JP2001252096A - トリグリセリド測定試薬 - Google Patents
トリグリセリド測定試薬Info
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- JP2001252096A JP2001252096A JP2000069193A JP2000069193A JP2001252096A JP 2001252096 A JP2001252096 A JP 2001252096A JP 2000069193 A JP2000069193 A JP 2000069193A JP 2000069193 A JP2000069193 A JP 2000069193A JP 2001252096 A JP2001252096 A JP 2001252096A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 生体試料中のトリグリセリド含量を測定する
ための測定試薬においてその保存安定性を確保するこ
と、及びより正確なトリグリセリド測定方法を提供する
こと。 【解決手段】 生体試料中のトリグリセリド含量を測定
するための測定試薬において、１）グリセロールキナー
ゼ（ＧＫ）、２）ＡＴＰ、３）グルコース、のうち１つ
を測定に影響しない段階まで他の２つの試薬とは反応系
が開始しない状況に保持することを特徴とするトリグリ
セリドを測定するための測定試薬、及び該測定試薬を用
いるトリグリセリド測定方法を提供する。
ための測定試薬においてその保存安定性を確保するこ
と、及びより正確なトリグリセリド測定方法を提供する
こと。 【解決手段】 生体試料中のトリグリセリド含量を測定
するための測定試薬において、１）グリセロールキナー
ゼ（ＧＫ）、２）ＡＴＰ、３）グルコース、のうち１つ
を測定に影響しない段階まで他の２つの試薬とは反応系
が開始しない状況に保持することを特徴とするトリグリ
セリドを測定するための測定試薬、及び該測定試薬を用
いるトリグリセリド測定方法を提供する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は臨床化学、薬物化
学、生化学及び食品化学において、酵素又は基質濃度を
酵素反応を利用して測定するための改良法及び改良され
た試料測定用組成物に関するものである。更に詳しく
は、本発明は生体試料中のトリグリセリド含量を測定す
るための測定試薬における改良及び改良された測定試薬
を用いる測定方法に関する。
学、生化学及び食品化学において、酵素又は基質濃度を
酵素反応を利用して測定するための改良法及び改良され
た試料測定用組成物に関するものである。更に詳しく
は、本発明は生体試料中のトリグリセリド含量を測定す
るための測定試薬における改良及び改良された測定試薬
を用いる測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】臨床検査に用いられる多くの試薬は、液
状あるいは凍結乾燥した状態で供給されている。凍結乾
燥試薬は使用に際し、一定の溶解液で溶解する必要があ
る。そして測定後の残余試薬は冷所に保存され、次の測
定に使用される。従ってこの保存期間中の試薬の安定
性、液状製品の安定性、及び液状製品の使用時の安定性
は十分確保されなくてはならないが、現状では必ずしも
十分なものではなかった。保存期間の長さに伴って経時
的に、測定値や感度の低下、試薬ブランクの上昇、及び
／又は酵素、補酵素、基質等の試薬組成分の失活、分
解、変性等がしばしば起こり、その結果測定試薬として
最も重要な正確性や精密性などが経時的に低下すること
が問題となっている。
状あるいは凍結乾燥した状態で供給されている。凍結乾
燥試薬は使用に際し、一定の溶解液で溶解する必要があ
る。そして測定後の残余試薬は冷所に保存され、次の測
定に使用される。従ってこの保存期間中の試薬の安定
性、液状製品の安定性、及び液状製品の使用時の安定性
は十分確保されなくてはならないが、現状では必ずしも
十分なものではなかった。保存期間の長さに伴って経時
的に、測定値や感度の低下、試薬ブランクの上昇、及び
／又は酵素、補酵素、基質等の試薬組成分の失活、分
解、変性等がしばしば起こり、その結果測定試薬として
最も重要な正確性や精密性などが経時的に低下すること
が問題となっている。
【０００３】これらの問題に対しては、製品及びその溶
解後の使用期限の短縮や安定化物質の添加等により対応
しているのが現状であるが、十分とは言い難い。それ
故、測定に用いる試薬の、製品での安定性、及び開封後
又は溶解後における効果的な安定化方法、が望まれてい
た。
解後の使用期限の短縮や安定化物質の添加等により対応
しているのが現状であるが、十分とは言い難い。それ
故、測定に用いる試薬の、製品での安定性、及び開封後
又は溶解後における効果的な安定化方法、が望まれてい
た。
【０００４】生体試料中のトリグリセリド（ＴＧ）は、
グリセロールに３分子の脂肪酸がエステル結合したもの
である。血中ＴＧは外因性と内因性とがあり、前者はカ
イロミクロン中に、後者は超低比重リポタンパク質（Ｖ
ＬＤＬ）、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）、又は高比
重リポタンパク質（ＨＤＬ）、中に組み込まれて血中を
運搬される。血中のＴＧは、食後は主としてカイロミク
ロン中に、空腹時は主としてＶＬＤＬ中に、含まれてい
る。肝は脂肪組織から放出された遊離脂肪酸を摂取し、
また糖質から脂肪酸合成を行い、これらの脂肪酸を素材
としてＴＧを合成し、ＶＬＤＬに組み込んで血中に分泌
している。血中カイロミクロン、ＶＬＤＬ中のＴＧは、
末梢組織のリポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）によって
加水分解されて脂肪酸を遊離し、その脂肪酸は組織内に
取り込まれて代謝される。従って、血中ＴＧ濃度は主と
