JP2001506512A

JP2001506512A - 多孔性の血管グラフト用の改良された生物学的に再吸収可能な密閉剤

Info

Publication number: JP2001506512A
Application number: JP51388698A
Authority: JP
Inventors: ジェイレンツ，デヴィッド; エルルーミス，ゲリー; モローニ，アントニオ; ドゥプレカー，ジェニファー
Original assignee: ミードックスメディカルズインコーポレーテッド
Priority date: 1996-09-13
Filing date: 1997-09-11
Publication date: 2001-05-22
Also published as: DE69728054T2; US20060159720A1; DE69728054D1; EP0941131B1; WO1998010804A1; EP0941131A1; US5851229A; AU4414097A

Abstract

(57)【要約】移植可能な柔軟な組織プロテーゼにしみ込ませるために用いられる生物学的再吸収可能な密閉剤組成物が、ヒドロゲルまたはゾル−ゲルを形成するために少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含む。この密閉剤組成物は、任意に生物活性剤を含んでもよく、かつ／もしくは、基質表面にこれらの組成物を適用した後に架橋結合してもよい。

Description

【発明の詳細な説明】多孔性の血管グラフト用の改良された生物学的に再吸収可能な密閉剤発明の分野本発明は、概して多孔性の移植可能な器具用の密閉剤に関する。特に、本発明は、グラフトをブロッドタイト(blood-tight)にするポリサッカリドのヒドロゲルまたはゾル−ゲル混合物をしみ込ませた多孔性の移植可能な血管グラフトに向けられている。本発明の別の態様は、このようなグラフトの間隙内にしみ込ませた治療試薬の定時放出輸送を提供することに向けられている。これらのグラフトを提供する方法も与えられている。発明の背景一般的に、組織成長(tissue ingrowth)に適応させると同時に、流体を運ぶように設計された移植可能な管状器具が液密かつ非トロンボゲン形成性であることが重要である。これは特に、移植可能な血管プロテーゼにおいて明らかである。組織成長に適応させるために、このようなプロテーゼは多孔性でもよい。しかしながら、ほとんどの布地の多孔性エンドプロテーゼおよびグラフトは、本来ブロッドタイトではなく、凝血または生物学的水密被覆で被覆されなければ、グラフトの壁を通して実質的な出血が起こる。従って、ブロッドタイト表面を維持することと、血管グラフトへの組織成長の促進のバランスをとらなければならない。特に、患者の体に血管グラフトを最初に導入する際に、患者の血液の損失を低減するために、多孔性材料からなる血管グラフトが実質的にブロッドタイトでなければならない。しかしながら、グラフト部位が治癒するにつれ、組織成長が促進されなければならない。しかして、ブロッドタイトかつ組織成長を促進する、グラフト材料が望まれている。しかしながら、このような特徴は、グラフトが二つの異なる物理的構造を備える必要がある。例えば、組織成長および回復を促進する血管グラフト材料は、細胞および栄養分をグラフトに移動させるに十分多孔性でなければならない。このような細胞成長は、グラフトの長期開通性にきわめて重要である。このような血管グラフトを形成する材料として、当該技術分野において、ナイロン、ポリエステル、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリアクリロニトリル等が知られている。体の中でのトロンボゲン形成性が低いために、ＰＴＦＥおよびポリエステルは今日広く用いられている。特に、ポリエチレンテレフタラートが、織物血管グラフトおよびエンドプロテーゼを作製する上で最も一般的に用いられている。外科医にとって、このようなグラフト材料の多孔性は、考慮するに必須のファクターである。特に、このような材料の多孔性は、長期的開通性およびグラフトの全体的な性能に寄与する。さらに、グラフト材料の多孔性が増大するにつれ、通常、取り扱い易さ、吻合および柔軟性が増大する。また、グラフト材料の多孔性が増大するにつれ、回復工程、すなわち結合組織細胞がグラフトに浸潤する能力も増大する。しかしながら、このような多孔性グラフト材料の組織成長等を促進する能力は高価なものとなる。未処理では、このようなグラフトはブロッドタイトではない。しかして、グラフトが移植されたときに、グラフト表面の孔を介した出血は重要な問題である。これに代わる方法が、血管グラフトの漏出を介した血液損失を低減するために開発された。例えば、孔が少ない材料が血管グラフトとして用いられた。しかしながら、このような材料は、管腔の内皮形成(endothelializatio n)およびグラフトへの組織成長を支援することができない。従って、このような布地グラフト材料は、開通性が短命であるために、実用的ではない。これに代えて、体にグラフトを導入する前に、多孔性血管グラフト材料が血液で予備処理された。このような予備処理は、グラフトを介して、患者に血液の重大な損失が起こる前に血液を凝血させることによって手術中の出血を低減する凝固因子を導入する。一般的に、グラフトの表面を予め凝血させるために、これらのグラフトが患者の新鮮な血液に浸され、あるいは流される。時間がかかり、患者から血液を取り出す必要があり、かつ患者からの血液の損失量を増大することから、これらの方法は制限される。しかして、この方法は、患者が大量の血液を失っていたり、時間が臨界的なファクターであるような緊急医療的状況においては利用できない。さらに、このような方法は、ヘパリンまたはワルファリンのような抗凝固薬を投与されている患者には有効に用いられない。初期においてブロッドタイトであり、次いで回復および移植されたグラフトへの組織成長を容易にするために徐々に多孔性になる材料の開発に、膨大な量の研究が集中してきた。この調査の多くは、このようなグラフト材料をブロッドタイトにするが、経時的に生分解されかつグラフトへの組織成長を促進する細胞外マトリックス（ＥＣＭ）タンパクを用いて、多孔性グラフト材料の表面を被覆することに注目した。例えば、コラーゲン、アルブミン、ゼラチン、エラスチンおよびフィブリンが多孔性血管グラフト用の生分解性密閉剤として用いられてきた。さらに、ゲル、ヒドロゲルおよびゾル−ゲルも、生体適合性、生分解性材料として記載されている。ゲルは液体と固体状態の中間の特性を備えた物質である。ゲルは弾性的に変形および回復し、高圧で流れる。ゲルは三次元ネットワーク構造を備え、高度に多孔性である。従って、多くのゲルが非常に高い比率の固体中液体量を含む。このネットワーク構造は永久的または一時的であり、重合性分子をベースとし、基本的にコロイド状溶液から形成される。