JP2001309786A - 大豆の検出方法 - Google Patents
大豆の検出方法Info
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- JP2001309786A JP2001309786A JP2000133281A JP2000133281A JP2001309786A JP 2001309786 A JP2001309786 A JP 2001309786A JP 2000133281 A JP2000133281 A JP 2000133281A JP 2000133281 A JP2000133281 A JP 2000133281A JP 2001309786 A JP2001309786 A JP 2001309786A
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- detecting
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 大豆の検出方法を提供する。
【解決手段】 試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を
行い、大豆特有の多コピーＤＮＡ配列を検出する大豆Ｄ
ＮＡの検出方法、試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅
を行い、増幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有
無を指標として、大豆ＤＮＡを検出する大豆ＤＮＡの検
出方法、電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳
動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利用する
前記の大豆ＤＮＡの識別方法、試料からＤＮＡを抽出
し、ＤＮＡ増幅を行い、増幅された大豆特有の多コピー
ＤＮＡ配列の有無を指標として、大豆の混入を検査する
大豆の混入の検査方法、電気泳動により解析をしたとき
にラダー状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ
産物を利用する大豆の混入の検査方法。
行い、大豆特有の多コピーＤＮＡ配列を検出する大豆Ｄ
ＮＡの検出方法、試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅
を行い、増幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有
無を指標として、大豆ＤＮＡを検出する大豆ＤＮＡの検
出方法、電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳
動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利用する
前記の大豆ＤＮＡの識別方法、試料からＤＮＡを抽出
し、ＤＮＡ増幅を行い、増幅された大豆特有の多コピー
ＤＮＡ配列の有無を指標として、大豆の混入を検査する
大豆の混入の検査方法、電気泳動により解析をしたとき
にラダー状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ
産物を利用する大豆の混入の検査方法。
Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、大豆検出系に関す
るものであり、さらに詳しくは、食品の原料ないし製品
中に微量に混入している大豆を簡便な方法で高感度で検
出することを可能とする新しい大豆検出方法、及びその
ために使用する材料に関するものである。本発明は、大
豆特有の特定の多コピーＤＮＡ配列を選定し、該ＤＮＡ
配列を増幅し、検出することにより、大豆を１ｐｐｍ
（μｇ／ｇ）レベルの高感度で検出することを可能とす
るものであり、新しい大豆検出系として有用である。
るものであり、さらに詳しくは、食品の原料ないし製品
中に微量に混入している大豆を簡便な方法で高感度で検
出することを可能とする新しい大豆検出方法、及びその
ために使用する材料に関するものである。本発明は、大
豆特有の特定の多コピーＤＮＡ配列を選定し、該ＤＮＡ
配列を増幅し、検出することにより、大豆を１ｐｐｍ
（μｇ／ｇ）レベルの高感度で検出することを可能とす
るものであり、新しい大豆検出系として有用である。
【０００２】
【従来の技術】従来、ＰＣＲにより大豆を検出すること
が行われており、例えば、食肉製品中に増量剤・品質改
良剤として添加されている大豆を検出する方法として、
大豆特有のレクチン遺伝子の一部をＰＣＲで増幅し、検
出する方法が提案されている。しかし、検出感度は、生
肉中で０．０１％（１００ｐｐｍ）、加熱肉製品中で
１．４％であり、しかも、あまり簡便な方法ではない。
が行われており、例えば、食肉製品中に増量剤・品質改
良剤として添加されている大豆を検出する方法として、
大豆特有のレクチン遺伝子の一部をＰＣＲで増幅し、検
出する方法が提案されている。しかし、検出感度は、生
肉中で０．０１％（１００ｐｐｍ）、加熱肉製品中で
１．４％であり、しかも、あまり簡便な方法ではない。
【０００３】大豆は、食品原料として広く利用されてい
るが、一方、アレルギー原因食品としても知られてい
る。大豆アレルギーは、三大アレルギーの一つであり、
患者数も多い。しかしながら、患者にとって、摂取して
安全な大豆量（混入量）は明らかになっておらず、たと
え微量であっても摂取を避ける必要がある。したがっ
て、食品原料ないし製品の提供者としては、それらに大
豆が混まれているか否かの品質管理を行うこと、また、
大豆が含まれている場合には、消費者に対して表示など
による情報提供を行ない、患者が知らずに摂取してアレ
ルギー反応を起こすことを防止することが重要であり、
そのために、高感度の分析方法を確立することが重要課
題となる。
るが、一方、アレルギー原因食品としても知られてい
る。大豆アレルギーは、三大アレルギーの一つであり、
患者数も多い。しかしながら、患者にとって、摂取して
安全な大豆量（混入量）は明らかになっておらず、たと
え微量であっても摂取を避ける必要がある。したがっ
て、食品原料ないし製品の提供者としては、それらに大
豆が混まれているか否かの品質管理を行うこと、また、
大豆が含まれている場合には、消費者に対して表示など
による情報提供を行ない、患者が知らずに摂取してアレ
ルギー反応を起こすことを防止することが重要であり、
そのために、高感度の分析方法を確立することが重要課
題となる。
【０００４】大豆の検出方法として、例えば、１０００
ｐｐｍの大豆を検出できる、抗原−抗体キットによる大
豆蛋白質検出法が報告されており、また、生肉中の１０
０ｐｐｍ（加熱肉製品中の１．４％）の大豆を検出でき
るＰＣＲ法が報告されている。しかし、食品の原料や製
品に微量に混入した大豆を高感度で検出するには、さら
に分析精度の高い検出方法を確立することが望まれる。
食品の原料や製品に大豆が混入する場合として、例え
ば、食品製品では、増量剤・品質改良剤として大豆が混
入されるケース（意図する混入）があるが、それ以外
に、例えば、原料のとうもろこしなどでは、大豆畑と隣
接する畑で栽培されることが多く、収穫、流通、加工設
備を大豆と共有することにより、大豆が混入するケース
（意図しない混入）があるとされている。したがって、
特に、大豆の意図しない微量な混入を知るには、できる
だけ高感度、例えば、１ｐｐｍレベルの検出が可能な新
しい大豆検出系を開発する必要がある。
ｐｐｍの大豆を検出できる、抗原−抗体キットによる大
豆蛋白質検出法が報告されており、また、生肉中の１０
０ｐｐｍ（加熱肉製品中の１．４％）の大豆を検出でき
るＰＣＲ法が報告されている。しかし、食品の原料や製
品に微量に混入した大豆を高感度で検出するには、さら
に分析精度の高い検出方法を確立することが望まれる。
食品の原料や製品に大豆が混入する場合として、例え
ば、食品製品では、増量剤・品質改良剤として大豆が混
入されるケース（意図する混入）があるが、それ以外
に、例えば、原料のとうもろこしなどでは、大豆畑と隣
接する畑で栽培されることが多く、収穫、流通、加工設
備を大豆と共有することにより、大豆が混入するケース
（意図しない混入）があるとされている。したがって、
特に、大豆の意図しない微量な混入を知るには、できる
だけ高感度、例えば、１ｐｐｍレベルの検出が可能な新
しい大豆検出系を開発する必要がある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】このような状況の中
で、本発明者らは、これまで、患者にとって、摂取して
安全な大豆量（混入量）が報告されていないこと、ま
た、意図して大豆を混ぜている食肉製品の場合と違い、
意図せずにとうもろこし等に混入している大豆は極く微
量であると考えられることから、微量の大豆を高感度で
検出できる新しい大豆検出系を確立することを目標とし
て鋭意研究を重ねた結果、大豆に特異的な多コピー・縦
列繰り返しＤＮＡ配列のＳＢ９２配列を利用した大豆検
出系が所期の目標を達成するのに有効であるとの知見を
得て、かかる知見に基づいて、本発明を完成するに至っ
た。本発明は、食品原料としてのとうもろこし等に微量
に付着・混入している大豆を高感度で検出することが可
能な新しい大豆検出系を提供することを目的とするもの
である。また、本発明は、食品に微量に混入している大
豆を１ｐｐｍレベルで検出することができる高感度大豆
検出方法を提供することを目的とするものである。さら
に、本発明は、製品中の大豆混入量を１ｐｐｍレベルで
検査し、製品中に大豆が含まれているか否かについての
情報を消費者に的確に提供することを可能とする新しい
大豆検出方法を提供するものである。
で、本発明者らは、これまで、患者にとって、摂取して
安全な大豆量（混入量）が報告されていないこと、ま
た、意図して大豆を混ぜている食肉製品の場合と違い、
意図せずにとうもろこし等に混入している大豆は極く微
量であると考えられることから、微量の大豆を高感度で
検出できる新しい大豆検出系を確立することを目標とし
て鋭意研究を重ねた結果、大豆に特異的な多コピー・縦
