JP2001503612A

JP2001503612A - 新規ヘモポイエチン受容体およびこれをコードする遺伝子配列

Info

Publication number: JP2001503612A
Application number: JP51338998A
Authority: JP
Inventors: ヒルトン，ダグラス・ジェイムズ; ニコラ，ニコス・アントニー; ファーレイ，アリソン; ウィルソン，トレイシー; ツァン，ジャン―グオ; アレキサンダー，ウォーレン; ラカー，スティーブン; ファブリ，ルイス; 哲郎小嶋; 正嗣前田; 康文菊池; ナッシュ，アンドリュー
Original assignee: AMRAD POERATIONS PTY.LTD.
Current assignee: AMRAD POERATIONS PTY.LTD.
Priority date: 1996-09-11
Filing date: 1997-09-11
Publication date: 2001-03-21
Also published as: EP0931149B1; WO1998011225A2; WO1998011225A3; EP0931149A2; AUPO224696A0

Abstract

(57)【要約】本発明は一般に新規ヘモポイエチン受容体、またはその誘導体およびこれをコードする遺伝子配列に関する。本発明の新規受容体とサイトカインリガンド間の相互作用は広範な種類の細胞の増殖、分化および生存を容易にする。本発明の新規受容体、またはその誘導体およびこれをコードする遺伝子配列は、その受容体とのリガンドと相互作用に基づく広範囲のアゴニスト、アンタゴニスト、治療剤および診断試剤の開発に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】新規ヘモポイエチン受容体およびこれをコードする遺伝子配列本発明は新規ヘモポイエチン受容体、またはその誘導体およびこれをコードする遺伝子配列に関する。本発明の新規受容体とリガンド間の相互作用は広範な種類の細胞の増殖、分化および生存を容易にする。本発明の新規受容体、またはその誘導体およびこれをコードする遺伝子配列は、その受容体とのリガンドと相互作用に基づく広範囲のアゴニスト、アンタゴニスト、治療剤および診断試剤の開発に有用である。この明細書中に挙げられた大量の刊行物の書誌的事項は詳細な説明の後に記載されている。明細書中に挙げられたヌクレオチドの配列番号(SEQ ID N0s.)およびアミノ酸配列は参考文献一覧表に従って定義されている。この明細書および下記の請求の範囲を通じて特に断らなければ、用語「含む(c omprise、comprisesまたはcomprising)」ははっきりと述べられた整数または整数群を含むことを意味し、他の整数または整数群を排除するものではない。急速に進歩する高度な組換ＤＮＡ技術は医学および同類の健康分野への研究を非常に容易にしている。サイトカインの研究は特に重要であり、具体的にはこれらの分子は広範な種類の細胞の増殖、分化および機能の制御するからである。組換サイトカインの投与およびサイトカイン機能および／または合成の制御は次第にある種の疾患の症状の処置の医学的研究の焦点になりつつある。あの種のサイトカインおよび細胞機能の他の分泌制御剤の発見にもかかわらず、治療計画に直接用いられ、標的とされるサイトカインは比較的少ない。例えば、インターロイキン(ＩＬ)−１１は機能的に多面発現的分子(1、2)であり、最初はＩＬ−６依存性形質細胞腫細胞株、Ｔ１１６５(3)の増殖を刺激する能力をもつことを特徴とした。ＩＬ−１１の他の生物学的作用には多能力ヘモポイエチン親細胞の増殖(4、5、6)、巨核球および血小板形成の増大(7、8、9、10)、急性期蛋白合成の刺激(11)および脂肪細胞リポ蛋白リパーゼ活性(11、13)の阻害が含まれる。ＩＬ−１１群の他の重要なサイトカインには、ＩＬ−６、白血病阻害因子(ＬＩＦ)、オンコスタチンＭ(ＯＳＭ)およびＣＮＴＦが含まれる。これらすべてのサイトカインは、細胞の増殖、分化および生存における著しい活性を伴なう多面発現的性質を示す。ヘモポイエチン受容体群の構成員は細胞外領域の保存アミノ酸ドメインの存在によって区別される。しかし、種々の受容体の他のヘモポイエチン受容体ドメイン間の低いアミノ酸配列保存にもかかわらず、それらはすべて２個のフィブロネクチン−型III繰り返し単位を中心に置く類似の３次構造であると仮定されると予告されている(18、19)。ヘモポイエチン受容体族の規模は現在は大きくなっており、インターロイキン −２(ＩＬ−２)、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ− ９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、顆粒球コロニー刺激因子(Ｇ−ＣＳＦ)、顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ(ＧＭ−ＣＳＦ)、エリスロポイエチン、スロンボポイエチン、レプチン、白血病阻害因子、オンコスタチン− Ｍ、線毛神経栄養因子、カルディオトロフィン、成長ホルモンおよびプロラクチンを含む多数のサイトカインのための細胞表面受容体を含む。ヘモポイエチン受容体族の構成員の多くは古典的な細胞表面受容体として作用し、細胞表面でそれらの同族のリガンドと結合し、細胞間シグナル形質導入を開始し、受容体のあるものは天然生成可溶体で産生される。これらの可溶性受容体はいずれもサイトカインアンタゴニストとして作用し、サイトカインに結合し、細胞表面受容体(例えば、ＬＩＦ結合蛋白)との生産的相互作用を阻害するか；(20)、またはアゴニストとして、サイトカインと結合し、細胞表面受容体成分(例えば、可溶性インターロイキン−６受容体a−鎖）との相互作用を増大させる；(21)。さらに、この族の他の構成員は、細胞表面形態の証拠はなく、分泌蛋白としてのみ産生されるようである。これに関して、ＩＬ−１２ p４０サブユニットは有用な例である。このサイトカインＩＬ−１２は、ＩＬ−６などのサイトカインとの類似性を示すp３５サブユニット(22)と、ＩＬ−６受容体a−鎖との類似性を有するp４０サブユニット(23)から構成されるヘテロ２量体として分泌される。この場合、この可溶性受容体はサイトカインそれ自体の一部として働き、活性蛋白の形成に必須である。サイトカイン(例えば、ＩＬ−p４０)、サイトカインアゴニスト(例えば、ＩＬ−６受容体a−鎖)またはサイトカインアンタゴニスト(例えば、ＬＩＦ結合蛋白）として作用するのに加えて、ヘモポイエチン受容体の構成員は小さい分子のサイトカイン様物質の発見に有用であった。例えば、２個の商業的に価値のあるサイトカインのペプチド様物質、エリスロポイエチンおよびスロンボポイエチン、の発見は、エリスロポイエチンおよびスロンボポイエチン受容体(24、25)の可溶性体に結合可能なペプチドの選択に集中して行われた。これらのサイトカインの重要性および多因子的性質のために、多面発現的サイトカインについて細胞結合性および可溶性の両方を含む受容体を確認する必要があった。このような受容体の確認は多面発現的サイトカインおよびある範囲の治療および診断試剤の開発を可能にする。従って、本発明の１つの態様は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードする配列をコードするか、または相補的であるヌクレオチドの配列を含む核酸分子に関する。さらに具体的には、本発明は、モチーフ： Trp Ser Xaa Trp Ser［SEQ ID NO:1］（式中、Xaaはいずれかのアミノ酸であり、好ましくはAsp、Gluである）を有する新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードする配列をコードするか、または相補的であるヌクレオチドの配列を含む核酸分子を提供する。なおさらに具体的には、本発明は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードする配列をコードするか、または相補的であるヌクレオチドの配列を含む核酸分子であり、上記受容体は、モチーフ： Trp Ser Xaa Trp Ser［SEQ ID NO:1］ (式中、Xaaはいずれかのアミノ酸であり、好ましくはAsp、Gluである)を含み、上記核酸分子は上記分子と低いストリンジェントな条件下で、４２℃にて、 5N(A/G)CTCCA(A/G)TC(A/G)CTCCA 3N［SEQ ID NO:7］および 5N(A/G)CTCCA(C/T)TC(A/G)CTCCA 3N［SEQ ID NO:8］とのハイブリッド形成によって同定可能である。なおまたさらに具体的には、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１２に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１２に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。関連する具体例において、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１４に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１４に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。別の関連する具体例において、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１６に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１６に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。さらなる関連する具体例において、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１８に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。なおさらに関連する具体例において、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ: ２４に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:２４に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。なおさらにさらなる具体例において、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ: ２８に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:２８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。なおさらに、別の具体例において、本発明は、実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:３８に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:３８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、またはこれと低いストリンジェントな条件下で、４２℃にてハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列、ここで上記ヌクレオチド配列は新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードしている、を含む分離された核酸分子を提供する。用語「受容体」はその最も広い意味に用いられ、リガンドと、結合し(binding )、共同し(associating)、またはさもなくば、相互作用し(interacting)得る分子を含む。一般に、本発明は必ずしもそのように限定されないが、相互作用は信号を伝える作用(signalling effect)を有する。例えば、この「受容体」は可溶性であってもよく、しばしばサイトカイン結合蛋白と称される。受容体はそのリガンドまたは複数のリガンドが同定されているかされていないかにかかわらず、受容体と見なされ得る。好ましくは、新規受容体は哺乳動物または鳥類から誘導され得る。具体的には、好ましい哺乳動物には、ひと、霊長類、実験動物(例えば、マウス、ラット、ウサギ、モルモット)、家畜動物(例えば、羊、馬、豚、牛)、愛玩動物(例えば、犬、猫)、狩猟可能な野生動物(例えば、鹿、狐、カンガルー)が含まれる。本発明はマウスに関して例示されているが、本発明はすべての動物、特にひとに及ぼすことができる。本発明は部分的に有限の配列類似性によるヘモポイエチン受容体族の構成員を同定する能力に基礎をおいている。この研究法に基づいて、新規受容体をコードする遺伝子配列が本発明に従って同定された。発現された遺伝子配列はこの明細書で「ＮＲ６」と称する。ＮＲ６の種々の形態は、例えば、ＮＲ６.１、ＮＲ６. ２およびＮＲ６.３と命名する。これらの分子のヌクレオチドおよび対応するアミノ酸はそれぞれＳＥＱＩＤＮＯｓ:１２、１４および１６に示されている。好ましいＮＲ６のひとおよびネズミの核酸配列は脳、肝臓、腎臓、新生児、胎芽または癌から誘導された組織からの配列を含む。４２℃における低いストリンジェントというのは、ハイブリッド形成条件のための少なくとも約1v/v％〜少なくとも約１５v/v％のホルムアミドおよび少なくとも約１Ｍ〜少なくとも約２Ｍの塩、および洗浄条件のための少なくとも約１Ｍ〜少なくとも約２Ｍの塩を含みまた包囲する。別のストリンジェントな条件は、必要ならば例えば中程度のストリンジェントの場合に適用することができ、ハイブリッド形成条件のための少なくとも約１６v/v％〜少なくとも約３０v/v％のホルムアミドおよび少なくとも約０.５Ｍ〜少なくとも約０.９Ｍの塩、および洗浄条件のための少なくとも約０.５Ｍ〜少なくとも約０.９Ｍの塩を含みまた包囲する。または高いストリンジェントというのは、ハイブリッド形成条件のための少なくとも約３１v/v％〜少なくとも約５０v/v％のホルムアミドおよび少なくとも約０.０１Ｍ〜少なくとも約０.１５Ｍの塩、および洗浄条件のための少なくとも約０.０１Ｍ〜少なくとも約０.１５Ｍの塩を含みまた包囲する。本発明によって意図される核酸分子は一般に分離された形態であり、好ましくはｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡ分子である。好ましい具体例において、核酸分子はベクター中に、最も好ましくは適当な宿主細胞中に発現可能な発現ベクター中に存在する。具体的には有用な宿主細胞には、原核細胞、哺乳動物細胞、酵母細胞および昆虫細胞が含まれる。細胞はまた細胞系であってもよい。従って、本発明の他の態様は前記の新規ヘモポイエチンまたはその誘導体をコードする核酸分子を含み、選択された宿主細胞中に発現可能である発現ベクターを提供する。本発明の別の態様は、ＮＲ６またはその誘導体をコードするヌクレオチド配列をクローニングする方法であって、上記方法はＳＥＱＩＤＮＯ：１に記載されたアミノ酸配列をコードする配列についてヌクレオチドデータベースを検索し、検索中に存在するヌクレオチドに基づいて１またはそれ以上のオリゴヌクレオチドプライマーを設計し、上記１またはそれ以上のオリゴヌクレオチドを用いて核酸をスクリーニングし、ついで、上記ＮＲ６またはその部分をコードするクローンを得ることを特徴とする方法を提供するものである。