JP2000515735A

JP2000515735A - 肝細胞成長因子レセプターアゴニスト

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Publication number: JP2000515735A
Application number: JP10504193A
Authority: JP
Inventors: ジェイヒラン，ケニース; エイチシュオール，ラルフ; エイチテイボー，ケリー
Original assignee: ジェネンテックインコーポレーテッド
Priority date: 1996-07-03
Filing date: 1997-06-20
Publication date: 2000-11-28
Also published as: AU729029B2; AU3494997A; DK0922102T3; US6099841A; ATE465257T1; EP0922102B1; CA2258153C; WO1998000543A1; IL127558A0; EP0922102A1; CA2258153A1; ZA975851B; DE69739856D1

Abstract

(57)【要約】肝細胞成長因子(ＨＧＦ)レセプターアゴニストが提供される。該ＨＧＦレセプターアゴニストはＨＧＦレセプター抗体とそれのフラグメントを含む。該ＨＧＦレセプターアゴニストはＨＧＦレセプター活性化を実質的に増強することに使用することができる。該ＨＧＦレセプターアゴニストは製薬的な組成物、製造物又はキット中に含めて良い。該ＨＧＦレセプターアゴニストを用いた治療又は診断の方法もまた、提供される。

Description

【発明の詳細な説明】肝細胞成長因子レセプターアゴニスト発明の分野本発明は、アゴニストの抗体を含む肝細胞成長因子レセプターアゴニストに関する。本発明はまた、哺乳動物における特別な病的状態の治療又は診断におけるアゴニストの使用に関する。発明の背景肝細胞成長因子("ＨＧＦ")は特別な組織と細胞タイプのための成長因子として作用する。ＨＧＦは肝細胞のマイトジェンとして最初に同定された［Michalopou losら，Cancer Res.，44:4414-4419(1984);Russelら，J．Cell．Physiol.，119: 183-192(1984);Nakamuraら，Biochem．Biophys．Res．Comm.,122:1450-1459(198 4)］。Nakamuraら,(前記)は部分的に肝切除したラットの血清からのＨＧＦの精製化を報告した。続いて、ＨＧＦはラット血小板から精製され、そしてそれのサブユニット構造が決定された［Nakamuraら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，83:6 489-6493(1986);Nakamuraら，FEBS Letters，224:311-316(1987)］。ヒト血漿からのヒトＨＧＦ("ｈｕＨＧＦ")の精製はGohdaら，J．Clin．Invest.，81:414-41 9(1988)によって最初に記載される。ラットＨＧＦとｈｕＨＧＦの両方は、"デルタ５ＨＧＦ"［Miyazawaら，Bioche m．Biophys．Res．Comm.，163:967-973(1989);Nakamuraら，Nature，342:440-44 3(1989);Sekiら，Biochem．Biophys．Res．Commun.，172:321-327(1990);Tashir oら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，87:3200-3204(1990);Okajimaら，Eur．J．B iochem.，193:375-381(1990)］で表される５アミノ酸を欠く自然に発生した変異のクローン化と配列決定を含む、分子のクローン化がなされている。ヒト血漿から精製した主要な形態に一致する、ｈｕＨＧＦの成熟形態は、アミノ酸Ｒ４９４とＶ４９５の間のヒトのプロ-ホルモンの蛋白分解性の開裂によって誘導されるジスルフィド結合したヘテロダイマーである。この開裂システムは、４４０アミノ酸(Ｍ_r６９ｋＤａ)のα-サブユニット及び２３４アミノ酸(Ｍ_r３４ｋＤａ)のβ-サブユニットから構成される分子を生成する。ｈｕＨＧＦｃ-ＤＮＡの核酸配列は、そのα-及びβ-鎖がプレ-プロ前駆体タンパク質をコード化する単一のオープン読み枠(single open reading frame)中に含まれることを明らかにする。成熟ｈｕＨＧＦの予測された最初の構造において、内部鎖Ｓ-Ｓ架橋は、α-鎖のＣｙｓ４８７とβ-鎖中のＣｙｓ６０４の間に形成される[Nakamura ら，Nature,(前記)参照]。そのα-鎖のＮ-末端は、メチオニン基で開始される、５４アミノ酸によって先行される。このセグメントは特異的な３１残基の疎水性のリーダー(シグナル)配列とそのプロ配列を含む。そのα-鎖はアミノ酸(aa)５５で始まり、且つ４つのクリングルドメインを含む。そのクリングル１ドメインはα-鎖の、約aa１２８から約aa２０６まで延在し、クリングル２ドメインは約a a２１１から約aa２８８の間であり、クリングル３ドメインは約aa３０３から約a a３８３間に延在するとして表され、さらにクリングル４ドメインは約aa３９１から約aa４６４まで延在する。各種のクリングルドメインの定義は、他のタンパク質(プロトロンビンとプラスミノーゲンのような)のクリングル様ドメインとのそれの相同性に基づき、それ故に、上記の限定は、概略に過ぎない。これまで、これらのクリングルの機能は測定されていなかった。ｈｕＨＧＦのβ-鎖はセリンプロテアーゼの触媒的ドメインと高い相同性を示す(プラスミノーゲンセリンプロテアーゼドメインに対し３８％の相同性)。しかしながら、セリンプロテアーゼの触媒的な三組みの形態である３つの残基の２つは，ｈｕＨＧＦ中に保存されていない。それ故に、それがセリンプロテアーゼ様ドメインであるにもかかわらず、ｈｕＨＧＦはタンパク質加水分解活性を有することがないと表され、且つそのβ-鎖の正確な役割は不明のままである。ＨＧＦはα-鎖の位置２９４と４０２、及びβ-鎖の位置５６６と６５３に配置された、４つの推定上のグリコシル化サイトを含む。ラットＨＧＦのアミノ酸配列とｈｕＨＧＦのそれとの対比は、その２つの配列が高度に保存され且つ同じ特徴的な構造的特色を有することを明らかにしている。ラットＨＧＦ中の４つのクリングルドメインの長さは、ｈｕＨＧＦにおけると正確に同じである。さらにまた、そのシステイン残基は正確に同じ位置に、同様の３次元構造の徴候で配される[Okajimaら,(前記);Tashiroら,(前記)]。ヒト白血球から分離した部分において、１５塩基対のイン-フレーム欠落が観測される。ＣＯＳ-１細胞中のｃＤＮＡ配列の移行発現は、クリングル１ドメイン中の５アミノ酸を欠いたコード化ＨＧＦ分子(デルタ５ＨＧＦ)が完全に機能的であることを明らかにする[Sekiら,(前記)]。自然発生的なｈｕＨＧＦ変異形は、Ｎ-末端フィンガーと成熟ｈｕＨＧＦの最初の二つのクリングルドメインのためのコード化配列を含むｈｕＨＧＦ転写体の代替の切り接ぎ形に一致するものと同定されている［Chanら，Science，254:138 2-1385(1991);Miyazawaら，Eur．J．Biochem.,197:15-22(1991)]。ＨＧＦ／ＮＫ２で表されたこの変異形は、成熟ｈｕＨＧＦの拮抗アンタゴニストとされるためのいずれかの研究者によって提案されている。Hartmannらは、しかしながらそのＨＧＦ／ＮＫ２は散乱するＭＤＣＫ細胞を生じる能力を保有することを報告した [Hartmannら，Proc．Natl．Acad.Sci.，89:11574-11578(1992)]。ＨＧＦ／ＮＫ１で表される別なＨＧＦ変異体もまた、ＨＧＦの拮抗アンタゴニストとして作用することが報告される［Lokkerら，J．Biol．Chm.，268:17145-1 7150(1993);Lokkerら，EHBO J.，11:2503-2510(1992)]。Ｎ-末端ヘアピンと第１のクリングルドメインを含むそのＨＧＦ／ＮＫ１分子は、Ａ５４９ヒト肺ガン腫細胞上のＨＧＦレセプターのブロック結合が見出された。また、しかしながら、ＨＧＦ／ＮＫ１のある濃度が、いずれかのアゴニスト的な活性を示唆する、Ａ５４９細胞中のレセプター中のチロシンのリン酸化を検出可能に増加することを誘発することも見出された。従って、ＨＧＦ／ＮＫ１のアゴニストまたはアンタゴニスト作用は細胞タイプに依存するであろうことが確信される。ＨＧＦとＨＧＦ変異形は、米国特許第5,227,158号、同5,316,921号及び同5,32 8,837号中にさらに記載される。ＨＧＦのための高い親和性はｃ-Ｍｅｔプロト-腫瘍細胞の生産として同定されている[Bottaroら，Science，251:802-804(1991);Naldiniら，Oncogene，6:501- 504(1991);1992年8月6日公開のＷＯ９２／１３０９７；1993年8月19日公開のＷＯ９３／１５７５４]。このレセプターは「ｃ-Ｍｅｔ」又は「ｐ１９０^MET」として通例関連し、典型的に固有の形態中に、１９０-ｋＤａヘテロダイマーの(ジスルフィド結合した５０-ｋＤａ α-鎖と１４５-ｋＤａ β-鎖)膜-スパンニングチロシンキナーゼタンパク質を備える[Parkら,Proc．Natl．Acad．Sci．USA，84:6 379-6383(1987)]。ｃ-Ｍｅｔレセプターの幾つかの端を切り取った形もまた、記載されている[ＷＯ９２／２０７９２；Pratら，Mol．Cell．Biol.,11:5954-5962 (1991)]。ｃ-Ｍｅｔに対するＨＧＦの結合活性は、最初の二つのクリングルを含む、ＨＧＦ分子のＮ-末端部分中に配された機能ドメインによって搬送されるものと推定される［Hatsumotoら，Biochem．Biophys．Res．Commun.，181:691-699(1991) ;Hartmannら，Proc．Natl．Acad．Sci.，89:11574-11578(1992);Lokkerら，EMBO J.，11:2503-2510(1992);LokkerとGodowski，J．Biol．Chem.，268:17145-1715 0(1991)］。そのｃ-Ｍｅｔタンパク質はＨＧＦ結合における１４５-ｋＤａ β- サブユニットのチロシン残基をリン酸化することになる。このＨＧＦレセプターに対するある種の抗体は、文献中に報告されている。そのような幾つかの抗体が以下に記される。 Pratら,Mol.Cell.Biol.,(前記)は、ｃ-Ｍｅｔ遺伝子によってコード化したβ- 鎖の細胞外ドメインのための特異的な幾つかのモノクローナル抗体を記載する［ＷＯ９２／２０７９２参照］。モノクローナル抗体は、Ｍｅｔタンパク質で過剰発現した全生存ＧＴＬ-１６細胞(ヒト胃ガン細胞系)によってBalb/cマウスの免疫化の後に選択される。免疫化したマウスから得た脾臓細胞は、Ａｇ8.653ミエローマ細胞と融合され、そしてハイブリッド上澄みはＧＴＬ-１６細胞への結合でスクリーンされる。ＤＬ-２１、ＤＮ-３０、ＤＮ-３１とＤＯ-２４として関係のある、４つのモノクローナル抗体が選択される。 Pratら，Int．J．Cancer，49:323-328(1991)は、ヒトの通常の及び新生物性組織中のｃ-Ｍｅｔタンパク質の分布を検出するために抗-ｃ-Ｍｅｔモノクローナル抗体ＤＯ-２４を用いることを記載する［Yamadaら，Brain Research，637:308 -312(1994)も参照］。ネズミのモノクローナル抗体ＤＯ-２４は、ＩｇＧ２ａアイソタイプ抗体であることが報告される。 Crepaldiら，J．Cell Biol.，125:313-320(1994)は、上皮組織中及びＭＤＣＫ細胞単層中のＨＧＦレセプターの細胞下の分布を同定するために、モノクローナル抗体ＤＯ-２４とＤＮ-３０［Pratら，Mol．Cell．Biol.,(前記)中に記載された］及びモノクローナル抗体ＤＱ-１３を用いることを報告する。Crepaldiらに従うモノクローナル抗体ＤＱ-１３は、ヒトｃ-Ｍｅｔ配列の１９ＣＯＯＨ-末端アミノ酸(Ｓｅｒ¹³⁷²からＳｅｒ¹³⁹⁰まで)に相当するペプチドに対して生起される。