JP2003530158A - 架橋化デキストランで含浸された脈管プロテーゼ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、少なくとも１つの共有結合で架橋されたデキストランおよび／または少なくとも１つの共有結合で架橋されたデキストランの官能化誘導体で含浸された合成支持体を含む可撓性脈管プロテーゼに関する。本発明はまた、該プロテーゼの製造方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、架橋されたデキストランおよび／または架橋されたデキストランの
官能化誘導体で含浸された脈管プロテーゼ、ならびにこのようなプロテーゼの製
造方法に関する。

【０００２】 修復性脈管手術において、ポリエステル、ナイロン、ポリプロピレン、ポリア
クリロニトリル、ポリウレタン、ポリエーテルウレタン、ポリエチレンテレフタ
レートまたは発泡した（expanded）ポリテトラフルオロエチレンから作製された
プロテーゼのような合成代替物（substitutes）の使用は、生物学的移植の代替法
である。

【０００３】 これらの合成代替物を生体適合性にするために、そして代替物がそれら自体に
おいて不浸透性（impermeable）でない場合、不浸透性（impermeability）特性
を与えるために、それらの表面は、血漿蛋白質（アルブミンまたはフィブリン）
または細胞外マトリックス蛋白質（コラーゲン、ゼラチンまたはフィブロネクチ
ン）のような生物学的物質でコーティングされ得る。

【０００４】 しかし、これらの蛋白質は、動物またはヒトソースから誘導されるという欠点
を有し、病原体および毒素での汚染という潜在的危険性を生じる。

【０００５】 これらの合成代替物の表面を必要に応じてカルボキシメチル化されたアルギネ
ートでコーティングすることが、既に提案されている（特許US 5 415 619）。し
かし、このタイプのプロテーゼを移植した後に、相当な炎症性応答およびプロテ
ーゼの表面での血液の迅速な凝固が、観察される。

【０００６】 ポリマー性ベース材料および前記ベース材料の表面へ直接付着された実質的に
非イオン性の水溶性ポリマー（この水溶性ポリマーは、場合によっては、アクリ
ルアミドまたはメタクリルアミド；ポリビニルピロリドン；部分的または全体的
に鹸化されたポリビニルアルコール；ポリエチレングリコールおよび架橋されて
いないデキストランのようなタイプのポリマーから選択される）を含む、血液媒
体と適合性であるデバイスがまた、既に、特に特許US 4 743 258において提案さ
れている。しかし、脈管プロテーゼコーティングとしてのこのようなポリマーの
使用は不満足であり、何故ならば、水性媒体におけるそれらの溶解性に起因して
それらが迅速に血液循環へと放出され、従ってプロテーゼからのコーティングの
除去が生じるからである。

【０００７】 その上、前処理が、プロテーゼを移植する前に、患者の血液で行われ得る。し
かし、これらの方法は制限され、何故ならば、それらは、時間を要しそして緊急
時には引き受けられ得ない、輸血を受けることを患者に要求するからである。さ
らに、それらは、患者が抗凝固剤処置下にある場合、使用され得ず、これはしば
しばあることである。

【０００８】 本出願人は、従って、先行技術の欠点を克服しそして動物起源でない物質でコ
ーティングした脈管プロテーゼを提供することを目的とし、得られるプロテーゼ
は不浸透性および可撓性の両方である。更に、そのコーティングを有するプロテ
ーゼは、移植後にその完全性（integrity）を保持すると同時に、非毒性かつ非
血栓形成性（nonthrombogenic）でなければならず、そしてそれがインビボで移
植される場合には移植後に炎症性反応を誘発してはならない。

【０００９】 従って、本発明の１つの主題は、少なくとも１つの共有結合で架橋されたデキ
ストランおよび／または少なくとも１つの共有結合で架橋された官能化デキスト
ラン誘導体で含浸された合成支持体を含むことを特徴とする、可撓性脈管プロテ
ーゼである。

【００１０】 本発明の目的のために、用語“可撓性”は、移植の間に外科医によって容易に
操作され得、そしてプロテーゼの管状形状が屈することなしにそして壁が互いへ
くっつくことなしに、折り畳みおよびねじれに容易に耐えるに十分に可撓性であ
るプロテーゼを意味する。

【００１１】 デキストランは、α（１−６）結合によって一緒に連結されるα−Ｄ−グルコ
ピラノース単位の配列からなるポリサッカリドとして定義され得る。

【００１２】 本発明に従うプロテーゼに使用される合成支持体は、例えば、ポリエステル、
ナイロン、ポリプロピレン、ポリアクリロニトリル、ポリウレタン、ポリエーテ
ルウレタン、ポリエチレンテレフタレート（織られた（woven）または編まれた
（knitted））または発泡された（expanded）ポリテトラフルオロエチレンから
なる。

【００１３】 本発明に従う可撓性脈管プロテーゼは、架橋されたデキストランの存在の点で
不浸透性であり、そして架橋されたデキストランの官能化誘導体の存在のために
生体適合性である（即ち、それは、受容する個体において、好ましくない生物学
的応答を誘発しない）という利点を有する。それは、ガンマ照射またはエチレン
オキシドでの滅菌に好適であり、これらの処理は、その不浸透性またはその可撓
性に対して悪影響を与えない。それはまた、閉鎖循環（closed circuit）での水
流におけるプロテーゼの２４時間の永久接触（permanent contact）後に、一定
の化学的および物理化学的特徴を維持し、その結果、血液循環における移植の条
件が再現されるという利点を有する。これらの条件下で、放出されるデキストラ
ンの量は、プロテーゼをコーティングするために使用されるデキストランのたっ
たの１重量％未満を示すプラトーに達する。

【００１４】 プロテーゼ支持体をコーティングするためのデキストランおよび／またはデキ
ストランの官能化誘導体の使用は、動物病原体での汚染のあらゆる危険性を回避
する。更に、本発明に従うプロテーゼは、血栓形成性（thrombogenic）でなく（
それは、凝固系を活性化しない)、そして受容する個体において炎症性反応を誘発
しないという利点を有する。

【００１５】 本発明に従う脈管プロテーゼを含浸するために使用され得るデキストランの官
能化誘導体は、例えば、番号WO 99/29734号で公開された国際ＰＣＴ特許出願、
またはJ. Biomed. Mater. Res. (Appl. Biomater.) 48, 578-590, 1999において
出版されたD. Logeart-Avramoglou およびJ. Jozefonviczによる論文に記載のも
のである。