上記のようにしてＮＲ６をコードする新規ヌクレオチド配列を得た後、高いストリンジェントの条件でｃＤＮＡクローンを結合するオリゴヌクレオチドを設計することができる。直接コロニーハイブリッド形成を採用しても良いし、またはＰＣＲ増幅を用いることもできる。高いストリンジェント条件下で結合するオリゴヌクレオチドプライマーは新規ＮＲ６をコードする分子の高速クローニングを確実にし、クローニングアーチファクトをスクリーニングするのに時間が短くてよい。しかし、用いられたプライマーによっては、低いかまたは中程度のストリンジェントな条件を用いてもよい。別法として、ＳＥＱＩＤＮＯ：７またはＳＥＱＩＤＮＯ：８に記載のオリゴヌクレオチドを用いるなどして、ライブラリーを直接スクリーニングするか、または両方の混合物のオリゴヌクレオチドを用いてもよい。さらに、ＳＥＱＩＤＮＯ：２〜１１に記載の１またはそれ以上のオリゴヌクレオチドも用いることができる。好ましくは、核酸ライブラリーはｃＤＮＡ、ゲノム、ｃＤＮＡ発現、またはｍＲＮＡのライブラリーである。好ましくは、核酸ライブラリーはｃＤＮＡ発現ライブラリーである。好ましくは、ヌクレオチドデータベースは、ひとまたはネズミ由来の、および脳、肝臓、腎臓、新生児組織、胎芽組織、腫瘍または癌組織由来のものである。当該ヌクレオチド配列との好ましい類似％は少なくとも約７０％、より好ましくは少なくとも約８０％、なおより好ましくは少なくとも約９０％、なおさらにより好ましくは約９５％またはそれ以上である。本発明の別の態様は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３に記載のアミノ酸配列またはそれらの全部または部分に少なくとも約５０％の類似性を有する、新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子を提供する。さらに、本発明の別の態様は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列またはそれらの全部または部分に少なくとも約５０％の類似性を有する、新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子を提供する。なおさらに、本発明の別の態様は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１７に記載のアミノ酸配列またはそれらの全部または部分に少なくとも約５０％の類似性を有する、新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子を提供する。本発明のさらなる態様は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１９に記載のアミノ酸配列またはそれらの全部または部分に少なくとも約５０％の類似性を有する、新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子を提供する。なおまた、本発明のさらなる態様は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２５に記載のアミノ酸配列またはそれらの全部または部分に少なくとも約５０％の類似性を有する、新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子を提供する。本発明の別の態様は、ＳＥＱＩＤＮＯｓ：２９の１またはそれ以上に記載のアミノ酸配列またはそれらの全部または部分に少なくとも約５０％の類似性を有する新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子を提供する。好ましくは、アミノ酸の類似性のパーセントは少なくとも約６０％、より好ましくは少なくとも約７０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０−８５％およびなおさらに好ましくは少なくとも約９０−９５％またはそれ以上である。従って、本発明により意図されるＮＲ６ポリペプチドは、ＳＥＱＩＤＮＯ：１２または１４または１６または１８または２５または２０または２４または２８または３８に実質的に記載されたヌクレオチド配列の全部または部分によって好ましくはコードされた新規ヘモポイエチン受容体の成分、部分、フラグメント、相同体または類似体、またはそれらの全部または部分と少なくとも約６０％のヌクレオチド類似性を有する分子、またはＳＥＱＩＤＮＯ：１２または１４または１６または１８または２０または２４または２８または３８に記載されたヌクレオチド配列またはそれらの相補形とハイブリダイズし得る分子である、誘導体を含む。ＮＲ６分子は非グリコシル化またはグリコシル化されていてもよい。グリコシル化形においては、グリコシル化は実質的に天然由来のヘモポイエチン受容体と同じであってもよく、またはグリコシル化の修飾体であってもよい。変更されたかまたは特異なグリコシル化状態は新規受容体の結合活性に影響を与えるかもしれないし、与えないかもしれない。ＮＲ６ヘモポイエチン受容体は可溶体であってもよく、または細胞表面に発現さてもよく、または固体支持体または他の分子に接合されるか、または融合されていてもよい。上述のように、本発明にはさらにある範囲のＮＲ６の誘導体が考えられる。誘導体には、ＮＲ６ポリペプチドおよび対応する遺伝子配列のフラグメント、部分、一部、突然変異体、相同体および類似体が含まれる。誘導体にはまた、ＮＲ６に対する単一また複数のアミノ酸の置換、削除および／または付加、またはＮＲ６をコードする遺伝子配列に対する単一また複数のヌクレオチドの置換、削除および／または付加が含まれる。アミノ酸配列またはヌクレオチド配列への「付加には他のペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質との融合、またはヌクレオチド配列への融合を含む。この明細書において、ＡＮＲ６αという場合、機能的誘導体またはＮＲ６の遺伝的相互作用誘導体を含むそれらの誘導体すべてをいう。ここで考えられるＮＲ６の類似体には、これに限定されるものではないが、側鎖の修飾、ぺプチド、ポリペプチド、またはタンパク合成中の非天然アミノ酸および／またはそれらの誘導体の組み入れ、および架橋体およびタンパク質性分子またはそれらの類似体への立体配座の拘束を課す他の方法の使用を含む。この発明で考えられる側鎖修飾の例としては、アルデヒドとの反応後ＮａＢＨ₄ での還元による還元的アルキル化；メチルアセトイミデートによるアミジン化；無水酢酸によるアシル化；シアネートによるアミノ基のカルバモイル化；２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）によるアミノ基のトリニトロベンジル化；無水コハク酸および無水テトラヒドロフタール酸によるアミノ基のアシル化；およびピリドキサール−５−ホスフェートによるリジンのピリドキシル化後ＮａＢＨ₄での還元、などのアミノ基の修飾が含まれる。アルギニン残基のグアニジン基は２,３−ブタンジオン、フェニルグリオキサールおよびグリオキサールなどの試剤によるヘテロ環縮合生成物の形成により修飾され得る。カルボキシル基はＯ−アシルイソウレア形成を経るカルボジイミド活性化後誘導体化によって、例えば対応するアミドに変更することができる。スルフィドリル基はヨード酢酸またはヨードアセトアミドによるカルボキシメチル化；システイン酸への過蟻酸酸化；他のチオール化合物との混合ジスルフィド形成；マレイン酸イミド、無水マレイン酸または置換マレイン酸イミドとの反応；４−クロロメルクリベンゾエート、４−クロロメルクリフェニルスルホン酸、フェニルメリクリクロリド、２−クロロメリクリ−４−ニトロフェノールおよび他の水銀化合物を用いる水銀誘導体の形成；アルカリ性ｐＨにおけるシアナートによるカルバモイル化などの方法によって修飾ざれ得る。トリプトファン残基は、例えば、Ｎ−ブロモスクシンイミドによる酸化または２−ヒドロキシ−５−ニトロベンジルブロミドまたはスルフェニルハロゲン化物によるインドール環のアルキル化によって修飾され得る。他方チロシン残基はテトラニトロメタンによってニトロ化し、３−ニトロチロシン誘導体を形成させることによって修飾され得る。ヒスチジン残基のイミダゾール環の修飾はヨード酢酸誘導体によるアルキル化またはジエチルピロカルボネートによるＮ−カルベトキシル化によって行い得る。ペプチド合成中の非天然由来のアミノ酸の導入の例としては、これに限定されるものではないが、ノルロイシン、４−アミノらく酸、４−アミノ−３−ヒドロキシ−５−フェニルペンタン酸、６−アミノーヘキサン酸、ｔ−ブチルグリシン、ノルバリン、フェニルグリシン、オルニチン、ザルコシン、４−アミノ−３− ヒドロキシ−６−メチルペンタン酸、２−チエニルアラニンおよび／またはアミノ酸のＤ−異性体の使用が挙げられる。ここで使用される非天然アミノ酸をTabl e１に示す。これらの型の修飾は患者に投与したとき、または診断剤として使用したとき、ＮＲ６を安定化させるために重要である。架橋剤は３Ｄ立体配座を安定させるために用いることができる。例えば、ｎ＝１〜ｎ＝６の(ＣＨ₂)nスペーサーを有する二官能イミドエステル、グルタルアルデヒド、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなどのホモ−二官能基架橋剤、および通常は、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドなどのアミノー反応性基と、マレイミドまたはジチオ基(ＳＨ)またはカルボジイミド(ＣＯＯＨ)などの別の基特異的反応性基を含むヘテロ−二官能基試剤を用いる。さらに、ペプチドは、例えば、Ｃ_αおよびＮ_α−メチルアミノ酸の導入、アミノ酸のＣ_αおよびＣ_β原子の間への二重結合の導入、および環状ペプチド、またはＮおよびＣ末端間、二個の側鎖間または１個の側鎖とＮまたはＣ末端間のアミド結合の形成など共有結合の導入による環状ペプチドまたは類似体の形成によって、立体配座的に拘束され得る。本発明はさらに、ＮＲ６のアンタゴニストまたはアゴニストまたはＮＲ６の機能的な類似体として作用することできるＮＲ６の化学的類似体を含む。化学的類似体はＮＲ６に必ずしも由来しなくてもよいが、ある立体構造上の類似点をもっていてもよい。別法として、化学的類似体は具体的にはＮＲ６様のある種の生理化学的特性をもつように設計してもよい。例えば、化学的類似体は化学的に合成するかまたは天然生成物のスクーリング後に検出され得る。ＮＲ６の同定はＮＲ６の発現を調節するかまたはＮＲ６の活性を調節することができるある範囲の治療上の分子の生産を可能にする。本発明にいうモジュレーターにはＮＲ６発現のアゴニストおよびアンタゴニストが含まれる。ＮＲ６発現のアンタゴニストはアンチセンス分子、リボザイムおよび同時抑圧分子（co-sup pression molecules）を含む。アゴニストはプロモーター能力を増強するかまたは負の調節機構を妨害する分子を含む。ＮＲ６のアゴニストには任意の負の調節機構を克服する分子を含む。ＮＲ６のアンタゴニストには抗体およびインヒビターペプチド断片を含む。本発明で考えられる他の誘導体には、完全にグリコシル化されていない分子から修飾されてグリコシル化されている分子までのある範囲のグリコシル化変異体を含む。変更されたグリコシル化パターンは、種々の宿主細胞中の組換え分子の発現からもたらされ得る。本発明の他の態様はヒトまたはマウスなどの患者におけるＮＲ６の発現を調節する方法、上記方法は、ＮＲ６を上方調節または下方調節またはさもなくばＮＲ６の発現を調節するのに十分な時間および条件下のＮＲ６発現のモジュレーターの有効量とＮＲ６をコートするＮＲ６遺伝子配列を接触させることを含む。ＮＲ６発現の調節はＮＲ６−リガンド相互作用または細胞活性のＮＲ６刺激の調節手段を提供する。本発明の他の態様はヒトにおけるＮＲ６の活性を調節する方法が含まれ、上記方法はＮＲ６活性を増加または減少させるのに十分な時間と条件下の分子の調節有効量を上記哺乳動物に投与することを含む。この分子はタンパク様の分子または化学的物質であってもよく、ＮＲ６の誘導体またはそのリガンド、または化学的類似体またはＮＲ６の切断した形態の変異体またはそのリガンドであってもよい。従って、本発明はＮＲ６またはその誘導体またはＮＲ６発現またはＮＲ６活性のモジュレーターおよび１つまたはそれ以上の製薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤を含む医薬組成物を含む。これらの成分は活性成分と称される。注入使用に適した製薬学的形態には滅菌水溶液（その場合水溶性）または滅菌注入可能な溶液または一時的調製のための滅菌粉末が挙げられる。上記形態は製造および保存の条件下で安定でなければならず、細菌および真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。担体は例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）、適切なその混合物および植物油を含む溶媒または希釈媒であることができる。適当な流動性は、例えば、界面活性剤の使用によって維持することができる。微生物の作用の妨害を例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チルメローザル（thirmerosal）などの多様な抗細菌および抗真菌剤によって達成することができる。多くの場合、例えば糖、塩化ナトリウムなどの等張剤を含むのが好ましい。注入可能な組成物の吸収遅延は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収遅延剤の組成物の使用によって達成することができる。滅菌注入可能な溶液を、上記に列挙した種々の他の成分と共に、適当な溶媒中に必要量の活性成分を処方し、必要ならば滅菌ろ過して調製する。滅菌注入可能な溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、あらかじめ滅菌濾過した活性成分およびさらに必要な成分の溶液から粉末を生産する真空乾燥および凍結乾燥技術である。活性成分が適切に保護される場合、それらは経口的に投与され、例えば、不活性希釈剤または吸収可能な可食担体とともに投与するか、または成分は硬また軟ゼラチンカプセルに封入することができ、また、錠剤に打錠することができ、日常食事の食物と一緒に直接処方することもできる。経口治療剤投与のため、活性化合物は賦形剤とともに処方することができ、摂取可能な錠剤、バッカル錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル剤、懸濁液、シロップ、オブラートなどの形態において使用することができる。そのような組成物および製剤は少なくとも１重量％の活性化合物を含むべきである。勿論、組成物および製剤の比率は変えることができ、単位の投与量の約５〜約８０重量％の間の都合よい量である。適当な投与量中に治療学的に有用な組成物中の活性化合物の量を得ることができる。本発明の好ましい組成物または製剤は経口投与量単位形態が約０.１μｇ〜２０００mgの間で活性化合物を含むよう調製される。別の投与量として約１Fg〜約１０００mgおよび約１０Fg〜約５００mgが挙げられる。錠剤、トローチ、ピル、カプセルなどはまた以下に挙げる成分をも含む：樹脂、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンなどの結合剤；リン酸二カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギニン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；およびスクロース、ラクトースまたはサッカリンなどの甘味料が添加されるか、ペパーミント、冬緑油、チェリーフレーバーなどの賦香剤を添加してよい。