JP2002053597A - パピローマウイルス様キメラ粒子 - Google Patents
パピローマウイルス様キメラ粒子Info
- Publication number
- JP2002053597A JP2002053597A JP2001104294A JP2001104294A JP2002053597A JP 2002053597 A JP2002053597 A JP 2002053597A JP 2001104294 A JP2001104294 A JP 2001104294A JP 2001104294 A JP2001104294 A JP 2001104294A JP 2002053597 A JP2002053597 A JP 2002053597A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- papillomavirus
- fusion
- chimeric
- particles
- product
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 93
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims abstract description 85
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 claims abstract description 51
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 63
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 51
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 24
- 108700005307 Human papillomavirus HPV L1 Proteins 0.000 claims description 6
- 108700031454 Bovine papillomavirus L1 Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 abstract description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 abstract description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 22
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 18
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 18
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 17
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 13
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 13
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 12
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 10
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 8
- 241000701646 Kappapapillomavirus 2 Species 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 8
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 8
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 6
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 6
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 5
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 5
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 4
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 4
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 4
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 4
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 4
- 238000000749 co-immunoprecipitation Methods 0.000 description 4
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000583086 Bunodosoma granuliferum Delta-actitoxin-Bgr2b Proteins 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 101710121996 Hexon protein p72 Proteins 0.000 description 2
- 241000709701 Human poliovirus 1 Species 0.000 description 2
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 2
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 2
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 2
- COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N Uranyl acetate Chemical compound O.O.O=[U]=O.CC(O)=O.CC(O)=O COQLPRJCUIATTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 2
- 229960002566 papillomavirus vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 241000208140 Acer Species 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 101150071434 BAR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000701814 Bovine papillomavirus type 2 Species 0.000 description 1
- 241000701812 Bovine papillomavirus type 4 Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000606153 Chlamydia trachomatis Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 241000907509 Cowbone Ridge virus Species 0.000 description 1
- 102000036364 Cullin Ring E3 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000701809 Deltapapillomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000388186 Deltapapillomavirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 101150013359 E7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101100321669 Fagopyrum esculentum FA02 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061978 Genital lesion Diseases 0.000 description 1
- 102100036738 Guanine nucleotide-binding protein subunit alpha-11 Human genes 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100283445 Homo sapiens GNA11 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001128634 Homo sapiens NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 2, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701828 Human papillomavirus type 11 Species 0.000 description 1
- 101000767631 Human papillomavirus type 16 Protein E7 Proteins 0.000 description 1
- 241000430519 Human rhinovirus sp. Species 0.000 description 1
- 101150075239 L1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150027802 L2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 101710157639 Minor capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000711466 Murine hepatitis virus Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 102100032194 NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 beta subcomplex subunit 2, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 241001377010 Pila Species 0.000 description 1
- 101710132637 Protein C2 Proteins 0.000 description 1
- 101710132697 Protein L2 Proteins 0.000 description 1
- 101710136297 Protein VP2 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101710195626 Transcriptional activator protein Proteins 0.000 description 1
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 241000589884 Treponema pallidum Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 229940096384 chicken egg white lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 229940038705 chlamydia trachomatis Drugs 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000037450 immune related reaction Effects 0.000 description 1
- 210000004201 immune sera Anatomy 0.000 description 1
- 229940042743 immune sera Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 108091008819 oncoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000027450 oncoproteins Human genes 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 208000019745 retinal vasculopathy with cerebral leukodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5258—Virus-like particles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/14011—Baculoviridae
- C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
- C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20023—Virus like particles [VLP]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/70—Nanostructure
- Y10S977/788—Of specified organic or carbon-based composition
- Y10S977/802—Virus-based particle
- Y10S977/803—Containing biological material in its interior
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S977/00—Nanotechnology
- Y10S977/902—Specified use of nanostructure
- Y10S977/904—Specified use of nanostructure for medical, immunological, body treatment, or diagnosis
- Y10S977/918—Immunological
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】免疫関連反応を誘導または検出する能力を保持
しているパピローマウイルス様キメラ粒子を提供する。 【解決手段】 ヒト又はウシパピローマウイルス含み、
パピローマウイルス粒子の融合パートナーがパピローマ
ウイルスＥ６又はＥ７ペプチドである、パピローマウイ
ルス粒子の形状エピトープを有するパピローマウイルス
様粒子。
しているパピローマウイルス様キメラ粒子を提供する。 【解決手段】 ヒト又はウシパピローマウイルス含み、
パピローマウイルス粒子の融合パートナーがパピローマ
ウイルスＥ６又はＥ７ペプチドである、パピローマウイ
ルス粒子の形状エピトープを有するパピローマウイルス
様粒子。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、パピローマウイル
ス様キメラ粒子および関連する合成ＤＮＡ分子、宿主細
胞、方法並びにワクチンに関する。
ス様キメラ粒子および関連する合成ＤＮＡ分子、宿主細
胞、方法並びにワクチンに関する。
【０００２】
【従来の技術】パピローマウイルスはヒトおよび広範囲
の動物の上皮に感染し、当該上皮の感染部位に一般に良
性の増殖を誘導する。しかしながら、幾つかの事例では
ある種のパピローマウイルスによって誘導された病巣は
悪性に経過する。ヒトの性器病巣の悪性進行とヒトパピ
ローマウイルス（ＨＰＶ）のある種の型（例えばＨＰＶ
１６）との間には密接な関係が存在する。これらのウイ
ルス型による感染は、子宮頸癌（世界的に最も一般的な
女性の癌の１つ）の進行における最も重要な危険因子で
あると考えられる（H. zur Hausen, Science 254:1167
(1991); M.H. Schiffman, J. Natl. Cancer Inst. 84:3
94(1992))。子宮頸癌の大半はＨＰＶ初期遺伝子（例え
ばＥ６およびＥ７）を含み、該遺伝子を発現している。
さらに、これらの遺伝子は培養細胞において強力な形質
転換活性および永代化（immortalizing)活性を有するこ
とが示された（B.A. Wemess, K. Munger & P.M. Howley
(1991)、「腫瘍学の進歩」(Advances in Oncology)、V.
T. DeVita, S. Hellman & S.A.Rosenberg編、（Lipponc
ott、フィラデルフィア）pp.3-18)。
の動物の上皮に感染し、当該上皮の感染部位に一般に良
性の増殖を誘導する。しかしながら、幾つかの事例では
ある種のパピローマウイルスによって誘導された病巣は
悪性に経過する。ヒトの性器病巣の悪性進行とヒトパピ
ローマウイルス（ＨＰＶ）のある種の型（例えばＨＰＶ
１６）との間には密接な関係が存在する。これらのウイ
ルス型による感染は、子宮頸癌（世界的に最も一般的な
女性の癌の１つ）の進行における最も重要な危険因子で
あると考えられる（H. zur Hausen, Science 254:1167
(1991); M.H. Schiffman, J. Natl. Cancer Inst. 84:3
94(1992))。子宮頸癌の大半はＨＰＶ初期遺伝子（例え
ばＥ６およびＥ７）を含み、該遺伝子を発現している。
さらに、これらの遺伝子は培養細胞において強力な形質
転換活性および永代化（immortalizing)活性を有するこ
とが示された（B.A. Wemess, K. Munger & P.M. Howley
(1991)、「腫瘍学の進歩」(Advances in Oncology)、V.
T. DeVita, S. Hellman & S.A.Rosenberg編、（Lipponc
ott、フィラデルフィア）pp.3-18)。
【０００３】パピローマウイルスは、直径が約５５ｎｍ
のエンベロープを持たない二本鎖ＤＮＡウイルスで、ヌ
クレオヒストンのコアの中に約８ｋｂのゲノムを含む(B
akerら、Biophys. J. 60:1445(1991))。キャプシドは、
ウイルスによってコードされる２つの蛋白Ｌ１およびＬ
２で構成され、これらはＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて、そ
れぞれ約５５ｋＤａおよび７５ｋＤａに移動する(Mose
Larsonら、J. Virol.61:3596(1987))。Ｌ１（これは主
要キャプシド蛋白である）は、Ｔ−７の二十面体対称と
結合する７２ペンタメーターとして配列されている。Ｌ
２の機能およびビリオン内の位置は不明である(Baker
ら、Biophys. J. 60:1445(1991))。
のエンベロープを持たない二本鎖ＤＮＡウイルスで、ヌ
クレオヒストンのコアの中に約８ｋｂのゲノムを含む(B
