JP2001322992A - インターストランドクロスリンク剤の合成方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明は、効率よいＤＮＡのインターストラ
ンドクロスリンク剤、そのための化合物、及びそれを用
いた医薬組成物を提供するものである。 【解決手段】 本発明は、一般式（Ｉ） Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｘ−Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、各々のＢはＤＮＡの塩基配列を認識できる化学
構造を示し、各々のＡはＤＮＡの塩基の一種に結合し得
る化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの化学構造を結合させ
得るリンカーを示し、ＸはＡ−Ｌ−Ｂコンポーネントを
結合させるスペーサーを示す。）で表されるＤＮＡの２
本鎖をインターストランドクロスリンクすることができ
る化合物に関する。また、本発明は前記化合物を用いる
ＤＮＡをインターストランドクロスリンクする方法、Ｄ
ＮＡのインターストランドクロスリンク剤、及びこれを
含有してなる医薬組成物に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、化学合成により製
造し得る化合物を用いて２本鎖ＤＮＡを同時にアルキル
化し、切断し得る化合物、これらの化合物を用いたＤＮ
Ａのアルキル化方法、２本鎖ＤＮＡの切断方法、及び、
これらの化合物を用いた医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒトゲノムプロジェクトにより我々の
「生命の設計図」である全遺伝子の塩基配列が数年内に
解明されようとしている。この設計図に傷があったり、
後天的に傷がはいると、病気や老化を引き起こすことが
知られている。ヒトゲノムプロジェクトの進展により癌
を含む多くの疾病はＤＮＡレベルで理解されるようにな
り、診断、予防などを中心とした医学全体が、革命的に
変化するものと考えられる。さらに、これらの疾病のＤ
ＮＡレベルでの理解に基づいた治療法、すなわち病因遺
伝子やその産物をターゲットとした医薬品の開発への期
待も大きいが、基礎研究を臨床研究に生かしてゆくため
の橋渡し的な研究はまだ、途についたばかりである。癌
についても、ＤＮＡレベルでの研究が行われているが、
現在用いられている抗癌剤は、スクリーニングによって
選択された抗生物質が多く、もともと癌細胞を殺すため
に微生物が産生したものではなく、癌の分子生物学的知
見に基づいたものはほとんどない。細胞内の特定遺伝子
の発現を細胞外から自由自在にコントロールすることが
可能になれば、究極の遺伝子レベルでの治療法となると
考えられる。

【０００３】ところで、遺伝情報を担うＤＮＡが化学的
に修飾を受けると、生命維持の根幹にあたる遺伝情報が
損なわれ、細胞の突然変異や死滅が引き起こされる。ま
た、正常細胞中のＤＮＡへの共有結合による修飾は、が
ん化の原因となっていることが知られている一方で、逆
にがん細胞中のＤＮＡに作用することで、抗がん剤とし
ても利用することができる。ＤＮＡの二本鎖をクロスリ
ンクさせる次式

【０００４】

【化４】

【０００５】で示されるようなインターストランドクロ
スリンク反応は、ＤＮＡの複製を完全に阻害することが
様々な系で確認されており、一本鎖のアルキル化と比較
して生体に対して非常に強い作用を有していることが知
られている（S.R.Rajski and R.M.Williams, Chem. Re
v., 98, 2723-2795(1998).）。例えば、ファージの失活
には平均１．３等量のインターストランドクロスリンク
化が起これば充分であるのに対し、単純な一本鎖のアル
キル化では２８０等量のアルキル化剤を必要とするとさ
れている（P.D.Lawley, J.H.Lethbridge, P.A.Edwards,
K.V.Shooter, J. Mol. Biol., 39, 181(1969).）。

【０００６】典型的なインターストランドクロスリンク
反応を起こす抗がん性抗生物質としてマイトマイシンや
カルチノフィリンＡが知られている。また、これまでに
ビゼレシンを代表とするＤＮＡインターストランドクロ
スリンクする化合物が数多く合成されている。ＤＮＡイ
ンターストランドクロスリンク反応を起こすことが報告
されている代表的な化合物としては、次に示すマイトマ
イシン、カルチノフィリンＡやナイトロジェンマスター
ドなどが知られている。

【０００７】

【化５】

【０００８】これらのマイトマイシンやナイトロジェン
マスタード（mechlorethamine）などは、有効な抗がん
剤として現在も臨床で利用されている。現在までに様々
なインターストランドクロスリンク剤の塩基配列特異性
が詳細に調べられている（a) S.-J.Lee, F.C.Seaman,
D.Sun, H.Xiong, R.C.Kelly, L.H.Hurley, J. Am. Che
m. Soc., 119, 3434-3442(1997); b) J.T.Millard, R.
J.Spencer, P.B.Hopkins, Biochemistry, 37, 5211-521
9(1998); c) T.Fujiwara, I.Saito, H.Sugiyama, Tetra
hedron Lett., 40, 315-318(1999).）。しかし、それら
の化合物の抗がん性とインターストランドクロスリンク
剤の塩基配列選択性との相関については全く明らかにさ
れていない。さらに、任意の塩基配列でインターストラ
ンドクロスリンクする化合物の分子設計には成功してい
ない。また、これまでに合成されているＤＮＡインター
ストランドクロスリンク剤は一般的に反応の効率が著し
く低い。例えば、ＤＮＡ中の５’−ＧＮＣ塩基配列に対
してクロスリンク能を有することが知られているマスタ
ードによるインターストランドクロスリンク体は使用し
ているＤＮＡに対してわずかに数％しか生成しているに
すぎない（Y.-H.Fan and B.Gold, J. Am. Chem. Soc.,
121, 11942-11946(1999).）。従って、効率よいＤＮＡ
インターストランドクロスリンク剤の開発が極めて重要
になってきている。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、効率よいＤ
ＮＡインターストランドクロスリンク剤、そのための化
合物、及びそれを用いた医薬組成物を提供するものであ
る。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、すでにＤ
ＮＡ塩基配列認識能をもつピロール−イミダゾールジア
ミド部とデュオカルマイシンセグメントの間にビニル基
を導入した次式（１）

【００１１】

【化６】

【００１２】で表されるハイブリット分子（１）のＤＮ
Ａアルキル化能を解析してきた。このハイブリット分子
（１）はホモダイマーを形成して次式で表されるよう
な、

【００１３】

【化７】

【００１４】ＤＮＡ中の特定の塩基配列に対して選択的
にダブルアルキル化することを明らかにしてきた。この
化合物は、ビニル基をリンカーＬとするＡ−Ｌ−Ｂ−Ｒ
型（式中、ＢはＤＮＡの塩基配列を認識できる化学構造
を示し、ＡはＤＮＡの塩基の一種に結合し得る化学構造
を示し、ＬはＡ及びＢの化学構造を結合させ得るリンカ
ーを示し、Ｒはアルキル基などの末端基を示す。）の構
造を有する分子である（特願平１１−８３５９１号参
照）。そこで、本発明者らは、この型の分子を基本とし
て検討してきたところ、この型の分子を異なる長さのス
ペーサーで連結した化合物が効率よいＤＮＡインタース
トランドクロスリンク能を有する化合物であることを見
出した。

【００１５】本発明は、一般式（Ｉ） Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｘ−Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、各々のＢはＤＮＡの塩基配列を認識できる化学
構造を示し、各々のＡはＤＮＡの塩基の一種に結合し得
る化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの化学構造を結合させ
得るリンカーを示し、ＸはＡ−Ｌ−Ｂコンポーネントを
結合させるスペーサーを示す。）で表されるＤＮＡの２
本鎖をインターストランドクロスリンクすることができ
る化合物に関する。また、本発明は前記化合物を用いる
ＤＮＡをインターストランドクロスリンクする方法、Ｄ
ＮＡのインターストランドクロスリンク剤、及びこれを
含有してなる医薬組成物に関する。

【００１６】本発明者らは、インターストランドクロス
リンク能を有する化合物を開発する目的で、例えばハイ
ブリット分子（１）を異なる長さのスペーサーで連結し
た化合物（７ａ−ｄ）を、次に示すスキーム、

【００１７】

【化８】

【００１８】（式中、Ｘは、

【００１９】

【化９】

【００２０】を示す。）に従って合成した。化合物（７
ａ−ｄ）の合成は、ジアミド誘導体（３）にそれぞれ対
応するスペーサーとなる活性化したカルボニル化合物を
縮合させることにより行った。まず、Ｎ−メチル−２−
ピロールアルデヒドを硝酸などでニトロ化した後、（Ｅ
ｔＯ）_２Ｐ（Ｏ）ＣＨＣＯ_２Ｅｔなどのウイティッヒ型
の試薬を用いてエステル体（２）とする。得られたエス
テル体（２）をＮａＢＨ_４などの金属水素化物などで還
元してアミノ体とし、これに１−メチル−３−ニトロ−
５−トリクロロアセチルイミダゾールを反応させてイミ
ダゾール−ピロール化合物（３）とする。これを前記と
同様な方法によりニトロ基を還元してアミノ基とし、こ
れに目的物に応じた酸ハロゲン化物、またはカルボニル
ジイミダゾール（ＣＤＩ）を反応させることにより二量
体化合物（４ａ−ｄ）とする。次いで、両末端のエステ
ル基を加水分解して遊離カルボン酸体（５ａ−ｄ）と
し、これをＣＤＩを用いて活性アミド体（６ａ−ｄ）と
した後、これに抗生物質ＤＵ８６のセグメントＡ部分を
反応させて目的の化合物（７ａ−ｄ）とした。この合成
法は、同種の対称二量体の合成に対して応用可能な汎用
性の高い手法であり、本発明の化合物はこの方法に準じ
て製造することができる。

