JP2001502171A

JP2001502171A - インターロイキン―１β変換酵素様のシステインプロテアーゼ

Info

Publication number: JP2001502171A
Application number: JP10516610A
Authority: JP
Inventors: ジユアン，シヤオ―チー; フレツチヤー，フレデリツク・エイ; パターソン，スコツト・デイ
Original assignee: アムジエン・インコーポレーテツド
Priority date: 1996-10-01
Filing date: 1997-09-18
Publication date: 2001-02-20
Also published as: WO1998014598A1; AU724214B2; MX9804289A; EP0870038A1; AU4430297A; US6512104B1; US20030170812A1; CA2236914A1

Abstract

(57)【要約】ＩＣＥ様のシステインプロテアーゼのファミリーの新規メンバーを同定した。該プロテアーゼファミリーをＬＩＣＥ（ＩＣＥ様）と命名し、本明細書記載のファミリーメンバーはＬＩＣＥ３である。ＬＩＣＥ３ポリペプチド、ＬＩＣＥ３をコードする核酸、並びにＬＩＣＥ３の発現のためのベクター及び宿主細胞を開示する。ＬＩＣＥ３アゴニストとアンタゴニストの同定方法及びアポトーシスの変化が特徴である疾患の治療方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】インターロイキン−１β変換酵素様のシステインプロテアーゼ発明の分野本発明は、インターロイキン−１β変換酵素（ＩＣＥ）と相同性を有する新規システインプロテアーゼに関する。該プロテアーゼは、アポトーシスの調節に関与する可能性のある、ＬＩＣＥ（ＩＣＥ様）と命名したシステインプロテアーゼのファミリーのメンバーである。発明の背景アポトーシスとも言われるプログラム細胞死は、多細胞生物の組織のサイズ及び細胞数のホメオスターシスの維持に必須であり、また癌、自己免疫疾患、ウイルス感染、及び神経変性などの疾患の進行にも重要な役割を果たす。細胞増殖と分化の制御におけるアポトーシスの重要性は最近まで報告されなかった（総説として、Ellisら、Ann．Rev．Cell Biol．7，663-698(1991)；Williams and smith ，Cell 74，777-779(1993);Vauxら、Cell 76，777-779(1994);Hoffman and Lieb ermann，Oncogene 9，1807-1812(1994);White，Genes Dev．10，1-15(1996);Abb as， Cell 84，655-657(1996)を参照されたい）。アポトーシスの分子的研究は線虫であるCaenorhabditis elegansで始まった。その発生は、アポトーシスを調節する少なくとも１４個の遺伝子で厳密に制御されている(Ellis,上記;Hengartner and Horvitz，Curr．Opin．Genet．Dev．4，581-586(1994a))。これらの遺伝子のうちで、ｃｅｄ−９はアポトーシスを抑制し、哺乳動物の癌原遺伝子Ｂｃｌ−２と相同性を有する（Hengartner and Horvitz，Cell 76，665-676(1994b)）。プログラム細胞死が起るために、ｃｅｄ−３とｃｅｄ−４を含む他の線虫遺伝子が必要であり、これらの２個の遺伝子における機能喪失変異により、正常には細胞死に至る細胞が生残った（Ellis and Horvitz，Cell 44，817-829(1986)；Yuan an d Horvitz，Development 116，309-320(1992)）。クローン化されたｃｅｄ−３遺伝子の構造解析により、この遺伝子の産物とインターロイキン−１β変換酵素と言われる哺乳動物の酵素（ＩＣＥ，Yuanら、Ce ll，75，641-52(1993)）の間に構造／機能上の相同性があることが判明した。ＩＣＥはインターロイキン−１βのプロ型を切断する(Blackら、FEBS Lett．247， 386-390(1989)；Kosturaら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86，5227-5231(1989))、新規クラスのシステインプロテアーゼであることか判明した（Cerrettiら、Science 256，97-100(1992)；Thornberryら、Nature 356，7 68-774(1992)；Molineauxら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90，1809-1813(1993 )。しかし、ＩＬ−１βの切断がＩＣＥの唯一の機能ではないようであった。培養細胞において、ＣＥＤ−３又はＩＣＥの過剰発現はアポトーシスを誘導した（ Miuraら、1993）。ＩＣＥを微量注入によって背根神経節に導入すると、ＩＣＥはまたプログラム細胞死を引起した(Gagliardiniら、Science 263，826-828，(1 994)）。これらのデータは、ＣＥＤ−３とＩＣＥの両方が、プログラム細胞死の制御に重要なプロテアーゼ活性を有し、ＩＣＥ又はＩＣＥ様システインプロテアーゼが哺乳動物のアポトーシスの制御に関与することを強く示唆した。ＩＣＥはＣＥＤ−３との強い相同性を有するが、アポトーシスにおけるその役割は十分には明らかになっていない。ＩＣＥ欠失マウスは正常に発生し、組織のホメオスターシスに殆ど異常性は見られない（Liら、Cell 80，401-411(1995)； Kuidaら、Science 267，2000-2003(1995)）ので、このサブセットのタンパク質分解酵素は機能上の冗長性を有するか、又はＩＣＥは主要なアポトーシス機椙に関与していないことを示唆する。ＣＥＤ−３及びＩＣＥとの配列相同性を有するシステインプロテアーゼと推定されるものをコードする幾つかの遺伝子が最近報告された。