しかして、ヒドロゲルはゲルとして記載されてもよく、その液体成分は水である。対照的に、ゾルはコロイド状溶液、すなわち液体中におけるコロイド状固体粒子の懸濁液である。La rouse Directory of Science and Technology 470，543(1995)参照。例として、Bassらに付与された米国特許第５２０９７７６号（’７７６号特許）は、分かれた組織を結合するため、あるいは表面に水密シールを形成するために組織またはプロテーゼ材料の表面を被覆するための組成物を開示している。’ ７７６号特許の組成物は、好ましくはコラーゲンとされる第１のタンパク成分、およびプロテオグリカン、サッカリドまたはポリアルコールとされる第２のタンパク支持成分を含む。この組成物において、第２の成分は、第１の成分と共にマトリックス、ゾルまたはゲルを形成することにより第１の成分を支持するのに適している。しかして、形成されたマトリックス、ゾルまたはゲルは、タンパク成分とタンパク、サッカリドまたはポリアルコールとされるタンパク支持成分を含むハイブリツド組成物である。このタンパク成分が密閉または結合機能を備える一方で、タンパク支持成分はタンパクの支持マトリックスを形成する。他の例では、Czechらに付与された米国特許第５１３５７５５号および第５３３６５０１号の両方が、創傷分泌物吸収剤として用いられるか、あるいは創傷分泌物を吸収するための創傷用包帯に取り込まれる、ヒドロゲルを開示している。これらの発明のヒドロゲル組成物は、２０−７０％のグリセロール等の少なくとも一つの多価アルコール、１０−３５％の少なくとも一つの天然バイオポリマー増粘剤、０．０５−１０％の架橋試薬および０−５０％の水または生理食塩水を含む。これらの特許に記載されたゲルまたはヒドロゲルは、ゼラチンのみ、またはアルキン酸塩等のポリサッカリドと組み合わせたゼラチンとされる。しかして、これらの特許のヒドロゲルは、タンパクヒドロゲルまたはタンパク−ポリサッカリドハイブリッドヒドロゲルである。ゼラチンに加えて、コラーゲンおよびペクチンもこれらの特許のヒドロゲル材料において好ましいタンパク成分である。いずれの特許も、密封機能を付与するために慣例的なタンパク材料を必要とし、ヒドロゲルはタンパクのキャリアーとして用いられている。しかしながら、BassおよびCzechの特許に記載された上記ハイブリッド被覆組成物は、容易に製造することができない。例えば、ハイブリッド被覆組成物のタンパク成分は、ヒドロゲル被覆材料（Czechでは創傷用包帯、Bassでは移植可能器具）の製造、滅菌または貯蔵中に変性し得る。変性すると、これらのハイブリッド被覆組成物は機能する能力を失い得る。このようなハイブリッド被覆組成物に係る別の問題は、基質材料、例えば創傷用包帯または移植可能な器具の表面が、例えば血管グラフトの表面にこれらの組成物を有効に結合するために、例えば血漿で予備処理されなければならないことである。さらに、このようなハイブリッド組成物は、基質材料の表面に被覆として堆積される。このような表面被覆は、体の分解酵素に容易に接近でき、しかして迅速に分解されるものに限定される。このようなタンパクまたはタンパクハイブリッド被覆の問題を軽減することを試みて、Leeらに付与された米国特許第５４１５６１９号（’６１９号特許）は、表面にポリサッカリドまたはポリサッカリド誘導体をしみ込ませることによって多孔性血管グラフトをブロッドタイトにする方法を記載している。従って、’ ６１９号特許は、グラフトの表面にポリサッカリドを物理的に吸着もしくは化学的に結合させることを意味するように用語“しみ込ませる”を用いている。この方法は、例えば血管グラフトの製造、滅菌および貯蔵中のタンパク変性の問題を軽減するが、表面にポリサッカリド被覆を結合するために、このようなグラフトの表面は、化学的または物理的に変性されなければならない。例えば、’６１９号特許は、ポリサッカリド溶液をグラフト表面にしみ込ませる前に、硫酸または過塩素酸溶液を用いて多孔性血管グラフトの表面を化学的に酸化することを記載している。またこの代わりに、’６１９号特許は、プラズマまたはコロナ放電を用いて予備処理することによりこのようなグラフトの表面を物理的に変性することを記載している。いずれの場合においても、’６１９号特許に記載された方法は、血管グラフトの表面を化学的または物理的に予備処理することによって、このような方法にさらなる不必要な工程を追加する。従って、体に導入する際に多孔性プロテーゼをブロッドタイトにし、組織成長が促進されるように経時的に生物学的再吸収可能である、血管グラフトのような多孔性の移植可能なプロテーゼ用の生物学的再吸収可能な密閉剤を提供することが望まれている。特に、グラフトをブロッドタイトにし、かつ密閉剤の導入の前にグラフトの表面の物理的または化学的修飾を必要としない、多孔性血管グラフト用の改良された生物学的再吸収可能な密閉剤を提供することが望まれている。発明の概要本発明によれば、移植可能なプロテーゼ用の改良された生物学的再吸収可能な密閉剤組成物が提供される。特に、生物学再吸収可能な密閉剤組成物は、移植可能なプロテーゼに実質的なブロッドタイトバリアを付与するヒドロゲルを形成する少なくとも二つのポリサッカリドの組合せを含む。好ましくは、このプロテーゼは、血管グラフトまたはエンドプロテーゼのような血管系において用いられる柔軟な組織プロテーゼである。他の管状プロテーゼまたは外科用メッシュまたはヘルニアプラグのような柔軟な組織プロテーゼも考慮される。移植可能なプロテーゼは、好ましくは、管状プロテーゼ状に織られたまたは編まれた合成布地材料からなる。使用可能な材料は、例えばポリエステル、ポリ（テトラフルオロエチレン）、ナイロン、ポリプロピレン、ポリウレタンおよびポリアクリロニトリル等を含む。編まれたまたは織られた布地ファブリックに加えて、プロテーゼは、例えば発泡ポリ（テトラフルオロエチレン）（ｅＰＦＴＥ）を用いて、押し出しまたは発泡技術から形成されてもよい。これらの材料の混成、その他が考慮されてもよい。本発明において、使用可能なポリサッカリドは、アルギン、カルボキシメチルセルロース、カラゲナンタイプＩ、カラゲナンタイプＩI、カラゲナンタイプIII およびカラゲナンタイプIVを含むカラゲナン、ファーセララン（furcellaran）、アガロース、グアー、ローカストビーンガム（Iocust bean gum）、アラビアガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ペクチン、部分的にアセチル基が除かれたキトサン、アミロースおよびアミロペクチンを含むデンプンおよびデンプン誘導体、キサンタン、カゼイン、ポリリジン、ヒアルロン酸およびその誘導体、ヘパリン、これらの塩、並びにこれらの混合物を含む。上述したように、本発明は、ヒドロゲルを形成するために、少なくとも二つのポリサッカリド、またはポリサッカリドおよびタンパクの組合せを必要とする。