【００２１】本発明を前記した化合物（７ａ−ｄ）を例
にして、具体的に説明する。これらの化合物を用いた２
本鎖ＤＮＡのインターストランドクロスリンク反応を次
の１８塩基及び１５塩基のＤＮＡ対を用いて実験した。 ５’−ＴＴＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡ−３’ （ＯＤＮ−１８） ３’−ＧＴＣＡＣＣＧＡＣＧＧＴＣＧＴ−５’ （ＯＤＮ−１５） このＯＤＮ−１８の５’末端側をテキサスレッド（ＴＸ
Ｒｅｄ）で標識したヌクレオチドをＴＸＲ−１８と呼ぶ
ことにする。また、この実験には補助試薬として次式、

【００２２】

【化１０】

【００２３】で表される化合物（この化合物を本明細書
では、ＩｍＩｍＰｙという。）を用いた。このＩｍＩｍ
Ｐｙは、本明細書における「ＤＮＡの塩基配列を認識で
きる化学構造を有する物質」として使用された。前記し
たＤＮＡに、本発明の化合物（７ａ−ｄ）、及び必要に
よりＩｍＩｍＰｙを添加して、ＤＮＡオリゴマーに対す
る化合物（７ａ−ｄ）のインターストランドクロスリン
ク反応について、ポリアクリルアミドゲル電気泳動を用
いた解析を行った。

【００２４】結果を図１に図面に代わる写真として示
す。図１の、レーン１はＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤ
Ｎ−１５（６μＭ）のみの場合を示し、レーン２はＴＸ
Ｒ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）にＩｍＩ
ｍＰｙ（１００μＭ）を添加した場合を示し、レーン３
はＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に
化合物（７ａ）（５０μＭ）を添加した場合を示し、レ
ーン４はＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μ
Ｍ）に化合物（７ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ
（１００μＭ）を添加した場合を示し、レーン５はＴＸ
Ｒ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に化合物
（７ｂ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μＭ）
を添加した場合を示し、レーン６はＴＸＲ−１８（３μ
Ｍ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に化合物（７ｃ）（５０
μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μＭ）を添加した場合
を示し、レーン７はＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−
１５（６μＭ）に化合物（７ｄ）（５０μＭ）及びＩｍ
ＩｍＰｙ（１００μＭ）を添加した場合を示す。

【００２５】その結果、化合物（７ａ）は単独では反応
はほとんど観察できなかったが（レーン３）、ＩｍＩｍ
Ｐｙが存在すると、出発原料のＤＮＡフラグメントＴＸ
Ｒ−１８は泳動度の低いバンドに変化した（レーン
４）。他のスペーサーをもつ化合物（７ｂ−ｄ）では、
化合物単独でもＩｍＩｍＰｙを併用してもレーン４で観
察されたような泳動度の低いバンドは殆ど生成しなかっ
た（レーン５、６、７）。これらの事実は化合物（７
ａ）とＩｍＩｍＰｙを併用した場合に極めて特異的なＤ
ＮＡオリゴマーＴＸＲ−１８に対する反応が起こったこ
とを示している。

【００２６】次に、先に観察されたバンドがインタース
トランドクロスリンク体に由来するものであることを確
認するために、上のストランド（ＴＸＲ−１８）と下の
ストランド（ＴＸＲ−１８Ｒ）を別々にラベルしたオリ
ゴマーからなる２組のＤＮＡ対を用いた実験を行った。
即ち、前記のＴＸＲ−１８とＯＤＮ−１５の対と、次に
示すＯＤＮ−１５ＲとＴＸＲ−１８Ｒとの対を用いた。 ５’−ＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＣＡＧＣＡ−３’ （ＯＤＮ−１５Ｒ） ３’−ＧＴＣＡＣＣＧＡＣＧＧＴＣＧＴＡＴＴ−５’ （ＯＤＮ−１８Ｒ） 使用したＴＸＲ−１８Ｒは、前記したＯＤＮ−１８Ｒの
５’末端側をテキサスレッド（ＴＸＲｅｄ）で標識した
ヌクレオチドである。さらにこの実験には標品として次
のヌクレオチドＴＸＲ−１４及びＴＸＲ−１４Ｒを用い
た。 ５’−ＴＴＡＣＡＧＴＧＧＣＴＧＣＣ−３’ （ＯＤＮ−１４） ３’−ＣＣＧＡＣＧＧＴＣＧＴＡＴＴ−５’ （ＯＤＮ−１４Ｒ） これらの塩基配列はいずれもＯＤＮ−１８又はＯＤＮ１
８Ｒの５’末端側の塩基配列と同じになるように設計さ
れている。ＴＸＲ−１４は、前記したＯＤＮ−１４の
５’末端側をテキサスレッド（ＴＸＲｅｄ）で標識した
ヌクレオチドであり、同様に、ＴＸＲ−１４ＲはＯＤＮ
−１４Ｒの５’末端側をテキサスレッド（ＴＸＲｅｄ）
で標識したヌクレオチドである。

【００２７】この結果を図２に図面に代わる写真として
示す。図２のレーン１は、ＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯ
ＤＮ−１５（６μＭ）のみの場合を示し、レーン２は、
ＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に化
合物（７ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μ
Ｍ）を添加した場合を示し、レーン３は、前記レーン２
において、さらに９０℃で２０分加熱処理した後、９０
℃で２０分間ピペリジン処理した場合を示し、レーン４
は、前記レーン３において、さらに３７℃で２時間アル
カリ脱リン酸化酵素処理した場合を示し、レーン５は、
標品のＴＸＲ−１４を示し、レーン６は、ＴＸＲ−１８
Ｒ（３μＭ）とＯＤＮ−１５Ｒ（６μＭ）のみの場合を
示し、レーン７は、ＴＸＲ−１８Ｒ（３μＭ）とＯＤＮ
−１５Ｒ（６μＭ）に化合物（７ａ）（５０μＭ）及び
ＩｍＩｍＰｙ（１００μＭ）を添加した場合を示し、レ
ーン８は、前記レーン７において、さらに９０℃で２０
分加熱処理した後、９０℃で２０分間ピペリジン処理し
た場合を示し、レーン９は、前記レーン８において、さ
らに３７℃で２時間アルカリ脱リン酸化酵素処理した場
合を示し、レーン１０は、標品のＴＸＲ−１４Ｒを示
す。

【００２８】この実験により、インターストランドクロ
スリンク体と考えられる新たな生成物を確認した（レー
ン２及び７）。これに対し、加熱処理、ピペリジン処理
を行うと、切断されたフラグメントが得られた（レーン
３及び９）。さらに、このフラグメントをＡＰ（alkali
ne phosphatase）処理すると泳動度が減少した（レーン
４及び８）。この生成物は別に合成した標品とポリアク
リルアミドゲル電気泳動で同一物であることを確認した
（レーン５及び１０）。この実験結果は、化合物（７
ａ）とＩｍＩｍＰｙによって、ＤＮＡオリゴマー上の２
個所のアデニン部位で配列選択的にアルキル化されてい
たことを示している。つまり、反応によって泳動速度の
大きな変化が観察された事実と併せて考えれば、ほぼ定
量的にＤＮＡに対するインターストランドクロスリンク
反応が進行することが確認された。

【００２９】これらの結果、ピロール−イミダゾールポ
リアミドＣＰＩコンジュゲート体（７ａ）はピロール−
イミダゾールの塩基配列認識のルール（a) P.B.Dervan,
etal., Nature, 282, 111-115(1998); b) T.Fujiwara,
Z.-F.Tao, Y.Ozeki, I.Saito, A.H.-J.Wang, M.Lee,
H.Sugiyama, J. Am. Chem. Soc., 121, 7706-7707(199
9).参照）に従ったトリアミドの存在下のみＤＮＡを効
率よくインターストランドクロスリンクすることが明ら
かとなった。化合物（７ａ）とＩｍＩｍＰｙによるイン
ターストランドクロスリンク体の構造を図３に示す。

【００３０】次に、インターストランドクロスリンク体
の塩基配列特異性を検討した。この化合物（７ａ）とＩ
ｍＩｍＰｙによるインターストランドクロスリンクの配
列特異性を検討するために、ＩｍＩｍＰｙと他の３種の
トリアミド存在下での化合物（７ａ）のクロスリンク反
応に変化を調べた。この実験で使用したトリアミドの構
造を次に示す。

【００３１】

【化１１】

【００３２】即ち、ＩｍＩｍＰｙは、Ｘ＝Ｎで、Ｙ＝Ｎ
で、Ｚ＝ＣＨのものであり、ＩｍＩｍＩｍは、Ｘ＝Ｎ
で、Ｙ＝Ｎで、Ｚ＝Ｎのものであり、ＩｍＰｙＰｙは、
Ｘ＝Ｎで、Ｙ＝ＣＨで、Ｚ＝ＣＨのものであり、ＰｙＩ
ｍＰｙは、Ｘ＝ＣＨで、Ｙ＝Ｎで、Ｚ＝ＣＨのものであ
る。この結果を、図４に図面に代わる写真として示す。
図４のレーン１は、ＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−
１５（６μＭ）のみの場合を示し、レーン２は、ＴＸＲ
−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に化合物
（７ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μＭ）
を添加した場合を示し、レーン３は、ＴＸＲ−１８（３
μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に化合物（７ａ）（５
０μＭ）及びＩｍＩｍＩｍ（１００μＭ）を添加した場
合を示し、レーン４は、ＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤ
Ｎ−１５（６μＭ）に化合物（７ａ）（５０μＭ）及び
ＩｍＰｙＰｙ（１００μＭ）を添加した場合を示し、レ
ーン５は、ＴＸＲ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６
μＭ）に化合物（７ａ）（５０μＭ）及びＰｙＩｍＰｙ
（１００μＭ）を添加した場合を示す。