ＩＣＥ関連遺伝子には、Ｎｅｄｄ２もしくはＩｃｈ１（Kumarら、Genes Dev 8，1613-1626(1994)；W angら、Cell 78，739-750(1904)）、Ｔｘ、Ｉｃｈ２もしくはＩＣＥｒｅｌ II（ Faucheuら、EMBO J 14，1914-1922(1995)；Kamensら、J Biol Chem 270，15250- 15256(1995)）、ＩＣＥｒｅｌ III（Mundayら、J Biol Chem 270，15870-15876( 1995)）、Ｍｃｈ２（Fernandes-Alnemriら、Cancer Res 55，2737-2742(1995)）、ＣＰＰ３２β(Fernandes-Alnemriら、J Biol Chem 269，30761-30764(1994)； Tewariら、Cell 81，801-809(1995))、及びＭｃｈ３もしくはＣＭＨ−１（Ferna ndes-Alnemriら、Cancer Res 55，6045-6052(1995b)；Lippkeら、J Biol Chem 2 71，1825-1828(1996)が含まれる。ＩＣＥｒｅIIIはまた、Ｔｙとしても単離された（ＰＣＴ出願第９６／０４３８７号参照）。ＣＰＰ３２βのマウスの相同体も報告された（Juanら、oncogene 13，749-755(1996)）。アポトーシスの制御におけるＩＣＥ様プロテアーゼの役割は、それらが、プログラム細胞死関連の事象の制御に有用であることを示唆する。アポトーシスは、過剰細胞死を特徴とする疾患（例えば、自己免疫疾患、ウイルス感染及び神経細胞変性）、及び細胞増殖の増大を含む疾患（例えば癌）において重要そうであるので、アポトーシスに関与する遺伝子とそれらがコードするポリペプチドの同定が本発明の目的である。アポトーシスを制御する新規遺伝子とタンパク質を同定するために、更なるＩＣＥ関連システインプロテアーゼの同定も本発明の更なる目的である。発明の概要ＩＣＥ様システインプロテアーゼファミリーの新規メンバーを同定した。該プロテアーゼファミリーをＬＩＣＥ（ＩＣＥ様）と命名し、本明細書記載のファミリーメンバーをＬＩＣＥ３と命名する。図１に示す、ＬＩＣＥ３をコードする核酸配列及びＬＩＣＥ３配列とハイブリダイズし、ストリンジェント条件下でハイブリダイズしたままである核酸配列は、本発明に含まれる。ＬＩＣＥ３をコードする核酸配列の発現のためのベクターと宿主細胞も提供する。ＬＩＣＥポリペプチド及び図１に示すＬＩＣＥ３アミノ酸配列と少なくとも６０％の相同性を有するその誘導体も含まれる。ＬＩＣＥポリペプチド、及びＬＩＣＥに特異的に結合する抗体もしくはそのフラグメントの製造方法も本発明の一部と考える。ＬＩＣＥと、アポトーシスに関与するポリペプチドをコードすることが知られている他のＩＣＥ関連遺伝子の間に観察される相同性は、ＬＩＣＥ３も、アポトーシス又はプログラム細胞死の制御に関与することを示唆する。それ故、ＬＩＣＥ活性を阻害する化合物は、アポトーシスの速度及び／又は程度を減少しうる。ＬＩＣＥ３と相互作用し、その活性を阻害する化合物の同定方法は、本発明に含まれる。細胞増殖の増大又はアポトーシスの増大を特徴とする疾患の治療方法も含まれる。図面の説明図１．ヒトＬＩＣＥ３ｃＤＮＡのヌクレオチドと予測アミノ酸配列。ヒトｃＤＮＡは３８９個のアミノ酸の読取り枠を含む。配列の左手側の数はヌクレオチドの位置を示し、右手側の数はアミノ酸の位置を示す。子測された翻訳開始コドン（ＡＴＧ）と翻訳終止コドン（ＴＡＧ）は、ホールドフェース体で示す。５’ 非翻訳領域のインフレームの終止コドンには下線が引いてある。基質への共有結合のために必須のアミノ酸配列ＱＡＣ（Ｒ／Ｑ）Ｇにも下線が引いてある。図２．システインブロテアーゼであるＬＩＣＥ３、ＬＩＣＥ２、ＬＩＣＥ１／ＣＰＰ３２β、Ｍｃｈ２、ＩＣＥ、Ｔｘ、Ｉｃｈ１、及びＣＥＤ−３の配列比較。ヒトＬＩＣＥ３（ＬＩＣＥ３）、ヒトＬＩＣＥ２（ＬＩＣＥ２）、ヒトＬＩＣＥ１／ＣＰＰ３２β（ＬＩＣＥ１）、ヒトＭｃｈ２（Ｍｃｈ２）、ヒトＩＣＥ、ヒトＩｃｈ１、ヒトＴｘ、及びC.elegansのＣＥＤ−３（ＣＥＤ−３）のアミノ酸配列を、コンピュータープログラムＭＡＬＩＧＮＥＤを用い最良のアラインメントを得るように編集した。７０％以上の配列（８個のうち少なくとも６個）で保存されている残基をボールドフェースで示す。アスララギン酸切断の可能性のある部位（位置２８１及び２９５）及び基質触媒のために必要な３個の残基（Ａｒｇ−１６７、Ｈｉｓ−２２５、Ａｒｇ−３１６）をボールドフェースで示し、アステリスクで示す。触媒的結合に必要なＱＡＣ（Ｒ／Ｑ）Ｇのシステイン残基も示す。アミノ酸残基の位置は記載の通りである。図３．ＬＩＣＥ発現のノーザン解析。示すように、種々の組織からのポリ（Ａ）⁺ｍＲＮＡの３つのノーザンブロットを、ヒトＬＩＣＥ３ランダムプライムドＤＮＡプローブとハイブリダイズさせた。左手側の数はサイズを示す。グルコース−３−リン酸脱水素酵素（Ｇ３ＰＤＨ）遺伝子の発現レベルを下のパネルに示し、それは、フィルターを、１．１ｋｂｐのヒトＧ３ＰＤＨｃＤＮＡを用いて製造したランダムプライムドプローブとハイブリダイズさせることによって得られた。右手側の矢印はＬＩＣＥ３のメッセージを示す。図４．網状赤血球溶解液でのＬＩＣＥ３ポリペプチドの発現。発現は実施例３に記載のように行った。発明の詳細な説明インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）及び他のＩＣＥ関連ポリペプチドに相同性を有する新規システインプロテアーゼを同定した。ＩＣＥとＣＥＤ−３に相同性を有する発現配列タグ（ＥＳＴ）（Ｇｅｎｂａｎｋ受託番号第Ｔ９６９１２号）をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅させ、ヒト胎児肝ｃＤＮＡライブラリーを探索するためにプローブとして用いた。得られた完全長クローンを配列決定し、アポトーシス遺伝子であるＩＣＥ及びＣＥＤ−３並びにシステインプロテアーゼをコードする種々の他のＩＣＥ関連遺伝子に顕著な相同性を有することを知見した。特に、ＣＰＰ３２βとＭｃｈ３α（ＣＭＨ−１）への顕著な相同性が観察された。ＣＰＰ３２β及びＭｃｈ３α（ＣＭＨ −１）は、ＬＩＣＥ（ＩＣＥ様）と命名したＩＣＥ様プロテアーゼファミリーのメンバーとして本明細書で指定する。ＣＰＰ３２βはＬＩＣＥ１であり、Ｍｃｈ３α（ＣＭＨ−１）はＬＩＣＥ２であり、本明細書記載の新規メンバーはＬＩＣＥ３である。基質結合と触媒に関与する、ＩＣＥ関連システインプロテアーゼに存在する保存配列ＱＡＣＲＧは、現在単離した遺伝子に高度に保存されている（図２に示すＬＩＣＥ３の残基２６６−２７０の配列ＱＡＣＱＧ）。