膨大な組合せのポリサッカリド、例えばアルギン酸／ペクチン、アルギン酸／キトサン、カラゲナンタイプＩ／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプＩ／ペクチン、カラゲナンタイプII／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプII／ペクチン、カラゲナンタイプII／グァーガム、カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガム、ローカストビーンガム／キサンタン、グアーガム／ローカストビーンガム、グアーガム／キサンタン、および寒天／グアーガムが、本発明において用いられる。ヒドロゲルを形成するポリサッカリドの好ましい組合せは、カラゲナンタイプIIとＣａ⁺²イオンおよび／またはローカストビーンガム、またはローカストビーンガムを含む、または含まないカラゲナンタイプIV、Ｃａ⁺²を含む。他の好ましい組合せは、精製されたアガロース／グアーガム、およびキトサン／グアーガムを含む。天然のポリサッカリドが絶えず単離および特徴付けされており、新規のポリサッカリドが分子生物学技術により生産されうるので、ポリサッカリドのような別のものが本発明において用いられる。本発明は、ヒドロゲルに治療または生物活性試薬を取り込むことをも考慮する。このように、ヒドロゲルは、ヒドロゲルが生分解または生物学的に再吸収されるにつれ、治療試薬を調節的に放出する。一つの特に使用できるクラスの治療試薬は抗凝血剤である。ここで用いるように、抗凝血剤はこの目的のために使用されるあらゆる試薬を含んでもよいが、現在使用されることがわかっているものは、ヘパリン、硫酸化ポリサッカリド、プロスタグランジン、ウロキナーゼ、ヒルジン、ストレプトキナーゼ、これらの薬学的な塩およびこれらの混合物である。ポリサッカリドであり、容易にヒドロゲル中に取り込まれるから、ヘパリンが好ましい。さらに、ヘパリン／キトサンの組合せも、表２で示されているように組み合わせた場合にゲルを形成することが知られている。本発明において、ポリサッカリドの組合せから形成されたヒドロゲルは、より隙間のないバリア、および多孔性器具の周りの密閉、例えば多孔性器具の間隙を介して密閉するために、架橋結合されてもよい。本発明の別の実施態様において、少なくとも二つのポリサッカリドからなるヒドロゲルマトリックスと、そのマトリックス内に取り込まれた抗凝血剤を含む、制御された放出材料が提供される。この材料は、多孔性の移植可能な器具の内表面および外表面の間の間隙内にしみ込む。本発明のさらに別の態様では、移植可能な多孔性の管腔の基質用の密閉剤が提供される。本発明のこの態様では、間に間隙がある内表面と外表面を備えた多孔性基質が提供される。この態様の密閉剤は、少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含むヒドロゲルを含む。この密封剤は多孔性基質の間隙を満たし、多孔性材料の内表面と外表面との間に実質的な液密バリアを付与する。この密閉剤は、少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含むゾル−ゲルであってもよい。本発明の別の態様において、プロテーゼは、グリセロール−水溶液中に分散された種子ガム(seed gum)ポリサッカリドおよび海藻抽出ポリサッカリドの混合物によって定義されるヒドロゲルがしみ込んだ管状部材を含む。あるいは、このプロテーゼは、グリセロール−水溶液中に分散された直鎖状ポリサッカリド成分および分枝状ポリサッカリド成分の混合物によって定義されるヒドロゲルがしみ込んだ管状部材を含む。移植可能な多孔性管状基質を液密にする方法も提供される。この方法は、間に間隙を備えた内表面および外表面を備えた移植可能な多孔性基質を提供すること；少なくとも二つのポリサッカリドを含むヒドロゲルまたはゾル−ゲルを提供すること；および、基質を液密にするようにこのヒドロゲルまたはゾル−ゲルを前記多孔性基質にしみ込ませることを含む。本発明のさらなる態様において、水性媒体中で混合された場合にヒドロゲルを形成する少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含む、柔軟な組織プロテーゼに使用される生物学的再吸収可能な密閉剤組成物が提供される。このヒドロゲルは、密閉剤としてプロテーゼに適用された場合に液密密閉を形成する。少なくとも二つのポリサッカリドの組合せに加えて、移植後に密閉剤が徐々に生物分解され組織成長が増大するにつれ、体の中にゆっくりと放出される治療または生物活性剤をさらに含む、制御された放出、生物学的再吸収が可能な密閉剤組成物も提供される。上記密閉剤組成物および該組成物を含むプロテーゼを調製および使用する方法も開示されている。発明の詳細な説明本発明は多くの種々の形態の実施態様によって満たされるものであるが、本願開示は、発明原理の模範として考慮され、例示および記載された実施態様に本発明を限定することを意図したものではないという理解のもとに、ここには発明の詳細かつ好ましい実施態様が記載されている。本発明は、密閉剤組成物と、この組成物がしみ込んだ移植可能な柔軟な組織プロテーゼに関する。特に、本発明は、少なくとも二つのポリサッカリドの組合せを含むヒドロゲルまたはゾル−ゲル密閉剤組成物に関する。本発明の密閉剤組成物は、実質的に液密、すなわちブロッドタイトシールを多孔性基質表面、特に血管グラフト上のような基質の管腔表面に形成する。これらの密閉剤組成物は、回復および内皮細胞の成長をさせるために経時的に生分解する。本発明の移植可能な柔軟な組織プロテーゼは、ヒドロゲルまたはゾル−ゲルが有効に付着するような、合成または天然ポリマー材料を含むあらゆる多孔性材料から形成されうる。しかして、このような多孔性材料は、ポリエステル、発泡ポリ（テトラフルオロエチレン）、ナイロン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリアクリロニトリル、ポリオレフィン、ポリカーポナート、高度に架橋結合したコラーゲン、ポリラクチド、ポリグリコシドおよびこれらの組合せを含んでもよい。これらの材料から形成された、織物もしくは編み物グラフトも本発明において用いられる。さらに、ベロアまたはダブルベロアグラフトも用いられる。本発明の目的では、“ヒドロゲル”および“ヒドロゲルマトリックス”の両方が、溶解することなく水中で膨張し、かつその構造中に顕著な量の水を保持する重合性材料を指す。このような材料は、液体と固体状態の中間の特性を備えている。また、ヒドロゲルは弾性的に変形および回復し、高圧でしばしば流れる。しかして、本発明の目的では、ヒドロゲルが水で膨張され、親水性ポリマーの三次元ネットワークを備える。対照的に、ゾル−ゲルは、構造の一部がある程度水溶性であるヒドロゲルである。