して肝におけるＴＧ及びＶＬＤＬ合成とその分泌、並び
に末梢におけるＶＬＤＬ分解とのバランスによって左右
される。すなわち、血中ＴＧ濃度の上昇は、脂肪組織か
らの脂肪酸放出の増大、肝における合成拮抗、末梢組織
のＬＰＬ活性低下などによって起こり、その測定はコレ
ステロールやリポタンパク質の測定とともに脂質代謝異
常の解明に重要である。
グリセロールに３分子の脂肪酸がエステル結合したもの
である。血中ＴＧは外因性と内因性とがあり、前者はカ
イロミクロン中に、後者は超低比重リポタンパク質（Ｖ
ＬＤＬ）、低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）、又は高比
重リポタンパク質（ＨＤＬ）、中に組み込まれて血中を
運搬される。血中のＴＧは、食後は主としてカイロミク
ロン中に、空腹時は主としてＶＬＤＬ中に、含まれてい
る。肝は脂肪組織から放出された遊離脂肪酸を摂取し、
また糖質から脂肪酸合成を行い、これらの脂肪酸を素材
としてＴＧを合成し、ＶＬＤＬに組み込んで血中に分泌
している。血中カイロミクロン、ＶＬＤＬ中のＴＧは、
末梢組織のリポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）によって
加水分解されて脂肪酸を遊離し、その脂肪酸は組織内に
取り込まれて代謝される。従って、血中ＴＧ濃度は主と
して肝におけるＴＧ及びＶＬＤＬ合成とその分泌、並び
に末梢におけるＶＬＤＬ分解とのバランスによって左右
される。すなわち、血中ＴＧ濃度の上昇は、脂肪組織か
らの脂肪酸放出の増大、肝における合成拮抗、末梢組織
のＬＰＬ活性低下などによって起こり、その測定はコレ
ステロールやリポタンパク質の測定とともに脂質代謝異
常の解明に重要である。
【０００５】生体試料中のＴＧの測定は、酵素を用いた
方法が臨床化学の分野で広く用いられている。その方法
は、生体試料中のＴＧをＬＰＬの作用によりグリセロー
ルに加水分解し、生じたグリセロールにグリセロールキ
ナーゼ（ＧＫ）、グリセロ−３−リン酸オキシダーゼを
作用させてＨ２Ｏ２を生成させ、この生成されたＨ２Ｏ
２をＰＯＤを用いて測定するものである。この方法で
は、生体試料中にもともと含まれている遊離グリセロー
ル、グリセロール−３−リン酸が測定系に影響を及ぼす
ので、これらを予め消去する必要がある。更にこの方法
は、生体試料中の還元性物質の影響を受ける、発色が安
定しない、などの欠点を有していた。
方法が臨床化学の分野で広く用いられている。その方法
は、生体試料中のＴＧをＬＰＬの作用によりグリセロー
ルに加水分解し、生じたグリセロールにグリセロールキ
ナーゼ（ＧＫ）、グリセロ−３−リン酸オキシダーゼを
作用させてＨ２Ｏ２を生成させ、この生成されたＨ２Ｏ
２をＰＯＤを用いて測定するものである。この方法で
は、生体試料中にもともと含まれている遊離グリセロー
ル、グリセロール−３−リン酸が測定系に影響を及ぼす
ので、これらを予め消去する必要がある。更にこの方法
は、生体試料中の還元性物質の影響を受ける、発色が安
定しない、などの欠点を有していた。
【０００６】また、ＡＤＰ−ＨＫ（ＡＤＰ依存性ヘキソ
キナーゼ）を利用した測定法が特開平１０−２６２６９
７号公報に開示されている。この方法において、生体試
料中のＴＧは、ＬＰＬによりグリセロールに分解され、
更にＡＴＰの存在下でグリセロールキナーゼ（ＧＫ）に
より、グリセロール−３−リン酸になる。このとき、Ａ
ＴＰはＡＤＰへと変換される。この変換されて生じたＡ
ＤＰ存在下で、グルコースにＡＤＰ−ＨＫを作用させ、
グルコース−６−リン酸を生成させる。更にグルコース
−６−リン酸脱水素酵素（Ｇ６ＰＤＨ）を作用させるこ
とによりＮＡＤＰＨが生成する。この生成したＮＡＤＰ
Ｈ量より生体試料中のＴＧ量を測定する。
キナーゼ）を利用した測定法が特開平１０−２６２６９
７号公報に開示されている。この方法において、生体試
料中のＴＧは、ＬＰＬによりグリセロールに分解され、
更にＡＴＰの存在下でグリセロールキナーゼ（ＧＫ）に
より、グリセロール−３−リン酸になる。このとき、Ａ
ＴＰはＡＤＰへと変換される。この変換されて生じたＡ
ＤＰ存在下で、グルコースにＡＤＰ−ＨＫを作用させ、
グルコース−６−リン酸を生成させる。更にグルコース
−６−リン酸脱水素酵素（Ｇ６ＰＤＨ）を作用させるこ
とによりＮＡＤＰＨが生成する。この生成したＮＡＤＰ
Ｈ量より生体試料中のＴＧ量を測定する。
【０００７】この公開公報に開示されている方法は、従
前の方法が有する問題点のうち還元物質の影響を受ける
といった問題点を解決した。しかし、該公開公報に開示
されている試薬の組成によれば、ＡＴＰ、ホスホエノー
ルピルビン酸（ＰＥＰ）、及びβ−ＮＡＤＰが同一試薬
中に保存されている。この試薬の保存ｐＨは７．０であ
り、このｐＨではこれらいずれの試薬成分も不安定であ
る。また、反応最終ｐＨも７．０なので、生成した反応
指示物質であるＮＡＤＰＨも不安定であり、退色が起こ
る。また、グルコース、ＡＴＰ及びグリセロールキナー
ゼを同一試薬中に保存しているので、後述するように試
薬の保存中に反応が進行してＰＥＰが消費されてしま
い、正確なＴＧの測定には望ましくない。
前の方法が有する問題点のうち還元物質の影響を受ける
といった問題点を解決した。しかし、該公開公報に開示
されている試薬の組成によれば、ＡＴＰ、ホスホエノー
ルピルビン酸（ＰＥＰ）、及びβ−ＮＡＤＰが同一試薬
中に保存されている。この試薬の保存ｐＨは７．０であ
り、このｐＨではこれらいずれの試薬成分も不安定であ
る。また、反応最終ｐＨも７．０なので、生成した反応
指示物質であるＮＡＤＰＨも不安定であり、退色が起こ
る。また、グルコース、ＡＴＰ及びグリセロールキナー
ゼを同一試薬中に保存しているので、後述するように試
薬の保存中に反応が進行してＰＥＰが消費されてしま