ヒトｃ-Ｍｅｔの細胞質ドメインに特異的なモノクローナル抗体もまた記載されている［Bottaroら,(前記)］。 Silvagnoら，Arterioscler．Throm．Vasc．Biol.，15:1857-1865(1995)は、マトリゲルプラグ(Matrigel plugs)中の欠陥形成誘発を開始するためにインビボでｃ-Ｍｅｔアゴニストの抗体を用いることを記載する。上記に参照として挙げたモノクローナル抗体の幾つかは、アップステートバイオテクノロジー社(Upstate Biotechnology Incorporated，Lake Placid，New Yo rk)からの市販として利用できる。ｃ-Ｍｅｔの細胞外エピトープに特異的な、モノクローナル抗体ＤＯ-２４とＤＬ-２１はアップステートバイオテクノロジー社からのものを利用し得る。ｃ-Ｍｅｔの細胞内エピトープのために特有のモノクローナル抗体ＤＱ-１３もまたアップステートバイオテクノロジー社からのものを利用し得る。ｃ-Ｍｅｔへの結合に加え、ＨＧＦは、細胞の表面上に又は細胞外マトリックス中に存在する幾つかのヘパリンとヘパラン硫酸プロテオグリカンに結合することが認められる［Ruoslahtiら，Cell，64:867-869(1991);Lyonら，J．Biol．Che m.，269:11216-11223(1994)］。ヘパラン硫酸はヘパリンに構成と構造が類似したグリコサミノグリカンであり且つ多くの哺乳動物細胞の表面に見出される。各種の仮説が、ある種の成長因子活性の調整におけるヘパリンとヘパラン硫酸プロテオグリカン("ＨＰＳＧｓ")の役割を説明するために提案されている。例えば、結合ヘパリン又はＨＳＰＧｓについて、ある種の成長因子がそれらの各々の高度親和性レセプターに結合するためのより有益な構造を有するであろうことが説明されている［Lindahlら，Annual Rev．Biochem.，47:385-417(1995)］;そのＨＳＰＧｓは、その高い親和性レセプターに対するリガンドの表現を容易にするある成長ファクターのためのドッキングサイトとして利用でき［Yayonら，Cell，64: 841-848(1991);Moscatelliら，J．Biol．Chem．267:25803-25809(1992);Nugent ら， Biochemistry，31:8876-8883(1992)］；さらにそのＨＳＰＧｓは、レセプター活性を促進するリガンドの二量重合を促進することができる［Ornitzら，Mol．Cel l．Biol.，12:240-247(1992);Spivak-Kroizmanら，Cell，79:1015-1024(1994)］。ある成長因子が蛋白分解の活性に対して安定又は耐え得ること［Damonら，J． Cell．Physiol.，138:221-226(1989);Muellerら，J．Cell．Physiol.，140:439- 448(1989);Rosengartら，Biochem．Biophys．Res．Commun.，152:432-440(1988) ］及びヘパリンに結合する場合の変成［Copelandら，Arch．Biochem．Biophys. ，289:53-61(1994)］がさらに主張されている。ＨＧＦと可溶ヘパリン及び他のヘパリン様分子との共インキュベーションは、ＨＧＦと相乗的なＨＧＦ分裂促進活性の二量重合化／オリゴ重合化を促進することが報告されている［例えば1995 年3月16日公開のＷＯ９４／０９９６９；Zioncheckら，J．Biol．Chem.，270:16 871-16878(1995)を参照］。 Mizunoらは、ＨＧＦ分子内のヘパリン-結合サイトに配置することを試みる幾つかの実験を記載する［Mizunoら，J．Biol．Chem.，269:1131-1136(1994)］。M izunoらは各種の検出した変異体ＨＧＦｓ［ｄ-Ｋ１(第１のクリングルドメインの削除)；ｄ-Ｋ２(第２のクリングルドメインの削除)；ｄ-Ｋ３(第３のクリングルドメインの削除)；ｄ-Ｋ４(第４のクリングルドメインの削除)；d-beta(ベータ鎖の削除)；ｄ-Ｈ(Ｎ−末端ヘアピンループの削除)；及びＨＫ１Ｋ２(Ｎ-末端ヘアピン鎖と第１及び第２のクリングルドメインからなる)］を構築し、そして固定化ヘパリンアフィニティーカラムに対するそれら各々の結合性を実験した。ｄ-Ｈとｄ-Ｋ２変異体がヘパリンアフィニティーカラムに対して減じられた結合性を示したその参考の報告では、その一方で本来のＨＧＦとその他の構築されたＨＧＦ変異体とがヘパリンカラムに緊密に結合した。種々の生物学的活性がＨＧＦとそのｃ-Ｍｅｔレセプターのための要望されている［一般に、Chanら，Hepat ocyte Growth Factor-Scatter Factor(HGF-SF)and the C-Met Receptor，Goldbe rgとRosen，eds.，Birkhauser Verlag-Basel(1993)，pp.67-79］。ＨＧＦのレベルが肝臓の障害を持つ患者の血漿中［Gohdaら,(前記)］、及び肝臓にダメージを誘発する実験動物の血漿中［Lindroosら，Hepatol.，13:743-750(1991)］又は血清中［Asamiら，J．Biochem.，109:8-13(1991)］で増加することが観測されている。この応答の速度論は、通例は急激であり、且つ肝臓再生化の間のＤＮＡ合成の第１段階に優先する。ＨＧＦはまた、シュワン細胞、メラノサイト、腎細管細胞、ケラチノサイト、ある種の内皮細胞及び上皮起源の細胞を含む、ある種の細胞タイプのための分裂促進因子として示されている［Matsumotoら，Biochem．Biophy s．Res．Commun.，176:45-51(1991);Igawaら，Biochem．Biophys．Res．Commun. ，174:831-838(1991);Hanら，Biochem.，30:9768-9780(1991);Rubinら，Proc．N atl．Acad．Sci．USA，88:415-419(1991);Krasnoselskyら，J．Neuroscience，1 4:7284-7290(1994)］。ＨＧＦとｃ-Ｍｅｔプロトオンコジーンの両方は、ＣＮＳ障害に対し小膠的反応の役割を演じることが主張されている［DiRenzoら，Oncog ene，8:219-222(1993)］。ＨＧＦはまた、インビトロで上皮の及び血管内皮細胞の分離を促進する活性、「散乱因子(scatter factor)」としても作用することができる［Stokerら，Natu re，327:239-242(1987);Weidnerら，J．Cell Biol.，111:2097-2108(1990);Nald iniら，EMBO J.，10:2867-2878(1991);Giordanoら，Proc．Natl．Acad．Sci．US A，90:649-653(1993)］。その上、ＨＧＦは上皮形態形成因子として記載されている［Montesanoら，Cell，67:901-908(1991)］。それ故に、ＨＧＦは、腫瘍転化において重視すべきことが主張されている［Comoglio，Hepatocyte Growth Fa ctor-Scatter Factor(HGF-SF)and the C-Met Receptor，GoldbergとRosen，eds. ，Birkhauser Verlag-Basel(1993)，pp.131-165］。Bellusciら，Oncogene，2:1 091-1099(1994)は、ＨＧＦがＮＢＴ-II膀胱癌腫細胞の運動性と侵略的な特性を促進できることを報告する。ｃ-ＭｅｔＲＮＡは幾つかのマウス骨髄前駆腫瘍細胞中で検出されている［Iye rら，Cell Growth and Differentiation，1:87-95(1990)］。さらにｃ-Ｍｅｔは各種のヒト固体腫瘍において発現される［Pratら，Int．J．Cancer,(前記)］。ｃ-Ｍｅｔオンコジーンの過剰発現は、濾胞上皮から誘導したチロイド腫瘍の病因及び生殖における役割を演じることも示唆されている［DiRenzoら，Oncogene ，7:2549-2553(1992)］。慢性のｃ-Ｍｅｔ／ＨＧＦレセプター活性化はまた、ある種の悪性疾患において観測されている［Cooperら，EMBO J.，5:2623-2628(198 6);Giordanoら，Nature，339:155-156(1989)］。発明の概要本発明はＨＧＦレセプターに特異的に結合するＨＧＦレセプターアゴニストを提供する。精製したＨＧＦレセプターアゴニストは、マイトジェンの、モトジェニック(motogenic)又はＨＧＦ又はＨＧＦレセプター活性化の他の生物学的活性を実質的に増強することができ、またかくして、肝臓の病的な状態を含む各種の疾患と病的状態の治療において有用である。本発明の一つの実施態様において、該ＨＧＦレセプターアゴニストは抗体である。好ましくは、このアゴニストはモノクローナル抗体である。本発明はまた、ＨＧＦレセプターアゴニストモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞系(hybridoma cell line)を提供する。本発明はまた、１種又はそれ以上のＨＧＦレセプターアゴニストと製薬的に許容される媒体を備える組成物を提供する。一つの実施態様において、そのような組成物は製造物(article of manufacture)またはキット中に含めてよい。本発明はまた、肝細胞の増殖を刺激するためにＨＧＦレセプターアゴニストの有効な量に肝細胞をさらすこと及び増殖している肝細胞内に望ましい遺伝物質を導入することを備える遺伝子治療方法を提供する。本発明は、ＨＧＦレセプターアゴニストの有効な量を哺乳動物に投与することを備える病的肝臓状態を治療するための方法をさらに提供する。該ＨＧＦレセプターアゴニストは単独で哺乳動物に投与してよく、又は代替的に、別の治療薬との組み合わせにおいて哺乳動物に投与してよい。該アゴニストは、治療の、同じく診断の薬剤として使用可能であると確信される。例えば、肝細胞増殖を刺激するためのモノクローナル抗体３Ｄ６(ここに記載される)の能力が与えられ、該抗体アゴニストは急性感不全のための治療として利用してよい。診断薬として、そのようなアゴニストは、例えば哺乳動物の組織中のｃ-Ｍｅｔの過剰発現を検出するために使用してよい。図面の簡単な説明図１Ａと１Ｂは３Ｄ６モノクローナル抗体に対応するミンク肺細胞のインビボ増殖アッセイの結果を示す。図２は６Ｅ１０と３Ｄ６抗体と共にインキュベートされ且つフローサイトメトリーによって分析された肝細胞の平均蛍光強度を説明するグラフを示す。図３はフェレット中３Ｄ６抗体(2mg/kg単独投与)の薬物速度論(血清濃度／時間曲線)を説明するグラフを示す。図４Ａ−４Ｃは：肝細胞増殖指数の平均(４Ａ)；LW/BW比平均パーセンテージ( ４Ｂ)；及び３Ｄ６と６Ｅ１０抗体で治療したフェレット中の２４，４８及び７２時間での平均血清アルブミン濃度（４Ｃ）を示す。図５Ａ−５Ｃは：６Ｅ１０又は３Ｄ６抗体治療２４時間後のフェレット肝臓中の標識化ＢｒｄＵ(５Ａと５Ｂ)を示す；図５Ｂの高い数値、分割した肝細胞を示す（５Ｃ）。図６Ａ−６Ｃは：３Ｄ６抗体治療の４８時間後でのフェレットからの膵臓組織のＨ＆Ｅ染色した断面(６Ａ)；３Ｄ６抗体治療の４８時間後でのフェレットからの膵臓組織のＢｒｄＵ染色断面(６Ｂ)；６Ｅ１０と３Ｄ６抗体治療の２４，４８及び７２時間での腺房細胞増殖指数を説明するグラフ、を示す。図７Ａ−７Ｂは：３Ｄ６抗体治療の４８時間後でのフェレットからの自律神経組織のＨ＆Ｅ染色した断面(７Ａ)；３Ｄ６抗体治療の４８時間後でのフェレットからの自律神経組織のＢｒｄＵ染色断面(７Ｂ)を示す。図８は、フェレット肝臓ｃ-Ｍｅｔのチロシンリン酸化のために試験したフェレットのサンプルのＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真を示す。全てのサンプルはウサギ抗-ホスホチロシンでブロットされる。レーン１と５は単独で賦形剤を受容した；レーン２と６-ＨＧＦ処理したサンプル；レーン３と７-３Ｄ６処理したサンプル；レーン４と８-６Ｅ１０処理したサンプル。対をなすサンプルの各々は単一の動物を表す。