akerら、Biophys. J. 60:1445(1991))。キャプシドは、
ウイルスによってコードされる２つの蛋白Ｌ１およびＬ
２で構成され、これらはＳＤＳ−ＰＡＧＥにおいて、そ
れぞれ約５５ｋＤａおよび７５ｋＤａに移動する(Mose
Larsonら、J. Virol.61:3596(1987))。Ｌ１（これは主
要キャプシド蛋白である）は、Ｔ−７の二十面体対称と
結合する７２ペンタメーターとして配列されている。Ｌ
２の機能およびビリオン内の位置は不明である(Baker
ら、Biophys. J. 60:1445(1991))。
【０００４】Ｌ１蛋白は自己集合組立能をもち、それに
よって、大量のウイルス様粒子（virus-like particle
s, VLPs）が、多数のパピローマウイルス種に由来する
Ｌ１蛋白の種々の組換え体（リコンビナント）発現系で
の発現により生成できる（Hagenseeら、J. Virol. 67:3
15(1993);Kirnbauerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA,8
9:12180(1992);Kirnbauerら、J. Virol. 67:6929(199
3);Roseら、J. Virol. 67:1936(1993))。集合組立には
必要ではないが、Ｌ２は、細胞内でＬ１とともに同時に
発現される場合（Ｌ１／Ｌ２ＶＬＰｓ）ＶＬＰｓに取り
込まれる。
よって、大量のウイルス様粒子（virus-like particle
s, VLPs）が、多数のパピローマウイルス種に由来する
Ｌ１蛋白の種々の組換え体（リコンビナント）発現系で
の発現により生成できる（Hagenseeら、J. Virol. 67:3
15(1993);Kirnbauerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA,8
9:12180(1992);Kirnbauerら、J. Virol. 67:6929(199
3);Roseら、J. Virol. 67:1936(1993))。集合組立には
必要ではないが、Ｌ２は、細胞内でＬ１とともに同時に
発現される場合（Ｌ１／Ｌ２ＶＬＰｓ）ＶＬＰｓに取り
込まれる。
【０００５】天然のビリオンまたはＬ１ＶＬＰｓでウサ
ギを免疫することによって高力価の中和血清抗体が誘導
されるが、大腸菌で発現させた集合組立されていないＬ
１による免疫では誘導されなかった（N.D. Christensen
& J.W. Kreider, J. Virol.64:3151(1990);Kirnbauer
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:12180(1992);Pila
cinskiら、Bio/Technology 2:356(1984);Segreら、Am.
J. Vet. Res. 16:517(1955))。天然の粒子に対して作製
した多クローン性および単クローン性抗体は形状依存性
エピトープを認識する(N.D. Christensen & J.W. Kreid
er, Virus Res.28:195(1993); Christensenら、J. Viro
l. 64:5678(1990); Christensenら、Virology 181:572
(1991)）。
ギを免疫することによって高力価の中和血清抗体が誘導
されるが、大腸菌で発現させた集合組立されていないＬ
１による免疫では誘導されなかった（N.D. Christensen
& J.W. Kreider, J. Virol.64:3151(1990);Kirnbauer
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:12180(1992);Pila
cinskiら、Bio/Technology 2:356(1984);Segreら、Am.
J. Vet. Res. 16:517(1955))。天然の粒子に対して作製
した多クローン性および単クローン性抗体は形状依存性
エピトープを認識する(N.D. Christensen & J.W. Kreid
er, Virus Res.28:195(1993); Christensenら、J. Viro
l. 64:5678(1990); Christensenら、Virology 181:572
(1991)）。
【０００６】ＶＬＰｓに対して作製した中和抗体もまた
形状依存性エピトープを認識する。感染性ＢＰＶ１（こ
れはウシの病巣から容易に得られ、インビトロＢＰＶ１
感染性アッセーで定量できる(Dvoretzkyら、Virology 1
03:369(1980)）を用いて、ウシパピローマウイルスから
得られたＶＬＰｓは高レベルの中和抗体を誘導すること
が示された(Kirnbauerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA
89:12180(1992))。この中和抗体は形状依存性エピトー
プに対して誘導され、免疫の前に粒子を変性させると中
和活性を誘導するこの調製物の能力は失われた（上掲
書）。
形状依存性エピトープを認識する。感染性ＢＰＶ１（こ
れはウシの病巣から容易に得られ、インビトロＢＰＶ１
感染性アッセーで定量できる(Dvoretzkyら、Virology 1
03:369(1980)）を用いて、ウシパピローマウイルスから
得られたＶＬＰｓは高レベルの中和抗体を誘導すること
が示された(Kirnbauerら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA
89:12180(1992))。この中和抗体は形状依存性エピトー
プに対して誘導され、免疫の前に粒子を変性させると中
和活性を誘導するこの調製物の能力は失われた（上掲
書）。
【０００７】昆虫細胞でリコンビナントバキュロウイル
スによってＬ１主要キャプシド蛋白を発現させるために
非進行性病巣から得られたＨＰＶ１６分離株のＬ１遺伝
子を用いた場合、Ｌ１は、プロトタイプのＨＰＶ１６
（癌病巣から最初に分離された）に由来するＬ１を用い
て得られた収量より３乗高い収量で自己集合組立を行な
い、天然のビリオンと形態学的に同様なＶＬＰｓを形成
した(Kirnbauerら、J. Virol. 67:6929(1993))。ＤＮＡ
配列の比較によって、プロトタイプＬ１の効率の悪い自
己集合組立をもたらすただ１つの非保存的アミノ酸変化
が明らかにされた（上掲書）。集合組立能をもつクロー
ンのＬ１はしたがって野性型遺伝子と考えられ、集合組
立不全クローンのプロトタイプＬ１は変異体と考えられ
る。
スによってＬ１主要キャプシド蛋白を発現させるために
非進行性病巣から得られたＨＰＶ１６分離株のＬ１遺伝
子を用いた場合、Ｌ１は、プロトタイプのＨＰＶ１６
（癌病巣から最初に分離された）に由来するＬ１を用い
て得られた収量より３乗高い収量で自己集合組立を行な
い、天然のビリオンと形態学的に同様なＶＬＰｓを形成
した(Kirnbauerら、J. Virol. 67:6929(1993))。ＤＮＡ
配列の比較によって、プロトタイプＬ１の効率の悪い自
己集合組立をもたらすただ１つの非保存的アミノ酸変化
が明らかにされた（上掲書）。集合組立能をもつクロー
ンのＬ１はしたがって野性型遺伝子と考えられ、集合組
立不全クローンのプロトタイプＬ１は変異体と考えられ
る。
【０００８】野性型Ｌ１蛋白をもつＨＰＶ１６ＶＬＰｓ
を抗原として用いて、ＨＰＶ１６に感染した患者におけ
る血清抗体を検出するＥＬＩＳＡを開発した(Kirnbauer
ら、L. Natl. Cancer Inst. 86:494(1994)）。対照的
に、変性ＨＰＶ１６粒子もプロトタイプＬ１蛋白調製物
もこれらの抗体を検出できなかった（上掲書）。これら
の結果は、プロトタイプＬ１蛋白は形状エピトープをも
たないことを明らかにした。
を抗原として用いて、ＨＰＶ１６に感染した患者におけ
る血清抗体を検出するＥＬＩＳＡを開発した(Kirnbauer
ら、L. Natl. Cancer Inst. 86:494(1994)）。対照的
に、変性ＨＰＶ１６粒子もプロトタイプＬ１蛋白調製物
もこれらの抗体を検出できなかった（上掲書）。これら
の結果は、プロトタイプＬ１蛋白は形状エピトープをも
たないことを明らかにした。
【０００９】自己集合組み立てさせた野性型ＨＰＶ１６
Ｌ１／Ｌ２に対して作製したウサギ血清は、ＨＰＶ１６
ＶＬＰが細胞表面分子に結合するのを妨げることが分か
った(Rodenら、J. Virol. （印刷中、1994年、10月))。
対照的に、ＨＰＶ１６Ｌ１／Ｌ２のプロトタイプ株に対
して作製された血清はそのような結合を阻止しなかった
（上掲書）。このデータは、プロトタイプＨＰＶ株は形
状エピトープを欠いていることを示している。
Ｌ１／Ｌ２に対して作製したウサギ血清は、ＨＰＶ１６
ＶＬＰが細胞表面分子に結合するのを妨げることが分か
った(Rodenら、J. Virol. （印刷中、1994年、10月))。
対照的に、ＨＰＶ１６Ｌ１／Ｌ２のプロトタイプ株に対
して作製された血清はそのような結合を阻止しなかった
（上掲書）。このデータは、プロトタイプＨＰＶ株は形
状エピトープを欠いていることを示している。
【００１０】完全なワタオウサギパピローマウイルス
（ＣＲＰＶ）のＬ１またはＬ１／Ｌ２から構成されたウ
イルス様粒子で免疫したウサギは、その後の感染性ＣＲ
ＰＶによる実験的感染から防御された(Breitburdら、第
12回国際パピローマウイルスワークショップ（於：アム
ステルダム）、印刷中（1994年、10月))。対照的に、変
性粒子で免疫した動物は防御されなかった（上掲書）。
これらの発見は、形状エピトープをもつＶＬＰは防御免
疫を誘導できるという結論と一致する。
（ＣＲＰＶ）のＬ１またはＬ１／Ｌ２から構成されたウ
イルス様粒子で免疫したウサギは、その後の感染性ＣＲ
ＰＶによる実験的感染から防御された(Breitburdら、第
12回国際パピローマウイルスワークショップ（於：アム
ステルダム）、印刷中（1994年、10月))。対照的に、変
性粒子で免疫した動物は防御されなかった（上掲書）。
これらの発見は、形状エピトープをもつＶＬＰは防御免
疫を誘導できるという結論と一致する。
【００１１】キャプシド蛋白で構成されたＶＬＰは、パ
ピローマウイルス感染を防止する予防ワクチンとして魅
力的な候補物である。しかしながら、これらＶＬＰワク
チンがすでに成立したパピローマウイルス感染に対して
治療的効果を有することはおそらくないであろう。Ｅ６
およびＥ７と異なり、このキャプシド蛋白は進行性病巣
または基底上皮感染細胞（これらはパピローマの免疫退
行の推定標的である）での発現は検出されない。
ピローマウイルス感染を防止する予防ワクチンとして魅
力的な候補物である。しかしながら、これらＶＬＰワク
チンがすでに成立したパピローマウイルス感染に対して
治療的効果を有することはおそらくないであろう。Ｅ６
およびＥ７と異なり、このキャプシド蛋白は進行性病巣
または基底上皮感染細胞（これらはパピローマの免疫退
行の推定標的である）での発現は検出されない。
【００１２】Ｌ１およびＬ２以外のパピローマウイルス
蛋白に対する免疫はパピローマウイルス感染の制御を助
けるかもしれないということが実験モデルによって証明
される。Ｅ６およびＥ７は腫瘍発生過程で選択的に維持
されるので、これらの腫瘍蛋白に由来するペプチドは、
ＨＰＶ含有腫瘍細胞に対する細胞性免疫反応のための標
的として役立つ可能性がある。動物モデル実験によって
ＨＰＶ１６のＥ７蛋白は腫瘍拒絶抗原として作用するこ
とが示唆された（Chenら、Proc. Natl. Acad.Sci. USA,
88:110(1981); Feltkempら、Eur. J. Immunol. 23:224
2(1993)）。のみならず、ＨＰＶ感染頻度、ＨＰＶ感染
の持続、並びに子宮頸癌および他のＨＰＶ関連癌のリス
クは細胞性免疫の抑制をもつ患者で高まる（Alloutら、
Br. Med.J. 298:153(1989);Lagaら、Int. J. Cancer 5
0:45(1992)）。これらの観察によって、細胞性免疫は、
ＨＰＶ感染およびそれに付随する腫瘍の発達を防御する
ために重要であることが示唆される。そのような免疫の
誘導は予防的であるとともに治療的であるかもしれな
い。
蛋白に対する免疫はパピローマウイルス感染の制御を助
けるかもしれないということが実験モデルによって証明
される。Ｅ６およびＥ７は腫瘍発生過程で選択的に維持
されるので、これらの腫瘍蛋白に由来するペプチドは、
ＨＰＶ含有腫瘍細胞に対する細胞性免疫反応のための標
的として役立つ可能性がある。動物モデル実験によって
ＨＰＶ１６のＥ７蛋白は腫瘍拒絶抗原として作用するこ
とが示唆された（Chenら、Proc. Natl. Acad.Sci. USA,
88:110(1981); Feltkempら、Eur. J. Immunol. 23:224
2(1993)）。のみならず、ＨＰＶ感染頻度、ＨＰＶ感染
の持続、並びに子宮頸癌および他のＨＰＶ関連癌のリス
クは細胞性免疫の抑制をもつ患者で高まる（Alloutら、
Br. Med.J. 298:153(1989);Lagaら、Int. J. Cancer 5
0:45(1992)）。これらの観察によって、細胞性免疫は、
ＨＰＶ感染およびそれに付随する腫瘍の発達を防御する
ために重要であることが示唆される。そのような免疫の
誘導は予防的であるとともに治療的であるかもしれな
い。
【００１３】外来ペプチドがウイルスキャプシド様構造
物に取り込まれ得ること、さらにこれらキメラ粒子を用
いて外来抗原を免疫系に呈示することが可能なことが明
らかになった。報告された実施例には、ヒトライノウイ
ルス２型エピトープ(Francisら、Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA, 87:2545(1990))、ＨＩＶのｇｐ４１（Borisova
ら、FEBS Lett. 259:121(1989)）のＢ型肝炎コア抗原粒
子の表示、並びに単純ヘルペスウイルス１型およびネズ
ミ肝炎ウイルス由来ペプチドのＢ１９パルボウイルス粒
子の表示(Brownら、Virology 198:477(1994)）が含まれ
る。パルボウイルスキメラは、対応するウイルスによる
実験的感染攻撃からマウスを防御した。上記の系の全て
で、外来配列はキャプシド構造に必須の蛋白内に挿入さ
れ、２０アミノ酸未満に限定されていた。しかしなが
ら、最近の実験（Miyamuraら、Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 91:8507(1994))は、パルボウイルスＬ１マイナー
キャプシド蛋白に融合させた場合、完全な１４７アミノ
酸のニワトリ卵白リゾチーム蛋白がＢ１９パルボウイル
ス粒子に取り込まれ得ることを明らかにした。このリゾ
チームは生物的活性を保持し、ウサギに注射したとき免
疫反応を誘導した。別の関連性が低い実験でも、ＨＩＶ
−１エンベロープ糖蛋白の８４アミノ酸を含むＢ型肝炎
ウイルス表面抗原粒子（これは脂質膜構造である）（Mi
chelら、J. Virol. 64:2452(1990))およびＨＩＶ−１Ｖ
３ループの一部分を含む酵母Ｔｙウイルス様粒子(Griff
ithsら、J. Virol. 65:450(1991)）もまた、動物に接種
したとき挿入したペプチドに対して免疫反応を起こさせ
ることが示された。パピローマウイルスに関しては、Ｈ
ＰＶ１６Ｅ７ペプチド（全て２０アミノ酸未満）を含む
Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原粒子は、マウスでペプチド特
異的抗体およびＴヘルパー応答を誘導することが報告さ
れた（Tindleら、Virology 200:547(1994)）。
物に取り込まれ得ること、さらにこれらキメラ粒子を用
いて外来抗原を免疫系に呈示することが可能なことが明
らかになった。報告された実施例には、ヒトライノウイ
ルス２型エピトープ(Francisら、Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA, 87:2545(1990))、ＨＩＶのｇｐ４１（Borisova
ら、FEBS Lett. 259:121(1989)）のＢ型肝炎コア抗原粒
子の表示、並びに単純ヘルペスウイルス１型およびネズ
ミ肝炎ウイルス由来ペプチドのＢ１９パルボウイルス粒
子の表示(Brownら、Virology 198:477(1994)）が含まれ
る。パルボウイルスキメラは、対応するウイルスによる
実験的感染攻撃からマウスを防御した。上記の系の全て
で、外来配列はキャプシド構造に必須の蛋白内に挿入さ
れ、２０アミノ酸未満に限定されていた。しかしなが
ら、最近の実験（Miyamuraら、Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 91:8507(1994))は、パルボウイルスＬ１マイナー
キャプシド蛋白に融合させた場合、完全な１４７アミノ
酸のニワトリ卵白リゾチーム蛋白がＢ１９パルボウイル
ス粒子に取り込まれ得ることを明らかにした。このリゾ
チームは生物的活性を保持し、ウサギに注射したとき免
疫反応を誘導した。別の関連性が低い実験でも、ＨＩＶ
−１エンベロープ糖蛋白の８４アミノ酸を含むＢ型肝炎
ウイルス表面抗原粒子（これは脂質膜構造である）（Mi
chelら、J. Virol. 64:2452(1990))およびＨＩＶ−１Ｖ
３ループの一部分を含む酵母Ｔｙウイルス様粒子(Griff
ithsら、J. Virol. 65:450(1991)）もまた、動物に接種
したとき挿入したペプチドに対して免疫反応を起こさせ
ることが示された。パピローマウイルスに関しては、Ｈ
ＰＶ１６Ｅ７ペプチド（全て２０アミノ酸未満）を含む
Ｂ型肝炎ウイルスコア抗原粒子は、マウスでペプチド特
異的抗体およびＴヘルパー応答を誘導することが報告さ
れた（Tindleら、Virology 200:547(1994)）。
【００１４】自己集合組立パピローマウイルスＬ１を基
材にしたキメラ粒子はこれまで報告がなく、またキメラ
ＶＬＰを作製する目的でウイルス性融合パートナーとし
て使用したという報告もない。上記に記載したキメラ粒
子実験は、パピローマウイルスと無関係のウイルスを含
み、したがってパピローマウイルスを含むキメラ粒子実
験の結果を予測することはできない。実際、カーンバウ
エルらによるパピローマウイルスの研究(Kirnbauerら、
J. Virol. 67:6929(1993）上掲書）では、Ｌ１のただ１
つの非保存的アミノ酸変化が、ＶＬＰｓへの効果的な自
己集合組立および形状エピトープの表示（これらは臨床
的に関連する免疫反応の誘導および検出に必須であるら
しい）をもたらすことが明らかにされた。したがって、
パピローマウイルスに無関係のウイルスを用いた研究
は、Ｌ１のただ１つのアミノ酸置換によって効果的な自
己集合組立が失われると仮定した場合、外来ペプチドま
たは蛋白を含むパピローマウイルスＬ２がパピローマウ
イルスＬ１との同時集合組立によって粒子を形成するこ
とができるか否かを予測することは不可能である。さら
にまた、これらの実験は、Ｌ１のただ１つのアミノ酸置
換が形状エピトープの表示を妨げることができると仮定
した場合、生じたキメラ粒子のいずれかが中和抗体もし
くは他の免疫関連反応を誘導または検出する能力を保持
しているか否かを予測することも不可能である。
材にしたキメラ粒子はこれまで報告がなく、またキメラ
ＶＬＰを作製する目的でウイルス性融合パートナーとし
て使用したという報告もない。上記に記載したキメラ粒
子実験は、パピローマウイルスと無関係のウイルスを含
み、したがってパピローマウイルスを含むキメラ粒子実
験の結果を予測することはできない。実際、カーンバウ
エルらによるパピローマウイルスの研究(Kirnbauerら、
J. Virol. 67:6929(1993）上掲書）では、Ｌ１のただ１
つの非保存的アミノ酸変化が、ＶＬＰｓへの効果的な自
己集合組立および形状エピトープの表示（これらは臨床
的に関連する免疫反応の誘導および検出に必須であるら
しい）をもたらすことが明らかにされた。したがって、