い、正確なＴＧの測定には望ましくない。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、測定
試薬の製品での安定性、開封後あるいは溶解後における
効果的な安定化方法を提供することである。更に詳しく
は、生体試料中のトリグリセリド含量を測定するための
測定試薬の、安定性、開封後又は溶解後における効果的
な安定化方法、及び安定化された測定試薬を用いた正確
なＴＧ測定方法を提供することである。
試薬の製品での安定性、開封後あるいは溶解後における
効果的な安定化方法を提供することである。更に詳しく
は、生体試料中のトリグリセリド含量を測定するための
測定試薬の、安定性、開封後又は溶解後における効果的
な安定化方法、及び安定化された測定試薬を用いた正確
なＴＧ測定方法を提供することである。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは精度の高い
測定に必要である安定な試薬を得るべく検討し、「共存
できない試薬成分の組合せ」と「共存できる試薬成分の
組合せ」及びその保存ｐＨ、シグナルを発生させる反応
生成物と反応ｐＨの適合性、更には、試薬成分の一であ
る酵素と他の試薬成分との組合せ、測定妨害物質の消
去、も考慮に入れた試薬組成を構築した。
測定に必要である安定な試薬を得るべく検討し、「共存
できない試薬成分の組合せ」と「共存できる試薬成分の
組合せ」及びその保存ｐＨ、シグナルを発生させる反応
生成物と反応ｐＨの適合性、更には、試薬成分の一であ
る酵素と他の試薬成分との組合せ、測定妨害物質の消
去、も考慮に入れた試薬組成を構築した。
【００１０】本発明において測定試薬とは、１つ以上の
試薬よりなり、生体試料中の特定の物質の存在又はその
含量を測定するために使用されるものである。また、本
発明において試薬とは１つ又は複数の試薬成分よりな
る。更に、本発明において試薬成分とは、試薬を構成す
る成分である物質を意味する。
試薬よりなり、生体試料中の特定の物質の存在又はその
含量を測定するために使用されるものである。また、本
発明において試薬とは１つ又は複数の試薬成分よりな
る。更に、本発明において試薬成分とは、試薬を構成す
る成分である物質を意味する。
【００１１】安定な試薬を得るためには、ｐＨ安定域が
異なる試薬成分が同一試薬中に含まれているか否かを、
更に共役酵素に含まれている又は酵素自身が持っている
及び／又は混在している夾雑酵素様活性を、考慮する必
要がある。
異なる試薬成分が同一試薬中に含まれているか否かを、
更に共役酵素に含まれている又は酵素自身が持っている
及び／又は混在している夾雑酵素様活性を、考慮する必
要がある。
【００１２】すなわち、共役酵素に含まれている夾雑酵
素様活性、又はその酵素がもっている基質特異性に由来
して、試薬保存中に試薬成分と酵素反応が生じ、試薬ブ
ランクを上昇させたり、試薬成分を消費したりすること
がある。
素様活性、又はその酵素がもっている基質特異性に由来
して、試薬保存中に試薬成分と酵素反応が生じ、試薬ブ
ランクを上昇させたり、試薬成分を消費したりすること
がある。
【００１３】また、例えば、酸性域で安定な試薬成分と
アルカリ性域で安定な試薬成分が同一試薬中に含まれる
ことにより、どちらか一方の試薬成分が不安定となる、
又は選択するｐＨによっては両試薬成分がともに不安定
となる、ことがある。
アルカリ性域で安定な試薬成分が同一試薬中に含まれる
ことにより、どちらか一方の試薬成分が不安定となる、
又は選択するｐＨによっては両試薬成分がともに不安定
となる、ことがある。
【００１４】更に、一般に基質濃度若しくは酵素活性量
の測定は、反応により生じた生成物である反応指示物質
のシグナルを検出することにより行われるが、この場
合、酵素活性の反応至適ｐＨのみならず反応生成物の安
定性も考慮する必要がある。つまり、特に生体試料の測
定は、生体試料に一種又は二種以上の試薬を添加するこ
とにより行われるが、これら試薬を添加した後のｐＨが
シグナルを発生する反応生成物の安定域から外れている
とその反応生成物の分解又は変性が起こり、正確なシグ
ナルの検出が行われず、ひいては正確な測定結果が得ら
れない。
の測定は、反応により生じた生成物である反応指示物質
のシグナルを検出することにより行われるが、この場
合、酵素活性の反応至適ｐＨのみならず反応生成物の安
定性も考慮する必要がある。つまり、特に生体試料の測
定は、生体試料に一種又は二種以上の試薬を添加するこ
とにより行われるが、これら試薬を添加した後のｐＨが
シグナルを発生する反応生成物の安定域から外れている
とその反応生成物の分解又は変性が起こり、正確なシグ
ナルの検出が行われず、ひいては正確な測定結果が得ら
れない。
【００１５】そこで試薬の安定化及びシグナルを発生す
る反応生成物の安定化の研究を重ねた結果、同じｐＨ安
定域を持つ試薬成分を同一の試薬として調製し、異なる
ｐＨ安定域を持つ試薬成分を別の試薬をして調製し、更
に、測定対象物とこれら試薬とを混合した後のｐＨを、
シグナルを発生させる反応生成物のｐＨ安定域に調整す
ることにより、試薬が安定に保持できかつ正確なシグナ
ルの検出が可能となる。
る反応生成物の安定化の研究を重ねた結果、同じｐＨ安
定域を持つ試薬成分を同一の試薬として調製し、異なる
ｐＨ安定域を持つ試薬成分を別の試薬をして調製し、更
に、測定対象物とこれら試薬とを混合した後のｐＨを、
シグナルを発生させる反応生成物のｐＨ安定域に調整す
ることにより、試薬が安定に保持できかつ正確なシグナ
ルの検出が可能となる。
【００１６】更に、正確な測定のためには、上記各試薬
成分及び反応生成物特に反応指示物質のｐＨ安定性や夾
雑酵素様活性の他に、測定妨害物質の消去等の方法も考
慮して試薬を構築する必要がある。
成分及び反応生成物特に反応指示物質のｐＨ安定性や夾
雑酵素様活性の他に、測定妨害物質の消去等の方法も考
慮して試薬を構築する必要がある。
【００１７】以下、生体試料中のトリグリセリドの測定