【００１６】 その調製が国際ＰＣＴ特許出願WO 99/29734に記載されるこのような誘導体は
、例えば、一般式ＤＭＣ_aＢ_bＳｕ_cＳ_dに対応し、ここで： Ｄは、α（１−６）結合を介して一緒に連結されるα−Ｄ−グルコピラノース
単位の配列からなるポリサッカリド鎖を示し、 ＭＣは、メチルカルボキシレート基を示し、 Ｂは、カルボキシメチルベンジルアミド基を示し、 Ｓｕは、スルフェート基を示し、 Ｓは、スルホネート基を示し、そして、 ａ、ｂ、ｃおよびｄは、デキストランの1グルコシド単位における遊離のヒド
ロキシル官能基の数に対して表される、各々ＭＣ、Ｂ、ＳｕおよびＳ基の置換度
（the degree of substitution）（ｄｓ）を示し、ａは０に等しいかまたは≧０
．２であり、ｂは０に等しいかまたは≧０．１であり、ｃは０に等しいかまたは
≧０．１であり、そしてｄは０に等しいかまたは≦０．１５であり、ｄ＝０であ
る場合、ａおよび／またはｂは≠０である。

【００１７】 これらの官能化デキストラン誘導体の中でも、より特別に使用され得るものは
、以下からなる群から選択されるものである： ・ａ≧０．５であり、ｃが０に等しいかまたは≦０．５であり、そしてｄ≦０
．１５であるかまたは０に等しく、そして重量平均モル質量が３ ０００〜５ ０
００ ０００ｇ／ｍｏｌである、官能化デキストラン、 ・ａ≧０．３であり、ｃが０に等しいかまたは≦０．４であり、そしてｄ≦０
．１５であるかまたは０に等しく、そして重量平均モル質量が３ ０００〜５ ０
００ ０００ｇ／ｍｏｌである、官能化デキストラン、 ・ａ≧０．５であり、ｃは０に等しいかまたは≦０．４であり、そしてｄ≦０
．１５であるかまたは０に等しく、そして重量平均モル質量が３ ０００〜５ ０
００ ０００ｇ／ｍｏｌである、官能化デキストラン、および ・ａ≧０．２であり、ｃが≧０．３であり、そしてｄ≦０．１５であるかまた
は０に等しく、そして重量平均モル質量が３ ０００〜５ ０００ ０００ｇ／ｍ
ｏｌである、官能化デキストラン。

【００１８】 本発明に従う脈管プロテーゼを含浸するために使用され得る官能化デキストラ
ン誘導体の更なる例としてはまた、以下が挙げられ得る： １）欧州特許0 146 455に記載されるデキストラン誘導体；これは、ランダム
に、以下を含む： ・少なくとも約３５％の単位Ｂ；これは、構造−Ｏ−(ＣＨ₂）_n−Ｒ−ＣＯＯ^- に対応するカルボキシル基を含む基で置換されたサッカリド単位Ａからなる［こ
こで、Ｒは単結合または基−ＣＯ−ＮＨ−（ＣＨ₂）_n'−を示し、ｎは１〜１０
の数であり、そして、ｎ’は１〜７である］、 ・少なくとも約３％の単位Ｄ；即ち、 構造：

【００１９】

【化１】

【００２０】 ［ここで、ｎは上記に定義される通りであり、Ｒ₂は生理学的に許容されるミネ
ラルまたは有機塩のアニオンを示し、そしてＲ₁は、単結合、−ＣＨ₂−基または
基：

【００２１】

【化２】

【００２２】 を示す］ の基を含む鎖で置換されたサッカリド単位Ａ、 ・必要に応じて、以下の構造の基で置換された単位Ａからなる単位Ｃ：

【００２３】

【化３】

【００２４】 ［ここで、Ｒ₁およびｎは前記に定義される通りである］および／または、非置
換サッカリド単位Ａ； ２）欧州特許0 428 182に記載されるデキストラン誘導体；これは、単位Ａお
よびＣ並びに少なくとも３５％の単位Ｂを含み、これらの単位は、欧州特許0 146
455に関連して上記で定義される通りである。

【００２５】 本発明に従う脈管プロテーゼの１つの有利な実施形態によれば、前記官能化デ
キストラン誘導体と前記デキストランとの重量比は、１／９９〜３０／７０、好
ましくは３／９７〜７／９３、そしてなおより好ましくは約５／９５に等しい。

【００２６】 本発明に従う脈管プロテーゼの別の有利な実施形態によれば、前記合成支持体
はまた、少なくともカルボキシレートおよび／またはスルフェート官能基で官能
化された、少なくとも１つの共有結合で架橋された天然または合成ポリサッカリ
ドで含浸されている。このような官能化ポリサッカリドの例は、ヘパリンである。

【００２７】 前記官能化ポリサッカリドと前記デキストランとの重量比は、有利には１／９
９〜３０／７０、そして好ましくは１／９９〜２０／８０である。

【００２８】 本発明に従う脈管プロテーゼが、官能化デキストラン誘導体および官能化ポリ
サッカリドの両方を含む場合、前記官能化デキストラン誘導体と前記官能化ポリ
サッカリドとの重量比は、好ましくは、１／９９〜９９／１である。

【００２９】 上記に定義されるような、官能化デキストラン誘導体および／または少なくと
もカルボキシレートおよび／またはスルフェート官能基で官能化された天然また
は合成ポリサッカリドが、本発明に従うプロテーゼに存在する場合、それらは、
特異的な生物学的活性を前記プロテーゼに与える。

【００３０】 特に、官能化デキストラン誘導体の存在は、本発明に従うプロテーゼに、それ
が移植される生物学的媒体との特異的な相互作用を示す可能性を提供し；プロテ
ーゼヘのヒト内皮細胞の増殖が特に観察され、このプロセスは、生物学的媒体へ
の移植片の組込み（integration）を促進する。

【００３１】 更に、種々の官能基でのそれらの置換度に依存して、上述の官能化デキストラ
ン誘導体および官能化ポリサッカリドは、瘢痕形成（cicatrizing）特性、抗−補
体活性および血液−血漿−代替（substitute）活性、細胞増殖の調節活性、また
は抗凝固特性を有し得る。

【００３２】 本発明の主題はまた、上述の脈管プロテーゼの製造方法であって、以下の工程： ａ）少なくとも１つのデキストランおよび／または少なくとも１つの官能化デ
キストラン誘導体の溶液の調製、 ｂ）この溶液を使用しての前記合成支持体の含浸、 ｃ）前記デキストランおよび／または前記官能化デキストラン誘導体の架橋、 を含むことを特徴とする。