２種の新規ＩＣＥ様プロテアーゼ（一つは択一的にＦＬＩＣＥ、ＭＡＣＨ１もしくはＭｃｈ５と命名され（Boldinら、Cell 85,803-815(1996)；Musioら、Cell 85,817-827(1996)；Ferna ndes-Alnemriら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93,7464-7469(1996)）、第２はＭｃｈ４と命名されている（Fernandes-Alnemriら、同上）の最近の報告はまた、配列ＱＡＣＱＧを有する基質結合部位を示す。更に、Ｍｃｈ４は、ＬＩＣＥ３アミノ酸配列の部分と同一である予測アミノ酸配列を有する。１．１ｋｂのＬＩＣＥ３ＤＮＡプローブを用いるノーザンブロット解析によると、種々の組織でＬＩＣＥ３が発現された（実施例２参照）。ＬＩＣＥ３発現は顕著に、脾臓、リンパ節及び末梢血液の白血球で観察され、造血におけるＬＩＣＥ３の役割の可能性を示唆した。網状赤血球溶解液でのＬＩＣＥ３のインビトロ発現（実施例３）及びE.coliでのＬＩＣＥ３の発現（実施例４）を記載する。ＬＩＣＥ３のＩＣＥとＣＥＤ−３との広範な相同性、及びシステインプロテアーゼ活性に必要なＬＩＣＥ３におけるアミノ酸残基の保存は、アポトーシスにおけるＬＩＣＥ３の役割を示す。本発明は、ＬＩＣＥ３の生物活性の一つ以上を有するポリペプチドをコードする隼離された核酸を提供する。本明細書で用いる核酸という用語は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、全体的もしくは部分的な合成ＤＮＡ又はＲＮＡを包含する。ＬＩＣＥ３ポリペプチドの生物活性には、タンパク質分解活性及びアポトーシスの刺激が含まれるが、それらに限定されない。プロテアーゼ活性は、適切なタンパク質基質もしくはペプチド基質の切断によってアッセイできる。基質には、ポリ（ＡＤＰ−リボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）（Lazebnikら、Nature 371，346- 347(1994)）、他のプロＩＣＥ様プロテアーゼ；核ラミンＡ、Ｂ１／Ｂ２、Ｃ；Ｇａｓ２；プロテインキナーゼＣδ；ステロール調節要素結合タンパク質；及びＤＥＶＤなどの合成テトラペプチド(Whyte，Trencds Cell Biol ．6，245-248(1996)）が含まれうる。アポトーシスを刺激するＬＩＣＥ３活性は、ＤＮＡ断片化解析を含む種々の技術でアッセイできる（Martinら、EMBO J．14 ，5191-5200(1995)）。本発明の核酸は、ａ）図１に示す核酸（配列番号＿）とその相補鎖；ｂ）図１に示す核酸（配列番号＿）のポリペプチドコード領域にハイブリダイズし、高ストリンジェント条件下にその核酸とハイブリダイズしたままである核酸；及びｃ）（ａ）又は（ｂ）の核酸と縮重している核酸；からなる群から選択される。一般的に、“高ストリンジェント”条件とは、配列番号１に対応する相補鎖の一部又は全部の完全なハイブリッドの融解温度（Ｔ_m）より約１２−２０℃低い温度、あるいは配列番号３に対応する相補鎖の部分又は全部の完全なハイブリッドのＴ_mより約１２−２０℃低い温度及び塩の条件を指す。一実施態様では、“ 高ストリンジェント条件”とは、約６５℃で約１Ｍ以下のＮａ⁺の条件を指す。インキュベーションの塩濃度、温度、及び／又は長さは、本発明の核酸分子のハイブリダイゼーションか得られるように、第１又は第２ハイブリダイゼーション工程で変えることができる。核酸のハイブリダイゼーション条件及び核酸ハイブリッドのＴ_mの計算は、Sambrookら、Molecular Cloni ng:A Laboratory Manual ２版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold S pring Harbor，New York(1989)に記載されている。本発明の核酸は、図１（配列番号＿）で示すＬＩＣＥ３のポリペプチドコード領域の部分又は全部にハイブリダイズしえ、それ故、図１（配列損号＿）の核酸の短縮又は延長を包含しうる。短縮又は延長核酸は、それらがＬＩＣＥ３の生物的性質の一つ以上を保持するならば、本発明に包含される。ハイブリズする核酸にはまた、ＬＩＣＥ３コード領域に対する５’及び／又は３’に位置する非コード配列も含まれうる。非コード配列には、ＬＩＣＥ３発現に関与する調節領域、例えばプロモーター、エンハンサー領域、翻訳開始部位、転写終結部位などが含まれる。本発明の核酸は、生物活性を有するＬＩＣＥ３フラグメントとそのアナログをコードする。フラグメントの例には、カルボキシ末端、アミノ末端、及び／又は内部領域で１個以上のアミノ酸の欠失がある短縮ＬＩＣＥ３分子を得る、核酸配列における変化などがある。一実施態様では、核酸は、少なくとも約１０個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードする。別の実施態様では、核酸は、少なくとも約２０個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードする。更に別の実施態様では、核酸は、少なくとも約５０個のアミノ酸からなるポリペプチドをコードする。アナログの例には、ＬＩＣＥ３コード領域における１個以上のアミノ酸の置換又は挿入が得られる核酸配列における変化などがある。ＬＩＣＥ３フラグメントとアナログをコードする核酸配列は、標準的組換えＤＮＡ法を用いて製造する。一つの好適実施態様では、本発明の核酸は、図１と配列番号＿に示すヒトＬＩＣＥ３をコードする。図１に示すヒトＬＩＣＥ３コード領域の配列を有するＤＮＡクローンは、American Type Culture Collectjon，Rockville，MDに、年＿月＿日に受託番号＿として寄託された。本発明の核酸は、生物活性ＬＩＣＥ３を発現するようにＤＮＡ配列と連結される。発現に必要な配列は当業者公知であり、ＲＮＡ合成開始のためのプロモーター及びエンハンサー配列、転写終結部位、タンパク質合成の開始のためのリボソーム結合部位、及び分泌のためのリーダー配列などがある。ＬＩＣＥ３の発現及び／又は分泌を可能とする配列は、同種（即ちＬＩＣＥ３発現と分泌に関与するケノムの配列と同一であるか、もしくは由来しうる）でありうるし、又は異種（即ち異なる生物もしくは宿主細胞に存在するか、もしくは由来しうる）でありうる。