法を例にとり、本発明を詳細に説明する。ＡＤＰ−ＨＫ
を用いたＴＧ測定法は、例えば図１に示した反応原理に
基づく。生体試料中のＴＧは、ＬＰＬによりグリセロー
ルに分解され、その後ＧＫ、ＡＤＰ−ＨＫ、Ｇ６ＰＤＨ
を作用させることによりβ−ＮＡＤＰＨを生成する。こ
の生成されるβ−ＮＡＤＰＨを検出することにより、Ｔ
Ｇの測定を行うことができる。このとき、β−ＮＡＤＨ
により検出を行ってもよい。
法を例にとり、本発明を詳細に説明する。ＡＤＰ−ＨＫ
を用いたＴＧ測定法は、例えば図１に示した反応原理に
基づく。生体試料中のＴＧは、ＬＰＬによりグリセロー
ルに分解され、その後ＧＫ、ＡＤＰ−ＨＫ、Ｇ６ＰＤＨ
を作用させることによりβ−ＮＡＤＰＨを生成する。こ
の生成されるβ−ＮＡＤＰＨを検出することにより、Ｔ
Ｇの測定を行うことができる。このとき、β−ＮＡＤＨ
により検出を行ってもよい。
【００１８】本発明者らは、上記反応原理に基づく反応
系に係る酵素であるＧＫが、ＡＴＰａｓｅ（アデノシン
トリホスファターゼ；ＡＴＰをＡＤＰに変換させる酵
素）様活性とヘキソキナーゼ様活性を有することを発見
した。つまり、グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、ＡＴ
Ｐ、及びグルコースを一体として同一液状状態で保存す
ると、保存中に酵素反応が開始し、ＰＥＰの減少がおき
て正確な測定を達成できないことを見出した。この発見
に基づき、本発明の一である、１）グリセロールキナー
ゼ（ＧＫ）、２）ＡＴＰ、３）グルコースを、ＴＧ測定
試薬において、そのうち１つを測定に影響しない段階ま
で他の２つとは反応が開始しない状況に保持することを
特徴とする測定試薬を得ることを達成した。
系に係る酵素であるＧＫが、ＡＴＰａｓｅ（アデノシン
トリホスファターゼ；ＡＴＰをＡＤＰに変換させる酵
素）様活性とヘキソキナーゼ様活性を有することを発見
した。つまり、グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、ＡＴ
Ｐ、及びグルコースを一体として同一液状状態で保存す
ると、保存中に酵素反応が開始し、ＰＥＰの減少がおき
て正確な測定を達成できないことを見出した。この発見
に基づき、本発明の一である、１）グリセロールキナー
ゼ（ＧＫ）、２）ＡＴＰ、３）グルコースを、ＴＧ測定
試薬において、そのうち１つを測定に影響しない段階ま
で他の２つとは反応が開始しない状況に保持することを
特徴とする測定試薬を得ることを達成した。
【００１９】ここで、測定に影響しない段階とは、測定
対象物との接触までを一般的には意味する。しかし、測
定対象物との接触が生じたとしても、更に何らかの手
段、例えば阻害剤等の添加により測定に影響する反応を
制御し、目的とする反応時に当該阻害剤による制御をは
ずす手段等をとっていればよく、ここで測定に影響しな
い段階を具体的に限定することは適当でない。
対象物との接触までを一般的には意味する。しかし、測
定対象物との接触が生じたとしても、更に何らかの手
段、例えば阻害剤等の添加により測定に影響する反応を
制御し、目的とする反応時に当該阻害剤による制御をは
ずす手段等をとっていればよく、ここで測定に影響しな
い段階を具体的に限定することは適当でない。
【００２０】また、上記１）〜３）等の試薬成分を反応
が開始しない状況におくには、分別して保存あるいは保
持することが最も簡便な手段であり、好ましい態様であ
るが、分別でなくとも乾燥状態、凍結状態、阻害剤によ
る制御下におく等の手段によっても、本発明の目的を達
成することができる。
が開始しない状況におくには、分別して保存あるいは保
持することが最も簡便な手段であり、好ましい態様であ
るが、分別でなくとも乾燥状態、凍結状態、阻害剤によ
る制御下におく等の手段によっても、本発明の目的を達
成することができる。
【００２１】更に、生体試料中にもともと含まれており
ＴＧの測定誤差の原因の１つとなる遊離グリセロール等
の消去を行えば、ＴＧのより正確な測定を達成すること
ができる。グリセロール等の消去は、図１の反応原理に
示すように、生成したＡＤＰをＰＫの作用によりＡＴＰ
に戻すことにより行われる。このとき、目的とする本反
応では、ＰＫの反応を止める必要がある。ＰＫの反応を
止める物質は、ＰＫの反応を止めるものであれば特に限
定されないが、塩化カルシウム、シュウ酸が例示され
る。
ＴＧの測定誤差の原因の１つとなる遊離グリセロール等
の消去を行えば、ＴＧのより正確な測定を達成すること
ができる。グリセロール等の消去は、図１の反応原理に
示すように、生成したＡＤＰをＰＫの作用によりＡＴＰ
に戻すことにより行われる。このとき、目的とする本反
応では、ＰＫの反応を止める必要がある。ＰＫの反応を
止める物質は、ＰＫの反応を止めるものであれば特に限
定されないが、塩化カルシウム、シュウ酸が例示され
る。
【００２２】また、上記反応原理に基づく反応系におい
て、アルカリ性域で安定な物質としては、ＡＴＰ、ＰＥ
Ｐなどを例示することができる。本発明のＴＧを測定す
るための測定試薬において、これらは、アルカリ性域で
あるｐＨ７．５〜１０．０、好ましくはｐＨ８．０〜１
０．０、より好ましくはｐＨ８．０〜９．０に単独で又
は組合せて調整される。その他、アルカリ性域で安定な
物質としてＡＤＰ、β−ＮＡＤＨ、β−ＮＡＤＰＨを示
すことができる。また、酸性域において安定な物質とし
ては、β−ＮＡＤＰを例示することができる。その他、
酸性域で安定な物質としてβ−ＮＡＤを示すことができ
る。そのため本発明において、これらは、酸性域である
ｐＨ５．０〜７．０、好ましくはｐＨ６．０〜７．０に
調整される。
て、アルカリ性域で安定な物質としては、ＡＴＰ、ＰＥ
Ｐなどを例示することができる。本発明のＴＧを測定す
るための測定試薬において、これらは、アルカリ性域で
あるｐＨ７．５〜１０．０、好ましくはｐＨ８．０〜１
