JP2002030091A - ２本鎖糖脂質アナログ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】安価な原料から短工程、高効率で得られ、細胞
培養やレクチンのスクリーニング等に使用できる新規な
糖脂質アナログ化合物およびその合成中間体の提供。 【解決手段】一般式１の糖脂質アナログ化合物およびそ
の製造中間体の一般式２の化合物。 （Ｒはグルコース残基又はガラクトース残基、ｍは２〜
６の、ｎは１１〜１７の整数を表す。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な構造を持つ
糖脂質アナログ化合物に関するものである。

【０００２】より詳細には、本発明は、細胞培養、ある
いは糖鎖の関わる細胞間認識の実体であるレクチン等の
糖鎖認識物質のスクリーニング等に使用可能な、安価な
原料から短工程、高効率で得られる、新規な構造を持つ
糖脂質アナログ化合物、および、その合成中間体に関す
るものである。

【０００３】

【従来の技術】細胞表層に、糖脂質、糖蛋白質等の複合
糖質の構成要素として存在する糖鎖が、細胞間のコミュ
ニケーション、細菌の感染等、多くの生命現象に重要な
役割を果たすことから、糖鎖を結合した様々な化合物
が、細胞培養、あるいは糖鎖の関わる細胞間認識の実体
であるレクチン等の糖鎖認識物質のスクリーニング等に
用いられてきた。

【０００４】細胞表層に存在する糖鎖を模した人工系の
研究は、主に糖鎖を結合した高分子を材料として行われ
てきた。（例えば、赤池敏宏ら、１１４−１２９ペー
ジ、別冊日経サイエンス１１１「糖鎖と細胞」、入村達
郎編、日経サイエンス社、東京、１９９４年）。しか
し、高分子を用いる場合、糖鎖の密度、糖鎖の提示様式
等を制御することが難しく、また、様々な構造を持った
糖鎖を結合させたモノマーの合成も難しいことから、糖
鎖密度、提示様式、そして何より、糖鎖構造の多様性に
関する検討が充分に行われてこなかった。

【０００５】より細胞表層に類似した系として、糖脂質
をプラスチックディッシュにコートするという研究も１
９８０年代から行われてきた（Ｒ．Ｌ．Ｓｃｈｎａａｒ
ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．、第１７９巻、
５４２−５５８ページ、１９８９年）。この手法は簡便
であり、糖鎖の密度はコートする糖脂質の全脂質中の濃
度として制御することが可能であり、糖鎖の提示様式は
細胞膜表面に類似していると考えられる。しかし、糖脂
質のサンプルを自然界から得るには、精製に手間が掛か
り、また、大量のサンプルを調製することも困難であ
る。さらに、糖鎖の構造も極めて限定されたものにな
る。

【０００６】そのため、合成した糖脂質アナログを用い
て、同様の実験を行う試みもなされてきた（Ｃ．Ｃ．Ｂ
ｌａｃｋｂｕｒｎとＲ．Ｌ．Ｓｃｈｎａａｒ、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２５３巻、１１８０−１１８８ペ
ージ、１９８３年）が、天然の糖脂質に類似した化学構
造を用いる限り、合成収率が低い、工程数が長い等の問
題があり、糖鎖構造の多様性に関しては、充分な検討が
行われていない。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
培養、あるいは糖鎖の関わる細胞間認識の実体であるレ
クチン等の糖鎖認識物質のスクリーニング等に使用可能
な、安価な原料から短工程、高効率で得られる、新規な
構造を持つ糖脂質アナログ化合物、および、その合成中
間体を提供することにある。

【０００８】

【課題を解決するための手段】細胞表層に存在する糖鎖
が、細胞間コミュニケーションに関わり、多くの生命現
象に関わっていることから、これまでに、糖鎖を含有す
る高分子や糖脂質を用いて、細胞培養、あるいは糖鎖の
関わる細胞間認識の実体であるレクチン等の糖鎖認識物
質のスクリーニング等の研究、応用が行われてきた。

【０００９】しかし、先に述べた通り、糖鎖を結合した
高分子には、糖鎖密度や提示様式の制御に大きな問題が
あり、糖脂質あるいは糖脂質アナログ化合物はそれらの
点は解決できるものの、依然として、サンプル調製には
難点があった。

【００１０】糖鎖密度や糖鎖提示様式の制御が可能なこ
とは、既に報告されているので、糖脂質アナログ化合物
の利点を生かすための最大の問題点は、その合成の難し
さにあると考えらえる。