種々のプラスミドベクターが、哺乳動物、植物、細菌、昆虫、ウイルス及び酵母である宿主細胞でＬＩＣＥ３を発現させるために利用できる。ＬＩＣＥコード領域はまた、ある特定の宿主での最適発現のための好適コドンに置換することによって改変できる。細菌、植物、昆虫、酵母、哺乳動物宿主系でのコドン使用法は公知であり、ｍＲＮＡ翻訳を最適化するために、当業者が利用できる。更に、ベクターは、トランスジェニック動物におけるＬＩＣＥ３の組織特異的発現のために利用できる。レトロウイルスとアデノウイルスをベースとした遺伝子トランスファーベクターも、インビボ治療のために、ヒト細胞でのＬＩＣＥ３発現のために使用できる（ＰＣＴ出願８６／００９２２参照）。本発明の核酸は、ＬＩＣＥ３の染色体座位の同定と疾患状態を予測できうる染色体ＬＩＣＥ３の異常（例えば、転座、欠損又は挿入）の同定のために使用できる。ＬＩＣＥ３配列の部分又は全部が染色体ＬＩＣＥ３のためのプローブとして使用できる。ＬＩＣＥ３染色体遺伝子の変化により、細胞及び病気の組織におけるアポトーシスの速度及び／又は程度の増大又は減少を可能とするＬＩＣＥ３発現が変化しうる。造血系（例えば脾臓及びリンパ節）の細胞がＬＩＣＥ３発現の変化によって最も影響されることが予期される。ＬＩＣＥ３核酸はまた、ＩＣＥ様プロテアーゼである関連遺伝子を同定するためにも使用できる。核酸プローブを、ＩＣＥ様プロテアーゼの保存領域に対し作製でき、それを用いて、関連分子のためにハイブリダイゼーション又はポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によってｃＤＮＡライブラリー又はゲノムライブラリーをスクリーニングできる。本発明の核酸はまた、遺伝子治療及びアンチセンス治療のために試薬として使用し、選択した組織中でのＬＩＣＥ３発現を改変できる。ＬＩＣＥ３発現は、ＬＩＣＥ３コード領域を含み、組織特異的様式でＬＴＣＥ３を産生する発現ベクターで標的組織を改変することによって増大しうる。遺伝子治療を用いて、癌のようなアポトーシスの増大が望ましい種々の疾患を治療する。内因性ＬＩＣＥ３発現は、ＬＩＣＥ３コード領域の一部、又はそれに機能できるように結合した制御領域に対するアンチセンス核酸を用いて減少させることができる。アンチセンス核酸は、完全長ＬＩＣＥ３、又は内因性ＬＩＣＥ３遺伝子もしくはＬＩＣＥ３の発現を制御する制御領域にハイブリダイズするそのフラグメントでありうる。アンチセンス治療を用いて、神経変性疾患及びウイルス感染などの、ＬＩＣＥ３の発現又は過剰発現が望ましくない疾患を治療する（病気の細胞にアポトーシスを起こさせる）。本発明の核酸配列はまた、下記の組換えＬＩＣＥ３を産生させるために、使用される。ＬＩＣＥ３を発現する原核及び真核宿主細胞も本発明によって提供される。宿主細胞には、細菌、酵母、植物、昆虫、又は哺乳動物などの細胞がある。ＬＩＣＥ３はまた、マウス又はヤギなどのトランスジェニック動物でも産生できる。本発明の核酸を含有するプラスミドやベクターは、当業者公知のトランスフェクション技術又は形質転換技術を用いて適切な宿主細胞に導入される。一好適実施態様では、宿主細胞は、図１及び配列番号＿で示すＬＩＣＥ３をコードするＤＮＡ配列を含む。ＬＩＣＥ３発現のための哺乳動物宿主細胞の例には、ＣＯＳ，ＣＨＯｄ−、２９３及び３Ｔ３などの細胞があるが、それらに限定されない。ＩＣＥは、４０４個のアミノ酸のポリペプチドとして発現するが、それは４個のアスパラギン酸残基での切断によって改変される。Ａｓｐ−２５７とＡｓｐ− ３１６の２個の切断部位を図２に示す。成熟ＩＣＥは、１０ｋＤａと２０ｋＤａの２個のサブユニットからなる３０ｋＤａタンパク質である。プロセシングによって産生される残りのフラグメントは成熟ポリペプチドの一部ではない。ＩＣＥの活性型は、各々１０ｋＤａと２０ｋＤａサブユニットを有する２個のダイマーからなるテトラマーであると考えられている（Thornberryら、上記）。ＩＣＥ及び他のＩＣＥ様プロテアーゼとのアナロジーとして、ＬＩＣＥ３はプロ酵素として発現し、アスパラギン酸残基での切断によって更にプロセシングを受け、数個のタンパク質分解フラグメントを与える。ＬＩＣＥ３に関し“プロ酵素”という用語を使用する場合、それは，ＬＩＣＥ３コードＤＮＡの発現から得られ、ポリペプチドの１個以上のアスパラギン酸残基で切断によって更にプロセシングを受けるポリペプチドを指す。他のＩＣＥ様プロテアーゼの切断部位と比較して、ＬＴＣＥ３プロセシング部位である可能性のある部位は、位置２８１と２９５のアスパラギン酸残基を含む（図２の配列のアラインメントに注意）。第３の切断部位である可能性のある部位は、位置８６のアスパラギン酸残基に位置しうる。しかし、この領域における、他のＩＣＥ様プロテアーゼのアスパラギン酸残基とのアラインメントは顕著ではない。典型的には、プロ酵素の２個の異なる分子量の切断産物は多量体（通常、テトラマー）に会合し、生物活性型になる。残墓８６−２８１（約２１ｋＤａフラグメント）のフラグメントと残基２９５− ３８９（約１０ｋＤａフラグメント）のフラグメントか活性多量体ＬＩＣＥ３を形成するように考えられる。ＬＩＣＥ３ポリペブチド及びＬＩＣＥ３の少なくとも一つの生物活性を有するそのフラグメントは、本発明に包含される。一実施態様では、完全長ＬＩＣＥ３ポリペプチド及びそのフラグメントは、図１（配列番号＿）のアミノ酸配列又はその一部を有する。ポリペプチドはアミノ末端メチオニン残基を有しても有しなくともよい。ＬＩＣＥ３ポリペプチドは図１（配列番号＿）に示される核酸配列で発現されるプロ酵素でありうるし、又は会合し生物活性分子を形成できる一つ以上のそのタンパク質分解フラグメントを含みうる。可能性のあるポリペプチドフラグメントは、残基８６−２８１及び２９５−３８９に及ぶ。ＬＩＣＥ３の誘導体とは、得られたポリペプチドがＬＩＣＥ３の少なくとも一つの生物活性を有するように、一つ以上のアミノ酸の付加、欠失、挿入、又は置換を有するポリペプチドを指す。一好適実施態様では、ＬＩＣＥ３誘導体は、図１（配列番号＿）に示されるアミノ酸配列の一部又は全部と少なくとも約６０％の相同性を有し、ＬＩＣＥ３の少なくとも一つの生物活性を有する。誘導体は、対立遺伝子変異体のポリペプチド産物又はｍＲＮＡスプライス変異体のように天然に存在しうるし、あるいは核酸の操作乃び合成のために当業者が利用できる技術を用いて構築できる。本発明は、外因性ＤＮＡ配列の原核細胞又は真核細胞の発現産物としてもＬＩＣＥ３を提供する。即ち、ＬＩＣＥ３は組換えＬＩＣＥ３である。