JP2001517208A

JP2001517208A - 損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、例えばｂ７−１遺伝子で形質転換したｒｍａ−ｓ細胞上に発現される抗原またはエピトープの治療的応用

Info

Publication number: JP2001517208A
Application number: JP52656398A
Authority: JP
Inventors: ウオルペルト，エリザベス; カルレ，クラス; ペテルソン，マックス; サンドベルグ，ヨハン
Original assignee: ウオルペルト，エリザベス
Priority date: 1996-12-12
Filing date: 1997-12-12
Publication date: 2001-10-02
Also published as: DE69720065T2; DK0964697T3; DE69720065D1; ES2193408T3; CA2274837A1; EP0964697A1; US20030087846A1; PT964697E; AU5423898A; SE9604581D0; ATE234628T1; EP0964697B1; WO1998025645A1

Abstract

(57)【要約】本願発明は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの発現を誘導し得る物質の、癌及びウイルス感染細胞に対する特異的なＴ細胞仲介の免疫反応を刺激する薬物，医薬組成物またはワクチンを製造するための使用に関する。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの発現を誘導し得る物質またはその一部の、同じ目的のための使用に関する。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように操作された哺乳動物細胞、及び同じ目的のためにＭＨＣクラスＩ依存性の構造などに対して活性化されたリンパ系細胞に関する。さらに上記のような哺乳動物細胞の操作及び上記のような操作に使用するためのキットと同様にヒトを治療するための方法も含まれる。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられたＴ細胞受容体またはその一部を含む分子の、薬物，医薬組成物またはワクチンを製造するための使用に関する。本願発明によれば、上記製造物または方法の最終的な目的は、癌及びウイルス感染の治療，予防及び診断である。

Description

【発明の詳細な説明】損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、例えばＢ７−１遺伝子で形質転換したＲＭＡ−Ｓ細胞上に発現される抗原またはエピトープの治療的応用本願発明は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの発現を誘導し得る物質の、癌及びウイルス感染細胞に対する特異的なＴ細胞仲介の免疫反応を刺激する薬物，医薬組成物またはワクチンを製造するための使用に関する。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの発現を誘導し得る物質またはその一部の、同じ目的のための使用に関する。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように操作された哺乳動物細胞、及び同じ目的のためにＭＨＣクラスＩ依存性の構造などに対して活性化されたリンパ系細胞に関する。さらに上記のような哺乳動物細胞の操作及び上記のような操作に使用するためのキットと同様に、ヒトを治療するための方法も含まれる。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに向けられたＴ細胞受容体またはその一部を含む分子の、薬物，医薬組成物またはワクチンを製造するための使用に関する。本願発明によれば、上記生成物または方法の最終的な目的は、癌及びウイルス感染の治療，予防及び診断である。発明の背景免疫系は生体にとっての外来物質（いわゆる抗原）を認識し、この物質を除去する。免疫系の重要部位はＣＤ８⁺細胞障害性Ｔ細胞またはＴリンパ球（ＣＴＬ）から構成され、これが、例えばウイルス感染または移植における、外来及び病変細胞を認識し、殺傷する。Ｔ細胞はその表面のＴ細胞受容体を通して抗原を認識する。Ｔ細胞受容体は、ペプチドが結合される細胞表面分子ＭＨＣ（主要適合性複合体）（ヒトにおけるＨＬＡ（ヒト白血球抗原））を認識する。ＭＨＣクラスＩ分子は全ての有核細胞で発現され、それらは優先的に内因性の細胞ペプチドを提示する。ＭＨＣクラスＩＩ分子が、細胞を提示する専門の抗原上に優先的に発現され、細胞外抗原からのペプチドを優先的に提示する。Ｔ細胞の標的細胞上の認識構造、例えばＭＨＣ分子に結合したペプチドをエピトープと呼ぶ。エピトープはより大きな抗原、例えばタンパク質の一部であることが多い。ＭＨＣクラスＩ複合体の産性及び提示は、細胞が正常細胞であろうとウイルス感染または癌に形質転換した細胞であろうと、細胞内のペプチドプロセッシング機構によって起こる。細胞は、細胞質タンパク質を短いペプチドに分解するためにプロテアソーム（proteasome）を用いる（１）。これらのペプチドの幾つかは、抗原プロセッシング関連トランスポーター（ＴＡＰ）分子によって、核や細胞質から小胞体（ＥＲ）やゴルジ体に輸送される。ＥＲやゴルジ体の中に入ると、ペプチド類はＭＨＣクラスＩタンパク質に結合し、３分子の複合体を形成する。そしてこの複合体は細胞表面に輸送され、そこでＴリンパ球受容体に認識されるようになる。ＣＤ８⁺Ｔリンパ球として知られる、ある特定のタイプのＴリンパ球の表面上の受容体は、特異的に、ＭＨＣクラスＩタンパク質とある特定のタンパク質から由来するペプチドとの組合せにより形成されるＭＨＣクラスＩ複合体を認識し、ＣＤ８⁺リンパ球を誘導してこれらの複合体を担う細胞を殺傷する。従って、問題のタンパク質がウイルス起源である場合は、Ｔリンパ球は、その関連したウイルスに感染した細胞に特異的なものとなる。ウイルス感染においては、細胞の多くのＭＨＣ分子が、正常な細胞タンパク質からのペプチドの代わりにウイルスペプチドで満たされる。Ｔ細胞認識のためのＭＨＣクラスＩ限定のエピトープの形成に導かれる、細胞内の一連の流れ、例えば天然タンパク質の分解，ペプチドのＥＲへの輸送，ＭＨＣクラスＩ分子へのペプチドの搭載は、“細胞ペプチドプロセッシング”として照会されている。ペプチド類は、ＴＡＰと呼ばれる細胞内分子複合体によって、ＥＲに輸送される（２）。機能的なＴＡＰ−複合体がない場合には、大部分のＭＨＣクラスＩ分子がＥＲ中に保持され、ほんの少しの分画しか細胞表面に輸送されない（３−６）。このことは、ＴＡＰ遺伝子が欠損した細胞系で研究されている。このような細胞のＭＨＣクラスＩ分子はしばしば、“空の”または“ペプチドを受容できる”として照会される。これらの分子は生理的な温度で不安定であるが、低温での培養もしくは外因性のＭＨＣクラスＩ結合ペプチドの添加によって安定化できる（７−９）。ＴＡＰ欠損細胞は、ウイルス，副（minor）適合性または腫瘍抗原に特異的な慣用のＭＨＣクラスＩ限定のＣＴＬでは効率的に認識されないことから、ＴＡＰはＭＨＣクラスＩ限定のＣＴＬ応答にきわめて重要であると考えられる（７，１０，１１）。対照的に、ＴＡＰ欠損細胞は幾つかのアロ（allo）ＭＨＣクラスＩ特異的ＣＴＬによって認識される（１０，１２，１３）。このようなアロ特異的なＣＴＬが、ＭＨＣクラスＩ分子自身、またはＴＡＰ非依存性のペプチドを担うＭＨＣクラスＩ分子を認識するかどうかは不明である。後者は、シグナル配列に由来するペプチド種（１４，１５）、もしくは他のＴＡＰ非依存性の機構によりＥＲに運ばれるペプチドを含んでいるかもしれない。腫瘍は、成長の制御を失った、即ち制限なしに成長し、正常組織を侵食してしまう細胞からなる。腫瘍は全てのタイプの臓器で発生し得る。多くの研究グループが今日、Ｔ細胞に腫瘍細胞を認識させ、殺傷するように誘導するという試みを行っている。その戦略は、種々のＭＨＣ分子に結合できるこれらのタンパク質から、腫瘍及びペプチドについて特有の（unique）タンパク質を見出すというものである。そしてこのようなペプチドを、腫瘍に対しての免疫反応を刺激すべきワクチン中の構成分として使用する。一つの問題は、種々の腫瘍が種々のタンパク質を有し、ＭＨＣ分子及び、それらのタンパク質由来のＭＨＣ分子に結合するペプチドが腫瘍間ばかりでなく、個体間でも多岐に亘っていることである。またもう一つの問題は、多くの腫瘍が、ＴＡＰなどの抗原プロセッシング機構部分を失っており、そのため腫瘍が慣用のＴ細胞では検出されないことである。それらの腫瘍は抗原性をもたず、免疫応答から逃れることができる（１６−１９）。それゆえＴＡＰ機能は抗原性にとっては必須なものと考えられ、細胞におけるＴＡＰ機能の阻害が、細胞によって発現される抗原に対するＴ細胞の応答を減少させたり、消失させたりすることは以前から示唆されている。例えば、ＷＯ９５／１５３８４は、ＴＡＰ阻害剤，ヘルペスシンプレックス（Herpes Simplex）ウイルス（ＨＳＶ）から単離されたタンパク質ＩＣＰ４７及び、その、ＣＤ８⁺ Ｔリンパ球に対するＭＨＣクラスＩタンパク質に関連するウイルス及び細胞の抗原の提示を阻害するための使用について記載する。幾人かの研究者は、細胞がＴ細胞仲介の認識から逃れる方法として、ＴＡＰ及びプロテアソームのダウンレギュレーションを強調している。本願発明は新規な概念，つまりＴＡＰ機能の阻止が、十分に機能的なＴＡＰ分子の存在下では認識されない宿主Ｔ細胞による新規な内因性ＭＨＣクラスＩ依存性抗原の認識を導くことに起因する、減少したというよりむしろ新規で特有の細胞の抗原性を、細胞ペプチドプロセッシングの阻止が導くことに基づいている。