しかして、ゾル−ゲルシステムにおいて、溶解速度は低いが、材料の一部は水で抽出可能である。従って、本発明の目的では、“密閉剤”または“密閉剤マトリックス”の両方が、ここで記載したようなヒドロゲルまたはゾル−ゲルを指す。これらの密閉剤材料は、その成分を架橋結合することによってより安定に調製することができる。本発明に係るこの密閉材料は、いくつかの方法で架橋結合されうる。例えば、マトリックス中の一つ以上のポリサッカリド間の共有結合の形成は一般的に不可逆な架橋結合を形成しうる。これとは別に、本発明に係る密閉剤マトリックスは、少なくとも一つのポリサッカリドにおけるイオン結合の形成によって架橋結合されうる。さらに別の例では、架橋結合が、例えば水素結合および特定のファン・デル・ワールスカのような、より弱い分子間相互作用を介して本発明に係る密閉材マトリックス中に形成されてもよい。本発明における架橋結合のさらに別の例では、半晶質の親水性ポリマーが、このポリマーの非晶質領域が水を吸収し、かつ水を吸収しない晶質領域（クリスタライト）が物理的架橋結合として作用する場合に、ヒドロゲルを形成する。これらの密開剤架橋結合メカニズムは、分子内または分子間のいずれであってもよい。さらに、このような相互作用は、二つ以上のポリサッカリド、または一つのポリサッカリドと一つ以上の別の親水性ポリマーとの間に生じてもよい。種々の条件下で組み合わせられたポリサッカリドの特定の組合せが、生理学的条件下で安定であり、適切な可塑剤と適合し、かつ移植可能なグラフトをブロッドタイトにするのに適したゲル材料を形成するか否かを予想することは困難である。しかして、以下の表１は、本発明に従って調製されたいくつかのポリサッカリドの組合せの模範例である。これらの模範的なポリサッカリドは、ｐＨ７．２の生理学的リン酸塩バッファーにおいて安定なゲルを形成する能力について評価された。従って、本発明において、少なくとも二つのポリサッカリドが、上述のような密閉剤マトリックスを定義するために用いられなければならない。特に、ポリサッカリドに関する以下のリストがここでは用いられる：ヘパリン、アルギン、カルボキシメチルセルロース、カラゲナンタイプＩ、カラゲナンタイプII、カラゲナンタイプIIIおよびカラゲナンタイプIVを含むカラゲナン、ファーセララン、アガロース、グアー、ローカストビーンガム、アラビアガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ペクチン、キトサン、アミロースおよびアミロペクチンを含むデンプンおよびデンプン誘導体、キサンタン、これらの塩、並びにこれらの混合物を含む。あるタンパクおよびポリアミノ酸も使用できる。上記リストは例証であり、発明の範囲を限定するものではない。また、可塑剤および柔軟剤が、この密閉剤マトリックス中に用いられてもよい。このような試薬の例は、ポリプロピレングリコールのようなグリセロール、ソルビトールおよびジオール；モノエチルクエン酸のような部分的にエステル化されたクエン酸；および乳酸エチルのような乳酸エステルを含み、本発明の密閉剤マトリックスに用いられる。本発明において、約０％〜約７０％の可塑剤が用いられる。しかしながら、特定の密閉剤における可塑剤の濃度を監視することが重要である。可塑剤があまりに多いと、密閉剤がしみ込んだグラフト材料に漏出を引き起こしうる。このような可塑剤を上述した適切な濃度で用いた場合には、しみ込んだ移植可能な材料の柔軟性およびしなやかさを増大することから、有益である。以下の表２は、本発明の模範的なポリサッカリドのいくつかの関連する化学的特性およびゲル形成能をまとめたものである。上述したように、本発明は、密閉剤マトリックスの成分として少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて用いる。このようなポリサッカリドの対の組合せは、アルギン酸／ペクチン、アルギン酸／キトサン、カラケナンタイプＩ／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプＩ／ペクチン、カラゲナンタイプII／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプII／ペクチン、カラゲナンタイプII／グアーガム、カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガム、ローカストビーンガム／キサンタン、グアーガム／ローカストビーンガム、グアーガム／キサンタン、アルギン酸／ポリリジン、寒天／グアーガム、タンパクおよびポリアミノ酸を含むが、以下の組合せに限定されない。イオン、特にＫ⁺、Ｃａ⁺²、およびＭ⁺²が、ゲルを形成するためにあるポリサッカリドと共同的に相互作用することが知られている。従って、密閉剤がしみ込んだグラフトは、ゲルの強度を増加するためにこのようなイオンの溶液と接触されてもよい。本発明において、密閉剤がしみ込んだグラフトを、例えばＫ⁺、Ｃａ⁺²、およびＭ⁺²イオンのようなイオン溶液を用いて、例えば少しだけ浸すか、浸すか、噴霧するか、あるいはそれ以外の慣例的な方法によって接触させるが、他のイオンも使用できる。従って、密閉剤マトリックスは、例えばカラゲナンタイプII、Ｃａ⁺²イオンおよびローカストビーンガムもしくはカラゲナンタイプIV 、Ｃａ⁺²イオンおよびローカストビーンガムを含んでもよい。本発明の他の実施態様では、抗凝血剤または他の生物活性試薬が密閉在中に導入されてもよい。このように、密閉剤のポリサッカリドマトリックスが生分解するにつれ、生物学的活性試薬、すなわち抗凝血試薬が経時的に調節可能に放出される。しかして、抗凝血試薬は、例えば多孔性血管グラフトの壁を介した血液漏れを防止する密閉剤の能力を増大させる。本発明において、抗凝血剤はプロスタグランジン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、硫酸化ポリサッカリド、アルブミン、これらの薬学的塩並びにこれらの混合物であってもよい。他の適切な抗凝血剤を用いてもよい。好ましくは、抗凝血剤はヘパリンもしくはその薬学的塩である。密閉マトリックスのタイプおよび組成は変更可能であり、多孔性の移植可能な材料のタイプおよび構造も変更可能である。例えば、一般的な合成グラフトは二つのカテゴリー、すなわち織物グラフトまたは押し出しグラフトの一つに入る。織物グラフトは例えばDacronポリエステルのような押し出し繊維から製造される。このような繊維は織り糸とされ、織るかまたは編むことによって管状構造に形成される。これとは別に、押し出しグラフトは、微小多孔性チューブを産生するために押しだされかつ機械的に引き延ばされた、例えばポリテトラフルオロエチレンのようなポリマーから製造された非織物グラフトである。一般的に、非被覆織物グラフトは、非織物押し出しグラフトよりも水の浸透性が高い。