【００３３】 工程ａ）の間に調製される溶液は、慣用的に浸透水（osmosed water）に基づく
、水溶液からなり得る。それは、例えば、使用されるデキストランのタイプおよ
びその重量平均モル質量に依存して、１％〜７０％（ｍ／Ｖ）のデキストラン、
または１％〜７０％（ｍ／Ｖ）の官能化デキストラン誘導体、または１％〜７０
％（ｍ／Ｖ）のデキストランおよび官能化デキストラン誘導体を含む。

【００３４】 本発明に従う方法において使用されるデキストランは、好ましくは、１０ ０
００〜５０ ０００ ０００ｇ／ｍｏｌの重量平均モル質量を有する。

【００３５】 記載され得る例としては、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社によって販売
されている、それぞれ約４０ ０００、７０ ０００および４６０ ０００ｇ／ｍ
ｏｌに等しい重量平均モル質量を有する、デキストランＴ４０、Ｔ７０およびＴ
５００、ならびにＳｉｇｍａ社によって販売されている、５×１０⁶ｇ／ｍｏｌ
以上の重量平均モル質量を有するデキストラン５Ｍが挙げられる。使用されるデ
キストランのタイプに依存して、本発明に従う方法の工程ａ）の間に調製される
溶液は、例えば、２０％〜７０％（ｍ／Ｖ）のデキストランＴ４０、１０％〜７
０％（ｍ／Ｖ）のデキストランＴ７０、１０％〜５０％（ｍ／Ｖ）のデキストラ
ンＴ５００、または１％〜１５％（ｍ／Ｖ）のデキストラン５Ｍを含む。

【００３６】 本発明に従う方法の１つの有利な実施形態によれば、この方法は、工程ａ）と
ｂ）との間に、工程ａ）の間に調製した溶液への架橋剤［例えば、ＳＴＭＰ（ソ
ディウムトリメタホスフエート)、オキシ塩化燐（ＰＯＣｌ_s)、エピクロロヒド
リン、ホルムアルデヒド、カルボジイミド、グルタルアルデヒド、またはポリサ
ッカリドを架橋するために好適である任意の他の化合物）の添加を含む。

【００３７】 この実施形態において、工程ｂ）およびｃ）は、有利には、３〜１０のｐＨで、
約１０〜４０℃の温度で、そして約１５０分以下の間、同時に行われる。

【００３８】 本発明に従う方法の別の有利な実施形態によれば、この方法は、工程ｂ）とｃ
）との間に、前記支持体の乾燥工程、続いて少なくとも１つの有機溶媒（例えば
、エーテル）中の架橋剤の溶液での該支持体の含浸工程を含む。

【００３９】 好適である架橋剤は、例えば、カルボジイミドまたはＢＤＧＥ（１，４−ブタ
ンジオールジグリシジルエーテル）［この架橋剤は、場合によっては、ポリサッ
カリド（官能化または非官能化デキストラン）中のグルコシド単位１００ｍｏｌ
当たり１０〜３０ｍｏｌ％の割合で使用される］、または有機溶媒に可溶性であ
る任意の他の架橋剤である。

【００４０】 この実施形態において、工程ｂ）およびｃ）は、各々、有利には、３〜１０の
ｐＨで、そして約１０〜４０℃の温度で行われ、工程ｂ）は、有利には、約１５
０分以下の間行われ、そして工程ｃ）は、約１５分〜１８時間の間行われる。

【００４１】 この実施形態の１つの有利なアレンジメントによれば、少なくとも１つのデキ
ストランおよび／または少なくとも１つの官能化デキストラン誘導体の溶液を調
製すること、この溶液で前記支持体を含浸すること、該支持体を乾燥すること、
少なくとも１つの有機溶媒中の架橋剤の溶液で該支持体を含浸すること、ならび
に該デキストランおよび／または該官能化デキストラン誘導体を架橋することの
連続工程は、該支持体の乾燥後、少なくとも１回、好ましくは２〜３回繰り返さ
れる。

【００４２】 本発明に従う方法の別の有利な実施形態によれば、デキストランおよび／また
は官能化デキストラン誘導体を架橋する工程ｃ）に、例えば以下に記載されるよ
うな柔軟剤および／または可塑剤と浸透水（osmosed water）との混合液を使用
して、前記プロテーゼを洗浄する工程が続く。

【００４３】 本発明に従う方法の別の有利な実施形態によれば、工程ａ）の間に調製される
少なくとも１つのデキストランおよび／または少なくとも１つの官能化デキスト
ラン誘導体の溶液はまた、少なくともカルボキシレートおよび／またはスルフェ
ート官能基で官能化された、少なくとも１つの天然または合成ポリサッカリドを
含む。

【００４４】 このようなポリサッカリドは、本発明に従う可撓性脈管プロテーゼに関連して
前述される通りである。

【００４５】 本発明に従う方法のなお別の有利な実施形態によれば、工程ａ）の間に調製さ
れる少なくとも１つのデキストランおよび／または少なくとも１つの官能化デキ
ストラン誘導体の溶液はまた、可塑剤および柔軟剤から選択される少なくとも１
つの添加剤、および／または抗凝固剤（例えば、抗ビタミンＫまたはアスピリン
）、抗菌剤および抗感染症剤からなる群から選択される１以上の有効成分を含む
。該有効成分は、例えば、使用されるポリサッカリドに対して１重量％〜１０重
量％の割合で該水溶液中に存在し得る。

【００４６】 使用され得る可塑剤の例としては、グリセロールまたはマンニトールが挙げら
れ、これは、例えば、１容積％〜１０容積％の割合で存在する。

【００４７】 使用され得る柔軟剤の例としては、乳酸、アスコルビン酸、エチレングリコー
ル、プロピレングリコールおよびソルビトールが挙げられ、これは、例えば、０．
１容積％〜５容積％の割合で存在する。

【００４８】 使用され得る抗菌剤および抗感染症剤の例は、非限定的様式で、リファンピシン
、ミノサイクリン、クロルヘキシジン、銀イオン剤（silver ion agents）およ
び銀ベース組成物（silver-based compositions）である。

【００４９】 本発明の主題はまた、上記に定義される本発明に従う方法によって得られ得る
ことを特徴とする、上記に定義される可撓性脈管プロテーゼである。

【００５０】 前述のアレンジメントに加えて、本発明はまた、本発明に従う脈管プロテーゼ
の製造例およびそれらの細胞生体適合性の評価について、ならびにまた添付の図
面に言及する以下の説明から明らかとなるであろう他のアレンジメントを含む。