０．０、より好ましくはｐＨ８．０〜９．０に単独で又
は組合せて調整される。その他、アルカリ性域で安定な
物質としてＡＤＰ、β−ＮＡＤＨ、β−ＮＡＤＰＨを示
すことができる。また、酸性域において安定な物質とし
ては、β−ＮＡＤＰを例示することができる。その他、
酸性域で安定な物質としてβ−ＮＡＤを示すことができ
る。そのため本発明において、これらは、酸性域である
ｐＨ５．０〜７．０、好ましくはｐＨ６．０〜７．０に
調整される。
【００２３】更にＴＧの測定系において、シグナルを発
生する反応生成物として検出に用いられているβ−ＮＡ
ＤＨやβ−ＮＡＤＰＨはｐＨ７．３以上で安定である。
そこで酸性域で安定な物質を同一試薬として、アルカリ
性域で安定な物質を別の同一試薬として調製し、測定対
象物とこれら試薬とを混合したときのｐＨは、例えばβ
−ＮＡＤＰＨを用いてシグナルを検出する場合、ｐＨ
７．０〜１０．０、好ましくはｐＨ７．３〜９．０とす
るのが望ましい。
生する反応生成物として検出に用いられているβ−ＮＡ
ＤＨやβ−ＮＡＤＰＨはｐＨ７．３以上で安定である。
そこで酸性域で安定な物質を同一試薬として、アルカリ
性域で安定な物質を別の同一試薬として調製し、測定対
象物とこれら試薬とを混合したときのｐＨは、例えばβ
−ＮＡＤＰＨを用いてシグナルを検出する場合、ｐＨ
７．０〜１０．０、好ましくはｐＨ７．３〜９．０とす
るのが望ましい。
【００２４】試薬を酸性域又はアルカリ性域に保つには
適宜緩衝液を用いるのが好ましく、酸性域に用いられる
緩衝液としてはグリシン−塩酸、酢酸、ＭＥＳ、Ｂｉｓ
−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ等、アルカリ性域に用いられる緩衝
液としてはＴｒｉｓ−塩酸、Ｂｉｃｉｎｅ、グリシルグ
リシン、ＴＡＰＳ、ＣＨＡＰＳ等を例示することができ
る。これら緩衝液の種類、ｐＨ、及び濃度は、成分の安
定性及び反応最終ｐＨにより適宜選択することができ
る。更に目的に応じ、本発明では、例えば酸性域、中性
域、アルカリ性域等に試薬を分けることも可能である。
適宜緩衝液を用いるのが好ましく、酸性域に用いられる
緩衝液としてはグリシン−塩酸、酢酸、ＭＥＳ、Ｂｉｓ
−Ｔｒｉｓ、ＡＤＡ等、アルカリ性域に用いられる緩衝
液としてはＴｒｉｓ−塩酸、Ｂｉｃｉｎｅ、グリシルグ
リシン、ＴＡＰＳ、ＣＨＡＰＳ等を例示することができ
る。これら緩衝液の種類、ｐＨ、及び濃度は、成分の安
定性及び反応最終ｐＨにより適宜選択することができ
る。更に目的に応じ、本発明では、例えば酸性域、中性
域、アルカリ性域等に試薬を分けることも可能である。
【００２５】また、上記反応原理に基づく反応系に係る
酵素であるＧ６ＰＤＨには、グルコース脱水素酵素活性
が夾雑している。そのため、Ｇ６ＰＤＨをβ−ＮＡＤ
Ｐ、グルコースとともに同一の試薬中で保存すると、酵
素反応が開始し試薬ブランクが上昇する。従って、Ｇ６
ＰＤＨに夾雑するグルコース脱水素酵素の作用によるＮ
ＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの生成を制御することを目的と
し、Ｇ６ＰＤＨ、β−ＮＡＤＰ、グルコースから選ばれ
る少なくとも１つを、その保存時において反応が開始し
ない状況に調製することも本発明の別の態様である。
酵素であるＧ６ＰＤＨには、グルコース脱水素酵素活性
が夾雑している。そのため、Ｇ６ＰＤＨをβ−ＮＡＤ
Ｐ、グルコースとともに同一の試薬中で保存すると、酵
素反応が開始し試薬ブランクが上昇する。従って、Ｇ６
ＰＤＨに夾雑するグルコース脱水素酵素の作用によるＮ
ＡＤＨ又はＮＡＤＰＨの生成を制御することを目的と
し、Ｇ６ＰＤＨ、β−ＮＡＤＰ、グルコースから選ばれ
る少なくとも１つを、その保存時において反応が開始し
ない状況に調製することも本発明の別の態様である。
【００２６】以上のような要件分析によって、本発明の
別の一である、トリグリセリドを測定するための測定試
薬において、１）グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、２）
ＡＴＰ、３）グルコース、のうち１つを測定に影響しな
い段階まで他の２つとは反応が開始しない状況に保持
し、更に次の４）〜９）の処理から選ばれる少なくとも
１つの処理を施すことを特徴とする、トリグリセリドを
測定するための測定試薬を完成した。 ４）ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）の活性を制御する。 ５）少なくとも一の試薬がｐＨ７．５〜１０．０、他の
一の試薬がｐＨ５．０〜７．０になるように調製する。 ６）反応時の反応液ｐＨが７．３以上になるように試薬
を調製する。 ７）ＡＴＰ及び／又はＰＥＰ（ホスホエノールピルビン
酸）の保存時のｐＨをアルカリ性になるように試薬を調
製する。 ８）β−ＮＡＤＰの保存時のｐＨを酸性になるように試
薬を調製する。 ９）Ｇ６ＰＤＨ（グルコース−６−リン酸脱水素酵
素）、β−ＮＡＤＰ、グルコースから選ばれる少なくと
も１つを、その保存時において反応が開始しない状況の
試薬として調製する。
別の一である、トリグリセリドを測定するための測定試
薬において、１）グリセロールキナーゼ（ＧＫ）、２）
ＡＴＰ、３）グルコース、のうち１つを測定に影響しな
い段階まで他の２つとは反応が開始しない状況に保持
し、更に次の４）〜９）の処理から選ばれる少なくとも
１つの処理を施すことを特徴とする、トリグリセリドを
測定するための測定試薬を完成した。 ４）ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）の活性を制御する。 ５）少なくとも一の試薬がｐＨ７．５〜１０．０、他の
一の試薬がｐＨ５．０〜７．０になるように調製する。 ６）反応時の反応液ｐＨが７．３以上になるように試薬
を調製する。 ７）ＡＴＰ及び／又はＰＥＰ（ホスホエノールピルビン