従って、グラフトの製造方法は、その多孔性に影響を与える。本発明では、“多孔”または“多孔性”とは、例えば血管グラフトの壁の間隙の相対量を指す。織物グラフトの織り方または編み方の堅固、押し出しグラフトの引き延ばしの度合いがその多孔性に影響する。織物グラフトの多孔性に影響を与える別のファクターは、使用された織り糸のタイプおよび使用された織物または編み物の外形のタイプを含む。例えば、さらに織り糸が付加された織り込まれた織物からなるグラフト材料は、よられた、もしくはけば立てられた質感を織物に付与し、ベロア（片面）またはダブルベロア（両面）と呼ばれる。このようなベロアグラフトは、より多くの表面積を備え、かつ予凝血が容易であることから、伝統的に移植後に出血しそうもなかった。対照的に、発泡ＰＴＦＥ（ｅＰＴＦＥ）から形成されたグラフトは、引き延ばされた原繊維が相互に結合した、空間形成節によって定められた繊維質構造を備える。原繊維によって橋渡しされた節表面間の空間は節間距離（internodal dis tance（ＩＮＤ））として定義される。ｅＰＴＦＥ血管グラフトの多孔性は、グラフトの微小多孔性構造のＩＮＤを変化させることによって調節される。所定の構造内のＩＮＤの増大は、内表面に沿って、増強された組織成長および内皮形成を引き起こす。この組織成長および内皮形成は、安定性を促進し、径方向強度を増大し、グラフトの開通性を増大する。従って、本発明の密閉剤と関連して、織物または押し出し材料の両方を用いることができる。グラフト材料の璧は、ポリサッカリドヒドロゲルまたはゾル−ゲルがその間隙にしみ込むことができるように十分に多孔性であることが重要である。本発明では、“しみ込む”とは、例えば血管グラフトの内表面および外表面間の孔または空間等の間隙を、このグラフトを実質的にブロッドタイトにするように、部分的または完全に満たすことを意味する。本発明では、比多孔度は、Wesolowski Porosityテスターを用いて測定される。この装置を用いて、グラフトの一端を自由にして、この自由端を、グラフトが垂直に自由にぶら下がるように、プロモーターのバルブに取り付ける。次に、水を１分間グラフトに流し、グラフトから抜け出した全ての水を回収し測定する。グラフトの比多孔度を以下の式に従って計算する。上式中、Ｖはｍｌ／分で表された回収された水の量であり、Ａはｃｍ²で表された水に曝されたグラフトの表面積である。≦１．０ｍｌ／分／ｃｍ²の比多孔度が移植可能な血管グラフトにとって許容できる漏出量であると考えられる。従って、本発明の目的において、実質的にブロッドタイトなグラフトとは、本発明の密閉剤をしみ込ませた後の比多孔度が、≦１．０ｍｌ／分／ｃｍ²であるグラフトを意味する。本発明のさらに別の実施態様では、調節された放出材料内に分散された抗凝血剤または他の生物学的活性剤が、多孔性の移植可能な器具の内および外表面間の間隙内にしみ込んでいる。調節された放出材料は、上述したような少なくとも二つのポリサッカリドを含むヒドロゲルマトリックスである。しかして、体に存在する天然酵素によって生分解されるにつれ、抗凝血剤が経時的にゆっくりと放出される。従って、例えば血管グラフトに実質的にブロッドタイトな密閉を付与することに加えて、ヒドロゲルマトリックスは、生分解するにつれ、抗凝血剤または生物学的活性剤が調節可能に放出される支持体構造をも提供する。このように、抗凝血剤の調節された放出は、ヒドロゲルによって形成された物理的バリアを通り抜けた血液を凝血させることにより患者の血液損失を防止する、ヒドロゲル組成物の能力を増大させる。 Kinam Parkら、Biodegradable Hydrogels For Drug Delivery(Technomic Publ i Shing Co.1993)によれば、ヒドロゲルシステムにおける薬剤放出は、種々の製剤の変量および／またはシステムの成分の生理的化学特性に影響される。しかして、ポリマー分解に加えて、抗凝血剤の放出は、水の含量、架橋結合の程度、結晶度および相分離のようなポリマーの物理的パラメータ−によって影響される。さらに、抗凝血剤の生理的特徴、特にポリマーおよび水性媒体におけるその溶解性およびヒドロゲルに導入された薬剤の量も、薬剤−ポリマー混成物の放出特性に重要な効果を与えることが予想される。従って、抗凝血剤の放出速度は、上記変量に従って変化するであろう。しかしながら、適切な放出速度を得ることは、当業者がこれらのパラメーターを調節することによって達成される。多孔性基質の間隙を満たす、またはしみ込ませるためのあらゆる慣例的方法を用いることができる。例えば、本発明の密閉剤混合物がガラス容器に移され、多孔性基質、例えば多孔性グラフトが密閉混合物中に浸される。グラフトの表面または溶液中に気泡が残らなくなるまでガラス容器を吸引する。この吸引が、グラフトの間隙中に密閉剤を送り込む。次いで、グラフトを密閉剤混合物から取り出し、過剰な密閉剤を除去または絞り出し、乾燥させる。あるいは、グラフトを本発明にかかる密閉組成物で満たし、グラフト壁の孔に組成物が浸透するように加圧する。例えば、血管グラフトのような多孔性基質の一端を自由にする。グラフトの他端を６０ｃｃ注射器のノズル部に接続する。この注射器を本発明の組成物で満たし、組成物をプランジャーで注射器から押し出す。このようにして、本発明の組成物がグラフトの間隙に送り込まれる。グラフトが組成物で満たされたら、注射器を引き抜き、過剰な密閉剤をグラフトから除去する。次いでグラフトを乾燥させる。この注入方法は、基質の有効なしみこみを確実にするのに必要な回数、例えば６回まで、繰り返されてもよい。グラフトの間隙に密閉剤をしみ込ませる力を用いた別の方法も考慮される。上述したように、本発明のゾル−ゲルは、部分的に、水に抽出可能な、例えば水溶性の材料から形成される。しかしながら、本発明のゾル−ゲル材料の溶解速度は非常に低いものである。本発明のゾル−ゲル材料は、上述した少なくとも二つのポリサッカリドから形成される。従って、このようなゾル−ゲル密閉剤は、周辺細胞からグラフトに上皮細胞を増殖させるように、生物適応産物中にゆっくりと生分解および／または溶解するような、初期においてブロッドタイトな表面を提供することから、多孔性グラフト材料にブロッドタイトバリアを付与するように最適化される。ガム、例えば種子（シード）ガムは、適切な溶媒または膨潤剤において、低い乾燥物質含量で、高い粘性の分散物またはゲルを形成する重合性物質である。特に、種子ガムポリサッカリドは、粘性の水性分散物を産生する水溶性ポリマーである。本発明の種子ガムポリサッカリドファミリーは、例えば、コーンスターチ、グアーガムおよびローカストビーンガムを含むが、他のガム材料も使用可能である。同様に、海藻抽出物ポリサッカリドも、粘性の水性分散物を提供する水溶性ポリマーである。しかして、海藻抽出物ポリサッカリドファミリーの全ての成分を本発明において用いることができ、例えばアルギン、カラゲナンI−IVを含むカラゲナンおよび寒天を含む。