本願発明者は、ＴＡＰ欠損細胞での免疫化が、ＴＡＰ欠損細胞によって優先的に発現されるエピトープに対して向けられたＴ細胞を誘引させ、このようなＴ細胞の誘導が幾つかの腫瘍部位の癌の成長を阻止できることを示している。本願発明の一つの応用は、ＴＡＰ依存性のペプチドの処理と提示をする能力が不十分な癌細胞を消失させることを目的とする、癌の免疫療法である。癌は一般的な疾患、むしろ疾患の集合体である。最近、多くの種類のヒト腫瘍（例えば、子宮頚癌，メラノーマ，肺癌など）においてプロセッシング／ＴＡＰ欠損が観察されている。さらに、免疫療法のプロトコールの発展と応用は今日、加えられた治療によってさえも選出されてしまう可能性がある逃避変異体（例えばＴＡＰが欠損した）の問題に直面している。エピトープが細胞系列に特異的であろうとなかろうと、ＴＡＰが欠損した種々の腫瘍に対する種々のＴ細胞を発生させることができるから、この原理は多くの種類の癌に応用できる。それゆえ応用された原理は、スウェーデンだけでも毎年何百何千の患者に加えられた免疫療法治療において適したものと言える。またもう一つの応用は、ＨＳＶワクチンの展開である。ＨＳＶは非常にありふれたウイルスであり、スウェーデンの人口の大部分のパーセントまでが感染しており、接触感染だけで無症状の人々もいる。症状のある大部分の人々が口内炎を発症しており、寿命に影響するわけではないが、非常に煩わしいものである。まれに重篤な合併症として、生命を脅かしかねない髄膜炎がある。ＨＳＶはまた膣内炎を起こすときがあり、感染した母親の新生児への生命を脅かす感染を引き起こす。ＨＳＶはＴＡＰをダウンレギュレートし、それによって“正常な”ＭＨＣクラスＩ限定のＣＴＬ応答を回避できることが示されている。前記したエピトープ及び方法は、未だ存在しないＨＳＶウイルスワクチンを発展させる道標になるであろう。発明の要約以下の観察は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープ、特に損傷したＴＡＰ機能に関連する抗原が癌に対しての免疫のために、またはウイルスワクチンとして使用できることを示す。本願の基礎となる重要な観察の一つとして、Ｔ細胞が、損傷したＴＡＰ機能に関連する抗原に対して活性化されることがある。以前、マウス（ＲＭＡ−Ｓ）からのＴＡＰ欠損腫瘍細胞を産生した。この細胞系は、非効率的に、細胞障害性Ｔリンパ球から応答を活性化する（実施例１，ｆｉｇ．１ＡとＢ）。刺激性分子Ｂ７−１での形質移入後、このＴＡＰ欠損腫瘍細胞（ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１）は高程度までＴ細胞を活性化できる。これらのＴ細胞は、ＴＡＰとは別個の構造を認識し、そのためＴＡＰ欠損腫瘍細胞が高程度（イン・ビボで（in vivo）８０％）まで殺傷される。本願発明者は、ＴＡＰ欠損の非形質転換正常細胞及び腫瘍細胞が、ＴＡＰ欠損細胞によって優先的に発現されるＭＨＣクラスＩ依存性エピトープに対して向けられるＣＴＬ応答を誘導できることを見出した。放射線照射した、Ｂ７−１形質導入ＴＡＰ欠損腫瘍細胞で免疫したＢ６マウスでは、後からのＴＡＰ欠損腫瘍細胞の移植での成長が妨げられ、損傷したＴＡＰ機能に関連するこれらの新規なエピトープが、イン・ビボでの腫瘍拒絶抗原として働いていることが実証された。ヒトＴＡＰ欠損腫瘍細胞はまた、ＴＡＰ欠損細胞によって誘導されるＴ細胞によって殺傷される。驚くべきことに、幾つかの、ＴＡＰ発現（ＴＡＰ−expressing）げっ歯類腫瘍細胞も、ＴＡＰ欠損細胞によって誘導されるＣＤ８⁺細胞に殺傷されるが（５／試験された５，４匹はリンパ腫で、１匹は肥満細胞腫）、同じマウスからの試験された非形質転換ＴＡＰ発現細胞（増殖させたＴ細胞，いわゆるＣｏｎＡブラスト（blast））は殺傷されなかった。ＣＴＬが、ＴＡＰ発現をする腫瘍上の、ＴＡＰ機能に依存しないエピトープを認識した、即ち、その腫瘍は、ＴＡＰ機能を完全に損傷してはいないが、かなり損傷している可能性があることが示された。本願発明者は、損傷したＴＡＰ機能に関連する抗原が、幾つかの腫瘍細胞型に局在することから、腫瘍免疫に用いられる共通腫瘍抗原である可能性があることを実証する。発明の詳細な説明本願発明の一つの対象は、ＭＨＣ提示のための細胞ペプチドプロセッシングを損傷する物質、例えばＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤などの、癌の成長またはウイルス感染を、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープ、特に内因性抗原に対して向けられる免疫学的なエフェクター、特にＣＤ８⁺細胞，好ましくは細胞障害性細胞を刺激することによって防止または予防する薬物またはワクチンの製造のための使用である。本願発明のもう一つの対象は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープ、例えばＭＨＣクラスＩ複合体のペプチドまたは一部の、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する抗原に対して向けられる特異的Ｔ細胞、好ましくはＣＤ８⁺Ｔ細胞を誘導するための医薬組成物の製造のための使用である。本願発明のもう一つの対象は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられるＴ細胞受容体またはＴ細胞受容体の一部の、医薬組成物の製造のための使用である。本願発明はまた、このような物質の混合物にも関連する。リンパ球分画などの分離した血液分画の存在下で、癌またはウイルスだけからの抗原を発現する、放射線照射した細胞を培養することによって、及び、例えば（１１）で行われているように、抗原を発現する標的細胞の認識のためのエフェクターを試験するすることによって、免疫学的エフェクター細胞が、癌またはウイルスに対して、伸張し、活性化することを試験できる。ある物質が、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの発現を誘導することは、ＭＨＣクラスＩ分子に対する抗体を用いて、ＭＨＣクラスＩのダウンレギュレーションを測定して、または抗原に対して向けられるエフェクター細胞による認識によって決定されてもよい。ＭＨＣクラスＩ複合体は、好ましくはヒトのＨＬＡＡ，ＢまたはＣである。ＭＨＣクラスＩ発現を測定するための抗体は、例えばファーミンジェン（Pharmingen）社（San Diego，California）から取得できる。ＴＡＰ機能のダウンレギュレーションもまた、例えば（３３）にあるように、ペプチドトランスポーターアッセイによって測定でき、ＴＡＰタンパク質を、ＴＡＰ分子に対して向けられる抗体を用いて測定できる。抗体結合の測定は、標準的な技術、例えばＦＡＣＳスキャンアナライザー（ベクトン・ディッキンソン（Becton Dickinson）社製）を用いるフローサイトメトリーによって行う。本願発明は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連するエピトープ／構造または抗原、特に損傷したＴＡＰ機能に関連する抗原の全ての形成法に関する。本願発明は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの発現を誘導する全ての物質に亘る。従って、本願発明による物質は、細胞のペプチドプロセッシングに関与する構成分の機能または発現を阻害する、またはこのような物質の活性サブフラグメントを阻害するいかなる物質でもよい。より詳しくは、本願発明はこのような物質の、免疫応答を誘導することにおける使用に関する。細胞のペプチドプロセッシングに関与する構成分の例としては、例えば、ＴＡＰなどのＥＲ膜上のペプチドの局在に関連する構成分である。また、プロテアソームなどの内因性タンパク質の細胞溶解性プロセッシングに加わる物質にも拡張される。該物質は、特定のウイルスタンパク質などのＴＡＰの機能を阻害する物質、例えばＨＳＶタイプ１のＩＣＰ４７，ＨＳＶタイプ２のＩＥ１２などのＴＡＰ阻害剤であってもよい。ＴＡＰ阻害剤は、ＷＯ９５／１５３８４に従って産生されてもよい。該物質はまた、ペプチドアルデヒドＺ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈ（ペプチドインターナショナル（Peptide International）社製，Louisvill，KY）やラクタシスチン（Lactacystin）（カルバイオケム（Calbiochem）社製，La Jolla、C allfornia）などのプロテアソーム阻害剤などの、プロテアソームの機能を阻害するものであってもよい。さらに該物質は、細胞のペプチドプロセッシングに関与する物質、例えばＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤などをコードする遺伝子であってもよい。該物質は、細胞のペプチドプロセッシングに関与する物質、例えばＴＡＰまたはプロテアソームなどの発現を停止するもの、例えば細胞のペプチドプロセッシングに関与する物質をコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列に少なくとも部分的に相補性である核酸配列、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドやＲＮＡを破壊するリボザイム（ribozyme）であってもよい。アンチセンスポリヌクレオチド配列やそのアナローグ（analogue）を、イン・ビボまたはイン・ビトロ（in vitro）でタンパク質の発現を妨げるために使用することができる。