パピローマウイルスに無関係のウイルスを用いた研究
は、Ｌ１のただ１つのアミノ酸置換によって効果的な自
己集合組立が失われると仮定した場合、外来ペプチドま
たは蛋白を含むパピローマウイルスＬ２がパピローマウ
イルスＬ１との同時集合組立によって粒子を形成するこ
とができるか否かを予測することは不可能である。さら
にまた、これらの実験は、Ｌ１のただ１つのアミノ酸置
換が形状エピトープの表示を妨げることができると仮定
した場合、生じたキメラ粒子のいずれかが中和抗体もし
くは他の免疫関連反応を誘導または検出する能力を保持
しているか否かを予測することも不可能である。
【００１５】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決するた
め、パピローマウイルス様キメラ粒子を提供することが
本発明の目的である。これらのキメラ粒子は多価抗原を
表示するための土台として機能することができる。また
これらのキメラ粒子は、蛋白を細胞内に運び、ペプチド
に加工し続いてＭＨＣ分子の中にこれらのペプチドを表
示させて細胞性免疫反応を誘導させるために役立てるこ
とができる。このキメラ粒子は、有効スペクトルの広い
効果的なパピローマウイルスワクチンを作製する費用効
率の良い方法を提供する。また別に、このパピローマウ
イルス用キメラ粒子はＶＬＰおよび／または融合パート
ナーの精製にも利用できる。またこのキメラ粒子は、活
性を有する無傷の蛋白（例えば酵素、毒素または薬剤）
を細胞内に運ぶために機能することができる。
め、パピローマウイルス様キメラ粒子を提供することが
本発明の目的である。これらのキメラ粒子は多価抗原を
表示するための土台として機能することができる。また
これらのキメラ粒子は、蛋白を細胞内に運び、ペプチド
に加工し続いてＭＨＣ分子の中にこれらのペプチドを表
示させて細胞性免疫反応を誘導させるために役立てるこ
とができる。このキメラ粒子は、有効スペクトルの広い
効果的なパピローマウイルスワクチンを作製する費用効
率の良い方法を提供する。また別に、このパピローマウ
イルス用キメラ粒子はＶＬＰおよび／または融合パート
ナーの精製にも利用できる。またこのキメラ粒子は、活
性を有する無傷の蛋白（例えば酵素、毒素または薬剤）
を細胞内に運ぶために機能することができる。
【００１６】前記目的を達成するため、本発明は、パピ
ローマウイルスＬ１融合生成物を含み、パピローマウイ
ルス粒子の形状エピトープを有することを特徴とするパ
ピローマウイルス様粒子を提供する。
ローマウイルスＬ１融合生成物を含み、パピローマウイ
ルス粒子の形状エピトープを有することを特徴とするパ
ピローマウイルス様粒子を提供する。
【００１７】当該パピローマウイルス様粒子において、
前記パピローマウイルスＬ１融合生成物は、ヒトパピロ
ーマウイルスＬ１融合生成物またはウシパピローマウイ
ルスＬ１融合生成物であることを特徴としていてもよ
い。
前記パピローマウイルスＬ１融合生成物は、ヒトパピロ
ーマウイルスＬ１融合生成物またはウシパピローマウイ
ルスＬ１融合生成物であることを特徴としていてもよ
い。
【００１８】前記ヒトパピローマウイルスＬ１融合生成
物は、ＨＰＶ１６Ｌ１融合生成物であり、前記ウシパピ
ローマウイルスＬ１融合生成物が、ＢＰＶ１Ｌ１融合生
成物であることを特徴としていてもよい。
物は、ＨＰＶ１６Ｌ１融合生成物であり、前記ウシパピ
ローマウイルスＬ１融合生成物が、ＢＰＶ１Ｌ１融合生
成物であることを特徴としていてもよい。
【００１９】前記ヒトパピローマウイルスＬ１融合生成
物が、ペプチド若しくは全長蛋白である単一の融合パー
トナー、または、ペプチド、全長蛋白、若しくは縦並び
に連結されたこれらの組み合わせである複数の融合パー
トナーを含むことを特徴としていてもよい。
物が、ペプチド若しくは全長蛋白である単一の融合パー
トナー、または、ペプチド、全長蛋白、若しくは縦並び
に連結されたこれらの組み合わせである複数の融合パー
トナーを含むことを特徴としていてもよい。
【００２０】前記融合パートナーがパピローマウイルス
Ｅ６またはＥ７生成物であることを特徴としていてもよ
い。
Ｅ６またはＥ７生成物であることを特徴としていてもよ
い。
【００２１】前記パピローマウイルスＬ１融合生成物
が、そのＮ末端またはＣ末端で融合パートナーに融合す
ることを特徴としていてもよい。
が、そのＮ末端またはＣ末端で融合パートナーに融合す
ることを特徴としていてもよい。
【００２２】前記パピローマウイルスＬ１融合生成物
が、Ｌ１アミノ酸の間に挿入された融合パートナーを有
することを特徴としていてもよい。
が、Ｌ１アミノ酸の間に挿入された融合パートナーを有
することを特徴としていてもよい。
【００２３】更にパピローマウイルスＬ２生成物を含む
ことを特徴としていてもよい。
ことを特徴としていてもよい。
【００２４】前記パピローマウイルスＬ２生成物が、Ｈ
ＰＶ１６Ｌ２生成物またはＢＰＶ１Ｌ２生成物であるこ
とを特徴としていてもよい。
ＰＶ１６Ｌ２生成物またはＢＰＶ１Ｌ２生成物であるこ
とを特徴としていてもよい。
【００２５】本発明の別の態様として、上記パピローマ
ウイルス様粒子を含む組成物も含まれる。
ウイルス様粒子を含む組成物も含まれる。
【００２６】
【発明の実施の形態】本発明は、パピローマウイルスＬ
２融合生成物が、パピローマウイルスＬ１生成物を基材
とする、形状エピトープを表示するパピローマウイルス
様粒子に取り込まれるという結果から得られた。これら
の結果は予期せぬものであった。
２融合生成物が、パピローマウイルスＬ１生成物を基材
とする、形状エピトープを表示するパピローマウイルス
様粒子に取り込まれるという結果から得られた。これら
の結果は予期せぬものであった。
【００２７】パピローマウイルスの研究(Kirnbauerら、
J. Virol. 67:6929(1993）上掲書）において、Ｌ１のた
だ１つの非保存的アミノ酸変化がＶＬＰｓへのＬ１の効
果的な自己集合組立および形状エピトープの表示をもた
らすことが示された。この形状エピトープの表示は、臨
床的に関連のある免疫反応の誘導および検出に必要なよ
うに思える。したがって、Ｌ１内のただ１つのアミノ酸
置換が効果的な自己集合組立を失わせると仮定した場
合、外来ペプチドまたは蛋白を含むパピローマウイルス
Ｌ２がパピローマウイルスＬ１とともに集合組み立てさ
れて粒子を形成するか否かは予測不可能であった。Ｌ１
内のただ１つのアミノ酸置換が形状エピトープの表示を
妨げることができると仮定した場合、生成されるどのよ
うなキメラ粒子が中和抗体もしくは他の免役関連反応の
誘導または検出能を保持しているかを予測することもま
た不可能であった。
J. Virol. 67:6929(1993）上掲書）において、Ｌ１のた
だ１つの非保存的アミノ酸変化がＶＬＰｓへのＬ１の効
果的な自己集合組立および形状エピトープの表示をもた
らすことが示された。この形状エピトープの表示は、臨
床的に関連のある免疫反応の誘導および検出に必要なよ
うに思える。したがって、Ｌ１内のただ１つのアミノ酸
置換が効果的な自己集合組立を失わせると仮定した場
合、外来ペプチドまたは蛋白を含むパピローマウイルス
Ｌ２がパピローマウイルスＬ１とともに集合組み立てさ
れて粒子を形成するか否かは予測不可能であった。Ｌ１
内のただ１つのアミノ酸置換が形状エピトープの表示を
妨げることができると仮定した場合、生成されるどのよ
うなキメラ粒子が中和抗体もしくは他の免役関連反応の
誘導または検出能を保持しているかを予測することもま
た不可能であった。
【００２８】パピローマウイルスＬ２融合生成物は一連
のアミノ酸の鎖を意味し、この場合該鎖の一部分はＬ２
の蛋白配列に由来し、さらに該鎖の一部分は別の１つ蛋
白配列（または複数の蛋白配列）に由来する。
のアミノ酸の鎖を意味し、この場合該鎖の一部分はＬ２
の蛋白配列に由来し、さらに該鎖の一部分は別の１つ蛋
白配列（または複数の蛋白配列）に由来する。
【００２９】Ｌ２融合生成物は、１つの蛋白（または多
数の蛋白）のための読み取り枠をＬ２のための読み取り
枠の隣にまたはその中に（枠内で）スプライシングする
ことによって製造される。
数の蛋白）のための読み取り枠をＬ２のための読み取り
枠の隣にまたはその中に（枠内で）スプライシングする
ことによって製造される。
【００３０】蛋白工学を用いてＬ２融合生成物の構造を
決定する。蛋白工学分野の従事者にとって日常的な作業
で天然蛋白Ｌ２の変種が作製される。作製されるこのよ
うな変形はＬ２の構造を詳細に知った上での経験に基づ
いて予測されるものでもよく、また完全に任意のもので
あってもよい。構造情報とランダム変異および選別との
組合せによってもまた劇的な結果を得ることができる。
決定する。蛋白工学分野の従事者にとって日常的な作業
で天然蛋白Ｌ２の変種が作製される。作製されるこのよ
うな変形はＬ２の構造を詳細に知った上での経験に基づ
いて予測されるものでもよく、また完全に任意のもので
あってもよい。構造情報とランダム変異および選別との
組合せによってもまた劇的な結果を得ることができる。
【００３１】例えば、融合ペプチドまたは蛋白がその間
に挿入されるＬ２アミノ酸の選別はこの基準によって実
施することができる。アミノ酸の配列と長さがパピロー
マウイルス間で変化する領域が存在することは、この領
域がＬ２の組み込みおよび／または粒子への取り込みに
必須ではない構造を表していることを示唆する。融合ペ
プチドまたは蛋白をＬ２内へ挿入するこの観察された能
力は、そのような領域が存在することを暗示させる。
に挿入されるＬ２アミノ酸の選別はこの基準によって実
施することができる。アミノ酸の配列と長さがパピロー
マウイルス間で変化する領域が存在することは、この領
域がＬ２の組み込みおよび／または粒子への取り込みに
必須ではない構造を表していることを示唆する。融合ペ
プチドまたは蛋白をＬ２内へ挿入するこの観察された能
力は、そのような領域が存在することを暗示させる。
【００３２】Ｌ２融合生成物のための構造の決定は、形
状エピトープを表示するパピローマウイルスＬ１生成物
を基材にしたパピローマウイルス様粒子への取り込みが
生じるＬ２融合生成物の能力をもとに実施される。
状エピトープを表示するパピローマウイルスＬ１生成物
を基材にしたパピローマウイルス様粒子への取り込みが
生じるＬ２融合生成物の能力をもとに実施される。
【００３３】構造決定の好ましい手段は、パピローマウ
イルスＬ１生成物を基材とするパピローマウイルス様粒
子へのＬ２融合生成物の取り込み効率および／または純
正度を測定するアッセーを含む。
イルスＬ１生成物を基材とするパピローマウイルス様粒
子へのＬ２融合生成物の取り込み効率および／または純
正度を測定するアッセーを含む。
【００３４】Ｌ１／Ｌ２ＶＬＰｓ形成の効率および／ま
たは純正度は形状エピトープの表示と関連がある（上掲
書）。
たは純正度は形状エピトープの表示と関連がある（上掲
書）。
【００３５】キメラＬ２は、したがって野性型Ｌ２の取
り込みのそれと同じような効率および／または純正度で
Ｌ１基材ＶＬＰｓへ取り込まれるようになるであろう。
り込みのそれと同じような効率および／または純正度で
Ｌ１基材ＶＬＰｓへ取り込まれるようになるであろう。
【００３６】Ｌ２融合生成物のための構造を決定する他
の好ましい手段は、中和抗体の誘発および／または検出
を測定するアッセーを含む。
の好ましい手段は、中和抗体の誘発および／または検出
を測定するアッセーを含む。
【００３７】中和抗体は形状依存性エピトープに対して
誘導される（上掲書）ので、中和抗体の誘導および／ま
たは検出は形状エピトープの表示と関連がある。
誘導される（上掲書）ので、中和抗体の誘導および／ま
たは検出は形状エピトープの表示と関連がある。
【００３８】したがって、キメラＬ２の取り込みは、Ｌ
１またはＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓと比較したときパピローマ
ウイルス様キメラ粒子による中和抗体の誘導および／ま
たは検出を抑制しない。
１またはＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓと比較したときパピローマ
ウイルス様キメラ粒子による中和抗体の誘導および／ま
たは検出を抑制しない。
【００３９】本発明の目的のために、キメラＬ２融合生
成物は、形状エピトープ（上記の手段または当技術分野
で既知の他のいずれかの手段で特定されたか否かにかか
わらず）を表示するパピローマウイルスＬ１生成物基材
パピローマウイルス様粒子へ取り込まれることができる
能力をもつ。
成物は、形状エピトープ（上記の手段または当技術分野
で既知の他のいずれかの手段で特定されたか否かにかか
わらず）を表示するパピローマウイルスＬ１生成物基材
パピローマウイルス様粒子へ取り込まれることができる
能力をもつ。
【００４０】Ｌ２およびその融合パートナー（およびＬ
１）の構造は、完全な長さのＬ２蛋白（およびＬ１蛋
白）並びに完全な長さの融合パートナー蛋白およびその
フラグメント（５’フラグメントであれ、３’フラグメ
ントであれまたは内部フラグメントであれ）を含むこと
が意図される。前記フラグメントは、少なくとも約２０
アミノ酸残基、有利には少なくとも約１０アミノ酸残
基、さらに好ましくは少なくとも約５アミノ酸残基であ
る。Ｌ２（およびＬ１）のタイプ、サブグループおよび
株間変動並びに、融合パートナー蛋白のヒト対立遺伝子
および種間変動も明らかに本発明の範囲内に含まれると
解される。本発明はまた、完全な長さのＬ２蛋白（およ
びＬ１蛋白）並びに完全な長さの融合パートナー蛋白お
よびそのペプチドフラグメントの保存的変種を含むが、
この場合、保存的アミノ酸が野性型Ｌ２（およびＬ１）
および融合パートナー蛋白のアミノ酸残基に代わって置
換される。遺伝暗号の縮退のために、本発明はまた、Ｌ
２（およびＬ１）および融合パートナー遺伝子のＤＮＡ
がコードするのと同じアミノ酸残基をコードするＤＮＡ
を含む。
１）の構造は、完全な長さのＬ２蛋白（およびＬ１蛋
白）並びに完全な長さの融合パートナー蛋白およびその
フラグメント（５’フラグメントであれ、３’フラグメ
ントであれまたは内部フラグメントであれ）を含むこと
が意図される。前記フラグメントは、少なくとも約２０
アミノ酸残基、有利には少なくとも約１０アミノ酸残
基、さらに好ましくは少なくとも約５アミノ酸残基であ
る。Ｌ２（およびＬ１）のタイプ、サブグループおよび
株間変動並びに、融合パートナー蛋白のヒト対立遺伝子
および種間変動も明らかに本発明の範囲内に含まれると
解される。本発明はまた、完全な長さのＬ２蛋白（およ
びＬ１蛋白）並びに完全な長さの融合パートナー蛋白お
よびそのペプチドフラグメントの保存的変種を含むが、
この場合、保存的アミノ酸が野性型Ｌ２（およびＬ１）
および融合パートナー蛋白のアミノ酸残基に代わって置
換される。遺伝暗号の縮退のために、本発明はまた、Ｌ
２（およびＬ１）および融合パートナー遺伝子のＤＮＡ
がコードするのと同じアミノ酸残基をコードするＤＮＡ
を含む。
【００４１】このパピローマウイルス様キメラ粒子自体
は、どのようなパピローマウイルスに由来するどのよう
なＬ２融合生成物もいずれのＬ１生成物と一緒に（該ゲ
ノムが密接に関係しようと、関係が薄かろうと粒子への
取り込みが生じるかぎり）取り込むと予想される。した
がって、例えばＢＰＶ−１、ＢＰＶ−２、ＢＰＶ−４、
ＣＲＰＶ、ＤＰＶ、ＥＥＰＶ、ＨＰＶ−１、ＨＰＶ−
５、ＨＰＶ−６、ＨＰＶ８、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１
６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３１またはＨＰＶ−３３の
何れかと関係があるＬ２融合生成物は、例えば上記のウ
イルスの何れか、またはパピローマウイルスのいずれか
のタイプ、サブグループもしくは株間変種に由来する何
れのＬ１生成物とも粒子内に取り込まれ得る。
は、どのようなパピローマウイルスに由来するどのよう
なＬ２融合生成物もいずれのＬ１生成物と一緒に（該ゲ
ノムが密接に関係しようと、関係が薄かろうと粒子への
取り込みが生じるかぎり）取り込むと予想される。した
がって、例えばＢＰＶ−１、ＢＰＶ−２、ＢＰＶ−４、
ＣＲＰＶ、ＤＰＶ、ＥＥＰＶ、ＨＰＶ−１、ＨＰＶ−
５、ＨＰＶ−６、ＨＰＶ８、ＨＰＶ−１１、ＨＰＶ−１
６、ＨＰＶ−１８、ＨＰＶ−３１またはＨＰＶ−３３の
何れかと関係があるＬ２融合生成物は、例えば上記のウ
イルスの何れか、またはパピローマウイルスのいずれか
のタイプ、サブグループもしくは株間変種に由来する何
れのＬ１生成物とも粒子内に取り込まれ得る。
【００４２】ＶＬＰｓは高力価の中和血清抗体の誘導に
必要な形状依存性エピトープを表示するので、Ｌ２融合
生成物を含むＶＬＰキメラは、液性免役の刺激のために
最適化されたサブユニットワクチンとして機能し、パピ
ローマウイルス感染を予防し、したがってパピローマウ
イルス関連癌およびパピローマウイルスに付随する他の
病的状態の発生を排除する。
必要な形状依存性エピトープを表示するので、Ｌ２融合
生成物を含むＶＬＰキメラは、液性免役の刺激のために
最適化されたサブユニットワクチンとして機能し、パピ
ローマウイルス感染を予防し、したがってパピローマウ
イルス関連癌およびパピローマウイルスに付随する他の
病的状態の発生を排除する。
【００４３】先に考察したように、ＶＬＰｓが既に存在
する増殖性病巣の退縮を誘導する治療用ワクチンとして
有効であるということはありそうもないので、キメラＶ
ＬＰｓは、治療用ワクチンを開発しようと長い間熱望さ
れ、これまで果たされなかった要請を達成するために機
能することができる。
する増殖性病巣の退縮を誘導する治療用ワクチンとして
有効であるということはありそうもないので、キメラＶ
ＬＰｓは、治療用ワクチンを開発しようと長い間熱望さ
れ、これまで果たされなかった要請を達成するために機
能することができる。
【００４４】おそらくキメラＶＬＰｓは、特異的な細胞
表面レセプターに結合して内在化されて細胞質中に遊離
され、したがって細胞性免疫を惹起させる細胞毒性Ｔ細
胞に向けて呈示されるＭＨＣクラスＩ分子と組み合わさ
れたペプチドの表示を促進するであろう。これは、特異
的に細胞に進入したり、細胞毒性Ｔ細胞反応を誘導する
ためにＭＨＣクラスＩ分子と一体となってペプチドの表
示を促進することが期待されない非複合体化蛋白と対照
的な点である（この場合は、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結
合してヘルパーＴ細胞に呈示され、ペプチドの表示が促
進される可能性の方が高い）。
表面レセプターに結合して内在化されて細胞質中に遊離
され、したがって細胞性免疫を惹起させる細胞毒性Ｔ細
胞に向けて呈示されるＭＨＣクラスＩ分子と組み合わさ
れたペプチドの表示を促進するであろう。これは、特異
的に細胞に進入したり、細胞毒性Ｔ細胞反応を誘導する
ためにＭＨＣクラスＩ分子と一体となってペプチドの表
示を促進することが期待されない非複合体化蛋白と対照
的な点である（この場合は、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結
合してヘルパーＴ細胞に呈示され、ペプチドの表示が促
進される可能性の方が高い）。
【００４５】Ｌ２融合生成物として１つまたは２つ以上
のパートナーを包含することは、（臨床的病巣の治療お
よび予防の改善を含む）広い利用スペクトルをもつ効果
的なパピローマウイルスワクチンを作製するために明ら
かに経費効率が良い方法である。
のパートナーを包含することは、（臨床的病巣の治療お
よび予防の改善を含む）広い利用スペクトルをもつ効果
的なパピローマウイルスワクチンを作製するために明ら
かに経費効率が良い方法である。
【００４６】融合パートナーは、ＶＬＰ基材ワクチンの
潜在的標的を広げる方法を提供するような融合パートナ
ー（例えばＥ６もしくはＥ７ペプチドまたは完全な長さ
のＥ６もしくはＥ７、他のパピローマウイルスペプチド
もしくは蛋白、または他のＳＴＤもしくは感染性病原体
（例えば単純ヘルペス、ＨＩＶ、トラコーマクラミジ
ア、淋菌、梅毒トレポネーマ）のペプチドもしくは蛋
白）から成る群から選択できる。
潜在的標的を広げる方法を提供するような融合パートナ