【００５１】 しかし、これらの例は、単に本発明の主題の例示として与えられ、それらは本
発明の限定を決して構成しないことが、明らかに理解されるべきである。

【００５２】 実施例１：ＢＤＧＥで架橋されたデキストランで含浸された合成支持体を含む
、本発明に従う脈管プロテーゼの製造 １）使用される合成支持体、デキストランおよび架橋剤 使用される合成支持体は、Ｃａｒｄｉａｌ＆Ｂａｒｄ社によって商品名“Ｄｉ
ａｌｉｎｅ Ｉ”で供給される、編まれた（knitted）ポリエチレンテレフタレー
ト（ＰＥＴ）からなる。その水浸透性（water permeability）は、ＩＳＯ／ＤＩ
Ｓ規格７１９８：１９９６に従って１０１０ｍｌ／分／ｃｍ²である。それは、
リブ付きテキスタイル（ribbed textile）４０〜６０ｃｍ長（ストレッチされた
形態）および直径８〜１０ｍｍの形態である。サンプル２０ｃｍ長(ストレッチ
された)を、本実施例のコンテクストで使用する。

【００５３】 使用されるデキストランは、Ｓｉｇｍａ社によって販売される、５×１０⁶ｇ
／ｍｏｌに等しい重量平均モル質量を有するデキストラン５Ｍである。

【００５４】 デキストラン架橋剤に関して、それはＢＤＧＥ（１，４−ブタンジオールジグ
リシジルエーテル、Ａｌｄｒｉｃｈ)。

【００５５】 ２）プロトコル 脈管プロテーゼの製造プロトコルは、乾燥工程によって分離される、デキスト
ラン溶液でＰＥＴ合成支持体を含浸しそして有機溶媒中で架橋する一連の連続サ
イクルからなる。

【００５６】 含浸工程のために調製されるデキストラン溶液は、浸透水（osmosed water）
中に９％、９．５％および１０％（ｍ／Ｖ）の５Ｍデキストランを含有する溶液
である。これらの溶液へ、乳酸（０．７容積％）およびグリセロール（２容積％
）を添加する。ｐＨを、２Ｍ水酸化ナトリウム溶液を使用して７に調整する。

【００５７】 ＰＥＴ合成支持体を、デキストラン溶液を汲み上げてそして管状サンプル内部
へそれを運ぶ蠕動ポンプを使用して、その２つの端部を介して含浸する。含浸時
間は、約１０秒〜５分である。

【００５８】 含浸に続いて、サンプルを２４時間４０℃でオーブン中において乾燥する。

【００５９】 次いで、デキストランを架橋する工程を行う：サンプルを、ＢＤＧＥ（デキス
トランのグルコシド単位１００ｍｏｌ当たり２２．３ｍｏｌ）を添加したエーテ
ル溶液に配置する。架橋を１８時間行う。

【００６０】 次いで、サンプルを吸引フード下で、１時間乾燥する。

【００６１】 含浸および架橋の３つの連続サイクルを行い、次いでサンプルを、０．７％（
Ｖ／Ｖ）の乳酸および２％のグリセロール(Ｖ／Ｖ)を含む浸透水（osmosed wate
r）の溶液（ｐＨ７）を使用して、３時間、３回洗浄する。

【００６２】 ３）結果 各サンプルについて、サンプルのコーティング度Ｒ（％）を測定する。これは
、ポリサッカリド溶液でのその処理後のサンプルの質量の増加に対応する（Ｒ＝
(Ｐ₂−Ｐ₁）／Ｐ₁×１００、Ｐ₁はサンプルの初期質量を示し、そしてＰ₂は処理
後のその最終質量を示す)。

【００６３】 サンプルの静的浸透性（static permeability）をまた、ＩＳＯ／ＤＩＳ規格
７１９８：１９９６に従って測定する。これは、重量測定によってそして静水圧
下で、サンプルしたプロテーゼの所定領域を通過する水の流速を測定することを
含む。サンプルを、試験を行う前に水でそれを含浸するために周囲温度で純水に
浸漬させてもよく（“Ｈｙｄ浸透性”：水和状態（hydrated state）における浸
透性）、または試験に直接供してもよい（“Ｕｎｈｙｄ浸透性”：非水和状態（
unhydrated state）における浸透性）。浸透性は、単位面積（ｃｍ²）当たりの
水の流速（ｍｌ／分）の商である：それは、ｍｌ／分／ｃｍ²で表される。以下
の実施例において、別に記載される場合を除いて、測定される浸透性は、ＩＳＯ
／ＤＩＳ規格７１９８：１９９６に従って得られる静的浸透性である。

【００６４】 プロテーゼ１〜３について得られた結果を表Ｉにおいて列挙する。

【００６５】

【表１】

【００６６】 プロテーゼ１〜３は、サンプルの可撓性を維持すると同時に良好なシーリング
を作製するために必要とされる可撓性特性およびコーティング度を有する。

【００６７】 実施例２：ＢＤＧＥを使用して架橋されたデキストランで含浸された合成支持
体を含む、本発明に従う脈管プロテーゼの別の製造例 使用される合成支持体、デキストランおよび架橋剤は、実施例１に記載される
通りである。実施例１と対照的に、引き続くプロトコルは、プロトコルの終わり
に３つの３時間洗浄を伴う、含浸および架橋の２つのみの連続サイクルを含む。
含浸溶液は、第１サイクルの間にグリセロールや乳酸を含まずそして第２サイク
ルについては２容積％のグリセロールを含む、１０％（ｍ／Ｖ）の濃度の５Ｍデ
キストランからなる。ＢＤＧＥ濃度は、２サイクルについて同一であり、サンプ
ルに従って、１５％、１８％または２０％（デキストランのグリコシド単位１０
０ｍｏｌに対するモル数で）である。

【００６８】 必要とされる可撓性性質を有する、プロテーゼ４〜６について得られた結果を
、表IＩにおいて列挙する。

【００６９】

【表２】

【００７０】 実施例３：ＳＴＭＰで架橋されたデキストラン、並びに必要に応じて官能化ボ
リサッカリドで含浸された合成支持体を含む、本発明に従う脈管プロテーゼの製
造 １）使用される合成支持体、デキストランおよび架橋剤 使用される合成支持体（編まれたＰＥＴ）およびデキストラン（５Ｍデキスト
ラン）は、実施例１に記載のものと同一である。架橋剤は、ＳＴＭＰ（ソディウ
ムトリメタホスフェート、Ｓｉｇｍａにより販売）からなる。

【００７１】 約１０６ ９００ｇ／ｍｏｌの重量平均モル質量を有する、使用される官能化
デキストラン誘導体は、ＤＭＣ₃Ｂ₂である；それは、上述の一般式ＤＭＣ_aＢ_bＳ
ｕ_cＳ_dに対応し、ここでメチルカルボキシレート基での置換度（添字ａ）は０．
８７に等しく、そしてカルボキシメチルベンジルアミド基での置換度（添字ｂ）
は０．２６に等しく、添字ｃおよびｄは０に等しい。その製造プロトコルは、第
0 146 455号で公開された欧州特許に記載される通りである。