細胞にある特定のタンパク質を産生するために転写されるメッセンジャーＲＮＡに相補性があるヌクレオチド配列の大量のストランド（strand ）を加える場合、これらの「アンチセンス」ストランドは、ｍＲＮＡにハイブリダイズ（hybridize）し、その翻訳を制限したり、妨げたりする。この方法は、例えばＴＡＰ及び／またはプロテアソームの発現を制限したり、妨げたりするために使用できる。また、ＤＮＡにハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用することもできる（２０，２１）。従って、アンチセンスＴＡＰで細胞を処理することができる（２２）。ｍＲＮＡにハイブリダイズするアンチセンスＲＮＡは、ＲＮＡを細胞に加えるか、アンチセンスＲＮＡを転写する遺伝子配列を導入することによって提供することができる（２３）。また、酵素的なプロセスとアンチセンスの塩基対の特異性とを結びつけるリボザイムを使用してもよい（２４）。これらの技術については（２５）で議論されている。本願発明の一つの目的は、癌や特定のウイルスに罹患している患者内の細胞を刺激して、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現させることである。該ウイルスは、ヘルペス・シンプレックス（Herpes Simplex）などの、ペプチドプロセッシング、例えばTAP機能を損傷するものでもよい。これはイン・ビトロでもイン・ビボでも実施できる。イン・ビボで実施するとき、患者に細胞ペプチドプロセッシングを損傷する物質を与える。従って、例えばＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤などの物質を含む組成物を与えてもよい。患者を、リボザイム，アンチセンスＲＮＡ，アンチセンスＤＮΛ及び／または、細胞ペプチドプロセッシングに関与する物質の発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドや、このような物質の阻害剤をコードする遺伝子、例えば、細胞ペプチドプロセッシングを損傷する物質をコードする遺伝子でワクチン接種できる。ＤＮＡは、いわゆるＤＮＡ免疫によって、生きている宿主の細胞に直接導入することができる。これには、筋肉内注射，皮内注射（表皮内の細胞をＤＮＡ被覆金粒子で形質導入する粒子衝撃）または組換え赤痢菌などの様々なベクターによる送達などの多くの種々の技術が含まれる。他の多くの技術が種々の研究室で展開されている。また、ＲＮＡ及びオリゴヌクレオチドをこのように与えてもよい（２６，２７）。本願発明のもう一つの対象は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように処理され、癌またはウイルス感染に対する薬物またはワクチンを製造するために使用されるべき細胞である。これらの細胞は、ペプチドプロセッシングが損傷した非哺乳動物、例えばＴＡＰ及び／またはプロテアソーム機能を欠失し、ヒトＭＨＣクラスＩ分子が形質導入された細胞、例えば昆虫細胞などでもよい（２８）。本願発明は、好ましくは、哺乳動物細胞に関し、特に、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように処理された自己哺乳動物細胞に関する。該細胞は、造血系細胞、特に樹状細胞から選択されてもよい。自己の細胞が特に好ましい。癌を治療しようとする場合、細胞は自己の細胞、特に疾病に冒された組織／臓器からの健康な細胞でもよい。そして、損傷したペプチドプロセッシングに関連するＭＨＣクラスＩ依存性抗原を発現するこれらの細胞は、Ｔ細胞を刺激してこれらの抗原に反応するようにするため、患者に注射される。本願発明のもう一つの対象は、哺乳動物細胞内の損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する方法であり、以下の特徴からなる。ａ）該細胞を、呻乳動物細胞内で細胞ペプチドプロセッシングに関与する物質を阻害する因子、例えばＴＡＰ阻害またはプロテアソーム阻害因子で処理する、または、ｂ）このような阻害因子をコードする配列を細胞のＤＮＡに導入する、または、ｃ）哺乳動物細胞内で細胞ペプチドプロセッシングに関与する物質、例えばＴＡＰまたはプロテアソームをコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に、少なくても部分的に相補性があるヌクレオチド配列を該細胞のＤＮＡに導入する、または、ｄ）該細胞を適当なリボザイムで処理する、及び、ｅ）非哺乳動物細胞を用いる場合は、それの、ヒトＭＨＣクラスＩ分子でのトランスフェクション、及び、ｆ）該細胞は、例えばＣｓ¹³⁷からの例えばγ−放射線照射を適当な量で、放射線照射されてもよい。ステップｅ）及びｆ）は、特に生きた細胞を用いる、標準的なワクチン接種技術の一部を表わしている。これらは本願発明の一部ではないが、ワクチン接種のプロセスには含まれていてもよい。標的細胞に外来の遺伝子産物を発現させるためには、そのＤＮＡを標的細胞に編入させる必要がある。プラスミドＤＮＡは、形質導入、例えばエレクトロポレーション（electroporation），リポフェクション（lipofection），カルシウム沈着（calcium precipitation）または粒子溶解（particle resolution）によって標的細胞に編入させることができる。ビヒクル（vehicle）として、例えばＤＯＴＡＰ（ベーリンガーマンハイム（Boehringer Manheim）社製）などのリポソームなどを用いてもよい。外来ＤＮＡを標的細胞に編入するもう一つの可能性は、ＤＮＡがタンパク質に包まれているレトロウイルスの使用である。レトロウイルスの場合、ＤＮＡは細胞を増殖することで、ゲノムに安定に編入できる（２９）。哺乳動物細胞を、真核細胞に適した培地、例えばウシ血清アルブミンを含むＲＰＭＩ１６４０中で培養してもよい。樹状細胞を、末梢血から、ＣＤ３４またはＣＤ１４などの分子に対する、例えばイムノマグネテイック・ソーティング（immunomagnetic sorting）によって分別する（sort）ことができる。マグネティックビーズはダイナル（Dynal）社から取得できる。この細胞は、イン・ビトロで、適した培地、例えば適当なサプリメント（３０）及び伸張と免疫原性を改善するためのアジュバントを含むＩＭＤＭ（ライフ・テクノロジーズ（Life Technologies）社製，Grand Island，NY）中で成長させることができる。アジュバントの例としては、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ），ＩＬ−４，腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ −α），幹細胞因子（ＳＣＦ）またはトランスホーミング成長因子−β（ＴＧＦ −β）などのサイトカイン類，ＭＨＣクラスＩＩまたは（Ｂ７発現を増幅する）ＣＤ４０に対する抗体、または共刺激性（costimulatory）分子の遺伝子などがある。損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように処理された、例えばＴＡＰまたはプロテアソーム阻害剤を有する細胞を、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連するＭＨＣクラスＩ依存性抗原に対するＴ細胞のイン・ビボまたはイン・ビトロでの活性化に用いてもよい。イン・ビボでの方法は前記されている。イン・ビトロでの方法は、例えば以下の通りである。ａ）細胞を前記のように、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように処理する。ｂ）Ｔ細胞を分離し、ステップａで得られた細胞を用いてイン・ビボで刺激する。そして、ｃ）活性化されたＴ細胞を患者に与える。Ｔ細胞のイン・ビトロでの樹状細胞での刺激は、現在の標準的な方法、例えばＴ細胞を末梢血から分別採取し、適当な培地及び適当な添加物、例えばＭＥＭ培地及びＩＬ−２において樹状細胞の存在下で培養することによって行う（３０，３１）。本願発明の一つの側面によれば、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して活性化された、Ｔ細胞などのリンパ球細胞、例えばＣＴＬ、好ましくはＣＤ８⁺Ｔリンパ球が、癌やウイルス感染に対する薬物またはワクチンを製造するために使用される。ヒトＴ細胞及び樹状細胞にとって最適の条件は、例えば（３０，３１）にあるようなものである。Ｔ細胞活性化は、細胞をＧＭ−ＣＳＦなどのサイトカイン類または、Ｂ７発現を増幅する、ＣＤ４０またはＭＨＣクラスＩＩなどに対する抗体で処理することにより増大できる。サイトカイン類及び抗体は、イムノコンタクト（ImmunoKontakt）社（スイス）から取得できる。これらの細胞は、例えばＴＡＰ阻害された細胞に対して向けられたＴ細胞クローンを用いて試験することができる。ＴＡＰ機能の阻害は、例えば（３２−３４）にあるように、ペプチドトランスポーターアッセイによって測定することができる。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する方法の、細胞で使用するためのキットに関し、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの形成を刺激する物質、ＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤、もしくは、プロテアソームまたはＴＡＰをコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に、少なくても部分的に相補性があるヌクレオチド配列などの活性な用量からなることを特徴とする。該キットは、さらにサイトカイン類及び共刺激性分子に対する遺伝子からなっていてもよい。