【００１１】本発明者らは、天然の脂質構造を離れ、式
（１）で示される化学構造を基本構造とすれば、比較的
安価な原料から短工程、高効率で得られる糖脂質アナロ
グ化合物を提供できるのではなかと考え、単糖であるガ
ラクトース等をモデルとして用いて、式（１）で示され
る糖脂質アナログ化合物を、式（２）で示される化合物
を中間体として合成し、レクチンによって糖鎖構造が特
異的に認識されることを確認して、本発明を完成するに
至った。

【００１２】本発明の糖脂質アナログ化合物合成中間体
に類似した、３，４，５−長鎖アルキロキシ安息香酸の
合成については、既に報告した（Ｈ．Ｔａｍｉａｋｉ
ら、１２５−１２８ページ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ １９９８、Ｍ．Ｋｏｎｄｏ編、Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、大阪、１
９９９年）。

【００１３】式（２）で示される合成中間体の前駆体で
ある、３，５−ジアルキロキシ安息香酸メチルの合成に
は、上述の方法と同様に、３，５−ジヒドロキシ安息香
酸メチルを原料としてエーテル合成を用いれば好い。

【００１４】次に、通常用いられる加水分解反応によっ
て、メチルエステルを加水分解すれば、３，５−ジアル
キロキシ安息香酸が得られる。さらに、通常用いられる
アミド化反応によって、アミノアルコールを縮合するこ
とにより、式（２）で示される合成中間体が得られる。

【００１５】グルコースやガラクトース等の導入には、
トリクロロアセトイミデート法を用いたが、原料となる
トリクロロアセトイミデート体の合成法は文献公知であ
る（Ｒ．Ｒ．ＳｃｈｍｉｄｔとＷ．Ｋｉｎｚｙ、Ａｄ
ｖ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．、第５０巻、２１−１２３ページ、１９９４年）。

【００１６】参考例に示す通り、ガラクトースが導入で
きれば、グルコースも同様の手法で導入できる。また、
長鎖アルキロキシ基部分の長さの異なる誘導体でも、同
じ反応を用いて糖の導入が行える。

【００１７】糖鎖導入方法には、トリクロロアセトイミ
デートを用いる方法以外にも、糖ハライドやチオグルコ
シドを用いる方法等が知られており（Ｓ．Ｈ．Ｋｈａｎ
とＲ．Ａ．Ｏ‘Ｎｅｉｌｌ編、Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ、Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｅｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、１９９６年）、
本発明の糖脂質アナログ化合物の合成には、そうした文
献公知の糖鎖導入法を用いることもできる。

【００１８】式（２）で示される合成中間体に対して、
グルコースとガラクトース以外の単糖、あるいは、糖質
オリゴマーの導入も、同様に上記の文献公知の反応を用
いて行うことができる。また、適当に保護された糖質誘
導体を用いれば、式（２）で示される合成中間体から出
発して、糖鎖伸長反応を行うことも可能である。

【００１９】既に報告したように（Ｈ．Ｔａｍｉａｋｉ
ら、１２５−１２８ページ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ １９９８、Ｍ．Ｋｏｎｄｏ編、Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、大阪、１
９９９年）、本発明の化学構造を応用して、糖脂質アナ
ログ化合物の化合物ライブラリーを作成することも可能
である。

【００２０】式（１）で示される化合物が、疎水性表面
上で糖鎖を提示し、その糖鎖とレクチンとの間に特異的
な相互作用があることは、表面プラズモン共鳴を用いた
分子間相互作用解析装置等を用いて、定量的に解析する
ことができる。例えば、ガラクトース誘導体であれば、
リシン等のガラクトース特異性が知られているレクチン
を用いれば好い。

【００２１】この方法を利用すれば、糖鎖認識特異性が
不明な新規の糖鎖認識物質の探索プローブとして、本発
明の化合物が利用できることは自明である。

【００２２】

【発明の実施の形態】以下に、本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれに限定されるものではない。

【００２３】

【実施例１】（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５
−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミドの合成）
３，５−ジヒドロキシ安息香酸メチル（8.41g, 50.0mmo
l）、１−ブロモドデカン（27.5ml, 110mmol）、炭酸カ
リウム（45.6g, 330mmol）を乾燥ジメチルホルムアミド
に懸濁させ、アルゴン雰囲気下、８０℃で１０時間加熱
撹拌した。室温に戻した後、氷冷した水（250ml）に注
ぎ、沈殿物をろ取、水洗した。残さをジクロロメタン
（300ml）に溶かし、飽和食塩水で洗浄して、無水硫酸
マグネシウムで乾燥した。固形物をろ別し、溶媒を留去
して、エタノールから再結晶して、３，５−ビス（１−
ドデシロキシ）−安息香酸メチル（24.7g, 98%）を得
た。