ー（例えばＥ６もしくはＥ７ペプチドまたは完全な長さ
のＥ６もしくはＥ７、他のパピローマウイルスペプチド
もしくは蛋白、または他のＳＴＤもしくは感染性病原体
（例えば単純ヘルペス、ＨＩＶ、トラコーマクラミジ
ア、淋菌、梅毒トレポネーマ）のペプチドもしくは蛋
白）から成る群から選択できる。
【００４７】Ｌ２融合生成物はＬ２分子につきただ１つ
の融合パートナーとは限らず、また別の融合パートナ
ー、例えば縦並びに連結したまた別のペプチドまたは完
全な長さの蛋白、または同じかもしくは異なる蛋白に由
来するそれらの組合せを含むことができる。さらにま
た、１つ以上のＬ２融合生成物をただ１つのＶＬＰ中に
同時に集合組み立てさせることができる。例えば、補助
刺激蛋白の結合ドメインまたは免疫反応に必要な補助レ
セプターもしくはリガンドを含むように操作して、ウイ
ルス標的エピトープを含むＬ２融合生成物またはキメラ
ＶＬＰをまた作製できる。これらは、例えばＢ７（これ
はＴ細胞上でＣＤ２８と相互作用する）、細胞内粘着分
子（ＩＣＡＭ）、リンパ球機能抗原（ＬＦＡ）、血管細
胞粘着分子（ＶＣＡＭ−１）および熱耐性抗原（ＨＳ
Ａ）（補助刺激物質またはリガンドをＶＬＰ表面に誘導
するため、実施例１４参照）である。
の融合パートナーとは限らず、また別の融合パートナ
ー、例えば縦並びに連結したまた別のペプチドまたは完
全な長さの蛋白、または同じかもしくは異なる蛋白に由
来するそれらの組合せを含むことができる。さらにま
た、１つ以上のＬ２融合生成物をただ１つのＶＬＰ中に
同時に集合組み立てさせることができる。例えば、補助
刺激蛋白の結合ドメインまたは免疫反応に必要な補助レ
セプターもしくはリガンドを含むように操作して、ウイ
ルス標的エピトープを含むＬ２融合生成物またはキメラ
ＶＬＰをまた作製できる。これらは、例えばＢ７（これ
はＴ細胞上でＣＤ２８と相互作用する）、細胞内粘着分
子（ＩＣＡＭ）、リンパ球機能抗原（ＬＦＡ）、血管細
胞粘着分子（ＶＣＡＭ−１）および熱耐性抗原（ＨＳ
Ａ）（補助刺激物質またはリガンドをＶＬＰ表面に誘導
するため、実施例１４参照）である。
【００４８】疾患の予防および／または治療においてワ
クチンとして実際に好ましいパピローマウイルス様キメ
ラ粒子の量は、製剤化された具体的な組成物、適用態
様、処置される具体的な部位および器官によって変動す
ることは理解されよう。ある宿主の投与量は通常の方法
によって、例えば適切な慣用的免疫付与プロトコルによ
って決定できる。
クチンとして実際に好ましいパピローマウイルス様キメ
ラ粒子の量は、製剤化された具体的な組成物、適用態
様、処置される具体的な部位および器官によって変動す
ることは理解されよう。ある宿主の投与量は通常の方法
によって、例えば適切な慣用的免疫付与プロトコルによ
って決定できる。
【００４９】また別にキメラＶＬＰはＶＬＰ精製方法で
も用いることができる。ＶＬＰｓはそれ自体予防用ワク
チンとして、さらに免疫診断として有用である（上掲
書）。簡単に記せば、融合パートナーに対する抗体は標
準的な免疫学的技術によって作製され、アフィニティー
クロマトグラフィーカラムはこの抗体を用いて構築され
る。続いてＶＬＰｓはアフィニティークロマトグラフィ
ー工程で精製される。また、キメラＶＬＰｓは融合パー
トナーの精製方法で用いることができる。例えば、Ｌ２
−Ｅ７融合生成物を含むＶＬＰｓは、正しく折り畳まれ
たＥ７を得る手段として有用である。子宮頸癌患者の血
清は、細菌から分離されたような変性Ｅ７に対するより
も高い割合で形状的に正確なＥ７に対して陽性であるこ
とが報告された(Viscidiら、Int. J. Cancer 55:780(19
93))。この報告でＥ７を生成させるために用いられたイ
ンビトロ転写−翻訳系は困難かつ高価で、しかも放射能
標識Ｅ７を用いる。キメラＥ７ＶＬＰｓを精製し、この
材料をＥ７ＥＬＩＳＡで用いることが有利であろう。ヒ
トＬ１またはＬ２との血清反応性の複雑さを避けるため
に、ＢＶＰ基材粒子を用いることができるであろう。Ｅ
７の血清反応性（これは前癌病変とは対照的に癌と相関
する）をモニターすることは、子宮頸癌患者で疾患の進
行を追跡するために、さらに再発をスクリーニングする
ために有用であると提唱された（上掲書）。
も用いることができる。ＶＬＰｓはそれ自体予防用ワク
チンとして、さらに免疫診断として有用である（上掲
書）。簡単に記せば、融合パートナーに対する抗体は標
準的な免疫学的技術によって作製され、アフィニティー
クロマトグラフィーカラムはこの抗体を用いて構築され
る。続いてＶＬＰｓはアフィニティークロマトグラフィ
ー工程で精製される。また、キメラＶＬＰｓは融合パー
トナーの精製方法で用いることができる。例えば、Ｌ２
−Ｅ７融合生成物を含むＶＬＰｓは、正しく折り畳まれ
たＥ７を得る手段として有用である。子宮頸癌患者の血
清は、細菌から分離されたような変性Ｅ７に対するより
も高い割合で形状的に正確なＥ７に対して陽性であるこ
とが報告された(Viscidiら、Int. J. Cancer 55:780(19
93))。この報告でＥ７を生成させるために用いられたイ
ンビトロ転写−翻訳系は困難かつ高価で、しかも放射能
標識Ｅ７を用いる。キメラＥ７ＶＬＰｓを精製し、この
材料をＥ７ＥＬＩＳＡで用いることが有利であろう。ヒ
トＬ１またはＬ２との血清反応性の複雑さを避けるため
に、ＢＶＰ基材粒子を用いることができるであろう。Ｅ
７の血清反応性（これは前癌病変とは対照的に癌と相関
する）をモニターすることは、子宮頸癌患者で疾患の進
行を追跡するために、さらに再発をスクリーニングする
ために有用であると提唱された（上掲書）。
【００５０】場合によっては、キメラＶＬＰｓは活性を
有する完全な蛋白を細胞に輸送させる方法で用いること
ができる。この蛋白は、例えば酵素または毒素または薬
剤であろう。このキメラＶＬＰｓは細胞にインビトロ、
インビボ、そのままの場所でまたは生体外のいずれかで
投与され、この蛋白はその後細胞に輸送され、該細胞で
その意図された目的（例えば酵素または毒素または薬剤
として）のために機能する。
有する完全な蛋白を細胞に輸送させる方法で用いること
ができる。この蛋白は、例えば酵素または毒素または薬
剤であろう。このキメラＶＬＰｓは細胞にインビトロ、
インビボ、そのままの場所でまたは生体外のいずれかで
投与され、この蛋白はその後細胞に輸送され、該細胞で
その意図された目的（例えば酵素または毒素または薬剤
として）のために機能する。
【００５１】本発明者らは、Ｌ２に融合させたＥ７蛋白
またはペプチドを取り込んだパピローマウイルス様キメ
ラ粒子の作製に成功した。
またはペプチドを取り込んだパピローマウイルス様キメ
ラ粒子の作製に成功した。
【００５２】パピローマウイルスＥ７遺伝子は、Ｌ２遺
伝子の３’末端に枠内で融合させた場合、またはＬ２読
み取り枠部分内で融合させた場合、ウイルス様粒子に取
り込んだＬ２−Ｅ７融合蛋白をＬ１蛋白の存在下で発現
させた。ＶＬＰｓへのＬ２−Ｅ７の取り込み効率と純正
度は野性型Ｌ２蛋白のそれと同様であった。ＢＰＶＬ１
／Ｌ２−Ｅ７ウイルス様粒子は、ＢＰＶＬ１／Ｌ２粒子
と同じ効率で中和抗体を誘導させることが分かった。キ
メラ粒子は、Ｌ２−Ｅ７キメラ粒子で免疫したウサギで
融合パートナーエピトープに特異的な液性免疫を誘導
し、Ｅ７に対する抗体を生じることが観察された。
伝子の３’末端に枠内で融合させた場合、またはＬ２読
み取り枠部分内で融合させた場合、ウイルス様粒子に取
り込んだＬ２−Ｅ７融合蛋白をＬ１蛋白の存在下で発現
させた。ＶＬＰｓへのＬ２−Ｅ７の取り込み効率と純正
度は野性型Ｌ２蛋白のそれと同様であった。ＢＰＶＬ１
／Ｌ２−Ｅ７ウイルス様粒子は、ＢＰＶＬ１／Ｌ２粒子
と同じ効率で中和抗体を誘導させることが分かった。キ
メラ粒子は、Ｌ２−Ｅ７キメラ粒子で免疫したウサギで
融合パートナーエピトープに特異的な液性免疫を誘導
し、Ｅ７に対する抗体を生じることが観察された。
【００５３】パピローマウイルス様キメラ粒子を作製す
ることが可能になったことによって、実際上どのような
蛋白またはペプチドもＬ２生成物に融合させ、パピロー
マウイルス様キメラ粒子に取り込ませることが可能にな
る。
ることが可能になったことによって、実際上どのような
蛋白またはペプチドもＬ２生成物に融合させ、パピロー
マウイルス様キメラ粒子に取り込ませることが可能にな
る。
【００５４】本発明者らは、Ｌ２−Ｅ７融合蛋白を作製
し、これらの蛋白を昆虫細胞でリコンビナントバキュロ
ウイルスを介してＬ１とともに発現させることによって
キメラＶＬＰｓを製造することに成功した。我々は３つ
のキメラＶＬＰｓを作製した：ＨＰＶ１６Ｌ１＋ＨＰＶ
１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完全な長さ）、ＢＰＶＬ１
＋ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完全な長さ）およびＢ
ＰＶＬ１＋ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（アミノ酸１〜
３０）。ＢＰＶＬ２はＨＰＶ１６Ｅ７にその３’末端で
融合させた。ＨＰＶ１６Ｌ２はＨＰＶ１６Ｅ７にその
３’末端で融合させた。さらにＨＰＶ１６Ｅ７の最初の
３０コドンはＢＰＶＬ２のコドン２７４と２７５との間
に挿入させた。
し、これらの蛋白を昆虫細胞でリコンビナントバキュロ
ウイルスを介してＬ１とともに発現させることによって
キメラＶＬＰｓを製造することに成功した。我々は３つ
のキメラＶＬＰｓを作製した：ＨＰＶ１６Ｌ１＋ＨＰＶ
１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完全な長さ）、ＢＰＶＬ１
＋ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完全な長さ）およびＢ
ＰＶＬ１＋ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（アミノ酸１〜
３０）。ＢＰＶＬ２はＨＰＶ１６Ｅ７にその３’末端で
融合させた。ＨＰＶ１６Ｌ２はＨＰＶ１６Ｅ７にその
３’末端で融合させた。さらにＨＰＶ１６Ｅ７の最初の
３０コドンはＢＰＶＬ２のコドン２７４と２７５との間
に挿入させた。
【００５５】Ｌ１およびＬ２−Ｅ７の蔗糖濃度勾配によ
る同時沈降並びに免疫沈澱によって、キメラ蛋白がＶＬ
Ｐｓに取り込まれていることが示された。
る同時沈降並びに免疫沈澱によって、キメラ蛋白がＶＬ
Ｐｓに取り込まれていることが示された。
【００５６】透過型電子顕微鏡によって、Ｌ２−Ｅ７融
合蛋白を含む粒子はＬ１またはＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓと同
じ効率で集合組立が行なわれ、形態学的に区別できない
ことが明らかになった。
合蛋白を含む粒子はＬ１またはＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓと同
じ効率で集合組立が行なわれ、形態学的に区別できない
ことが明らかになった。
【００５７】インビトロＢＰＶ１中和アッセーによっ
て、ＢＰＶＬ１含有キメラＶＬＰｓは中和抗血清を誘導
できることが示された。力価はＢＰＶＬ１／Ｌ２を用い
て得られるものに匹敵した。３００００に匹敵する中和
力価がＢＰＶＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓおよびＢＰＶＬ１／Ｌ
２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完全な長さ）キメラＶＬＰｓの両
方に対して得られた。
て、ＢＰＶＬ１含有キメラＶＬＰｓは中和抗血清を誘導
できることが示された。力価はＢＰＶＬ１／Ｌ２を用い
て得られるものに匹敵した。３００００に匹敵する中和
力価がＢＰＶＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓおよびＢＰＶＬ１／Ｌ
２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完全な長さ）キメラＶＬＰｓの両
方に対して得られた。
【００５８】Ｌ２−Ｅ７キメラ粒子で免疫したウサギは
Ｅ７に対する抗体を生じたが、このことは、キメラＶＬ
Ｐｓによる融合パートナーエピトープに対して特異的な
液性免疫が誘導されることを示し、さらにＥ７の存在部
位がＶＬＰｓの外部であることを確認させた。
Ｅ７に対する抗体を生じたが、このことは、キメラＶＬ
Ｐｓによる融合パートナーエピトープに対して特異的な
液性免疫が誘導されることを示し、さらにＥ７の存在部
位がＶＬＰｓの外部であることを確認させた。
【００５９】実施例１で説明するように、キメラリコン
ビナントバキュロウイルスを作製することができる。キ
メラの遺伝子は、ゲノム源またはｃＤＮＡから直接的合
成またはそのいずれかの組合せによって得ることができ
る。Ｌ２およびその融合パートナー遺伝子はリコンビナ
ントＰＣＲ技術によって増幅できる。このＰＣＲ技術
は、例えば融合を促進し、さらに発現、移転および／ま
たはクローニングのためのベクター（例えばプラスミ
ド）へのクローニングを促進する制限酵素部位を含むオ
リゴヌクレオチドを用いる。
ビナントバキュロウイルスを作製することができる。キ
メラの遺伝子は、ゲノム源またはｃＤＮＡから直接的合
成またはそのいずれかの組合せによって得ることができ
る。Ｌ２およびその融合パートナー遺伝子はリコンビナ
ントＰＣＲ技術によって増幅できる。このＰＣＲ技術
は、例えば融合を促進し、さらに発現、移転および／ま
たはクローニングのためのベクター（例えばプラスミ
ド）へのクローニングを促進する制限酵素部位を含むオ
リゴヌクレオチドを用いる。
【００６０】融合遺伝子はバキュロウイルス発現ベクタ
ーでクローニングできる。Ｌ１を含む別のバキュロウイ
ルス発現ベクターを作製できる。または、融合遺伝子
は、既にＬ１を含むバキュロウイルス二重発現ベクター
でクローニングできる。
ーでクローニングできる。Ｌ１を含む別のバキュロウイ
ルス発現ベクターを作製できる。または、融合遺伝子
は、既にＬ１を含むバキュロウイルス二重発現ベクター
でクローニングできる。
【００６１】実施例２では、リコンビナントバキュロウ
イルス選別の典型的な方法が説明される。ＣｓＣｌ精製
（またはそれに匹敵する）リコンビナントプラスミドを
バキュロウイルスＤＮＡとＳｆ９昆虫細胞にリポフェク
チン（またはそれと同等なもの）を用いて同時トランス
フェクションさせることができる。続いて、通常のバキ
ュロウイルスベクターおよび昆虫細胞培養方法を用い
て、リコンビナントバキュロウイルスを（例えば）プラ
ーク精製することができる。
イルス選別の典型的な方法が説明される。ＣｓＣｌ精製
（またはそれに匹敵する）リコンビナントプラスミドを
バキュロウイルスＤＮＡとＳｆ９昆虫細胞にリポフェク
チン（またはそれと同等なもの）を用いて同時トランス
フェクションさせることができる。続いて、通常のバキ
ュロウイルスベクターおよび昆虫細胞培養方法を用い
て、リコンビナントバキュロウイルスを（例えば）プラ
ーク精製することができる。
【００６２】二重発現バキュロウイルスベクターの代わ
りに２種の単一発現バキュロウイルスを用いる方が有利
であるかもしれない。この場合には、キメラＶＬＰｓは
Ｓｆ９細胞を２つのリコンビナントバキュロウイルス
（１つはＬ１生成物を他方はＬ２融合生成物をコードす
る）で感染させることによって生成できる。該遺伝子を
異なるベクターに配置することによって、産生されるＬ
１生成物およびＬ２融合生成物量を操作することができ
る。このアプローチは、ＶＬＰにおけるＬ２融合生成物
のＬ１生成物に対する比を変化させることを可能にす
る。天然のビリオンではＬ２はＬ１に比べて少ない成分
であるが、２種の単一発現ベクターを用いてＶＬＰへの
Ｌ２融合生成物のより大量の取り込みを達成することが
できる。
りに２種の単一発現バキュロウイルスを用いる方が有利
であるかもしれない。この場合には、キメラＶＬＰｓは
Ｓｆ９細胞を２つのリコンビナントバキュロウイルス
（１つはＬ１生成物を他方はＬ２融合生成物をコードす
る）で感染させることによって生成できる。該遺伝子を
異なるベクターに配置することによって、産生されるＬ
１生成物およびＬ２融合生成物量を操作することができ
る。このアプローチは、ＶＬＰにおけるＬ２融合生成物
のＬ１生成物に対する比を変化させることを可能にす
る。天然のビリオンではＬ２はＬ１に比べて少ない成分
であるが、２種の単一発現ベクターを用いてＶＬＰへの
Ｌ２融合生成物のより大量の取り込みを達成することが
できる。
【００６３】実施例３で説明するように、キメラ粒子は
塩化セシウム（または同等物）中でのバンド形成によっ
て精製することができる。Ｓｆ９昆虫細胞にバキュロウ
イルスを例えば感染価１０で感染させることができる。
７２時間後（またはその辺りで）、細胞を採取し燐酸緩
衝食塩水中で６０秒（またはその辺りで）音波破砕でき
る。低速（または同等な処理）で清澄にした後、溶解物
を４０％（重量／容積）の蔗糖／ＰＢＳクッション中で
例えば１１００００×ｇ、２５時間遠心する（ＳＷ−２
８ローター）。再懸濁させた沈殿物を、例えば１０−４
０％（重量／重量）のＣｓＣｌ／ＰＢＳ勾配中で室温で
２０時間１４１０００×ｇで平衡に達するまで遠心す
る。目に見えるバンドを採取し、同一条件を用いて再び
平衡となるまで遠心し、ＰＢＳに対して十分に透析して
（例えば）４℃で保存する。
塩化セシウム（または同等物）中でのバンド形成によっ
て精製することができる。Ｓｆ９昆虫細胞にバキュロウ
イルスを例えば感染価１０で感染させることができる。
７２時間後（またはその辺りで）、細胞を採取し燐酸緩
衝食塩水中で６０秒（またはその辺りで）音波破砕でき
る。低速（または同等な処理）で清澄にした後、溶解物
を４０％（重量／容積）の蔗糖／ＰＢＳクッション中で
例えば１１００００×ｇ、２５時間遠心する（ＳＷ−２
８ローター）。再懸濁させた沈殿物を、例えば１０−４
０％（重量／重量）のＣｓＣｌ／ＰＢＳ勾配中で室温で
２０時間１４１０００×ｇで平衡に達するまで遠心す
る。目に見えるバンドを採取し、同一条件を用いて再び
平衡となるまで遠心し、ＰＢＳに対して十分に透析して
（例えば）４℃で保存する。
【００６４】実施例４に説明するように、キメラ複合体
の同時沈降を、例えば分析用濃度勾配遠心で実施でき
る。例えば、１２から４５％蔗糖の段階勾配は４℃で一
晩で直線化して透析したサンプルを最上部に重層し、こ
の濃度勾配を４１０００ｒｐｍ（２８８０００×ｇ）で
２時間ＳＷ−４１ローターで遠心する。分画を採集し、
同時沈降について例えばウェスタンブロット分析または
同時免疫沈澱によって分析する。
の同時沈降を、例えば分析用濃度勾配遠心で実施でき
る。例えば、１２から４５％蔗糖の段階勾配は４℃で一
晩で直線化して透析したサンプルを最上部に重層し、こ
の濃度勾配を４１０００ｒｐｍ（２８８０００×ｇ）で
２時間ＳＷ−４１ローターで遠心する。分画を採集し、
同時沈降について例えばウェスタンブロット分析または
同時免疫沈澱によって分析する。
【００６５】実施例５で説明するように、同時沈降は例
えば免疫沈澱によって達成される。
えば免疫沈澱によって達成される。
【００６６】実施例６で説明するように抗血清を作製で
きる。これは、文献に記載されたように(Dvoretskyら、
Virology 103:369(1980)）、ＢＰＶ１中和アッセー（ま
たは同等なもの）を実施するために行なわれる。抗血清
は例えば以下のように作製される。ＰＢＳ中のＣｓＣｌ
勾配精製粒子３３０μｌ（濃度１ｍｇ／ｍｌ）を皮下注
射してウサギを免疫する。続いて、最初の注射から２週
間後および４週間後に同じ量の粒子でウサギを追加免疫
する。
きる。これは、文献に記載されたように(Dvoretskyら、
Virology 103:369(1980)）、ＢＰＶ１中和アッセー（ま
たは同等なもの）を実施するために行なわれる。抗血清
は例えば以下のように作製される。ＰＢＳ中のＣｓＣｌ
勾配精製粒子３３０μｌ（濃度１ｍｇ／ｍｌ）を皮下注
射してウサギを免疫する。続いて、最初の注射から２週
間後および４週間後に同じ量の粒子でウサギを追加免疫
する。
【００６７】実施例７で説明するようにＢＰＶ１中和ア