本願発明はまた、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する物質、ＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤もしくは、アンチセンスヌクレオチドまたはリボザイムなどの、プロテアソームまたはＴＡＰをコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に、少なくても部分的に相補性のヌクレオチド配列などの、医薬的に有効な用量と、医薬的に許容できるアジュバントと共になる、医薬組成物またはワクチンに関する。本願発明のもう一つの対象は、癌及びウイルス感染の治療，防止及び診断のための方法であり、以下のように特徴付けられる。ａ）ヒト体内から取り出した細胞は、細胞ペプチドプロセッシングの阻害剤、例えばＴＡＰ阻害剤で処理され、可能であれば医薬的に許容されるアジュバントと共に体内に再投与される。または、ｂ）損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現する細胞が、可能であれば医薬的に許容されるアジュバントと共に体内に投与される。もしくは、ｃ）自己のＴ細胞が、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣ依存性の抗原またはエピトープに対してイン・ビトロで刺激され、体内に投与される。もしくは、ｄ）ＭＨＣクラスＩ提示のための細胞ペプチドプロセッシングの阻害剤、例えばＴＡＰ阻害剤を、医薬的に許容できるアジュバントと共に体内に投与する。もしくは、ｅ）損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープ、例えばペプチドまたはＭＨＣクラスＩ複合体またはその一部を体内に投与する。もしくは、ｆ）損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられたＴ細胞受容体またはその一部を体内に投与する。該細胞は、例えば本願明細書の第９頁の第２０行目から第２９行目に記載されているものなどの自己呻乳動物細胞であることが好ましい。該Ｔ細胞は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現するように処理された細胞、例えば本願明細書の第９頁の第１３行目から第２９行目に記載されている細胞で刺激されてもよい。それらは自己のものでもよい。標的細胞，刺激されたＴ細胞または阻害剤の量は、実施者または医師が決定することができる医薬的に有効な量である。アジュバントは、例えば第１１頁の第８行目から第１３行目までに記載される、医薬物質の効果を増大する物質である。本願発明の医薬組成物は、本明細書に記載される、細胞ペプチドプロセッシングを損傷する少なくとも１つの物質が、活性成分としてその中に溶解または分散している、生理学的に許容できる担体を含む。本願明細書で用いられているように、「医薬的に許容できる」という語は、該物質が望ましくない生理学的効果、例えば悪心，めまい感，胃の不調などを生じることなしにヒトに投与できることを表わしている。中に溶解または分散させた活性成分を含む医薬組成物の製造は、当分野ではよく理解されている。典型的なものとして、このような組成分を、滅菌して注射可能とするか、液体溶液または懸濁液で、水溶性または非水溶性として製造する、もしくは、使用前に液体に入れて溶液または懸濁液にするのに適した固形としても製造できる。製造はまた、エマルジョン化で行うこともできる。活性成分は、医薬的に許容でき、活性成分と融和性があり、本願明細書中に記載される治療方法での使用に適した量の賦形剤と混合できる。適した賦形剤は例えば、水，食塩水，ブドウ糖，グリセリン，エタノールなど及びそれらの組合せである。加えて、必要であれば、該組成物は、活性成分の有効性を増大する少量の補助物質、例えば湿化または乳化剤，ｐＨ緩衝剤などを含むことができる。本願発明の医薬組成物には、その中の構成分の、医薬的に許容できる塩が含まれる。医薬的に許容できる塩は、例えば塩酸またはリン酸などの無機酸、もしくは酢酸，酒石酸またはマンデル酸などの有機酸と形成される酸付加塩、もしくは例えばナトリウム，カリウム，アンモニウム，カルシウムまたは水酸化第二鉄の無機塩及びイソプロピルアミン，トリメチルアミン，２−エチルアミノエタノール，ヒスチジン，プロカインなどの有機塩を含む。生理学的に許容できる担体は、当分野でよく知られている。液体担体の例としては、活性成分と水以外、何も物質を含まない、もしくは生理的ｐＨ値のリン酸ナトリウム，生理食塩水またはその両方のリン酸緩衝性食塩水などのバッファを含む滅菌水溶液がある。さらにまた、水性担体は、塩化ナトリウム及びカリウムなどの塩，ブドウ糖，プロピレングリコール，ポリエチレングリコール及び他の溶質と同様に、１以上のバッファ塩を含むことができる。液体組成物はまた、水に加えて及び水を除いて、液相を含むことができる。このような付加的液相の例として、グリセリン，綿実油などの植物油，エチルオレイン酸などの有機エステル及び水−油エマルジョンがある。以下の観察は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープが、癌に対する免疫化剤として使用できることを示す。観察の要約： − ＣＤ８⁺Ｔ細胞を、ＴＡＰ欠損細胞によって認識され、優先的に発現されるエピトープに対して活性化することができる。このことは、Ｂ６マウスを、Ｔ細胞活性化分子で形質導入される同種のＴＡＰ欠損腫瘍細胞（共刺激分子Ｂ７− １で形質導入されたＴＡＰ欠損ＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞。該細胞はＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７ −１と称する。）及びＴＡＰ１-/-マウス（ノックアウトされたＴＡＰ遺伝子の両対立遺伝子）からの非形質転換脾細胞及び樹状細胞で免疫化し、別のＴＡＰ欠損及びＴＡＰ発現の標的細胞上で誘導されるＣＴＬを試験することによって示される（実施例１−３）。 − エピトープの認識は、ＭＨＣクラスＩ発現に依存する。これは、ＭＨＣクラスＩ欠損の種々の組合せを発現する細胞上に誘導されたＣＴＬを試験することによって示される（実施例２）。 − エピトープは、ＴＡＰ欠損げっ歯類腫瘍細胞及びげっ歯類のＴＡＰ欠損非形質転換細胞上で、ＴＡＰ欠損ヒト腫瘍細胞系上においてと同様に認識される（実施例２及び３）。 − 驚くべきことに、同系のＴＡＰ欠損細胞、両ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１腫瘍細胞は、ＴＡＰ１-/-マウスからの非形質転換脾細胞及び樹状細胞と同様に、幾つかの別の同種の、ＴＡＰ発現げっ歯類腫瘍細胞を認識するＴ細胞を誘導するが、同系のＴＡＰ発現非形質転換細胞は殺傷されない（実施例６−８）。 − ＴＡＰ発現腫瘍細胞上で認識されるエピトープは、ＴＡＰ機能に非依存性のエピトープである（実施例６）。 − 同系のＴＡＰ欠損細胞での免疫は、ＴＡＰ欠損及びＴＡＰ発現の両腫瘍細胞のイン・ビボでの腫瘍成長に対して防御することができる（実施例５，９）。結果として、本願発明者は、損傷したＴＡＰ機能に関連する抗原が、幾つかの腫瘍細胞型に局在し、ゆえに腫瘍免疫治療に使用することができる、共通腫瘍抗原になり得ることを実証する。実験において、Ｂ６マウスは、同系のＴＡＰ欠損細胞、例えばＴＡＰ１遺伝子が遺伝子操作によって削除されたＴＡＰ-/-マウスからの細胞で免疫される。これは生きているヒトにおいては未だ可能ではない。しかしながら、ＴＡＰに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理された細胞は、ＴＡＰ機能が、変異細胞系ＲＭＡ−ＳもしくはＴＡＰが遺伝子操作により削除されているマウス（ＴＡＰノックアウトマウス）からの細胞でのように、構造遺伝子での変化によって阻止された細胞と同じ細胞表現型を有している（２２）。この表現型は、例えば２６℃でのインキュベーションによってアップレギュレート（upregulate）することができる、ＭＨＣクラスＩ分子の減少した細胞表面での発現によって、また、外部から加えられた抗原に対する、増大した刺激能によって特徴付けられる。本願発明とこのような研究の重要な違いは、本願発明者が、ＴＡＰ阻害は、ＣＤ８⁺ Ｔ細胞認識に対して、新規の内因性ＭＨＣクラスＩ依存性抗原を付加することを見出したことである。さらに、これらが様々な別の腫瘍細胞でも認識されることが示される。ヒト細胞系Ｔ２Ｋ^bは、誘導されたＣＴＬによって認識されるから、損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープもヒト細胞上で認識される。ヒトにおいて、自己のまたはＭＨＣが合致した細胞は、異なる種類のＴＡＰ阻害剤で処理することができる。これらの細胞は、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対するＣＴＬを誘導するために使用することができる。表示されたデータに従って、これらのＣＴＬは、ＴＡＰ欠損及びＴＡＰ発現のどちらの腫瘍の免疫治療に用いてもよい。文献から、幾つかのウイルスは抗原提示を阻害でき、それゆえ通常のＣＴＬ認識から逃れることができることも知られている（３３，３４）。ゆえに、ＴＡＰ阻害細胞によって誘導されるＣＴＬはまた、ＴＡＰ機能が前記のように阻害されるウイルス感染での治療剤として使用されてもよい。細胞表面でのＭＨＣクラスＩ分子及びＴＡＰ依存性ペプチドの提示は、多くのファクター、ＴＡＰ分子によるＥＲ膜でのペプチドのトランスロケーション（translocation）はその一つであるが、に依存する複合プロセスである。