投与単位形態がカプセルの場合、カプセルは上記種類の物質に加えて、液体担体を含むことができる。他の種々の物質はコーティングとして存在するか、または投与形態の物理的形態を改良するものである。例えば、錠剤、ピルまたはカプセルはシェラック、糖または両方でコーティングすることができる。シロップまたはエリキシル剤は活性化合物、甘味料としてのスクロース、保存料としてのメチルおよびプロピルパラベン、チェリーまたはオレンジフレーバーなどの着色料および賦香剤を含んでいてもよい。勿論、投与形態を調製するのに使用されるいずれの物質も製薬学的に純粋であり、使用される量では実質的に無毒であるべきである。さらに、活性化合物は持続性放出製剤および処方に調製することができる。本発明はまた、クリーム、ローションおよびゲルなどの局所的投与に適した形態に適用でき、皮膚を通して活性物質が吸収される顔料の範囲にまで及ぶことができる。製薬学的に許容され得る担体および／または希釈剤には任意のおよびすべての溶媒、分散媒体、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張および吸収遅延剤などを含む。そのような製薬学的に活性な物質の為の媒体および試剤の使用は当該技術分野においてよく知られている。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と両立しないものを除く限り、治療組成物中のそれらの使用は含まれる。補足的活性成分もまた組成物に処方することができる。投与の容易化および用量の均一化のための用量単位形態に非経口組成物を製剤化することは特に有益である。本明細書で使用する用量単位形態とは、治療されるべき哺乳動物患者のための単一用量として適した物理的に個別の単位；必要な製薬学的担体に関して望ましい治療効果を生じさせるために計算された活性物質の前もって決定した量を含む各単位をいう。本発明の新規の用量単位形態の使用説明書は（ａ）活性物質の独特の性質および達成されるべき特定の治療効果、および（ｂ）本明細書に詳細が示される肉体的健康が損なわれ疾患症状を有する生存患者の疾患の治療のために活性物質などを調合する分野における固有の制限、によって指示され直接依存するものである。主要な活性成分は上記のように用量単位形態中の適切な製薬学的に許容し得る担体とともに有効量にて便利にかつ有効に投与するために調合される。例えば、単位投与形態は０.５μｇ〜約２０００ｍｇの間にわたる量である主要活性成分を含む。比率で示すと活性成分は一般的に約０.５μｇ〜約２０００ｍｇ／ｍｌ担体で存在する。補足的な活性成分を含む組成物の場合、用量を上記成分の通常投与および投与方法を参照して決定する。投与量はまた患者の体重当たりで表わされてもよい。例えば、約１０ng〜約１０００mg/kg体重、約１００ng〜５００mg/kgおよび約１Fg〜２５０mg/kg体重が投与されてもよい。医薬組成物はまた、ベクターがＮＲ６発現またはＮＲ６活性を調節することができる核酸分子を担持する標的細胞をトランスフェクションすることができるベクターなどの遺伝的分子をも含むことができる。このベクターは、例えばウイルスベクターであってよい。本発明のさらに他の態様は、ＮＲ６およびその誘導体に対する抗体に関する。そのような抗体はモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体であってよく、ＮＲ６に対する天然に存在する抗体から選択されてよく、またはＮＲ６またはその誘導体に特異的に作成されてもよい。後者の場合、ＮＲ６またはその誘導体は、まず担体分子に結合する必要がある場合がある。本発明の抗体および／または組換え体ＮＲ６またはその誘導体は、特に治療剤または診断剤として有用である。例えば、ＮＲ６抗体またはそのリガンドに対する抗体はアンタゴニストとして機能し得る。例えば、ＮＲ６およびその誘導体はＮＲ６に対する天然に存在する抗体に関してスクリーニングするために使用することができる。これらは例えばいくつかの自己免疫疾患に起こり得る。別法として特異的な抗体を使用してＮＲ６をスクリーニングすることができる。そのようなアッセイに関する技術は当該技術分野においては公知であり、例えばサンドイッチアッセイおよびELISAアッセイなどが含まれる。ＮＲ６濃度の知識はある種の癌または癌になりやすい素因の診断またはある種の治療プロトコールをモニターするのに重要であり得る。本発明のＮＲ６に対する抗体はモノクローナルまたはポリクローナルであってよい。代わりに抗体の断片はFab断片などの抗体の断片として使用されてよい。さらに、本発明は組換え抗体および合成抗体および抗体ハイブリッドに拡大する。「合成抗体」は本明細書では抗体断片および抗体ハイブリッドを含むとみなされ得る。本発明のこの局面の抗体は免疫療法に関して特に有用であり、またアポトーシスの査定または治療治療体制のプログラムをモニターする診断道具としてもまた使用することができる。例えば、特異的抗体を使用してＮＲ６タンパク質をスクリーニングすることができる。後者は、例えば細胞抽出物中または他の生物学的液体中のＮＲ６の濃度に関するスクリーニング、または培養上清液体からの組換え手段によって作成されるＮＲ６を精製する手段として重要であろう。本明細書で考えられるアッセイのための技術は当該技術分野において公知であり、例えばサンドイッチアッセイおよびELISAアッセイなどが含まれる。本発明の範囲内に上記で議論した最初に記載した抗体に対する任意の第２抗体（モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体または抗体の断片または合成抗体の断片）を含む。第１抗体および第２抗体の両者は検出アッセイにおいて使用することができ、または第１抗体は、市販で入手可能な抗免疫グロブリン抗体を用いることができる。本明細書で考えられるような抗体はＮＲ６の任意の領域に特異的である任意の抗体を含む。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両者は酵素またはタンパク質で免疫化することによって入手することができ、ついでいずれかの型が免疫アッセイに関して利用可能である。血清の両型を入手する方法は当該技術分野においてよく知られている。ポリクローナル血清はあまり好まれないが、ＮＲ６またはその抗原部位の有効量で適当な研究室動物の注入によって容易に調製され、動物から血清を回収し、ついで公知の免疫吸着技術法によって特異的な血清を単離する。この方法によって産生された抗体は実際上任意の型の免疫アッセイにおいて利用できるが、それらは一般的に製造物の潜在的な不均一性のためにあまり好まれない。免疫アッセイにおけるモノクローナル抗体の使用は特に製造物の大量および均一性において製造できる能力のために好ましい。不死細胞株および免疫原調製物に対して感作したリンパ球を融合することによって得られるモノクローナル抗体製造物のためのハイブリドーマ細胞株の調製は、当業者によく知られた技術によって行うことができる。本発明の他の態様は、患者からの生物学的試料中のＮＲ６を検出する方法であって、抗体−ＮＲ６複合体を生成させるのに十分な時間および条件下でＮＲ６またはその誘導体に特異的な抗体または相同体を生物学的試料と接触させ、ついで複合体を検出する方法である。ＮＲ６の存在はウエスタンブロットおよびＥＬＩＳＡ製造物などにより、複数の方法において達成されるであろう。広範囲の免疫アッセイ技術が、米国特許第４,０１６,０４３号、４,４２４,２７９号および４ ,０１８,６５３号を参照することにより知ることができ、利用可能である。これらは勿論単一部位および二部位の両方または非競合タイプの「サンドイッチ」アッセイ並びに伝統的な競合結合アッセイの両者を含む。これらのアッセイはまた標識した抗体を標的に直接結合させることも含む。サンドイッチアッセイは中でも、最も有用で一般に使用されているアッセイであり、本発明でも好んで使用している。サンドイッチアッセイの多数の修正技術が存在し、ついでそのすべては本発明により包含するものとする。要約すれば、典型的なフォワードアッセイにおいて、非標識抗体を固相基質に固定し、ついで試験しようとするサンプルを結合分子と接触させる。適当なインキュベーション期間の後、その期間は抗体一抗原錯体の形成を可能にするのに十分な時間であり、抗原に特異的な第２抗体、検出可能なシグナルを産生できるリポーター分子で標識し、ついで抗体−抗原−標識抗体の別の複合体の形成に十分な時間放置する。未反応物質を洗い流し、抗原の存在はリポーター分子によって産生されたシグナルの観察によって決定される。その結果は可視シグナルの単純な観察によって定性することができ、または既知のハプテンの量を含むコントロールサンプルと比較することによって定量することができる。該フォワードアッセイの修正技術には同時アッセイ、サンプルおよび標識した抗体の両方が同時に結合抗体に加えられるアッセイを含む。これらの技術は当業者によく知られており、わずかな修正は容易に明らかである。本発明により、該サンプルはＮＲ６含有の細胞抽出物、組織生検またはおそらく血清、唾液、粘液分泌物、リンパ球、組織液および呼吸器官の液体を含む。従って、該サンプルは、一般的に生体液ならびに細胞培養物からなどの発酵液および上清液を含む生物学的サンプルに及ぶ。典型的なフォワードサンドイッチアッセイにおいて、ＮＲ６またはその抗原部位に特異性を有する第１抗体は、固相表面に共有結合するかまたは受動的結合するかである。該固相表面は典型的にガラスまたはポリマーであり、最も一般に使用されるポリマーはセルロース、ポリアクリルアミド、ナイロン、ポリスチレン、塩化ポリビニルまたはポリプロピレンである。固相支持体は管、ビーズ、微小円盤またはイムノアッセイを行うのに適しているそのほか任意の表面であってよい。結合プロセスは当該技術分野においてよく知られており、かつ架橋した共有結合または物理的吸着を含み、該ポリマー抗体複合体は試験サンプルの調製時に洗浄される。試験されるべきサンプルのアリコートは、ついで固相複合体に添加され、かつ十分な時間インキュベートし（例えば２−４０分または一層都合よければ一夜）、適当な条件下（例えば約室温から約３７℃）で抗体に存在する任意のサブユニットの結合を可能にする。インキュベーション期間の後、抗体サブユニット固相を洗浄し乾燥し、ついでハプテンの一部に特異的な第２抗体とインキュベートする。第２抗体のハプテンに対する結合を示すために用いるリポーター分子に第２抗体を結合させる。別法は生理学的サンプル中の標的分子を固定化し、ついでリポーター分子で標識されるかまたはされていない特異的抗体に対して固定化標的を暴露する方法である。標的の量およびリポーター分子シグナルの強度に依存して、結合標的は抗体で直接標識することによって検出することができる。別法として第２の標識した抗体は第１抗体に特異的であり、標的−第１抗体複合体にさらして標的−第１抗体−第２抗体の第３次複合体を形成させる。該複合体はリポーター分子によって発せられたシグナルによって検出される。他の別法においてＮＲ６リガンドを固相支持体に固定し、ついでＮＲ６を含む生物学的サンプルを固定化したリガンドと接触させる。ＮＲ６とそのリガンド間の結合は、それ自体リポーター分子で標識されたＮＲ６に対する抗体を用いて測定することができ、またはリポーター分子で標識されたさらなる抗−免疫グロブリン抗体をＮＲ６に対する抗体の検出に使用することができる。本明細書において使用する「リポポーター分子またはーター分子」とはその化学的性質によって、抗原−結合抗体の検出を可能にする分析的に同定可能なシグナルを提供する分子をいう。検出は定性的であるかまたは定量的であってよい。このタイプのアッセイにおいて、最も普通に使用されるリポーター分子は酵素、蛍光団または複数の分子を含むラジオヌクレオチド（すなわちラジオアイソトープ）および化学蛍光分子のいずれかである。エンザイムイムノアッセイの場合、一般にグルタルアルデヒドまたは過ヨウ素酸塩によって酵素は第２抗体にコンジュゲートされる。しかしながら容易に認識されるように、多様な異なる結合技術が存在しており、それらは当業者には容易に利用できるものである。一般に使用される酵素にはとりわけ西洋ワサビペルオキシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼおよびアルカリホスファターゼなどである。特異的な酵素と使用される基質は、一般に対応する酵素による加水分解の際の検出可能な色の変化の生成物に関して選択される。適当な酵素の例にはアルカリホスファターゼおよびペルオキシダーゼを含む。蛍光原基質を使用することも可能であり、上記の色素原基質よりむしろ蛍光生成物を産生する。すべての場合において、酵素標識した抗体を第１抗体ハプテン複合体に加え、結合可能とし、ついで過剰な試薬剤を洗い流す。ついで、適当な基質を含む溶液を抗体−抗原−抗体の複合体に添加する。基質は第２抗体に結合した酵素と反応させ、定性的な可視シグナルを得、さらに、通常は分光光度計を使用して定量化し、サンプル中に存在するハプテンの量の指数を得る。「リポーター分子」はまた細胞凝集またはラテックスビーズ上の赤血球などの凝集の阻害の使用に及ぶ。別法として、フルオレセインおよびローダミンなどの蛍光化合物は、その化学的結合能力を変えずに抗体に化学的に結合され得る。特定の波長の光の照射によって活性化される場合、フルオロクロム−標識抗体は光エネルギーを吸収し、分子の励起状態に誘導され、光学顕微鏡で可視的に検出可能な特徴的な発色をする。ＥＩＡにおけるように、蛍光標識抗体を第１抗体−ハプテン複合体に結合させるのは可能である。未結合試薬を洗い流し、残った第３複合体を適当な波長の光に暴露させると、観察される蛍光が当該ハプテンの存在を示す。免疫蛍光およびＥＩＡ技術は両者とも当該技術分野においてよく確立されており、特に本方法に関して好ましい。しかしながら、ラジオアイソトープ、化学蛍光分子または生物蛍光分子などの他のリポーター分子もまた使用することができる。本発明はまた、ＮＲ６遺伝子またはその誘導体を検出するためのＰＣＲ分析に関する遺伝子アッセイを含む。結合に用いられる別法には、特異的なオリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションとしての一本鎖ＤＮＡ高次構造多型分析(SSCP) などの直接的ヌクレオチドスキャニングまたは突然変異スキャニング、直接タンパク質切断試験（direct protein truncation test）などの方法を含む。本発明の核酸分子はＤＮＡまたはＲＮＡであってよい。核酸分子がＤＮＡ形態にある時、ゲノムＤＮＡまたはｃＤＮＡであってよい。本発明の核酸ＲＮＡ形態は一般的にｍＲＮＡである。本発明の核酸分子は一般的に単離された形態にあるが、ベクター分子、特に発現ベクター分子などの他の遺伝子分子に、組込まれるか、またはライゲーションされるかあるいは融合し、または結合され得る。ベクターおよび発現ベクターは一般的に複製可能であり、もし適用可能であるならば、原核細胞または真核細胞の１つまたは両者において発現する。好ましくは原核細胞には大腸菌(E.colil) 、バシラス種（Bacillus sp）およびシュードモナス種（Pseudomonas sp）が含まれる。好ましい真核細胞には酵母、真菌類、哺乳動物細胞および昆虫細胞が含まれる。従って、本発明の他の態様は、ベクター部分および哺乳動物の、より具体的にはひとのＮＲ６遺伝子部分を含む遺伝子構築物を含み、このＮＲ６遺伝子部分はＮＲ６ポリペプチドまたはその機能的または免疫学的相互作用的誘導体をコードすることができる。