列繰り返しＤＮＡ配列のＳＢ９２配列を利用した大豆検
出系が所期の目標を達成するのに有効であるとの知見を
得て、かかる知見に基づいて、本発明を完成するに至っ
た。本発明は、食品原料としてのとうもろこし等に微量
に付着・混入している大豆を高感度で検出することが可
能な新しい大豆検出系を提供することを目的とするもの
である。また、本発明は、食品に微量に混入している大
豆を１ｐｐｍレベルで検出することができる高感度大豆
検出方法を提供することを目的とするものである。さら
に、本発明は、製品中の大豆混入量を１ｐｐｍレベルで
検査し、製品中に大豆が含まれているか否かについての
情報を消費者に的確に提供することを可能とする新しい
大豆検出方法を提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
の本発明は、以下の手段からなる。 （Ａ）大豆特有の多コピーＤＮＡ配列との相同性が高
く、該ＤＮＡ配列以外のＤＮＡ配列との相同性が低いプ
ライマー。 （Ｂ）上記多コピーＤＮＡ配列が、大豆ＳＢ９２配列で
ある前記（Ａ）記載のプライマー。 （Ｃ）ＰＣＲ増幅により、電気泳動により解析をしたと
きにラダー状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣ
Ｒ産物を生成するプライマー。 （Ｄ）ＰＣＲ増幅により、電気泳動により解析をしたと
きにラダー状の泳動図を形成する大豆ＳＢ９２配列由来
のＰＣＲ産物を生成するプライマー。 （Ｅ）次の（１）〜（９）の中から選択される塩基配列
を有するセンスストランドプライマーと、次の（１０）
〜（３２）の中から選択される塩基配列を有するアンチ
センスストランドプライマーとを組合せてなる前記
（Ａ）〜（Ｄ）のいずれか１項に記載のプライマー。 （１）５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （２）５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （３）５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （４）５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （５）５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （６）５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （７）５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧ−３′ （８）５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧ−３′ （９）５′−ＡＡＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧ−３′ （10）５′−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （11）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （12）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （13）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （14）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （15）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （16）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （17）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （18）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （19）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （20）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （21）５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （22）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴ−３′ （23）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （24）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （25）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （26）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （27）５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （28）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＴＡＡＡＡＧ−３′ （29）５′−ＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （30）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＴＡ−３′ （31）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （32）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （Ｆ）試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を行い、大
豆特有の多コピーＤＮＡ配列を検出する大豆ＤＮＡの検
出方法。 （Ｇ）試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を行い、増
幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有無を指標と
して、大豆ＤＮＡを検出する大豆ＤＮＡの検出方法。 （Ｈ）電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳動
図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利用する大
豆ＤＮＡの識別方法。 （Ｉ）試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を行い、増
幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有無を指標と
して、大豆の混入を検査する大豆の混入の検査方法。 （Ｊ）電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳動
図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利用する前
記（Ｉ）記載の大豆の混入の検査方法。
の本発明は、以下の手段からなる。 （Ａ）大豆特有の多コピーＤＮＡ配列との相同性が高
く、該ＤＮＡ配列以外のＤＮＡ配列との相同性が低いプ
ライマー。 （Ｂ）上記多コピーＤＮＡ配列が、大豆ＳＢ９２配列で
ある前記（Ａ）記載のプライマー。 （Ｃ）ＰＣＲ増幅により、電気泳動により解析をしたと
きにラダー状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣ
Ｒ産物を生成するプライマー。 （Ｄ）ＰＣＲ増幅により、電気泳動により解析をしたと
きにラダー状の泳動図を形成する大豆ＳＢ９２配列由来
のＰＣＲ産物を生成するプライマー。 （Ｅ）次の（１）〜（９）の中から選択される塩基配列
を有するセンスストランドプライマーと、次の（１０）
〜（３２）の中から選択される塩基配列を有するアンチ
センスストランドプライマーとを組合せてなる前記
（Ａ）〜（Ｄ）のいずれか１項に記載のプライマー。 （１）５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （２）５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （３）５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （４）５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （５）５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （６）５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （７）５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧ−３′ （８）５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧ−３′ （９）５′−ＡＡＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧ−３′ （10）５′−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （11）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （12）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （13）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （14）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （15）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （16）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （17）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （18）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （19）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （20）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （21）５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （22）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴ−３′ （23）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （24）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （25）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （26）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （27）５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （28）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＴＡＡＡＡＧ−３′ （29）５′−ＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （30）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＴＡ−３′ （31）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （32）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （Ｆ）試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を行い、大
豆特有の多コピーＤＮＡ配列を検出する大豆ＤＮＡの検
出方法。 （Ｇ）試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を行い、増
幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有無を指標と
して、大豆ＤＮＡを検出する大豆ＤＮＡの検出方法。 （Ｈ）電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳動
図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利用する大
豆ＤＮＡの識別方法。 （Ｉ）試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を行い、増
幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有無を指標と
して、大豆の混入を検査する大豆の混入の検査方法。 （Ｊ）電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳動
図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利用する前
記（Ｉ）記載の大豆の混入の検査方法。
【０００７】
【発明の実施の形態】次に、本発明についてさらに詳細
に説明する。本発明では、大豆検出用のプライマーを設
計するために、検出感度向上化の観点から、大豆に特異
的な多コピーＤＮＡ配列を検索した。そして、ａ）コピ
ー数が他に比べて多いこと、ｂ）縦列に繰り返し単位が
並んでいる配列であることから、特にＳＢ９２配列を選
定し、ＰＣＲ増幅により、ＳＢ９２配列由来のＰＣＲ産
物を増幅するプライマーを設計し、種々の実験を試み
て、その特異性について検討した（以下、上記プライマ
ーを用いたＰＣＲをＳＢ９２ ＰＣＲという。）。本発
明者は、各品種の大豆から抽出したＤＮＡをＳＢ９２
ＰＣＲに供して検討したところ、大豆全てから電気泳動
で解析をしたときにラダー状の泳動図を形成する特徴的
なＰＣＲ産物が得られることがわかった。さらに、上記
ＰＣＲ産物の塩基配列を解析した結果、大豆ＳＢ９２配
列由来であることが確認できた。
に説明する。本発明では、大豆検出用のプライマーを設
計するために、検出感度向上化の観点から、大豆に特異
的な多コピーＤＮＡ配列を検索した。そして、ａ）コピ
ー数が他に比べて多いこと、ｂ）縦列に繰り返し単位が
並んでいる配列であることから、特にＳＢ９２配列を選
定し、ＰＣＲ増幅により、ＳＢ９２配列由来のＰＣＲ産
物を増幅するプライマーを設計し、種々の実験を試み
て、その特異性について検討した（以下、上記プライマ
ーを用いたＰＣＲをＳＢ９２ ＰＣＲという。）。本発
明者は、各品種の大豆から抽出したＤＮＡをＳＢ９２
ＰＣＲに供して検討したところ、大豆全てから電気泳動
で解析をしたときにラダー状の泳動図を形成する特徴的
なＰＣＲ産物が得られることがわかった。さらに、上記
ＰＣＲ産物の塩基配列を解析した結果、大豆ＳＢ９２配
列由来であることが確認できた。
【０００８】一方、各品種のとうもろこしから抽出した
ＤＮＡをＳＢ９２ ＰＣＲに供して、とうもろこしから
上記ＰＣＲ産物が得られるか否かを確認した結果、とう
もろこしからは、上記ＰＣＲ産物は得られないことが確
認できた。
ＤＮＡをＳＢ９２ ＰＣＲに供して、とうもろこしから
上記ＰＣＲ産物が得られるか否かを確認した結果、とう
もろこしからは、上記ＰＣＲ産物は得られないことが確
認できた。
【０００９】本発明は、大豆特有の多コピーかつ縦列の
繰り返しＤＮＡ配列を選定し、該ＤＮＡ配列を増幅し、
該ＤＮＡ配列を検出して大豆の混入を検査することを特
徴としている。本発明では、上記多コピーＤＮＡ配列と
して、ＳＢ９２配列由来のＰＣＲ産物を増幅するプライ
マーを設計した。大豆のＳＢ９２配列は既に公知であ
る、しかし、該ＤＮＡ配列の中の、約９０ｂｐの繰り返
し単位を大豆の検出に使用すること、それにより、解析
作業がきわめて容易になること、検出感度が向上するこ
と、は全く知られていない。具体的には、該ＤＮＡ配列
を増幅するためのプライマーのうち、センスストランド
プライマーとして、次の９種の塩基配列を有するプライ
マーを設計した。 ５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （配列番号１） ５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （配列番号２） ５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （配列番号３） ５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （配列番号４） ５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （配列番号５） ５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （配列番号６） ５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧ−３′ （配列番号７） ５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧ−３′ （配列番号８） ５′−ＡＡＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧ−３′ （配列番号９） また、アンチセンスストランドプライマーとして、次の
２３種の塩基配列を有するプライマーを設計した。 ５′−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （配列番号10） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号11） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号12） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号13） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号14） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号15） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （配列番号16） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号17） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号18） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号19） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号20） ５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号21） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴ−３′ （配列番号22） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （配列番号23） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （配列番号24） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （配列番号25） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （配列番号26） ５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （配列番号27） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＴＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号28） ５′−ＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号29） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＴＡ−３′ （配列番号30） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号31） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号32） を設計した。