【００２４】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ7.16(2H, d, J =
2.4Hz)、6.63(1H, t, J = 2.4Hz)、3.96(4H, t, J =
6.2Hz)、3.89(3H, s)、1.77(4H, m)、1.44(4H, m)、1.2
6(32H, m)、0.88(6H, t, J = 7.0Hz)。

【００２５】３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−安息
香酸メチル（23.7g, 47mmol）に、エタノール−水
（３：１、400ml）に溶かした水酸化カリウム（20.4g,
363mmol）を加え、４時間加熱還流した。エタノールを
留去し、２Ｎ塩酸（220ml）を加えた後、ジクロロメタ
ンで抽出した。ジクロロメタン層を、水、飽和食塩水で
洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。固形物をろ
別し、溶媒を留去して、エタノールから再結晶して、
３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−安息香酸（20.5g,
89%）を得た。

【００２６】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ7.23(2H, d, J =
2.4Hz)、6.69(1H, t, J = 2.4Hz)、3.98(4H, t, J =
6.6Hz)、1.79(4H, m)、1.44(4H, m)、1.27(32H, m)、0.
88(6H, t, J = 6.8Hz)。

【００２７】３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−安息
香酸（4.92g, 100mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール（1.62g, 120mmol）、水溶性カルボジイミド（2.
30g,120mmol）に乾燥ジクロロメタン（100ml）を加え、
室温で３０分撹拌の後、２−アミノエタノール（0.74m
l, 120mmol）を加え、さらに３時間撹拌した。ジクロロ
メタン（200ml）を加え、１Ｎ塩酸、水、飽和重曹水、
飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し
た。固形物をろ別し、溶媒を留去して、メタノールから
再結晶して、目的物（4.47g, 84%）を得た。

【００２８】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.87(2H, d, J =
2.4Hz)、6.60(1H, br)、6.56(1H,t, J = 2.2Hz)、3.95
(4H, t, J = 6.4Hz)、3.82(2H, m)、3.61(2H, q, J =
5.2Hz)、1.76(4H, m)、1.42(4H, m)、1.26(32H, m)、0.
88(6H, t, J = 6.8Hz )、MALDI-TOFMS (dithranol) m/z
534 ([M+H]⁺)。

【００２９】

【実施例２】（Ｎ−（２−β−ガラクトキシエチル）−
３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミドの合
成）テトラアセチルガラクトシルトリクロロアセトイミ
デート（0.78g, 1.5mmol）とＮ−（２−ヒドロキシエチ
ル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミ
ド（0.40g, 0.75mmol）を乾燥ジクロロメタン（15ml）
に溶かし、モレキュラーシーブスＡＷ−３００（0.4g,
粉末）を加え、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌した。０
℃に冷却した後、乾燥ジクロロメタン（1.0ml）で希釈
したトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホナート
（3.45μl, 18.7μmol）を滴下し、徐々に室温に戻しな
がら３０分間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミン
を加えて中和し、セライトろ過後、溶媒を留去した。残
さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：
酢酸エチル＝２：１）により精製し、目的物のテトラア
セチル体（0.17g, 27%）を得た。

【００３０】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.89(2H, d, J =
2.4Hz)、6.56(1H, t, J = 2.2Hz)、6.54(1H, t, J =
5.9Hz)、5.39(1H, bd, J = 3.4Hz)、5.21(1H, dd, J =
10.5Hz, 7.8Hz)、5.02(1H, dd, J = 10.5Hz, 3.4Hz)、
4.50(1H, d, J = 7.8Hz)、4.13(2H, d, J = 6.8Hz)、3.
97(4H, t, J = 6.5Hz)、3.92(2H, m)、3.72-3.81(2H,
m)、3.56(1H, m)、2.17(3H, s)、2.01(3H, s)、1.99(3
H, s)、1.94(3H, s)、1.76(4H, m)、1.44(4H, m)、1.27
(32H, m)、0.88(6H, t, J = 6.8Hz)、MALDI-TOFMS(dith
ranol) m/z 887 ([M+Na]⁺)。

【００３１】テトラアセチル体（0.16g, 0.18mmol）を
乾燥メタノール（8ml）に溶かし、ナトリウムメトキシ
ド（5.1mg, 0.09mmol）を加え、アルゴン雰囲気下室温
で１．５時間撹拌した。反応終了後、アンバーライトＩ
Ｒ−１２０を加えて中和し、ろ過後、溶媒を留去した。
残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホ
ルム：メタノール：水＝２００：２０：１）により精製
し、目的物（0.12g, 95%）を得た。