ッセー（または同等なもの）を実施し、ＢＰＶキメラ粒
子が形状エピトープを表示しているか否かを調べる。例
えば２回目の追加免疫注射後３週間して得られた血清の
段階希釈を＝５００フォーカス形成単位のＢＰＶ１ウイ
ルスと３０分保温し、このウイルスをＣ１２７細胞に１
時間吸着させ、この細胞を３週間培養する。続いてフォ
ーカスをメタノール中の０．５％メチレンブルー／０．
２５％石炭酸フクシンで染色する。キメラＶＬＰｓおよ
びコントロールＢＰＶＬ１−Ｌ２ＶＬＰｓについて中和
力価を得る。匹敵する中和力価は、キメラ粒子が適切に
折り畳まれて有効に形状エピトープが表示されているこ
とを示す。
ッセー（または同等なもの）を実施し、ＢＰＶキメラ粒
子が形状エピトープを表示しているか否かを調べる。例
えば２回目の追加免疫注射後３週間して得られた血清の
段階希釈を＝５００フォーカス形成単位のＢＰＶ１ウイ
ルスと３０分保温し、このウイルスをＣ１２７細胞に１
時間吸着させ、この細胞を３週間培養する。続いてフォ
ーカスをメタノール中の０．５％メチレンブルー／０．
２５％石炭酸フクシンで染色する。キメラＶＬＰｓおよ
びコントロールＢＰＶＬ１−Ｌ２ＶＬＰｓについて中和
力価を得る。匹敵する中和力価は、キメラ粒子が適切に
折り畳まれて有効に形状エピトープが表示されているこ
とを示す。
【００６８】実施例８に説明するように、キメラ粒子は
例えば透過型電子顕微鏡で調べることができる。例え
ば、精製粒子を炭素被覆グリッドに吸着させ、１％酢酸
ウラニルで染色し、フィリップス電子顕微鏡モデルＥＭ
４００Ｔで３６０００倍で調べる。キメラ粒子およびＬ
１またはＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓの取り込み効率並びに形態
を比較する。取り込みおよび形態が区別不可能であると
いうことは、キメラ粒子の適切な自己集合組立を示唆す
る。
例えば透過型電子顕微鏡で調べることができる。例え
ば、精製粒子を炭素被覆グリッドに吸着させ、１％酢酸
ウラニルで染色し、フィリップス電子顕微鏡モデルＥＭ
４００Ｔで３６０００倍で調べる。キメラ粒子およびＬ
１またはＬ１／Ｌ２ＶＬＰｓの取り込み効率並びに形態
を比較する。取り込みおよび形態が区別不可能であると
いうことは、キメラ粒子の適切な自己集合組立を示唆す
る。
【００６９】実施例９で説明するように、キメラ粒子
は、例えば融合パートナーエピトープに対して特異的な
液性免疫誘導について調べられる。例えば、ウサギにキ
メラＶＬＰｓを接種する。例えば融合パートナー抗原サ
ンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥに、続いてウェスタンブロッ
テイング分析に付してこの血清を抗体について調べる。
免疫血清および免疫前血清（コントロール）を適切に希
釈して用いることができる。免疫ウサギから得た血清に
よってウェスタンブロットで融合パートナーのバンドが
検出されれば、融合パートナーエピトープに対して特異
的な抗体が誘導されたことが示唆される。
は、例えば融合パートナーエピトープに対して特異的な
液性免疫誘導について調べられる。例えば、ウサギにキ
メラＶＬＰｓを接種する。例えば融合パートナー抗原サ
ンプルをＳＤＳ−ＰＡＧＥに、続いてウェスタンブロッ
テイング分析に付してこの血清を抗体について調べる。
免疫血清および免疫前血清（コントロール）を適切に希
釈して用いることができる。免疫ウサギから得た血清に
よってウェスタンブロットで融合パートナーのバンドが
検出されれば、融合パートナーエピトープに対して特異
的な抗体が誘導されたことが示唆される。
【００７０】実施例１０で説明するように、例えばキメ
ラＶＬＰｓをマウスに注射し抗原特異的Ｔ細胞増殖を測
定することによって、融合ペプチドについて特異的な細
胞性免疫の誘導についてキメラ粒子を調べる。
ラＶＬＰｓをマウスに注射し抗原特異的Ｔ細胞増殖を測
定することによって、融合ペプチドについて特異的な細
胞性免疫の誘導についてキメラ粒子を調べる。
【００７１】実施例１１で説明するように、Ｌ２融合は
予防免疫を失わせないことを明らかにするために、例え
ばウサギをキメラＣＲＰＶＶＬＰｓおよび非キメラＣＲ
ＰＶＶＬＰｓ（コントロール）で免疫し、続いて感染性
ＣＲＰＶで試験感染させることによって、または、ＳＴ
Ｄ病原体を含むキメラＶＬＰｓで実験動物を免疫し、続
いてＳＴＤで試験感染させてから致死的感染に対する生
存の向上もしくは致死量以下の試験感染後の感染の減少
を測定することによって、キメラ粒子を試験感染に対す
る予防免疫の誘導について調べることができる。
予防免疫を失わせないことを明らかにするために、例え
ばウサギをキメラＣＲＰＶＶＬＰｓおよび非キメラＣＲ
ＰＶＶＬＰｓ（コントロール）で免疫し、続いて感染性
ＣＲＰＶで試験感染させることによって、または、ＳＴ
Ｄ病原体を含むキメラＶＬＰｓで実験動物を免疫し、続
いてＳＴＤで試験感染させてから致死的感染に対する生
存の向上もしくは致死量以下の試験感染後の感染の減少
を測定することによって、キメラ粒子を試験感染に対す
る予防免疫の誘導について調べることができる。
【００７２】実施例１２で説明するように、例えばキメ
ラＣＲＰＶＶＬＰｓおよび非キメラＣＲＰＶＶＬＰｓ
（コントロール）を用いて（既にパピローマをもつ）ウ
サギを免疫し、存在するパピローマの退縮を測定するこ
とによって、既に存在するパピローマに対する治療的免
疫誘導についてキメラ粒子を調べることができる。
ラＣＲＰＶＶＬＰｓおよび非キメラＣＲＰＶＶＬＰｓ
（コントロール）を用いて（既にパピローマをもつ）ウ
サギを免疫し、存在するパピローマの退縮を測定するこ
とによって、既に存在するパピローマに対する治療的免
疫誘導についてキメラ粒子を調べることができる。
【００７３】実施例１３で説明するように、例えば腫瘍
の免疫療法および免疫的予防についてキメラ粒子を調べ
ることができる。
の免疫療法および免疫的予防についてキメラ粒子を調べ
ることができる。
【００７４】本発明の具体的な特徴は、特定の実施形態
に本発明の範囲を限定することなく本発明の例示を目的
とする以下の実施例を参考にいっそう容易に理解されよ
う。
に本発明の範囲を限定することなく本発明の例示を目的
とする以下の実施例を参考にいっそう容易に理解されよ
う。
【００７５】
【実施例】以下に、本発明の実施例を説明するが、本発
明は以下の実施例になんら限定されるものではない。 （実施例１） ［キメラリコンビナントバキュロウイルスの作製］３種
のキメラを作製した：ＨＰＶ１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ
７、ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７およびＢＰＶＬ２−Ｈ
ＰＶ１６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）。ＨＰＶ１６Ｌ２−
ＨＰＶ１６Ｅ７は、ＨＰＶ１６Ｌ２のＣ−末端（アミノ
酸４７３）に融合させた完全な長さのＨＰＶ１６Ｅ７を
含んでいた。ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７は、ＢＰＶＬ
２のＣ−末端（アミノ酸４６９）に融合した完全な長さ
のＨＰＶ１６Ｅ７を含んでいた。ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１
６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）は、アミノ酸２７４と２７
５の間でＢＰＶＬ２の中央に融合させたＨＰＶ１６Ｅ７
の最初の３０アミノ酸を含んでいた。
明は以下の実施例になんら限定されるものではない。 （実施例１） ［キメラリコンビナントバキュロウイルスの作製］３種
のキメラを作製した：ＨＰＶ１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ
７、ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７およびＢＰＶＬ２−Ｈ
ＰＶ１６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）。ＨＰＶ１６Ｌ２−
ＨＰＶ１６Ｅ７は、ＨＰＶ１６Ｌ２のＣ−末端（アミノ
酸４７３）に融合させた完全な長さのＨＰＶ１６Ｅ７を
含んでいた。ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７は、ＢＰＶＬ
２のＣ−末端（アミノ酸４６９）に融合した完全な長さ
のＨＰＶ１６Ｅ７を含んでいた。ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１
６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）は、アミノ酸２７４と２７
５の間でＢＰＶＬ２の中央に融合させたＨＰＶ１６Ｅ７
の最初の３０アミノ酸を含んでいた。
【００７６】Ｌ２−Ｅ７キメラ遺伝子はリコンビナント
ＰＣＲ技術（R. Higuchi(1990)、「ＰＣＲプロトコル：
方法と応用の手引」(PCR Protocols: A Guide toMethod
s and Applications）より、M.A. Innis, D.H. Gelfan
d, J.J. Sninsky & T.J. White編、(Academic, NY), p
p.177-180))によって作製した。完全な長さのＨＰＶ１
６Ｅ７を含むキメラについては、制限酵素部位を含む
５’オリゴおよび、Ｅ７の５’オリゴと相補的な３’オ
リゴを用いてＬ２を増幅させた。それぞれ別個の反応
で、Ｌ２の３’オリゴと相補的な５’オリゴ、および制
限酵素部位を含む３’オリゴを用いてＥ７を増幅させ
た。続いて、外側（Ｌ２の５’およびＥ７の３’）オリ
ゴのみを用いて、Ｌ２およびＥ７遺伝子を第二のプライ
マー伸長反応で融合させた。ＨＰＶ１６Ｅ７のアミノ酸
１〜３０のみを含むキメラについては、“内部”プライ
マーはＨＰＶ１６Ｅ７の最初の３０アミノ酸をコードし
た。
ＰＣＲ技術（R. Higuchi(1990)、「ＰＣＲプロトコル：
方法と応用の手引」(PCR Protocols: A Guide toMethod
s and Applications）より、M.A. Innis, D.H. Gelfan
d, J.J. Sninsky & T.J. White編、(Academic, NY), p
p.177-180))によって作製した。完全な長さのＨＰＶ１
６Ｅ７を含むキメラについては、制限酵素部位を含む
５’オリゴおよび、Ｅ７の５’オリゴと相補的な３’オ
リゴを用いてＬ２を増幅させた。それぞれ別個の反応
で、Ｌ２の３’オリゴと相補的な５’オリゴ、および制
限酵素部位を含む３’オリゴを用いてＥ７を増幅させ
た。続いて、外側（Ｌ２の５’およびＥ７の３’）オリ
ゴのみを用いて、Ｌ２およびＥ７遺伝子を第二のプライ
マー伸長反応で融合させた。ＨＰＶ１６Ｅ７のアミノ酸
１〜３０のみを含むキメラについては、“内部”プライ
マーはＨＰＶ１６Ｅ７の最初の３０アミノ酸をコードし
た。
【００７７】続いて、融合遺伝子をバキュロウイルス二
重発現ベクターｐＳｙｎｗｔＶ１−（これはポリヘドロ
ンプロモーター下でクローニングされたＬ１を既に含む
(Kirnbauerら、Virol. 67:6929(1993)）でｐＳｙｎプロ
モーターの直ぐ下流でクローニングした。
重発現ベクターｐＳｙｎｗｔＶ１−（これはポリヘドロ
ンプロモーター下でクローニングされたＬ１を既に含む
(Kirnbauerら、Virol. 67:6929(1993)）でｐＳｙｎプロ
モーターの直ぐ下流でクローニングした。
【００７８】ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７キメラは５’
ＢｇＩＩＩから３’ＢｇＩＩＩフラグメントとしてクロ
ーニングした。ＨＰＶ１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７キメラ
は５’ＳｓｔＩＩから３’ＳｓｔＩＩフラグメントとし
てクローニングした。ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完
全な長さ）のために用いたプライマーは以下の通りであ
った：ＢＰＶＬ２のセンス（鎖）は、5'GCGGTAGATCTACC
TATAAATATGAGTGCACGAAAAAGAGTAAAACGT3' （配列番号：
１）、アンチセンス（鎖）は、5'GCAATGTAGGTGTATCTCCA
TGCATGGCATGTTTCCGTTTTTTTCGTTTCCTCAACAAGGAGGG3'（配
列番号：２）ＨＰＶ１６Ｅ７、センスは、5'CCCTCCTTGT
TGAGGAAACGAAAAAAACGGAAACATGCCATGCATGGAGATACACCTACA
TTGC3'（配列番号：３）およびアンチセンスは5'CCGCTA
GATCTGGTACCTGCAGGATCAGCCATGG3' （配列番号：４）Ｂ
ＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）のため
に用いたプライマーは以下の通りであった：ＢＰＶＬ
２、センスは上記と同じで、内部プライマーのアンチセ
ンスは5'CAGTTGTCTCTGGTTGCAAATCTAACATATATTCATGCAATG
TAGGTGTATCTCCATGCATGGATGAAAACACTTCAGGATCTTCCGTGGGC
3' （配列番号：５）、内部プライマーのセンスは5'GCA
TGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACTGTTATG
AGCAATTAAATGACCAAACATTTGCAAACCCACTGTATGAAGCAGAACC
3' （配列番号：６）、ＢＰＶＬ２、アンチセンスは5'C
CGCTAGATCTAGGGAGATACAGCTTCTGGCCTTGTTGCCACAACGC3'
（配列番号：７）。ＨＰＶ１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７キ
メラのために用いたプライマーは以下の通りであった：
ＨＰＶ１６Ｌ２、センスは5'GCGGTCCGCGGAATATGCGACACA
AACGTTCTGCAAAACGCACAAAACGT3'(配列番号：８）、およ
びアンチセンスは5'ATCTCCATGCATGGCAGCCAAAGAGAC3'
（配列番号：９）、ＨＰＶ１６Ｅ７、センスは5'GTCTCT
TTGGCTGCCATGCATGGAGAT3'（配列番号：１０）、および
アンチセンスは5'GCTCCGCGGGGTACCTGCAGGATCAGCC3'
（配列番号：１１）。 （実施例２） ［リコンビナントバキュロウイルスの選別］リポフェク
チン(GIBCO/BRL製、ガイザースバーグ、メリーランド）
を用いて、ＣｓＣｌ精製リコンビナントプラスミドをＳ
ｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ１７１１）にバキュロ
ウイルスＤＮＡ（Baculo-Gold;PharMingen製、サンディ
エゴ、カリフォルニア）と同時トランスフェクションさ
せた（P.C. Harting, Biotechniques 11:310(1991)）。
リコンビナントバキュロウイルスは、記載（M.D. Summe
rs & G.E. Smith (1987)、「バキュロウイルスベクター
と昆虫細胞培養手順の手引」(A Manual of Methods for
Baculovirus Vectors and Insect Cell Culture Proce
dures)、Texas Agricultural Experiment Station Bull
etin(Tex. Agric. Exp. Stn., College Station, TX)、
1555巻）にしたがってプラーク精製した。 （実施例３） ［キメラ粒子の精製］Ｓｆ９昆虫細胞は、感染価１０で
リコンビナントバキュロウイルスで感染させられた。７
２時間後、採取細胞を燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で６
０秒間音波で破砕した。低速で清澄にした後、溶解物を
４０％（重量／容積）の蔗糖／ＰＢＳクッション中で１
１００００×ｇ、２５時間遠心した（ＳＷ−２８ロータ
ー）。再懸濁させた沈殿物を、１０〜４０％（重量／重
量）のＣｓＣｌ／ＰＢＳ勾配中で室温で２０時間１４１
０００×ｇで平衡に達するまで遠心した。目に見えるバ
ンドを採取し、同一条件を用いて再び平衡となるまで遠
心し、ＰＢＳに対して十分に透析して４℃で保存した。 （実施例４） ［Ｌ１／Ｌ２−Ｅ７複合体の同時沈降］Ｌ２−Ｅ７融合
蛋白が粒子内に取り込まれているか否かを決定するため
に、分析用濃度勾配遠心を、Ｌ１およびＬ２の同時集合
組立について調べるために先に報告されたように実施し
た(Kirnbauerら、Virol. 67:6929(1993)）。
ＢｇＩＩＩから３’ＢｇＩＩＩフラグメントとしてクロ
ーニングした。ＨＰＶ１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７キメラ
は５’ＳｓｔＩＩから３’ＳｓｔＩＩフラグメントとし
てクローニングした。ＢＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（完
全な長さ）のために用いたプライマーは以下の通りであ
った：ＢＰＶＬ２のセンス（鎖）は、5'GCGGTAGATCTACC
TATAAATATGAGTGCACGAAAAAGAGTAAAACGT3' （配列番号：
１）、アンチセンス（鎖）は、5'GCAATGTAGGTGTATCTCCA
TGCATGGCATGTTTCCGTTTTTTTCGTTTCCTCAACAAGGAGGG3'（配
列番号：２）ＨＰＶ１６Ｅ７、センスは、5'CCCTCCTTGT
TGAGGAAACGAAAAAAACGGAAACATGCCATGCATGGAGATACACCTACA
TTGC3'（配列番号：３）およびアンチセンスは5'CCGCTA
GATCTGGTACCTGCAGGATCAGCCATGG3' （配列番号：４）Ｂ
ＰＶＬ２−ＨＰＶ１６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）のため
に用いたプライマーは以下の通りであった：ＢＰＶＬ
２、センスは上記と同じで、内部プライマーのアンチセ
ンスは5'CAGTTGTCTCTGGTTGCAAATCTAACATATATTCATGCAATG
TAGGTGTATCTCCATGCATGGATGAAAACACTTCAGGATCTTCCGTGGGC
3' （配列番号：５）、内部プライマーのセンスは5'GCA
TGAATATATGTTAGATTTGCAACCAGAGACAACTGATCTCTACTGTTATG
AGCAATTAAATGACCAAACATTTGCAAACCCACTGTATGAAGCAGAACC
3' （配列番号：６）、ＢＰＶＬ２、アンチセンスは5'C
CGCTAGATCTAGGGAGATACAGCTTCTGGCCTTGTTGCCACAACGC3'
（配列番号：７）。ＨＰＶ１６Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７キ
メラのために用いたプライマーは以下の通りであった：
ＨＰＶ１６Ｌ２、センスは5'GCGGTCCGCGGAATATGCGACACA
AACGTTCTGCAAAACGCACAAAACGT3'(配列番号：８）、およ
びアンチセンスは5'ATCTCCATGCATGGCAGCCAAAGAGAC3'
（配列番号：９）、ＨＰＶ１６Ｅ７、センスは5'GTCTCT
TTGGCTGCCATGCATGGAGAT3'（配列番号：１０）、および
アンチセンスは5'GCTCCGCGGGGTACCTGCAGGATCAGCC3'
（配列番号：１１）。 （実施例２） ［リコンビナントバキュロウイルスの選別］リポフェク
チン(GIBCO/BRL製、ガイザースバーグ、メリーランド）