レーン１−４はウサギ抗-ｃ-Ｍｅｔで免疫沈降され且つレーン５−８は抗-ホスホチロシン(４Ｇ１０)で免疫沈降される。図９は、サンドウィッチＥＬＩＳＡ中で測定された、Ａ５４９上の３Ｄ６抗体によるｃ-Ｍｅｔリン酸化の誘導を示す。発明の詳細な説明１．定義ここで使用したなような、用語「肝細胞成長因子」と「ＨＧＦ」は、６つのドメイン(フィンガー、クリングル１、クリングル２、クリングル３、クリングル４及びセリンプロテアーゼドメイン)を持った構造を典型的に有し、且つ後述するように、ＨＧＦレセプターへの結合の特性を有する成長因子に関する。用語「肝細胞成長因子」と「ＨＧＦ」は、ヒト("ｈｕＨＧＦ")及びヒトでない哺乳動物の種からの肝細胞成長因子、さらに特にラットＨＧＦを包含する。ここに用いられるような用語は、成熟した、プレ(pre)、プレ-プロ(pre-pro)、及びプロ形態、天然ソースから精製又は分離した、化学的に合成した又は組換えにより作製したものを包含する。ヒトＨＧＦは、Miyazawaら，1989,(前記)，又はNakamuraら，1989,(前記),によって公知のｃＤＮＡ配列によってコード化される。Miyazawa らとNakamuraらによって報告された配列は１４アミノ酸において異なる。その相違の理由は完全に明確ではなく；多型性又はクローン化アーチファクトの可能性がある。両方の配列は、前述の用語によって特に包含される。各個のアミノ酸配列における１つ又はそれ以上のアミノ酸の相違によって示される通り、天然の対立遺伝子のバリエーションは個人の中で存在し且つ起こり得るものと解されるであろう。本発明のＨＧＦは、好ましくは固有の哺乳動物のＨＧＦとの少なくとも約８０％の配列相同性を、より好ましくは約９０％の配列相同性を、さらにより好ましくは少なくとも約９５％の配列相同性を有する。用語「肝細胞成長因子」と「ＨＧＦ」は、Sekiら、(前記)によって開示されたようなデルタ５ｈｕＨＧＦを特に含む。ここで用いる場合、用語「ＨＧＦレセプター」と「ｃ-Ｍｅｔ」は、細胞外ドメイン、膜内外ドメイン及び細胞内ドメイン、同様にＨＧＦに結合するための能力を保有するそれらの変異体とフラグメントを典型的に包含する、ＨＧＦのための細胞のレセプターに関する。用語「ＨＧＦレセプター」と「ｃ-Ｍｅｔ」は、ｐ１９０^METとして各種知られる遺伝子によってコード化される、完全な長さの、固有アミノ酸配列を備えるポリペプチド分子を包含する。本定義は、ＨＧＦレセプターの可溶化形、及び天然ソースから、インビトロで合成的に作製された又は組換えＤＮＡ技術の方法を含む遺伝子操作によって得られたＨＧＦレセプターを特に包含する。該ＨＧＦレセプター変異体又はフラグメントは、Rodriguesら，Mol． Cell．Biol.，11:2962-2970(1991);Parkら，Proc．Natl．Acad．Sci.，84:6379- 6383(1987);又はPonzettoら，Oncogene，6:553-559(1991)において公知のヒトｃ -Ｍｅｔアミノ酸配列のいずれかのドメインとの、少なくとも約６５％の配列相同性を、より好ましくは少なくとも７５％の配列相同性を共有する。ここに開示された各種のポリペプチドを記載するために用いる場合、「分離した」は、その自然な環境からの成分から、同定され且つ分離され及び／又は回復されているポリペプチドを意味する。その自然な環境の不純成分は、ポリペプチドを診断又は治療に用いることに典型的な悪影響を及ぼすであろう物質であり、酵素、ホルモン、及び他の蛋白様の又は非蛋白様の溶質を包含してよい。好適な実施態様において、ポリペプチドは、(1)回転カップシークェネーター(spinning cup sequenator)の使用によってＮ-末端又は内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために十分な程度の、又は(2)クマシンブルー又は好ましくは銀染色を用い非-還元又は還元雰囲気下でのＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均質化によって純化されるであろう。ＨＧＦレセプターアゴニストの少なくとも１つの成分は自然環境には存在しないであろうことから、分離したポリペプチドは組換え細胞内のポリペプチドの元の位置に含まれる。しかしながら通常は、分離したポリペプチドは少なくとの１つの純化工程によって調整されるだろう。ここでの均質性は、他のソースタンパク質とポリペプチドによって５％より少ない汚染を意味する。「分離した」ＨＧＦレセプターアゴニスト核酸分子は、ＨＧＦレセプターアゴニスト核酸の天然ソースにおいて通例関係付けられる少なくとも１種の不純物核酸分子から同定され且つ分離された核酸分子である。分離したＨＧＦレセプターアゴニスト核酸分子は、天然において見出されるそれの形又はセッティングにおいて別なものである。分離したＨＧＦレセプターアゴニスト核酸分子は、それ故に、それが天然細胞中に存在するようなＨＧＦレセプターアゴニスト核酸分子と区別される。しかしながら、分離したＨＧＦレセプターアゴニスト核酸分子は、例えばその核酸分子が天然細胞のそれとは異なる染色体位置にあるように、ＨＧＦレセプターアゴニストが通常に発現した細胞中に含まれる。用語「アミノ酸」はすべて自然に生じるＬ-α-アミノ酸に関連する。この定義は、ノルロイシン、オルニチン、及びホモシステインを含むことを意味する。そのアミノ酸はシングル-レター又はスリー-レター記号のいずれか一方によって表される： Asp Ｄアスパラギン酸 Ile Ｉイソロイシン Thr Ｔスレオニン Leu Ｌロイシン Ser Ｓセリン Tyr Ｙチロシン Glu Ｅグルタミン酸 Phe Ｆフェニルアラニン Pro Ｐプロリン His Ｈヒスチジン Gly Ｇグリシン Lys Ｋリシン Ala Ａアラニン Arg Ｒアルギニン Cys Ｃシステイン Trp Ｗトリプトファン Val Ｖバリン Gln Ｑグルタミン Met Ｍメチオニン Asn Ｎアスパラギン用語「ヘパリン」は、広い概念において使用され、且つしばしばグリコサミノグリカンとして関係する、硫酸化した、直鎖のアニオン性ムコポリサッカリドの不均一群に関する。たとえその他が存在してよいとしても、ヘパリン中の主な糖は：α-Ｌ-イズロン酸2-硫酸塩、2-デオキシ-2-スルファミノ-α-グルコース6- 硫酸塩、β-D-グルクロン酸，2-アセタミド-2-デオキシ-α-D-グルコース、及び L-イズロン酸である。これらと任意の他の糖は、グリコシド結合によって典型的に接合される。ヘパリンの分子量は、分子量測定のソースと方法に基づいて典型的には約6,000から約20,000Ｄａまで変化する。ヘパリンは、各種の細胞と組織、特に、幾つかの哺乳動物種において、肝臓と肺の固有の構成物である。ここで用いる場合、用語「ヘパリン-独立」は、ヘパリンに結合する能力が実質的に減じられた或いはヘパリン、又はヘパラン硫酸とプロテオグリカンを含むヘパリン様グリコサミノグリカンに結合することができない、ＨＧＦレセプターアゴニストを表す。ＨＧＦレセプターアゴニストがヘパリン-独立かどうかの測定は、適当でない実験を除き熟練した研究者によって測定され得る。ここで用いる場合、用語「アゴニスト」と「アゴニスト的な」は、ＨＧＦ生物学的活性又はＨＧＦレセプター活性化を直接的に又は非直接的に、実質的に誘発、促進又は増大することができる分子に関し又は表現する。ここで用いる場合、用語「アンタゴニスト」と「アンタゴニスト的な」は、直接又は間接的に、実質的にＨＧＦ生物学的活性又はＨＧＦレセプター活性化に反作用すること、減じること又は阻害することができる分子に関し又は表現する。ここで用いる場合、用語「ＨＧＦ生物学的活性」は、ＨＧＦのいずれかの分裂促進性(mitogenic)、モトジェニック(motogenic)又は形態形成(morphogenic)活性又は結果としてＨＧＦレセプターへのＨＧＦ結合を生じるいずれかの活性に関する。用語「ＨＧＦレセプター活性化」は、ＨＧＦレセプタ−二量重合化またはＨＧＦ-誘発チロシンキナーゼ活性に関する。ＨＧＦレセプター活性化は、ＨＧＦレセプターへのＨＧＦの結合の結果として生じてよいが、しかしＨＧＦレセプターへのいずれかのＨＧＦ結合の独立を代替的に生じてもよい。ＨＧＦ生物学的活性は、例えば肝細胞成長促進のインビトロ又はインビボアッセイにおいて測定されてよい。最初の培養において成熟ラット肝細胞は肝細胞増殖についてＨＧＦの影響を試験するために使用されている。従って、ＨＧＦレセプターアゴニストの影響は、最初の培養中のラット肝細胞のＤＮＡ合成を誘発するＨＧＦの能力を試験するための好適なアッセイにおいて測定され得る。ヒト又はフェレット肝細胞は、通常のラット肝細胞の最初の培養を調整するために確立された方法と同様に培養され得る。代替的に、ＨＧＦレセプターアゴニストの影響は、後述の実施例中に記したミンク肺細胞又はフェレット肝細胞のような、ＨＧＦレセプターを発現する細胞の別なタイプにおけるＤＮＡ合成を誘導するためのＨＧＦの能力を試験するのに好適なアッセイにおいて測定され得る。ＤＮＡ構成は、例えばＤＮＡ中の³Ｈ-チミジンの混入を測定することによって分析され得る。ＨＧＦレセプターアゴニストの効果は、それの増殖の促進又は増大の能力又はＤＮＡ内の³Ｈ- チミジンの混入によって測定することができる。ＨＧＦレセプターアゴニストの効果はまた、動物モデルにおけるインビボで試験することもできる。用語「抗体」は、ここでは広い概念において使用され、且つ完全な免疫グロブリン又はｈ抗体分子、ポリクローナル抗体、多特異的抗体(すなわち、少なくとも２つの完全な抗体から形成された二特異的抗体)、それらがここに記載したいずれかの望ましいアゴニスト的な特性を示す限りの免疫グロブリンフラグメント(Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ')₂、又はＦｖのような)を含む。抗体は、特異的な抗原に対し結合特異性を示す典型的なタンパク質又はポリペプチドである。固有の抗体は通例、２つの同一の軽い(Ｌ)鎖と２つの同一の重い(Ｈ)鎖から構成されるヘテロ四量体グリコプロテインである。典型的には、それぞれの軽鎖は一つの共有ジスルフィド結合によって重鎖に結合され、ジスルフィド結合の数は異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で変化する。それぞれの重鎖と軽鎖はまた、鎖間のジスルフィド架橋を調整する間隔を有する。それぞれの重鎖は一端で、定常ドメインの数に従う可変ドメイン(ＶＨ)を有する。それぞれの軽鎖は、一端に可変ドメイン(ＶL)、またそれの他端に定常ドメインを有し；該軽鎖の定常ドメインは重鎖の第１の定常ドメインとともに整列され、また軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインとともに整列される。特別のアミノ酸残基が軽鎖と重鎖の可変ドメインの間に界面を形成するものと思われる［Chothiaら，J．Mol．Biol.，186:651-663( 1985);NovotnyとHaber，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，82:4592-4596(1985)］。何れかの脊椎動物の種からの抗体の軽鎖は、それら定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、いわゆるカッパ(κ)とラムダ(λ)の二つの明確に異なるタイプの１つに割り当てることができる。それら重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、免疫グロブリンは異なるクラスに割り当てることができる。免疫グロブリンには五つの主要なクラスがある：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧとＩｇＭ、そしてこれらの幾つかは、例えばＩｇＧ-１、ＩｇＧ-２、ＩｇＧ-３、及びＩｇＧ- ４；ＩｇＡ-１とＩｇＡ-２のようなサブクラス(アイソタイプ)内にさらに分割することができる。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、デルタ、エプシロン、γ、及びμと称される。