もう一つの重大なステップは、内因性タンパク質のプロテアソームによるサイトゾルの（Cytosoic）プロセッシングである。プロテアソームの構成分を欠く細胞は、ＴＡＰ欠損細胞に対する同様な表現型、即ち抗原性ペプチドの乏しい発生を有する。プロテアソーム阻害剤は、ＭＨＣクラスＩ限定の抗原提示及びＭＨＣクラスＩ分子の集積をブロックし、この集積は外部から加えられるペプチドによって再構成することができる（１，３５−３７）。損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープは、プロテアソームの阻害下でも露呈され、より一般的な語、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連するＭＨＣクラスＩ依存性エピトープと名づけることができるであろう。ゆえに、本願発明はまた、Ｔ細胞のプロテアソーム阻害剤での誘導にも関する。また、他のまだ定義されていないファクターがＭＨＣ／ＴＡＰ依存性ペプチド複合体の形成に必要であり、このファクターの阻害において、損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープを露呈する類似の表現型を生じることは容易に予想されることである。この基礎を成す発見は、機能的なＴＡＰ複合体の非存在下で優先的に認識されるＭＨＣクラスＩ依存性ＣＴＬエピトープの存在を明らかにする。Ｂ７−１形質転換ＴＡＰ欠損ＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞またはＴＡＰ１-/-マウスからの脾細胞で免疫したＢ６細胞は、ＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞及びＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラストの両標的に対する強力なＣＴＬ応答を発生させた。対照的に、ＴＡＰ発現ＲＭＡ− Ｓ．ＴＡＰ２腫瘍細胞及びＢ６ＣｏｎＡブラストは、これらのＣＴＬによる溶解に対して大きな抵抗性を示した。ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１免疫マウスは、ＲＭＡ−Ｓ腫瘍移植の増殖物から防御され、損傷したＴＡＰ機能に関連するこれらのエピトープがイン・ビボで腫瘍拒絶抗原として働くことができることを示している。驚くべきことに、幾つかのＴＡＰ発現腫瘍もまた、非形質転換細胞が抵抗性を示すのに対して、誘導されたＣＴＬに感受性であった。このＣＴＬが、ＴＡＰ発現をまだ有している、即ちＴＡＰ機能をかなりの程度ではあるが完全には損傷していない腫瘍でのＴＡＰ機能に非依存性のエピトープを認識したことが示された。両方ともＴＡＰ発現をする、ＲＭＡ及びＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２の間の感受性の違いはおそらく、ＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２がＴＡＰでの形質導入体であり、そのため元となる腫瘍ＲＭＡでのレベルに比べてＴＡＰを過発現できることによる。記載された実験において、Ｂ６マウスは、同系のＴＡＰ欠損細胞で免疫された。ヒトとの相関は、ＴＡＰ欠損細胞、例えばＴＡＰ阻害剤が導入される自己の細胞を用いてＣＴＬを誘導することである。表示されたデータに従って、これらのＣＴＬはＴＡＰ欠損及びＴＡＰ発現の両腫瘍の免疫治療に用いてもよい。またこれらのＣＴＬは、ＴＡＰ機能が阻害されるウイルス感染において治療剤として使用してもよい（３３，３４）。この研究は、リンパ球を起源とする幾つかの異なった腫瘍細胞を用いて行われた。また、非リンパ球細胞系、Ｈ−２Ｋｂ形質導入肥満細胞腫Ｐ８１５も誘導されたＣＴＬによって殺傷される。本願発明による該薬剤は、優先的にＴＡＰの発現を欠いた腫瘍に対してばかりでなく、ＴＡＰ発現腫瘍に向けて使用されてもよい。該薬剤はまた、例えばヘルペスシンプレックスウイルス感染細胞内など、ＴＡＰ機能がウイルスタンパク質によって阻害される特定のウイルス感染に対して使用されてもよい。図面の簡単な説明図の記号一覧 Figure 1. Ｂ６マウスのＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１細胞での免疫化は、非形質導入ＲＭＡ−Ｓ細胞を認識するＣＤ８⁺ＣＴＬを誘導する。（Ａ及びＢ）Ｂ６マウスをイン・ビボで免疫し、脾細胞はイン・ビトロでＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞（○）またはＢ７−１で形質導入したＲＭＡ−Ｓ細胞（◆）で再刺激され、ＲＭＡ−Ｓ標的細胞に対する細胞障害性について試験された。２つの実験が示され、パネルＡが４／６実験を表わし、パネルＢは残りの実験を表わしている。（Ｃ）前記のように発生させたＣＴＬを、抗ＣＤ８抗体及び補体で（▲）または抗ＣＤ４抗体及び補体で（△）枯渇させ、ＲＭＡ−Ｓ標的細胞に対する細胞障害性について試験された。３つのうち代表的な実験の１つが示される。Ｆｉｇｕｒｅ２．ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１誘導ＣＴＬによるエピトープの認識には、標的細胞において、ＴＡＰ機能の非存在及びＭＨＣクラスＩ分子の存在が必要である。Ｂ６マウスをイン・ビボで免疫し、脾細胞はイン・ビトロでＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１細胞で再刺激され、（Ａ）ＲＭＡ−Ｓ（○）及びＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ−２（●），（Ｂ）Ｂ６からのＣｏｎＡブラスト（□），ＴＡＰ１-/- （■），β₂ｍ-/-（△）及びＴＡＰ１／β₂ｍ-/-マウス（▲）及び（Ｃ）Ｔ２（ ▽）及びＴ２Ｋ^b（▼）細胞に対する細胞障害性について試験された。３つのうち代表的な実験の１つが示される。 Figure 3. ＴＡＰ１-/-脾細胞での免疫化は、ＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラスト及びＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞を認識するＣＴＬを誘導する。Ｂ６マウスをイン・ビボで免疫し、脾細胞はイン・ビトロでＴＡP1-/-マウスからの脾細胞で再刺激され、ＲＭＡ−Ｓ（○），Ｂ６ＣｏｎＡブラスト（□）及びＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラスト（■）に対する細胞障害性について試験された。３つのうち代表的な実験の１つが示される。 Figure 4. Ｂ６マウスのＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１細胞での免疫化は、ＲＭＡ− Ｓ腫瘍細胞の増殖物から防御する。Ｂ６マウスは、ＰＢＳ（◇），ＲＭＡ−Ｓ（ ○）またはＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１（◆）での免疫化後、１０⁶生ＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞が与えられた。Figureは、各実験で免疫化群当り４−６匹のマウスの、４つの別々の実験（ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１に対して３つ）の集積されたデータを表わしている。 Figure 5. ＴＡＰ発現腫瘍ＲＭＡは、ＴＡＰ機能に非依存性のエピトープを発現する。Ｂ６マウスをイン・ビボで免疫し、脾細胞はイン・ビトロでＲＭＡ− Ｓ．Ｂ７−１腫瘍細胞で再刺激され、（Ａ）ＲＭＡ−Ｓ（□），ＲＭＡ（◇），ＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２（○）またはＢ６ＣｏｎＡブラスト（△），（Ｂ）コールド（ｃｏｌｄ）Ｂ６ＣｏｎＡブラスト（□）またはＴＡＰ１−／−ＣｏｎＡブラスト（◇）を指定された割合で添加されるＲＭＡに対する細胞障害性について試験された。 Figure 6. 幾つかのＴＡＰ発現腫瘍細胞系は、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１によって誘導されるＣＴＬによって殺傷され、非形質転換ＴＡＰ発現細胞は抵抗性である。Ｂ６マウスをイン・ビボで免疫し、脾細胞はイン・ビトロでＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１腫瘍細胞で再刺激され、ＲＭＡ−Ｓ（□），ＥＬ−４（◇），ＡＬＣ（○ ），Ｃ４４２５−（△），Ｐ８１５（▽），Ｂ６ＣｏｎＡブラスト（■）及びＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラスト（◆）に対する細胞障害性について試験された。３つのうち代表的な実験の１つが示される。 Figure 7. ＴＡＰ１-/-樹状細胞での免疫化は幾つかのＴＡＰ発現腫瘍細胞を認識するＣＴＬを誘導する。Ｂ６マウスをイン・ビボでＴＡＰ１-/-マウスからの樹状細胞で免疫し、脾細胞はイン・ビトロでＴＡＰ１-/-マウスからの脾細胞で再刺激され、ＲＭＡ−Ｓ（□），ＥＬ−４（◇），ＡＬＣ（○），ＲＭＡ（△ ），Ｐ８１５Ｋ^b（▲），２６Ｅ１Ｎｍｙｃ（▼）及びＢ６ＣｏｎＡブラスト（■）に対する細胞障害性について試験された。２つのうちの１つの実験が示される。 Figure 8. Ｂ６マウスのＲＭＡ−Ａ．Ｂ７−１細胞での免疫化は、幾つかのＴＡＰ発現腫瘍細胞の増殖物から防御される。