【００３３】この結果、ＩｍＩｍＩｍを用いた系（レー
ン３）においても効率は若干低下するもののクロスリン
ク体の生成が明確に観察された。しかし、他のトリアミ
ドを用いた系（レーン４及び５）では、クロスリンク体
の生成はほとんど確認することはできなかった。これら
の結果は、図３に示すモデルに基づいて任意の配列でＤ
ＮＡのインターストランドクロスリンク反応が行える可
能性を示している。

【００３４】さらに、インターストランドクロスリンク
反応の最適条件の検討を行った。化合物（７ａ）とＩｍ
ＩｍＰｙによるインターストランドクロスリンク反応に
おける最適の塩基配列の間隔を調べる実験を行うために
次の塩基ついを用いた実験を行った。 ５’−[TXRed]−ＴＴＡＣＡＧＴＧＧＣ−（Ｔ）_ｎ−ＧＣＣＡＧＣＡ−３’ ３’−ＧＴＣＡＣＣＧ−（Ａ）_ｎ−ＣＧＧＴＣＧＴ−５’ ５’末端側のＴＸＲｅｄは、テキサスレッドでの標識を
示す。ｎ＝０の場合の、上段のものをＴＸＲ−１７と称
し、下段のものをＯＤＮ−１４と称する。ｎ＝１の場合
の、上段のものをＴＸＲ−１８と称し、下段のものをＯ
ＤＮ−１５と称する。ｎ＝２の場合の、上段のものをＴ
ＸＲ−１９と称し、下段のものをＯＤＮ−１６と称す
る。ｎ＝３の場合の、上段のものをＴＸＲ−２０と称
し、下段のものをＯＤＮ−１７と称する。

【００３５】この結果を、図５に図面に代わる写真とし
て示す。図５のレーン１は、ｎ＝０のもので、ＴＸＲ−
１７（３μＭ）とＯＤＮ−１４（６μＭ）に化合物（７
ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μＭ）を添
加した場合を示し、レーン２は、ｎ＝１のもので、ＴＸ
Ｒ−１８（３μＭ）とＯＤＮ−１５（６μＭ）に化合物
（７ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μＭ）
を添加した場合を示し、レーン３は、ｎ＝２のもので、
ＴＸＲ−１９（３μＭ）とＯＤＮ−１６（６μＭ）に化
合物（７ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１００μ
Ｍ）を添加した場合を示し、レーン４は、ｎ＝３のもの
で、ＴＸＲ−２０（３μＭ）とＯＤＮ−１７（６μＭ）
に化合物（７ａ）（５０μＭ）及びＩｍＩｍＰｙ（１０
０μＭ）を添加した場合を示す。

【００３６】この結果、ｎ＝０の場合（レーン１）には
全くクロスリンク体を確認することはできなかったが、
ｎ＝２の場合（レーン３）においては先に述べてきたｎ
＝１の場合（レーン２）と同様の定量的なインタースト
ランドクロスリンク反応が起こっていることがわかっ
た。しかしながら、ｎ＝３の場合（レーン４）には２０
％程のクロスリンク体が観察されたにとどまった。

【００３７】さらに、試薬濃度と等量比の反応条件につ
いても検討を行った結果、最終的にTexas Red-18（３μ
Ｍ）に対して、化合物（７ａ）、ＩｍＩｍＰｙをそれぞ
れ２５μＭにまで下げた条件まで定量的なクロスリンク
反応を確認することができた。これらの結果、化合物
（７ａ）とＩｍＩｍＰｙなどによる協同的インタースト
ランドクロスリンク反応を確立することができた。さら
に最適のトリアミドとクロスリンカーを設計すること
で、任意の塩基配列を有するＤＮＡサイトにのみ選択的
にインターストランドクロスリンクする能力をもつテー
ラーメイドドラッグを実現することができるようにな
る。

【発明の実施の態様】

【００３８】本発明の一般式（Ｉ） Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｘ−Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、各々のＢはＤＮＡの塩基配列を認識できる化学
構造を示し、各々のＡはＤＮＡの塩基の一種に結合し得
る化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの化学構造を結合させ
得るリンカーを示し、ＸはＡ−Ｌ−Ｂコンポーネントを
結合させるスペーサーを示す。）で表されるＤＮＡの２
本鎖をインターストランドクロスリンクすることができ
る化合物は、２個の（Ａ−Ｌ−Ｂ）コンポーネントをス
ペーサーＸで相互に連結させた構造を有することを特徴
とするものである。

【００３９】（Ａ−Ｌ−Ｂ）コンポーネントの中のＢ部
分は、ＤＮＡの塩基配列を認識できる化学構造を有する
ものであり、好ましくは置換基を有してもよいピロール
（本明細書ではＰｙと略称する。）及び／又はイミダゾ
ール（本明細書ではＩｍと略称する。）から誘導される
化学構造などであり、これたの置換基を有してもよいピ
ロール環や置換基を有してもよいイミダゾール環をアミ
ド結合で結合させた化学構造が好ましい。この部分の化
学構造とこれに結合するＤＮＡの塩基配列については、
a) P.B.Dervan, et al., Nature, 282, 111-115(1998);
b) T.Fujiwara, Z.-F.Tao, Y.Ozeki, I.Saito, A.H.-
J.Wang, M.Lee, H.Sugiyama, J. Am. Chem. Soc., 121,
7706-7707(1999).などの公知技術を参照することがで
きる。

【００４０】（Ａ−Ｌ−Ｂ）コンポーネントの中のＡ部
分は、ＤＮＡの塩基の一種に結合し得る化学構造を有す
る部分であり、ＤＮＡ中の塩基と共有結合形成できるも
のが好ましい。好ましいＡ部分としてはＤＮＡをアルキ
ル化する抗癌抗生物質のアルキル化部分であって、シク
ロプロパン環やアジリジン環などを有する化学構造がさ
らに好ましい。（Ａ−Ｌ−Ｂ）コンポーネントの中のリ
ンカーＬは、Ａ部分及びＢ部分の化学構造を結合させ得
るものであればよく、これによりＤＮＡの塩基をアルキ
ル化する部分とＤＮＡの塩基配列を認識し得る部分とを
一体化することが可能となる。即ち、ＤＮＡの特定の塩
基配列の部分を特異的に認識し、当該認識部位に応じた
塩基を特異的にアルキル化して結合することが可能とな
る。リンカーＬとしては、適当な長さを有し、即ち原子
数が２〜１０個、好ましくは２〜５個程度を有し、Ａ部
分とＢ部分を化学結合させ得るものであればよい。好ま
しいリンカーＬとしてはビニル基を含有する化学構造が
挙げられる。好ましい（Ａ−Ｌ−Ｂ）−コンポーネント
としては、次式（II）

【００４１】

【化１２】

【００４２】又は次式（III）

【００４３】

【化１３】

【００４４】で表される基などが挙げられる。（Ａ−Ｌ
−Ｂ）コンポーネントを結合させるスペーサーＸとして
は、適当な長さを有し、即ち原子数が１〜１５個、好ま
しくは２〜８個程度を有し、２個の（Ａ−Ｌ−Ｂ）コン
ポーネントを化学結合させ得るものであればよい。例え
ば、カルボニル基又は炭素数２〜１５、好ましくは２〜
８の有機ジカルボン酸から誘導されるアシル基などが挙
げられる。有機ジカルボン酸としては飽和又は不飽和の
脂肪族ジカルボン酸、飽和又は不飽和の環式脂肪族時カ
ルボン酸、芳香族時カルボン酸、芳香脂肪族ジカルボン
酸、複素環式時カルボン酸などが挙げられる。スペーサ
ーＸとしては、−ＣＯ−基、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ
−基、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_４−ＣＯ−基、又は、−ＣＯ
−（ｐ−Ｃ_６Ｈ_４）−ＣＯ−基などが挙げられるが、脂
肪族飽和ジカルボン酸のアシル基が好ましく、より具体
的には−ＣＯ−（ＣＨ_２）_４−ＣＯ−基などが好まし
い。

【００４５】本発明は、前記した本発明の化合物のいず
れかを用いて、２本鎖ＤＮＡの特定の塩基配列部分をイ
ンターストランドクロスリンクする方法を提供する。こ
の本発明の方法においては、さらにＤＮＡの塩基配列を
認識できる化学構造を有する物質、例えばＩｍＩｍＰ
ｙ、ＩｍＩｍＩｍなどのトリアミドの存在下に行うのが
好ましい。本発明の方法によりインターストランドクロ
スリンクする場合には、（Ａ−Ｌ−Ｂ）コンポーネント
の中のＢ部分のＤＮＡの塩基配列を認識できる化学構造
により、ＤＮＡの特定の塩基配列部分に特異的にインタ
ーストランドクロスリンクすることができる。例えば、
本発明の化合物として前記した化合物（７ａ）などを用
いた場合には、ＤＮＡのＴＧＧＣ若しくはＧＣＣＡ又は
それらの相補鎖部分にインターストランドクロスリンク
することができる。