【００３２】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ7.39(1H, t, J =
5.6Hz)、6.93(2H, d, J = 2.0Hz)、6.55(1H, t, J =
2.0Hz)、4.27(1H, d, J = 7.8Hz) 、4.00(2H, m)、3.94
(4H,t, J = 6.8Hz)、3.83(3H, m)、3.48-3.73(5H, m)、
1.75(4H, m)、1.41(4H, m)、1.28(32H, m)、0.88(6H,
t, J = 6.8Hz)、MALDI-TOFMS (dithranol) m/z 718([M+
Na]⁺)。

【００３３】

【実施例３】（Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，
５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミドの合成）
３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−安息香酸（4.92g,
100mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（1.62
g, 120mmol）、水溶性カルボジイミド（2.31g,120mmo
l）に乾燥ジクロロメタン（100ml）を加え、室温で３０
分撹拌の後、６−アミノヘキサノール（1.41g, 120mmo
l）を加え、さらに３時間撹拌した。ジクロロメタン（2
00ml）を加え、１Ｎ塩酸、水、飽和重曹水、飽和食塩水
で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。固形物を
ろ別し、溶媒を留去して、ヘキサンから再結晶して、目
的物（5.16g, 88%）を得た。

【００３４】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.84(2H, d, J =
2.4Hz) 、 6.55(1H, t, J = 2.2Hz)、6.13(1H, br)、
3.95(4H, t, J = 6.6Hz)、3.65(2H, t, J = 6.4Hz)、3.
43(2H, q, J = 6.7Hz)、1.77(4H, m)、1.60(4H, m)、1.
42(8H, m)、1.26(32H, m)、0.88(6H, t, J = 6.8Hz) 、
MALDI-TOFMS (dithranol) m/z 591 ([M+H]⁺)。

【００３５】

【実施例４】（Ｎ−（６−β−ガラクトキシヘキシル）
−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミドの
合成）テトラアセチルガラクトシルトリクロロアセトイ
ミデート（0.34g, 0.68mmol）とＮ−（２−ヒドロキシ
ヘキシル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベン
ズアミド（0.20g, 0.34mmol）を乾燥ジクロロメタン（1
4ml）に溶かし、モレキュラーシーブスＡＷ−３００
（0.2g,粉末）を加え、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌
した。０℃に冷却した後、乾燥ジクロロメタン（1.0m
l）で希釈したトリメチルシリルトリフルオロメタンス
ルホナート（1.6μl, 8.46μmol）を滴下し、徐々に室
温に戻しながら４５分間撹拌した。反応終了後、トリエ
チルアミンを加えて中和し、セライトろ過後、溶媒を留
去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー
（ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）により精製し、目的
物のテトラアセチル体（0.12g, 40%）を得た。

【００３６】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.85(2H, d, J =
2.2Hz)、6.55 (1H, t, J = 2.2Hz)、6.11(1H, t, J =
5.6Hz)、5.39(1H, d, J = 3.3Hz)、5.20(1H, dd, J = 1
0.5Hz, 7.8Hz)、5.01(1H, dd, J = 10.5Hz, 3.3Hz)、4.
45(1H, d, J = 7.8Hz)、4.19(1H, dd, J = 11.1Hz, 6.5
Hz)、4.12(1H, dd, J = 11.1Hz, 7.0Hz)、3.96(4H, t,
J = 6.6Hz)、3.89(2H, m)、3.47(1H, m)、3.42(2H,
m)、2.15(3H, s)、2.06(3H, s)、2.05(3H, s)、1.99(3
H, s)、1.77(4H, m)、1.38(12H, m)、1.26(32H, m)、0.
88(6H, t, J = 6.8Hz)、MALDI-TOFMS (dithranol) m/z
921 ([M+H]⁺)。

【００３７】テトラアセチル体（0.25g, 0.27mmol）を
乾燥メタノール（15ml）に溶かし、ナトリウムメトキシ
ド（7.7mg, 0.14mmol）を加え、アルゴン雰囲気下室温
で１．５時間撹拌した。反応終了後、アンバーライトＩ
Ｒ−１２０を加えて中和し、ろ過後、溶媒を留去した。
残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホ
ルム：メタノール：水＝２００：２０：１）により精製
し、目的物（0.11g, 55%）を得た。