好ましくは遺伝子構築物のＮＲ６遺伝子部分は、ベクター上のプロモーターに機能可能に結合しており、このプロモーターは適当な細胞における該ＮＲ６遺伝子部位の発現を目的とし得る。さらに、遺伝子構築物のＮＲ６遺伝子部分はマルトース結合タンパク質またはグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼまたはその一部をコードするヌクレオチド配列などの他の遺伝子配列に融合した遺伝子すべてまたは一部を含むことができる。本発明はそのような遺伝子構築物およびそれを含む原核細胞または真核細胞をも含む。本発明はまた、突然変異体、その一部、断片、部分、ホモログおよび類似体を含む任意またはすべてのＮＲ６誘導体またはそれらをコードする遺伝子配列であって、天然に存在するヌクレオチドまたはアミノ酸配列の単一または複数のヌクレオチドまたはアミノ酸の置換、付加および／または欠失を含む遺伝子配列に及ぶ。ＮＲ６は細胞型の多様な配列の増殖、分化および生存に重要である。従って、ＮＲ６またはその機能的な誘導体は、イン・ビトロおよびイン・ビボの異なる細胞および組織の配列における増殖、維持または再生を調節するために使用されることが提案されている。例えば、ＮＲ６は神経増殖、分化および生存の調節に有用であると考えられている。可溶性ＮＲ６ポリペプチドはまた、疾患、傷害または異常の範囲の治療において有用であると考えられる。膜結合または可溶性ＮＲ６は、神経細胞または組織にイン・ビトロで使用されることができ、例えば移植手法または移植などにおける増殖、分化または生存を調節することができる。上記のように、本発明のＮＲ６またはその機能的誘導体はＮＲ６と１またはそれ以上の製薬学的に許容し得る担体および／または希釈剤を含む医薬組成物に提供され得る。さらに、本発明は本発明のＮＲ６の有効な量を投与することを含む治療方法を含む。本発明はまたＮＲ６ｓのアンタゴニストまたはアゴニストに及び、その治療用組成物および方法論におけるそれらの使用に及ぶ。本発明の更なる態様は、ＮＲ６伝達の欠陥または低下症状の処置のための薬物の製造におけるＮＲ６またはその機能的誘導体の使用を含む。本発明の更に別の態様はＮＲ６のリガンド、好ましくはそのリガンドの単離形態または組換体またはその誘導体を含む。本発明はさらに同種および異種ノックアウト動物を含むＮＲ６遺伝子のためのマウスまたは他のネズミ科の種などのノックアウト動物を含む。そのような動物は、ＮＲ６の効果の検討ならびにＮＲ６のアゴニストまたはアンタゴニストとして作用することができる薬剤のスクリーニングをするための、特に有用な生きたイン・ビボモデルを提供する。この具体例では、ＮＲ６をコードする遺伝子の少なくとも１つのアレルにおける１つの突然変異を含むトランスジェニック動物を提供する。さらに、本発明はＮＲ６をコードする遺伝子の２つのアレルにおける１つの突然変異を含むトランスジェニック動物を提供する。好ましくはトランスジェニック動物はマウスまたはラットなどのげっ歯類の動物である。本発明はさらに以下の図および実施例によって具体的に説明するが、これに限定されるものではない。図面において：図１はＮＲ６ｃＤＮＡ、ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３の３形態で観察されるスプライシングパターンを示すマウスＮＲ６遺伝子の配列決定された領域を拡大した図である。図２は、ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３の両者によって共有された３ ’(３Ｎ)非翻訳領域の末端にＳＥＱＩＤＮＯ：１２および１４において示されるｃＤＮＡのＤ５０をコードするヌクレオチド１４８からのｃＤＮＡをコードするエクソンを含む、マウスＮＲ６遺伝子のヌクレオチド配列を示す。この図において、この領域はヌクレオチドｇ１１８２からｇ６６１７までを含む。この配列はまた配列番号２８と定義される。図３は、５’(５Ｎ)配列をさらに付加したマウスゲノムＮＲ６遺伝子のヌクレオチド配列を表すものである。ＮＲ６のコーディングエクソンはマウスゲノムの約１１kbにわたる。８イントロンによって分離される９つのコーディングエクソンが存在する：エクソン１少なくとも２３９ｎｔイントロン１５１９５ｎｔエクソン２２８２ｎｔイントロン２２１４ｎｔエクソン３１３０ｎｔイントロン３１０７ｎｔエクソン４１７０ｎｔイントロン４１３７２ｎｔエクソン５１５８ｎｔイントロン５６８ｎｔエクソン６１６９ｎｔイントロン６２０２０ｎｔエクソン７１８８ｎｔイントロン７１０４ｎｔエクソン８４３ｎｔイントロン８１８１ｎｔエクソン９２５２ｎｔエクソン１はシグナル配列をコードし、エクソン２はＩｇ様ドメイン、エクソン３〜６はヘモポイエチンドメインをコードする。エクソン７、８および９はかわりにスプライシングされる。図４はマウスＮＲ−６のゲノム構造を図式で表したものである。図５は同種組換えによるＮＲ６遺伝子座のターゲティングを図式で表したものである。本発明で使用したアミノ酸残基の１文字および３文字略号は表２にまとめている： ¹ポリアデニル化シグナルAATAAATAAAはヌクレオチド１４５１から１４６０の位置である；ＮＲ６.１（配列番号：１２）およびＮＲ６.２（配列番号：１４）はエクソンの末端を示すＱ４０７をコードするヌクレオチド１２２３と同一である。ＮＲ６.１はＮＲ６.２にのみ存在するエクソンをスプライシングし、ＮＲ６. ２と共有する最終エクソンのために異なるリーディングフレームを使用する；これはアミノ酸残基部位４０８−４１３のアミノ酸VLPAKLに対応する。ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３によって共有される３Ｎ−非翻訳ＤＮＡの領域はヌクレオチド１２４０から１４７５である。WSXWSモチーフはアミノ酸残基３３０〜３３４にある。² ポリアデニル化シグナルAATAAAはヌクレオチド１４９４〜１５０３の位置である。WSXWSモチーフはアミノ酸残基３３０〜３３４である。ＮＲ６.１およびＮＲ６.２はエクソンの末端を表すＱ４０７をコードするヌクレオチド１２２３に一致する。ＮＲ６.２はアミノ酸残基Ｄ４０８、ヌクレオチド１２２４で開始し、Ｇ４２２、ヌクレオチド１２６４で終了するエクソンでスプライシングする。ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３によって共有される３Ｎ−非翻訳ＤＮＡの領域はヌクレオチド１２８３から１５１７の位置である。³ ヌクレオチドおよびアミノ酸番号は配列番号１２および１４に対応する。 WSXWSモチーフはアミノ酸残基３３０〜３３４である。ポリアデニル化シグナルA ATAAATAAAはヌクレオチド１７８１から１７８０の位置である。ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３はＱ４０７（エクソンの末端を表す）をコードするヌクレオチド１２２３に一致する。ＮＲ６.３はこの位置からのスプライシングに失敗し、それゆえ翻訳はイントロンを通して続けられ、アミノ酸残基４０８〜４６１からのＣ−末端タンパク質領域を生じる。ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６．３によって共有される３Ｎ−非翻訳ＤＮＡの領域は、ヌクレオチド１４６９から１８０４までである。⁴ 該ヌクレオチド配列は、ヌクレオチドＣ１５１、Pro５１の最初のヌクレオチドからのＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３に同一である。このヌクレオチドからの番号付けは、配列番号１４および１６と同一である。この点の５ＮはＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３において見出されない５N RACEによって製造される製造物に独特であり、配列番号２０および２１に示されている。⁵ マウスゲノムＮＲ６遺伝子座の構造。ＮＲ６のコーディングエクソンはマウスゲノムの約１１kbにわたる。８つのイントロンによって分離された９つのコーディングエクソンが存在する：エクソン１少なくとも２３９ｎｔイントロン１５１９５ｎｔエクソン２２８２ｎｔイントロン２２１４ｎｔエクソン３１３０ｎｔイントロン３１０７ｎｔエクソン４１７０ｎｔイントロン４１３７２ｎｔエクソン５１５８ｎｔイントロン５６８ｎｔエクソン６１６９ｎｔイントロン６２０２０ｎｔエクソン７１８８ｎｔイントロン７１０４ｎｔエクソン８４３ｎｔイントロン８１８１ｎｔエクソン９２５２ｎｔエクソン１はシグナル配列をコードし、エクソン２はＩｇ様ドメイン、エクソン３〜６はヘモポイエチンドメインをコードする。エクソン７、８および９は、選択的にスプライシングされる。本発明のＮＲＧ分子は当該明細書に記載された利用性の範囲を保有する。さらなる利用性には以下が含まれる：１．ＮＲ６と相互作用する分子の同定。これらには：ａ）標準オルファン受容体（orphan）法（２６）を用いた対応するリガンドｂ）受容体アンタゴニストまたはアゴニストのいずれかとして機能するモノクローナル抗体、ｃ）ファージディスプレイ法（２７、２８）を用いて単離した模擬(mimetic)またはアンタゴニストペプチドｄ）アンタゴニストまたはアゴニストのいずれかとして機能する小分子天然産物２．ＮＲ６遺伝子中の欠失／再配列を検出するための診断剤の開発。本明細書に記載されたＮＲ６ノックアウトマウス実験はこの利用性のために有用なモデルを提供する。再生分野における応用も存在する。例えば、ＮＲ６状態に関して試験することができる。ＮＲ６＋／−保因者は発達問題を有する子孫を生むことが予想される。実施例１実施例２ヘモポイエチン受容体ファミリーのメンバーにおいて見出される保存されたWS XWSモチーフに対して設計されたオリゴヌクレオチドを用いての最初のＮＲ６ｃＤＮＡクローンの単離（ｉ）ＵＮＩ−ＺＡＰバクテリオファージ（ストラタジーン（Stratagene）、カリフォルニア、米国；カタログ番号９３７３０８）にクローニングした市販されている成体マウス睾丸ｃＤＮＡライブラリーを使用して大腸菌株ＬＥ３９２に感染させる。感染した菌を２０の１５０mmアガープレート上で増殖させ、１プレート当たり約５０,０００プラークを得る。ついでプラークを直径１５０mmのナイロン膜に同じものを２枚トランスファーさせ（コロニー／プラークスクリーン、NENリサーチ・プロダクツ（NEN Research Products）、マサチューセッツ、米国）、溶菌し、ＤＮＡを変性させ、ついで乾熱で１００℃で１分間オートクレーブすることによって固定する。そのフィルターを室温にて０.１％（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、０.１×ＳＳＣ（ＳＳＣは１５０mMの塩化ナトリウム、１５mMのクエン酸ナトリウム二水和物）中で二回すすぎ、ついで２ mg／mlウシ血清アルブミン、２mg／mlフィコール、２mg／mlポリビニルピロリドン、１００mM ATP、１０mg／ml tRNA、２mM ピロリン酸ナトリウム、２mg／mlサケ精子ＤＮＡ、０.１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳおよび２００mg／mlアジ化ナトリウムを含む６×ＳＳＣ中４２℃で一晩プレハイブリダイズした。そのプレハイブリダイゼーションバッファーを除去した。ハイブリダイゼーションのための変性オリゴヌクレオチド１.２Fg（WSDWS；実施例１）を９６０mCiのｙ³²Ｐ−ＡＴＰ（ブレサテク（Bresatec）、S.A.、オーストラリア）を用いてＴ４ポリヌクレオチドキナーゼでリン酸化した。単一に取り込まれたＡＴＰを前もってパックされたゲル濾過カラム（ＮＡＰ−５；ファルアマシア（Pharmacia）、ウプサラ、スウェーデン）を用いて標識したオリゴヌクレオチドから分離した。フィルターを４２℃でＮＰ４０よりはむしろ０.１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ、標識したオリゴヌクレオチドの１０⁶−１０⁷cpm／mlを含むプレハイブリダイゼーションバッファー８０ml中で一晩ハイブリダイズした。フィルターを簡単に二回室温で６×ＳＳＣ、０.１％（ｖ／ｖ）ＳＤＳ中ですすぎ、４５℃で３０分間二回、同バッファー１.５１を含むウォーターバス中で振盪させ、ついで室温で６×ＳＳＣで簡単にすすいだ。ついでフィルターをブロッティングして乾燥させて、ついで−７０℃ で、増感スクリーンを用いてオートラジオグラフフィルムで被曝させ現像まで７ −１４日間置いた。向き合った二枚のフィルターに陽性と思われるプラークを取りだし、１００mM NaCl、１０mM MgCl₂、０.５％（ｗ／ｖ）ゼラチン０.５％（ｖ／ｖ）クロロホルムを含むおよび１０mM Tris．HCl pH7.4で溶出し、４℃で保存した。二日後、ＬＥ３９２細胞を初代プラグからの溶出物で感染させ、ついで第２次スクリーニングためにリプレートした。このプロセスをハイブリダイゼーションプラークが純粋になるまで繰り返した。一旦精製されると、陽性のｃＤＮＡｓを製造者（ストラタジーン、カリフォルニア、米国）による指示書によりＺＡＰIIバクテリオファージから切り出しプラスミドpBluescriptにクローニングした。CsCl精製したＤＮＡ調製物を作成し、ついでこれを両鎖についてシークエンシングした。シークエンシングはアプライド・バイオシステムズ自動化ＤＮＡシークエンサー（Applied Biosystems autom ated DNA sequencer）で製造者の指示書に従って蛍光ジデオキシヌクレオチド類似体を用いて行った。そのＤＮＡ配列をアプライド・バイオシステムズにより提供されたソフトウェアを用いて分析した。マウス睾丸ｃＤＮＡライブラリーから単離した２つのクローンは６８−１および６８−２のヌクレオチド配列同一性の大きな領域を持っており、ヘモポイエチン受容体ファミリーの新規メンバーをコードするようであり、かつ発明者らはその推定受容体に「ＮＲ６」という便宜上の名称（working name）を与えた。（ii）実験の平行系列において、市販されているマウス脳ｃＤＮＡライブラリー（ストラタジーン９６７３１９号、ｂａｌｂ／ｃ、２０日齢、全脳ｃＤＮＡ／ Uni-ZAP XRベクター）を使用して、大腸菌XL1-Blue MRF=株を感染させた。感染した菌を９０×１３５mmの角アガープレート上で増殖させて、１プレートあたり約２５,０００プラークを得た。ついでプラークをハイボンド−Ｎ（＋）（アマシャムRPN 203B）の正に帯電したナイロン膜にトランスファーし、溶菌しついでそのＤＮＡを室温で７分間、変性０.５ＭＮａＯＨ、１.５ＭＮａＣｌで変性させた。その膜を室温で１０分間０.５Ｍ Tris-HCL pH7.2、１.５ＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡで中和し、ついでＤＮＡをＵＶ架橋によって固定した。 WSDWSおよびWSEWSオリゴヌクレオチドプローブ（配列番号：７および８）の混合物を［α−³²Ｐ］−ＡＴＰ（東洋紡#PNK-104 Kination kit)で標識した。ついでマウス脳ｃＤＮＡライブラリーからの膜をWSDWSおよびWSEWSオリゴヌクレオチドプローブと４２℃で１６時間ラピッド・ハイブリダイゼーション・バッファー（Rapid Hybridization Buffer）（アマシャム、RPN1636）中でハイブリダイズさせた。フィルターを４２℃で１×ＳＳＣ／０.１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳで洗浄してオートラジオグラフィーにかけた。