繰り返しＤＮＡ配列を選定し、該ＤＮＡ配列を増幅し、
該ＤＮＡ配列を検出して大豆の混入を検査することを特
徴としている。本発明では、上記多コピーＤＮＡ配列と
して、ＳＢ９２配列由来のＰＣＲ産物を増幅するプライ
マーを設計した。大豆のＳＢ９２配列は既に公知であ
る、しかし、該ＤＮＡ配列の中の、約９０ｂｐの繰り返
し単位を大豆の検出に使用すること、それにより、解析
作業がきわめて容易になること、検出感度が向上するこ
と、は全く知られていない。具体的には、該ＤＮＡ配列
を増幅するためのプライマーのうち、センスストランド
プライマーとして、次の９種の塩基配列を有するプライ
マーを設計した。 ５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （配列番号１） ５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （配列番号２） ５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （配列番号３） ５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （配列番号４） ５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （配列番号５） ５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （配列番号６） ５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧ−３′ （配列番号７） ５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧ−３′ （配列番号８） ５′−ＡＡＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧ−３′ （配列番号９） また、アンチセンスストランドプライマーとして、次の
２３種の塩基配列を有するプライマーを設計した。 ５′−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （配列番号10） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号11） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号12） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号13） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号14） ５′−ＴＡＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号15） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （配列番号16） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号17） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号18） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号19） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （配列番号20） ５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （配列番号21） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴ−３′ （配列番号22） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （配列番号23） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （配列番号24） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （配列番号25） ５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （配列番号26） ５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （配列番号27） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＴＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号28） ５′−ＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号29） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＴＡ−３′ （配列番号30） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号31） ５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （配列番号32） を設計した。
【００１０】通常、ＰＣＲ法に用いるプライマーは、１
５塩基以上であると、所望の特異性が得られる。従っ
て、本発明のプライマーも１５塩基以上であることが望
ましく、上記配列のうち、少なくとも連続した１５塩基
を有するプライマーも本発明のプライマーに包含され
る。
５塩基以上であると、所望の特異性が得られる。従っ
て、本発明のプライマーも１５塩基以上であることが望
ましく、上記配列のうち、少なくとも連続した１５塩基
を有するプライマーも本発明のプライマーに包含され
る。
【００１１】本発明において、上記プライマーによるＤ
ＮＡ配列の増幅、及び該ＤＮＡ配列の検出は、ＰＣＲ／
電気泳動、又はそれらと同効の手段を用いて、適宜、行
えばよい。例えば、とうもろこし等から公知の方法で抽
出したＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、増幅したＰＣ
Ｒ産物を電気泳動によって検出すればよい。本発明は、
大豆特異的な多コピー・縦列繰り返しＤＮＡ配列を特定
のプライマーで増幅し、そのＰＣＲ産物を解析すること
により、大豆ＤＮＡを高感度で検出することを可能と
し、例えば、食品原料としてのとうもろこし中の大豆１
ｐｐｍを検出できる特徴を有する。また、ＰＣＲ増幅産
物は、約９０ｂｐの繰り返し単位からなり、電気泳動で
解析をしたときに特徴的なラダー状の泳動図を形成する
ことから、増幅産物が縦列の繰り返し多コピーＤＮＡ配
列に由来するものであることを目視により確認すること
が可能であり、煩雑な配列確認作業を要することなく、
簡便かつ確実に多コピーＤＮＡ配列の存否を判定できる
特徴を有する。
ＮＡ配列の増幅、及び該ＤＮＡ配列の検出は、ＰＣＲ／
電気泳動、又はそれらと同効の手段を用いて、適宜、行
えばよい。例えば、とうもろこし等から公知の方法で抽
出したＤＮＡを鋳型としてＰＣＲを行い、増幅したＰＣ
Ｒ産物を電気泳動によって検出すればよい。本発明は、
大豆特異的な多コピー・縦列繰り返しＤＮＡ配列を特定
のプライマーで増幅し、そのＰＣＲ産物を解析すること
により、大豆ＤＮＡを高感度で検出することを可能と
し、例えば、食品原料としてのとうもろこし中の大豆１
ｐｐｍを検出できる特徴を有する。また、ＰＣＲ増幅産
物は、約９０ｂｐの繰り返し単位からなり、電気泳動で
解析をしたときに特徴的なラダー状の泳動図を形成する
ことから、増幅産物が縦列の繰り返し多コピーＤＮＡ配
列に由来するものであることを目視により確認すること
が可能であり、煩雑な配列確認作業を要することなく、
簡便かつ確実に多コピーＤＮＡ配列の存否を判定できる
特徴を有する。
【００１２】本発明は、以下の特徴を有する。 １）大豆特有の多コピーＤＮＡ配列（ＳＢ９２配列）を
増幅することにより、とうもろこし等に混入する可能性
のある大豆を高感度（１ｐｐｍ（μｇ／ｇ））で検出す
ることができる。 ２）電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳動図
を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を得ることによ
り、増幅産物を特定するための解析作業を簡便かつ確実
に行うことができる。なお、本発明において、「多コピ
ーＤＮＡ配列」とは、大豆ゲノム中に複数存在する実質
的に同一のＤＮＡ配列のことをいい、また、「ラダー状
の電気泳動図を形成する」とは、ＰＣＲ産物を電気泳動
で解析したときに、電気泳動図中にほぼ一定の長さ（ｂ