酸）の保存時のｐＨをアルカリ性になるように試薬を調
製する。 ８）β−ＮＡＤＰの保存時のｐＨを酸性になるように試
薬を調製する。 ９）Ｇ６ＰＤＨ（グルコース−６−リン酸脱水素酵
素）、β−ＮＡＤＰ、グルコースから選ばれる少なくと
も１つを、その保存時において反応が開始しない状況の
試薬として調製する。
【００２７】また、本発明の別の一は、生体試料中のト
リグリセリド含量を測定するための測定試薬において、
上記４）〜９）の処理から選ばれる少なくとも２つの処
理を施すことを特徴とするトリグリセリドを測定するた
めの測定試薬である。
リグリセリド含量を測定するための測定試薬において、
上記４）〜９）の処理から選ばれる少なくとも２つの処
理を施すことを特徴とするトリグリセリドを測定するた
めの測定試薬である。
【００２８】反応が開始しない状況の試薬に調製するに
は、分別して調製することが最も簡便な手段であり、好
ましい態様である。分別調製の例として、上記のように
各試薬成分のｐＨによる安定性及び反応の至適ｐＨを考
慮して、各試薬成分を、安定でかつ反応が生じないｐＨ
で、個別にあるいは組合せて調製することがあげられ
る。なお、分別調製する試薬は溶液であってもよいし、
用時溶解して用いる乾燥あるいは凍結製剤として調製し
てもよい。また、分別でなくとも乾燥状態、凍結状態、
阻害剤による制御下におく等の手段によっても、本発明
の目的は達成することができる。
は、分別して調製することが最も簡便な手段であり、好
ましい態様である。分別調製の例として、上記のように
各試薬成分のｐＨによる安定性及び反応の至適ｐＨを考
慮して、各試薬成分を、安定でかつ反応が生じないｐＨ
で、個別にあるいは組合せて調製することがあげられ
る。なお、分別調製する試薬は溶液であってもよいし、
用時溶解して用いる乾燥あるいは凍結製剤として調製し
てもよい。また、分別でなくとも乾燥状態、凍結状態、
阻害剤による制御下におく等の手段によっても、本発明
の目的は達成することができる。
【００２９】本発明の測定試薬の実施の態様としては、
第一試薬にＡＴＰ、ＰＥＰ等を含有させ、アルカリ性域
のｐＨ７．５〜１０．０より好ましくは、ｐＨ８．０〜
９．０に調整し、第二試薬にβ−ＮＡＤＰ等を含有させ
弱酸性のｐＨ５．０〜７．０より好ましくはｐＨ６．０
〜７．０に調整し、生体試料、第一試薬、第二試薬を混
合したときのｐＨは、ｐＨ７．０〜１０．０より好まし
くは、ｐＨ７．３〜９．０となるのが好ましい。
第一試薬にＡＴＰ、ＰＥＰ等を含有させ、アルカリ性域
のｐＨ７．５〜１０．０より好ましくは、ｐＨ８．０〜
９．０に調整し、第二試薬にβ−ＮＡＤＰ等を含有させ
弱酸性のｐＨ５．０〜７．０より好ましくはｐＨ６．０
〜７．０に調整し、生体試料、第一試薬、第二試薬を混
合したときのｐＨは、ｐＨ７．０〜１０．０より好まし
くは、ｐＨ７．３〜９．０となるのが好ましい。
【００３０】これら第一試薬、第二試薬の緩衝液の種
類、濃度は試薬成分の安定性、反応最終ｐＨにより適宜
選択することができるが、より好ましくは、第一試薬の
緩衝液はＢｉｃｉｎｅを用いるのが好ましい。また、濃
度は０．０１〜２Ｍ、より好ましくは２０〜１００ｍＭ
の濃度が好ましい。また、第二試薬の緩衝液はＭＥＳを
用いるのが好ましい。また、濃度は０．０１〜２Ｍ、よ
り好ましくは２０〜１００ｍＭの濃度が好ましい。
類、濃度は試薬成分の安定性、反応最終ｐＨにより適宜
選択することができるが、より好ましくは、第一試薬の
緩衝液はＢｉｃｉｎｅを用いるのが好ましい。また、濃
度は０．０１〜２Ｍ、より好ましくは２０〜１００ｍＭ
の濃度が好ましい。また、第二試薬の緩衝液はＭＥＳを
用いるのが好ましい。また、濃度は０．０１〜２Ｍ、よ
り好ましくは２０〜１００ｍＭの濃度が好ましい。
【００３１】更に本発明は、上記本発明の測定試薬を利
用して行うトリグリセリド測定方法をも含有する。本発
明のトリグリセリド測定方法で測定する対象となる生体
試料としては、血清、血漿、尿、髄液等が例示される。
また、本発明のトリグリセリド測定方法において、測定
手法は特に限定されずエンドポイントアッセイ法、レー
トアッセイ法等の手法を適宜用いることができる。
用して行うトリグリセリド測定方法をも含有する。本発
明のトリグリセリド測定方法で測定する対象となる生体
試料としては、血清、血漿、尿、髄液等が例示される。
また、本発明のトリグリセリド測定方法において、測定
手法は特に限定されずエンドポイントアッセイ法、レー
トアッセイ法等の手法を適宜用いることができる。
【００３２】なお本発明は、生体試料中の物質を、特に
ＴＧを、測定する系の試薬並びに測定方法に関する発明
であり、最も好ましくは本発明で開示した改良の手段を
全て組合せて利用することが好適である。しかし、各改
良手段を完全に組合せなくとも、従前の技術に比して格
段の効果を達成するものであれば、当業者が所望により
適宜組合せて、その要求する効果の程度に合わせ試薬の
キット化や調製、及び測定方法に利用すればよい。
ＴＧを、測定する系の試薬並びに測定方法に関する発明
であり、最も好ましくは本発明で開示した改良の手段を
全て組合せて利用することが好適である。しかし、各改
良手段を完全に組合せなくとも、従前の技術に比して格
段の効果を達成するものであれば、当業者が所望により
適宜組合せて、その要求する効果の程度に合わせ試薬の
キット化や調製、及び測定方法に利用すればよい。
【００３３】
【実施例】以下に実施例を挙げて本発明を更に説明する
が、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
が、本発明は下記の実施例に限定されるものではない。
【００３４】実施例１ 本発明の測定試薬を調製した。 （１）第一試薬の組成 Ｂｉｃｉｎｅ ５０ｍＭ 塩化カリウム １００ｍＭ 塩化マグネシウム １０ｍＭ ノニオンＡ−１０Ｒ ０．５％ トリトンＸ−１００ ０．２％ アジ化ナトリウム ０．１％ ＰＥＰ ４．０ｍＭ ＡＴＰ ３．０ｍＭ Ｇ６ＰＤＨ ４．５Ｕ／ｍＬ ＰＫ ３．０Ｕ／ｍＬ ＧＫ ３．０Ｕ／ｍＬ ｐＨ ８．５