【００７２】 ２）プロトコル １０％（ｍ／Ｖ）のデキストランの５Ｍ溶液を、０．７％（容積で）の乳酸お
よび２％（容積で）のグリセロールの存在下で、０．２Ｍ水酸化ナトリウムにお
いて調製する。この溶液はまた、必要に応じて、官能化デキストラン誘導体ＤＭ
Ｃ₃Ｂ₂を含み得る；この場合、５Ｍデキストランは、溶解させる前にデキストラ
ンＤＭＣ₃Ｂ₂と固相で混合される。ＤＭＣ₃Ｂ₂の割合は、５Ｍデキストランの重
量に対して３重量％、即ち、官能化デキストラン誘導体と５Ｍデキストランとの
間で３／９７の重量比に等しい。

【００７３】 変形として、デキストラン溶液はまた、それぞれ、５Ｍデキストランの重量に
対して１重量％、３重量％、５重量％または１０重量％の割合で、即ち、１／９
９、３／９７、５／９５および１０／９０のヘパリンと５Ｍデキストランとの間
の重量比で、ヘパリン（抗凝固剤）を含み得る。

【００７４】 このように調製される含浸溶液を４０℃で２０分間加熱し、そして次いで、０．
２Ｍ水酸化ナトリウム０．５ｍｌで予め希釈したＳＴＭＰ（５Ｍデキストランお
よびＤＭＣ₃Ｂ₂デキストラン（後者が存在する場合）のグルコシド単位１００ｍ
ｏｌ当たり８ｍｏｌ）を、含浸溶液に添加する。

【００７５】 合成支持体を、周囲温度で１０秒から５分間、実施例１に記載されるのと同一
様式で、この溶液で含浸する。ＤＭＣ₃Ｂ₂デキストランが存在する場合、それは、
５Ｍデキストランで“共架橋される”だろう。

【００７６】 プロテーゼを２時間４０℃で乾燥し、次いで、０．７％（Ｖ／Ｖ）の乳酸およ
び２％のグリセロール（Ｖ／Ｖ）を含む浸透水（osmosed water）の溶液（ｐＨ
７）を使用して、３時間、３回洗浄する。

【００７７】 ３）結果 プロテーゼ７〜１２について得られた結果を、表IIIにおいて列挙する；コー
ティング量に関するパラメータＲおよび浸透性を、実施例１に示すように測定す
る。

【００７８】

【表３】

【００７９】 プロテーゼ７〜１２は可撓性である。官能化デキストラン誘導体ＤＭＣ₃Ｂ₂ま
たはヘパリンの存在は、架橋反応を妨げず、水和状態における浸透性は、サンプ
ル７〜１２で同一である。

【００８０】 実施例４：ＳＴＭＰで架橋されたデキストランで含浸された合成支持体を含む
、本発明に従う脈管プロテーゼの別の製造例 合成支持体（編まれたＰＥＴ）および架橋剤（ＳＴＭＰ）は、実施例３におい
て使用したものと同一である。使用されるデキストランは、Ｐｈａｒｍａｃｉａ
Ｂｉｏｔｅｃｈ社によって販売される、４６０ ０００ｇ／ｍｏｌに等しい重量
平均モル質量を有するＴ５００である。

【００８１】 方法は、実施例３におけるのと同一の様式で行われ、含浸溶液は、２２％（ｍ
／Ｖ）のＴ５００デキストラン、０．７％（容積で）の乳酸および２％（容積で
）のグリセロールを含む。ＳＴＭＰは、８％の割合で存在する（デキストランの
グルコシド単位１００ｍｏｌ当たりのモルに基づく）。

【００８２】 プロテーゼサンプル１３が得られ、これは必要とされる可撓性および不浸透性
（impermeability）特性を有し、そしてこの特徴を表IVにおいて列挙する：

【００８３】

【表４】

【００８４】 実施例５：ＳＴＭＰで架橋されたデキストランで含浸された合成支持体を含む
、本発明に従う脈管プロテーゼの他の製造例 使用される合成支持体(編まれたＰＥＴ)、架橋剤（ＳＴＭＰ）およびデキスト
ラン（Ｔ５００または５Ｍ）は、実施例３および４に記載されるものと同一であ
る。

【００８５】 方法は、実施例３におけるのと同一様式で行われ、含浸溶液は、２０％（ｍ／
Ｖ）のＴ５００デキストランまたは１０％（ｍ／Ｖ）の５Ｍデキストランのいず
れか、ならびに０．７％（容積で）の乳酸および２％（容積で）のグリセロール
を含む。ＳＴＭＰは、８％の割合で存在する（デキストランのグルコシド単位１
００ｍｏｌ当たりのモルに基づく）。

【００８６】 接触時間（contact time)、即ち、デキストラン溶液へのＳＴＭＰの添加と、
この溶液でのサンプルの含浸とを隔てる時間間隔は、様々である。

【００８７】 プロテーゼサンプル１４〜１９が得られ、これは必要とされる可撓性および不
浸透性（impermeability）特性を有し、そしてこの特徴を表Ｖにおいて列挙する
：

【００８８】

【表５】

【００８９】 従って、本発明に従う可撓性および不浸透性脈管プロテーゼは、合成支持体の
含浸の前に、デキストラン溶液との架橋剤の接触時間を変化させることによって
得られ得る。

【００９０】 デキストラン架橋反応は、架橋剤がデキストラン溶液と接触するように配置さ
れると直ぐに開始し、含浸溶液の粘度の増加が生じる。プロテーゼ支持体の含浸
は、含浸溶液が液性でありすぎる（これは、コーティングを非常に薄くする）、
そして粘性でありすぎる（そのとき、プロテーゼ支持体を含浸し難い）のいずれ
でもない段階で、行われなければならない。上記の表Ｖにおける実施例において
提供される接触時間は、所望の特徴を有するプロテーゼを得るために好適である
。

【００９１】 実施例６：ガンマ照射での本発明に従うプロテーゼの滅菌 実施例３において調製したプロテーゼサンプル７を、２５ｋＧｒａｙの線量で
、ガンマ照射で滅菌した。滅菌プロテーゼの浸透性を、同一の非滅菌プロテーゼ
のものと同様に測定した。結果を表VIに与える。