外因性ＤＮＡ配列は、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ及び合成ＤＮＡ配列を含む。ＬＩＣＥ３は、細菌、酵母、植物、昆虫、又は哺乳動物の細胞の発現産物でありうる。細菌細胞で産生されたＬＩＣＥ３はＮ−末端メチオニン残基を有するであろう。本発明はまた、ＬＩＣＥ３の製造方法であって、ＬＩＣＥ３をコードする核酸で形質転換された、又はトランスフェクトされた原核又は真核の宿主細胞を増殖させ、核酸のポリペプチド発現産物を単離することを含むことを特徴とする該方法も提供する。翻訳後修飾（例えば、Ｎ−結合又はＯ−結合炭水化物鎖の付加、Ｎ−末端又はＣ−末端のプロセシング）、アミノ酸骨格への化学的部分の付加、Ｎ−結合又はＯ−結合炭水化物鎖の化学修飾、及び原核宿主細胞発現の結果としてＮ−末端メチオニンの付加を受けたＬＩＣＥ３ポリペプチドも本発明に含まれる。ポリペプチドはまた、タンパク質の検出と単離を可能とする、酵素的標識、蛍光性標識、アイソトープ標識又はアフィニティ標識などの検出可能標識で修飾されることもできる。異種アミノ酸配列に融合したＬＩＣＥ３アミノ酸配列の一部又は全部を含むＬＩＣＥ３キメラタンパク質も本発明に含まれる。異種配列は、得られた融合タンパク質がＬＩＣＥ３の活性を保持することを可能とする任意の配列でありうる。例えば、異種配列には、二量体化を可能とする、１ｇＧのＦｃ領域のような免疫グロブリンの融合、又はポリペプチドの標識を提供する酵素への融合、又はＬＩＣＥ３の細胞外輸送を行わせる分泌配列への融合が含まれる。本発明のポリペプチドは、ＬＩＣＥ３を発現する組織と細胞株から、及びＬＩＣＥ３を発現する形質転換宿主細胞から単離精製される。ＬＩＣＥ３は通常、細胞内タンパク質として産生されるので、それは細胞溶解液から単離される。単離されたＬＩＣＥ３ポリペプチドは、ヒトタンパク質及び他の細胞構成成分を実質的に伴っていない。天然源（例えば、正常にＬＩＣＥ３を発現する組織及び細胞株）及び形質転換宿主細胞からのＬＩＣＥ３の精製方法も本発明に包含される。精製方法では、適切な順序で一つ以上の標準的タンパク質精製工程を用い、精製タンパク質を得ることができる。クロマトグラフィー工程には、イオン交換、ゲル濾過、疎水性相互作用、逆相、クロマトフォーカシング、抗ＬＩＣＥ３抗体もしくはビオチン− ストレプトアビジンアフィニティ複合体などを用いるアフィニティクロマトグラフィーなどが含まれうる。安定性の増大、循環時間の延長、又は免疫原性の減少（例えば米国特許第４，１７９，３３７号参照）などの更なる利点を提供するＬＩＣＥ３の化学修飾誘導体も本発明によって提供される。誘導体化の化学的部分は、ポリエチレングリコール、エチレングリコール／プロピレングリコールコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコールなどの水溶性ポリマーから選択しうる。ポリペプチドは、分子内のランダムな位置又は分子内の予め決めた位置で修飾できるし、一つ、二つ、又は三つの結合化学部分を含みうる。ＬＩＣＥ３ポリペプチドは、アゴニストとアンタゴニストの同定に有用である。一般的に、ＬＩＣＥ３は、ＬＩＣＥ３生物活性を変化させる能力のために、候補の物質をスクリーニングするための標的である。アゴニスト又はアンタゴニストの可能性のあるものの同定は、候補の物質の存在下、種々のタンパク質基質のＬＩＣＥ３媒介切断をアッセイすることによって容易に行える。ＬＩＣＥ３活性のアッセイに適したタンパク質基質は上述した。ＬＩＣＥ３ポリペプチドは、ＬＩＣＥ３に特異的に結合する抗体の作出のために有用である。抗ＬＩＣＥ３抗体は、当業者が利用できる方法と試薬を用いて製造する。抗体は診断への適用に有用であり、又はアゴニストもしくはアンタゴニストとして治療上の価値を有しうる。ＬＩＣＥ３ポリペプチドは、アポトーシスの細胞内調節因子である。細胞内でのＬＩＣＥ３レベルの調節は、アポトーシスの増大（細胞死の過剰）又はアポトーシスの減少（細胞増殖の過剰）を特徴とする疾患の治療に有用でありうる。治療薬として直接使用するために、ＬＩＣＥ３ポリペプチドは、標的細胞に取込まれる形態であるべきである。あるいは、ＬＴＣＥ３アゴニスト又はアンタゴニストを用いて、細胞内ＬＩＣＥ３レベルを調節し、それによってアポトーシス疾患を治療できうる。ＬＩＣＥ３と相互作用する化合物の同定方法も本発明に包含される。この方法は、化合物がＬＩＣＥ３と結合するのを可能にする条件下でＬＩＣＥ３を化合物とインキュベートし、結合の度合いを測定することを含む。化合物は実質的に精製されているか、又は粗混合物中に存在していてもよい。結合化合物は、タンパク質、ペプチド、炭水化物、又は小分子量の有機化合物でありうる。化合物は、ＬＩＣＥ３の生物活性を増大させるか、又は減少させる能力によって更に特徴付けされうるし、それ故ＬＩＣＥ３アゴニスト又はＬＩＣＥ３アンタゴニストとして作用しうる。本発明はまた、ＬＩＣＥ３アンタゴニスト／阻害剤、及びそれらの取得方法も包含する。アンタゴニストは、ＬＩＣＥ３の一つ以上の生物活性を減少させるか、又は除去するであろう。例えば、ＬＩＣＥ３アンタゴニストは、アポトーシスの速度及び／又は程度を減少させうる。ＬＩＣＥ３アンタゴニストは、ＬＩＣＥ３活性又は活性ＬＩＣＥ３分子の産生を阻止するように、ＬＩＣＥ３又はＬＩＣＥ３エフェクターもしくは活性化因子に結合する物質を含む。ＬＩＣＥ３活性は、触媒部位ＱＡＣＱＧでＬＩＣＥ３に結合する物質、又はＬＩＣＥ３に結合し、触媒部位がもはや基質分子に接近できないようなコンフォメーション変化を誘導する物質によって阻害されうる。ＬＩＣＥ３アンタゴニストの例は、ポリペプチドもしくはペプチド（例えば、抗ＬＩＣＥ３抗体又はそのフラグメント）、炭水化物、及び小分子量有機分子である。一実施態様では、アンタゴニストは、ＬＩＣＥ３には結合するが、基質切断は起らないように化学修飾した、切断配列を有するペプチド誘導体（テトラペプチドＤＥＶＤのような）を含む。ペプチド基質は、アルデヒド及びフルオロ／クロロメチルケトン誘導体への修飾によってアンタゴニストに変換できる。この型のＬＩＣＥ３アンタゴニストは、上記のようなタンパク質基質又はペプチド基質のＬＩＣＥ３媒介切断の阻害能力によって容易にアッセイできる。他のアンタゴニストは、ＬＩＣＥ３発現を調節する物質を含み、典型的には、ＬＩＣＥ３をコードする核酸に相補的で、発現のアンチセンス調節因子として作用する核酸を含む。