本発明の一つの実施態様において、ヒドロゲルが、グリセロール−水溶液中に分散された、直鎖状ポリサッカリド成分および分枝状ポリサッカリド成分の組み合わせを含む。本発明の直鎖状ポリサッカリドは、粘性の水性分散物を提供する水溶性ポリマーである。しかして、直鎖状ポリサッカリドファミリーの全ての成分が本発明に用いられ、例えばアルギン、デンプンアミロースおよびその誘導体、タイプI−IVを含むカラゲナン、ペクチン、およびセルロース誘導体を含む。同様に、本発明の分枝状ポリサッカリドは、粘性の水性分散物を提供する水溶性ポリマーである。しかして、分枝状ボリサッカリドファミリーの全ての成分が本発明に用いられ、例えばグアーガム、キサンタン、ローカストビーンガム、デンプン、アミロペクチンおよびその誘導体、並びにアラビアガムを含む。以下の実施例は、密閉剤組成物の調製方法および移植可能な多孔性基質への適用をさらに例証する。実施例１カラゲナンタイプＩ／ローカストビーンガム本発明の密閉剤組成物のいくつかの調製例を、以下に記載するように６００ｍ１ビーカーに調製した。密閉剤組成物Ａ：カラゲナンタイプＩ（SIGMA Chemical Co.，St．Louis，MO ）の溶液を、Dyna-Mixerを用いて一定に混合しながら、３００ｍｌの水に４ｇｍのカラゲナンタイプＩを添加することによって調製した。この実験で用いられたカラケナンタイプＩは、カッパ型が主であり、より少量のラムダ型を含む。このカラゲナンタイプＩは商業的等級のものであり、種々の海藻から得られたものである。この溶液が滑らか、かつ塊が見えない場合には、混合をやめ、これに２０ｇｍのグリセロールを添加し、手で攪拌する。密閉剤組成物Ｂ：ローカストビーンガムの溶液を、Dyna-Mixerを用いて一定に混合しながら、３００ｍｌの水に３ｇｍのカラゲナンタイプＩを添加することによって調製した。この溶液が滑らか、かつ塊が見えない場合には、混合をやめ、これに２０ｇｍのグリセロールを添加し、手で攪拌する。密閉剤組成物Ｃ：等量（１：１混合物）の溶液ＡおよびＢを、手で攪拌して調製した。織りかつ編まれたダブルベロアグラフトを水密にする溶液Ｃの能力を以下の三つの条件下で評価した：（１）グラフトを室温の密閉剤で被覆し、室温で乾燥させた；（２）グラフトを６０℃の密閉剤で被覆し、室温で乾燥させた；（３）グラフトを室温の密閉剤で被覆し、６０℃で乾燥させた。各パラメーターを３回試験した。本発明において、“室温”とは約２２℃〜約２５℃の温度を意味する。密閉組成物の一つをグラフトにしみ込ませるために、以下のプロトコルを行った。各グラフトを６０ｃｃの注射器に取り付けた。密閉剤組成物を注射器に充填し、グラフトが満たされるまでグラフトに組成物を注入し、圧力をかけた。グラフトをからにして、それに力をかけて過剰な密閉剤を除去し、乾燥させた。室温で乾燥させたグラフトは、約２〜約４時間乾燥させた。６０℃で乾燥させたグラフトは、約３０分〜約１時間オープン中で乾燥させた。この工程をグラフトにつき６回繰り返した。６回処理した後に、各密閉剤のグラフトを密閉する能力を、上述したようにグラフトの多孔性、例えば比多孔度を測定することによって試験した。表３は、試験した各グラフトの結果をまとめるものである。 ^*２３℃の密閉剤をしみ込ませ、室温で乾燥させたグラフト⁺ ６０℃の密閉剤をしみ込ませ、室温で乾燥させたグラフト^★★ 上記Wesolowski試験に従って測定された多孔性このデータが示すように、密閉剤をしみ込ませた織物グラフトは、編物ダブルベロアグラフトよりも顕著に水密であった。密閉剤が６０℃で注入されたときに、織物および編物の両方のグラフトがより多くの水を保持した。全てのグラフトが、最終的な被覆後に柔軟かつしなやかであり、密閉剤に割れを生じることなく容易に取り扱われたことに注意すべきである。グラフトの全ての比多孔度が≧１ｍｌ／分／ｃｍ²だったので、これらの調製物のいずれも、宿主生命体への移植に適していない。従って、カラケナンタイプIIとローカストビーンガムとの密閉剤組成物を試した。実施例２カラゲナンタイプII／ローカストビーンガム別の実験において、カラゲナンタイプII−ローカストビーンガムヒドロゲルの密閉剤特性を評価した。この実験のプロトコルは、密閉剤組成物Ａにおいて、カラゲナンタイプＩの代わりに４ｇｍのカラケナンタイプII（SIGMA Chemical Co. ,St．Louls，MO）を用いたこと以外は実施例１と同じであった。この実験に用いられたカラゲナンタイプIIは、主にイオタ型である。さらに、密閉剤組成物Ａのみを織物グラフトにしみ込ませるために用いた。実験結果は以下の表４に示されている。 ^*２３℃の密閉剤をしみ込ませ、室温で乾燥させたグラフト⁺ ６０℃の密閉剤をしみ込ませ、室温で乾燥させたグラフト ”２３℃の密閉剤をしみ込ませ、６０℃で乾燥させたグラフト^★★ 上記Wesolowski試験に従って測定された多孔性このデータが示すように、密閉剤をしみ込ませた織物グラフトは、編物ダブルベロアグラフトよりも顕著に水密であった。室温で乾燥させたグラフトと６０℃ で乾燥させたグラフトとの間には多孔性において差がない。密閉剤が６０℃で注入されたときに、織物および編物の両方のグラフトがより多くの水を保持した。カラケナンタイプIIのみで被覆された織物グラフトは、カラゲナンタイプII／イナゴマメ混合物で被覆されたグラフトよりも顕著に多孔性であった。６０℃でカラゲナンタイプII被覆グラフトを乾燥することが、多孔性テストにおいて証明されたように、水密性を顕著に改善した。全てのグラフトが、最終的な被覆後に柔軟かつしなやかであり、密閉剤に割れを生じることなく容易に取り扱われた。このデータに示されているように、カラゲナンタイプII／ローカストピーンガム密閉剤をしみ込ませた織物グラフトは実質的に水密であり、例えば≦１．０ｍｌ／分／ｃｍ²の比多孔度を示した。これらのデータは、このようなグラフト−密閉剤の組み合わせが、宿主生命体への移植に実行可能であることを示している。実施例３カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガム別の実験において、カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガムヒドロゲルの密閉剤特性を評価した。この実験のプロトコルは、密閉剤組成物Ａにおいて、カラゲナンタイプＩの代わりに４ｇｍのカラゲナンタイプIV（SIGMA Chemical Co. ,St．Louis，MO）を用いたこと以外は実施例１と同じであった。この実験に用いられたカラケナンタイプIVは、Gigartina acicuiaireおよびG.pistillataから得られた。実験結果は以下の表５に示されている。 ^*２３℃の密閉剤をしみ込ませ、室温で乾燥させたグラフト⁺ ６０℃の密閉剤をしみ込ませ、室温で乾燥させたグラフト^★★ 上記Wesolowski試験に従って測定された多孔性このデータが示すように、密閉剤をしみ込ませた織物グラフトは、編物ダブルベロアグラフトよりも顕著に水密であった。