ｐ）毎に繰り返しはしご状のバンドが検出されることを
いう。
増幅することにより、とうもろこし等に混入する可能性
のある大豆を高感度（１ｐｐｍ（μｇ／ｇ））で検出す
ることができる。 ２）電気泳動により解析をしたときにラダー状の泳動図
を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を得ることによ
り、増幅産物を特定するための解析作業を簡便かつ確実
に行うことができる。なお、本発明において、「多コピ
ーＤＮＡ配列」とは、大豆ゲノム中に複数存在する実質
的に同一のＤＮＡ配列のことをいい、また、「ラダー状
の電気泳動図を形成する」とは、ＰＣＲ産物を電気泳動
で解析したときに、電気泳動図中にほぼ一定の長さ（ｂ
ｐ）毎に繰り返しはしご状のバンドが検出されることを
いう。
【００１３】
【実施例】次に、実施例に基づいて本発明を具体的に説
明するが、本発明は以下の実施例により何ら限定される
ものではない。 実施例１ （１）プライマー 大豆ＳＢ９２配列の繰り返し配列一単位（約９０塩基）
の中から、該ＤＮＡ配列に特異的な配列を検索し、この
検索結果を基に、以下の塩基配列を有するオリゴヌクレ
オチドを合成した。 センスプライマー： ５’−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３’ （配列番号：１） アンチセンスプライマー： ５’−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３’ （配列番号：10） （２）大豆 輸入大豆の種子７品種、及びそのうちの１品種より発芽
させた大豆の葉１種、並びに種苗用の種子１品種を用い
た。 （３）とうもろこし 輸入とうもろこしの種子２品種、それらから発芽させた
とうもろこしの葉２種、種苗用のとうもろこしの種子６
品種、国内産の生とうもろこしの種子１品種を用いた。
明するが、本発明は以下の実施例により何ら限定される
ものではない。 実施例１ （１）プライマー 大豆ＳＢ９２配列の繰り返し配列一単位（約９０塩基）
の中から、該ＤＮＡ配列に特異的な配列を検索し、この
検索結果を基に、以下の塩基配列を有するオリゴヌクレ
オチドを合成した。 センスプライマー： ５’−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３’ （配列番号：１） アンチセンスプライマー： ５’−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３’ （配列番号：10） （２）大豆 輸入大豆の種子７品種、及びそのうちの１品種より発芽
させた大豆の葉１種、並びに種苗用の種子１品種を用い
た。 （３）とうもろこし 輸入とうもろこしの種子２品種、それらから発芽させた
とうもろこしの葉２種、種苗用のとうもろこしの種子６
品種、国内産の生とうもろこしの種子１品種を用いた。
【００１４】（４）ＤＮＡ抽出：ＱＩＡＧＥＮ社製ＤＮ
ｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ を用い、同
キット添付のＤＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍｉｎｉ Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋに従って以下の方法で行った。液体窒素
で凍結し、ドライアイス存在下で細かく粉砕した大豆又
はとうもろこし種子、葉を容器に入れ、１ｍｌのｂｕｆ
ｆｅｒ ＡＰ１、１０μｌの１００ｍｇ／ｍｌ ＲＮａ
ｓｅＡを加え、混合した後、６５℃で１５分間保温し
た。その後、該混合物に３２５μｌのｂｕｆｆｅｒ Ａ
Ｐ２ を加え、氷中で１０分間放置した。その後、遠心
分離によりその上清液を得、これをＱＩＡｓｈｒｅｄｄ
ｅｒ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ（１本）に供し、遠心分
離によりＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕ
ｍｎパス液を得た。このパス液に０．５容量のｂｕｆｆ
ｅｒ ＡＰ３、１．１容量のエタノールを加えて混合し
た。この混合液をＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍ
ｎに６５０μｌずつ供し、約６，０００ｘｇで１分間遠
心分離をしてＤＮＡをＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌ
ｕｍｎに吸着させた。その後、ＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ
Ｃｏｌｕｍｎに５００μｌのｂｕｆｆｅｒ ＡＷを加
え、遠心分離によりＤＮｅａｓｙＳｐｉｎ Ｃｏｌｕｍ
ｎを２回洗浄し、最後に空の状態で遠心分離し、同Ｃｏ
ｌｕｍｎに残っているｂｕｆｆｅｒ ＡＷを完全に除去
した。その後、ＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ
に６５℃で予め保温しておいたｂｕｆｆｅｒ ＡＥを１
２５μｌ供し、遠心分離によりＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ
ＣｏｌｕｍｎからＤＮＡを抽出した。
ｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍｉｎｉ Ｋｉｔ を用い、同
キット添付のＤＮｅａｓｙ Ｐｌａｎｔ Ｍｉｎｉ Ｈ
ａｎｄｂｏｏｋに従って以下の方法で行った。液体窒素
で凍結し、ドライアイス存在下で細かく粉砕した大豆又
はとうもろこし種子、葉を容器に入れ、１ｍｌのｂｕｆ
ｆｅｒ ＡＰ１、１０μｌの１００ｍｇ／ｍｌ ＲＮａ
ｓｅＡを加え、混合した後、６５℃で１５分間保温し
た。その後、該混合物に３２５μｌのｂｕｆｆｅｒ Ａ
Ｐ２ を加え、氷中で１０分間放置した。その後、遠心
分離によりその上清液を得、これをＱＩＡｓｈｒｅｄｄ
ｅｒ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ（１本）に供し、遠心分
離によりＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕ
ｍｎパス液を得た。このパス液に０．５容量のｂｕｆｆ
ｅｒ ＡＰ３、１．１容量のエタノールを加えて混合し
た。この混合液をＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍ
ｎに６５０μｌずつ供し、約６，０００ｘｇで１分間遠
心分離をしてＤＮＡをＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌ
ｕｍｎに吸着させた。その後、ＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ
Ｃｏｌｕｍｎに５００μｌのｂｕｆｆｅｒ ＡＷを加
え、遠心分離によりＤＮｅａｓｙＳｐｉｎ Ｃｏｌｕｍ
ｎを２回洗浄し、最後に空の状態で遠心分離し、同Ｃｏ
ｌｕｍｎに残っているｂｕｆｆｅｒ ＡＷを完全に除去
した。その後、ＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ
に６５℃で予め保温しておいたｂｕｆｆｅｒ ＡＥを１
２５μｌ供し、遠心分離によりＤＮｅａｓｙ Ｓｐｉｎ
ＣｏｌｕｍｎからＤＮＡを抽出した。
【００１５】（５）ＰＣＲ ＤＮＡの増幅反応は、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐ
Ｈ８．３）、５０ｍＭＫＣｌ、０．２ｍＭ各ｄＮＴＰ、
０．５μＭプライマー（配列番号：１）、０．５μＭプ
ライマー（配列番号：１０）、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2
、０．６２５Ｕ ＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ（ＰＥ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）、及び５０ｎｇ鋳型ＤＮＡ
を加えた反応溶液２５μｌを０．２ｍｌマイクロチュー
ブに入れ、サーマルサイクラーＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ
Ｓｙｓｔｅｍ ９６００（ＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
社）により、酵素活性化（９５℃，１２分）後、変性
（９６℃，１分）、アニーリング（６４℃，３０秒）、
伸展（７２℃，３分）の反応を前半３０回繰り返し、変
性（９６℃，１分）、アニーリング（６４℃，３０
秒）、伸展（７２℃，４分）の反応を後半１０回繰り返
した。得られたＰＣＲ反応液をエチジウムブロマイド含
有の２％アガロースゲル電気泳動に供して、蛍光イメー
ジアナライザーＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ ５９５（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ
社）により、下記表１に示す条件にて解析した。その結
果を図１〜２に示す。
Ｈ８．３）、５０ｍＭＫＣｌ、０．２ｍＭ各ｄＮＴＰ、
０．５μＭプライマー（配列番号：１）、０．５μＭプ
ライマー（配列番号：１０）、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2
、０．６２５Ｕ ＡｍｐｌｉＴａｑ Ｇｏｌｄ（ＰＥ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）、及び５０ｎｇ鋳型ＤＮＡ
を加えた反応溶液２５μｌを０．２ｍｌマイクロチュー
ブに入れ、サーマルサイクラーＧｅｎｅＡｍｐ ＰＣＲ
Ｓｙｓｔｅｍ ９６００（ＰＥＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ
社）により、酵素活性化（９５℃，１２分）後、変性