【００４６】また、本発明は、前記した本発明の化合物
からなる、２本鎖ＤＮＡのインターストランドクロスリ
ンク剤を提供する。本発明のインターストランドクロス
リンク剤は効率よく、しかもＤＮＡの特定の塩基配列部
分インターストランドクロスリンクすることができる。
本発明のインターストランドクロスリンク剤は、ＤＮＡ
の特定の塩基配列の部分にインターストランドクロスリ
ンクすることができるので、遺伝子の異常による各種の
疾患の治療又は予防に有用である。特に癌遺伝子に対し
てその発現の予防、治療に有用となる。したがって、本
発明は前記した本発明の化合物及び製薬上許容される担
体からなる医薬組成物を提供するものである。本発明の
医薬組成物は、遺伝子の異常に伴う各種疾患、例えば癌
の治療又は予防に有用である。

【００４７】

【実施例】次に、実地例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるもので
はない。

【００４８】実施例１ 化合物（７ａ）の製造 （１） 化合物（２）の製造 濃硫酸（１．５ｍｌ、３５．７ｍｍｏｌ）の無水酢酸溶
液（３ｍｌ）中に１−メチル−２−ピロールアルデヒド
（３．０ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）の無水酢酸溶液（５ｍ
ｌ）を−４０℃下で４０分間ゆっくりと滴下した。反応
混合物を−１０℃下で２時間攪拌した後、そこにヘキサ
ン（１００ｍｌ）を加えた。生じた沈殿物を桐山ロート
を用いて集め、ヘキサン（１０ｍｌ ｘ ２）で洗浄する
ことにより黄色粗結晶（１．４３ｇ、３４％）を得た。
さらなる精製に付すことなく直ちにこのものを次の反応
に用いた。水素化ナトリウム（３７２ｍｇ、９．２９ｍ
ｍｏｌ、６０％ oil suspension）のＴＨＦ（５ｍｌ）
溶液中に２−ジエチルホスホノ酢酸エチルエステル（tr
iethylphosphonoacetate）（１．９３ｍｌ、９．７５ｍ
ｍｏｌ）を０℃下でゆっくりと加えた。さらに、１−メ
チル−４−ニトロ−２−ピロールアルデヒド（１．４３
ｇ、９．２９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍｌ）溶液を０
℃下で加えた後、反応混合物を室温下で２時間攪拌し
た。反応溶液の溶媒を留去し蒸留水（１０ｍｌ）を加え
た。水層を酢酸エチル（１００ｍｌ ｘ ２）を用いて抽
出した。有機層を集め無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、
濾過、濃縮し残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（２５→５０％ ＥｔＯＡｃ in hexane, gradient
elution）にて精製することにより化合物（２）（１．
６９ｇ、８１％）を得た。

【００４９】^１H NMR(CDCl_３) δ 1.34(t, J=7.0Hz, 3H), 3.77(s, 3H), 4.26(q, J=7.0H
z, 2H),6.31(d, J=16.0Hz, 1H), 7.11(d, J=1.5Hz, 1
H),7.48(d, J=16.0Hz, 1H), 7.56(d, J=1.5Hz, 1H).^１３ C NMR(CDCl_３) δ 14.3, 35.4, 60.8, 106.1, 118.4, 125.3, 129.8, 130.
1,136.7, 166.5. MS(FAB+) 225[M^＋].

【００５０】（２） 化合物（３）の製造 化合物（２）（５００ｍｇ、２．２３ｍｍｏｌ）の無水
メタノール（２５ｍｌ）溶液中に１０％パラジウム−炭
素（２２０ｍｇ）を加えた。さらに水素化ホウ素ナトリ
ウム（１５３ｍｇ、４．０４ｍｍｏｌ）の蒸留水（３ｍ
ｌ）溶液を０℃下で滴下した後、反応混合物を室温下で
２０分攪拌した。反応溶液をセライトにて濾過した後、
酢酸エチル（５００ｍｌ）を加えた。有機層を蒸留水
（１０ｍｌ）にて洗浄した後、無水硫酸ナトリウムにて
乾燥後、濾過、濃縮し褐色粗結晶（４６１ｍｇ）を得
た。さらなる精製に付すことなく直ちにこのものを次の
反応に用いた。粗結晶の無水塩化メチレン（１０ｍｌ）
溶液中にエチルジイソプロピルアミン（０．５２ｍｌ、
２．９８ｍｍｏｌ）と別途合成した１−メチル−４−ニ
トロ−２−トリクロロアセチルイミダゾール（Ｏ_２ＮＩ
ｍＣＯＣＣｌ_３）（５５０ｍｇ、２．０２ｍｍｏｌ）
を、順次０℃下で加えた後、反応混合物を室温下で１時
間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た残留物をシ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（３０→５０％ Ｅ
ｔＯＡｃ（ヘキサン中））にて精製することにより、化
合物（３）（４００ｍｇ、５２％ for ２ steps）を得
た。

【００５１】^１H NMR(CDCl_３) δ 1.33(t, J=7.0Hz, 3H), 3.71(s, 3H), 4.21(s, 3H),4.2
5(q, J=7.0Hz, 2H), 6.16 (d, J=16.0Hz, 1H),6.62(d,
J=l.5Hz, 1H), 7.32(d, J=l.5Hz, 1H),7.55(d, J=16.0H
z, 1H), 7.82(s, 1H), 8.97(brs, 1H).^１３ C NMR(CDCl_３) δ 14.3, 34.4, 37.1, 60.3, 102.5, 114.2, 117.9, 122.
1, 124.4,127.6, 131.4, 137.2, 145.3, 154.4, 167.4. MS(FAB+) 347[M+].

【００５２】（３） 化合物（４ａ）の製造 化合物（３）（２５０ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の無水
メタノール−酢酸エチル（１：１、１０ｍｌ）混合溶液
中に１０％パラジウム−炭素（１２０ｍｇ）を加えた。
さらに水素化ホウ素ナトリウム（５４．５ｍｇ、１．４
４ｍｍｏｌ）の蒸留水（０．５ｍｌ）溶液を０℃下で滴
下した後、反応混合物を室温下で２０分攪拌した。反応
溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡ
ｃ）にて濾過した後、溶媒を留去して褐色粗結晶（１４
１ｍｇ）を得た。さらなる精製に付すことなく直ちにこ
のものを次の反応に用いた。粗結晶の無水塩化メチレン
（２ｍｌ）溶液中にエチルジイソプロピルアミン（０．
２５ｍｌ、１．３３ｍｍｏｌ）とアジポイル−ジクロラ
イド（adipoyl chloride）（３２μｌ、０．２２ｍｍｏ
ｌ）を、順次０℃で加えた後、反応混合物を室温下で１
４時間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た黄色残
留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（０→３％
ＭｅＯＨ in ＣＨＣｌ_３）にて精製することにより化
合物（４ａ）（９６．２ｍｇ、３６％ for ２ steps）
を得た。

【００５３】^１H NMR(CDCl_３) δ 1.32(t, J=6.5Hz, 6H), 1.81(s, 4H), 2.42(s, 4H), 3.
67(s, 6H),4.04(s, 6H), 4.24(q, J=6.5Hz, 4H), 6.10
(d, J=15.5Hz, 2H),6.51(s, 2H), 7.34(s, 2H), 7.41
(s, 2H), 7.53(d, J=15.5Hz, 2H),8.04(brs, 2H), 8.80
(brs, 2H).^１３ C NMR(5%CD_３OD in CDCl_３) δ 14.1, 24.8, 34.1, 34.5, 34.6, 60.3, 102.3, 112.9,
114.3,118.0, 122.8, 127.1, 131.8, 133.7, 135.8, 15
5.8, 168.0, 171.0. MS(ESI+) 744.6[M^＋].

【００５４】（４） 化合物（５ａ）の製造 ４ａ（７６．２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）の蒸留水
（０．６ｍｌ）懸濁液中にＤＢＵ：1,8-diazabicyclo
[5.4.0]undec-7-ene（０．６ｍｌ、４．０１ｍｍｏｌ）
を加えた反応溶液を室温下で１５時間攪拌した。反応の
終結をＨＰＬＣ（０→１００％ ５０ｍｍｏｌぎ酸アン
ムニウム水溶液−アセトニトリル, ２０ｍｉｎ、２５４
ｎｍ）で確認した後、反応溶液の溶媒を留去して得た褐
色残留物をジエチルエーテル（１０ｍｌ）、酢酸エチル
（１０ｍｌ）を用いて結晶化させた。得られたＤＢＵ塩
化合物を１％希塩酸を用いて脱塩した後、生じた沈殿物
を桐山ロートを用いて集め減圧下乾燥することにより５
ａ（４０．０ｍｇ、５７％）を得た。

【００５５】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.58(s, 4H), 2.32(s, 4H), 3.68(s, 6H), 3.94(s, 6
H),6.03(d, J=15.5Hz, 2H), 6.80(s, 2H), 7.41(s, 2
H), 7.43(s, 2H),7.46(d, J=15.5Hz, 2H), 9.89(brs, 2
H), 10.24(brs, 2H). MS(ESI+) 688.5[M+].

【００５６】（５）化合物（６ａ）の製造 ５ａ（３０．０ｍｇ、４３，６μｍｏｌ）の無水ジメチ
ルホルムアミド（１ｍｌ）溶液中に１，１’−カルボニ
ルジイミダゾール（1,1'-carbonyldiimidazole）（ＣＤ
Ｉ）（４２ｍｇ、２６１μｍｏｌ）を加えた反応溶液
を、室温下で１５時間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去
して得た黄色残留物をジエチルエーテル（１０ｍｌ）を
用いて結晶化を行い化合物（６ａ）（３５．７ｍｇ、１
００％）を得た。

【００５７】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.59(s, 4H), 2.34(s, 4H), 3.78(s, 6H), 3.96(s, 6
H),7.11(s, 2H), 7.16(d, J=14.5Hz, 2H), 7.32(s, 2
H),7.45(s, 2H), 7.49(s, 2H), 7.87(d, J=14.5Hz, 2
H),7.90(s, 2H), 8.68(s, 2H), 10.07(brs, 2H), 10.23
(brs, 2H).