を用いて、ＣｓＣｌ精製リコンビナントプラスミドをＳ
ｆ９昆虫細胞（ＡＴＣＣ，ＣＲＬ１７１１）にバキュロ
ウイルスＤＮＡ（Baculo-Gold;PharMingen製、サンディ
エゴ、カリフォルニア）と同時トランスフェクションさ
せた（P.C. Harting, Biotechniques 11:310(1991)）。
リコンビナントバキュロウイルスは、記載（M.D. Summe
rs & G.E. Smith (1987)、「バキュロウイルスベクター
と昆虫細胞培養手順の手引」(A Manual of Methods for
Baculovirus Vectors and Insect Cell Culture Proce
dures)、Texas Agricultural Experiment Station Bull
etin(Tex. Agric. Exp. Stn., College Station, TX)、
1555巻）にしたがってプラーク精製した。 （実施例３） ［キメラ粒子の精製］Ｓｆ９昆虫細胞は、感染価１０で
リコンビナントバキュロウイルスで感染させられた。７
２時間後、採取細胞を燐酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中で６
０秒間音波で破砕した。低速で清澄にした後、溶解物を
４０％（重量／容積）の蔗糖／ＰＢＳクッション中で１
１００００×ｇ、２５時間遠心した（ＳＷ−２８ロータ
ー）。再懸濁させた沈殿物を、１０〜４０％（重量／重
量）のＣｓＣｌ／ＰＢＳ勾配中で室温で２０時間１４１
０００×ｇで平衡に達するまで遠心した。目に見えるバ
ンドを採取し、同一条件を用いて再び平衡となるまで遠
心し、ＰＢＳに対して十分に透析して４℃で保存した。 （実施例４） ［Ｌ１／Ｌ２−Ｅ７複合体の同時沈降］Ｌ２−Ｅ７融合
蛋白が粒子内に取り込まれているか否かを決定するため
に、分析用濃度勾配遠心を、Ｌ１およびＬ２の同時集合
組立について調べるために先に報告されたように実施し
た(Kirnbauerら、Virol. 67:6929(1993)）。
【００７９】簡単に記せば、１２から４５％の蔗糖段階
濃度勾配を４℃で一晩直線化させて透析サンプルを最上
部に重層し、この濃度勾配をＳＷ−４１ローターで４１
０００ｒｐｍ（２８８０００×ｇ）で２時間遠心した。
分画を採取し、これら分画をクーマシー染色ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ（Ｌ１）またはウェスタンブロット分析（抗ＢＰ
ＶＬ２ポリクローナル抗体または抗ＨＰＶ１６Ｅ７ポリ
クローナル抗体および 125Ｉ標識抗ウサギＩｇＧを用い
る）で調べた。
濃度勾配を４℃で一晩直線化させて透析サンプルを最上
部に重層し、この濃度勾配をＳＷ−４１ローターで４１
０００ｒｐｍ（２８８０００×ｇ）で２時間遠心した。
分画を採取し、これら分画をクーマシー染色ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥ（Ｌ１）またはウェスタンブロット分析（抗ＢＰ
ＶＬ２ポリクローナル抗体または抗ＨＰＶ１６Ｅ７ポリ
クローナル抗体および 125Ｉ標識抗ウサギＩｇＧを用い
る）で調べた。
【００８０】キメラＬ２−Ｅ７とウイルス様粒子との結
合は同時沈降分析によって確認された。 （実施例５） ［Ｌ１／Ｌ２−Ｅ７複合体の同時免疫沈澱］Ｌ２−Ｅ７
融合蛋白はＬ１と安定な複合体を形成するという証拠を
得るために、同時免疫沈澱実験を実施した。
合は同時沈降分析によって確認された。 （実施例５） ［Ｌ１／Ｌ２−Ｅ７複合体の同時免疫沈澱］Ｌ２−Ｅ７
融合蛋白はＬ１と安定な複合体を形成するという証拠を
得るために、同時免疫沈澱実験を実施した。
【００８１】簡単に記せば、ＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰＶ
１６Ｅ７（完全な長さ）およびＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰ
Ｖ１６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）ＶＬＰ調製物を、ＰＢ
Ｓ、１％トリトンＲＸ−１００中で抗Ｌ１モノクローナ
ル抗体５Ｂ６(Rodenら、J. Virol. 印刷中（1994年11
月))、抗Ｌ１ポリクローナル抗体、免疫前血清または無
関係抗体（抗Ｅ１Ａモノクローナル抗体）および蛋白Ａ
セファロースを用いて免疫沈澱させ、さらにＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥに付した。蛋白を免疫ブロッティングに付し、抗
ＢＰＶＬ２もしくは抗ＨＰＶ１６Ｅ７血清または抗ＨＰ
Ｖ１６Ｅ７モノクローナル抗体（Triton Diagnostics
製、アラメダ、カリフォルニア）をプローブとして調べ
た。
１６Ｅ７（完全な長さ）およびＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰ
Ｖ１６Ｅ７（アミノ酸１〜３０）ＶＬＰ調製物を、ＰＢ
Ｓ、１％トリトンＲＸ−１００中で抗Ｌ１モノクローナ
ル抗体５Ｂ６(Rodenら、J. Virol. 印刷中（1994年11
月))、抗Ｌ１ポリクローナル抗体、免疫前血清または無
関係抗体（抗Ｅ１Ａモノクローナル抗体）および蛋白Ａ
セファロースを用いて免疫沈澱させ、さらにＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥに付した。蛋白を免疫ブロッティングに付し、抗
ＢＰＶＬ２もしくは抗ＨＰＶ１６Ｅ７血清または抗ＨＰ
Ｖ１６Ｅ７モノクローナル抗体（Triton Diagnostics
製、アラメダ、カリフォルニア）をプローブとして調べ
た。
【００８２】キメラＬ２−Ｅ７とウイルス様粒子との結
合は同時免疫沈澱によって確認された。 （実施例６） ［抗血清の作製］ＰＢＳ中で１ｍｇ／ｍｌの濃度の３３
０μｌのＣｓＣｌ濃度勾配精製粒子を皮下注射してウサ
ギを免疫した。最初の注射から２週間および４週間後で
同じ量の粒子でウサギを追加免疫した。 （実施例７） ［ＢＰＶ１中和アッセー］報告(Kirnbauerら、Proc. Na
tl. Acad. Sci. USA, 89:12180(1992)）にしたがってフ
ォーカス形成アッセーを実施した。
合は同時免疫沈澱によって確認された。 （実施例６） ［抗血清の作製］ＰＢＳ中で１ｍｇ／ｍｌの濃度の３３
０μｌのＣｓＣｌ濃度勾配精製粒子を皮下注射してウサ
ギを免疫した。最初の注射から２週間および４週間後で
同じ量の粒子でウサギを追加免疫した。 （実施例７） ［ＢＰＶ１中和アッセー］報告(Kirnbauerら、Proc. Na
tl. Acad. Sci. USA, 89:12180(1992)）にしたがってフ
ォーカス形成アッセーを実施した。
【００８３】簡単に記せば、２回目の追加免疫注射の３
週間後に得たウサギの血清の段階希釈を、＝５００フォ
ーカス形成単位のＢＰＶ１ウイルスと３０分保温し、こ
のウイルスをＣ１２７細胞に１時間吸着させ、さらにこ
の細胞を３週間培養した(Dvoretzkyら、Virology 103:3
69(1990)）。フォーカスをメタノール中の０．５％メチ
レンブルー／０．２５％石炭酸フクシンで染色した。
週間後に得たウサギの血清の段階希釈を、＝５００フォ
ーカス形成単位のＢＰＶ１ウイルスと３０分保温し、こ
のウイルスをＣ１２７細胞に１時間吸着させ、さらにこ
の細胞を３週間培養した(Dvoretzkyら、Virology 103:3
69(1990)）。フォーカスをメタノール中の０．５％メチ
レンブルー／０．２５％石炭酸フクシンで染色した。
【００８４】３００００に匹敵する中和力価がＢＰＶＬ
１／Ｌ２ＶＬＰｓおよびＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰＶ１６
Ｅ７（完全な長さ）キメラＶＬＰｓについて得られた。 （実施例８） ［電子顕微鏡］透過型電子顕微鏡観察を報告(Kirnbauer
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:12180(1992)）に
したがって実施した。
１／Ｌ２ＶＬＰｓおよびＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰＶ１６
Ｅ７（完全な長さ）キメラＶＬＰｓについて得られた。 （実施例８） ［電子顕微鏡］透過型電子顕微鏡観察を報告(Kirnbauer
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:12180(1992)）に
したがって実施した。
【００８５】簡単に記せば、精製粒子を炭素被覆グリッ
ドに吸着させ、１％酢酸ウラニルで染色し、フィリップ
ス電子顕微鏡モデルＥＭ４００Ｔで３６０００倍で調べ
た。
ドに吸着させ、１％酢酸ウラニルで染色し、フィリップ
ス電子顕微鏡モデルＥＭ４００Ｔで３６０００倍で調べ
た。
【００８６】Ｌ２−Ｅ７融合蛋白を含む粒子は、形態お
よび取り込み効率に関してＬ１ＶＬＰｓまたはＬ１／Ｌ
２ＶＬＰｓと区別できないことが分かった。 （実施例９） ［抗体の誘導］ＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７パピ
ローマウイルス様粒子を接種したウサギはＥ７を認識す
る抗血清を産生した。
よび取り込み効率に関してＬ１ＶＬＰｓまたはＬ１／Ｌ
２ＶＬＰｓと区別できないことが分かった。 （実施例９） ［抗体の誘導］ＢＰＶＬ１／Ｌ２−ＨＰＶ１６Ｅ７パピ
ローマウイルス様粒子を接種したウサギはＥ７を認識す
る抗血清を産生した。
【００８７】Ｅ７特異性について血清を調べるために、
２．５μｇのＨＰＶ１６Ｅ７および２．５μｇのＢＳＡ
（コントロール）をＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、続いてウ
ェスタンブロッティングで調べた。免疫血清および免疫
前血清（コントロール）を１：１０の希釈で用いた。
２．５μｇのＨＰＶ１６Ｅ７および２．５μｇのＢＳＡ
（コントロール）をＳＤＳ−ＰＡＧＥに付し、続いてウ
ェスタンブロッティングで調べた。免疫血清および免疫
前血清（コントロール）を１：１０の希釈で用いた。
【００８８】免疫ウサギから得た血清はウェスタンブロ
ットでＨＰＶ１６Ｅ７蛋白バンドを特異的に検出し、Ｅ
７エピトープに特異的な抗体の誘導を示唆した。 （実施例１０） ［細胞性免疫の誘導］Ｅ７ペプチドに特異的な細胞性免
疫の誘導について、例えばキメラＶＬＰｓをマウスに注
射し、抗原特異的Ｔ細胞増殖を測定することによって、
キメラ粒子を調べた。 （実施例１１） ［予防的免疫］キメラ粒子を、試験感染に対する予防的
免疫の誘導について調べる。例えばＥ７キメラＣＲＰＶ
ＶＬＰｓおよび非キメラＣＲＰＶＶＬＰｓ（コントロー
ル）でウサギを免疫し、続いて感染性ＣＲＰＶで試験感
染させて、Ｌ２−Ｅ７融合が予防的免疫を失わせないこ
とを示すか、またはＳＴＤ病原体を含むキメラＶＬＰｓ
で実験動物を免疫し、続いてＳＴＤ病原体で試験感染さ
せ、致死的感染に対する生存度の向上または致死量以下
の試験感染後の感染の減少を測定する。 （実施例１２） ［治療的免疫］例えば、ウサギ（既にパピローマをも
つ）をＥ７キメラＣＲＰＶＶＬＰｓおよび非キメラＣＲ
ＰＶＶＬＰｓ（コントロール）で免疫し、既に存在する
パピローマの退縮を測定することによって、既に存在す
るパピローマに対する治療的免疫の誘導についてキメラ
粒子を調べる。 （実施例１３） ［腫瘍の免疫療法および免疫予防］例えば、実験動物
（例えばマウス）で既に存在する腫瘍を治療する能力、
または腫瘍の発達を予防する能力について、例えばＥ７
を発現している腫瘍細胞を用いてキメラ粒子を調べる。
動物を、例えばＬ２−Ｅ７キメラＶＬＰｓで免疫し、例
えばＥ７を発現している接種腫瘍原性細胞の増殖につい
て調べる。このアプローチは、非複合Ｅ７および補助刺
激蛋白で免疫した動物で機能することが示された（Chen
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:110(1991))。 （実施例１４） ［キメラＶＬＰｓの表面への誘導］細胞表面に結合する
例えば補助刺激物質またはリガンドのようなある種の分
子は、キメラＶＬＰｓの表面に存在することが望ましい
かもしれない。ローデンら(Rodenら、J. Virol. 印刷中
（1994年、11月))は、Ｌ２の領域はＶＬＰｓの表面存在
することを見出した。ＢＰＶＬ２アミノ酸４４〜１７３
を含むペプチドは、ウサギに接種されたとき、１：１０
００の血清希釈で活性を有する中和抗体を誘導した。こ
れらの結果は，Ｌ２の領域は中和エピトープを明示し、
さらにこれらの領域は天然のビリオン表面に接近できる
ことを示唆している。したがって、非Ｌ２ポリペプチド
をこれらの領域の１つに融合させることによって、おそ
らくこのペプチドをキメラＶＬＰ表面に誘導することが
できるであろう。
ットでＨＰＶ１６Ｅ７蛋白バンドを特異的に検出し、Ｅ
７エピトープに特異的な抗体の誘導を示唆した。 （実施例１０） ［細胞性免疫の誘導］Ｅ７ペプチドに特異的な細胞性免
疫の誘導について、例えばキメラＶＬＰｓをマウスに注
射し、抗原特異的Ｔ細胞増殖を測定することによって、
キメラ粒子を調べた。 （実施例１１） ［予防的免疫］キメラ粒子を、試験感染に対する予防的
免疫の誘導について調べる。例えばＥ７キメラＣＲＰＶ
ＶＬＰｓおよび非キメラＣＲＰＶＶＬＰｓ（コントロー
ル）でウサギを免疫し、続いて感染性ＣＲＰＶで試験感
染させて、Ｌ２−Ｅ７融合が予防的免疫を失わせないこ
とを示すか、またはＳＴＤ病原体を含むキメラＶＬＰｓ
で実験動物を免疫し、続いてＳＴＤ病原体で試験感染さ
せ、致死的感染に対する生存度の向上または致死量以下
の試験感染後の感染の減少を測定する。 （実施例１２） ［治療的免疫］例えば、ウサギ（既にパピローマをも
つ）をＥ７キメラＣＲＰＶＶＬＰｓおよび非キメラＣＲ
ＰＶＶＬＰｓ（コントロール）で免疫し、既に存在する
パピローマの退縮を測定することによって、既に存在す
るパピローマに対する治療的免疫の誘導についてキメラ
粒子を調べる。 （実施例１３） ［腫瘍の免疫療法および免疫予防］例えば、実験動物
（例えばマウス）で既に存在する腫瘍を治療する能力、
または腫瘍の発達を予防する能力について、例えばＥ７
を発現している腫瘍細胞を用いてキメラ粒子を調べる。
動物を、例えばＬ２−Ｅ７キメラＶＬＰｓで免疫し、例
えばＥ７を発現している接種腫瘍原性細胞の増殖につい
て調べる。このアプローチは、非複合Ｅ７および補助刺
激蛋白で免疫した動物で機能することが示された（Chen
ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:110(1991))。 （実施例１４） ［キメラＶＬＰｓの表面への誘導］細胞表面に結合する
例えば補助刺激物質またはリガンドのようなある種の分
子は、キメラＶＬＰｓの表面に存在することが望ましい
かもしれない。ローデンら(Rodenら、J. Virol. 印刷中
（1994年、11月))は、Ｌ２の領域はＶＬＰｓの表面存在
することを見出した。ＢＰＶＬ２アミノ酸４４〜１７３
を含むペプチドは、ウサギに接種されたとき、１：１０
００の血清希釈で活性を有する中和抗体を誘導した。こ
れらの結果は，Ｌ２の領域は中和エピトープを明示し、
さらにこれらの領域は天然のビリオン表面に接近できる
ことを示唆している。したがって、非Ｌ２ポリペプチド
をこれらの領域の１つに融合させることによって、おそ
らくこのペプチドをキメラＶＬＰ表面に誘導することが
できるであろう。
【００８９】
【発明の効果】本発明の特定の実施形態を詳細に記載し
たが、当業者には、これらの実施形態は制限的ではなく
例示であって、本発明の真正の範囲は添付の請求の範囲
に限定されることは明らかであろう。
たが、当業者には、これらの実施形態は制限的ではなく
例示であって、本発明の真正の範囲は添付の請求の範囲
に限定されることは明らかであろう。
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> The Government of the United States of America, as represented by the Secretary, Department of Health and Human Services <120> Chimeric Papillomavirus-like Particles <130> NIH032.001HJP <140> PCT/US95/12914 <141> 1995-10-06 <150> US 08/319, 467 <151> 1994-10-06 <160> 11 <210> 1 <211> 48 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer for PCR of BPVL2 <400> 1 GCGGTAGATC TACCTATAAA TATGAGTGCA CGAAAAAGAG TAAAACGT 48 <210> 2 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense primer for PCR of BPVL2 <400> 2 GCAATGTAGG TGTATCTCCA TGCATGGCAT GTTTCCGTTT TTTTCGTTTC CTCAACAAGG 60 AGGG 64 <210> 3 <211> 64 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer for PCR of HPV16E7 <400> 3 CCCTCCTTGT TGAGGAAACG AAAAAAACGG AAACATGCCA TGCATGGAGA TACACCTACA 60 TTGC 64 <210> 4 <211> 34 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense primer for PCR of HPV16E7 <400> 4 CCGCTAGATC TGGTACCTGC AGGATCAGCC ATGG 34 <210> 5 <211> 92 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Internal anti-sense primer for PCR of BPVL2-HPV16E7 <400> 5 CAGTTGTCTC TGGTTGCAAA TCTAACATAT ATTCATGCAA TGTAGGTGTA TCTCCATGCA 60 TGGATGAAAA CACTTCAGGA TCTTCCGTGG GC 92 <210> 6 <211> 102 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Internal sense primer for PCR of BPVL2-HPV16E7 <400> 6 GCATGAATAT ATGTTAGATT TGCAACCAGA GACAACTGAT CTCTACTGTT ATGAGCAATT 60 AAATGACCAA ACATTTGCAA ACCCACTGTA TGAAGCAGAA CC 102 <210> 7 <211> 47 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense primer for PCR of BPVL2 <400> 7 CCGCTAGATC TAGGGAGATA CAGCTTCTGG CCTTGTTGCC ACAACGC 47 <210> 8 <211> 50 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer for PCR of HPV16L2 <400> 8 GCGGTCCGCG GAATATGCGA CACAAACGTT CTGCAAAACG CACAAAACGT 50 <210> 9 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense primer for PCR of HPV16L2 <400> 9 ATCTCCATGC ATGGCAGCCA AAGAGAC 27 <210> 10 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense primer for PCR of HPV16E7 <400> 10 GTCTCTTTGG CTGCCATGCA TGGAGAT 27 <210> 11 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense primer for PCR of HPV16E7 <400> 11 GCTCCGCGGG GTACCTGCAG GATCAGCC 28 000