（９６℃，１分）、アニーリング（６４℃，３０秒）、
伸展（７２℃，３分）の反応を前半３０回繰り返し、変
性（９６℃，１分）、アニーリング（６４℃，３０
秒）、伸展（７２℃，４分）の反応を後半１０回繰り返
した。得られたＰＣＲ反応液をエチジウムブロマイド含
有の２％アガロースゲル電気泳動に供して、蛍光イメー
ジアナライザーＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ ５９５（Ａｍ
ｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ
社）により、下記表１に示す条件にて解析した。その結
果を図１〜２に示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】図１の種子等は以下に示される。 種子１〜７： 輸入大豆の種子 種子８： 種苗用の大豆の種子 葉： 輸入の大豆から発芽した葉 図２の種子等は以下に示される。 種苗１〜６： 種苗用のとうもろこしの種子 国産生： 国内産のとうもろこしの種子 輸入１、２： 輸入とうもろこしの種子
【００１８】（６）結果 図１に示すように、本発明のプライマーを用いて上記Ｐ
ＣＲを行ない、解析した結果、大豆８品種（うち１種は
葉でも）全てで、標的ＳＢ９２配列から予測される位置
にバンドが検出された。図２に示すように、本発明のプ
ライマーを用いて上記ＰＣＲを行ない、解析した結果、
種苗用のとうもろこしの種子と国内産の生とうもろこし
の種子とについては、バンドは検出されなかった。一
方、輸入とうもろこしの種子２品種については、大豆と
同様の位置にバンドが検出された。そこで、この輸入と
うもろこしの種子２品種と大豆の種子とをそれぞれ超音
波洗浄したものと、上記とうもろこし２品種の種子から
発芽させた葉とについて再度上記ＰＣＲを行ない解析し
た。その結果、図３に示すように大豆の種子については
バンドが検出されたが、超音波洗浄したとうもろこしの
種子２品種とこれらの葉についてはバンドは検出されな
かった。この結果は、上記とうもろこしの種子２品種に
は当初大豆が混入しており、これが超音波洗浄により除
去されたことを示している。
ＣＲを行ない、解析した結果、大豆８品種（うち１種は
葉でも）全てで、標的ＳＢ９２配列から予測される位置
にバンドが検出された。図２に示すように、本発明のプ
ライマーを用いて上記ＰＣＲを行ない、解析した結果、
種苗用のとうもろこしの種子と国内産の生とうもろこし
の種子とについては、バンドは検出されなかった。一
方、輸入とうもろこしの種子２品種については、大豆と
同様の位置にバンドが検出された。そこで、この輸入と
うもろこしの種子２品種と大豆の種子とをそれぞれ超音
波洗浄したものと、上記とうもろこし２品種の種子から
発芽させた葉とについて再度上記ＰＣＲを行ない解析し
た。その結果、図３に示すように大豆の種子については
バンドが検出されたが、超音波洗浄したとうもろこしの
種子２品種とこれらの葉についてはバンドは検出されな
かった。この結果は、上記とうもろこしの種子２品種に
は当初大豆が混入しており、これが超音波洗浄により除
去されたことを示している。
【００１９】なお、ここで上記超音波洗浄は、次のよう
にして行った。即ち、とうもろこしの種子２品種、大豆
の種子１品種を２０ｍｌのＴＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ ｐＨ７．５，１ｍＭ ＥＤＴＡ）緩衝液を入れ
た５０ｍｌ滅菌遠沈管に入れ、超音波発生装置で１分間
超音波処理を行なった。処理後、種子の表面を紙タオル
でふき取った。新しい液に変え、これらの操作を合計五
回行なった。従って、以上の結果から、上記検出の結果
を指標として、とうもろこし中への大豆の混入を検出で
きることが分かった。
にして行った。即ち、とうもろこしの種子２品種、大豆
の種子１品種を２０ｍｌのＴＥ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−
ＨＣｌ ｐＨ７．５，１ｍＭ ＥＤＴＡ）緩衝液を入れ
た５０ｍｌ滅菌遠沈管に入れ、超音波発生装置で１分間
超音波処理を行なった。処理後、種子の表面を紙タオル
でふき取った。新しい液に変え、これらの操作を合計五
回行なった。従って、以上の結果から、上記検出の結果
を指標として、とうもろこし中への大豆の混入を検出で
きることが分かった。
【００２０】実施例２ （１）国内産の生とうもろこしの種子と大豆の種子か
ら、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出した。
ら、実施例１と同様にしてＤＮＡを抽出した。
【００２１】次に、これらを希釈・混合して、とうもろ
こしＤＮＡ中に１０ｐｐｍ及び１ｐｐｍの割合で大豆Ｄ
ＮＡを含む混合物をそれぞれ調製した（以下、ＤＮＡ混
合という）。 （２）国内産の生とうもろこしの種子をデシケーターで
乾燥させた後、ドライアイス存在下で細かく破砕した。
大豆の種子も、同様にドライアイス存在下で細かくで破
砕した。９ｇのとうもろこし破砕物と１ｇの大豆破砕物
とを容器に入れ、１５分間混合し、１０％大豆を含むと
うもろこし破砕物を調製した。次に、９ｇのとうもろこ
し破砕物と１ｇの１０％大豆を含むとうもろこし破砕物
を同様に混合し、１％大豆を含むとうもろこし破砕物を
調製した。この操作を繰り返し、最終的に１０ｐｐｍ及
び１ｐｐｍの大豆を含むとうもろこし破砕物をそれぞれ
９ｇと１０ｇと得た。
こしＤＮＡ中に１０ｐｐｍ及び１ｐｐｍの割合で大豆Ｄ
ＮＡを含む混合物をそれぞれ調製した（以下、ＤＮＡ混
合という）。 （２）国内産の生とうもろこしの種子をデシケーターで
乾燥させた後、ドライアイス存在下で細かく破砕した。
大豆の種子も、同様にドライアイス存在下で細かくで破
砕した。９ｇのとうもろこし破砕物と１ｇの大豆破砕物
とを容器に入れ、１５分間混合し、１０％大豆を含むと
うもろこし破砕物を調製した。次に、９ｇのとうもろこ
し破砕物と１ｇの１０％大豆を含むとうもろこし破砕物
を同様に混合し、１％大豆を含むとうもろこし破砕物を
調製した。この操作を繰り返し、最終的に１０ｐｐｍ及
び１ｐｐｍの大豆を含むとうもろこし破砕物をそれぞれ
９ｇと１０ｇと得た。
【００２２】次に、得られた１０ｐｐｍ及び１ｐｐｍの
大豆を含むとうもろこし破砕物試料のそれぞれ９ｇと１
０ｇとに、ｂｕｆｆｅｒ ＡＰ１ を３２．５ｍｌ、１
００ｍｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅＡを３００μｌ加え、混合
した後、６５℃で１５分間保温した。その後、ｂｕｆｆ
ｅｒ ＡＰ２を１０．５ｍｌ加え、氷中で１０分間放置
した。その後、遠心分離によりその上清液を得、これを
ＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎに供
し、遠心分離によりＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒＳｐｉｎ
Ｃｏｌｕｍｎパス液を得た。このパス液からそれぞれ
１．３ｍｌを取り、以後、実施例１と同様の方法でＤＮ
ｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ（１本）に吸着した
後にＤＮＡを抽出した（以下、種子混合という）。
大豆を含むとうもろこし破砕物試料のそれぞれ９ｇと１
０ｇとに、ｂｕｆｆｅｒ ＡＰ１ を３２．５ｍｌ、１
００ｍｇ／ｍｌ ＲＮａｓｅＡを３００μｌ加え、混合
した後、６５℃で１５分間保温した。その後、ｂｕｆｆ
ｅｒ ＡＰ２を１０．５ｍｌ加え、氷中で１０分間放置
した。その後、遠心分離によりその上清液を得、これを
ＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎに供
し、遠心分離によりＱＩＡｓｈｒｅｄｄｅｒＳｐｉｎ
Ｃｏｌｕｍｎパス液を得た。このパス液からそれぞれ
１．３ｍｌを取り、以後、実施例１と同様の方法でＤＮ
ｅａｓｙ Ｓｐｉｎ Ｃｏｌｕｍｎ（１本）に吸着した
後にＤＮＡを抽出した（以下、種子混合という）。
【００２３】（３）ＰＣＲ 上記（１）及び（２）で得られた鋳型ＤＮＡをそれぞれ
５００ｎｇ加えること以外は実施例１と同様にしてＰＣ
Ｒ反応液を調製し、エチジウムブロマイド含有の２％ア
ガロースゲル電気泳動に供して、蛍光イメージアナライ
ザーＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ ５９５（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）によりＤ
ＮＡを検出した。その結果を図４に示す。
５００ｎｇ加えること以外は実施例１と同様にしてＰＣ
Ｒ反応液を調製し、エチジウムブロマイド含有の２％ア
ガロースゲル電気泳動に供して、蛍光イメージアナライ
ザーＦｌｕｏｒＩｍａｇｅｒ ５９５（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）によりＤ
ＮＡを検出した。その結果を図４に示す。
【００２４】（４）結果 本発明のプライマーを用いて上記ＰＣＲを行なった結
果、ＤＮＡ混合及び種子混合の両者について標的ＳＢ９
２配列から予測される位置にバンドが検出された。この
結果より、とうもろこし中に、１０ｐｐｍあるいは１ｐ
ｐｍの大豆が存在する場合でも大豆を検出することがで
きることが分かった。
果、ＤＮＡ混合及び種子混合の両者について標的ＳＢ９
２配列から予測される位置にバンドが検出された。この
結果より、とうもろこし中に、１０ｐｐｍあるいは１ｐ
ｐｍの大豆が存在する場合でも大豆を検出することがで
きることが分かった。
【００２５】実施例３ （１）塩基配列解析 実施例１で大豆から得られた約２７０ｂｐ．のＤＮＡ断
片を含むＰＣＲ反応液から同ＤＮＡ断片を精製、ｐＧＥ
Ｍ−Ｔ Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒにサブクローニング
後、塩基配列解析を行なった。大豆由来の約２７０ｂ
ｐ．のＤＮＡ断片の塩基配列解析その結果と、大豆ＳＢ
９２塩基配列（ＥＭＢＬ ＧＭ１１０２６）との比較の
結果を図５に示す。表中の＊は、ＳＢ９２配列のＲｅｐ