【００５８】（６） 化合物（７ａ）の製造 水素化ナトリウム（２．６ｍｇ、６４．４μｍｏｌ、６
０％ oil suspension）の無水ジメチルホルムアミド
（０．２ｍｌ）溶液中に、別途合成したＤＵ８６のセグ
メントＡ（１２．５ｍｇ、４８．３μｍｏｌ）の無水ジ
メチルホルムアミド（０．２ｍｌ）溶液を０℃下で加え
た後、化合物（６ａ）（１３．６ｍｇ、１７．２μｍｏ
ｌ）の無水ジメチルホルムアミド（０．２ｍｌ）溶液を
加えた反応溶液を０℃下で４時間攪拌した。反応溶液中
に１０ｍＭリン酸ナトリウム（２ｍｌ）緩衝溶液を０℃
下で加えた後、減圧下溶媒を留去し黄色残留物を得た。
粗結晶を桐山ロート上で蒸留水（１０ｍｌ）、メタノー
ル（１０ｍｌ）、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）にて順
次洗浄し、減圧下乾燥することによって標記の化合物
（７ａ）（１２．２ｍｇ、６１％）を得た。

【００５９】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.29(m, 2H), 1.58(s, 4H), 2.09(m, 2H), 2.33(s, 4
H),2.47(s, 6H), 3.45(m, 2H), 3.72(s, 6H), 3.73(s,
6H),3.95(s, 6H), 4.18(m, 2H), 4.28(m, 2H),6.57(d,
J=14.5Hz, 2H), 6.83(brs, 2H), 6.99(s, 2H),7.41(s,
2H), 7.44(s, 2H), 7.58(d, J=14.5Hz, 2H),9.98(s, 2
H), 10.23 (s, 2H), 12.36(brs, 2H). MS(ESI+) 1168.6[M^＋].

【００６０】実施例２ 化合物（７ｂ）の製造 （１） 化合物（４ｂ）の製造 実施例１の（２）で製造した化合物（３）（４２０ｍ
ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）の無水メタノール−酢酸エチル
（１：１、３０ｍｌ）混合溶液中に１０％パラジウム−
炭素（２００ｍｇ）を加えた。さらに水素化ホウ素ナト
リウム（１０６ｍｇ、２．８０ｍｍｏｌ）の蒸留水（１
ｍｌ）溶液を０℃下で滴下した後、反応混合物を室温下
で２０分攪拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（ＥｔＯＡｃ）にて濾過した後、溶媒を留
去して褐色粗結晶（３２７ｍｇ）を得た。さらなる精製
に付すことなく直ちにこのものを次の反応に用いた。粗
結晶の無水塩化メチレン（１０ｍｌ）溶液中にエチルジ
イソプロピルアミン（０．６ｍｌ、３．６３ｍｍｏｌ）
とテレフタル酸ジクロライド（terephtaloylchloride）
（１２２ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）を、順次０℃下で加
えた後、反応混合物を室温下で２時間攪拌した。反応溶
液の溶媒を留去して得た黄色残留物をシリカゲルカラム
クロマトグラフィー（０→３％ ＭｅＯＨ in ＣＨＣｌ
_３）にて精製することにより化合物（４ｂ）（２２３ｍ
ｇ、４８％ for ２ steps）を得た。

【００６１】^１H NMR(CDCl_３) δ 1.33(t, J=7.5Hz, 6H), 3.71(s, 6H), 4.12(s, 6H),4.2
5(q, J=7.5Hz, 4H), 6.13(d, J=16.0Hz, 2H),6.55(s, 2
H), 7.38(s, 2H), 7.56(d, J=16.0Hz, 2H),7.61(s, 2
H), 8.02(s, 4H), 8.38(brs, 2H), 8.82(brs, 2H).

【００６２】（２） 化合物（５ｂ）の製造 化合物（４ｂ）（３０．０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）の
蒸留水（０．２ｍｌ）懸濁液中に１，８−ジアザビシク
ロ［５，４，０］ウンデセン−７（1,8-dazabicyclo[5.
4.0]undec-7-ene）（ＤＢＵ）（０．２ｍｌ、１．３４
ｍｍｏｌ）を加えた反応溶液を室温下で１２時間攪拌し
た。反応の終結をＨＰＬＣ（０→１００％ ５０ｍｍｏ
ｌ ぎ酸アンモニウム水溶液−アセトニトリル, ２０ｍ
ｉｎ、２５４ｎｍ）で確認した後、反応溶液の溶媒を留
去して得た褐色残留物をジエチルエーテル（１０ｍ
ｌ）、酢酸エチル（１０ｍｌ）を用いて結晶化させた。
得られたＤＢＵ塩化合物を１％希塩酸を用いて脱塩した
後、生じた沈殿物を桐山ロートを用いて集め減圧下乾燥
することにより化合物（５ｂ）（２１．５ｍｇ、８５
％）を得た。

【００６３】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 3.68(s, 6H), 4.00(s, 6H), 6.04(d, J=16.0Hz, 2H),
6.81(s, 2H),7.43(s, 2H), 7.46(d, J=16.0Hz, 2H), 7.
66(s, 2H), 8.10(s, 4H),9.95(s, 2H), 10.95(s, 2H).

【００６４】（３） 化合物（６ｂ）の製造 化合物（５ｂ）（５４．５ｍｇ、７９．９μｍｏｌ）の
無水ジメチルホルムアミド（３ｍｌ）溶液中に、ＣＤＩ
（７６ｍｇ、２３１μｍｏｌ）を加えた反応溶液を室温
下で１５時間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た
黄色残留物をジエチルエーテル（１０ｍｌ）を用いて結
晶化を行い化合物（６ｂ）（６３．０ｍｇ、９７％）を
得た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 3.79(s, 6H), 4.02(s, 6H), 7.10(s, 2H), 7.17(d, J=1
5.0Hz, 2H),7.32(s, 2H), 7.50(s, 2H), 7.68(s, 2H),
7.87(d, J=15.0Hz, 2H),7.90(s, 2H), 8.11(s, 4H), 8.
67(s, 2H), 10.15(s, 2H),10.96(s, 2H).

【００６５】（４） 化合物（７ｂ）の製造 水素化ナトリウム（４．５ｍｇ、１１２．５μｍｏｌ、
６０％ oil suspension）の無水ジメチルホルムアミド
（０．１ｍｌ）溶液中に、別途合成したＤＵ８６のセグ
メントＡ（２１．０ｍｇ、８１．３μｍｏｌ）の無水ジ
メチルホルムアミド（０．１ｍｌ）溶液を０℃下で加え
た後、化合物（６ｂ）（２１．０ｍｇ、２４．９μｍｏ
ｌ）の無水ジメチルホルムアミド（０．８ｍｌ）溶液を
加えた反応溶液を０℃下で１８時間攪拌した。反応溶液
中に１０ｍＭリン酸ナトリウム（２ｍｌ）緩衝溶液を０
℃下で加えた後、減圧下溶媒を留去し黄色残留物を得
た。粗結晶を桐山ロート上で蒸留水（１０ｍｌ）、メタ
ノール（１０ｍｌ）、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）に
て順次洗浄し、減圧下乾燥することによって標記の化合
物（７ｂ）（２４．５ｍｇ、８３％）を得た。

【００６６】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.30(m, 2H), 2.09(m, 2H), 2.47(s, 6H), 3.46(m, 2
H),3.74(s, 12H), 4.02(s, 6H), 4.20(m, 2H), 4.29(m,
2H),6.60(d, J=15.0Hz, 2H), 6.83(brs, 2H), 7.01(s,
2H),7.43(s, 2H), 7.58(d, J=15.0Hz, 2H), 7.68(s, 2
H),8.12(s, 4H), 10.05(s, 2H), 10.96(s, 2H), 12.36
(brs, 2H). MS(ESI+) 1188.9[M^＋].

【００６７】実施例３ 化合物（７ｃ）の製造 （１） 化合物（４ｃ）の製造 実施例１の（２）で製造した化合物（３）（２００ｍ
ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の無水メタノール−酢酸エチル
（１：１、２０ｍｌ）混合溶液中に１０％パラジウム−
炭素（１００ｍｇ）を加えた。さらに水素化ホウ素ナト
リウム（４４ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の蒸留水（０．
５ｍｌ）溶液を０℃下で滴下した後、反応混合物を室温
下で２０分攪拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）にて濾過した後、溶媒を
留去して褐色粗結晶（９３ｍｇ）を得た。さらなる精製
に付すことなく直ちにこのものを次の反応に用いた。粗
結晶の無水塩化メチレン（２ｍｌ）溶液中にエチルジイ
ソプロピルアミン（０．１５ｍｌ、０．８８ｍｍｏｌ）
とフマル酸ジクロライド（fumaryl chloride）（１６μ
ｌ、０．１５ｍｍｏｌ）を順次０℃下で加えた後、反応
混合物を室温下で１２時間攪拌した。反応溶液の溶媒を
留去して得た黄色残留物をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（０→３％ ＭｅＯＨ in ＣＨＣｌ_３）にて精
製することにより化合物（４ｃ）（５０．１ｍｇ、４１
％ for ２ steps）を得た。

【００６８】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.25(t, J=7.0Hz, 6H), 3.70(s, 6H), 3.98(s, 6H),4.1
6(q, J=7.0Hz, 4H), 6.11(d, J=16.0Hz, 2H), 6.85(s,
2H),7.26(s, 2H), 7.45(s, 2H), 7.52(d, J=16.0Hz, 2
H),7.61(s, 2H), 9.97(s, 2H), 10.90(s, 2H).