向き合った２枚のフィルター上で陽性であると思われるプラークを取り上げて大腸菌XL1-Blue MRFN上でナイロン膜に固定するプロセスにてリプレートし、オリゴヌクレオチドプローブと膜をハイブリダイズし、純粋なプラークが得られるまで洗浄とオートラジオグラフィーを反復した。純粋に陽性であるハイブリダイゼーションプラークからのｃＤＮＡ断片を製造者の指示書に従って、ヘルパーファージ株ExAssist（ストラタジーン、９６７３１９号）での切り出しにより単離した。Ampli-Taq DNAポリメラーゼおよびTaqジデオキシ・ターミネーター・サイクル・シークエンシング・キット（Taq dideox y terminator cycle sequencing kit）（パーキン・エルマー（Perkin Elmer）、４０１１５０号）を９６℃で１０秒間の２５サイクル、５０℃を５秒、６０℃ で４分間増殖させた後、ABIモデル３７７ＤＮＡシークエンサー上でシークエンシングプライマーでシークエンシングを行った。マウス脳ダイブラリーからの１クローンであるＭＢＣ−８クローンは、マウス睾丸ｃＤＮＡライブラリーから単離された６８−１および６８−２の両クローンと大領域のヌクレオチド配列と同一性を共有した。（iii）実験の第３系列において、総ＲＮＡをマウス骨芽細胞株から調製し、シルグウィン（Chirgwin）らの方法（１５）に従って、ＫＵＳＡを調製し、ついでポリ（Ａ）＋ＲＮＡをさらにオリゴー（ｄＴ）−セルロースクロマトグラフィー（ファルマシア・バイオテク（Pharmacia Biotech））によって精製した。相補的ＤＮＡをオリゴヌクレオチド（ｄＴ）プライミングによって合成し、UniZAP XR方向クローニングベクター（ストラタジーン）に挿入し、ついでギガパック・ゴールド（Gigapack Gold）（ストラタジーン）を用いて８ファージにパッケージングして、１.２５×１０⁷の独立したクローンを得た。約１０⁶クローンを本質的に上記（ii）に記載と同様にスクリーニングした。要約すればプローブをＴ４ポリヌクレオチドキナーゼを用いて³²Ｐで標識し、ついでプレハイブリダイゼーションを４２℃でラピッド・ハイブリダイゼーション・バッファー（アマシャムLIFE SCIENCE）中で４時間行った。ついでフィルター（ハイボンドＮ＋、アマシャム）を同条件で１９時間、³²Ｐ−標識したWSXWS混合オリゴヌクレオチドでハイブリダイゼーションし、ついで３回洗浄した。最終の洗浄を４２℃にて１×ＳＳＰＥ、０.１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳで３０分間洗浄した。ついでフィルターをコダックＸ−ＯＭＡＴＡＲフィルムに増感スクリーンとともに５日間露光した。単離したクローンをpBluescript SK（＋）ファージミド（ストラタジーン）のイン・ビボエキサイジョンにかけ、ついでプラスミドＤＮＡを標準的方法により調製した。ＤＮＡ配列をＡＢＩＰＲＩＳＭ３７７ＤＮＡシークエンサー（パーキン・エルマー）で適当な合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いて決定した。クローンpKUSA166はＭＢＣ−８、マウス脳および睾丸ｃＤＮＡライブラリーから単離した６８−１および６８−２クローンとヌクレオチド配列同一性の大領域を持っていた。実施例３ＮＲ６に特異的なプローブを用いたさらなるＮＲ６ｃＤＮＡの単離（i）ＮＲ６に関するｃＤＮＡクローンを含む他のｃＤＮＡライブラリーを同定するために、発明者は、プライマーとして６８−１および６８−２の配列から設計されたオリゴヌクレオチド２０７０および２０５７を用いて多様なヒト組織からｍＲＮＡから作成されたλ−バクテリオファージの１μ１アリコートに関してＰＣＲを行った。反応液には５μｌの１０×濃縮ＰＣＲバッファー（ベーリンガー・マンハイムGmbH、マンハイム、ドイツ連邦共和国）、１μｌの１０ｍＭdA TP、dCTP、dGTPおよびdTTP、２.５μｌのオリゴヌクレオチドHYB2およびT3またはT7のいずれかを１００mg/mlの濃度の２.５μｌ、０.５μｌのTaqポリメラーゼ（ベーリンガーマンハイムGmbH）および水を最終容量が５０μｌになるまで含んだ。ＰＣＲは、パーキン・エルマー９６００で反応液を９６℃で２分間加熱し、ついで９６℃で３０秒、５５℃で３０秒および７２℃で２分間を２５サイクル行った。ＰＣＲ産物をアガロースゲル上で分離してナイロン膜に固定し、³²Ｐ−標識したオリゴヌクレオチド１９４３（配列番号：４２）とハイブリダイズした。オリジナルライブラリーに加えて、マウス脳ｃＤＮＡライブラリーはＮＲ６ｃＤＮＡｓを含むと思われた。これらを³²Ｐ−標識したオリゴヌクレオチド１９４４、２１０６、２１２０（実施例１）またはランダムデカヌクレオチドラベリングキット（ブレザテク（Bresatec））を用いて³²Ｐで標識した６８−１（図１におけるＮＲ６．１のヌクレオチド９３４から末端まで）からのオリジナルＮＲ６ｃＤＮＡクローンの断片でスクリーニングした。使用した条件は、標識したオリゴヌクレオチドに関して、フィルターを４５℃よりは５５℃で洗浄するが、ＮＲ６ｃＤＮＡ断片に関してはプレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーションを２×ＳＳＣ中で行い、フィルターを６５℃で０.２×ＳＳＣで洗浄した点以外は（i）に記載と同様である。再び、上記（i）と同様に、陽性にハイブリダイズしたプラークを精製し、ｃＤＮＡを回収し、pBluescriptIIまたはpUC19プラスミドにクローニングした。独立したｃＤＮＡクローンを両鎖に関してシークエンシングした。本方法を用いて、さらに６つのクローン６８−５、６８−３５、６８−４１、６８−５１、６８−７７および７３−２３が、６８−１、６８−２ＭＢＣ−８およびpKUSA166との配列同一性の大領域を保有した。平行実験系列において、さらにスクリーニングをpKUSA166から切り出した１. ７kbp EcoRI−XhoI断片から調製されたハイブリダイゼーションプローブを用いて行った。この断片を切り出し、ついでT7QuickPrime Kit（ファルマシアバイオテク）を用いて³²Ｐで標識した。約６×１０⁵クローンをスクリーニングした。ハイボンドＮ＋フィルター（アマシャム）を最初に４２℃で４時間、５０％（ｖ /ｖ）ホルムアミド、５×ＳＳＰＥ、５×Denhardt's solution、０.１％（ｗ/ｖ）ＳＤＳおよび０.１mg／ml変性サケ精子ＤＮＡ中でプレハイブリダイズした。ハイブリダイゼーシヨンを同条件の下で³²Ｐ−標識したＮＲ−６ｃＤＮＡ断片プローブを添加して１６時間行った。最終的にそのフィルターを６８℃で１時間、０.２×ＳＳＣ、０.１％（ｗ/ｖ）ＳＤＳ中で１回洗浄した。８クローンを単離し、ついでファージクローンをpBluescript SK(-)ファージミド（ストラタジーン）のイン・ビボエキサイジョンにかけた。プラスミドＤＮＡｓを標準的方法によって調製した。ＤＮＡ配列をＡＢＩＰＲＩＳＭ３７７ＤＮＡシークエンサーによって適当な合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いて決定した。この手法を用いて、６８−１、６８−２、ＭＢＣ−８、ｐＫＵＳＡ１６６、６８−５、６８−３５、６８−４１、６８−５１，６８−７７および７７−２３との配列の同一性の大領域を含むKUSAライブラリーからのさらに８つのクローンを単離した。実施例４ＮＲ６をコードするゲノムＤＮＡの単離ネズミＮＲ６ゲノム遺伝子座をコードするＤＮＡもまた６８−１ｃＤＮＡをプローブとして用いて単離した。２つの陽性のクローン、２−２および５７−３を λFIXにクローニングしたマウス１２９/Sv株ゲノムＤＮＡライブラリーから単離した。これらのクローンを重複させ、ついで制限部位の位置、イントロンおよびエクソンを従来方法にて決定した。エクソンおよび介在イントロンを含むゲノムクローンの領域を、アプライド・バイオシステムズ自動化ＤＮＡシークエンサーを製造者の指示書に従って蛍光ジデオキシヌクレオチド類似体を用いて両鎖に関してシークエンシングした。図２はヌクレオチド配列および翻訳領域の対応するアミノ酸配列を示している。これはまた、配列番号：３０および３１にも示される。図３はさらに５Ｎ配列を添加したゲノムＮＲ６遺伝子配列を提供している。これはまた、本配列に関連して配列番号：３８にて表されている。ＮＲ６のコーディングエクソンはマウスゲノムの約１１ｋｂにわたっている。８イントロンによって分離される９つのコーディングエクソンが存在する：エクソン１少なくとも２３９ｎｔイントロン１５１９５ｎｔエクソン２２８２ｎｔイントロン２２１４ｎｔエクソン３１３０ｎｔイントロン３１０７ｎｔエクソン４１７０ｎｔイントロン４１３７２ｎｔエクソン５１５８ｎｔイントロン５６８ｎｔエクソン６１６９ｎｔイントロン６２０２０ｎｔエクソン７１８８ｎｔイントロン７１０４ｎｔエクソン８４３ｎｔイントロン８１８１ｎｔエクソン１はシグナル配列をコードし、エクソン２はＩｇ様ドメイン、エクソン３〜６はヘモポイエチンドメインをコードする。エクソン７、８および９は選択的にスプライシングされる。実施例５ＮＲ６の５'レース分析５'−レースを使用してNR6.1、2および3のIle 321をコードするヌクレオチド９６０の５'配列の性質を検討した。ヌクレオチドおよび対応するアミノ酸配列をそれぞれ配列番号：１２、１４、１６に示す。５'−レースを製造者の指示書によりマウス脳マラソン−レディーｃＤＮＡ（クローンテク(CLONETECH)、CATNo ．7450-1）でAdvantage KlenTaqポリメラーゼ（クローンテク、CAT No．K1905-1 ）を用いて行った。要約すれば、増幅の最初のラウンドは、５０μｌの総容量のうち５μｌのｃＤＮＡを用いて、９４℃×０.５分、６８℃×２.０分をGeneAmp 2400（パーキン・エルマー）３５サイクルによって各１mMのプライマーＡＰ１＆Ｍ１１６［配列番号：２］またはＡＰ１＆Ｍ１５９［配列番号：4］を用いて行った。最初の増幅からの５０倍希釈産物の５μｌの量をついで再度増幅した：最初の増幅のプライマー、ＡＰ１およびＭ１１６[配列番号２]で製造された産物に関して、プライマーＡＰ２およびＭ１０８[配列番号：３]の１mMを第２次増殖に用いた。最初の増幅のプライマー、ＡＰ１およびＭ１１６[配列番号２]で製造された産物に関して、別個の２つの２次反応を行った。１つの反応は１mMのプライマーＡＰ２＆Ｍ２４２［配列番号：５］およびもう一方の反応はＡＰ２＆Ｍ１１２［配列番号：６］で行った。増幅は９４℃×０.５分、６８℃× ２.０分を２５サイクルで行った。これらのサンプルをアガロースゲル電気泳動によって分析した。１つのエチジウムブロミド染色増幅産物が観察されると、それは製造者の指示書に従って（キアゲン（Qiagen）、CAT No．DG-0281）QIAquic k PCR精製キットによって精製し、ついでその配列を２次増幅工程において使用された両プライマー、すなわちＡＰ２および［配列番号：３］、Ｍ２４２［配列番号：５］またはＭ１１２［配列番号：６］のいずれかを用いて、直接決定した。実施例６ＮＲ６のクローニングマウス脳および睾丸ｃＤＮＡライブラリーの変性WSXWSオリゴヌクレオチドでの最初のスクリーニングおよび後のマウス睾丸、マウス脳およびKUSA骨芽細胞株からｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングから、ＮＲ６ｃＤＮＡｓの総量が単離された。ＮＲ６のヌクレオチド配列はまた脳ｃＤＮＡの５'レース分析からも決定された。さらに、ＮＲ６をコードする２つのネズミゲノムＤＮＡクローンもまた単離された。ＮＲ６ｃＤＮＡクローンの比較は、１２３塩基対５'−非翻訳領域および１２２２１塩基対のオープンリーディングフレームを含むヌクレオチド配列の共通領域が推定開始メチオニンMet 1から始まりGln 407（それぞれ配列番号１２、１４および１６）までであることを明らかにした。この共通のオープンリーディングフレーム内に、４つの保存されたシステイン残基およびヘモポイエチン受容体ファミリーのメンバーに典型的な５つのアミノ酸モチーフWSXWSが含まれるヘモポイエチン受容体ドメインが観察された。さらなる分析はヌクレオチド１２２１の後に、３つの異なる種類のＮＲ６ｃＤＮＡが見出され、これらはＮＲ６.１ＮＲ６.２およびＮＲ６.３（それぞれ配列番号１２、１４および１６）と命名された。それぞれは古典的な膜貫通領域を欠いており、それゆえ細胞外環境に分泌されやすいように思われる受容体をコードしていた。３種類のＮＲ６タンパク質の推定Ｃ−末端領域が異なっているようであるが、それらをコードするｃＤＮＡｓもまた３'−非翻訳領域の共通領域を持つ。配列番号１２、１４、１６に関して両ヌクレオチドおよびアミノ酸の数は推定開始メチオニンで始まる。ＮＲ６.１およびＮＲ６.２はＱ４０７をコードするヌクレオチド１２２３に同一であり、これはエクソンの末端を表す。ＮＲ６.１はＮＲ６.２にのみ存在するエクソンをスプライシング(out)し、ＮＲ６.２と共有する最終エクソンについて異なるリーディングフレームを用いる。３'−非翻訳領域はＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３によって共有され、ＮＲ６.２はＤ４０８をコードするヌクレオチド１２２４で開始し、Ｇ４２２のコドンにおける最初のヌクレオチドをコードするヌクレオチド１２６４で終了するエクソンにスプライシング(in)し、ＮＲ６．２（図１参照）と共有する最終エクソンについて異なるリーディングフレームを用いる。ＮＲ６.３はヌクレオチド１２２４位からスプライシングできず、それゆえイントロンを介して翻訳は続行され、Ｃ−末端タンパク質領域を生じる。マウス脳ｃＤＮＡ調製物からの５'−ＲＡＣＥ増幅によって製造されたＮＲ６ｃＤＮＡ産物の配列は配列番号：１８に示される。５'−ＲＡＣＥを用いて同定されたヌクレオチド配列はヌクレオチドＣ１５１からのＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３をコードするｃＤＮＡｓの配列に同一であるようであり、Pro51のためのコドンの最初のヌクレオチドである。このヌクレオチドの５'、配列(複数 )は異なり、その配列はＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３には見出されない独特のものである。さらに、１つのヌクレオチド差異が存在し、ヌクレオチド４７５にＡよりＧを含むＲＡＣＥからの配列を有し、結果Thr159がAlaとなった。ゲノムクローンの分析は、それらに重複およびＮＲ６の３形態のコーディング領域（図１、２および３）のコーディング領域の大部分をコードするエクソンを含むことを明らかにした。これらのゲノムクローンは、ＮＲ６ｃＤＮＡｓのAsp5 0（ヌクレオチド１４８）からコードされるエクソンを含む。ｃＤＮＡｓのこの５'配列は、５'-非翻訳領域およびMet1からGln４９までをコードする領域（配列番号１２、１４、１６）を含み、かつ５'ＲＡＣＥ産物（配列番号１８）の分析から推定される５'末端は単離された２つのゲノムクローン中に存在しなかった。ＮＲ６ゲノムＤＮＡクローン分析はまた、見出された３種類のＮＲ６ｃＤＮＡｓの説明も提供した。ＮＲ６.１、ＮＲ６.２およびＮＲ６.３はＮＲ６ｍＲＮＡ（図１）の別のスプライシングによって生じるようである。３つの異なるＮＲ６タンパク質が共有すると推定される最終のアミノ酸残基はGln４０７である。配列番号：１８はGln４０７が、ヌクレオチドｇ５８５０〜ｇ６０３７（図２参照）をカバーするエクソンによってコードされる最終アミノ酸であることを示している。