【００９２】

【表６】

【００９３】 プロテーゼは、ガンマ線での滅菌後、リークタイト（leaktight）および可撓
性のままである。ガンマ照射は、プロテーゼコーティングの外観を劣化させない
ようである。逆に、それらは、おそらく、架橋剤のものと類似の効果を有する：
それらは、それら自体の間で相互作用し得るフリーラジカルを作り、そしてこれ
は共有結合を形成し得る。

【００９４】 実施例７：本発明に従う脈管プロテーゼの積分水浸透性（integral water per
meability）の測定 １）プロテーゼサンプルの性質 １０％（ｍ／Ｖ）の５Ｍデキストランを含む、実施例３で調製したプロテーゼ
７を使用する。そしてまた、１０％（ｍ／Ｖ）の５Ｍデキストランおよび７％（
５Ｍデキストランの量に対する重量に基づいて表される）（即ち、７／９３に等
しい、官能化デキストラン誘導体と５Ｍデキストランとの重量比）のＤＭＣ₃Ｂ₂ を使用して、実施例３に従って調製した、プロテーゼ２０を使用する。架橋剤は
、ＳＴＭＰであり、デキストランのグルコシド単位１００ｍｏｌ当たり８ｍｏｌ
％の割合まで、含浸溶液に存在する。

【００９５】 ２）測定されるパラメータ プロテーゼ７および２０について、以下を測定する： ・水和または非水和状態における静的浸透性（static permeability）（実施
例１に示されるように、ＩＳＯ／ＤＩＳ規格７１９８：１９９６に従って測定さ
れる）； ・規格化ＩＳＯ手順７１９８に従って評価される、積分水浸透性（integral w
ater permeability）。下記の表VIIは、サンプルの長さ（１、ｃｍで）、回収さ
れる水の容積（Ｖ、ｍｌ／分で）、そして積分浸透性(integral permeability)
（Ｐ、ｍｌ／分／ｃｍ²）を示す； ・実施例１に記載される通りに測定される、コーティング度（the degree of
coating）Ｒ； ・相対湿度ＲＨの割合、このパラメータは、サンプルの可撓性に対して影響を
有する。サンプルを、乾燥状態（４０℃のオーブンでの処理後）および湿潤状態
（８０％湿度のベルジャー（bell-jar）に配置されたサンプル）で計量し、乾燥
サンプルの重量に対するこれらの計量間の差異は、相対湿度ＲＨの割合を与える
。

【００９６】 ３）結果 必要とされる可撓性および浸透性特性を特に示す、サンプル７および２０の特
徴を、表VIIにおいて列挙する。

【００９７】

【表７】

【００９８】 実施例８：本発明に従う脈管プロテーゼのためのコーティング剤のインビトロ
細胞生体適合性 この実施例を、本発明に従う脈管プロテーゼのためのコーティング剤として使
用されるデキストランゲルの細胞適合性（cytocompatibility）を研究すること
へ向ける。

【００９９】 Ｉ）デキストランゲルの調製 デキストランゲルを以下の様式で調製する： −非官能化デキストランゲル（ゲルＡ）：０．７％の乳酸および２％のグリセ
ロールを含有する滅菌０．２Ｍ ＮａＯＨ水溶液中の、Ｓｉｇｍａ社によって販
売される５×１０⁶ｇ／ｍｏｌに等しい重量平均モル質量を有する５Ｍデキスト
ランの１０％溶液（溶液Ａ）を、調製する； −非官能化デキストランゲルおよび官能化デキストランゲル（ゲルＢ〜Ｄ）：
０．７％の乳酸および２％のグリセロールを含有する滅菌０．２Ｍ ＮａＯＨ水
溶液中の、上述の５Ｍデキストランおよび非官能化デキストランの重量に対して
３％(ｗ／ｖ)の式ＤＭＣ_aＢ_bＳｕ_cＳ_dの官能化デキストランを含有する１０％溶
液（溶液Ｂ〜Ｄ）を、調製する。使用される式ＤＭＣ_aＢ_bＳｕ_cＳ_dのデキストラ
ンの置換添字ａ、ｂ、ｃおよびｄを、下記の表VIIIに与える：

【０１００】

【表８】

【０１０１】 このように調製したデキストラン溶液Ａ〜Ｄを、４０℃で２０分間加熱し、次
いで、０．５ｍｌの０．２Ｍ水酸化ナトリウムに予め希釈した架橋剤（実施例３
において上記に記載のように、グルコシド単位１００ｍｏｌ当たり８ｍｏｌのＳ
ＴＭＰ）を、これらのデキストラン溶液へ添加する。

【０１０２】 次いで、混合物を、１ウェル当たり１５０μｌの割合で、１２−ウェル培養プ
レートに注ぐ。架橋反応が完了したときに、このように得られたゲルを滅菌ＰＢ
Ｓで３回洗浄する。

【０１０３】 ＩＩ）ゲルＡ〜Ｄへの内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６の接着の研究 ヒト内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）および２
μＣｉ／ｍｌのトリチウム化プロリン（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を含有するＤＭＥＭ
培養培地３ｍｌへ、２×１０⁶細胞の割合で接種する。３７℃で２４時間培養後
、細胞をトリプシン溶液を使用して剥離し、１２００ｒｐｍで遠心分離し、次い
で１０％ＦＣＳを含有するＤＭＥＭ培養培地に再懸燭する。次いで、細胞を、Ｍ
ａｌａｓｓｅｚ細胞を使用してカウントし、希釈し、そして１ウェル当たり５０
０００細胞の割合で、デキストランゲルＡ〜Ｄを含有するプレート上へ接種す
る。次いで、培養プレートを、３７℃で３時間インキュベートする。

【０１０４】 インキュベーション期間の終わりに、デキストランゲルへ接着していない細胞
を除去するために、接種したウェルをＰＢＳで２回リンスする。

【０１０５】 次いで、付着細胞を、トリプシン溶液を使用して剥離し、そして次いで、各ウ
ェルの細胞を、５ｍｌのシンチレーション液体（Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ（登録商標
）“Ｈｉｓａｆｅ”、Ｗａｌｌａｃｋ）を含有するカウンテイングフラスコへ配
置する。

【０１０６】 各フラスコに存在する放射活性の測定を、１フラスコ当たり４の１分カウント
の割合で、シンチレーションカウンター（ＬＫＢ）を使用して行う。

【０１０７】 ゲルＢ〜Ｄへの細胞の接着の割合を、コントロールウェル（即ち、非官能化デ
キストランゲルＡを含有するウェル）において放出される放射活性に対して決定
する。