Ｂ６マウスをイン・ビボでＰＢＳ（◇）またはＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１（□）で免疫し、もしくはＣＤ８-/-マウスをＰＢＳ（△）またはＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１細胞（○）で免疫され、（Ａ）１０⁵ のＲＭＡ腫瘍細胞，（Ｂ）１０²のＥＬ−４腫瘍細胞，（Ｃ）１０³のＡＬＣ腫瘍細胞で与えられた。Figureは、免疫化群当り４−６匹のマウスの１つの実験を表わす。本願発明は、幾つかの非限定的実施例に参照して記載される。ここで使用される全ての技術的及び科学的語は、他に定義されない場合には、当業者に常識的に理解されるのと同じ意味を有するものである。ここで実施される技術は、他に記載がなければ、当業者に既知のものである。ここに記載される刊行物は参考文献に編入されている。材料及び方法マウス：全てのマウスがMicrobiology and Tumour Biology Center（Karolins ka Institute）で飼育、維持された。ＴＡＰ１-/-，β₂−ミクログロブリン（β₂ ｍ）-/-及びＴＡＰ１／β₂ｍ-/-マウスの発生及びキャラクタリゼーションが記載される（３８−４０）。本研究で使用されるＴＡＰ１-/-及びβ₂ｍ-/-マウスは、Ｂ６（Ｃ５７ＢＬ／６）と少なくとも６回交配される。動物の世話は規格化されたガイドラインに従った。細胞系：Ｔ２Ｋ^bは、Ｈ−２Ｋ^b（マウスＭＨＣ対立遺伝子（型））をＴＡＰ１／２欠損変異ヒト細胞系Ｔ２の下位区分に形質導入したものである（４１）。全ての細胞系は、ペニシリン−ストレプトマイシン及び５％ＦＣＳを添加したＲＰＭＩ１６４０培地（ライフ・テクノロジーズ社製，Gaithersburg，MD）において３７℃及び５％ＣＯ₂で成長させた。抗体：Ｂ７−１（ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１）発現は、ＣＴＬＡ−４１ｇ融合タンパク質（４２）（Dr．P．Lane，Basel Institute for Immunology，Basel，スイスからの寄贈）及びＦＩＴＣ（フルオレセイン・イソチオシアネート）−接合抗ヒトＩｇＧ抗体（Dako，Glostrup，Denmark）を用いるか、ビオチニル化抗Ｂ７ −１モノクローナル抗体１６−１０Ａ１（ファーミンジェン，San Diego，CA）及びＮＥＵＴＲＡＬＩＴＥアビジンＦＩＴＣ（Southern Biotechnology Associa tes Inc.，Birmingham，AL）を用いて評価された。コールドの標的競合アッセイ：コールドの標的競合アッセイのために、コールドの（非標識化）ＣｏｎＡブラストを、異なった濃度で、一定数のエフェクター細胞及び５×１０³ ⁵¹Ｃｒ−標識化標的細胞と共にインキュベートした。骨髄由来の樹状細胞での免疫：骨髄由来の樹状細胞は、ＴＡＰ１-/-マウスから、Inabaらのプロトコール（４３）に以下の改変を加えて用いることによって取得された。骨髄細胞は、ＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子）分泌細胞系Ｘ６３（Dr．C．Watts，Univ Dundee，Dundee，UKから寄贈）からの１０％上清及び２０％ＦＣＳを含むダルベッコ修飾イーグル培地で培養された。培養培地は３日毎に入れ換え、細胞を第７日に再プレートした。第８日に、非付着性細胞をイン・ビボ免疫に使用した。１０⁵細胞が腹腔内投与され、脾細胞がイン・ビボ免疫１０日後で再刺激された。実施例Ａ．ＣＤ８⁺Ｔ細胞が、損傷したＴＡＰ機能に関連するＭＨＣクラスＩ依存性エピトープに対して誘導される。ＴＡＰ欠損細胞での免疫は、イン・ビボでの腫瘍成長を防御することができる。実施例１Ｂ７−１（ＣＤ８０）で形質導入したＲＭＡ−Ｓ細胞は、非形質導入ＲＭＡ− Ｓ細胞を認識するＣＴＬを誘導するＢ６マウスを放射線処理（１００グレイ（Ｇｙ））腫瘍細胞１０⁷個の、３週間のｓ．ｃ．注射で免疫した。用いられた腫瘍は、４Ｇｙ放射線処理したマウスでの腹水細胞系として連続的に継代された。腫瘍細胞は、ＴＡＰ−２を欠損したものであり、ＲＭＡ−Ｓ細胞（Ｂ６起源のラッシャー白血球ウイルス誘導マウスＴ細胞リンパ腫ＲＢＬ−５由来（４４））と呼ばれ、Ｂ７−１で形質導入された、即ち２×１０⁶のＲＭＡ−Ｓ細胞は、１０μｌのＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ライフ・テクノロジーズ，Gaithersburg，MD）及びｐＳＲＩｎｅｏプラスミド内にクローンされたげっ歯類Ｂ７−１遺伝子（４５）１μｇ（Bristol Meyers 質導入された細胞は濃度１ｍｇ／ｍｌのＧＥＮＥＴＩＣＩＮ（ライフ・テクノロジーズ，Gaithersburg，MD）で選別された。Ｂ７−１発現ＲＭＡ−Ｓ細胞の１％の最もポジティブな分画が、ＦＡＣＳＶＡＮＴＡＧＥセルソーターでソート（ sort）され、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１とした。この形質導入は、非形質導入ＲＭＡ−Ｓ標的の強力で再現可能な溶解を生じた（Ｆｉｇ．１Ａ及びＢ）。該溶解はエフェクターの抗ＣＤ８抗体（ＣＤ８はＣＴＬ細胞表面のマーカーである）及び補体との前処理によって阻止された（Ｆｉｇ．ＩＣ）。エフェクター集団（population）の補体仲介枯渇が次のように行われた。２０×１０⁶のエフェクター細胞は、１ｍｌＰＢＳ中２００μｇの抗ＣＤ８抗体（１６９．４及び１５６．７．７の混合物）、もしくは１ｍｌＰＢＳ中２００μｇの抗ＣＤ４抗体（ＹＴＳ１９１）で４℃，６０分間インキュベートされた。全ての抗体が、Dr．H．Waldman（University of Cambridge，Cambridge， UK）により寄贈された。細胞を一度洗浄し、ウサギ補体（ペル−フリーズ・バイオロジカルズ（Pel−Freeze Biologicals），Brown Deer，WI）１：８希釈と共に３７℃，７５分インキュベートした。これは、同系のＴＡＰ欠損細胞に対するＣＴＬを発生させることができることを実証している。コントロールの細胞系，ＹＡＣ−１（Ａ／Ｓｎバックグラウンドのモロニーウイルス誘導Ｔ細胞リンパ腫）及びＰ８１５（ＤＢＡ／２バックグラウンドのメチルコラントレン誘導肥満細胞腫）は、ＢＡＬＢ／ｃマウスからのコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）ブラストと同様に、これらのＣＴＬによる溶解に抵抗性であった（データは示さず）。ＣｏｎＡ活性化Ｔ細胞ブラストの発生は以下のようである。脾細胞を、２×１０⁶細胞／ｍｌで４８時間、ペニシリンーストレプトマイシン，１０％ＦＣＳ，１０ｍＭＨＥＰＥＳ（ライフ・テクノロジーズ，Gaithersburg，MD），３×１０−⁵Ｍ２−ＭＥ（２−メルカプトエタノール）（シグマ，St．Louis，MO）及び３μｇ／ｍｌのＣｏｎＡ（シグマ，St．Louis，MO）を添加したα−ＭＥＭ培地中でインキュベートした。標準的な４時間の⁵¹Ｃｒ細胞障害性アッセイに標的として使用する前に、死細胞をＬＹＭＰＨＯＰＲＥＰ密度勾配（ニコメッド（Nycomed），Oslo，Norway）での遠心分離により除去した。ＴＡＰ−２欠損ＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞は、Ｂ６細胞での細胞障害性を誘導するのに効率的ではなかった（Ｆｉｇ．１Ａ及びＢ）。実施例２ＣＴＬ認識は、標的細胞内のＭＨＣクラスＩ分子の存在及びＴＡＰの非存在を必要とするＲＭＡ−ＳのＴＡＰ−２形質導入体（ＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２細胞は、ＲＭＡ− ＳＩＩ５．９細胞としも照会されるが、ＲＭＡ−Ｓのげっ歯類ＴＡＰ−２遺伝子での形質導入によって誘導された（４６）。）実施例１においてと同様に、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１誘導ＣＴＬによる溶解に対して実質的に抵抗性であった（Ｆｉｇ．２Ａ）。これは、該エピトープが、ＴＡＰ発現を欠いている細胞において優先的に認識されることを示していた。これに一致して、ＴＡＰ１-/-マウスからのＣｏｎＡブラストは、溶解に対して高感受性であったが、Ｂ６マウスからのＣｏｎＡブラストは、溶解に対して抵抗性であった。ＴＡＰ１／β₂ｍ-/-（二重変異体）からのＣｏｎＡブラストは、溶解に対して抵抗性であり、エピトープのＣＴＬ認識におけるＭＨＣクラスＩ依存性を示していた（Ｆｉｇ．２Ｂ）。実際、Ｈ−２Ｋ^bで形質導入した、ヒトＴＡＰ欠損細胞系Ｔ２は、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１誘導ＣＴＬによる溶解に感受性であるが、非形質導入Ｔ２細胞は抵抗性であった（Ｆｉｇ．２Ｃ）。まとめると、これらの結果は、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７ −１により誘導された応答の少なくても一部が、ＭＨＣクラスＩ特異的または限定的であり、ＴＡＰ欠損細胞によって排他的とまではいかないが、優先的に発現されるエピトープに対して向けられていることを示していた。少なくとも幾つかのエピトープは、非形質転換及び形質転換の両方のリンパ球細胞上、及びヒト起源もしくはげっ歯類起源の細胞上で認識された。これらのエピトープは、損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープとして照会されるだろう。実施例３ＴＡＰ１-/-脾細胞は、ＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラスト及びＲＭＡ−Ｓ腫瘍細胞を認識するＣＴＬを誘導する前記で示されたように、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１によって誘導されるＣＴＬは、ＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラストを殺傷した。