「抗体フラグメント」は完全な抗体、一般的に完全な抗体の抗原結合性又は可変領域を含む。抗体フラグメントの実施例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ'、Ｆ(ａｂ')₂、及びＦｖフラグメント、ディアボディ(diabodies)、単鎖抗体分子、及び抗体フラグメントから形成される多特異性抗体を含む。用語「可変」は、抗体の中の配列の異なる可変ドメインのある部分を表すためにここで用いられ、且つそれの特別な抗原のためのそれぞれ特異的な抗体の結合性と特異性において用いられる。しかしながら、その可変性は抗体の可変ドメインを経て通例平等には分配されない。それは、相補決定領域(ＣＤＲｓ)と称される三つのセグメントまたは軽鎖と重鎖の可変ドメイン中の中の高度可変領域に典型的に濃縮される。該可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク(ＦＲ)と称される。固有の重鎖と軽鎖の可変ドメインは、それぞれβ-シート構造を大部分採用する、ループ接合を形成する３つのＣＤＲｓによって接続される４つのＦＲ領域を、及び幾つかのケースにおいて部分的に形成するβ-シート構造を備える。各鎖中のＣＤＲｓは、ＦＲ領域と、抗体の抗原結合サイトの形成に寄与する他の鎖からのＣＤＲｓとによって互いに密接した中に保持される［ Kabatら，Sequences of Proteins of Immunological Interest，National Inst itutes of Health，Bethesda，MD(1987)参照］。定常ドメインは抗原への抗体の直接結合において含まれないが、しかし抗原-依存の細胞毒性における抗原の酸化のような各種の効果的機能を呈する。ここで用いるような用語「モノクローナル抗体」は、抗体の実質的に均質な対象物から得られた抗体、すなわち、少量で存在するであろう変異を本質的に生じる可能性を除いて同じである対象物を備える個々の抗体に関する。ここでのモノクローナル抗体は、別な種の又は別の抗体クラス又はサブクラスに属するもの、それらが望ましいアゴニスト活性を示す限りは、同様にそのような抗体のフラグメントから誘導される抗体中の一致する配列と同じか又は同種である鎖の残留物と同じく、特別な種或いは特別な抗体クラス又はサブクラスに属するものから誘導される抗体中の一致する配列と同じか又は同種である重鎖及び／又は軽鎖の部分における「キメラ」抗体を特に含む［米国特許第4,816,567；Morrisonら，Pro c．Natl．Acad．Sci．USA，81:6851-6855(1984)］。ここで用いるような用語「処理、治療(treating)」、「処理、治療(treatment )」及び「治療(therapy)」は、治癒的な治療(curative therapy)、予防的治療(p rophylactic therapy)、及び予防的治療(preventative therapy)に関する。ここで用いるような用語「哺乳動物」は、ヒト、ウシ、ウマ、イヌ及びネコを含む哺乳動物として分類される何れかの動物に関する。本発明の好適な実施態様においては、その哺乳動物はヒトである。ＩＩ本発明の組成物と方法本発明の一つの実施態様において、ＨＧＦレセプターアゴニストが提供される。ＨＧＦレセプターアゴニストの非限定的な実施例は、抗体、タンパク質、糖タンパク質、糖ペプチド、糖脂質、ポリサッカリド、オリゴサッカリド、核酸、生物有機分子、模擬ペプチド、製薬学的剤及びそれの代謝産物、転写及び翻訳制御配列、及び類似物を含む。本発明の別の好適な実施態様において、本発明のＨＧＦレセプターアゴニストＨＧＦレセプター抗体である。例えば、該アゴニスト抗体はポリクローナル抗体でよい。ポリクローナル抗体の調整方法は、熟練した研究者に知られている。ポリクローナル抗体は、例えば免疫化剤、もし望むのならアジュバントの１度又はそれ以上の注射によって、哺乳動物中に生起することができる。典型的には、その免疫化剤及び／又はアジュバントは複数回の皮下又は腹腔内注射によって哺乳動物中に注射されるだろう。好適には、その免疫化剤はｃ-Ｍｅｔポリペプチド又はそれの融合タンパク質を含む。それを免疫化される哺乳動物において免疫するために周知のタンパク質に免疫化剤を共役するのに利用してよい。利用してよいそのような免疫タンパク質の実施例は、鍵穴リンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシのサイログロブリン、及び大豆のトリプシンインヒビターを含むがそれらに限定されるものではない。使用してよいアジュバントの実施例は、完全フロイントアジュバント及びＭＰＬ-ＴＤＭアジュバント(モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコラート)を含む。その免疫化プロトコールは、更なる実験を要せずに当業者によって選択されることができる。哺乳動物は次いで採血され、その血清はＨＧＦレセプター抗体価が分析される。もし望むのなら、哺乳動物は、抗体価増加又はプラトーとなるまで増加させることができる。本発明のアゴニスト抗体は、代替的にモノクローナル抗体でもよい。本発明のアゴニストモノクローナル抗体は、KohlerとMilstein，Nature，256:495-497(19 75)によって記載されたそれらのような、ハイブリドーマ法を用いて調整してよい。ハイブリドーマ法において、マウス又はその他の適当な宿主動物は、典型的には、免疫化剤に特異的に結合するであろう抗体を生産をする又は生産の可能な誘因リンパ球に対し免疫化剤によって免疫化(上述したように)される。代替的に、そのリンパ球はインビトロで免疫化してよい。好ましくは、その免疫化剤はｃ-Ｍｅｔポリペプチド又はそれの融合タンパク質を含む。その免疫化剤は代替的に、そのレセプターへのＨＧＦの結合中に酸化する１又はそれ以上のアミノ酸残基を有するＨＧＦ又はＨＧＦレセプターのフラグメント又は部分を備える。より好適な実施態様において、該免疫化剤は、実施例１中に記載するような、ＩｇＧ配列に融合したｃ-Ｍｅｔの細胞外ドメインを備える。一般に、もしヒト由来の細胞が望ましいならば末梢血液リンパ球(ＰＢＬｓ)が用いられ、もし非-ヒト哺乳動物ソースが望ましいならば脾臓細胞又はリンパ節細胞が用いられる。そのリンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコールのような適当な融合剤を用いて不朽化細胞系と融合される［Goding，Monoclonal Antibodies:Principles and Practice，Academic Press ，(1986)pp.59-103］。不朽化細胞系は、哺乳動物細胞、特に齧歯類動物、ウシ及びヒト由来の骨髄腫細胞を通例は形質転換させる。通例、ラット又はマウス骨髄種細胞系が用いられる。そのハイブリドーマ細胞は、融合しない不朽化細胞の成長又は生存を阻害する１種又はそれ以上の物質を好適に含む適当な培地中で培養してよい。例えば、もしその親細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HGPRT又はHPRT)を欠いているならば、そのハイブリドーマ用の培地は、HGPRT-欠損細胞の成長を実質的に防ぐ、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジン(ＨＡＴ培地)を典型的には含むであろう。好適な不朽化細胞系は、効率的に融合し、選択した抗体-生産細胞によって抗体の安定な高レベルの発現を支持するそれらであり、且つＨＡＴ培地のような培地に感受性である。より好適な不朽化細胞系は、例えば、Salk Institute Cell Distribution Center，San Diego，California及びAmerican Type Culture Coll ection，Rockville，Harylandから得ることができるネズミ骨髄腫系である。そのようなネズミ骨髄腫細胞系の実施例は、下記の実施例１中に記載したP3X63AgU .1である。ヒト骨髄腫及びマウス-ヒト異種骨髄腫細胞系もまた、ヒトモノクローナル抗体の生産のために記載されている［Kozbor，J．Immunol.，133:3001-30 05(198 4);Brodeurら，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications ，Marcel Dekker，Inc.，New York，(1987)pp.51-63］。ハイブリドーマ細胞は培地中で培養され、ＨＧＦレセプターに対して影響を与えるモノクローナル抗体の存在によって分析することができる。好ましくは、ハイブリドーマによって生産されるモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降によって、或いはラジオイムノアッセイ(ＲＩＡ)又は酵素-結合免疫吸着法(ＥＬＩＳＡ)のようなインビトロ結合アッセイによって測定される。そのような技術とアッセイは、当該分野で周知であり、また下記の実施例中でさらに記載される。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、MunsonとPollard，Anal．Bioch em.，107:220-239(1980)のスキャッチャード分析によって測定することができる。望ましいハイブリドーマ細胞が同定された後、そのクローンは、制限希釈法によってサブクローン化され且つ標準的な方法によって成長される［Goding,(前記 )］。この目的のために好適な培地は、例えばDulbeccoの修正イーグル培地とRPM I-1640培地を含む。代替的に、そのハイブリドーマ細胞は哺乳動物中の腹水のようなインビボで成長させてよい。サブクローンによって分泌されるモノクローナル抗体は、例えば、プロテインＡ-セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、またはアフィニティークロマトグラフィーのような通常の免疫グロブリン純化手法によって培地又は腹水液から分離又は純化することができる。そのモノクローナル抗体はまた、米国特許第4,816,567号中に記載されたそれらのように、組換えＤＮＡ法によって作製してもよい。本発明のモノクローナル抗体をコード化するＤＮＡは、通常の手法を用いて容易に分離及び配列決定することができる(例えば、ネズミ抗体の重鎖と軽鎖をコード化する遺伝子に対し特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いることによって )。本発明のハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好適なソースとして保存する。一度の分離で、そのＤＮＡは、組換え宿主細胞中にモノクローナル抗体の合成を得るための、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞、または免疫グロブリンタンパク質を他の方法では誘導できない骨髄腫細胞のような宿主細胞内にトランスフェクションされるように、発現ベクター内に配置してよい。そのＤＮＡはまた、例えば同種ネズミ配列の代わりにヒトの重鎖と軽鎖の定常ドメインのためのコード化配列で置換することによって［米国特許第4,816,567号；Morrisonら,(前記)］または非-免疫グロブリンポリペプチドのためのコード化配列の全て又は一部をコード化する免疫グロブリンへの共有結合化によって、修正してもよい。そのような非-免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインで置換することができ、又はＨＧＦレセプターのための特異性を有する１つの抗原-結合サイトと、異なる抗原のための特異性を有する別の抗原-結合サイトを備えるキメラ二価抗体を創作するために、本発明の抗体の１つの抗原結合サイトの可変領域で置換することができる。より好適な実施態様において、モノクローナル抗体はAmerican Type Culture Collection Accession No．ATCC HB-12093の下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって分泌されるモノクローナル抗体と同じ生物学的特徴を有する。