このエクソンの末端からの別のスプライシング（図１）はＮＲ６.１（配列番号：１２）、ＮＲ６.２（配列番号：１４）およびＮＲ６.３（配列番号：１６）をコードするｃＤＮＡｓの生成を説明する。ＮＲ６.１の場合は、ｇ６９３８〜ｇ６４２５の領域はスプライシングされ、ｇ６０３７およびｇ６４２６の近位に導入される。ＮＲ６.２の場合、ｇ６０３８からｇ６１４１の領域がスプライシングされ、６１４２からｇ６１８３からのエクソンが保存され、ついで、ｇ１８３からｇ６４２５までの領域がスプライシング(out)される。ＮＲ６. ３はヌクレオチドｇ６０３８からスプライシングが全く無い時に生じるようである。３つ全部の形態に関して、膜貫通よりはむしろ分泌型が製造されるが、これは推定Ｃ−末端領域において異なっている。追加の５Ｎ配列を有するゲノムＮＲ６配列は図３に示す。実施例７ＥＳＴｓ配列番号：１６に示されるスプライシングされていない型に対応するネズミＮＲ６とデータベースを調査した。使用されたネズミＮＲ６配列を配列番号：２２に示す。調査したデータベースは：（i）dbEST−発現された配列タグのデータベースナショナル・センター・フォー・バイオテクノロジー・インフォメーション・ナショナル・ライブラリー・オブ・メディスン（National Center for Biotechn ology Information National Library of medicine）、３８Ａ、８Ｎ８０５８６００ロックビル・パイク(Rockville Pike)、ベテスダ（Bethesda）、メリーランド２０８９４電話番号：００１１−１−３０１−４９６−２４７５ＦＡＸ番号：００１５−１−３０１−４８０−９２４１米国。（ii）日本ＤＮＡデータベースのＤＮＡデータベースリリース３６８９。サンゾ・ミヤガワ（Sanzo Miyagawa）監督／データベース管理者、ヒデノリ・ハヤシダ（Hidenori Hayashida）、科学論評家ユキコ・ヤマザキ（Yukiko Yamaz aki）／エリコ・ハタダ（Eriko Hatada）／ヒロアキ・セリザワ（Hiroaki Seriz awa）、注釈家／論評家モトノ・ホリエ（Motono Horie）／シゲコ・スズキ（Shi geko Suzuki）／ユミコ・サタオ（Yumiko Satao）、秘書／タイピスト、日本国４１１静岡県三島市谷田１１１１、国立遺伝子情報分析遺伝子情報研究所の遺伝的センターのＤＮＡデータバンクによって調製された。（iii）EMBL核酸配列データ・バンク・リリース４７．０。（iv）EMBL核酸配列データ・バンク・ウイークリー・アップデイツ・シンス・リリース４４。（v）ジェネティック・シークエンス・データ・バンク・ＮＣＢＩ−ジーンバンク・リリース９４。ナショナル・センター・フォー・バイコテクノロジー・インフォメーション・ナショナル・ライブラリー・オプ・メディスン（National Center for Biotechnol ogy Information National Library of Medicine）３８Ａ、８Ｎ８０５８６００ロックビル・パイク、ベテスダ、メリーランド２０８９４、電話番号：００１１−１−３０１−２９５−２４７５、ＦＡＸ番号：００１５−１−３０１−４８０−９２４１米国。（vi）キュムラティブ・アップデイツ・シンスＮＣＢＩ−ジーンバンク・リリース８８（Cumulative Updates since NCBI-GenBank Release 88）。ナショナル・センター・フォー・バイコテクノロジー・インフォメーション・ナショナル・ライブラリー・オブ・メディスン、３８Ａ、８Ｎ８０５８６００ロックビル・パイク、ベテスダ、メリーランド２０８９４、電話番号：００１１− １−３０１−２９５−２４７５、ＦＡＸ番号：００１５−１−３０１−４８０− ９２４１米国。ネズミプローブを用いてのデータベースの調査によりそのプローブに対しての配列の類似性を有するいくつかのＥＳＴの配列が同定された。そのＥＳＴは： W66776（マウス配列） MM5839（マウス配列） AA014965（マウス配列） W46604（ヒト配列） W46603（ヒト配列） H14009（ヒト配列） N78873（ヒト配列） R87407（ヒト配列）実施例８ヒトＮＲ６をコードする３'ｃＤＮＡクローンの単離ヒトＮＲ６をコードするＰＣＲ産物を、マウスＮＲ６配列（配列番号：２２）で調査したデータベースから同定されたヒトＥＳＴに基づくオリゴヌクレオチドＵＰ１およびＬＰ１（以下参照）を用いて製造し（ジーンバンク受領番号：Ｈ１４００９、ジーンバンク受領番号：ＡＡ０４２９１４）、。ＰＣＲをヒト胎児肝臓ｃＤＮＡライブラリー（マラソン既製ｃＤＮＡクローンテク７４０３−１）に関してアドバンテージ・クレン・Taqポリメラーゼミックス（クローンテク８４１７−１）を用いて、９４℃で３０秒間から、ついで６８℃３分間を３５サイクルの後、６８℃で４分間ついで１５℃で停止させて提供されたバッファー中で行った。パーキン・エルマー・GeneAmp PCTシステム２４００サーマル・サイクルに関する標準的ＰＣＲプログラムを使用した。ＰＣＲは約５６０塩基対（bp；配列番号：１８）の主要産物を産生し、それはランダム・プライマー法を用いて［ α−³²Ｐ］ｄＣＴＰで放射性標識し（アマシャム、ＲＰＮ、１６０７、メガ・プライム・キット）、ついでヒト胎児腎臓５Ｎ−ＳＴＲＥＴＣＨＰＬＵＳｃＤＮＡライブラリー（クローンテク＃ＨＬ１１５０ｘ）をスクリーニングするために使用した。ライブラリースクリーニングをラピッド・ハイブリダイゼーション・バッファー（Rapid Hybridization Buffer）（アマシャムＲＰＮ１６３６）を用いて製造者の指示書により行い、ついで膜を０.１×ＳＳＣ／０.１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳ中で６５℃で３０分間洗浄した。２つの独立したｃＤＮＡクローンをラムダファージとして入手し、続いてサブクローニングおよびシークエンシングした。両クローン（ＨＦＫ−６３およびＨＦＫ−６６）は、マウスＮＲ６と配列類似性を示す１.４キロベース（kb）インサートを含む。ＨＦＫ−６６のの配列および対応するアミノ酸翻訳は配列番号：２４に示す。クローンＨＦＫ−６６の翻訳タンパク質配列はマウスＮＲ６と高い配列類似性を示す。オリゴヌクレオチド実施例９ヒトＮＲ６のゲノム構造ヒトＮＲ６をコードするヒトゲノムＤＮＡクローンを放射性標識したオリゴヌクレオチド２１９９および２２００（以下参照）を用いてヒトゲノムライブラリー（ラムダＦＩＸＪＩＩストラタジーン９４６２０３）をスクリーニングすることによって単離した。これらのオリゴヌクレオチドをヒトＥＳＴｓ（ジーンバンク受領番号：Ｒ８７４０７、ジーンバンク受領番号：Ｈ１４００９）に基づいて設計されたものであり、マウスＮＲ６で調査したデータベースから同定されたものである。フィルターを３７℃で一晩２mg／mlのウシ血清アルブミン、２mg／ml のフィコール、２mg／mlのポリビニルピロリドン、１００mM ATP、１０mg／mlのｔＲＮＡ、２mMピロリン酸ナトリウム、２mg／mlのサケ精子ＤＮＡ、０.１％（ｗ／ｖ）ＳＤＳおよび２００mg／mlのアジ化ナトリウムを含む６×ＳＳＣ中でハイブリダイズし、ついで６５℃にて６×ＳＳＣ／０.１％ＳＤＳで洗浄した。５つの独立したゲノムクローンを得てシークエンシングした。得られた配列の範囲を決定し、それらのクローンは重複し、マウスＮＲ６と類似のゲノム構造を示すことを表した。エクソンコーディング領域は、ゲノムクローンによってカバーされる領域に関してほとんど同一であるが、イントロンコーディング領域は異なっており、イントロンの大きさは共通点がある。既知の重複の程度は図５に示す。オリゴヌクレオチド：実施例１０ヒトＮＲ６ｍＲＮＡ発現のノザンブロット分析クローンテク多数組織ノザンブロット（Human MTN Blot、クローンテク＃７７６０−１、ヒトＭＴＮＢｌｏｔＩＶ、クローンテク＃７７６６−１、ヒト脳MT N Blot ＩＩ、クローンテク＃７７５５−１、ヒト脳MTN Blot III、クローンテク＃７７５０）を放射性標識した３ＮヒトＮＲ６ｃＤＮＡクローン、ＨＦＫ− ６６（配列番号：２４）でプローブ化した。そのクローンをランダム・プライマー法を用いて［α−³²Ｐ］ｄＣＴＰで放射性標識した（アマシャム、ＲＰＮ、１６０７、メガ・プライム・キット）。ハイブリダイゼーションをエクスプレスハイブリダイゼーション溶液（クローンテクＨ５０９１０）中で６７℃で３時間行い、膜を５０℃で６×ＳＳＣ／０.１％w/v ＳＤＳで洗浄した。１.８kbの転写産物が生殖組織、消化組織および中性の組織にわたる多様なヒト組織中で検出された。心臓、胎盤、骨格筋、前立腺および脳の多様な領域では高程度で観察され、低いレベルでは皐丸、子宮、小腸および大腸において観察される。これらのノザンブロットを示す写真は必要ならば利用できる。この発現パターンはマウスＮＲ６で観察される発現パターンとは異なる。実施例１１マウスＮＲ６発現ベクター pEF-FLAG/mNR6.1 マウスＮＲ６.１の成熟コーディング領域を以下のオリゴヌクレオチド：を用いて増幅して、その成熟コーディング領域の５'末端でのイン・フレームでのAsc I制限酵素部位、および３'末端ではMlu I部位を導入した。ＤＮＡ断片由来の得られたＰＣＲをついでAsc IおよびMlu Iで消化し、ついでｐＥＦ−ＦＬＡＧのMlu I部位にクローニングした。ＮＲ６の発現は、（１６）記載と同様に、ポリペプチド・チェイン・エロンゲーション・ファクタ−１αプロモーターの制御下にあり、ｐＥＦ−ＦＬＡＧからのＩＬ３シグナル配列を用いると、ＦＬＡＧタグしたＮＲ６タンパク質のＮ−末端の分泌が得られた。 pEF-FLAGを以下のように発現ベクターpEF-BOSを修飾することによって製造した： pEF-BOS（１６）をXba Iで消化してマウスＩＬ３シグナル配列（MVLASSTTSIHT MLLLLLMLFHLGLQASIS）およびＦＬＡＧエピトープ（DYKDDDDK）をコードするリンカーを合成した。Asc IおよびMlu I制限酵素部位をクローニングサイトとして導入した。リンカーの配列は以下である：２つのオリゴヌクレオチドを一緒にアニーリングし、ついでpEF-BOSのＸｂａ I部位にライゲーションしてpEF-FLAGを得た。 pCOS1/FLAG/mNR6およびpCHO1/FLAG/mNR6 ＩＬ３シグナル配列／Flag／mNR6およびヒトＧ−ＣＳＦｃＤＮＡからのポリ（Ａ）アデニル化シグナルをコードする配列を有するＤＮＡ断片を制限酵素EcoR Iを用いてpEF-FLAG/mNR6から切り出した。ついでこのＤＮＡ断片をpCOS1およびp CHO1のEcoRIクローニングサイトに挿入した。 pCOSIおよびpCHO1ベクターは以下のようにして構築された。pCHO1はまた参照文献(17)にも記載されるが異なる選択マーカーを使用した。 pCOS1を、HEF-12h-gα１をEcoRIおよびSma Iで消化し（国際出願公開番号WO92 /19759の図２４参照）、消化産物をEcoRI-Not-I-BamHIアダプター（タカラ４５１０）とライゲーションすることによって調製した。得られたプラスミドはEFI αプロモータ-／エンハンサー、Nco^rマーカー遺伝子、ＳＶ４０E、OriおよびAmp^r マーカー遺伝子を含む。実施例１２ｍＮＲ６は、ＣＨＯ細胞のトランスフェクションの後ＮＮ Flagタグタンパク質として、KUSA細胞のトランスフェクションの後ＣＮ Flagタンパク質として発現され、両方の場合に、種々の濃度の２量体および凝集体のＮＲ６が分泌された。実施例１３マウスＮＲ６発現ＮＲ６発現実験をマウスノザンブロットにおいて行った。成体マウスに使用した感作レベルで、ＮＲ６発現は唾液腺、肺および睾丸に検出された。胚発達中、ＮＲ６は受精第１０日目から誕生までのあいだの胎児組織において発現している。細胞株において、ＮＲ６発現はＴリンパ球株ＣＴＬＬ−２ならびにＦＤ−ＰｙＭＴ（ポリオーマミドルＴ遺伝子を発現するＦＤＣ−Ｐ１ミエローマ細胞）、および骨髄を含む繊維芽細胞および胎児肝ストローマ細胞で観察された。実施例１４ＣＨＯおよびＫＵＳＡｍＮＲ６の発現、精製および特徴付けこの方法は再度折り畳みなしにＣＨＯ由来のＮＮ FLAG-mNR6の２量体の製造を提供する。すべての他の方法によってＮＲ６は製造でき、本発明にそれらは包含され得る。Ａ．ＣＨＯ由来Ｎ'ＦＬＡＧ−ｍＮＲ６（２量体）の製造（i）タンパク質の製造構造および機能的活性を分析するために、Ｎ−末端ＦＬＡＧ（ＮＮＦＬＡＧ）配列を有するマウスＮＲ６の全コーディング配列を含むｃＤＮＡ断片を発現ベクターｐＣＨＯ１のEcoRIサイトにクローニングする。Ｎ−末端ＦＬＡＧ−タグＮＲ６の安定した製造のために、該ベクターはＥＦ１aプロモーターのコントロール下でＮＲ６遺伝子とともに選択マーカーとしてのＤＨＦＲ（ジヒドロ葉酸レダクターゼ）を含む。ＣＨＯ細胞をポリカチオンリポソームトランスフェクション剤（リポフェクタミン（Lipofectamine）、ギブコＢＲＬ（GibcoBRL）を用いてこの構築物でトランスフェクションした。（ii）リポソームトランスフェクション法６ウェル組織培養プレートを用いて、２mlＩＭＤＭ＋１０％（ｖ／ｖ）ＦＣＳ中の２×１０⁵KUSA細胞または２mla-MEM＋１０％（ｖ／ｖ）ＦＣＳ中の２×１０⁵ ＣＨＯ細胞を７０％コンフルエントまで培養した。１００Ｆ１ＯＰＴＩ−ＭＥＭＩに希釈した２ＦｇＤＮＡ（ギブコＢＲＬ、米国）を１００Ｆ１ＯＰＴＩ −ＭＥＭＩに希釈した１２Ｆｌリポフェクタミンと緩やかに混合し、ついで室温で３０分間インキュベートしてＤＮＡ複合体を形成させた。ＤＮＡ複合体をＯＰＴＩ−ＭＥＭＩの総１ml容量に緩やかに希釈し、ついで洗浄したKUSAまたはC HO細胞単層上にのせた。さらに１ml ＩＭＤＭ＋２０％（v/v）ＦＣＳ（KUSA細胞）または１mlα−ＭＥＭ＋２０％（v/v）ＦＣＳ（CHO細胞）を５時間後にトランスフェクションした細胞に加えた。２４時間で、培養培地を新鮮完全増殖培地で置換した。トランスフェクション４８時間後に、選択を適用した。相対的に高い濃度のＮＲ６の分泌するメトトレキサート耐性クローンを選択し、ついでさらなる分析を行った。（iii）タンパク質発現ＣＨＯ細胞をヌクレオチド無含有α−ＭＥＭ＋１０％（v/v）FCS中のローラーボトル中でコンフルエンスまで増殖させた。製造者の指示書に従って条件付けた培地中での１００ng／mlを用いて選択を維持した。発現をバイオセンサー（Bios ensor）によってモニターし、その回収は３日または４日で最良であることが判明した。Ｂ．タンパク質分析（i）バイオセンサー分析発現および精製をバイオセンサー分析（BiaCoreTM、スウェーデン）によってモニターし、その際FLAGペプチド配列に特異的な抗FLAGペプチドM2抗体（コダック・イーストマン（Kodak Eastman）、米国）をセンサーチップに結合した。画分をセンサー表面（共鳴単位）への結合について分析し、ついでサンプルを次の画分の分析の前に５０mMジエチルアミン（pH１２.０）を用いて表面から除去した。そのバイオセンサーの固定および実行条件は製造者の指示書に従った。（ii）タンパク質の製造ＮＲ６の製造および分析のために、ＣＨＯ細胞から製造された条件付けた培地（２Ｌ）を第３日の後、コンフルエンスの後に回収した。調整培地は、分子量１０,０００カットオフのジアフィルトレーションを用いて濃縮した（イージー・フロー・サルトリアス(Easy Flow，Sartorius，Aus)。２００mlの容量（すなわち１０×濃縮）で、サンプルを２０mM Tris、０.１５Ｍ NaCl、０.０２％（v/v ）Tween 20（pH7.5）（バッファーＡ）に変えた。