従って、Ｂ６マウスのＴＡＰ１-/- マウスからの脾細胞での免疫は、ＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラスト及びＲＭＡ− Ｓ腫瘍細胞を効率的に溶解する細胞障害性細胞を生じさせるが、Ｂ６ＣｏｎＡブラスト及びＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２は、著しく減少したレベルでしか殺傷されなかった（Ｆｉｇ．３；データは示さず）。ＴＡＰ欠損細胞の殺傷が、ＮＫ（ナチュラルキラー）細胞を枯渇されたマウスからのエフェクターでも認められた（データは示さず）。Ｂ６マウスは、５０×１０⁶の放射線照射（２０Ｇｙ）脾細胞の２週間のｓ．ｃ．注射で免疫した。実施例４損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープによる初期ＣＴＬの発生予めのイン・ビボでの免疫なしの、Ｂ６脾細胞のＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１及びＴＡＰ１-/-脾細胞でのイン・ビトロの刺激を以下のように行った。免疫化または非免疫化マウスからの脾臓の単一細胞サスペンジョン（suspension）を調整した。２０×１０⁶エフェクター細胞を、２×１０⁶の放射線照射した腫瘍細胞もしくは２０×１０⁶の放射線照射した脾細胞と共にインキュベートした。培養を、ペニシリンーストレプトマイシン，１０％ＦＣＳ，３×１０−５Ｍ２−ＭＥ，１ｍＭピルビン酸ナトリウム，０．１ｍＭ非必須アミノ酸類及び２ｍＭＬ−グルタミンを添加した、１０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地で、３７℃及び５％ＣＯ₂ で５日間、保持した。この刺激は、再現性よく、ＲＭＡ−Ｓ及びＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラストの標的に対する細胞障害性応答を起こしたが、ＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２及びＢ６ＣｏｎＡブラストはかなり低い感受性を示した。イン・ビトロの細胞障害性アッセイを以下のように行った。標的細胞を⁵¹Ｃｒで標識し、細胞培養培地に再懸濁した。５×１０³の標的細胞を各ウェルに加え、次にエフェクター細胞を加えた。細胞を３７℃，４時間インキュベートし、上清を回収した。放射活性をファルマシア−ＬＫＢγカウンターで測定し、特異的な溶解を算出した（（エフェクター細胞で放出されたＣＰＭ（counts per minute）−エフェクター細胞なしで放出されたＣＰＭ）／（界面活性剤によって放出されたＣＰＭ−エフェクター細胞なしで放出されたＣＰＭ）×１００）。２０％以上の自然発生的な溶解を伴う結果は破棄された。非形質導入ＲＭＡ−Ｓ細胞を用いるイン・ビトロ刺激は、幾つかの実験においてより低いレベルの溶解を生じた（ＴａｂｌｅＩ；データは示さず）。ＲＭＡ −Ｓ及びＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラストの標的の殺傷は、エフェクターの、抗ＣＤ８抗体及び補体との前処理によって阻止された（データは示さず）。実施例５Ｂ６マウスのＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１での免疫は、ＲＭＡ−Ｓ腫瘍の成長を防御するＴＡＰ欠損腫瘍細胞系に対する防御的な免疫応答を誘導することができるのかどうかに取りかかるために、我々は、Ｂ６マウスをＲＭΛ−Ｓ細胞，ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１細胞またはＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）で免疫した。３週間に一度の免疫化後、マウスに、ＮＫ仲介のＲＭＡ−Ｓ拒絶に打ち勝つことが予め確認された量である、１０⁶のＲＭＡ−Ｓ腫瘍生細胞のｓ．ｃ．で誘発させた（４１）。イン・ビボでの腫瘍成長は、以下のように行った。Ｂ６マウスを前記のように免疫した。最後の免疫の１週間後、マウスに１０⁶の腫瘍生細胞を与え、１週間に一度、触診しながら成長させた。各マウスについて、腫瘍が直径２０ｍｍに達したときに、実験を終了させた。ＰＢＳで免疫したマウスの８９％（１７／１９マウス）が、誘発後３週間、腫瘍を増大し続けた。対照的に、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１で免疫されたマウスの８％（１／１３）でしか腫瘍は増殖しなかった。ＲＭＡ−Ｓで免疫したマウスは、部分的に防御された。このマウスの５５％（１０／１８マウス）が、腫瘍を増大し続けた(Ｆｉｇ．４）ＲＭＡ−Ｓ仲介の腫瘍成長からの防御が、ＮＫ１．１．枯渇マウスにおいても認められた（データは示さず）。Ｂ．損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープは、幾つかのＴＡＰ発現性腫瘍においては見出せるが、非形質転換細胞では見出せない共通の腫瘍抗原である。実施例６ＴＡＰ発現腫瘍細胞ＲＭＡは、損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープに向けられるＣＴＬによって認識される驚くべきことに、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１によって誘導されたＣＴＬは、ＴＡＰ発現、ＲＭＡ−Ｓの親腫瘍細胞，ＲＭＡを再現よく殺傷した。溶解のレベルは、ＴＡＰ形質導入腫瘍細胞系ＲＭＡ−Ｓ．ＴＡＰ２でより著しく高いが、ＴＡＰ欠損細胞ＲＭＡ−Ｓの溶解レベルよりはまだ低かった（Ｆｉｇ．５Ａ）。前記のように、ＴＡＰ発現Ｂ６ＣｏｎＡブラストの殺傷は観察されなかった。Ｂ６及びＴＡＰ-/-マウスからのＣｏｎＡブラストを用いたコールドの標的阻害実験において、後者の方がＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１によって誘導されるＣＴＬによるＲＭＡの溶解をより効率的に阻害し（Ｆｉｇ．５Ｂ）、これらのＣＴＬによるＲＭＡの殺傷の少なくても一部は、ＴＡＰ機能に非依存性のエピトープの認識に依存していることを実証した。ホット（ｈｏｔ）及びコールドの標的をエフェクターなしにインキュベートするコントロール実験は、いずれの標的の、如何なる溶解も起こさなかった（データは示さず）。実施例７幾つかのＴＡＰ発現腫瘍細胞系は、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１によって誘導されるＣＴＬによって殺傷されるが、非形質転換ＴＡＰ発現細胞は抵抗性を示す観察されたＲＭＡの殺傷に対する可能な説明は、幾つかの腫瘍細胞がＴＡＰ機能をかなり欠損している、即ちＴＡＰタンパク質を最適以下のレベルでしか発現していないというものである。損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープが共通抗原であり得るのかどうかを探索するために、我々は、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１誘導ＣＴＬによる殺傷のための、別の因子で形質転換された、他の、Ｈ−２^b発現腫瘍細胞系を試験した。実際、試験された全ての腫瘍細胞，発癌物質誘導（9,10 −ジメチル−1,2−ベンズアントラセン）EL−4（American Type Culture Condit ion，Rockville，MD），放射線照射白血病ウイルス誘導ALC（Dr．Wen Tao，Karo linska Institute，Swedenより寄贈）及び26E−1Nmyc腫瘍細胞（Dr． Santiago Silva，Karolinska Institute，Swedenより寄贈）は、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１誘導ＣＴＬによって殺傷された。２６Ｅ−１Ｎｍｙｃは、ＥＢＮＡ−１及びＮ−ｍｙｃについてトランスジェニックなマウス（ＥＢＮＡ−１及びＮ−ｍｙｃのトランスジェニックマウスを交配させることによって誘導される（４７，４８））からの自然発生のリンパ腫である。ＥＬ−４のβ₂ｍ陰性の変異体は、Ｐ８１５腫瘍細胞（Ｈ−２^d起源の肥満細胞腫で、（American Type Culture Condi tion，Rockville，MDから購入）と同様に、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１誘導ＣＴＬによって殺傷されなかった（Ｆｉｇ．６）。上記に記載された細胞のうち、Ｈ−２^d 陽性のＰ８１５及び２６Ｅ−１Ｎｍｙｃ細胞だけが、Ｂａｌｂ／ｃの脾細胞によって誘導されるＢ６ＣＴＬによって殺傷され（データは示さず）、腫瘍細胞が一般的に、試験された全てのＣＴＬに対して感受性を示さないことが示された。実施例８ＴＡＰ欠損非形質転換細胞は、幾つかのＴＡＰ発現腫瘍細胞系を認識するが、ＴＡＰ発現非形質転換細胞を認識しないＣＴＬを誘導するＴＡＰ１-/-マウスからの脾細胞または培養樹状細胞で免疫したＢ６マウスからのＣＴＬはまた、ＲＭＡ，ΛＬＣ，２６Ｅ−１Ｎｍｙｃ，ＥＬ−４（より低いレベルまで），Ｈ−２Ｋ^b及びＴＡＰ１-/-ＣｏｎＡブラストで形質導入されたＰ８１５細胞を殺傷した。Ｂ６ＣｏｎＡブラストは、これらのＣＴＬによって殺傷されなかった（Ｆｉｇ．７）。これは、非形質転換細胞ではなくて、ＴＡＰ発現腫瘍細胞が損傷したＴＡＰ機能に関連するエピトープを発現するという考えを強化する。溶解のレベルは、おそらくＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１における高レベルのＢ７発現に起因する、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１で観察されるものよりも低かった。実施例９ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１での免疫は、幾つかのＴＡＰ発現腫瘍の成長を防御するＢ６マウスを、ＲＭＡ−Ｓ．Ｂ７−１で免疫した、もしくは免疫しなかった。最後の免疫から１週間後、マウスに１０⁵のＲＭＡ腫瘍細胞または１０²のＥＬ− ４腫瘍細胞または１０³のＡＬＣ腫瘍細胞を与えた。免疫した群においては、マウスの２０％しか腫瘍を増殖させなかったが、免疫しなかった群の全てのマウスが腫瘍を増大し続けた。ＲＭＡ及びＥＬ−４に対して、免疫したマウスで観察された防御は、ＣＤ８を欠損したマウスでは見られず、この防御がＣＤ８⁺ＣＴＬによって仲介されていることを実証した（Ｆｉｇ．８Ａ−Ｃ）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者サンドベルグ，ヨハンスウェーデン国ソルナ，パルクベーゲン 19