【００６９】（２） 化合物（５ｃ）の製造 化合物（４ｃ）（４０．１ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の
蒸留水（０．３ｍｌ）懸濁液中にＤＢＵ（０．３ｍｌ、
２．００ｍｍｏｌ）を加えた反応溶液を室温下で１７時
間攪拌した。反応の終結をＨＰＬＣ（０→１００％ ５
０ｍｍｏｌぎ酸アンモニウム水溶液−アセトニトリル,
２０ｍｉｎ、２５４ｎｍ）で確認した後、反応溶液の
溶媒を留去して得た褐色残留物をジエチルエーテル（１
０ｍｌ）、酢酸エチル（１０ｍｌ）を用いて結晶化させ
た。得られたＤＢＵ塩化合物を１％希塩酸を用いて脱塩
した後、生じた沈殿物を桐山ロートを用いて集め減圧下
乾燥することにより化合物（５ｃ）（２２．５ｍｇ、６
１％）を得た。

【００７０】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 3.69(s, 6H), 3.98(s, 6H), 6.04(d, J=16.0Hz, 2H),6.
83(s, 2H), 7.26(s, 2H), 7.43(s, 2H), 7.47(d, J=16.
0 Hz, 2H),7.60(s, 2H), 9.97(s, 2H), 10.90(s, 2H).

【００７１】（３） 化合物（６ｃ）の製造 化合物（５ｃ）（１７．５ｍｇ、２６．５μｍｏｌ）の
無水ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）溶液中にＣＤＩ
（３０ｍｇ、１８５μｍｏｌ）を加えた反応溶液を室温
下で１５時間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た
黄色残留物をジエチルエーテル（１０ｍｌ）を用いて結
晶化を行い化合物（６ｃ）（１８．５ｍｇ、９２％）を
得た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 3.78(s, 6H), 4.00(s, 6H), 7.11(s, 2H),7.17(d, J=1
5.0Hz, 2H), 7.28(s, 2H), 7.34(s, 2H),7.52(s, 2H),
7.63(s, 2H), 7.89(d, J=15.0Hz, 2H),7.91(s, 2H), 8.
68(s, 2H), 10.17(s, 2H), 10.89(s, 2H).

【００７２】（４） 化合物（７ｃ）の製造 水素化ナトリウム（２．８ｍｇ、７１．２μｍｏｌ、６
０％ oil suspension）の無水ジメチルホルムアミド
（０．１ｍｌ）溶液中に、別途合成したＤＵ８６のセグ
メントＡ（１３．８ｍｇ、５３．４μｍｏｌ）の無水ジ
メチルホルムアミド（０．１ｍｌ）溶液を０℃下で加え
た後、化合物（６ｃ）（１３．５ｍｇ、１７．８μｍｏ
ｌ）の無水ジメチルホルムアミド（０．７ｍｌ）溶液を
加えた反応溶液を０℃下で１２時間攪拌した。反応溶液
中に１０ｍＭリン酸ナトリウム（２ｍｌ）緩衝溶液を０
℃下で加えた後、減圧下溶媒を留去し黄色残留物を得
た。粗結晶を桐山ロート上で蒸留水（１０ｍｌ）、メタ
ノール（１０ｍｌ）、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）に
て順次洗浄し、減圧下乾燥することによって標記の化合
物（７ｃ）（９．６ｍｇ、４７％）を得た。

【００７３】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.30(m, 2H), 2.08(m, 2H), 2.47(s, 6H), 3.47(m, 2
H),3.73(s, 6H), 3.74(s, 6H), 3.99(s, 6H), 4.20(m,
2H),4.29(m, 2H), 6.59(d, J=15.0Hz, 2H), 6.79(brs,
2H),7.01(s, 2H), 7.28(s, 2H), 7.43(s, 2H),7.58(d,
J=15.0Hz, 2H), 7.61(s, 2H), 10.07(s, 2H),10.89(s,
2H), 12.36(brs, 2H). MS(ESI+) 1138.5[M^＋].

【００７４】実施例４ 化合物（７ｄ）の製造 （１） 化合物（４ｄ）の製造 実施例１の（２）で製造した化合物（３）（２００ｍ
ｇ、０．５８ｍｍｏｌ）の無水メタノール−酢酸エチル
（１：１、２０ｍｌ）混合溶液中に１０％パラジウム−
炭素（１００ｍｇ）を加えた。さらに水素化ホウ素ナト
リウム（４４ｍｇ、１．１５ｍｍｏｌ）の蒸留水（０．
５ｍｌ）溶液を０℃下で滴下した後、反応混合物を室温
下で２０分攪拌した。反応溶液をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）にて濾過した後、溶媒を
留去して褐色粗結晶（６３ｍｇ）を得た。さらなる精製
に付すことなく直ちにこのものを次の反応に用いた。粗
結晶の無水塩化メチレン（２ｍｌ）溶液中にＣＤＩ（１
６ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）を０℃下で加えた後、反応
混合物を室温下で１２時間攪拌した。反応溶液の溶媒を
留去して得た黄色残留物をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（０→３％ ＭｅＯＨ in ＣＨＣｌ_３）にて精
製することにより化合物（４ｄ）（５１．３ｍｇ、４５
％ for ２ steps）を得た。

【００７５】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.24(t, J=7.0Hz, 6H), 3.70(s, 6H), 3.96(s, 6H),4.1
5(q, J=7.0Hz, 4H), 6.08(d, J=16.0Hz, 2H), 6.87(s,
2H),7.26(s, 2H), 7.45(s, 2H), 7.51(d, J=16.0Hz, 2
H),8.31(brs, 2H), 10.10(s, 2H).

【００７６】（２） 化合物（５ｄ）の製造 ４ｄ（４１．３ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）の蒸留水
（０．３ｍｌ）懸濁液中にＤＢＵ（０．３ｍｌ、２．０
０ｍｍｏｌ）を加えた反応溶液を室温下で１７時間攪拌
した。反応の終結をＨＰＬＣ（０→１００％ ５０ｍｍ
ｏｌぎ酸アンモニウム水溶液−アセトニトリル, ２０ｍ
ｉｎ、２５４ｎｍ）で確認した後、反応溶液の溶媒を留
去して得た褐色残留物をジエチルエーテル（１０ｍ
ｌ）、酢酸エチル（１０ｍｌ）を用いて結晶化させた。
得られたＤＢＵ塩化合物を１％希塩酸を用いて脱塩した
後、生じた沈殿物を桐山ロートを用いて集め減圧下乾燥
することにより化合物（５ｄ）（２７．４ｍｇ、７３
％）を得た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 3.68(s, 6H), 3.96(s, 6H), 6.01(d, J=16.0Hz, 2H),6.
84(s, 2H), 7.26(s, 2H), 7.42(s, 2H), 7.47(d, J=16.
0Hz, 2H),8.84(brs, 2H), 10.08(s, 2H).

【００７７】（３） 化合物（６ｄ）の製造 化合物（５ｄ）（２２．４ｍｇ、３７．１μｍｏｌ）の
無水ジメチルホルムアミド（１ｍｌ）溶液中にＣＤＩ
（３０ｍｇ、１８５μｍｏｌ）を加えた反応溶液を室温
下で１５時間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た
黄色残留物をジエチルエーテル（１０ｍｌ）を用いて結
晶化を行い化合物（６ｄ）（２５．２ｍｇ、９６％）を
得た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 3.79(s, 6H), 3.98(s, 6H), 7.10(s, 2H),7.15(d, J=1
5.0Hz, 2H), 7.28(s, 2H), 7.34(s, 2H),7.50(s, 2H),
7.87(d, J=15.0Hz, 2H), 7.90(s, 2H),8.67(s, 2H), 8.
89(brs, 2H), 10.25(s, 2H).

【００７８】（４） 化合物（７ｄ）の製造 水素化ナトリウム（４．６ｍｇ、１１４．４μｍｏｌ、
６０％ oil suspension）の無水ジメチルホルムアミド
（０．１ｍｌ）溶液中に、別途合成したＤＵ８６のセグ
メントＡ（２２．１ｍｇ、８５．８μｍｏｌ）の無水ジ
メチルホルムアミド（０．１ｍｌ）溶液を０℃下で加え
た後、化合物（６ｄ）（２０．２ｍｇ、２８．６μｍｏ
ｌ）の無水ジメチルホルムアミド（０．１ｍｌ）溶液を
加えた反応溶液を０℃下で１２時間攪拌した。反応溶液
中に１０ｍＭリン酸ナトリウム（２ｍｌ）緩衝溶液を０
℃下で加えた後、減圧下溶媒を留去し黄色残留物を得
た。粗結晶を桐山ロート上で蒸留水（１０ｍｌ）、メタ
ノール（１０ｍｌ）、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）に
て順次洗浄し、減圧下乾燥することによって標記の化合
物（７ｄ）（５．５ｍｇ、１８％）を得た。

【００７９】^１H NMR(DMSO-d_６) δ 1.29(m, 2H), 2.09(m, 2H), 2.47(s, 6H), 3.44(m, 2
H),3.72(s, 6H), 3.73(s, 6H), 3.97(s, 6H), 4.18(m,
2H),4.27(m, 2H), 6.56(d, J=14.5Hz, 2H), 6.84(brs,
2H),7.01(s, 2H), 7.26(s, 2H), 7.42(s, 2H),7.57(d,
J=14.5Hz, 2H), 8.82(brs, 2H), 10.16(s, 2H),12.35(b
rs, 2H). MS(ESI+) 1084.5[M^＋].