【００３８】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.85(2H, d, J =
2.0Hz)、6.55(1H, t, J = 2.0Hz)、5.45(1H, t, J =
5.7Hz)、4.24(1H, d, J = 7.7Hz) 、4.00(1H, d, J =
3.0Hz)、3.94(4H, t, J = 6.5Hz)、3.81-3.92(3H, m)、
3.65(1H, dd, J = 9.6Hz, 7.7Hz)、3.57(1H, dd, J =
9.6Hz, 3.0Hz)、3.52(2H, m)、3.40(2H, q, J = 6.7H
z)、1.75(4H, m)、1.41(12H, m)、1.28(32H, m)、0.88
(6H, t, J = 6.7Hz)、MALDI-TOFMS (dithranol) m/z 77
5 ([M+Na]⁺)。

【００３９】

【実施例５】（Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５
−ビス（１−オクタデシロキシ）−ベンズアミドの合
成）３，５−ジヒドロキシ安息香酸メチル（8.41g, 50.
0mmol）、１−ブロモオクタデカン（37ml, 111mmol）、
炭酸カリウム（45.6g, 330mmol）を乾燥ジメチルホルム
アミドに懸濁させ、アルゴン雰囲気下、８０℃で１０時
間加熱撹拌した。室温に戻した後、氷冷した水（250m
l）に注ぎ、沈殿物をろ取し、乾燥の後、ｎ−プロパノ
ールから再結晶して、３，５−ビス（１−オクタデシロ
キシ）−安息香酸メチル（22.1g, 66%）を得た。

【００４０】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ7.16(2H, d, J =
2.0Hz)、6.63(1H, t, J = 2.2Hz)、3.96(4H, t, J =
6.6Hz)、3.89(3H, s)、1.77(4H, m)、1.44(4H, m)、1.2
6(56H, m)、0.88(6H, t, J = 6.6Hz)。

【００４１】３，５−ビス（１−オクタデシロキシ）−
安息香酸メチル（20.4g, 30mmol）に、エタノール−水
（３：１、300ml）に溶かした水酸化カリウム（13.0g,
232mmol）を加え、４時間加熱還流した。室温に戻し
て、溶媒をデカンテーションで除き、２Ｎ塩酸（120m
l）とジクロロメタン（200ml）を加え、懸濁状態で６時
間撹拌を行った。ジクロロメタンを留去し、沈殿物をろ
取、乾燥して、３，５−ビス（１−オクタデシロキシ）
−安息香酸（19.4g, 97%）を得た。

【００４２】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ7.22(2H, d, J =
2.0Hz)、6.69(1H, t, J = 2.2Hz)、3.98(4H, t, J =
6.6Hz)、1.78(4H, m)、1.44(4H, m)、1.26(56H, m)、0.
88(6H, t, J = 6.8Hz)。

【００４３】３，５−ビス（１−オクタデシロキシ）−
安息香酸（6.59g, 100mmol）、１−ヒドロキシベンゾト
リアゾール（1.62g, 120mmol）、水溶性カルボジイミド
（2.31g, 120mmol）に乾燥ジクロロメタン（100ml）を
加え、１５分加熱還流の後、２−アミノエタノール（0.
74ml, 120mmol）を加え、さらに１時間加熱還流した。
室温に戻した後、ジクロロメタン（200ml）を加え、１
Ｎ塩酸、水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫
酸マグネシウムで乾燥した。固形物をろ別し、溶媒を留
去して、ヘキサンから再結晶して、目的物（5.63g, 80
%）を得た。

【００４４】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.87(2H, d, J =
2.4Hz)、6.57(1H, t, J = 2.4Hz)、3.96(4H, t, J =
6.4Hz)、3.83(2H, t, J = 5.0Hz)、3.62(2H, q, J = 5.
2Hz)、1.76(4H, m)、1.42(4H, m)、1.26(56H, m)、0.88
(6H, t, J = 6.8Hz)。

【００４５】

【実施例６】（Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，
５−ビス（１−オクタデシロキシ）−ベンズアミドの合
成）３，５−ビス（１−オクタデシロキシ）−安息香酸
（6.59g, 100mmol）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾー
ル（1.62g, 120mmol）、水溶性カルボジイミド（2.30g,
120mmol）に乾燥ジクロロメタン（100ml）を加え、１
５分加熱還流の後、２−アミノヘキサノール（1.41g, 1
20mmol）を加え、さらに１時間加熱還流した。室温に戻
した後、ジクロロメタン（200ml）を加え、１Ｎ塩酸、
水、飽和重曹水、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネ
シウムで乾燥した。固形物をろ別し、溶媒を留去して、
ヘキサンから再結晶して、目的物（6.90g, 80%）を得
た。