【０１０８】 得られた結果を、下記の表IXに与える：

【０１０９】

【表９】

【０１１０】 これらの結果は、官能化デキストラン誘導体の存在が、内皮細胞の接着を促進
することを可能にするということを示す。

【０１１１】 同様の結果が、ラットの平滑筋細胞（ＣＭＩ）についての同一実験を行うこと
によって得られた。

【０１１２】 ＩＩＩ）ゲルＡおよびＣ上でのＥＡ．ｈｙ ９２６内皮細胞の増殖の研究 ヒト内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６を、デキストランゲルＡおよびＣ上に、１０
％ＦＣＳを含有するＤＭＥＭ培養培地へ、１ｃｍ²当たり１００００細胞の割合
で接種する。

【０１１３】 ５日間の培養後、細胞をＰＢＳで３回リンスし、次いでトリプシン溶液５００
μｌで剥離し、そしてアイソトロン(Isotron)電解質溶液に懸濁させる。次いで
、細胞を、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ（登録商標）カウンティングマシー
ンを使用してカウントする。

【０１１４】 ゲルＣ上において観察された細胞増殖についての結果を、ゲルＡ上において観
察された細胞増殖の割合として表し、下記の表Ｘに与える。

【０１１５】

【表１０】

【０１１６】 これらの結果は、官能化デキストラン誘導体の存在は、内皮細胞の増殖を促進
することを示す。

【０１１７】 類似の結果が、ラットの平滑筋細胞（ＣＭＩ）についての同一実験を行うこと
によって得られた。

【０１１８】 結果のこのセットは、本発明に従う官能化デキストラン誘導体の存在は、内皮
細胞の接着および増殖を促進することを示し、これは、それがコーティングする
脈管プロテーゼの生物学的媒体への組み込み（integration）を促進するために
重要な特性である。

【０１１９】 実施例９：本発明に従う脈管プロテーゼのインビトロ細胞生体適合性 １）プロトコル ヒト内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６を用いて実施例３で合成したプロテーゼ７お
よび８の細胞適合性を分析するために、１ｃｍ²サンプルを、プロテーゼから切り
取り、ガンマ照射で滅菌し、そして２４−ウェル培養プレートヘ導入する。滅菌
ガラス挿入物をサンプル上に配置して、培養培地にいったん浸漬されたそれらが
巻き上がる（rolling up）ことを防ぐ。

【０１２０】 プロテーゼサンプルを、培養培地[即ち、Ｌ−グルタミン(２ｍＭ)、ＨＡＴ（２％
Ｖ／Ｖ）および１０％ウシ胎仔血清（ＧＩＢＣＯ）を補足された、４５００ｍｇ
／ｍｌのグルコースを含む、ピルビン酸ナトリウムを含まないＤＭＥＭ培地（Ｇ
ＩＢＣＯ）]中に２４時間維持し、次いで培地を吸引し、そしてサンプルにヒト
内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６を５×１０⁴細胞／ｃｍ²の密度で接種し、各サンプ
ルを３重で調製する。接種したサンプルを、静的条件下、５％ＣＯ₂を含む湿っ
た雰囲気下で、３７℃のインキュベーターに配置する。培地を２日毎で新しくす
る。

【０１２１】 細胞増殖を、逆光学顕微鏡（inverse optical microscope）を使用して、８日
間、毎日観察する。この目的のために、サンプルをＰＢＳ（非滅菌）で３回洗浄
し、４％ホルムアルデヒドに固定し、ＰＢＳにおいて更に３回洗浄し、次いでク
マシーブルー（５％）で染色し、そして最後に７０％エタノールで脱色し、その
結果、細胞膜のみが着色したままとなる。顕微鏡下で、細胞は、無色バックグラ
ウンド上で青色に見える。

【０１２２】 ２）結果 図２は、脈管プロテーゼサンプル７（−ν−曲線）および８（−π−曲線）に
おける永久（permanent）ヒト内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６についての増殖曲線（
growth curves）を示し、時間（日）はｘ軸上に与えられ、そしてｌｃｍ²当たり
の細胞数（×１０）はｙ軸上に与えられる。

【０１２３】 有意な差異が、サンプル７および８における細胞の増殖間において見られる：
ＤＭＣ₃Ｂ₂がプロテーゼコーティングに存在する場合、細胞数は、日が経つにつ
れて徐々に増加し、プロテーゼにおける官能化デキストラン誘導体の存在がヒト
内皮細胞ＥＡ．ｈｙ ９２６の増殖を改善することを示している。

【０１２４】 同様の結果が、他の内皮細胞培養物、即ちヒト臍帯静脈の内皮細胞およびウシ
大動脈の内皮細胞で得られた。従って、一般的に、本発明に従う脈管プロテーゼ
における官能化デキストラン誘導体の存在は、内皮細胞の増殖を促進するようで
あり、これは、生物学的媒体への移植片の組み込み（integration）を促進する
ために重要な特性である。

【０１２５】 実施例１１：架橋されていないデキストランでコーティングされた脈管プロテ
ーゼのものと比較しての、本発明に従う脈管プロテーゼの安定性の研究 １）脈管プロテーゼの製造 本発明に従う脈管プロテーゼを、実施例３に記載のプロトコルに従って、そし
て上記実施例１に記載の支持体およびデキストランならびに上記実施例３に記載
の架橋剤を使用して、作製した。

【０１２６】 比較目的のために、本発明の一部を形成しない脈管プロテーゼを、架橋剤をデ
キストラン溶液に添加しなかったこと以外には同一の条件下で、作製した。

【０１２７】 ２）コーティングの安定性の研究 この研究のために使用したアセンブリは、サーモスタットで３７℃に維持され
た水浴、および脈管プロテーゼ内の溶液の連続流を循環するためのポンプからな
る。ポンプの流速は、１秒当たり７×１０^-5ｍ³に設定して、動脈循環の生理学
的流速の条件を再現した。

【０１２８】 循環溶液のサンプルを、放出されたデキストラン量を定量するために、一定の
間隔で採取する。放出されたデキストランを、放出されたデキストラン量が非常
に少ない場合には必要に応じて循環溶液の凍結乾燥および希釈後に、Ｄｕｂｏｉ
ｓら（Analytical Chemistry，1956. 3 (28), 350-356）の方法に従う、濃硫酸
／フェノール媒体における炭水化物の比色分析によって、間接的に評価する。

【０１２９】 本発明に従う（架橋化デキストランで含浸された）プロテーゼについて得られ
た結果を、下記の表XIに与える：

【０１３０】

【表１１】

【０１３１】 本発明に従わない（架橋されていないデキストランで含浸された）プロテーゼ
によって自然に放出されたデキストラン量を測定することは可能でなかった。何
故ならば、デキストランは、プロテーゼの最初の洗浄の間に、即ち閉鎖循環にお
ける水流と接触させてプロテーゼを配置する前でさえ、全て放出されたからであ
る。デキストランのこの放出は、プロテーゼのシーリング特性を破壊する結果と
なる。