【００３５】 （２）第二試薬の組成 ＭＥＳ ５０ｍＭ シュウ酸 １００ｍＭ グルコース ８０ｍＭ トリトンＸ−１００ ０．２５％ β−ＮＡＤＰ ６．０ｍＭ アジ化ナトリウム ０．１％ ＡＤＰ−ＨＫ １０．０Ｕ／ｍＬ リパーゼ １５００Ｕ／ｍＬ ｐＨ ６．５
【００３６】比較例１ 特開平１０−２６２６９７号公報に開示された測定試薬
を、本発明の測定試薬との比較検討のために調製した。 （１）第一試薬の組成 ＰＩＰＥＳ ５０ｍＭ 塩化マグネシウム ５ｍＭ アデカノールＢ−７９５ ０．３％ トリトンＸ−１００ ０．３％ ＰＥＰ ０．５ｍＭ ＡＴＰ ２ｍＭ ＰＫ ５Ｕ／ｍＬ ＧＫ ５Ｕ／ｍＬ グルコース ２０ｍＭ ＮＡＤＰ １ｍＭ ｐＨ ７．０
を、本発明の測定試薬との比較検討のために調製した。 （１）第一試薬の組成 ＰＩＰＥＳ ５０ｍＭ 塩化マグネシウム ５ｍＭ アデカノールＢ−７９５ ０．３％ トリトンＸ−１００ ０．３％ ＰＥＰ ０．５ｍＭ ＡＴＰ ２ｍＭ ＰＫ ５Ｕ／ｍＬ ＧＫ ５Ｕ／ｍＬ グルコース ２０ｍＭ ＮＡＤＰ １ｍＭ ｐＨ ７．０
【００３７】 （２）第二試薬の組成 ＰＩＰＥＳ ５０ｍＭ Ｇ６ＰＤＨ ２０Ｕ／ｍＬ ＡＤＰ−ＨＫ ２０Ｕ／ｍＬ リパーゼ ２０００Ｕ／ｍＬ ＭＧＬＰ（モノグリセリドリパーゼ） ５Ｕ／ｍＬ コレステロールエステラーゼ ５０Ｕ／ｍＬ アデカノールＢ−７９５ ０．１％ ｐＨ ７．０
【００３８】実験例１ 実施例１で調製した試薬を用いて、試薬の製造後１ヶ月
保存後の試薬ブランクの変動を表１に示した。比較例と
して、特開平１０−２６２６９７号公報の実施例に開示
された組成の試薬（比較例１）、すなわち塩化マグネシ
ウム、ＡＴＰ、ＰＥＰ、グルコース、ＧＫ及びＰＫを第
一試薬組成に配置した試薬を用いて同様に製造後１ヶ月
保存後の試薬ブランクの変動を調べた。表１に示すとお
り、特開平１０−２６２６９７号公報の実施例に開示さ
れた組成の試薬を用いると、経時的並びに温度依存的に
試薬ブランクが上昇してしまうが、本発明の試薬では試
薬ブランクの上昇が抑えられることが判明した。
保存後の試薬ブランクの変動を表１に示した。比較例と
して、特開平１０−２６２６９７号公報の実施例に開示
された組成の試薬（比較例１）、すなわち塩化マグネシ
ウム、ＡＴＰ、ＰＥＰ、グルコース、ＧＫ及びＰＫを第
一試薬組成に配置した試薬を用いて同様に製造後１ヶ月
保存後の試薬ブランクの変動を調べた。表１に示すとお
り、特開平１０−２６２６９７号公報の実施例に開示さ
れた組成の試薬を用いると、経時的並びに温度依存的に
試薬ブランクが上昇してしまうが、本発明の試薬では試
薬ブランクの上昇が抑えられることが判明した。
【００３９】
【表１】
【００４０】
【実験例２】実施例１及び比較例１で調製した試薬を用
いて、各試薬の製造後１ヶ月保存した後のＡＴＰ、ＰＥ
Ｐの残存率、並びにグルコース−６−リン酸の生成量に
ついて比較検討した。表２〜４に示すように、本発明に
より、ＡＴＰの安定化が図られ、グルコース−６−リン
酸の生成も抑制されていることが示された。実験例１で
示された比較例の試薬ブランクの変動は、ＡＴＰ加水分
解によるＡＤＰの生成とグルコース−６−リン酸の生成
が原因であると考えられる。また、特開平１０−２６２
６９７号公報に開示された試薬組成は、ＰＫとＰＥＰと
によるＡＴＰ再生反応により保存中並びにグリセロール
消去反応により生成するＡＤＰの消去を目的としている
が、試薬組成の組合せによる問題のために、ＰＥＰの枯
渇が生じている。すなわち、既報の試薬組成では長期間
の保存により試薬ブランクの変動のみならず、十分なグ
リセロール消去を行うことができなくなる。
いて、各試薬の製造後１ヶ月保存した後のＡＴＰ、ＰＥ
Ｐの残存率、並びにグルコース−６−リン酸の生成量に
ついて比較検討した。表２〜４に示すように、本発明に
より、ＡＴＰの安定化が図られ、グルコース−６−リン
酸の生成も抑制されていることが示された。実験例１で
示された比較例の試薬ブランクの変動は、ＡＴＰ加水分
解によるＡＤＰの生成とグルコース−６−リン酸の生成
が原因であると考えられる。また、特開平１０−２６２
６９７号公報に開示された試薬組成は、ＰＫとＰＥＰと
によるＡＴＰ再生反応により保存中並びにグリセロール
消去反応により生成するＡＤＰの消去を目的としている
が、試薬組成の組合せによる問題のために、ＰＥＰの枯
渇が生じている。すなわち、既報の試薬組成では長期間
の保存により試薬ブランクの変動のみならず、十分なグ
リセロール消去を行うことができなくなる。
【００４１】
【表２】
【００４２】
【表３】
【００４３】
【表４】
【００４４】
【発明の効果】本発明は、トリグリセリド（ＴＧ）を測
定するための測定試薬であって、混在する酵素、基質、
触媒等に影響されない、極めて安定性に優れた測定試薬
を提供する。更に本発明は、該測定試薬を用いたＴＧ測
定方法をも提供する。本発明により、測定試薬の保存期
間を延長することができ、更にＴＧの測定をより正確に
行うことができる。
定するための測定試薬であって、混在する酵素、基質、
触媒等に影響されない、極めて安定性に優れた測定試薬
を提供する。更に本発明は、該測定試薬を用いたＴＧ測
定方法をも提供する。本発明により、測定試薬の保存期
間を延長することができ、更にＴＧの測定をより正確に
行うことができる。
【図１】 ＡＤＰ−ＨＫ（ＡＤＰ依存性ヘキソキナー
ゼ）を用いたトリグリセリド（ＴＧ）測定法の反応原理
を示した図である。図中、ＬＰＬはリポタンパク質リパ
ーゼ、ＧＫはグリセロールキナーゼ、ＰＫはピルビン酸
キナーゼ、Ｇ６ＰＤＨはグルコース−６−リン酸脱水素
酵素を意味する。
ゼ）を用いたトリグリセリド（ＴＧ）測定法の反応原理
を示した図である。図中、ＬＰＬはリポタンパク質リパ
ーゼ、ＧＫはグリセロールキナーゼ、ＰＫはピルビン酸