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (Ｃ１２Ｎ 15/09 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:93） Ｃ１２Ｒ 1:93） (71)出願人 501134749 ザ ガヴァメント オブ ザ ユナイテッ ド ステイツ オブ アメリカ、アズ レ プリゼンテッド バイ ザ セクレタリ ー、 デパートメント オブ ヘルス ア ンド ヒューマン サーヴィスィズ アメリカ合衆国 20852 メリーランド州 ロックビル エグゼキュティブ ブルバ ード 6011 スイート 325 オフィス オブ テクノロジー トランスファー ナ ショナル インスティテュート オブ ヘ ルス内 (72)発明者 ローウィ、 ダグラス アール. アメリカ合衆国 20814 メリーランド州 ベセスダ サウス チェルシー レーン 4709 (72)発明者 シラー、 ジョン ティー. アメリカ合衆国 20902 メリーランド州 シルバー スプリング メイプル ビュ ー ドライブ 11306 (72)発明者 グリーンストーン、 ヘザー アメリカ合衆国 20910 メリーランド州 シルバー スプリング ストラットン ロード 1901 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA32 CA07 DA02 EA02 FA02 GA11 HA01 4C085 AA03 AA07 AA08 BA76 BA99 CC08 DD42 GG01 GG04 4H045 AA11 CA01 DA86 EA31 FA74
Claims (10)
- 【請求項１】 パピローマウイルスＬ１融合生成物を
含み、パピローマウイルス粒子の形状エピトープを有す
るパピローマウイルス様粒子。 - 【請求項２】 前記パピローマウイルスＬ１融合生成
物が、ヒトパピローマウイルスＬ１融合生成物またはウ
シパピローマウイルスＬ１融合生成物である請求項１に
記載のパピローマウイルス様粒子。 - 【請求項３】 前記ヒトパピローマウイルスＬ１融合
生成物が、ＨＰＶ１６Ｌ１融合生成物であり、前記ウシ
パピローマウイルスＬ１融合生成物が、ＢＰＶ１Ｌ１融
合生成物である請求項２に記載のパピローマウイルス様
粒子。 - 【請求項４】 前記ヒトパピローマウイルスＬ１融合
生成物が、ペプチド若しくは全長蛋白である単一の融合
パートナー、または、ペプチド、全長蛋白、若しくは縦
並びに連結されたこれらの組み合わせである複数の融合
パートナーを含む請求項１に記載のパピローマウイルス
様粒子。 - 【請求項５】 前記融合パートナーがパピローマウイ
ルスＥ６またはＥ７生成物である請求項４に記載のパピ
ローマウイルス様粒子。 - 【請求項６】 前記パピローマウイルスＬ１融合生成
物が、そのＮ末端またはＣ末端で融合パートナーに融合
する請求項１に記載のパピローマウイルス様粒子。 - 【請求項７】 前記パピローマウイルスＬ１融合生成
物が、Ｌ１アミノ酸の間に挿入された融合パートナーを
有する請求項１に記載のパピローマウイルス様粒子。 - 【請求項８】 更にパピローマウイルスＬ２生成物を
含む請求項１に記載のパピローマウイルス様粒子。 - 【請求項９】 前記パピローマウイルスＬ２生成物
が、ＨＰＶ１６Ｌ２生成物またはＢＰＶ１Ｌ２生成物で
ある請求項８に記載のパピローマウイルス様粒子。 - 【請求項１０】 請求項１に記載のパピローマウイル
ス様粒子を含む組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/319,467 US5618536A (en) | 1992-09-03 | 1994-10-06 | Chimeric papillomavirus-like particles |
| US08/319,467 | 1994-10-06 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51266796A Division JP3343912B2 (ja) | 1994-10-06 | 1995-10-06 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007047248A Division JP2007143560A (ja) | 1994-10-06 | 2007-02-27 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002053597A true JP2002053597A (ja) | 2002-02-19 |
Family
ID=23242365
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51266796A Expired - Lifetime JP3343912B2 (ja) | 1994-10-06 | 1995-10-06 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
| JP2001104294A Pending JP2002053597A (ja) | 1994-10-06 | 2001-04-03 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
| JP2007047248A Pending JP2007143560A (ja) | 1994-10-06 | 2007-02-27 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP51266796A Expired - Lifetime JP3343912B2 (ja) | 1994-10-06 | 1995-10-06 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007047248A Pending JP2007143560A (ja) | 1994-10-06 | 2007-02-27 | パピローマウイルス様キメラ粒子 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5618536A (ja) |
| EP (2) | EP1018555A3 (ja) |
| JP (3) | JP3343912B2 (ja) |
| AT (1) | ATE258985T1 (ja) |
| AU (1) | AU3828495A (ja) |
| DE (1) | DE69532532T8 (ja) |
| DK (1) | DK0789766T3 (ja) |
| ES (1) | ES2213754T3 (ja) |
| PT (1) | PT789766E (ja) |
| WO (1) | WO1996011274A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008530010A (ja) * | 2005-02-01 | 2008-08-07 | アメリカ合衆国 | 広範に交差中和する抗体を誘導するためのパピローマウイルスｌ２ｎ末端ペプチド |
Families Citing this family (68)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5437951A (en) * | 1992-09-03 | 1995-08-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins |
| US20020164350A1 (en) * | 1992-09-03 | 2002-11-07 | Lowy Douglas R. | Chimeric papillomavirus-like particles |
| US5888516A (en) * | 1994-05-16 | 1999-03-30 | Merck & Co. Inc. | Recombinant papillomavirus vaccines |
| AUPM566794A0 (en) * | 1994-05-17 | 1994-06-09 | University Of Queensland, The | Process and product |
| GB9420146D0 (en) * | 1994-10-06 | 1994-11-23 | Cancer Res Campaign Tech | Papillomavirus vaccine |
| WO1996011272A2 (de) * | 1994-10-07 | 1996-04-18 | Medigene Gesellschaft Für Molekularbiologische Diagnostik, Theraphie Und Technologie Mbh | Papillomavirusähnliche partikel, fusionsproteine sowie verfahren zu deren herstellung |
| AU4727296A (en) * | 1995-02-24 | 1996-09-11 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation |
| FR2749323B1 (fr) * | 1996-06-04 | 1998-07-10 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Pseudo-particules virales utiles en tant que vecteur de delivrance d'acide nucleique |
| CA2257822A1 (en) * | 1996-07-17 | 1998-01-22 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secre Tary, Department Of Health And Human Services | Infectious papillomavirus pseudoviral particles |
| HUP9904137A3 (en) * | 1996-07-29 | 2001-06-28 | Cantab Pharmaceuticals Res Ltd | Polypeptides useful as immunotherapeutic agents and methods of polypeptide preparation |
| AU781653B2 (en) * | 1996-07-30 | 2005-06-02 | Transgene S.A. | Pharmaceutical composition for treating papollomavirus tumour and infection |
| FR2751879B1 (fr) * | 1996-07-30 | 1998-10-30 | Transgene Sa | Composition pharmaceutique contre les tumeurs et infections a papillomavirus |
| US7118754B1 (en) * | 1996-07-30 | 2006-10-10 | Transgene S.A. | Pharmaceutical composition for treating papillomavirus tumors and infection |
| WO1998010790A1 (en) * | 1996-09-11 | 1998-03-19 | Merck & Co., Inc. | Papillomavirus vaccine formulation |
| GB9621091D0 (en) * | 1996-10-09 | 1996-11-27 | Fondation Pour Le Perfectionem | Attenuated microorganisms strains and their uses |
| EP0980257A1 (en) * | 1997-05-01 | 2000-02-23 | Chiron Corporation | Use of virus-like particles as adjuvants |
| US6228368B1 (en) * | 1997-10-06 | 2001-05-08 | Loyola University Of Chicago | Papilloma virus capsomere formulations and method of use |
| US7182947B2 (en) * | 1998-02-20 | 2007-02-27 | Medigene Ag | Papillomavirus truncated L1 protein and fusion protein constructs |
| US7494658B2 (en) * | 1998-02-20 | 2009-02-24 | Medigene Ag | Papilloma virus truncated L1 protein and fusion protein constructs |
| US20020039584A1 (en) | 1998-02-20 | 2002-04-04 | Medigene Ag | Papilloma virus capsomere vaccine formulations and methods of use |
| CA2229955C (en) | 1998-02-20 | 2003-12-09 | Medigene Gmbh | Papilloma virus capsomere vaccine formulations and methods of use |
| US6926897B1 (en) * | 1998-03-24 | 2005-08-09 | Medigene Aktiengesellschaft | Medicament for the avoidance or treatment of papillomavirus-specific tumour |
| US7112330B1 (en) * | 1998-08-14 | 2006-09-26 | Chiron Corporation | Method for producing yeast expressed HPV types 6 and 16 capsid proteins |
| JP4563582B2 (ja) * | 1998-08-14 | 2010-10-13 | メルク・シャープ・エンド・ドーム・コーポレイション | ヒトパピローマウイルスのウイルス様粒子を使用するタンパク質送達系 |
| US6991795B1 (en) | 1998-08-14 | 2006-01-31 | Merck & Co., Inc. | Protein delivery system using human papillomavirus virus-like particles |
| DE69935606T9 (de) | 1998-10-16 | 2021-03-11 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Adjuvanzsysteme und impfstoffe |
| DE69929232T2 (de) * | 1998-10-21 | 2006-08-31 | The United States Government As Represented By The Department Of Health And Human Services | Virusähnliche partikel zur induktion von autoantikörpern |
| US6380364B1 (en) | 1998-11-23 | 2002-04-30 | Loyola University Of Chicago | Chimeric biotin-binding papillomavirus protein |
| CU22871A1 (es) * | 1998-12-02 | 2003-10-21 | Ct Ingenieria Genetica Biotech | Formulaciones conteniendo partículas semejantes a virus como inmunopotenciadores por vía mucosal |
| US6689366B1 (en) * | 1998-12-17 | 2004-02-10 | Merck & Co., Inc. | Synthetic virus like particles with heterologous epitopes |
| WO2000035479A1 (en) * | 1998-12-17 | 2000-06-22 | Merck & Co., Inc. | Synthetic virus-like particles with heterologous epitopes |
| DE19905883C2 (de) * | 1999-02-11 | 2001-05-23 | Deutsches Krebsforsch | Chimäre Virus-ähnliche Partikel bzw. chimäre Capsomere von BPV |
| DE19916224C1 (de) * | 1999-04-10 | 2000-06-21 | November Ag Molekulare Medizin | Synthetisches biologisch aktives Molekül |
| GB9921146D0 (en) * | 1999-09-07 | 1999-11-10 | Smithkline Beecham Biolog | Novel composition |
| US8128922B2 (en) | 1999-10-20 | 2012-03-06 | Johns Hopkins University | Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen |
| US7026443B1 (en) | 1999-12-10 | 2006-04-11 | Epimmune Inc. | Inducing cellular immune responses to human Papillomavirus using peptide and nucleic acid compositions |
| US6908613B2 (en) * | 2000-06-21 | 2005-06-21 | Medimmune, Inc. | Chimeric human papillomavirus (HPV) L1 molecules and uses therefor |
| JP2004502452A (ja) * | 2000-07-07 | 2004-01-29 | メルク エンド カムパニー インコーポレーテッド | キメラヒトパピローマウイルスの製造 |
| GB0018050D0 (en) * | 2000-07-21 | 2000-09-13 | Norchip As | Detection of human papillomavirus mRNA |