ＬＴＣＥ３の少なくとも一つの生物活性を刺激するＬＩＣＥ３アゴニストも得ることができる。アゴニストは、ＬＩＣＥ３活性の速度及び／又は程度を増大させることができる。アゴニストは、ポリペプチドとペプチド、炭水化物及び小分子量有機分子を含む。本発明のＬＩＣＥ３ポリペプチドに特異的に結合する抗体も本発明に包含される。抗体は、完全長ＬＩＣＥ３(プロ酵素型)、又は一つ以上のそのフラグメントによる免疫化で産生されることができ、抗体はポリクローナル又はモノクローナルでありうる。更に、本発明の抗体は、Ｌ鎖とＨ鎖のマウスの定常領域がヒト配列に置換されていることを特徴とするキメラ抗体や、相補性決定領域だけがマウス起源であることを特徴とするＣＤＲ −移植抗体のような組換え体でありうる。本発明の抗体はまた、例えばヒト抗体を産生できるトランスジェニック動物の免疫化によって製造したヒト抗体でもありうる（例えば、ＷＯ９３／１２２２７参照）。抗体は、生物サンプル中のＬＩＣＥ３を検出するために有用であり、それによってＬＩＣＥ３を産生する細胞又は組織の同定を可能とし、ＬＩＣＥ３発現の定量的ものさしを提供する。更に、ＬＩＣＥ３に結合する抗体又はそのフラグメントを用いて、ＬＩＣＥ３の影響を阻害できる。本発明はまた、治療有効量のＬＩＣＥ３ポリペプチド、ＬＩＣＥ３アゴニストもしくはＬＩＣＥ３アンタゴニスト、並びに医薬として許容できる希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤及び／又はアジュバントを含む医薬製剤も提供する。“治療有効量”という用語は、特定の疾患と投与経路のために治療効果を与える量を意味する。製剤は液体剤形又は凍結乾燥剤形でありえ、種々のｐＨ値とイオン強度を有する希釈剤（Ｔｒｉｓ、酢酸、又はリン酸緩衝液）、Ｔｗｅｅｎ又はポリソルベートのような可溶化剤、ヒト血清アルブミン又はゼラチンのような担体、チメロサール又はベンジルアルコールのような保存剤、及びアスコルビン酸又はメタ重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤を含む。溶解性、安定性、血漿半減期及び生物利用性を増大させる水溶性ポリマーで修飾したＬＩＣＥ３ポリペプチド、アゴニスト及びアンタゴニストを含む製剤も本発明に包含される。製剤はまた、延長された期間にわたる制御された薬物送達のために、リポソーム、微小エマルション、ミセル又は小胞に、ＬＩＣＥ３ポリペプチド、アゴニスト又はアンタゴニストを導入することを含む。特定の製剤の選択は、治療する疾患、投与経路及び所望の薬物動力学パラメーターを含む幾つかの因子に依存する。医薬製剤に適した成分のより広範な検討は、Reming ton's Pharmaceutical Sciences，18版，A.R.Gennaro編，Hack，Easton，PA(198 0)に記載されている。本発明の製剤は、皮下、静脈内、もしくは筋肉内の注射、又は経口投与、鼻内投与、肺内投与、もしくは直腸投与によって投与できる。最終的に選択される投与経路は、幾つかの因子に依存し、当業者は確認することができる。本発明はまた、治療有効量の本発明の核酸と医薬として許容できるアジュバントを含む医薬製剤も提供する。核酸製剤は、アンチセンス治療法の一部として、ＬＴＣＥ３コード領域の一部もしくは全部及び／又はフランキング領域の、細胞と組織への送達に適切であろう。アポトーシスの増大又は細胞増殖の増大を特徴とする疾患の治療方法も本発明に包含される。治療有効量のＬＩＣＥ３ポリペプチド又はＬＩＣＥ３アゴニストを投与して、腫瘍細胞のアポトーシスの促進によって癌を治療できうる。あるいは、治療有効量のＬＩＣＥ３アンタゴニストを投与して、ウイルス感染（例えばＡＩＤＳ）、神経系変性（例えばパーキンソン病、アルツハイマー病）及び自己免疫疾患のような、アポトーシスの増大が原因の疾患を治療できうる。ＬＩＣＥ３アゴニストはＬＩＣＥ３の活性を刺激しうるか、又はＬＩＣＥ３発現のレベルを増大させうる。ＬＩＣＥ３アンタゴニストはＬＩＣＥ３の活性を阻害しうるか、又はＬＩＣＥ３発現のレベルを減少させうる。細胞増殖の増大を特徴とする疾患の治療が望まれるときに、ＬＩＣＥ３ポリペプチド又はＬＩＣＥ３アゴニストを単独で、又はアポトーシスを増大させる他の薬剤と組合せて使用して、治療を行うことができる。アポトーシスの増大を特徴とする疾患の治療が望まれるときに、ＬＩＣＥ３アンタゴニストを単独で、又はアポトーシスを阻害する他の薬剤と組合せて使用できる。本発明をより十分に説明するために、以下の実施例を記載するが、本発明の範囲を限定するものと考えるべきではない。実施例１ＬＩＣＥ３のクローニングと配列決定鋳型としてヒト脾臓ＱＵＩＣＫ−クローンｃＤＮＡ（Clontech，Palo Alto，ＣＡ）を用い、プライマーとして以下のＤＮＡオリゴヌクレオチドを用い、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を行った：得られた、ＰＣＲによって産生されたＤＮＡフラグメントは、ＧｅｎＢａｎｋの発現配列決定タグ（ＥＳＴ）クローン#Ｔ９６９１２（1995年３月27日入力）の配列に対応した。このＤＮＡフラグメントをｐＣＲIIベクター（Invitrogen）にサブクローンし、スクリーニングのためのアンチセンスリボプローブを産生させるために使用した。³²Ｐ−標識リボプローブを用いて、ヒト胎児肝ライブラリー（カタログ番号#ＨＬ１０６４ａ， Clontech）の７８０，０００個のプラークをスクリーニングした。ハイブリダイゼーションを、Stark溶液（５０％ホルムアミド、５０ｍＭリン酸カリウム、５ ×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、５×Denhardt's、０．０５％サルコシル、及び３００ｍｇ／ｍＬのサケ精子ＤＮＡ）中で４２℃で行った。次に、フィルターを、最終ストリンジェンシー０．１×ＳＳＣ、５５℃まで洗浄した。２回のスクリーニング後、２個の陽性クローン、５−１と１３−１を得た。これらの２個のクローンからの挿入物を、λベクターのクローニング部位に隣接する以下のプライマーを用いるＰＣＲで増幅させた：次に、ＰＣＲ産物を、配列決定のためにｐＣＲIIにサブクローンした。自動ＤＮＡ配列決定機（モデル３７３Ａ，Applied Biosystems）でＴａｑ DyeDeoxy Term inator Cycle Sequencing（Applied Biosystems，Inc.