【００４６】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.85(2H, d, J =
2.0Hz) 、 6.55(1H, t, J = 2.2Hz)、6.08(1H, br)、
3.96(4H, t, J = 6.6Hz)、3.65(2H, t, J = 6.4Hz)、3.
44(2H, q, J = 6.7Hz)、1.77(4H, m)、1.60(4H, m)、1.
42(8H, m)、1.26(56H, m)、0.88(6H, t, J = 6.8Hz)。

【００４７】

【参考例１】（３，４，５−トリス（１−オクタデシロ
キシ）−ベンジルガラクトシドの合成）テトラアセチル
ガラクトシルトリクロロアセトイミデート（0.44g, 0.8
8mmol）と３，４，５−トリス（１−オクタデシロキ
シ）−ベンジルアルコール（0.40g, 0.44mmol）を乾燥
ジクロロメタン（24ml）に溶かし、モレキュラーシーブ
ス４Ａ（0.4g,粉末）を加え、アルゴン雰囲気下で１時
間撹拌した。０℃に冷却した後、乾燥ジクロロメタン
（0.2ml）で希釈したトリメチルシリルトリフルオロメ
タンスルホナート（0.8μl, 4.4μmol）を滴下し、徐々
に室温に戻しながら１．５時間撹拌した。反応終了後、
トリエチルアミンを加えて中和し、セライトろ過後、溶
媒を留去した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（ヘキサン：酢酸エチル＝７：１）により精製し、
目的物のテトラアセチル体（0.19g, 34%）を得た。

【００４８】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.47(2H, s)、5.
39(1H, dd, J = 3.4Hz, 2.7Hz)、5.27(1H, dd, J = 10.
5Hz, 7.8Hz)、5.00(1H, dd, J = 10.5Hz, 4.3Hz)、4.81
(1H,d, J = 11.6Hz)、4.53(1H, d, J = 7.8Hz)、4.51(1
H, d, J = 11.6Hz)、4.22(1H, dd, J = 11.1Hz, 6.6H
z)、4.14(1H, dd, J = 11.1Hz, 7.0Hz)、3.94(5H, m)、
3.89(2H, t, J = 6.2Hz)、2.15(3H, s)、2.06(3H, s)、
1.99(3H, s)、1.97(3H, s)、1.76(6H, m)、1.46(6H,
m)、1.25(84H, m)、0.88(9H, t, J = 7.1Hz)、MALDI-TO
FMS (dithranol) m/z 1244 ([M+H]⁺)。

【００４９】テトラアセチル体（0.11g, 0.09mmol）を
乾燥メタノール（15ml）に熱を加えながら溶かし、ナト
リウムメトキシド（2.7mg, 0.04mmol）を加え、３時間
加熱還流した。反応終了後、アンバーライトＩＲ−１２
０を加えて中和し、ろ過後、溶媒を留去した。残さをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（ジクロロメタン：
メタノール＝１０：１）により精製し、目的物（0.08g,
88%）を得た。

【００５０】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.53(2H, s)、4.
82(1H, d, J = 11.5Hz)、4.47(1H,d, J = 11.5Hz)、4.4
3(1H, d, J = 7.8Hz) 、3.97(1H, bd, J = 3.4Hz)、3.9
0(6H, m)、3.84(2H, dd, J = 11.9Hz, 4.6Hz)、3.66(1
H, dd, J = 9.5Hz, 7.8Hz)、3.54(1H, dd, J = 9.5Hz,
3.4Hz)、3.52(1H, m)、1.72(6H, m)、1.42(6H, m)、1.2
4(84H, m)、0.84(9H, t, J = 6.8Hz)、MALDI-TOFMS (di
thranol) m/z 1098 ([M+Na]⁺)。

【００５１】

【参考例２】（３，４，５−トリス（１−オクタデシロ
キシ）−ベンジルグルコシドの合成）テトラアセチルグ
ルコシルトリクロロアセトイミデート（0.44g, 0.88mmo
l）と３，４，５−トリス（１−オクタデシロキシ）−
ベンジルアルコール（0.41g,0.44mmol）を乾燥ジクロロ
メタン（24ml）に溶かし、モレキュラーシーブス４Ａ
（0.4g,粉末）を加え、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌
した。０℃に冷却した後、乾燥ジクロロメタン（24ml）
で希釈した三フッ化ホウ素ジエチルエーテル錯体（16.8
μl, 0.13mmol）を滴下し、徐々に室温に戻しながら
０．５時間撹拌した。反応終了後、トリエチルアミンを
加えて中和し、セライトろ過後、溶媒を留去した。残さ
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢
酸エチル＝１０：１）により精製し、目的物のテトラア
セチル体（0.15g, 27%）を得た。