用語「生物学的特徴」は、ｃ-Ｍｅｔへの特異的な結合又はｃ-Ｍｅｔ活性化の実質的な誘発又は増大の能力のような、そのモノクローナル抗体のインビトロ及び／又はインビボでの活性又は特性に関する。本明細書中に開示した通り、３Ｄ６モノクローナル抗体(ATCC HB-12093)は、インビボでの相対的に長い血清半減期を有し、ヘパリン-独立であり、且つ肝細胞増殖と肝臓成長の誘導に重要な影響を及ぼすように特徴付けされる。そのモノクローナル抗体はまた、ここに開示された３Ｄ６抗体と実質的に同じエピトープに好適に結合するであろう。これは、ここでの及び実施例中に記載したような、各種のアッセイの誘導によって測定することができる。例えば、特に開示した３Ｄ６抗体と同じ特異性を有するモノクローナル抗体かどうかを測定するために(すなわち、ATCC寄託No.HB-12093を有する抗体) 、一つには下記の実施例中に記載したような、ｃ-Ｍｅｔチロシンリン酸化アッセイにおいて活性を比較できる。本発明のアゴニスト抗体はまた、一価抗体を含んでもよい。一価抗体の調製方法は、当該分野において周知である。例えば、一つの方法は免疫グロブリン軽鎖と修正した重鎖の組み換え体発現を含む。その重鎖は普通、重鎖架橋化を防止するためにＦｃ領域中の何れかの点で端切りされる。代替的に、相当するシステイン残基は別のアミノ酸残基で置換され又は架橋を防止するために削除される。インビトロでの方法は一価抗体を調製するためにも好適である。それのフラグメント、特にＦａｂフラグメントを製作するための抗体の消化は、当該分野で周知のルーチーンの技術を用いて達成し得る。例えば、消化はパパインを用いて実行できる。パパイン消化の実施例は、1994年12月22日公開のＷＯ９４／２９３４８及び米国特許第4,342,566号中に記載される。抗体のパパイン消化は、Ｆａｂフラグメントと称される、単一抗原結合サイトをそれぞれ持った、２つの同じ抗原結合性フラグメント、及び残余のＦｃフラグメントが典型的に生成する。ペプシン処理は２つの抗原結合サイトを持ち且つ抗原架橋化をさらに可能とするＦ( ａｂ')₂フラグメントを生じる。抗体消化において生じるＦａｂフラグメントはまた、軽鎖の定常ドメインと重鎖の第１の定常ドメイン(ＣＨ₁)をも含む。Ｆａｂ'フラグメントは、抗体ヒンジ領域から１又はそれ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ₁ドメインのカルボキシ終端での幾つかの残基の付加によってＦａｂフラグメントと異なる。Ｆａｂ'-ＳＨは遊離チオール基を生じる定常ドメインのシステイン残基によってＦａｂ'のためのここでの定義である。Ｆ(ａｂ')₂抗体フラグメントは、それらの間にヒンジシステインを有するＦａｂ'フラグメントの対として本来は生産される。抗体フラグメントの別の化学的カップリングは周知である。上述したアゴニスト抗体に加え、キメラ又はハイブリッドアゴニスト抗体は、架橋剤を含むそれらを含んだタンパク質の化学的な合成における周知の方法を用いてインビトロで調製してよいことが考慮される。例えば、イムノトキシンはジスルフィド交換反応を用いて又はチオエーテル結合を形成することによって構築してよい。この目的のために好適な試薬の実施例は、イミノチオラートとメチル -4-メルカプトブチルイミダートである。本発明のアゴニスト抗体はヒト化抗体又はヒト抗体をさらに備えてよい。非- ヒト(例えばネズミ)抗体のヒト化形態は、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖又は非-ヒト免疫グロブリンから誘導した最小配列を含むそれのフラグメント（Ｆｖ、Ｆａｖ、Ｆａｖ'、Ｆ(ａｂ')₂又は抗体の別な抗原-結合サブ配列のような）である。ヒト化抗体は、望ましい特異性、親和性及び能力を有するマウス、ラット又はウサギのような非-ヒト種(ドナー抗体)のＣＤＲからの残基で置換したレシピエントの相補決定領域(ＣＤＲ)からの残基中にヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)を含む。幾つかの例示において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は相当する非-ヒト残基で置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体中或いは移入したＣＤＲ又はフレームワーク配列中でも見出されない残基をも備えてよい。一般に、ヒト化抗体は、非-ヒト免疫グロブリンのそれらと一致するＣＤＲ領域の全て又は実質的に全て、及びヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のそれらであるＦＲ領域の全て又は実質的に全てにおいて、少なくとも一方、典型的には両方の可変領域の実質的に全てを備えるであろう。ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域(Ｆｃ)、典型的にはヒト免疫グロブリンのそれの少なくとも一部を任意に備えるであろう［Jonesら、Nature，321:522-525(198 6);Riechmannら，Nature，332:323-329(1988);及びPresta，Curr．Op．Struct． Biol．2:593-596(1992)］。非-ヒト抗体のヒト化のための方法は、当該分野で周知である。一般に、ヒト化抗体は非-ヒトであるソースからその中に導入される１又はそれ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非-ヒトアミノ酸残基はしばしば「移入」可変領域から典型的に得られる、「移入」残基として関係する。ヒト化はウィンターら(Win ter and co-workers)の方法［Jonesら，Nature，321:522-525(1986);Riechmann ら，Nature,332:323-327(1988);Verhoeyenら，Science，239:1534-1536(1988)］に続いて、ヒト抗体の相当する配列と齧歯類動物のＣＤＲｓまたはＣＤＲ配列との置換によって、必須に実行できる。従って、そのような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり(米国特許第4,816,567号)、この点で非-ヒト種からの相当する配列によって置換されている完全なヒト可変ドメインよりも実質的に劣る。実際に、ヒト化抗体は、齧歯類動物抗体中の類似サイトからの残基によって置換される何れかのＣＤＲ残基及び可能性のある何れかのＦＲ残基においては、典型的なヒト抗体である。ヒト化抗体の作製において用いるべき軽鎖と重鎖の両方の、ヒト可変ドメインの選択は、抗原性を現実ために非常に重要である。「ベスト-フィット」法に従って、齧歯類動物抗体の可変ドメインの配列は、周知のヒト可変ドメイン配列の全体のライブラリーに対してスクリーンされる。齧歯類動物のそれに閉じ込めるヒト配列は、ヒト化抗体のためのヒトのフレームワーク(ＦＲ)として受け取られる［Simsら，J．Immunol.，151:2296-2308(1993);ChothiaとLesk，J．Mol．Biol. ，196:901-917(1987)］。別な方法は、軽鎖と重鎖の特別のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導される特別なフレームワークを用いる。同じフレームワークを、幾つかの異なるヒト化抗体のために使用してよい［Cart erら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，89:4285-4289(1992);Prestaら，J．Immuno l.，151:2623-2632(1993)］。抗体が、抗原への高い親和性の及びその他の有利な生物学的特性を保持しつつヒト化することがさらに重要である。この目的達成のため、好適な方法に従い、ヒト化抗体は、親とヒト化配列の３次元モデルを用いて親配列と各種の概念的なヒト化した生成物の分析方法の手法によって調製される。３次元免疫グロブリンモデルが普通に利用でき、当業者にとって普通のものである。コンピュータープログラムは、免疫グロブリン配列の選択した候補の有望な３-次元組織的構造を図示及びディスプレイするのに利用できる。これらのディスプレイの調査は、免疫グロブリン配列候補の機能性におけるその残基の可能性のある役割の分析、すなわち、それが抗原に結合するために免疫グロブリン候補の能力に影響を及ぼす残基の分析を可能にする。この方法において、一致し且つ重要な配列から選択され及び結合することができるＦＲ残基を、標的抗原への親和性を増加するような望ましい抗体特性とすることが達成される。一般に、ＣＤＲ残基は、直接的であり抗原結合性の感化において最も実質的に包含される［1994年3月3日公開のＷＯ９４／０４６７９参照］。免疫化に関して、内因性の免疫グロブリン生成の不在においてヒト抗体の完全なレパートリーを生産することができるトランスジェニック動物(例えばマウス) を利用することができる。例えば、キメリックで生殖系変異マウス中の抗体重鎖接合領域(JH)遺伝子のホモ接合削除は、内因性抗体生産の完全な阻害の結果を生じる。そのような生殖系変異マウスにおけるヒト生殖系免疫グロブリン遺伝子の転移は、抗原チャレンジについてヒト抗体の生産を生ずるであろう［例えば、Ja kobovitsら，Proc．Natl．Acad．Sci．USA，90:2551-2555(1993);Jakobovitsら，Nature，362:255-258(1993);Bruggemannら，Year in Immuno.，7:33-40(1993) 参照］。ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーにおいて生産することもできる［HoogenboomとWinter，J．Mol．Biol.，227:381-388(1991);Marks ら，J．Mol．Biol.，222:581-597(1991)］。Coleら及びBoernerらの技法もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用できる［Coleら，Monoclonal Ant ibodies and Cancer Therapy，Alan R．Liss,p.77-96(1985)とBoernerら，J．Im munol.，147(1):86-95(1991)］。本発明の別な実施態様において、肝臓の病的状態を治療するための方法が提供される。本発明によって考慮される病的肝臓状態は、急性肝不全、アルコール性肝炎、及び急性又は慢性肝炎(肝硬変の不在が好ましい)を含む。そのような状態の診断は医療の開業医又は臨床医のルーチンスキルの範囲内である。その方法において、ＨＧＦレセプターアゴニストが単独で又は他の治療技術とさらに組み合わせてにおいて、哺乳動物に投与される。該アゴニストは好ましくは製薬的に許容される担体において哺乳動物に投与される。好適な担体及びそれの調剤は、Remingtons' Pharmaceutical Sciences，1 6th ed.，1980，Mack Publishing Co.，edited by Oslo et al.中に記載される。典型的には、製薬的に許容される塩の適当な量が調剤等張を行うために調剤中に使用される。製薬的に許容される担体の実施例は、生理食塩水、リンゲル液及びデキストロース液を含む。その溶液のｐＨは好ましくは約５から約８まで、より好適には約７から約７．５までである。さらに担体は、例えばマトリックスがフィルム、リポソーム又はミクロ粒子のような形状物である、アゴニスト含有固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスのような持続解放製剤を含む。例えば投与のルート及び投与されているアゴニストの濃度がより好適となるであろうある種の担体について当業者はそれを予測するであろう。該アゴニストは注射によって(例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、門脈内)、又は有効な形態においてそれを血流に搬送させる温浸法のような他の方法によって哺乳動物に投与することができる。