，Foster City，ＣＡ）を用い、両鋳型鎖でＤＮＡ配列決定を行った。３８９アミノ酸の長い読取り枠を同定した。ｃＤＮＡ配列を図１に示す。図１に示した配列と、ＩＣＥとＣＥＤ−３と他のＩＣＥ関連プロテアーゼ遺伝子との比較により、強い類似性が判明した（図２参照）。重要なことであるが、ＬＩＣＥ３は残基２６６−２７０に配列ＱＡＣＱＧを有したが、それは、図２に記載のＣＥＤ−３と他の全てのＩＣＥ関連プロテアーゼ遺伝子に存在する配列ＱＡＣＲＧと類似している。この配列は、基質との共有結合と触媒のための部位である。この部位は、ヒトＣＰＰ３２β／Ｌｉｃｅｌのアミノ酸残基１６２〜１６６に位置し、ヒトＩＣＥのアミノ酸残基２８３〜２８７に位置する。ＣＥＤ−３様システインプロテアーゼは、ＩＣＥの場合、２個の保存されたアスパラギン酸残基、Ａｓｐ−２９７とＡｓｐ−３１６で切断され、ＣＰＰ３２β／Ｌｉｃｅｌの場合、Ａｓｐ−１７５とＡｓｐ−１８１で切断され、成熟酵素が生成する（Th ornberryら、上記；Fernandes-Alnemriら、上記；Juanら、上記）。両方のアスパラギン酸残基はヒトＬＩＣＥ３に存在した（図２）。更に、ＩＣＥの５’領域の２個の別のアスパラギン酸残基は切断部位であり、ＬＩＣＥ３も更なる切断部位を有するらしい。ヒトＩＣＥの基質認識に必要な残基、Ａｒｇ−１７８、Ｈｉｓ −２３７、Ａｒｇ−３４１（Walkerら、Cell 78，343-352(1994)；Wilsonら、、 1994；Fernandes-Alnemriら、上記；Juanら、上記）もヒトＬＩＣＥ３で保存されていた（図２）。全体として、ＬＩＣＥ３は、他のＩＣＥ関連システインプロテアーゼと、約４３〜５７％の範囲の相同性を有する（表１参照）。ＬＩＣＥ３は、ＬＩＣＥ２と最も関連しており、ＬＩＣＥ２と約５７％の相同性を有する。実施例２ＬＩＣＥ３のノーザンブロット解析ＬＩＣＥ３ｃＤＮＡを含むｐＣＲIIベクターをＥｃｏＲＩで消化して得られた１．１ｋｂのＤＮＡフラグメントを鋳型として用い、ランダムプライムドＤＮＡ標識キット(Boehringer Mannheim)を用いＤＮＡプローブを産生させた。３枚のヒト多重組織ノーザンブロット（カタログ＃７７５９−１，７７６０−１、及び７７５４−１、Clontech）を、Stark溶液中、４２℃で一晩、このＤＮＡブローブとハイブリダイズさせた。これらのフィルターを、室温で６×ＳＳＣで簡単に洗浄し、次に４２℃で１５分間２×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳで２度、４２℃で１５分間１×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳで２度、及び４２℃で１５分間０．５×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳで２度洗浄した。次にフィルターを、２日間、Kodak Ｘ線フィルムに曝し、現像した。内部対照として、フィルターを、同一条件下、１．１ｋｂのヒトグリセルアルデヒド３−リン酸脱水素酵素（Ｇ３ＰＤＨ，Clontech ）のランダム−プライムドｃＤＮＡプローブとハイブリダイズさせた。ＬＩＣＥ３のｍＲＮＲは約４ｋｂであり、心臓、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓、膵臓、前立腺、小腸、卵巣、脾臓、リンパ節、胸腺、虫垂、末梢血白血球、骨髄、及び胎児肝臓などの種々のヒト組織で発現される（図３参照）。ＬＩＣＥ３は、脾臓やリンパ節のような造血組織で高度に発現され、Ｌ１ＣＥ３は造血において役割をもつことか示唆される。ヒト脳は、ＬＩＣＥ３のｍＲＮＡ発現が観察されない唯一の組織である。ＬＩＣＥ３の発現パターンは、発現が脳で検出できるＣＰＰ３２β／ＬＩＣＥ１のそれとは異なる。実施例３網状赤血球溶解液でのＬＩＣＥ３の発現インビトロ翻訳ベクター（Ｓ−タグＮ−末端融合配列を含むｐＣＩＴＥ−４ｂ、Novagen）にクローン化された完全長ＬＩＣＥ３配列を用い、タンパク質を標識するためにε−アミノ酸基でビオチニル化された、前もって添加したE.coliリシンｔＲＮＡを有するPromegaのＴｎＴＴ７−共役網状赤血球溶解液システムを用い、タンパク質を発現させた。製造業者の推奨に基づき反応を開始し、３０ ℃で９０分間インキュベートした。各反応のアリコートと分子量マーカーを、予め準備した１０％ＮｕＰＡＧＥゲル（Novex）で分離し、製造業者の指示に従いニトロセルロース膜（０．４５μｍ，Schleicher and Schuell）に移した。膜を乾燥し、ブロックし、ストレプトアビジン−アルカリ性ホスファターゼ（ビオチニル化タンパク質を認識する）と一緒にインキュベートした。洗浄後、アルカリ性ホスファターゼのウエスタンブルー安定化基質（Promega）を用い、関連タンパク質を検出した。図４は、膜の画像を示す。マーカーの相対的分子量はｋＤａで画像の左に示してある。対照であるルシフェラーゼとＬＩＣＥ３は、予期された相対的分子量に移動する。実施例４ E.coli 溶菌液でのＬＩＣＥ３の発現完全長のＬＩＣＥ３配列を、タンパタ質のＮ−末端にオリゴヒスチジン配列が導入されたE.coli発現ベクターにクローンした。得られたプラスミドを用いて、標準的技術を用い、E.coliのＢＬ２１（ＤＥ３）ＬｙｓＳ株（Novagen，Madison ，ＷＩ）を形質転換した。形貿転換体を、ＬＢａｍｐ中３７℃で一晩増殖させ、一晩培養液を新鮮なＬＢａｍｐで１：１００に希釈した。ＯＤ₆₀₀が０．８−１．０になるまで、培養物を３０℃で増殖させ、次に０．５ｍＭイソプロピル−β −Ｄ−チオガラクトシダーゼを加え、培養液を３０℃で３時間インキュベートし、融合タンパク質の発現を誘導した。細胞をペレットにし、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、１％アプロチニン、１μｇ／ｍＬロイペプチン、１μｇ／ｍＬペプスタチン、１μｇ／ｍＬＥ６４、及び１ｍＭＰＭＳＦを含む溶菌緩衝液（５０ｍＭＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４，１５０ｍＭＮａＣｌ，２ｍＭＥＤＴＡ，１％ＮＰ−４０）に再懸濁した。水浴音波発生器（Branson Ultrasonics Corp.，Dan bury，ＣＴ）中で２分間の音波処理によって細胞を溶菌させ、得られた溶菌液を５，０００×ｇで１０分間遠心した。