２３℃の密閉剤が注入された織物グラフトと６０℃の密閉剤が注入された織物グラフトとの間に多孔性の差はなかった。しかしながら、密閉剤が６０℃で注入されたときに、編物グラフトがより多くの水を保持した。全てのグラフトが、最終的な被覆後に柔軟かつしなやかであり、密閉剤に割れを生じることなく容易に取り扱われたことに注意すべきである。このデータに示されているように、カラゲナンタイプII／ローカストビーンガム密閉剤のように、カラケナンタイプIV／ローカストビーンガム密閉剤は、宿主生命体に移植可能な実質的に水密なグラフトを提供することができた。実施例１−３が証明するように、カラゲナンIIおよびIVは、カラゲナンＩよりも、ローカストビーンガムと組み合わせて用いられた場合にグラフトを密閉することにおいてより有効であった。密閉剤は、主として編物構造が本来的に大きな多孔性を備えていることから、編物ダブルベロアグラフトよりも織物グラフトを用いた場合に、より効果的であった。カラケナンタイプIIおよびローカストビーンガムをしみ込ませたグラフトにおいては、室温で乾燥されたグラフトと６０℃ で乾燥されたグラフトとの間に差異はなかった。６０℃の密閉剤が注入された織物および編物グラフトの両方が、２３℃の密閉剤が注入された同じグラフトと比較して、多孔性試験においてより多くの水を保持した。カラゲナンタイプIIのみで被覆された織物グラフトは、カラゲナンタイプIIとローカストビーンガムとの組み合わせで被覆された織物グラフトに匹敵する結果を示さなかった。しかしながら、表４の結果は、６０℃で乾燥させたカラゲナンタイプIIをしみ込ませたグラフトがより多くの密閉剤をグラフトに付着させ、より少ない多孔度であったことを示す。カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガムの組み合わせで被覆されたグラフトは、カラケナンタイプII／ローカストビーンガムの組み合わせに匹敵した。乾燥方法は、観察された多孔性特性を変化させなかった。しかしながら、カラゲナンタイプＩ／ローカストビーンガムの組み合わせで被覆されたグラフトは、実施例１−３において試験された密閉剤混合物の中で最も多孔性であった。実施例４寒天／グアーガム一般的に適用できる密閉剤、例えば織物および編物グラフトの両方を実質的にブロッドタイトにする密閉剤を見いだす試みとして、寒天／グアーガムの組み合わせを含む混合物を用いて実験することにした。この実施例では、精製された寒天とグアーガムの組み合わせから成るヒドロゲルをしみ込ませたグラフトの多孔性を試験した。寒天／グアーガム密閉剤混合物が４０℃でゲルを形成することが見いだされたことから、二つの編物グラフトと二つのダブルベロアグラフトは６０℃で注入された。各グラフトは実施例１に記載されたように６回注入された。各タイプのグラフトの一方は、注入の間に約１〜約２時間、室温で乾燥させ（試験１と称する）、他方のグラフトは６０℃のオーブンで約３０分〜約１時間乾燥させた（試験２と称する）。水多孔性試験を、上記実施例１に記載したように各グラフトについて行った。精製された寒天／グアーガム密閉剤組成物についての多孔性試験の結果は以下に表６として表されている。 ^★★上記Wesolowski試験に従って測定された多孔性別の実験において、異なる組の編物およびダブルベロアグラフトを用いて、精製された寒天／グアーガム混合物を土記のように再度試験した。以下の表７に示したように、二つの実験の結果は類似する。 ^★★上記Wesolowski試験に従って測定された多孔性表６および７の結果が示すように、室温で乾燥したグラフトは、６０℃で乾燥したグラフトより多孔性が低い。熱がグラフトから水を除去するにつれ、ゲル化工程を妨害し、観察された高い多孔性の結果を導くと考えられる。さらに、室温で乾燥したグラフトは６０℃で乾燥したグラフトよりもしなやかであった。この結果は、精製された寒天／グアーガム密閉剤がカラゲナンタイプIIおよびIV／ローカストビーンガム密閉剤混合物に匹敵することを示す。実際に、表６および７のデータは、寒天／グアーガム密閉剤混合物が室温で乾燥された場合に、織物および編物グラフトの両方をブロッドタイトにするのに適していることを示唆する。実施例５この実施例では、実施例１に記載されたように行われた種々の多孔性試験から得られたものである。この実験において、編物および織物グラフトの多孔性は、使用されたポリサッカリド、種々のポリサッカリドの濃度および比率、グリセロールの濃度、並びに密閉剤および乾燥工程の温度を含む種々のパラメーターを変更することによって評価された。これらの結果は以下の表８にまとめられている。これらのデータは、カラゲナンタイプIV／グアーガム、カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガム、アガロース／グアーガムおよびキトサン／グアーガム密閉剤の組み合わせの密閉剤混合物が、一般に織物および編物グラフトの両方に実質的なブロッドタイトバリアを付与できることを示している。本発明について記載したが、同一物が多くの方法で変形されてもよいことは明らかである。このような変形は本発明の範囲および精神から外れるものではなく、このような全ての修飾は、添付のクレームの範囲に含まれると考えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ルーミス，ゲリーエルアメリカ合衆国ニュージャージー 07960 モリスタウンスカイラインドライブ 98 (72)発明者モローニ，アントニオアメリカ合衆国ニュージャージー 07950 モリスプレインズバーンハムロード 43 (72)発明者ドゥプレカー，ジェニファーアメリカ合衆国ニュージャージー 07662 ロチェルパークベッカーアベニュ 72

Claims