キナーゼ、Ｇ６ＰＤＨはグルコース−６−リン酸脱水素
酵素を意味する。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/92 Ｇ０１Ｎ 33/92 Ｃ Ｆターム(参考） 2G045 AA13 BB51 BB52 BB54 CA25 DA70 FB01 4B050 CC07 KK06 KK08 KK13 LL03 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ64 QQ70 QR04 QR07 QR12 QR41 QR42 QR44 QS28 QX01
Claims (5)
- 【請求項１】 生体試料中のトリグリセリド含量を測定
するための測定試薬において、次の１つを測定に影響し
ない段階まで他の２つとは反応が開始しない状況に保持
することを特徴とするトリグリセリド測定のための測定
試薬； １）グリセロールキナーゼ（ＧＫ） ２）アデノシン５’−三リン酸（ＡＴＰ） ３）グルコース。 - 【請求項２】 請求項１記載の測定試薬であって、グル
コースを他の２つとは別個の試薬として保持するトリグ
リセリド測定のための測定試薬。 - 【請求項３】 請求項１又は２に記載の測定試薬であっ
て、次の処理から選ばれる少なくとも１つの処理を施す
ことを特徴とするトリグリセリド測定のための測定試
薬； ４）ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）の活性を制御する、 ５）少なくとも一の試薬がｐＨ７．５〜１０．０、他の
一の試薬がｐＨ５．０〜７．０になるように調製する、 ６）反応時の反応液ｐＨが７．３以上になるように試薬
を調製する、 ７）ＡＴＰ及び／又はＰＥＰ（ホスホエノールピルビン
酸）の保存時のｐＨをアルカリ性になるように試薬を調
製する、 ８）β−ＮＡＤＰの保存時のｐＨを酸性になるように試
薬を調製する、 ９）Ｇ６ＰＤＨ（グルコース−６−リン酸脱水素酵
素）、β−ＮＡＤＰ、グルコースから選ばれる少なくと
も１つを、その保存時において反応が開始しない状況の
試薬に調製する。 - 【請求項４】 生体試料中のトリグリセリド含量を測定
するための測定試薬において、次の処理から選ばれる少
なくとも２つの処理を施すことを特徴とするトリグリセ
リド測定のための測定試薬； ４）ピルビン酸キナーゼ（ＰＫ）の活性を制御する、 ５）少なくとも一の試薬がｐＨ７．５〜１０．０、他の
一の試薬がｐＨ５．０〜７．０になるように調製する、 ６）反応時の反応液ｐＨが７．３以上になるように試薬
を調製する、 ７）ＡＴＰ及び／又はＰＥＰ（ホスホエノールピルビン
酸）の保存時のｐＨをアルカリ性になるように試薬を調
製する、 ８）β−ＮＡＤＰの保存時のｐＨを酸性になるように試
薬を調製する、 ９）Ｇ６ＰＤＨ（グルコース−６−リン酸脱水素酵
素）、β−ＮＡＤＰ、グルコースから選ばれる少なくと
も１つを、その保存時において反応が開始しない状況の
試薬に調製する。 - 【請求項５】 請求項１〜４のいずれか１項に記載の測
定試薬を用いるトリグリセリド測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000069193A JP4442983B2 (ja) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | トリグリセリド測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000069193A JP4442983B2 (ja) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | トリグリセリド測定試薬 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001252096A true JP2001252096A (ja) | 2001-09-18 |
| JP2001252096A5 JP2001252096A5 (ja) | 2007-05-17 |
| JP4442983B2 JP4442983B2 (ja) | 2010-03-31 |
Family
ID=18588126
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000069193A Expired - Fee Related JP4442983B2 (ja) | 2000-03-13 | 2000-03-13 | トリグリセリド測定試薬 |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4442983B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004087945A1 (ja) * | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Denka Seiken Co., Ltd. | 低密度リポ蛋白中のトリグリセリドの定量方法 |
-
2000
- 2000-03-13 JP JP2000069193A patent/JP4442983B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004087945A1 (ja) * | 2003-03-28 | 2004-10-14 | Denka Seiken Co., Ltd. | 低密度リポ蛋白中のトリグリセリドの定量方法 |
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|---|---|
| JP4442983B2 (ja) | 2010-03-31 |
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