不溶ペレットと可溶性分画からのアリコート、及び分子量マーカーを、予め準備した１０％ＮｕＰＡＧＥゲル（Novex，San Diego，CA）で分離し、製造業者の指示に従いニトロセルロース膜（０．４５μ ｍ，Schleicher and Schuell，Keene，ＮＨ）に移した。ベクター（Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，ＣA）のポリヒスチジンドメインに対する抗体をプローブとして膜を処理すると、細胞の不溶ペレットにのみタンパク質が検出された。そのタンパク質は、完全長のＨＩＳ−ＬＩＣＥ３融合タンパタ質の予期された相対的分子量（Ｍｒ 46，000）に近いＭｒ約49，000 に移動した。融合タンパク質の一部が細胞の可溶性分画で発現されたが、オリゴヒスチジン配列がプロテアーゼによる自己プロセシングで除去されたということも可能である。細胞の不溶性分画からの組換えＬＩＣＥ３タンパク質は精製され、再フォールディングが行われる。好適と考えられる実施態様に関して本発明を記載したが、本発明は開示した実施態様に限定されるものではなく、逆に、請求の範囲の思想と範囲内に含まれる種々の改変と均等物を包含するものであり、請求の範囲は、このような全ての改変と均等物を包含するように、最も広範な解釈を与えられるべきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 37/02 Ａ６１Ｐ 37/02 Ｃ０７Ｋ 16/40 Ｃ０７Ｋ 16/40 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 9/64 9/64 ＺＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｑ 1/37 Ｃ１２Ｑ 1/37 Ｇ０１Ｎ 33/573 Ｇ０１Ｎ 33/573 Ａ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＧ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者パターソン，スコツト・デイアメリカ合衆国、カリフオルニア・91320、ニユーベリー・パーク、コール・リンダ・ビスタ・3832

Claims

【特許請求の範囲】１．ＬＩＣＥ３の少なくとも１種の生物活性を有するポリペプチドをコードする単離された核酸であって、ａ）図１（配列番号＿）に示される核酸；ｂ）図１（配列番号＿）に示される核酸のポリペプチドコード領域にハイブリダイズし、高ストリンジェント条件下でその核酸にハイブリダイズしたままである核酸；及びｃ）核酸（ａ）又は（ｂ）に縮重している核酸；からなる群から選択されることを特徴とする核酸。２．ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ又はＲＮＡであることを特徴とする請求項１に記載の核酸。３．請求項１に記載の核酸にコードされることを特徴とするポリペプチド。４． Escherichia coliでの発現に好適な一つ以上のコドンを含むことを特徴とする請求項１に記載の核酸。５．結合した検出可能な標識を有することを特徴とする請求項１に記載の核酸。６．図１（配列番号＿）のポリペプチド−コード領域を含むことを特徴とする請求項１に記載の核酸。７．配列番号＿のアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードすることを特徴とする核酸。８．請求項１に記載の核酸を含むことを特徴とする発現ベクター。９．核酸が、図１（配列番号＿）に示されるポリペプチド−コード領域を含むことを特徴とする請求項８に記載の発現ベクター。１０．請求項８に記載の発現ベクターで形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞。１１．原核細胞又は真核細胞であることを特徴とする請求項１０に記載の宿主細胞。１２． Escherichia coliであることを特徴とする請求項１１に記載の宿主細胞。１３．ＬＩＣＥ３ポリペプチドの製造方法であって、請求項１に記載の核酸で形質転換又はトランスフェクトされた宿主細胞を、適切な栄養条件下で増殖させること；及び該核酸の発現ポリペプチド産物を単離すること；を含むことを特徴とする該方法。１４．請求項１３に記載の方法で製造されることを特徴とするポリペプチド。１５．図１（配列番号＿）に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチド、又は図１（配列番号＿）に示されるアミノ酸配列に少なくとも約６０％の相同性を有するその誘導体であって、ＬＩＣＥ３の少なくとも１種の生物活性を有することを特徴とする該ポリペプチド。１６．ＬＩＣＥ３に特異的に結合することを特徴とする抗体又はそのフラグメント。１７．モノクローナル抗体であることを特徴とする請求項１６に記載の抗体。１８．生物サンプル中のＬＩＣＥ３の存在の検出方法であって、請求項１６に記載の抗体がＬＩＣＥ３へ結合できる条件下、サンプルを該抗体とインキュベートすること；及び結合抗体を検出すること；を含むことを特徴とする該方法。１９．ＬＩＣＥ３に結合する候補化合物の能力の評価方法であって、結合を可能とする条件下、ＬＩＣＥ３を候補化合物とインキュベートすること；及び結合化合物を測定すること；を含むことを特徴とする該方法。２０．化合物がＬＩＣＥ３のアンタゴニストであることを特徴とする請求項１９に記載の方法。２１．動物におけるＬＩＣＥ３の発現の調節方法であって、図１（配列番号＿）に示される核酸に相補的な核酸を該動物に投与することを特徴とする該方法。２２．医薬として許容できる担体、アジュバント、可溶化剤、安定化剤及び／又は抗酸化剤中に、治療有効量のＬＩＣＥ３を含むことを特徴とする医薬製剤。２３．ＬＩＣＥ３がヒトＬＩＣＥ３であることを特徴とする請求項２２に記載の製剤。２４．アポトーシスの増大を特徴とする疾患の治療方法であって、治療有効量のＬＩＣＥ３アンタゴニストを投与することを特徴とする該方法。２５．疾患が、ウイルス感染、自己免疫疾患、又は神経系変性であることを特徴とする請求項２４に記載の方法。２６．細胞増殖の増大を特徴とする疾患の治療方法であって、治療有効量のＬＩＣＥ３を投与することを特徴とする該方法。２７．疾患が癌であることを特徴とする請求項２６に記載の方法。