ｅａｔ １の塩基と同じ塩基であったことを示す。
片を含むＰＣＲ反応液から同ＤＮＡ断片を精製、ｐＧＥ
Ｍ−Ｔ Ｅａｓｙ Ｖｅｃｔｏｒにサブクローニング
後、塩基配列解析を行なった。大豆由来の約２７０ｂ
ｐ．のＤＮＡ断片の塩基配列解析その結果と、大豆ＳＢ
９２塩基配列（ＥＭＢＬ ＧＭ１１０２６）との比較の
結果を図５に示す。表中の＊は、ＳＢ９２配列のＲｅｐ
ｅａｔ １の塩基と同じ塩基であったことを示す。
【００２６】（２）結果 図５に示すように、本発明のプライマーを用いてＰＣＲ
により増幅されたＤＮＡ断片の塩基配列は、大豆ＳＢ９
２塩基配列（ＥＭＢＬ ＧＭ１１０２６）とほぼ合致し
た。以上の結果から、増幅されたＤＮＡ断片が大豆のＳ
Ｂ９２配列由来であることがより確実に確認された。
により増幅されたＤＮＡ断片の塩基配列は、大豆ＳＢ９
２塩基配列（ＥＭＢＬ ＧＭ１１０２６）とほぼ合致し
た。以上の結果から、増幅されたＤＮＡ断片が大豆のＳ
Ｂ９２配列由来であることがより確実に確認された。
【００２７】
【発明の効果】以上詳述した通り、本発明は、食品の原
料ないし製品中に混在する微量の大豆の検出方法に係る
ものであり、本発明によれば、１）新しい大豆検出系を
提供することができる、２）食品中に混在する微量の大
豆を高感度で検出することができる、３）１ｐｐｍレベ
ルの高感度で大豆を検出することができる、４）食品中
の大豆混入量を１ｐｐｍレベルで検査し、食品中に大豆
が混入されているか否かについての情報を消費者に的確
に提供することができる、５）増幅される大豆ＤＮＡ由
来のＰＣＲ産物が、電気泳動で解析したときに特徴的な
ラダー状の泳動図を形成することから、煩雑な配列確認
作業を要することなく、簡便かつ確実に大豆ＤＮＡの存
否を判定することができる、などの効果が奏される。
料ないし製品中に混在する微量の大豆の検出方法に係る
ものであり、本発明によれば、１）新しい大豆検出系を
提供することができる、２）食品中に混在する微量の大
豆を高感度で検出することができる、３）１ｐｐｍレベ
ルの高感度で大豆を検出することができる、４）食品中
の大豆混入量を１ｐｐｍレベルで検査し、食品中に大豆
が混入されているか否かについての情報を消費者に的確
に提供することができる、５）増幅される大豆ＤＮＡ由
来のＰＣＲ産物が、電気泳動で解析したときに特徴的な
ラダー状の泳動図を形成することから、煩雑な配列確認
作業を要することなく、簡便かつ確実に大豆ＤＮＡの存
否を判定することができる、などの効果が奏される。
【００２８】
【配列表】SEQUENCE LISTING <110> House Foods Corporation <120> A method of detection of soya <130> 000301P <141> 2000-05-02 <160> 32 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 1 tctagacgct cgaaagtgaa caacg 25
【００２９】<210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 2 tcgagacgct cgaaattgaa caacg 25
【００３０】<210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 3 tcgagatggt caaaattgaa caacg 25
【００３１】<210> 4 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 4 tcgagacgct cgaaattgaa caacgga 27
【００３２】<210> 5 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 5 tctagacgct cgaaagtgaa caacgga 27
【００３３】<210> 6 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 6 tcgagatggt caaaattgaa caacgga 27
【００３４】<210> 7 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 7 aatatatcga gacgctcgaa attg 24
【００３５】<210> 8 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 8 aatatatcga gatggtcaaa attg 24
【００３６】<210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 9 aactcttcta gacgctcgaa agtg 24
【００３７】<210> 10 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 10 agttatgtcc ccgaatcaga catctgt 27
【００３８】<210> 11 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 11 tattatgtcc tcgaatcgga catccga 27
【００３９】<210> 12 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 12 tattatgtcc ccgaatcgga catccga 27
【００４０】<210> 13 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 13 tattatgtcc ccgaatcgga catccgt 27
【００４１】<210> 14 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 14 tattatgtcc tcgaatcgga catccgt 27
【００４２】<210> 15 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 15 tattatgcgc ctgaatcgga cctccga 27
【００４３】<210> 16 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 16 ttatgtcccc gaatcagaca tctgt 25
【００４４】<210> 17 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 17 ttatgtcctc gaatcggaca tccga 25
【００４５】<210> 18 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 18 ttatgtcccc gaatcggaca tccga 25
【００４６】<210> 19 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 19 ttatgtcccc gaatcggaca tccgt 25
【００４７】<210> 20 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 20 ttatgtcctc gaatcggaca tccgt 25
【００４８】<210> 21 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 21 ttatgcgcct gaatcggacc tccga 25
【００４９】<210> 22 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 22 ttatgtcccc gaatcagaca tctgtgt 27
【００５０】<210> 23 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 23 ttatgtcctc gaatcggaca tccgagt 27
【００５１】<210> 24 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 24 ttatgtcccc gaatcggaca tccgagt 27
【００５２】<210> 25 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 25 ttatgtcccc gaatcggaca tccgtgt 27
【００５３】<210> 26 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 26 ttatgtcctc gaatcggaca tccgtgt 27
【００５４】<210> 27 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 27 ttatgcgcct gaatcggacc tccgagt 27
【００５５】<210> 28 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 28 gaatcggacc tccgagttaa aag 23
【００５６】<210> 29 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 29 gaatcagaca tctgtgtgaa aag 23
【００５７】<210> 30 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 30 gaatcggaca tccgagtgaa ata 23
【００５８】<210> 31 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 31 gaatcggaca tccgagtgaa aag 23
【００５９】<210> 32 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 32 gaatcggaca tccgtgtgaa aag 23
【図１】大豆試料から抽出したＤＮＡ由来のＰＣＲ産物