【０１３２】 これに反して、２４時間の循環後、本発明に従う（即ち、共有結合で架橋され
たデキストランで含浸された）脈管プロテーゼによって放出されたデキストラン
量は、プロテーゼを含浸するデキストランの総量の約０．０１４％を示す７０μ
ｇでプラトーに達する。この無視し得る量は、本発明に従う脈管プロテーゼの長
期にわたる非常に高い化学的安定性を示す。

【０１３３】 前述の文章から明らかであるように、本発明は、たった今より詳細に記載した
実行、調製または適用のそのモードに決して限定されず；逆に、それは、本発明
のコンテクストまたは範囲から逸脱することなしに、当業者に予想され得る全て
の変形を含む。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１はグルコシド単位Ｄへ結合された、種々の化学基ＭＣ、Ｂ、ＳｕおよびＳ
で置換された官能化デキストラン誘導体の構造を図示する；例として、グルコシ
ド単位の種々の炭素上の置換位置が、炭素２上に示される。

【図２】 図２は、非官能化デキストラン誘導体（曲線−ν−）または非官能化デキスト
ラン誘導体および官能化デキストラン誘導体（曲線−π−）のいずれかを含む本
発明に従う脈管プロテーゼのサンプル上における、永久ヒト内皮細胞ＥＡ．ｈｙ
９２６の増殖曲線を示し、時間（日）はｘ軸上に与えられ、そしてｌｃｍ²当た
りの細胞数（×１０）はｙ軸上に与えられる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，Ｐ Ｔ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ， ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 レツールニュール ディディエル フランス国 エフ−92350 レ プレシス ロビンソン リュ デ ラ フォッセ バザン 17 Ｆターム(参考） 4C081 AB12 AC03 BA14 BA15 BB07 CA02 CA09 CA16 CA21 CA24 CD03 DA03 DC14 EA02 EA06 EA11 EA12

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも１つの共有結合で架橋されたデキストランおよび
   ／または少なくとも１つの共有結合で架橋された官能化デキストラン誘導体で含
   浸された合成支持体を含むことを特徴とする、可撓性脈管プロテーゼ。
2. 【請求項２】 前記官能化デキストラン誘導体と前記デキストランとの重量
   比が、１／９９〜３０／７０、好ましくは３／９７〜７／９３、そしてなおより
   好ましくは約５／９５に等しいことを特徴とする、請求項１に記載のプロテーゼ
   。
3. 【請求項３】 前記合成支持体がまた、少なくともカルボキシレートおよび
   ／またはスルフェート官能基で官能化された、少なくとも１つの共有結合的に架
   橋された天然または合成ポリサッカリドで含浸されていることを特徴とする、請
   求項１または請求項２に記載のプロテーゼ。
4. 【請求項４】 前記官能化ポリサッカリドと前記デキストランとの重量比が
   、有利には１／９９〜３０／７０、そして好ましくは１／９９〜２０／８０であ
   ることを特徴とする、請求項３に記載のプロテーゼ。
5. 【請求項５】 前記官能化デキストラン誘導体と前記官能化ポリサッカリド
   との重量比が１／９９〜９９／１であることを特徴とする、請求項３または請求
   項４に記載のプロテーゼ。
6. 【請求項６】 前記請求項のいずれか１つに記載の脈管プロテーゼの製造方
   法であって、以下の工程： ａ）少なくとも１つのデキストランおよび／または少なくとも１つの官能化デ
   キストラン誘導体の溶液の調製、 ｂ）この溶液を使用しての前記合成支持体の含浸、 ｃ）該デキストランおよび／または該官能化デキストラン誘導体の架橋、 を含むことを特徴とする、方法。
7. 【請求項７】 工程ａ）とｂ）との間に、工程ａ）の間に調製した溶液への
   架橋剤の添加を含むことを特徴とする、請求項６に記載の方法。
8. 【請求項８】 工程ｂ）およびｃ）が、３〜１０のｐＨで、約１０〜４０℃
   の温度で、そして約１５０分以下の間、同時に行われることを特徴とする、請求
   項７に記載の方法。
9. 【請求項９】 工程ｂ）とｃ）との間に、前記支持体の乾燥工程、続いて少
   なくとも１つの有機溶媒中の架橋剤の溶液での該支持体の含浸工程を含むことを
   特徴とする、請求項６に記載の方法。
10. 【請求項１０】 工程ｂ）およびｃ）が、各々、３〜１０のｐＨで、そして
    約１０〜４０℃の温度で行われること、工程ｂ）が約１５０分以下の間行われる
    こと、そして工程ｃ）が約１５分〜１８時間の間行われることを特徴とする、請
    求項９に記載の方法。
11. 【請求項１１】 少なくとも１つのデキストランおよび／または少なくとも
    １つの官能化デキストラン誘導体の溶液を調製すること、この溶液で前記支持体
    を含浸すること、該支持体を乾燥すること、少なくとも１つの有機溶媒中の架橋
    剤の溶液で該支持体を含浸すること、ならびに前記デキストランおよび／または
    前記官能化デキストラン誘導体を架橋することの連続工程が、該支持体の乾燥後
    、少なくとも１回、好ましくは２〜３回繰り返されることを特徴とする、請求項
    ９または請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 デキストランおよび／または官能化デキストラン誘導体を
    架橋する工程ｃ）に、前記プロテーゼを洗浄する工程が続くことを特徴とする、
    請求項６〜１１のいずれか１つに記載の方法。
13. 【請求項１３】 工程ａ）の間に調製される少なくとも1つのデキストラン
    および／または少なくとも１つの官能化デキストラン誘導体の前記溶液がまた、
    少なくともカルボキシレートおよび／またはスルフェート官能基で官能化された
    、少なくとも１つの天然または合成ポリサッカリドを含むことを特徴とする、請
    求項６〜１２のいずれか１つに記載の方法。
14. 【請求項１４】 工程ａ）の間に調製される少なくとも１つのデキストラン
    および／または少なくとも１つの官能化デキストラン誘導体の溶液がまた、可塑
    剤および柔軟剤から選択される少なくとも１つの添加剤、および／または抗凝固
    剤、抗菌剤および抗感染症剤からなる群から選択される１以上の有効成分を含む
    ことを特徴とする、請求項６〜１３のいずれか1つに記載の方法。
15. 【請求項１５】 請求項６〜１４のいずれか１つに記載の方法によって得ら
    れ得ることを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１つに記載の可撓性脈管プロ
    テーゼ。