該アゴニストはまた、局所治療効果を出すために、分離した肝臓灌流のような分離灌流技術によって投与してもよい。局部又は静脈内注射が好適である。該アゴニストの投与のための有効な投薬量とスケジュールは、経験的なものであり、そのような決定の作製は当該分野の技量の範囲内である。当業者であれば、例えば該アゴニストを受ける哺乳動物への、投与ルート、使用するアゴニストの特有の型及び哺乳動物に投与されている他の薬剤に基づいて投与する必要のあるアゴニストの投与量を変えるであろうことを理解するであろう。抗体アゴニストのための適切な投与量の選択におけるガイダンスは、例えば、Handbook of Mo noclonal Antibodies，Ferroneら，eds.，Noges Publications，Park Ridge，N. J.，(1985)ch．22 and pp.303-357;Smithら，Antibodies in Human Diagnosis a nd Therapy，Haberら，eds.,Raven Press，New York(1977)pp.365-389のような抗体の治療的使用に関する文献中に見出される。単独で使用するアゴニストの典型的な一日当たり投与量は、約１μｇ／体重ｋｇから１００ｍｇ／体重ｋｇまでの範囲としてよく、又は上述したファクターに基づいて一日当たりそれ以上としてよい。該アゴニストはまた、１種それ以上の他の治療薬の有効量と組み合わせて哺乳動物に投与してもよい。該アゴニストは、１種又はそれ以上の治療薬と逐次的に又は同時に投与されてよい。アゴニストと治療薬の量は、例えば使用する薬剤のタイプ、治療するべき病状、及びスケジュール及び投与ルートなどに基づくが、しかし一般には、各々が患者に用いられる場合よりも少ないであろう。哺乳動物へのアゴニストの投与に続いて、その哺乳動物の生理的状態は、熟練した開業医に周知の各種の方法においてモニターすることができる。その方法において、哺乳動物の肝細胞は肝細胞増殖を刺激するためにＨＧＦレセプターアゴニストの有効量にさらされ、且つ望ましい遺伝物質が増殖している肝細胞内に導入される。その肝細胞は生体内又は生体外でＨＧＦレセプターアゴニストにさらされる。好適な実施態様において、肝細胞は３Ｄ６抗体の有効量にさらされる。典型的には、その望ましい遺伝物質は臨床上重要なポリペプチド又はタンパク質をコード化する核酸であろう。望ましい遺伝物質は、例えば哺乳動物が必要とする又は不足しているタンパク質をコード化する遺伝子であってよい。本発明によって考慮されるその遺伝子治療法は、しかしながら、肝臓細胞又は組織の生理又は健康に直接的又は間接的に影響を与える遺伝物質を導入することに限定することを意図するものではない。実施例のために、その遺伝物質はＬＤＬレセプターコード化核酸及びＬＤＬレセプター欠損を有する哺乳動物の増殖している肝細胞内に導入することができるような核酸でよい。哺乳動物の肝細胞内に遺伝物質( 典型的にはベクター中に含む)を搬送するための２つの主要なアプローチ-インビボ及びインビトロ、がある。インビボ搬送では、その遺伝物質は哺乳動物内、好適には肝臓組織内に、直接注入又は搬送されてよい。ＨＧＦレセプターアゴニストは、上述したような各種の方法を通してその哺乳動物に投与してよい。インビトロ搬送では、その哺乳動物の肝細胞又は肝臓組織が、部分的肝切除術のように、哺乳動物から外科的に取り出され、その肝細胞は細胞増殖を刺激するためにＨＧＦレセプターアゴニストにさらされ、そして遺伝物質がその肝細胞内に導入される。そのインビトロで治療された肝細胞は、哺乳動物に投与され又は元に移入される。増殖している肝細胞内に該望ましい遺伝物質を導入するために、利用し得る技術は各種あり、またそれは当該分野においては周知である。その技術は、例えば該遺伝物質がインビボかインビトロのいずれかで肝細胞内に搬送されるかによって変更されるであろう。インビトロで肝細胞内への遺伝物質の転移するための好適な技術は、ベクター、リポソーム、電気泳動、ミクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥ-デキストリン、及びリン酸カルシウム析出の使用を含む。遺伝物質のインビトロ搬送のために普通に用いるベクターは、レトロウイルスである。インビボ遺伝子搬送技術は、ウイルスベクター(アデノウイルスのような)と脂質-ベース系とのトランスフェクションを含む。リポソームが用いられる場合、エンドサイトーシスと結合した細胞表面タンパク質に結合するタンパク質が標的化及び／又は取り込みのために使用され得る。幾つかの遺伝子搬送プロトコールのレビューのため、Andersonら，Sciece，256:808-813(1992);ＷＯ９３／２５６７３を参照。本発明のさらに別な実施態様において、診断アッセイにおけるアゴニストの利用のための方法が提供される。例えば、該アゴニストは、特異的な細胞と組織中のＨＧＦレセプターの過剰発現を検出するための診断アッセイにおいて用いることができる。当該分野において周知の各種の診断アッセイ、インビボイメージングアッセイ、インビトロ競合結合アッセイ、直接又は間接サンドウィッチアッセイ及び異種又は同種相のいずれかで誘導される免疫沈降アッセイのような方法を使用してよい［Zola，Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques，CRC Pr ess，Inc．(1987)pp.147-158］。該診断アッセイにおいて用いるアゴニストは、検出可能な成分で標識することができる。その検出可能な成分は、直接又は間接のいずれかの検出可能な信号を生成することが可能とすべきである。例えば、その検出可能な成分は、³Ｈ、¹⁴Ｃ、³²Ｐ、³⁵Ｓ、又は¹²⁵Ｉのようなラジオアイソトープ、フルオレセインイソチオシアナート、ローダミン、又はルシフェリンのような蛍光体又は化学発光物質、又はアルカリホスファターゼ、ベータガラクトシダーゼ又はホースラディッシュペルオキシダーゼのような酵素としてよい。該検出可能な成分へのアゴニストの接合化のためには当該分野で周知のいずれかの方法が使用でき、Hunterら，Nature，144:945(1962);Davidら，Biochemistry，1 3:1014-1021(1974);Painら，J．Immunol．Meth.，40:219-230(1981);and Nygren ，J．Histochem．and Cytochem.，30:407-412(1982)によって記載されたそれらの方法を含む。加えて、本発明のアゴニスト抗体は、ＨＧＦレセプターの免疫純化のために使用できる。本発明の更なる実施態様において、遺伝子治療、病的肝臓状態の治療又はＨＧＦレセプターの検出又は純化のために使用する材料を含む製作物またはキットが提供される。その製作物は、標識を持った容器を備える。好適な容器は、例えばボトル、バイアル及び試験管を含む。該容器はガラス又はプラスチックのような各種の材料で形成することができる。該容器は、遺伝子治療、病的肝臓状態の治療又はＨＧＦレセプターの検出又は純化のために有効である活性剤を有する組成物を保持する。該組成物中の活性剤は、ＨＧＦレセプターアゴニストであり、好適にはｃ-Ｍｅｔ用の特異的なモノクローナル抗体を備える。さらにより好ましくは、該活性剤は３Ｄ６モノクローナル抗体を含む。容器上の標識は、該組成物が遺伝子治療、病的肝臓状態の治療又はＨＧＦレセプターの検出又は純化のために使用されることを示し、且つ上述したそれらのような、インビボ又はインビトロでの使用のいずれかの指示もまた表示することもできる。本発明のキットは、上述した容器と、緩衝液を含む第２の容器とを備える。それは、他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、及び使用のための器具とともに挿入するパッケージを含む、市販及びユーザーの立場から望まれる他の材料をさらに含めることができる。本発明は以下の実施例を参照することによってより完全に理解されるであろう。それらは、しかしながら本発明の範囲を限定するために説明するものではない。ここで引用する全ての参考文献は参考によって併合される。実施例１モノクローナル抗体３Ｄ６の調製Ｂａｌｂ／ｃマウス(Charles River Laboratoriesより入手)は、各後脚パッド内に５回、２．５μｇ／５０μｌのｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧ融合タンパク質(Ribi Immu nochemical Research Inc.，Hamilton,HTから購入したＭＰＬ-ＴＤＭアジュバント中で希釈した)の注射によって免疫化される。注射は０日及び５６，６３，６６及び７３日に投与される。該ｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧ融合タンパク質(ヒトＩｇＧ１重鎖に融合したｃ-Ｍｅｔの細胞外ドメインを含む)は、Markら，J．Biol．Chem. ，267:26166-26171(1992)によって記載されたように必須的に構成され且つチャイニーズハムスター卵巣(ＣＨＯ)細胞中で生産される。該ｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧは、 Chamowら，J．Immunol.，153:4268-4280(1994)からの修正された溶出スキームを用いた固定化プロテインＡ(Bioprocessing，Inc.，Princeton，NJ)上のアフィニティクロマトグラフィーを用いた単一工程で続いて純化される。培養上澄みはプロテインＡカラムにかけられ、２０ｍＭトリス，ｐＨ７．４、０．１５ＭＮａＣｌ中で平衡化される。該カラムは、非-特異的結合タンパク質を除去するために、最初に平衡化緩衝液で、次いで０．５Ｍの塩酸テトラメチルアンモニウムを含む平衡化緩衝液で洗浄される。ｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧは２０ｍＭトリス、ｐＨ７．４、３．５ＭＭｇＣｌ₂液で溶出される。このｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧ溶出物は濃縮され、そして約２-４ｍｇ／ｍｌの最終濃度に、セファデックスＧ２５上のゲル濾過によって２０ｍＭトリス、ｐＨ７．４，０．１５ＭＮａＣｌに交換される。７７日に、膝窩リンパ節が該マウスから除去され、単細胞懸濁液が、１％ペニシリン-ストレプトマイシンを補足したＤＭＥＭ培地(Biowhitakker社から入手) 中に調製される。該リンパ節細胞は、次いで３５％ポリエチレングルコールを用いてネズミ骨髄腫細胞P3X63AgU.1(ATCC CRL 1597)と融合され、さらに９６穴培養プレート中で培養される。融合で生じたハイブリドーマはＨＡＴ培地中で選択される。融合の１０日後、ハイブリドーマ培養上澄みが、ｃ-Ｍｅｔ融合タンパク質に結合するモノクローナル抗体の存在用の試験のため、ＥＬＩＳＡ中でスクリーニングされる。ＥＬＩＳＡ中、９６穴ミクロタイタープレート(Nunc)は、各穴毎に２μｇ／ｍｌヤギ抗-ヒトＩｇＧＦｃ(Cappel Laboratoriesより購入)の５０μｌを加えることによりコートされる。そのプレートは、次いで蒸留水で３回洗浄される。ミクロタイター中の穴は２％ウシ血清アルブミンの２００μ１でブロックされ、室温で１時間インキュベートされる。プレートは次いで、再度蒸留水で３回洗浄される。洗浄工程の後、0.4μｇ／ｍｌのｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧ融合タンパク質が各穴に加えられる。該プレートは震とう装置上、室温で１時間インキュベートされ、続いて蒸留水で３回洗浄する。次いで、ハイブリドーマ上澄みの１００μｌが指定した穴に加えられる。P3X6 3AgU.1ネズミ骨髄腫細胞調製培地がコントロールとして他の指定した穴に加えられる。該プレートは震とう装置上、室温で１時間インキュベートされ、次いで蒸留水で３回洗浄される。