（iii）ｍＮＲ６の免疫沈降およびウエスタン・ブロット分析濃縮調整培地（１ml）をＭ２アフィニティー樹脂（２０F1、コダック・イーストマン）で免疫沈降した。ｍＮＲ６の構造上の特徴を調べるためにＳＤＳＰＡＧＥを還元および非還元条件の下で行った。分離はNOVEX4-20％（v/v）Tris／グリシン勾配ゲル上で行い、ついでタンパク質をＰＶＤＦ膜へとトランスファーした。ウエスタンブロットをビオチン化したＭ２抗体（第１抗体、１：５００）でプロービングし、ついでストレプトアビジンペルオキシダーゼ（第２抗体、１：３０００）でプロービングした。サンプルを電気化学蛍光（ECL、デュポン（Dup ont）、米国）を用いてオートラジオグラフィーによって可視化した。前染色標準の回帰分析によって（バイオラド（BIORAD）、Aus）モノマー単位の分子量を６５,０００ダルトンであると算定した。非還元条件の下で分子量を１２７,０００であると算定したが、これはＮＲ６がジスルフィド結合した２量体であることを示唆する。約２５０,０００ダルトンでの４量体複合体流出も観察された。約５０,０００ダルトンの流出バンドが観察されたが、非還元条件の下でモノマーＮＲ６が全く検出されなかったことはこの系で発現したＮＲ６の多数がジスルフィド結合体であることを示唆している。（iv）ｍＮＲ６のアフィニティークロマトグラフィー濃縮調整培地（２００ml）を重力に従いＭ２アフィニティー樹脂（５ml）にかけた。回収を増強するために未結合画分をカラムに繰り返して４回かけ、バッファーＡの２００容量でカラムを十分に洗浄した。バイオセンサー分析は濃縮液中にもともと存在するＭ２結合の約２０％が未結合画分中に存在することを示唆している。結合画分を免疫脱吸着剤（５０ml）；アクチセプ（actisep）（ストラタジーン・ラブズ（Stratagene Labs）、米国）を用いてカラムから溶出させた。（v）ｍＮＲ６のイオン交換および脱塩陰イオンクロマトグラフィーの前にｍＮＲ６のバッファー交換をするために、溶出した画分（５０ml）の１０ml分をＧ２５セファロース（ファルマシア、スウェーデン）を含むＸＫカラム（４００×２６mm I.D.）にかけた。クロマトグラフィーをオンラインＵＶ２８０および誘電性モニターを備えたＦＰＬＣ（ファルマシア、スウェーデン）を用いて４ml/分で行った。移動相は１０mM Tris、０. １M NaCl、０.０２％v/v Tween、ｐＨ８.０であった。１０ml画分を１２.５分〜２５分の間で回収して最良の塩回収および脱塩した。画分をバイオセンサー分析し、結合により保存した。すべての保存活性画分を等容量の２０mM Tris、０.０２％（v/v）Tween、pH8. 5（バッファーＢ）で希釈し、ついでMono Q 5/5（ファルマシア、スウェーデン）に２ml／分の流速でかけた。そのカラムをバッファーＢで洗浄した。溶出はバッファーＢと０.６Ｍ NaClを含むバッファーＢの直線勾配を用い、流速１ml／分にて３０分かけて行った。画分（１分）を回収し、ついでバイオセンサーで分析し、ＳＤＳＰＡＧＥおよびウエスタンブロットでも分析した。画分１５〜２６（約０.４Ｍ NaCl）はバイオセンサーにより示されるように、ｍＮＲ６の大部分を含むようである。Ｃ．ＣＨＯ由来Ｎ'ＦＬＡＧ−ｍＮＲ６（モノマー形態）の製造（i）タンパク質の製造マウスＮＲ６の全コーディング領域とＮ−末端ＦＬＡＧＪ配列を含むｃＤＮＡ断片をＮ−末端ＦＬＡＧ−タグタンパク質の製造のために発現ベクターｐＣＨＯ１にクローニングした。このベクターはＥＦ１αプロモーターのコントロール下でＮＲ６遺伝子の発現を伴うネオマイシン耐性遺伝子を含む。この発現構築物をＣＨＯ細胞にリポフェクタミン（ギブコＢＲＬ、米国）を用いて製造者の指示書に従い、トランスフェクションした。トランスフェクションした細胞は、ゲネチシン（geneticin）（６００Ｆｇ／ml、ギブコＢＲＬ、米国）で選択した耐性細胞を有するＩＭＤＭ＋１０％（v/v）FCS中で培養した。ネオマイシン耐性クローンは比較的高濃度でＮＲ６を分泌するものを選択し、さらなる分析を行った。（ii）タンパク質発現血清無含有調整培地中で発現したＮ'ＦＬＡＧ−ＮＲ６（１０リットル）をトランスフェクションしたＣＨＯおよび細胞から回収した。回収された培地をＳｌＹ１０カートリッジ（アミシオン分子量は１０,０００減少）を備えたＣＨ₂ウルトラフィルトレーション系を用いて濃縮した。還元および非還元ＳＤＳＰＡＧＥ条件下で発現生成物の予備試験を行い、ついでウエスタンブロット分析が行われた。ウエスタン上のタンパク質の可視化は第１抗体抗ＦＬＡＧＭ２に特異的であった。還元条件下で約６５,０００ダルトンのバンドが観察された。非還元条件下で、２量体およびより大きい分子量の凝集体が観察された。これらは、還元ゲル中では存在しないジスルフィド結合モノマーである。少量のモノマーは非還元ゲルに存在すると思われる。（iii）ＮＲ６のアフィニティークロマトグラフィー濃縮調整培地をＦＬＡＧＭ２アフィニティー樹脂（１００×１６mm I.D.）にかけた。未結合タンパク質をカラムから洗浄した後、結合したタンパク質をＰＢＳ中、ＦＬＡＧペプチド（６０Fg／ml）を用いて溶出した。（vi）ＮＲ６のイオン交換クロマトグラフィーアフィニティーカラムからの溶出した画分を、２５,０００カットオフ透析チュービング（cut-off dialysis tubing）（spectra/Por7、スペクトラム）を用いて５０mMジチオトレイトール（ＤＴＴ）を含む２０mM Tris-HCl pH8.5（バッファーＣ）に対して一夜透析した。透析した画分を、前もって５mM DTTを含むバッファーＣで平衡化したMONO Q 5/5（ファルマシア、スウェーデン）にかけた。クロマトグラフィーをバッファーＣと０.１Ｍ NaClを含むバッファーＣ間の直線勾配を用いて流速０.５ml／分で行った。（v）ＮＲ６の再生(refolding) Mono QからのＮＲ６を含む画分を５０mM DTTに調整し、４℃で一夜放置した。再生を開始するために、ついでサンプルを最終タンパク質濃度１００Fg/mlで、５０mM Tris-HCl（pH8.5）、２Ｍ尿素、０.１％（v/v）Tween２０、１０mMグルタチオン（還元）および２mMグルタチオン（酸化）に対して透析した。折り畳み (folding)を２４時間かけてバッファーを１回取り換えて環境温度にて行った。（v）逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）折り畳まれた製造物を、前もって０.１％（v/v）トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）にて平衡化したVydac C4樹脂（２５０×４.６mm I.D.）を用いてＲＰ−ＨＰＬＣによりさらに精製した。０〜８０％（v/v）アセトニトリル／０.１％（v/v）ＴＦＡの直線勾配を用いて流速１ml／分で溶出を行った。Ｄ．ｐＣＨＯ１／ＮＲ６／ＦＬＡＧＮＲ６の本来のＮ末端を決定するために、Ｃ末端ＦＬＡＧＮＲ６ＣＨＯ細胞株を確立した。プラスミドpKUSA166（pBLUESCRIPTのEcoRIサイトにクローニングしたマウスＮＲ６ｃＤＮＡ）をBamHIで消化してマウスＮＲ６の最終の１５アミノ酸をコードする配列を除去した。マウスＮＲ６の３'末端の後にFLAGペプチドタグをコードする合成オリゴヌクレオチドをアニーリングし、pKUSA166のBamHIサイトにライゲーションした。オリゴヌクレオチドの配列は以下である：− リンカーの５'末端がサイレント突然変異を導入し（ＣＴＧ>ＴＴＧ）、リンカーの挿入の際に５'BamHIを破壊する。Ｃ−末端ＦＬＡＧを有するＮＲ６ｃＤＮＡ（本来のシグナル配列）をEcoRIおよびBamHIでpKUSA166から切りだし、ｐＣＨＯのEcoRI-BamHIクローニングサイトにクローニングした。このベクターがＣ−末端FLAGタグ（CN FLAG-mNR6）を有するＮＲ６タンパク質の分泌をもたらす。このベクターはKUSA細胞からのＮＲ６タンパク質の分泌をもたらす。ベクターｐＣＨＯ１は異なる分泌可能なマーカーであるが（１７）に既述のものである。（i）ポリクローナルＮＲ６抗血清の製造ＮＲ６のＮ末端領域からの以下のペプチドはＮＲ６に対するポリクローナル抗血清の製造のために選択されたそのペプチドをＫＬＨにコンジュゲートし、ウサギに注入した。ＮＲ６ペプチド配列に特異的であるポリクローナル抗体の製造および精製は標準的方法に従う。（ii）タンパク質発現Ｃ末端タグｍＮＲ６のｃＤＮＡでトランスフェクションしたKUSA細胞を、１ｏ％（v/v）ＦＢＳを含むＩＭＤＭ培地を用いてフラスコ（８００ml）中でコンフルエンスに達するまで増殖させた。調整培地（１００ml）をコンフルエンスに達した後３−４日に回収した。（iii）免疫沈降およびウエスタンブロットによるＮＲ６の特徴分析推定配列を有するＮＲ６がｃＤＮＡでトランスフェクションしたＫＵＳＡ細胞において製造されることを確立するために、Ｍ２抗体およびに精製ＮＲ６特異的ウサギ抗体の両者を用いたウエスタンブロット分析を行った。調整培地（１〜５ ml）を、Ｍ２アフィニティー樹脂（１０−２０F1）で免疫沈降した。ついで結合に十分な時間ののち、ビーズをＭＴ−ＰＢＳで洗浄し、続いてＮＲ６を１００Fg ／mlＦＬＡＧペプチド（４０Ｆ１、（１、５分インキュベート））で溶出させた。ついでサンプルを還元および非還元ＳＥＳＰＡＧＥ、ついでウエスタンブロット分析にかけた。精製したＮＲ６ポリクローナル抗体（Ｇタンパク質によって精製）およびＭ２抗体の両者は約６５,０００ダルトンの分子量のサイズの還元条件の下でのバンドを認識する。Ｎ末端およびＣ末端での２つの抗体認識が存在するので、ＮＲ６の全長が製造されるとみなすのが合理的である。標準的方法によるそれぞれの抗体のビオチン化はバックグランドを減少させる。非還元条件下で約１２７,０００の分子量のバンドに対するポリクローナルＮＲ６結合抗体はダイマーＮＲ６ジスルフィド結合形態と一致する。微量成分の４量体ＮＲ６が存在し、ポリクローナルＮＲ６抗体を用いるとモノマーＮＲ６は明らかでない。実施例１５ＮＲ６ノックアウトマウスの産生ＮＲ６標的ベクターを構築するために、エクソン２〜６を含む４.１kbのゲノムＮＲ６ＤＮＡを削除し、Ｇ４１８−耐性カセットで置換し、それぞれ２.９および４.５kbの５Ｎおよび３ＮＮＲ６アームを残した。エクソン７，８および３Ｎフランキング配列を含むマウスゲノムＮＲ６クローン２.２（図３）の４.５kb XhoI断片をpBluescriptのXhoIサイトにサブクローニングし、pBSNR6Xho4.5を産生させた。同じゲノムクローンからのＮＲ６イントロン１内の２.９kb NotI-S tuI断片をpBSNR6Xho4.5をNotIおよびEcoRV消化したものにクローニングし、ｐＮＲ６−Ｅｘ２−６を製造する。このプラスミドを、２つのＮＲ６断片間に位置するClaIで消化し、平滑末端を続け、lacＺ遺伝子およびＰＫＧneoカセットを含む placZneoから平滑末端化した６kbのHindIII断片でライゲーションし、最終的なターゲティングベクターｐＮＲ６lacＺneoを製造する。pNR6lacZneoをNotIで直線化し、Ｗ９.５胚幹細胞にエレクトロポレーションした。４８時間後、トランスフェクションした細胞を１７５Fg/ml Ｇ４１８中で選択し、耐性クローンを取りだし、ついでさらに８日後膨張させた。標的ベクターが内在性ＮＲ６遺伝子で組換えられたクローンをゲノムＮＲ６クローン２.２からの０.６kbShoI-StuI断片を有するSpeI-消化したゲノムＤＮＡをハイブリダイズすることによって同定した。このプローブ（プローブＡ，図４）、これは標的ベクターにおけるＮＲ６配列に対する３Ｎに位置し、内在性（９. ９kb）および標的化した（７.１kb）ＮＲ６遺伝子座（図５）を区別した。ゲノムＤＮＡを３７℃で１６時間、SpeIで消化し、０.８％（w/v）アガロースで電気泳動し、ナイロン膜にトランスファーし、ついで０.５Ｍリン酸ナトリウム、７％（w/v）ＳＤＳ、１mM ＥＤＴＡを含む溶液中で³²Ｐ−標識したプローブにハイブリダイズさせ、ついで４０mMリン酸ナトリウム、１％（w/v）ＳＤＳを含む溶液中で６５℃にて洗浄した。ハイブリダイズしたバンドをコダックＸＡＲ −５フィルムおよび増感スクリーンを用いて−７０℃で１６時間オートラジオグラフィーによって可視化した。２つのターゲティングＥＳ細胞クローン、Ｗ９. ５ＮＲ６−２−４４およびＷ９.５ＮＲ６−４−２をＣ５７Ｂ１／６芽細胞に注入してキメラマウスを製造する。雄性キメラをＣ５７Ｂ１／６雌性と交配させてＮＲ６異種接合子を生み出し、野生型（ＮＲ６^+/+）、異種（ＮＲ６^+/-）および変異種（ＮＲ６^-/-）マウスを作成した。子孫の遺伝子型を尾の生検から抽出したゲノムＤＮＡのサザンブロット分析によって決定した。両方が標的化したＥＳ細胞クローン由来のＮＲ^+/-異種マウス間で交配からの幼マウスの遺伝子型は同種ＮＲ６^-/-変異体が存在しないことを明らかにした。誕生から幼マウスまでに異常にマウスが減少したことはないから、これはＮＲ６の欠如が胚発達または誕生直後で死滅したことを示唆している。発生の多様な段階での胚組織の遺伝子型は妊娠後期（１６日以降）または誕生の際に死が起こることを示唆している。実施例１６オリゴヌクレオチド当業者は本明細書に記載された発明が具体的に記載されたもの以外に多様な変化および修飾が可能であることを理解するであろう。本発明にはそのような変更および修飾のすべてが含まれると理解されるべきである。本発明はまた、本明細書で引用されるかまたは指摘された、工程、特徴、組成および化合物のすべてを個々にまたは集合的に、ついで上記工程または特徴の任意の２つまたはそれ以上の任意のかつすべての組み合わせを含む。