【００８０】実施例５ ＩｍＩｍＰｙ（化合物（１
１））の製造 （１） Ｏ_２ＮＰｙＬＣＯＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＭ
ｅ_２（化合物（８））の製造 Ｏ_２ＮＰｙＣＯＣＣｌ_３（５００ｍｇ、１．８４ｍｍｏ
ｌ）にジメチルアミノプロピルアミン（１ｍｌ、８．３
３ｍｍｏｌ）を加えた後、反応混合物を室温下で１２時
間攪拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た黄色残留物
をジエチルエーテル（３ｍｌ）を用いて結晶化を行い化
合物（８）（４６０ｍｇ、９７％）を得た。^１ H NMR(CDCl_３) δ 1.75(t, J=6.0Hz, 2H), 2.34(s, 6H), 2.54(t, J=6.0H
z, 2H),3.49(q, J=6.0Hz, 2H), 4.00(s, 3H), 6.94(s,
1H),7.52(s, 1H), 8.68(brs, 1H).

【００８１】（２） Ｏ_２ＮＩｍＰｙＬＣＯＮＨＣＨ_２
ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＭｅ_２（化合物（９））の製造 化合物（８）（４６０ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）の無水
メタノール（３ｍｌ）溶液中に１０％パラジウム−炭素
（１２０ｍｇ）を加えた後、反応混合物を水素圧下、室
温で２時間攪拌した。反応溶液をセライト（ＭｅＯＨ）
にて濾過した後、溶媒を留去して黄色粗結晶（４１３ｍ
ｇ）を得た。さらなる精製に付すことなく直ちにこのも
のを次の反応に用いた。粗結晶の無水塩化メチレン（８
ｍｌ）溶液中に、エチルジイソプロピルアミン（０．５
ｍｌ、２．８７ｍｍｏｌ）と、別途合成したＯ_２ＮＩｍ
ＣＯＣＣｌ_３（４９３ｍｇ、１．８１ｍｍｏｌ）を順次
０℃下で加えた後、反応混合物を室温下で１５時間攪拌
した。反応溶液の溶媒を留去して得た残留物中に、蒸留
水（３０ｍｌ）を加えて生じる黄色沈殿物を桐山ロート
に用いて濾取した。蒸留水（３０ｍｌ）、ジエチルエー
テル（５ｍｌ）にて順次洗浄し、減圧下乾燥することに
よって化合物（９）（５８７ｍｇ、８６％ for ２ step
s）を得た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 1.61(t, J=7.0Hz, 2H), 2.14(s, 6H), 2.24(t, J=7.0H
z, 2H),3.19(q, J=7.0Hz, 2H), 3.81(s, 3H), 4.04(s,
3H), 6.97(s, 1H),7.27(s, 1H), 8.14(brs, 1H), 8.61
(s, 1H), 10.80(brs, 1H).

【００８２】（３） Ｏ_２ＮＩｍＩｍＰｙＬＣＯＮＨＣ
Ｈ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＭｅ_２（化合物（１０））の製造 化合物（９）（１００ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）の無水
メタノール（３ｍｌ）溶液中に１０％パラジウム−炭素
（５０ｍｇ）を加えた後、反応混合物を水素圧下、室温
で４時間攪拌した。反応溶液をセライト（ＭｅＯＨ）に
て濾過した後、溶媒を留去して黄色粗結晶（６５．３ｍ
ｇ）を得た。さらなる精製に付すことなく直ちにこのも
のを次の反応に用いた。粗結晶の無水塩化メチレン（２
ｍｌ）溶液中に、エチルジイソプロピルアミン（０．１
ｍｌ、０．５７ｍｍｏｌ）と、別途合成したＯ_２ＮＩｍ
ＣＯＣＣｌ_３（７２．２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を順
次０℃下で加えた後、反応混合物を室温下で１５時間攪
拌した。反応溶液の溶媒を留去して得た残留物中に、蒸
留水（１０ｍｌ）を加えて生じる黄色沈殿物を桐山ロー
トを用いて濾取した。蒸留水（１０ｍｌ）、ジエチルエ
ーテル（２ｍｌ）にて順次洗浄し、減圧下乾燥すること
によって化合物（１０）（５８．２ｍｇ、４４％ for
２ steps）を得た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 1.61(t, J=7.0Hz, 2H), 2.15(s, 6H), 2.25(t, J=7.0H
z, 2H),3.19(q, J=7.0Hz, 2H), 3.80(s, 3H), 4.04(s,
3H),4.06(s, 3H), 6.91(s, 1H), 7.23(s, 1H), 7.58(s,
1H),8.13(brs, 1H), 8.65(s, 1H), 10.29(s, 1H).

【００８３】（４） ＡｃＨＮＩｍＩｍＰｙＬＣＯＮＨ
ＣＨ_２ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＭｅ_２（化合物（１１））の製造 化合物（１０）（４８．２ｍｇ、９６．４μｍｏｌ）の
無水メタノール−酢酸エチル（２：１、６ｍｌ）混合溶
液中に１０％パラジウム−炭素（４０ｍｇ）を加えた
後、水素化ホウ素ナトリウム（８ｍｇ、０．２１ｍｍｏ
ｌ）の蒸留水（０．４ｍｌ）溶液を０℃下で滴下し、反
応混合物を室温下で２０分攪拌した。反応溶液をセライ
ト（ＭｅＯＨ）にて濾過した後、溶媒を留去して黄色粗
結晶（３８ｍｇ）を得た。さらなる精製に付すことなく
直ちにこのものを次の反応に用いた。粗結晶にエチルジ
イソプロピルアミン（０．１ｍｌ、０．５７ｍｍｏｌ）
と無水酢酸（０．１ｍｌ、１．０５ｍｍｏｌ）を加えた
後、反応混合物を室温下で４時間攪拌した。反応溶液の
溶媒を留去して得た残留物中に、クロロホルム（１ｍ
ｌ）を加えて生じる不溶物を濾過により除いた。溶媒を
留去して得た粗結晶にジエチルエーテル（２ｍｌ）を加
えて洗浄し、減圧下乾燥することによって標記の化合物
（１１）（２３．２ｍｇ、４７％ for ２ steps）を得
た。^１ H NMR(DMSO-d_６) δ 1.61(m, 2H), 2.04(s, 3H), 2.14(s, 6H), 2.25(m, 2
H),3.19(m, 2H), 3.81(s, 3H), 3.98(s, 3H), 4.00(s,
3H),6.92(s, 1H), 7.23(s, 1H), 7.51(s, 1H), 7.56(s,
1H),8.12(brs, 1H), 9.34(s, 1H), 10.27(s, 1H), 10.
30(s, 1H).

【００８４】実施例６ ポリアクリルアミドゲル電気泳
動を用いた解析 全量１０μｌのカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）５ｍＭ中に５’末端がテキサスレッドでラベルされ
たＤＮＡフラグメント３μＭとその相補的ＤＮＡオリゴ
マー６μＭ、ＤＭＦ２０％（ｖ／ｖ）と先に表記した濃
度の薬剤を含む標準反応溶液を微量遠心分離管（Eppend
orf）に入れて３７℃下で一晩静置した。Milli-Ｑ精製
した蒸留水１１０μｌを加えて希釈した後、そこから１
μｌを取り出した。その溶液（１μｌ）から遠心減圧下
得られたＤＮＡをローディング色素（フューシンレッド
のＤＭＦ溶液）８μｌに溶解させた。その２μｌについ
て、HITACHI 5500-S DNA sequencer systemを用いた１
５％ディネーチャーポリアクリルアミドゲルでの電気泳
動を行った。

【００８５】実施例７ インターストランドクロスリン
ク体の構造確認試験 全量１０μｌのカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）５ｍＭ中に５’末端がテキサスレッドでラベルされ
たＤＮＡフラグメント３μＭとその相補的ＤＮＡオリゴ
マー６μＭ、ＤＭＦ２０％（ｖ／ｖ）と先に表記した濃
度の薬剤を含む標準反応溶液を微量遠心分離管（Eppend
orf）に入れて３７℃下で一晩静置した。 反応溶液よ
り１μｌ取り出し、そこにMilli-Ｑを１１μｌ加えて希
釈した。その希釈溶液から１μｌ取り出しレーン２、レ
ーン７に用いた。希釈溶液（１１μｌ）を９０℃で２０
分間振動した後、ピペリジン（１μｌ）を加えさらに９
０℃で２０分間振動した。その溶液を遠心減圧後、さら
に一晩凍結乾燥を行った。そこに５０ｍＭカコジル酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１μｌとMilli-Ｑを１０
μｌ加えて希釈した。その希釈溶液から１μｌ取り出し
レーン３、レーン８に用いた。溶液（１０μｌ）中にＡ
ｐ（１μｌ）を加え３７℃で２時間振動した後、１．１
μｌ取り出しレーン４、レーン９に用いた。それぞれ取
り出した反応溶液から遠心減圧下得られたＤＮＡをロー
ディング色素（フューシンレッドのＤＭＦ溶液）８μｌ
に溶解させ、その２μｌについて、HITACHI 5500-S DNA
sequencer systemを用いた１５％ディネーチャーポリ
アクリルアミドゲルでの電気泳動を行った。