次に、アッセイ緩衝液(ＰＢＳ中、0.5％ウシ血清アルブミン、0.05％Tween-20 、0.01％チマーソル)で１：１０００に希釈された５０μｌＨＲＰ-接合したヤギ抗-マウスＩｇＧＦｃ(Cappel Laboratoriesから購入)が各穴に加えられ、該プレートは震とう装置上、室温で１時間インキュベートされる。該プレートは蒸留水で３回洗浄され、続いて各穴毎に基質(5mgＯＰＤ、12.5mlＰＢＳ、５μｌＨ₂ Ｏ₂)の５０μｌを加えた後、室温で１０分間インキュベーションされる。該反応は各穴毎に２Ｎ硫酸アンモニウム５０μｌの添加によって停止され、そして４９０ｎｍでの吸光度が自動ミクロタイタープレートリーダーで測定される。ＥＬＩＳＡ中でスクリーニングしたＯｆ９１２ハイブリドーマ上澄みは、２４の上澄みが陽性の試験をした(上記バックグラウンドでほぼ２回計測)。ＥＬＩＳＡ中で陽性試験した上澄みはさらに、ヒトｃ-Ｍｅｔを発現するＢＡＦ３移入細胞を用いてＦＡＣＳ分析によって分析される。その移入ＢＡＦ３細胞は、次のように構築される。発現プラスミドは、pRK5.tk.neoベクター内にヒトｃ-Ｍｅｔのための完全長ｃＤＮＡ(ｐＯＫ met ｃＤＮＡとしてRodriguesら(前記)中に記載される)の挿入によって調製される［de Sauvageら，Nature，369:533-538(1994) ;Gorman，DNA Cloning:A New Approach，2:143-190(IRL Washington 1985)］。得られたプラスミドは線状化され且つエレクトロポレーション(８００マイクロファラッド、２５０Ｖ、ＢＲＬエレクトロポレーター)によって、ＩＬ-３従属細胞系、ＢａＦ３［Palaciosら，Cell，41:727-734(1985)］内に移入される。移入体の選択は、２ｍｇ／ｍｌＧ４１８の存在において２-３週間細胞を培養することによって実行される。BaF3-hmet.8として関連する、選択した移入体細胞の一つは、ｃ-Ｍｅｔの発現をウエスタンブロッティングによって確認される。BaF3- hmet.8はまた、³Ｈ-チミジンの混入を測定する増殖アッセイにおいてＨＧＦへの応答についての陽性をも試験した。親ＢａＦ３細胞とpRK5.tk.neoベクターの移入によって誘導したいずれかの細胞のいずれもが、発現ｃ-Ｍｅｔ又は増殖アッセイにおいてＨＧＦへの応答を見出すことはなかった。そのBaF3-hmet.8細胞は、１０％胎児ウシ血清、５％ＷＥＨＩ-調製培地(IL-3 のソースとして)及び２ｍＭグルタミンによって補足したＲＰＭＩ培地中で培養される。該分析を行う前に、その細胞はアッセイ培地(１０％胎児ウシ血清で補足したＲＰＭＩ培地)で２度洗浄され、５×１０⁴細胞／ｍｌの濃度となるようアッセイ培地中に懸濁させる。そのハイブリドーマは制限希釈法によって２度クローン化され、次いでアゴニスト特性を特徴付けされる。３Ｄ６モノクローナル抗体が選択され、プロテインＧアフィニティーカラムを用いて腹水から純化され、滅菌濾過され、使用の前に４℃で保存される。リムルスアメボサイト溶解産物アッセイによって測定されるような内毒素活性(ＥＵ)は、１ＥＵ／ｍｇより小さい。実施例２ミンク肺細胞系を用いるインビトロアッセイミンク肺細胞(Ｍｖ１Ｌｕ，ＡＴＣＣＣＣ１６４)は、１０％胎児ウシ血清、２ｍＭグルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補足したＨＥＭ中で培養される。アッセイの実行の前に、該ミンク肺細胞はトリプシン-ＥＤＴＡ(シグマ社)によって培養フラスコから解放され、アッセイ培地(１ｍｇ／ｍｌＢＳＡと２ｍＭグルタミンで補足したＤＭＥ／Ｆ１２培地)で２度洗浄し、１×１０⁵細胞／ｍｌの濃度にアッセイ培地中に再懸濁され、９６穴プレートに移植される。組換えヒトＨＧＦ(rhuＨＧＦ)が、Nakaら，J．Biol．Chem.，267:20114-20119 (1992)からの変法を用いてＣＨＯ細胞内に生成される。rhuＨＧＦ-移入細胞は、培養槽内の２％胎児ウシ血清を含む４００Ｌの培地中で８日間培養される。rhu ＨＧＦを含む培養上澄みは濃縮され且つ清澄化され、次いで０．３モルとなる固形ＮａＣｌの添加で調整される。rhuＨＧＦはカチオン交換クロマトグラフィーを用いる単一工程において純化される。調整され、濃縮された上澄みは、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５，０．３ＭＮａＣｌ中で平衡化したＳ-セファロース高速流のカラムにかけられる。非結合タンパク質洗浄後、rhuＨＧＦは、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５，０．３ＭＮａＣｌから、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５，１．２ＭＮａＣｌ間での直線的濃度勾配において溶出される。rhuHＧＦ含有フラクションは、ＳＤＳ-ＰＡＧＥ分析に基づいてプールされる。そのＳセファロース高速流プールは濃縮され、約３−５ｍｇ／ｍｌの最終濃度に、セファデックスＧ２５によるゲル濾過によって、２０ｍＭトリス、ｐＨ７．５，０．５ＭＮａＣｌに交換される。rhuＨＧＦ保存溶液は、１０μｇ／ｍｌの濃度となるようアッセイ緩衝液(ＰＢＳ中、0.5％ウシ血清アルブミン、0.05％Tween-20、0.01％チマーソル)でrhuＨＧＦを希釈することによって調整される。アッセイ緩衝液中のｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧ(実施例１中に記載した)は、２０μｇ／ｍｌの濃度に調製される。ヒトｃ-Ｍｅｔを認識するがしかしミンクｃ-Ｍｅｔはしない、ＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体３Ｃ１(ジェネンテック社)が、陰性コントロールとして使用される。３Ｄ６(実施例１中に記載の通り)と３Ｃ１抗体は、変化させた濃度でアッセイ培地中に希釈され、且つ抗体調製物の１００μｌ(又はrhuHＧＦ又はｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧの１００μｌ)が、図１Ａと１Ｂ中に示す最終濃度を生じるように９６穴プレート中の指定した穴に加えられる。そのプレートは５％ＣＯ₂中で１６時間インキュベートされる。次に、１μＣｉ³Ｈ-チミジンが各穴に加えられ、さらに該プレートは３７℃且つ５％ＣＯ₂中で２４時間インキュベートされる。その細胞は細胞ハーベスター( Packard Filtermate 196 cell harvestor)によってプレート(Packerd Unifilter GF/B plates)上に収穫される。ＤＮＡ内に混入した放射能の量は、シンチレーションカウンター(Packard Top-Count microplate scintillation countor)において定量化される。図１Ａと１Ｂはその結果を示す。統計上の分析は、分散の分析によって試験される("ＡＮＯＶＡ")。ＤＮＡ合成は、ＨＧＦと３Ｄ６においてベースライン上に有意に増加した(ｐ＜0.05)。最大の応答は、１０ｎｇ／ｍｌの濃度での３Ｄ６によって達成された。ＨＧＦと３Ｄ６の刺激効果は、可溶化ｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧによる投与量一従属手法において特に示される。細胞がコントロール抗体、３Ｃ１の存在において培養される場合、ＤＮＡ合成においてバックグラウンドを越える増加はなかった。ｃ-Ｍｅｔ−ＩｇＧによるミンク肺細胞の増殖のベースライン阻害は、ミンク肺細胞によってオートクライン手法において分泌した、培養における少量のＨＧＦの阻害の結果となる(データは示さない)。実施例３最初のフェレット肝細胞を用いるインビトロアッセイ若いオスのフェレット(450-920ｇ)は、Marshall farms，Syracuse，New York から入手した。その全部の動物は、発送の前に去勢され且つ下降(descented)される。その動物は１２時間、明／暗の下で群収容され且つ標準実験フェレット食を給餌させる。全ての実験は一般に知られ、且つＡＣＵＣ規格によって推奨されるガイドラインに基づいて実行される。最初のフェレット肝細胞は、アールの緩衝塩溶液中、0.05％コラゲナーゼタイプＩＶを用い、修正した再循環２-段階in situコラゲナーゼ灌流技法［Seglen,M eth．Cell Biol.，13:29-83(1976)］により分離される。肝臓は２５ｍｌ／分で1 0-15分間灌流される。除去後、肝臓は鋏で細分し、ガーゼを通して濾過し、且つその細胞懸濁液は３５ミクロンのナイロンメッシュ(Small Parts，Inc.，Miami Lakes，FLから入手)を通過させる。使用の前に、細胞は洗浄し、且つレイボビッッ１５培地(Gibco)中で３度、５０ｇでペレット化される。分離した肝細胞(１×１０⁶／ｍｌ)は、１０μ／ｍ１３Ｄ６抗体(実施例１中に記載した)又は６Ｅ１０(陰性コントロールとして用いる、ＨＩＶ１のｇｐ１２０グリコプロテインを認識するＩｇＧ１マウスモノクローナル抗体；ジェネンテック社)の存在又は不在において、室温で１時間、胎児ウシ血清を含むＬ１５培地中でインキュベートされる。その細胞は次いで３回洗浄し、Ｒ-フィコエリスリン接合ヤギ抗-マウス抗体(Jacson Immunoresearch Laboratories社，West Grove ，PA)(１μｇ／ｍｌ)とともに１時間インキュベートされる。洗浄後、ヨウ化プロビジウムが死滅細胞の除外をさせるために加えられる。一貫して80-90％である細胞生活能力、及び肝細胞への抗体結合性がフローサイトメトリーによって分析される。図２中に示す通り、３Ｄ６によるインキュベーション、しかし６Ｅ１０とではない、は、３Ｄ６抗体がｃ-Ｍｅｔレセプターを認識し且つ結合することを指示する平均蛍光強度におけるログシフトを誘導した。実施例４フェレットを用いるインビボアッセイ若いオスのフェレット(450-920ｇ)は、Marshall farms，Syracuse，New York から入手した。その全部の動物は、発送の前に去勢され且つ下降(descented)される。その動物は１２時間明／暗の下で群収容され且つ標準実験フェレット食を給餌させる。全ての実験は一般に知られ、且つＡＣＵＣ規格によって推奨されるガイドラインに基づいて実行される。Ａ．薬物速度論内在ポリエチレンカテーテル(Becton Dickinson，Sparks，MDから市販品を利用)が、投与の５日前、２匹のフェレットの頸動脈に麻酔下に移植される。３Ｄ６又は６Ｅ１０抗体(実施例１に記載の通りで且つ3,2mg/kg)のボーラス注入の後、１ｍｌの血液サンプルが、0.033，１，４，７，２４，４８及び123.5時間で捕集される。血清は分析される前まで−２０℃で保存される。フェレット血清中の３Ｄ６と６Ｅ１０抗体の濃度が、サンドウィッチＥＬＩＳＡ技法を用いて測定される。そのプレートは、ｃ-Ｍｅｔ-ＩｇＧ(実施例１中に記載の通り調製された２μｇ／ｍｌ)によって４℃で一晩、コートされる。そのブロック化の後、該プレートは希釈したフェレット漿液と共にインキュベートされる。抗体のＦｃ部分が、１：１０００に希釈したＨＲＰ-接合ヤギ抗-マウスＦｃ(Amersham社)により検出される。各フェレットからのデータは、時間データに対する秤量していない血清濃度の２つの指数の合計を合わせることによって分析される。導かれた薬物速度論パラメータは、計数と指数から算出される［Wagner，Parmacokin．Biopharm.，4:443 -467(1976)］。一般に、３Ｄ６抗体は血清中で良好な耐性及び安定性がある。３Ｄ６単独(2mg /kg)静脈内投与後の一匹のフェレットからの血清濃度一時間曲線を図３に示す。その循環は血清濃度データを表し、その実線は、データ−Ｃｔ＝２０．６ｅｘｐ (-0.082t)＋１１．９ｅｘｐ(-0.0143t)と記載の薬物速度論機能を表す。３Ｄ６抗体は両方の動物において相対的に緩やかであることが明らかにされた(平均血清クリアランス＝２ｍｌ／ｈｒ)。最初の半減期は１．８及び８．５時間であり、かつ最後の半減期はそれぞれ３４．７及び４８．５時間であった。曲線の下方のエリアの大部分は最後の半減期と結び付けられる(76.8-96.5%)。