【特許請求の範囲】１．多孔性の内壁および外壁を含み、当該壁は、組織成長のための多孔性を備え、管状プロテーゼを通過して生物学的再吸収可能な液密密閉剤を形成する少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含有するヒドロゲルがしみ込んでいる、移植可能な液密管状プロテーゼ。２．前記ポリサッカリドが、アルギン、カルボキシメチルセルロース、カラゲナン、ファーセララン、アガロース、グアー、ローカストビーンガム、アラビアガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ペクチン、部分的にアセチル基が除かれたキトサン、アミロースおよびアミロペクチンを含むデンプンおよびデンプン誘導体、キサンタン、カゼイン、ポリリジン、ヒアルロン酸およびその誘導体、ヘパリン、これらの塩、並びにこれらの混合物からなる群から選択される、請求項１記載のプロテーゼ。３．前記壁が織物、編物、押し出し物、もしくは鋳造物である、請求項１記載のプロテーゼ。４．前記壁が、一つ以上の合成または天然ポリマーを含む、請求項１記載のプロテーゼ。５．前記壁が、ポリエステル、発泡ポリ（テトラフルオロエチレン）、ナイロン、ポリプロピレン、ポリウレタンおよびポリアクリロニトリルから成る群から選択された一つ以上の材料を含む、請求項１記載のプロテーゼ。６．少なくとも二つのポリサッカリドの組み合わせが、アルギン酸／ペクチン、アルギン酸／キトサン、カラケナンタイプＩ／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプＩ／ペクチン、カラゲナンタイプII／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプII／ペクチン、カラゲナンタイプII／グアーガム、カラゲナンタイプIV ／ローカストビーンガム、ローカストビーンガム／キサンタン、グアーガム／ローカストビーンガム、グアーガム／キサンタン、および寒天／グアーガムからなる対のヒドロゲルポリサッカリドの群から選択された、請求項１記載のプロテーゼ。７．少なくとも二つのポリサッカリドが、カラゲナンタイプII、Ｃａ⁺²イオンおよびローカストビーンガムを含む、請求項１記載のプロテーゼ。８．少なくとも二つのポリサッカリドが、カラゲナンタイプIV、Ｃａ⁺²イオンおよびローカストビーンガムを含む、請求項１記載のプロテーゼ。９．少なくとも二つのポリサッカリドが、精製されたアガロースとグアーガムを含む、請求項１記載のプロテーゼ。１０．少なくとも二つのポリサッカリドが、キトサンとグアーガムを含む、請求項１記載のプロテーゼ。１１．抗凝血剤が前記ヒドロゲル中に含有され、当該ヒドロゲルが前記多孔性の壁を通して抗凝血剤を調節可能に放出する、請求項１記載のプロテーゼ。１２．前記抗凝血剤が、ヘパリン、プロスタグランジン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、硫酸化ポリサッカリド、アルブミン、これらの薬学的な塩およびこれらの混合物からなる群から選択された、請求項１１記載のプロテーゼ。１３．少なくとも二つのポリサッカリドがそれぞれヘパリンとキトサンである、請求項１記載のプロテーゼ。１４．前記ポリサッカリドが架橋結合している、請求項１記載のプロテーゼ。１５．水性媒体中で混合された場合にヒドロゲルを形成する少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含み、当該ヒドロゲルは、密閉剤として適用された場合に液密なシールを形成する、生物学的再吸収可能な密閉剤組成物。１６．前記ポリサッカリドが、アルギン、カルボキシメチルセルロース、カラゲナン、ファーセララン、アガロース、グアー、ローカストビーンガム、アラビアガム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ペクチン、部分的にアセチル基が除かれたキトサン、アミロースおよびアミロペクチンを含むデンプンおよびデンプン誘導体、カゼイン、ポリリジン、ヒアルロン酸およびその誘導体、ヘパリン、キサンタン、タンパク、ポリアミノ酸、これらの塩、並びにこれらの混合物からなる群から選択された、請求項１５記載の生物学的再吸収可能な密閉剤。１７．少なくとも二つのポリサッカリドの組み合わせが、アルギン酸／ペクチン、アルギン酸／キトサン、カラゲナンタイプＩ／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプＩ／ペクチン、カラゲナンタイプII／ローカストビーンガム、カラゲナンタイプII／ペクチン、カラゲナンタイプII／グアーガム、カラゲナンタイプIV／ローカストビーンガム、ローカストビーンガム／キサンタン、グアーガム／ローカストビーンガム、グアーガム／キサンタン、キトサン／ヘパリン、および寒天／グアーガムからなる対のヒドロゲルポリサッカリドの群から選択された、請求項１５記載の生物学的再吸収可能な密閉剤。１８．少なくとも二つのポリサッカリドが、カラゲナンタイプＩI、Ｃａ⁺²イオンおよびローカストビーンガムを含む、請求項１５記載の生物学的再吸収可能な密閉剤。１９．少なくとも二つのポリサッカリドが、精製されたアガロースとグアーガムを含む、請求項１５記載の生物学的再吸収可能な密閉剤。２０．少なくとも二つのポリサッカリドが、キトサンとグアーガムを含む、請求項１５記載の生物学的再吸収可能な密閉剤。２１．少なくとも二つのポリサッカリドがヘパリンとキトサンである、請求項１５記載の生物学的再吸収可能な密閉剤。２２．ヒドロゲルマトリックスと、当該ヒドロゲルマトリックスに含まれた生物活性剤とを含み、前記ヒドロゲルは、水性媒体に添加されると前記ヒドロゲルを形成する少なくとも二つのポリサッカリドを組み合わせて含有し、多孔性の柔軟な組織プロテーゼにしみ込むと液密シールを形成する、柔軟な組織プロテーゼに使用される放出調節型の生物学的再吸収可能な密閉剤組成物。２３．組織成長のために多孔性の内壁および外壁を備えた管状部材を含み、グリセロール−水溶液中に分散した種子ガムポリサッカリドと海藻抽出ポリサッカリドとを組み合わせて含む、生物学的再吸収可能なヒドロゲル密閉剤がしみ込んだ、移植可能な柔軟な組織プロテーゼ。２４．組織成長のために多孔性の内壁および外壁を備えた管状部材を含み、グリセロール−水溶液中に分散した直鎖状ポリサッカリド成分と分枝状ポリサッカリド成分との組み合わせである、生物学的再吸収可能なヒドロゲル密閉剤がしみ込んだ、移植可能な柔軟な組織プロテーゼ。２５．ａ．内および外表面と、該表面の孔によって定義される多孔性を備えた移植可能な柔軟な組織多孔性基質を調製し、ｂ．少なくとも二つのポリサッカリドによって定義されたヒドロゲルを前記表面にしみ込ませ、前記孔を前記ヒドロゲルで満たし、ｃ．前記ヒドロゲルにより、前記孔中に前記基質を液密にするシールを形成させることを含む、移植可能な柔軟な組織多孔性基質を液密にする方法。２６．ａ．内および外表面と、該表面の孔によって定義される多孔性を備えた移植可能な柔軟な組織多孔性基質を調製し、ｂ．少なくとも二つのポリサッカリドによって定義されたゾル−ゲルを前記表面にしみ込ませ、前記孔を前記ゾル−ゲルで満たし、ｃ．前記ゾルゲルにより、前記孔中に前記基質を液密にするシールを形成させることを含む、移植可能な柔軟な組織多孔性基質を液密にする方法。２７．ａ）少なくとも二つのポリサッカリドによって定義されたマトリックスと、当該ヒドロゲルマトリックスを通過して分散した治療剤とを備えた生分解可能な治療用ヒドロゲルを調製し、ｂ）前記多孔性基質の内および外表面の間の間隙に前記生分解可能な治療用ヒドロゲルをしみ込ませ、ｃ）前記生分解可能な治療用ヒドロゲルにより、前記基質の周りにブロッドタイトなシールを形成させることを含む、多孔性基質において密閉在中に分散した治療剤の調節された放出を提供する方法。