【００８６】実施例８ インターストランドクロスリン
ク体の塩基配列特異性試験 全量１０μｌのカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）５ｍＭ中に５’末端がテキサスレッドでラベルされ
たＤＮＡフラグメント３μＭと各種ＤＮＡオリゴマー６
μＭ、ＤＭＦ２０％（ｖ／ｖ）と先に表記した濃度の薬
剤を含む標準反応溶液を微量遠心分離管（Eppendorf）
に入れて３７℃下で一晩静置した。Milli-Ｑ精製した蒸
留水１１０μｌを加えて希釈した後、そこから１μｌを
取り出した。その溶液（１μｌ）から遠心減圧下得られ
たＤＮＡをローディング色素（フューシンレッドのＤＭ
Ｆ溶液）８μｌに溶解させた。その２μｌについて、HI
TACHI 5500-S DNA sequencer systemを用いた１５％デ
ィネーチャーポリアクリルアミドゲルでの電気泳動を行
った。

【００８７】実施例９ インターストランドクロスリン
ク反応の最適条件試験 全量１０μｌのカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）５ｍＭ中に各種の５’末端がテキサスレッドでラベ
ルされたＤＮＡフラグメント３μＭとそれぞれに対応し
た相補的ＤＮＡオリゴマー６μＭ、ＤＭＦ２０％（ｖ／
ｖ）と先に表記した濃度の薬剤を含む標準反応溶液を微
量遠心分離管（Eppendorf）に入れて３７℃下で一晩静
置した。Milli-Ｑ精製した蒸留水１１０μｌを加えて希
釈した後、そこから１μｌを取り出した。その溶液（１
μｌ）から遠心減圧下得られたＤＮＡをローディング色
素（フューシンレッドのＤＭＦ溶液）８μｌに溶解させ
た。その２μｌについて、HITACHI 5500-S DNA sequenc
er systemを用いた１５％ディネーチャーポリアクリル
アミドゲルでの電気泳動を行った。

【００８８】実施例１０ 試薬濃度と等量比の反応条件
試験 全量１０μｌのカコジル酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
０）５ｍＭ中に５’末端がテキサスレッドでラベルされ
たＤＮＡフラグメント（ＴＸＲ−１８）３μＭと相補的
ＤＮＡオリゴマー（ＯＤＮ−１５）６μＭ、ＤＭＦ２０
％（ｖ／ｖ）と表記した濃度の薬剤を含む標準反応溶液
を微量遠心分離管（Eppendorf）に入れて３７℃下で一
晩静置した。 ［７ａ（μＭ）、ＩｍＩｍＰｙ（μＭ）；５０、１００
（レーン１）；２５、５０（レーン２）；１２、２５
（レーン３）；６、１２（レーン４）；３、６（レーン
５）；２５、１００（レーン６）；２５、５０（レーン
７）；２５、２５（レーン８）；２５、１２（レーン
９）、２５、６（レーン１０）］ Milli-Ｑ精製した蒸留水１１０μｌを加えて希釈した
後、そこから１μｌを取り出した。その溶液（１μｌ）
から遠心減圧下得られたＤＮＡをローディング色素（フ
ューシンレッドのＤＭＦ溶液）８μｌに溶解させた。そ
の２μｌについて、HITACHI 5500-S DNA sequencer sys
temを用いた１５％ディネーチャーポリアクリルアミド
ゲルでの電気泳動を行った。結果を図６に示す。図６の
各レーンにおける７ａ（μＭ）とＩｍＩｍＰｙ（μＭ）
の濃度は前記したとおりである。また、クロスリンキン
グ収率を図７に示す。図７の左側は、ＩｍＩｍＰｙと７
ａが２：１の場合の試料の等量を示し、図７の右側は７
ａが２５μＭの場合のＩｍＩｍＰｙの等量を示してい
る。

【００８９】

【発明の効果】本発明は、ＤＮＡ上に存在する特定の塩
基配列に対して選択的にインターストランドクロスリン
クすることを可能とする試薬である。このことはヒトゲ
ノム上での重要な遺伝子配列、あるいは遺伝子異常に対
する有用なドラッグとして、はじめての遺伝子レベルで
の創薬を実現する可能性を秘めている。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明の化合物のインターストランド
クロスリンクをポリアクリルアミドゲル電気泳動を用い
て解析した実験結果を示す、図面に代わる写真である。

【図２】図２は、２組のＤＮＡ対を用いて、本発明の化
合物のインターストランドクロスリンク反応を解析した
実験結果を示す、図面に代わる写真である。

【図３】図３は、本発明の化合物（７ａ）とＩｍＩｍＰ
ｙを用いて形成されたインターストランドクロスリンク
体の化学構造を示すものである。

【図４】図４は、種々のトリアミドを併用して本発明の
化合物のインターストランドクロスリンク反応を解析し
た実験結果を示す、図面に代わる写真である。

【図５】図５は、種々の長さのＤＮＡを用いて本発明の
化合物のインターストランドクロスリンク反応を解析し
た実験結果を示す、図面に代わる写真である。

【図６】図６は、本発明の化合物（７ａ）及びＩｍＩｍ
Ｐｙの種々の濃度におけるクロスリンキング反応の結果
を示す、図面に代わる写真である。

【図７】図７は、本発明の化合物（７ａ）及びＩｍＩｍ
Ｐｙを用いた場合の種々の条件下におけるクロスリンキ
ング収率をグラフ化したものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｅ // Ｃ０７Ｍ 7:00 ＺＮＡＡ (72)発明者 飯田 博一 東京都文京区小石川５−31−５ ビラしん び303 (72)発明者 齋藤 烈 京都府京都市山科区勧修寺柴山１−21 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 CA01 HA11 4C050 AA01 AA08 BB04 CC04 EE02 FF02 FF03 GG03 HH04 4C072 MM01 UU01 4C086 AA01 AA02 AA03 CB03 MA01 MA02 MA03 MA04 MA05 NA14 ZB21 ZB26

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（Ｉ） Ａ−Ｌ−Ｂ−Ｘ−Ｂ−Ｌ−Ａ （Ｉ） （式中、各々のＢはＤＮＡの塩基配列を認識できる化学
   構造を示し、各々のＡはＤＮＡの塩基の一種に結合し得
   る化学構造を示し、ＬはＡ及びＢの化学構造を結合させ
   得るリンカーを示し、ＸはＡ−Ｌ−Ｂコンポーネントを
   結合させるスペーサーを示す。）で表されるＤＮＡの２
   本鎖をインターストランドクロスリンクすることができ
   る化合物。
2. 【請求項２】 ＤＮＡの塩基配列を認識できる化学構造
   が、置換基を有してもよいピロール及び／又はイミダゾ
   ールから誘導される化学構造である請求項１に記載の化
   合物。
3. 【請求項３】 ＤＮＡの塩基の一種に結合し得る化学構
   造が、シクロプロパン環を有する化学構造である請求項
   １又は２に記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ａ及びＢの化学構造を結合させ得るリン
   カーＬが、ビニル基を含有する化学構造である請求項１
   〜３のいずれかに記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ａ−Ｌ−Ｂコンポーネントを結合させる
   スペーサーＸが、カルボニル基又は有機ジカルボン酸か
   ら誘導されるアシル基である請求項１〜４のいずれかに
   記載の化合物。
6. 【請求項６】 有機ジカルボン酸が、脂肪族飽和若しく
   は不飽和ジカルボン酸又は芳香族ジカルボン酸である請
   求項５に記載の化合物。
7. 【請求項７】 一般式（Ｉ）で表される化合物のＡ−Ｌ
   −Ｂ−コンポーネントが次式（II） 【化１】 又は次式（III） 【化２】 で表される化合物である請求項１〜６のいずれかに記載
   の化合物。
8. 【請求項８】 一般式（Ｉ）で表される化合物が、次式
   （IV） 【化３】 （式中、Ｘは、−ＣＯ−基、−ＣＯ−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＯ
   −基、−ＣＯ−（ＣＨ_２）_４−ＣＯ−基、又は、−ＣＯ
   −（ｐ−Ｃ_６Ｈ_４）−ＣＯ−基で表される基を示す。）
   で表される化合物である請求項７に記載の化合物。
9. 【請求項９】 請求項１〜８のいずれかに記載の化合物
   を用いて、２本鎖ＤＮＡの特定の塩基配列部分をインタ
   ーストランドクロスリンクする方法。
10. 【請求項１０】 ２本鎖ＤＮＡのインターストランドク
    ロスリンクを、さらにＤＮＡの塩基配列を認識できる化
    学構造を有する物質の存在下に行う請求項９に記載の方
    法。
11. 【請求項１１】 ＤＮＡの塩基配列を認識できる化学構
    造を有する物質が、ＩｍＩｍＰｙで表される物質である
    請求項１０に記載の方法。
12. 【請求項１２】 特定の塩基配列が、ＴＧＧＣ若しくは
    ＧＣＣＡ又はそれらの相補鎖である請求項９〜１１のい
    ずれかに記載の方法。
13. 【請求項１３】 請求項１〜８のいずれかに記載の化合
    物からなる、２本鎖ＤＮＡのインターストランドクロス
    リンク剤。
14. 【請求項１４】 請求項１〜８のいずれかに記載の化合
    物及び製薬上許容される担体からなる医薬組成物。
15. 【請求項１５】 癌の治療薬である請求項１２に記載の
    医薬組成物。