| US7318928B2 (en) * | 2000-08-01 | 2008-01-15 | The Johns Hopkins University | Molecular vaccine linking intercellular spreading protein to an antigen |
| ES2454640T3 (es) * | 2000-08-03 | 2014-04-11 | Johns Hopkins University | Vacuna molecular que lleva unida un polipéptido de chaperona del retículo endoplasmático a un antígeno |
| AU2002255532A1 (en) * | 2001-02-13 | 2002-10-15 | Joseph D. Mosca | Biological carriers for induction of immune responses |
| ATE471990T1 (de) | 2001-08-13 | 2010-07-15 | Univ Rochester | Transkutane immunisierung gegen papillomavirus mit virusähnlichen papillomaviruspartikeln |
| GB0206360D0 (en) | 2002-03-18 | 2002-05-01 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Viral antigens |
| WO2004042001A2 (en) * | 2002-05-17 | 2004-05-21 | Emory University | Virus-like particles, methods of preparation, and immonogenic compositions |
| DE60326449D1 (de) * | 2002-05-17 | 2009-04-16 | Univ Cape Town | Chimere human papilloma virus 16 l1 proteine, welche ein l2 peptid enthalten, damit hergestellte virus-ähnliche partikel und methode zur herstellung der partikel |
| US9045727B2 (en) * | 2002-05-17 | 2015-06-02 | Emory University | Virus-like particles, methods of preparation, and immunogenic compositions |
| GB0228715D0 (en) * | 2002-12-09 | 2003-01-15 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| US7858098B2 (en) | 2002-12-20 | 2010-12-28 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Vaccine |
| WO2004098526A2 (en) * | 2003-05-05 | 2004-11-18 | Johns Hopkins University | Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein |
| CA2552508A1 (en) * | 2003-12-31 | 2005-09-29 | Pharmexa Inc. | Inducing cellular immune responses to human papillomavirus using peptide and nucleic acid compositions |
| US7758866B2 (en) | 2004-06-16 | 2010-07-20 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Vaccine against HPV16 and HPV18 and at least another HPV type selected from HPV 31, 45 or 52 |
| WO2006063065A2 (en) | 2004-12-08 | 2006-06-15 | Gen-Probe Incorporated | Detection of nucleic acids from multiple types of human papillomaviruses |
| AU2005322960A1 (en) * | 2005-01-06 | 2006-07-13 | The Johns Hopkins University | RNA interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by DNA and transfected dendritic cell vaccines |
| US7314630B2 (en) * | 2005-01-07 | 2008-01-01 | Yao-Xiong Hu | Compounds and methods of early diagnosis of cervical cancer and genital condyloma with HPV, CHSP60 tumor suppressor H-Ras, K-Ras and PTEN derived peptides modified |
| CA2595726A1 (en) * | 2005-01-26 | 2006-08-03 | The Johns Hopkins University | Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding mutant oncoprotein antigen and calreticulin |
| TWI321350B (en) * | 2006-04-18 | 2010-03-01 | Advanced Semiconductor Eng | Heatsink and heatsink positioning system |
| US20100330105A1 (en) * | 2006-08-22 | 2010-12-30 | John Hopkins University | Anticancer Combination Therapies |
| US8778351B2 (en) | 2006-08-30 | 2014-07-15 | University Of Rochester | Combined human papillomavirus VLP/gene delivery system and use thereof as a vaccine for prophylaxis and immunotherapy of infectious diseases and tumors |
| US9085638B2 (en) | 2007-03-07 | 2015-07-21 | The Johns Hopkins University | DNA vaccine enhancement with MHC class II activators |
| US20080260765A1 (en) * | 2007-03-15 | 2008-10-23 | Johns Hopkins University | HPV DNA Vaccines and Methods of Use Thereof |
| WO2009055491A2 (en) * | 2007-10-22 | 2009-04-30 | University Of Rochester | Respiratory syncytial virus vaccine based on chimeric papillomavirus virus-like particles or capsomeres |
| MX2010004850A (es) * | 2007-11-02 | 2010-12-07 | Univ Johns Hopkins | Composiciones de peptidos de hpv de tipos multiples y metodos para tratamiento o prevencion de infeccion de virus de papiloma humano. |
| US20090285861A1 (en) * | 2008-04-17 | 2009-11-19 | Tzyy-Choou Wu | Tumor cell-based cancer immunotherapeutic compositions and methods |
| EP2444103B1 (en) | 2009-06-19 | 2017-12-20 | Eyegene Inc. | Vaccine for cervical cancer |
| KR20200027956A (ko) | 2017-06-23 | 2020-03-13 | 패쏘백스 엘엘씨 | 키메라 바이러스-유사 입자 및 면역 반응의 항원-특이적 재지향자로서의 이의 용도 |
| US11560408B2 (en) | 2018-12-27 | 2023-01-24 | Verimmune Inc. | Conjugated virus-like particles and uses thereof as anti-tumor immune redirectors |
| JP7017811B2 (ja) * | 2020-02-13 | 2022-02-09 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | ウイルス様粒子及びその使用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9113809D0 (en) * | 1991-06-26 | 1991-08-14 | Cancer Res Campaign Tech | Papillomavirus l2 protein |
| DK0595935T3 (da) * | 1991-07-19 | 2003-07-21 | Csl Ltd | Papillomavirusvaccine |
| US5437951A (en) * | 1992-09-03 | 1995-08-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Self-assembling recombinant papillomavirus capsid proteins |
-
1994
- 1994-10-06 US US08/319,467 patent/US5618536A/en not_active Expired - Lifetime
-
1995
- 1995-10-06 ES ES95936278T patent/ES2213754T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-06 DE DE69532532T patent/DE69532532T8/de active Active
- 1995-10-06 DK DK95936278T patent/DK0789766T3/da active
- 1995-10-06 EP EP00103738A patent/EP1018555A3/en not_active Ceased
- 1995-10-06 AU AU38284/95A patent/AU3828495A/en not_active Abandoned
- 1995-10-06 PT PT95936278T patent/PT789766E/pt unknown
- 1995-10-06 EP EP95936278A patent/EP0789766B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-06 WO PCT/US1995/012914 patent/WO1996011274A1/en active IP Right Grant
- 1995-10-06 JP JP51266796A patent/JP3343912B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-06 AT AT95936278T patent/ATE258985T1/de active
-
1997
- 1997-01-09 US US08/781,084 patent/US5855891A/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-04-03 JP JP2001104294A patent/JP2002053597A/ja active Pending
-
2007
- 2007-02-27 JP JP2007047248A patent/JP2007143560A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008530010A (ja) * | 2005-02-01 | 2008-08-07 | アメリカ合衆国 | 広範に交差中和する抗体を誘導するためのパピローマウイルスｌ２ｎ末端ペプチド |
| US8404244B2 (en) | 2005-02-01 | 2013-03-26 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Papillomavirus L2 N-terminal peptides for the induction of broadly cross-neutralizing antibodies |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1018555A3 (en) | 2000-10-11 |
| EP0789766A1 (en) | 1997-08-20 |
| JP2007143560A (ja) | 2007-06-14 |
| JPH10506796A (ja) | 1998-07-07 |
| AU3828495A (en) | 1996-05-02 |
| EP0789766B1 (en) | 2004-02-04 |
| WO1996011274A1 (en) | 1996-04-18 |
| US5855891A (en) | 1999-01-05 |
| DE69532532D1 (de) | 2004-03-11 |
| US5618536A (en) | 1997-04-08 |
| DE69532532T8 (de) | 2005-05-25 |
| EP1018555A2 (en) | 2000-07-12 |
| JP3343912B2 (ja) | 2002-11-11 |
| ES2213754T3 (es) | 2004-09-01 |
| PT789766E (pt) | 2004-05-31 |
| ATE258985T1 (de) | 2004-02-15 |
| DK0789766T3 (da) | 2004-05-24 |
| DE69532532T2 (de) | 2005-01-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3343912B2 (ja) | パピローマウイルス様キメラ粒子 | |
| Jagu et al. | Concatenated multitype L2 fusion proteins as candidate prophylactic pan-human papillomavirus vaccines | |
| JP3958360B2 (ja) | 免疫治療剤として役立つポリペプチド及びポリペプチド調製の方法 | |
| JP5296665B2 (ja) | ヒトパピローマウイルスカプソメアワクチン製剤の製造方法 | |
| EP1292328B1 (en) | Chimeric human papillomavirus (hpv) l1 molecules and uses therefor | |
| Yang et al. | Papillomavirus capsid mutation to escape dendritic cell-dependent innate immunity in cervical cancer | |
| US7691386B2 (en) | Chimeric papillomavirus-like particles | |
| JPH11510688A (ja) | パピローマウイルスのポリプロテイン構築物 | |
| AU2001275458A1 (en) | Chimeric human papillomavirus (HPV) L1 molecules and uses therefor | |
| US20040081661A1 (en) | Papillomavirus truncated L1 protein and fusion protein constructs | |
| AU717647B2 (en) | Chimeric papillomavirus-like particles | |
| AU717932B2 (en) | Chimeric papillomavirus-like particles | |
| KR20050050115A (ko) | 유두종바이러스의 2종 이상의 비구조적 초기 단백질을암호화하는 ｄｎａ 백신 | |
| CA2201601C (en) | Chimeric papillomavirus-like particles | |
| against Human | LIONEL CRAWFORD | |
| AU2007201791A1 (en) | Papilloma virus capsomere vaccine formulations and methods of use |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20040109 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20051101 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20060201 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20060209 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060428 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20060428 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20061031 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070228 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20070413 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20071005 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090203 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090209 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090302 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090305 |