【手続補正書】【提出日】平成１２年７月２７日（２０００．７．２７）【補正内容】表３配列番号のまとめ配列配列番号アミノ酸配列 WSXWS 1 実施例１に挙げられているオリゴヌクレオチドプライマーおよびプローブ 2-11 ＮＲ６.１¹のヌクレオチド配列 12 ＮＲ６.１のアミノ酸配列 13 ＮＲ６.２²のヌクレオチド配列 14 ＮＲ６.２のアミノ酸配列 15 ＮＲ６.３³のヌクレオチド配列 16 ＮＲ６.３のアミノ酸配列 17 ＮＲ６特異的なプライマー⁴を用いての脳ｃＤＮＡの５ＮＲＡＣＥによって製造される産物のヌクレオチド配列 18 配列番号：１８のアミノ酸配列 19 脳ｃＤＮＡの５ＮＲＡＣＥに固有のヌクレオチド配列 20 配列番号：２０のアミノ酸配列 21 スプライシングしていないマウスＮＲ６ヌクレオチド配列 22 ヒトＮＲ６に対するＰＣＲ産物 23 ヒトＮＲ６をコードするクローンＨＦＫ−６６のヌクレオチド配列 24 配列番号：２４のアミノ酸配列 25 ＵＰ１およびＬＰ１オリゴヌクレオチド配列、それぞれ 26-27 マウスＮＲ６のゲノムヌクレオチド配列 28 配列番号：２８のアミノ酸配列 29 マウスＮＲ６.１オリゴヌクレオチドプライマー 30，31 マウスＩＬ−３シグナル配列 32 マウスＩＬ−３シグナル配列およびＦＬＡＧエピトープのリンカー配列 33-35 さらに５Ｎ配列を含むマウスＮＲ６のゲノムヌクレオチド配列 38 オリゴヌクレオチド２１９９および２２００、それぞれ 36，37 ＮＲ６のＮ−末端領域 39 オリゴヌクレオチド１９４３、２０７０および２０５７それぞれ 40,41,42 入してキメラマウスを製造する。雄性キメラをＣ５７Ｂ１／６雌性と交配させてＮＲ６異種接合子を生み出し、野生型（ＮＲ６^+/+）、異種（ＮＲ６^+/-）および変異種（ＮＲ６^-/-）マウスを作成した。子孫の遺伝子型を尾の生検から抽出したゲノムＤＮＡのサザンブロット分析によって決定した。両方が標的化したＥＳ細胞クローン由来のＮＲ^+/-異種マウス間で交配からの幼マウスの遺伝子型は同種ＮＲ６^-/-変異体が存在しないことを明らかにした。誕生から幼マウスまでに異常にマウスが減少したことはないから、これはＮＲ６の欠如が胚発達または誕生直後で死滅したことを示唆している。発生の多様な段階での胚組織の遺伝子型は妊娠後期（１６日以降）または誕生の際に死が起こることを示唆している。実施例１６オリゴヌクレオチド当業者は本明細書に記載された発明が具体的に記載されたもの以外に多様な変化および修飾が可能であることを理解するであろう。本発明にはそのような変更および修飾のすべてが含まれると理解されるべきである。本発明はまた、本明細書で引用されるかまたは指摘された、工程、特徴、組成および化合物のすべてを個々にまたは集合的に、ついで上記工程または特徴の任意の２つまたはそれ以上の任意のかつすべての組み合わせを含む。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 45/00 Ａ６１Ｋ 45/00 48/00 48/00 Ａ６１Ｐ 43/00 １０５Ａ６１Ｐ 43/00 １０５Ｃ０７Ｋ 14/715 Ｃ０７Ｋ 14/715 16/28 16/28 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ファーレイ，アリソンオーストラリア3068ビクトリア州ノース・フィッツロイ、ミラー・ストリート27／９ ―19番 (72)発明者ウィルソン，トレイシーオーストラリア3104ビクトリア州ノース・ボールウィン、フォーチュナ・アベニュー 26番 (72)発明者ツァン，ジャン―グオオーストラリア3029ビクトリア州ホッパーズ・クロッシング、カリ・クレセント３番 (72)発明者アレキサンダー，ウォーレンオーストラリア3039ビクトリア州ムーニー・ポンズ、パーク・ストリート13番 (72)発明者ラカー，スティーブンオーストラリア3034ビクトリア州アボンデイル・ハイツ、リバーサイド・アベニュー 26番 (72)発明者ファブリ，ルイスオーストラリア3082ビクトリア州ミル・パーク、レイバー・コート８番 (72)発明者小嶋哲郎東京都大田区南六郷１―８―１―302 (72)発明者前田正嗣茨城県つくば市春日１―６―２―606 (72)発明者菊池康文茨城県土浦市小松１―29―５―110 (72)発明者ナッシュ，アンドリューオーストラリア3070ビクトリア州ノースコート、グリーン・ストリート24番

Claims

【特許請求の範囲】１．モチーフ： Trp Ser Xaa Trp Ser［ＳＥＱＩＤＮＯ:１］（式中、Xaaはいずれかのアミノ酸である）を有する新規ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードする配列をコードするか、または相補的であるヌクレオチドの配列を含む核酸分子。２．XaaがAspまたはGluである、請求項１記載の核酸分子。３．上記核酸分子が、４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、 5N(A/G)CTCCA(A/G)TC(A/G)CTCCA 3N［SEQ ID NO:7］および 5N(A/G)CTCCA(C/T)TC(A/G)CTCCA 3N［SEQ ID NO:8］とのハイブリッド形成可能である、請求項１または２記載の核酸分子。４．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１２に記載のヌクレオチドの配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１２に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、これとハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列を含む、請求項３記載の核酸分子。５．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１４に記載のヌクレオチドの配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１４に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、これとハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列を含む、請求項３記載の核酸分子。６．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１６に記載のヌクレオチドの配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１６に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、これとハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列を含む、請求項３記載の核酸分子。７．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１８または２４に記載のヌクレオチドの配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１８または２４に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、これとハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列を含む、請求項３記載の核酸分子。８．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:２８に記載のヌクレオチドの配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:２８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、これとハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列を含む、請求項３記載の核酸分子。９．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:３８に記載のヌクレオチドの配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:３８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６０％の類似性を有するヌクレオチド配列、または４２℃にて低いストリンジェントな条件下で、これとハイブリッド形成可能なヌクレオチド配列を含む、請求項３記載の核酸分子。１０．上記ヘモポイエチン受容体がげっ歯類由来のものである、請求項４〜９のいずれか１項記載の核酸分子。１１．上記ヘモポイエチン受容体がひと由来のものである、請求項９記載の核酸分子。１２．（ｉ）ＳＥＱＩＤＮＯ：１２記載のヌクレオチド配列；（ii）ＳＥＱＩＤＮＯ：１４記載のヌクレオチド配列；（iii）ＳＥＱＩＤＮＯ：１６記載のヌクレオチド配列；（iv）ＳＥＱＩＤＮＯ：１８記載のヌクレオチド配列；（ｖ）ＳＥＱＩＤＮＯ：２４記載のヌクレオチド配列；（vi）ＳＥＱＩＤＮＯ：２８記載のヌクレオチド配列；および（vii）ＳＥＱＩＤＮＯ：３８記載のヌクレオチド配列からなる一覧表から選ばれる核酸分子を含む発現ベクター。１３．ＮＲ６またはその誘導体の特徴を有するヘモポイエチン受容体をコードするヌクレオチド配列をクローニングする方法であって、上記方法は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱＩＤＮＯ：７および／またはＳＥＱＩＤＮＯ：８の１つまたはそれ以上に記載されたアミノ酸配列をコードする配列についてヌクレオチドデータベースを検索し、上記検索で突きとめられたヌクレオチド配列に基づいて１またはそれ以上のオリゴヌクレオチドプライマーを設計し、上記１またはそれ以上のオリゴヌクレオチドを用いて核酸ライブラリーをスクリーニングし、ついで、上記ＮＲ６またはその部分または誘導体をコードするクローンを得ることを特徴とする方法。１４．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ：１３に記載のアミノ酸配列またはそれと少なくとも約５０％の類似性を有する、ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子。１５．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ：１５に記載のアミノ酸配列またはそれと少なくとも約５０％の類似性を有する、ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子。１６．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ：１７に記載のアミノ酸配列またはそれと少なくとも約５０％の類似性を有する、ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子。１７．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ：１９に記載のアミノ酸配列またはそれと少なくとも約５０％の類似性を有する、ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子。１８．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ：２５に記載のアミノ酸配列またはそれと少なくとも約５０％の類似性を有する、ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子。１９．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ：２９に記載のアミノ酸配列またはそれと少なくとも約５０％の類似性を有する、ヘモポイエチン受容体またはその誘導体をコードするヌクレオチドの配列を含む分離された核酸分子。２０．アミノ酸モチーフ： Trp Ser Xaa Trp Ser［ＳＥＱＩＤＮＯ:１］（式中、Xaaはいずれかのアミノ酸である）を含む分離された新規ヘモポイエチン受容体。２１．XaaがAspまたはGluである、請求項２０記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２２．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１３に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２３．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１５に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２４．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１７に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２５．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１９に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２６．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:２５に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２７．実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:２９に記載されたアミノ酸配列を含む、請求項２１記載の分離されたヘモポイエチン受容体。２８．哺乳動物におけるＮＲ６の発現をモジュレーションする方法であって、上記方法が上記ＮＲ６をコードする遺伝子配列を、アップレギュレーションまたはダウンレギュレーションするか、かさもなくばＮＲ６の発現をモジュレーションするのに十分である、時間および条件下でＮＲ６発現のモジュレーターの有効量と接触させる方法であり、上記ＮＲ６をコードする遺伝子配列が、ＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列から選ばれるか、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８の少なくとも１つと少なくとも約６０％の類似性を有する配列であり、かつ４２℃にて低いストリンジェントな条件下でこれらとハイブリッド形成し得ることを特徴とする方法。２９．哺乳動物におけるＮＲ６の活性をモジュレーションする方法であって、上記方法が哺乳動物にＮＲ６活性を増大または減少させるのに十分である、時間および条件下で分子の有効量を投与する方法であり、上記ＮＲ６が、アミノ酸配列： (ｉ)ＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％の類似性を有する配列から選ばれ、かつ４２℃にて低いストリンジェントな条件下でこれらとハイブリッド形成し得るヌクレオチド配列によってコードされており；かつ (ii)実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または３２、または３０に記載されているか、またはこれらと少なくとも約５０％の類似性を有する配列、を含むことを特徴とする方法。３０．可溶性のＮＲ６受容体および１またはそれ以上の医薬学的に許容ざれ得る担体および／または希釈剤を含む医薬組成物であって、上記ＮＲ６が、アミノ酸配列： (ｉ)ＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％の類似性を有する配列から選ばれ、かつ４２℃にて低いストリンジェントな条件下でこれらとハイブリッド形成し得るヌクレオチド配列によってコードされており；かつ (ii)実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または３２、または３０に記載されているか、またはこれらと少なくとも５０％の類似性を有する配列、を含むことを特徴とする医薬組成物。３１．ＮＲ６受容体に対する分離された抗体または抗体の製剤であって、上記ＮＲ６受容体が、アミノ酸配列： (ｉ)ＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列、またはＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載のヌクレオチド配列と少なくとも約６０％の類似性を有する配列から選ばれ、かつ４２℃にて低いストリンジェントな条件下でこれらとハイブリッド形成し得るヌクレオチド配列によってコードされており；かつ (ii)実質的にＳＥＱＩＤＮＯ:１２、または１４、または１６、または１８、または２４、または２８、または３８に記載されているか、またはこれらと少なくとも５０％の類似性を有する配列、を含む抗体または抗体の製剤。３２．ＮＲ６をコードする遺伝子のアレルの少なくとも１つに突然変異を含む形質転換動物。３３．ＮＲ６をコードする遺伝子のアレルの２つに突然変異を含む、請求項３２記載の形質転換動物。３４．上記動物がげっ歯動物である、請求項３２または３３記載の形質転換動物。