【００５２】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.47(2H, s)、5.
20(1H, dd, J = 9.5Hz, 9.3Hz)、5.11(1H, dd, J = 9.8
Hz, 9.5Hz)、5.06(1H, dd, J = 9.3Hz, 7.8Hz)、4.80(1
H, d, J = 11.5Hz)、4.58(1H, d, J = 7.8Hz)、4.50(1
H, d, J = 11.5Hz)、4.28(1H,dd, J = 12.3Hz, 4.6H
z)、4.17(1H, dd, J = 12.3Hz, 2.4Hz)、3.92-4.06(6H,
m)、3.70(1H, ddd, J = 9.8Hz, 4.6Hz, 2.4Hz)、2.10(3
H, s)、2.03(3H, s)、2.00(3H, s)、1.99(3H, s)、1.76
(6H, m)、1.46(6H, m)、1.25(84H, m)、0.88(9H,t, J =
7.1Hz)。

【００５３】テトラアセチル体（0.06g, 0.05mmol）を
乾燥メタノール（10ml）に熱を加えながら溶かし、ナト
リウムメトキシド（2.0mg, 0.02mmol）を加え、１時間
加熱還流した。反応終了後、アンバーライトＩＲ−１２
０を加えて中和し、ろ過後、溶媒を留去した。残さをシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メ
タノール＝１０：１）により精製し、目的物（0.0５g,
8９%）を得た。

【００５４】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.53(2H, s)、4.
81(1H, d, J = 11.5Hz)、4.47(1H,d, J = 11.5Hz)、4.4
2(1H, d, J = 7.6Hz) 、3.93(6H, m)、3.86(2H, m)、3.
56-3.67(2H, m)、3.40-3.44(2H, m)、2.95(1H, br)、2.
90(1H, d, J = 2.9Hz)、2.70(1H, d, J ＝ 2.4Hz)、2.1
5(1H, m)、1.74(6H, m)、1.44(6H, m)、1.24(84H, m)、
0.86(9H, t, J = 6.8Hz)、MALDI-TOFMS (dithranol) m/
z 1098 ([M+Na]⁺)。

【００５５】

【参考例３】（３，４，５−トリス（１−ドデシロキ
シ）−ベンジルガラクトシドの合成）テトラアセチルガ
ラクトシルトリクロロアセトイミデート（0.30g, 0.61m
mol）と３，４，５−トリス（１−ドデシロキシ）−ベ
ンジルアルコール（0.20g, 0.30mmol）を乾燥ジクロロ
メタン（12ml）に溶かし、モレキュラーシーブス４Ａ
（0.2g,粉末）を加え、アルゴン雰囲気下で１時間撹拌
した。０℃に冷却した後、乾燥ジクロロメタン（0.2m
l）で希釈したトリメチルシリルトリフルオロメタンス
ルホナート（0.6μl, 3.0μmol）を滴下し、徐々に室温
に戻しながら４０分間撹拌した。反応終了後、トリエチ
ルアミンを加えて中和し、セライトろ過後、溶媒を留去
した。残さをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘ
キサン：酢酸エチル＝５：１）により精製し、目的物の
テトラアセチル体（0.17g, 56%）を得た。

【００５６】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.48(2H, s)、5.
40(1H, bd, J = 3.4Hz)、5.28(1H,dd, J = 10.5Hz, 8.1
Hz)、5.01(1H, dd, J = 10.5Hz, 3.4Hz)、4.82(1H, d,
J =11.5Hz)、4.54(1H, d, J = 8.1Hz)、4.52(1H, d, J
= 11.5Hz)、4.22(1H, dd,J = 11.2Hz, 6.4Hz)、4.15(1
H, dd, J = 11.2Hz, 7.0Hz)、3.95(5H, m)、3.91(2H,
t, J = 4.9Hz)、2.16(3H, s)、2.07(3H, s)、2.00(3H,
s)、1.99(3H, s)、1.77(6H, m)、1.47(6H, m)、1.27(48
H, m)、0.88(9H, t, J = 6.8Hz)、MALDI-TOFMS (dithra
nol) m/z 1014 ([M+H]⁺)。