Claims

【特許請求の範囲】 1. ＴＡＰ（抗原のプロセッシングに関連したトランスポーター（transporte r））またはプロテアソーム（proteasome）の阻害剤などの、ＭＨＣ提示のための細胞ペプチドプロセッシングを損傷する物質の、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられる免疫学的エフェクター、特にＣＤ８⁺細胞、好ましくは細胞障害性細胞を刺激することにより、癌の成長またはウイルス感染を防止または予防することができる薬剤またはワクチンの製造のための使用。 2. 該物質が、例えばＨＳＶタイプ１のＩＣＰ４７，ＨＳＶタイプ２のＩＥ１２などのＴＡＰ阻害剤、またはＴＡＰ阻害剤をコードする遺伝子もしくは、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡを破壊するリボザイム（ribozy me）などの、ＴＡＰをコードするＲＮＡまたはＤＮＡ配列に少なくとも部分的に相補性があるヌクレオチド配列などのように、ＴＡＰの機能及び／または発現を阻害することを特徴とする、請求項１記載の物質の使用。 3. 該物質が、例えばペプチドアルデヒドＺ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｈ，ラクタシスチン（Lactacystin）などのＴＡＰ阻害剤、またはプロテアソーム阻害剤をコードする遺伝子、もしくは、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡを破壊するリボザイムなどの、プロテアソームをコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に少なくとも部分的に相補性があるヌクレオチド配列などのように、プロテアソームの機能及び／または発現を阻害することを特徴とする、請求項１記載の物質の使用。 4. ＭＨＣクラスＩ分子のペプチドまたは一部などの、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープの、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する抗原またはエピトープに対して向けられた特定のＴ細胞、好ましくはＣＤ８⁺Ｔ細胞を誘導するための、医薬組成物の製造のための使用。 5. 損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、ＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられた、Ｔ細胞受容体またはＴ細胞受容体の一部を含む分子の、医薬組成物を製造するための使用。 6. ＴＡＰ及び／またはプロテアソーム機能を欠失し、ヒトＭＨＣクラスＩ分子が形質移入され得る細胞などの哺乳動物細胞または非哺乳動物細胞から選択される、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現する、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられた免疫学的エフェクター、特にＣＤ８⁺細胞、好ましくは細胞障害性細胞を刺激することによって、癌またはウイルス感染に対する医薬物またはワクチンを製造するために用いられるべき細胞。 7. 樹状細胞などの造血細胞のような哺乳動物細胞，他の自己の細胞、特に癌の原発（origin）組織からの細胞、もしくは昆虫細胞などの非哺乳動物細胞であることを特徴とする、請求項６記載の細胞。 8. 癌またはウイルス感染に対する薬物またはワクチンを製造するために使用される、例えばＣＴＬ，好ましくは損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して活性化されたＣＤ８⁺Ｔリンパ球である、Ｔ細胞などのリンパ球細胞。 9. 哺乳動物細胞内の損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する方法であり、ａ）細胞を、呻乳動物細胞内の細胞ペプチドプロセッシングに関与する物質を阻害する因子、例えば、ＩＣＰ４７などのＴＡＰ阻害またはプロテアソーム阻害因子，アンチセンスヌクレオチドまたはリボザイムで、医薬的に許容できるアジュバントと共に処理する、もしくは、ｂ）該阻害因子をコードする配列を、細胞のＤＮＡに導入する、もしくは、ｃ）ＴＡＰまたはプロテアソームなどの、哺乳動物細胞内の細胞ペプチドプロセッシングに関与する物質をコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に少なくとも部分的に相補性があるヌクレオチド配列、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＲＮＡを破壊するリボザイムを、細胞のＤＮＡに導入する、もしくは、ｄ）細胞を、酵素的なプロセスとアンチセンスの塩基対の特異性とを結び付けるリボザイムなどの、適当なリボザイムで処理する、及びｅ）ＴＡＰ及び／またはプロテアソーム機能を欠失し、ヒトＭＨＣクラスＩ分子が形質導入されている細胞、例えば昆虫細胞などの非哺乳動物細胞が用いられる場合は、ヒトＭＨＣクラスＩ分子での細胞のトランスフェクション、及び、ｆ）細胞を、Ｃｓ¹³⁷などからのγ放射線照射などを適当な量で放射線照射してもよい、ことを特徴とする該方法。 10. 細胞内の損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する方法において使用するためのキットであって、ＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤または、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムなどの、プロテアソームまたはＴＡＰをコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に少なくとも部分的に相補性があるヌクレオチド配列などの、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する物質の活性な用量からなり、可能であればまた、例えばサイトカイン類及び、Ｂ７などの、共刺激性分子に対する遺伝子，金粒子及びリポソームなどのアジュバントからなることを特徴とする該キット。 11．ＴＡＰまたはプロテアソームの阻害剤または、プロテアソームまたはＴＡＰ阻害剤をコードする遺伝子または、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはリボザイムなどの、プロテアソームまたはＴＡＰをコードするｍＲＮＡまたはＤＮＡ配列に少なくとも部分的に相補性があるヌクレオチド配列などの、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを誘導する物質の医薬的に有効な量と、サイトカイン類及び共刺激性分子などの、医薬的に許容できるアジュバントからなる、医薬組成物またはワクチン。 12. 癌及びウイルス感染の治療，予防及び診断のための方法であって、ａ）ヒトの体内から取り出した細胞を、ＴＡＰ阻害剤などの、細胞ペプチドプロセッシングの阻害剤で処理し、可能であれば医薬的に許容できるアジュバントと共に体内に再投与する、もしくは、ｂ）損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを発現する細胞を、可能であれば医薬的に許容できるアジュバントと共に体内に投与する、もしくは、ｃ）自己のＴ細胞を、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対してイン・ビトロで刺激して、体内に投与する、もしくは、ｄ）ＴＡＰ阻害剤などの、ＭＨＣクラスＩ提示のための細胞ペプチドプロセッシングの阻害剤を、医薬的に許容できるアジュバントと共に体内に投与する、もしくは、ｅ）ペプチドまたはＭＨＣクラスＩ複合体またはその一部などの、損傷した細胞ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープを体内に投与する、もしくは、ｆ）損傷した細胞内ペプチドプロセッシングに関連する、特にＭＨＣクラスＩ依存性の抗原またはエピトープに対して向けられたＴ細胞受容体またはその一部を体内に投与する、ことを特徴とする該方法。