の電気泳動図を示す。
の電気泳動図を示す。
【図２】とうもろこし試料から抽出したＤＮＡ由来のＰ
ＣＲ産物の電気泳動図を示す。
ＣＲ産物の電気泳動図を示す。
【図３】超音波洗浄したとうもろこし試料等から抽出し
たＤＮＡ由来のＰＣＲ産物の電気泳動図を示す。
たＤＮＡ由来のＰＣＲ産物の電気泳動図を示す。
【図４】感度確認に供したＤＮＡ由来のＰＣＲ産物の電
気泳動図を示す。
気泳動図を示す。
【図５】ＳＢ９２ ＰＣＲ産物の塩基配列を解析した結
果を示す。
果を示す。
【図６】本発明のセンスストランドプライマー（（１）
〜（９））とアンチセンスストランドプライマー（（１
０）〜（３２））を示す説明図である。
〜（９））とアンチセンスストランドプライマー（（１
０）〜（３２））を示す説明図である。
Claims (10)
- 【請求項１】 大豆特有の多コピーＤＮＡ配列との相同
性が高く、該ＤＮＡ配列以外のＤＮＡ配列との相同性が
低いプライマー。 - 【請求項２】 上記多コピーＤＮＡ配列が、大豆ＳＢ９
２配列である請求項１記載のプライマー。 - 【請求項３】 ＰＣＲ増幅により、電気泳動により解析
をしたときにラダー状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由
来のＰＣＲ産物を生成するプライマー。 - 【請求項４】 ＰＣＲ増幅により、電気泳動により解析
をしたときにラダー状の泳動図を形成する大豆ＳＢ９２
配列由来のＰＣＲ産物を生成するプライマー。 - 【請求項５】 次の（１）〜（９）の中から選択される
塩基配列を有するセンスストランドプライマーと、次の
（１０）〜（３２）の中から選択される塩基配列を有す
るアンチセンスストランドプライマーとを組合せてなる
請求項１〜４のいずれか１項に記載のプライマー。 （１）５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （２）５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （３）５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧ−３′ （４）５′−ＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （５）５′−ＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （６）５′−ＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧＡＡＣＡＡＣＧＧＡ−３′ （７）５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＴＴＧ−３′ （８）５′−ＡＡＴＡＴＡＴＣＧＡＧＡＴＧＧＴＣＡＡＡＡＴＴＧ−３′ （９）５′−ＡＡＣＴＣＴＴＣＴＡＧＡＣＧＣＴＣＧＡＡＡＧＴＧ−３′ （10）５′−ＡＧＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （11）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （12）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （13）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （14）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （15）５′−ＴＡＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （16）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴ−３′ （17）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （18）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡ−３′ （19）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （20）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴ−３′ （21）５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡ−３′ （22）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴ−３′ （23）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （24）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （25）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＣＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （26）５′−ＴＴＡＴＧＴＣＣＴＣＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴ−３′ （27）５′−ＴＴＡＴＧＣＧＣＣＴＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴ−３′ （28）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＣＴＣＣＧＡＧＴＴＡＡＡＡＧ−３′ （29）５′−ＧＡＡＴＣＡＧＡＣＡＴＣＴＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （30）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＴＡ−３′ （31）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＡＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ （32）５′−ＧＡＡＴＣＧＧＡＣＡＴＣＣＧＴＧＴＧＡＡＡＡＧ−３′ - 【請求項６】 試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を
行い、大豆特有の多コピーＤＮＡ配列を検出する大豆Ｄ
ＮＡの検出方法。 - 【請求項７】 試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を
行い、増幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有無
を指標として、大豆ＤＮＡを検出する大豆ＤＮＡの検出
方法。 - 【請求項８】 電気泳動により解析をしたときにラダー
状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を利
用する大豆ＤＮＡの識別方法。 - 【請求項９】 試料からＤＮＡを抽出し、ＤＮＡ増幅を
行い、増幅された大豆特有の多コピーＤＮＡ配列の有無
を指標として、大豆の混入を検査する大豆の混入の検査
方法。 - 【請求項１０】 電気泳動により解析をしたときにラダ
ー状の泳動図を形成する大豆ＤＮＡ由来のＰＣＲ産物を
利用する請求項９記載の大豆の混入の検査方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000133281A JP2001309786A (ja) | 2000-05-02 | 2000-05-02 | 大豆の検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000133281A JP2001309786A (ja) | 2000-05-02 | 2000-05-02 | 大豆の検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001309786A true JP2001309786A (ja) | 2001-11-06 |
Family
ID=18641806
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000133281A Pending JP2001309786A (ja) | 2000-05-02 | 2000-05-02 | 大豆の検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001309786A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003068964A1 (fr) * | 2002-02-15 | 2003-08-21 | Nisshin Seifun Group Inc. | Procede permettant de tester les aliments |
-
2000
- 2000-05-02 JP JP2000133281A patent/JP2001309786A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003068964A1 (fr) * | 2002-02-15 | 2003-08-21 | Nisshin Seifun Group Inc. | Procede permettant de tester les aliments |
| AU2002332325B2 (en) * | 2002-02-15 | 2007-08-23 | Nisshin Seifun Group Inc. | Method of testing food |
| US7344866B2 (en) | 2002-02-15 | 2008-03-18 | Nisshin Seifun Group Inc. | Method of testing food |
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