【００５７】テトラアセチル体（0.33g, 0.33mmol）を
乾燥メタノール（20ml）に溶かし、ナトリウムメトキシ
ド（2.7mg, 0.04mmol）を加え、アルゴン雰囲気下室温
で１時間撹拌した。反応終了後、アンバーライトＩＲ−
１２０を加えて中和し、ろ過後、溶媒を留去した。残さ
をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム：メタノール＝２０：１）により精製し、目的物（0.
12g, 45%）を得た。

【００５８】¹H-NMR(CDCl₃, 400MHz)δ6.58(2H, s)、4.
84(1H, d, J = 11.5Hz)、4.50(1H,d, J = 11.5Hz)、4.3
3(1H, d, J = 7.8Hz) 、3.96(5H, m)、3.92(2H, m)、3.
89(1H, dd, J = 11.7Hz, 6.0Hz)、3.83(1H, dd, J = 1
1.7Hz, 9.4Hz)、3.66(1H, dd, J = 9.4Hz, 7.8Hz)、3.5
3(1H, dd, J = 9.4Hz, 3.4Hz)、3.50(1H, dd, J = 9.4H
z, 6.0Hz)、1.76(6H, m)、1.44(6H, m)、1.28(48H,
m)、0.88(9H, t, J = 7.0Hz)、MALDI-TOFMS (dithrano
l) m/z 846 ([M+Na]⁺)。

【００５９】

【実施例７】（ガラクトース誘導体とリシンとの相互作
用）糖脂質アナログ化合物とレクチンとの相互作用は、
分子間相互作用解析装置であるＩＡｓｙｓ ｐｌｕｓ
（Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｓｅｎｓｏｒｓ社製）を用いて解
析した。

【００６０】疎水性キュベットを、界面活性剤水溶液、
バッファー、イソプロパノールで洗浄の後、Ｎ−（６−
β−ガラクトキシヘキシル）−３，５−ビス（１−ドデ
シロキシ）−ベンズアミドの０．４ｍＭ溶液（クロロホ
ルム：メタノール：イソプロパノール＝１：３：１６）
６０μｌを添加して固定化を行った。固定化量は、７４
１Ａｒｃｓｅｃｏｎｄｓだった。

【００６１】このキュベットを、バッファー、塩酸水溶
液、水酸化ナトリウム水溶液で洗浄の後、ウシ血清アル
ブミンでブロッキングを行い、バッファーで洗浄の後、
リシンの２０μＭ溶液５０μｌを添加して、相互作用を
検討した。５分後の吸着量は、７２５Ａｒｃｓｅｃｏｎ
ｄｓだった。

【００６２】同様の解析を、Ｎ−（６−ヒドロキシヘキ
シル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズア
ミドについて行ったところ、固定化量は３３０Ａｒｃｓ
ｅｃｏｎｄｓ、リシンの吸着量は５７Ａｒｃｓｅｃｏｎ
ｄｓだった。

【００６３】同様の解析を、Ｎ−（２−β−ガラクトキ
シエチル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベン
ズアミドについて行ったところ、固定化量は５９７Ａｒ
ｃｓｅｃｏｎｄｓ、リシンの吸着量は５７１Ａｒｃｓｅ
ｃｏｎｄｓだった。

【００６４】同様の解析を、Ｎ−（６−ヒドロキシエチ
ル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミ
ドについて行ったところ、固定化量は２３０Ａｒｃｓｅ
ｃｏｎｄｓ、リシンの吸着量は７１Ａｒｃｓｅｃｏｎｄ
ｓだった。

【００６５】以上の結果から、Ｎ−（６−β−ガラクト
キシヘキシル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−
ベンズアミドおよびＮ−（２−β−ガラクトキシエチ
ル）−３，５−ビス（１−ドデシロキシ）−ベンズアミ
ドが、疎水表面上に固定化されることでガラクトースを
提示することが確認された。

【００６６】

【発明の効果】本発明は、細胞培養やレクチン等のスク
リーニングに使用可能な、安価な原料から短工程、高効
率で得られる、新規な構造を持つ糖脂質アナログ化合
物、および、その合成中間体を提供するものである。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】式（１）で示される糖脂質アナログ化合
   物。 【化１】 （ただし、式中で、Ｒはグルコース残基、ガラクトース
   残基を表し、ｍは２から６の整数を、ｎは１１から１７
   の整数を表す。）
2. 【請求項２】式（２）で示される糖脂質アナログ化合物
   合成中間体。 【化２】 （ただし、式中で、ｍは２から６の整数を、ｎは１１か
   ら１７の整数を表す。）