分散の最初の量は相対的に小さく(６２-６９ｍｌ／ｋｇ)、血清量に近い；分散の定常状態量は、ほぼ１．７から２．５倍大きい。血清中の平均滞在時間は５３時間である。完全な３Ｄ６抗体の血清レベルは５日間、１μｇ／ｍｌの濃度以上に保持される；上に開示したようなレベルはインビトロでのミンク肺細胞の増殖の最大レベルを誘導する。図４Ａは平均肝細胞増殖指数(±Ｓ.Ｅ.)を示す。図４ＢはＬＷ／ＢＷ比平均パーセンテージ(±Ｓ.Ｅ.)を示す。図４Ｃは３Ｄ６と６Ｅ１０で治療した動物における２４，４８及び７２時間での平均血清アルブミン濃度(±Ｓ.Ｅ.)を示す。３Ｄ６処理動物において、肝細胞増殖指数は２４及び４８時間で有意に増加し、また４８時間と７２時間で体重及び血清アルブミン濃度がそれに従い増加した。統計的に有意の変化(ｐ＜0.05)は図４Ａ−４Ｃ中の*によって示した。Ｂ．肝細胞増殖における効果意識のある動物に、０．９％塩溶液中、３Ｄ６又は６Ｅ１０のいずれか一方の２ｍｇ／ｋｇを単独静脈内ボーラスで橈側皮静脈内に受容させた。トータルで２３の動物が実験に含まれる。全ての動物は機敏な動作と３Ｄ６又は６Ｅ１０の投与の後の活性を残している。動物は、抗体の注入後、２４(3D6,n=3；6E10,n=2)、４８(3D6,n=6；6E10,n=6) 、及び７２(3D6,n=3；6E10,n=3)時間で安楽死させる。３Ｄ６処理動物は実存の肝臓重量(データは示さず)の増加があり、肝臓重量は体重のパーセンテージとして表した(図４Ｂ)。以下の表１中に示した通り、活性とプラシーボ処理群との間で、体重のパーセンテージとして表した場合、腎臓、脾臓、心臓又は脳の重量に差異は無かった。表１のデータは、３Ｄ６と６Ｅ１０処理動物における脾臓、腎臓、心臓及び脳の重量を、体重のパーセンテージとして表した。該データは平均値±Ｓ.Ｅ.として与える。３Ｄ６処理動物において、血清アルブミン(図４Ｃ)、トリグリセリド及びコレステロールレベルは統計的に有意に増加し、一方ＡＳＴとＡＬＴレベルは落下した。以下の表２中に示した通り、アルカリホスファターゼ、ガンマ-ＧＴ及びビリルビンレベルは変化がないことが観測された。結果は平均値士Ｓ.Ｅ.として表される。３Ｄ６処理動物におけるレベル中の有意な減少(ｐ＜0.05)は**によって示される。赤血球細胞、白血球細胞又は血小板数における有意なシフトはなかった(データは示さず)。Ｃ．組織学ブロモデオキシウリジン(ＢｒｄＵ)が安楽死させる２時間前に全ての動物に腹腔内投与される。動物は心臓穿刺による感覚喪失下で放血させ、血清とＥＤＴＡ処理全血サンプルは生化学及び血液学的実験のために捕集した。組織(肝臓、膵臓、皮膚、食道、胃、小腸、結腸、心臓、肺、腎臓、副腎、甲状腺、リンパ節、胸腺、脾臓、骨格筋、座骨神経、骨及び骨髄)を採取し、４％緩衝化ホルマリン中で固定し、パラフィン包埋用に処理される。３ミクロン厚切片が各々から切り出され、ヘマトキシリン又はエオシン("Ｈ＆Ｅ")で染色され又は免疫化学用に処理される。肝臓、膵臓、座骨神経、腎臓、副腎と小腸の切片は、１：２０に希釈したモノクローナル抗-ＢｒｄＵ抗体(Ｄａｋｏ)を用い、ＢｒｄＵの結合性を測定するために染色される。切片はキシレン中で脱ワックスされ続いてアルコールで脱水される。内因性ペルオキシダーゼが、蒸留水中１％過酸化水素中に切片を３０分間浸漬することによってブロック化される。リンス後、切片は２０分間３７℃でトリプシン(0.05%)化され、次いで１時間、７０℃で0.15Mクエン酸三ナトリウム中９５％ホルムアミド中で変成せしめ、洗浄し、ＴＢＳで希釈した１０％ヤギ血清中でブロック化し、次いで４℃で一晩、最初の抗体とともにインキュベートさせる。最初の抗体は、キット(Vectastain elite ABC kit)によって測定される。標識化サイトは３，３ジアミノベンジジン四塩酸(ＤＡＢ；シグマ)中でのインキュベートによって視覚化される。切片はメイヤーのヘマトキシン(シグマ)中で対比染色され、高純度アルコールを通して脱水され、キシレン中で清浄化され次いで載置される。各切片中の１５の分離フィールドの最小値から、１０００の肝細胞又は膵臓腺房細胞核の最小値が計測される。パーセンテージとして表されるＢｒｄＵ指数は肝細胞又は膵臓腺房細胞核のそれぞれのトータルの数によって除された陽性の標識された核の数として計算される。明瞭に染色された核のみが陽性としてカウントされる。図５Ａと５Ｂは、６Ｅ１０(図５Ａ)又は３Ｄ６(図５Ｂ)投与後２４時間の肝臓中の標識化ＢｒｄＵを示す。陽性の標識化肝細胞における有意の増加が、３Ｄ６処理動物において観測される。ＴＨＶは末端肝細静脈を示す。肝臓の構造は実験した全ての動物において通常であった。３Ｄ６を受けた動物において、２４と４８時間で肝細胞の増殖があった。増殖肝細胞の大部分は、肝腺房のゾーン２と３中に位置する。図５Ｃは肝細胞の分割を説明するための、図５Ｂからの高い拡大化を示す。ＢｒｄＵの結合によって測定した通りの肝細胞中のＤＮＡ合成に一致する増加があり、一方、経時的なＤＮＡ合成に変化がないことが、コントロール抗体、６Ｅ１０で処理した動物において観測された。３Ｄ６処理動物における肝細胞ＢｒｄＵ標識化指数(平均値±Ｓ.Ｅ.)は、２４時間で１３．８(±１．６)％のピークに達し、そして４８時間で３．９(±０．８)％に、７２時間で２．１(±０．９)に落下した。２４と４８時間でのＢｒｄＵ指数は、コントロール６ｅ１０処理動物のそれらよりも有意に大きかった(ｐ＜0.05)。図４Ａ参照。図６は、３Ｄ６投与４８時間後の動物からの膵臓(図６Ａ)のＨ＆Ｅ染色した切片と、ＢｒｄＵ(図６Ｂ)のための染色した相対エリアを示す。図６Ａの有糸分裂細胞と図６Ｂ中のＢｒｄＵ陽性細胞が矢示される。増加した標識は腺房細胞でのみ観測された。６Ｅ１０と３Ｄ６処理動物の腺房細胞増殖指数が図６Ｃに示される。標識した腺房細胞中の有意な増加(ｐ＜0.05)は３Ｄ６処理動物において４８と７２時間で観測された。膵外分泌の腺房細胞の増加した増殖は処理の４８と７２時間後に観察され、これら細胞中の増加したＤＮＡ合成と関係があった(図６Ａと６Ｂ)。膵臓は通常の外観であり、２つの群の間にランゲルハンス島中のＤＮＡ合成における相違は無かった。膵臓腺房細胞における標識ＢｒｄＵにおいて、６Ｅ１０処理したコントロールとの比較として、３Ｄ６処理動物は４８時間と７２時間とで有意に増加したが、２４時間ではなかった(図６Ｃ参照)。図７は３Ｄ６投与４８時間の動物からの、自律神経のＨ＆Ｅ染色切片(図７Ａ) とＢｒｄＵの一致するエリア(図７Ｂ)とを示し、図７Ａの有糸分裂細胞と図７ＢのＢｒｄＵ陽性細胞が矢示される。陽性の標識細胞の形態学は、それらがシュヴァン細胞であることを示唆する。増殖とＤＮＡ合成の増加はまた、末梢神経と自律神経中の細胞における４８と７２時間でも観測された(図７Ａと７Ｂ)。延在したスピンドル細胞形態学を有する細胞はシュヴァン細胞の特徴を表している。皮膚、食道、胃、小腸、結腸、心臓、肺、腎臓、副腎、甲状腺、リンパ節、胸腺、脾臓、脳、骨格筋、骨及び骨髄は両方の群において形態学的に通常であり、細胞増殖の証拠の無いことが示された。Ｄ．ｃ-Ｍｅｔのチロシンリン酸化における効果ｃ-Ｍｅｔレセプターを刺激する又はｃ-Ｍｅｔ活性化を誘導するための３Ｄ６の能力は、ｃ-Ｍｅｔチロシンリン酸化を測定することによって実験される。ｃ- Ｍｅｔのリン酸化は、(1)インビボでの３Ｄ６投与後のフェレット肝細胞；及び( 2)３Ｄ６抗体の存在中で培養したＡ５４９細胞を試験したSadickらの方法に基づくサンドウィッチＥＬＩＳＡ［Sadickら，Anal．Biochem.，235:207-214(1996)] において測定される。 (1)フェレット肝臓ｃ-Ｍｅｔリン酸化実験のため、麻酔した動物には、橈側皮静脈内に、rhuＨＧＦ(500μｇ/ml)、３Ｄ６(2mg/kg)、６Ｅ１０(2mg/kg)又は0.9 %塩溶液コントロールのいずれかの１ｍｌが注射される。動物は注射の５分後に安楽死させ、その肝臓が免疫沈降実験のために採取された。免疫沈降のための操作は４℃で実行される。フェレット肝臓は、１０ｍＭのＣＨＡＰＳ、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＰＭＳＦ、１０μｇ／ｍｌのアプロトニン、１０μｇ／ｍｌのロイペプシン、１ｍＭのＮａ₃ＶＯ₄、１００μＭのモリブデン酸Ｎａ、及び１ｍＭのＮａＦを含むトリス-緩衝化塩溶液中でホモジナイズ( 10%W/v)される。ホモジネートは小片をペレット化するため3000ｇで５分間回転させる。上澄みは、１５，０００ｇで３０分間遠心分離によって清澄化し、デカンテーションされ、次いでプロテインＡセファロースビーズと共に１５分間インキュベートされる。遠心分離によるプロテインＡセファロースビーズの除去後、それぞれの上澄み１ｍｌは、チロシンリン酸化タンパク質用に、アガロース-付加４Ｇ１０ビーズ(Upstate Biotechnology，Lake Placid，NY)の２５μｌ、又は全ｃ-Ｍｅｔ用に、ウサギ抗-ｃ-Ｍｅｔの１０μｇとのいずれかと、２時間インキュベートされる。プロテインＡアガロースビーズの２５μｌが、抗体の添加の９０分後にウサギ-抗-c-Ｍｅｔ沈殿に加えられる。該ビーズはペレット化され、免疫沈降緩衝液１ｍｌで４回洗浄される。ビーズは、２ＸLaemmliサンプル緩衝液５０μｌ中に懸濁し、５分間沸騰させる。該ビーズのペレット化の後、上澄みがデカンテーションされ、５％ベータ-メルカプトエタノールが加えられ、タンパク質がさらに５分間煮沸することによって除去される。各サンプルの１０μｌは７．５％ＳＤＳ-ＰＡＧＥ上に１時間１００ボルトで移動され(図８参照)、そして１時間ニトロセルロース膜上に移送される。移送したタンパク質は化学蛍光キット(Boehringer Mannheim)、製造者の説明書に従い検出される。ブロック化の後、その膜はウサギ抗-ホスホチロシン抗体( 1:2000；Zymed，South San Francisco，CA)と共に１時間、次いでペルオキシダーゼ接合抗-ウサギ抗体(1:2000)と共に１時間、インキュベートされる。インビボにおいて、フェレット肝臓中のｃ-Ｍｅｔのチロシンリン酸化は、ＨＧＦと３Ｄ６の両方の注射５分後に増加した(図８参照)。６Ｅ１０又は賦形剤による注射に従うチロシンリン酸化に変化はなかった。 (2)ミクロタイタープレートは４℃で一晩、５μｇ／ｍｌウサギ抗-c-ＭｅｔポリクローナルＩｇＧでコートされ、次いで非-特異的結合がブロック化される。ミクロタイタープレートのコート化と同時に、Ａ５４９細胞(ｃ-Ｍｅｔ発現、ヒト類表皮細胞系)はＰＢＳで２回洗浄され、３Ｄ６又は６Ｅ１０抗体又は０．１％ＢＳＡ、２ｍＭグルタミン及びペニシリン／ストレプトマイシンを補足したＲＰＭＩ培地で希釈したrhuＨＧＦと３７℃で１０分間インキュベートされる。該細胞はＰＢＳで２度洗浄し、次いで室温でオービタルシェーカー上、３０分間、１ｍｌ溶解緩衝液(ＰＢＳ、0.2%Triton X-100、10μg/mlアプロトニン、5mMＮａＦ、2mMオルトバナジン酸ナトリウム、及び0.2mMＰＭＳＦ)中で溶解した。その溶解物は１０分間遠心分離し、100μｌの上澄みはブロック化したミクロタイタープレートに分注によって移した。２３℃で２時間のインキュベーションの後、チロシンリン酸化が、ビオチン-抗-Ｐ-Ｔｒｙ(Upstate Biotech,Lake Placid,NY )、続いてＨＲＰ-ストレプトアビジンと２３℃で２時間インキュベーションによって測定される。次いで、ＴＭＢペルオキシダーゼ基質(ＫＰＬ，Gaiyhersburg ，MD)が加えられる。反応はリン酸で停止され、ＯＤが自動プレートリーダー中、４５０ｎｍで測定される。トータルｃ-Ｍｅｔは、検出がビオチン化ウサギ抗-ｃ-ＭｅｔポリクローナルＩｇＧ(ＮＩＨＳビオチン、Pierce Chemical)を除き、上述の通りにインキュベートされた平行な穴内で測定される。溶解物はチロシンリン酸化ｃ-Ｍｅｔと全ｃ-Ｍｅｔの相対量として分析される。図９に示すように、ＨＧＦと３Ｄ６は、ｃ-Ｍｅｔの全量の変更させることなく、Ａ５４９細胞中にチロシンリン酸化を誘導した。材料の寄託以下のカルチャーは、American Type Culture Collection，12301 Parklawn D rive，Rockville，MD，USA(ATCC)に寄託されている：ハイブリドーマＡＴＣＣ番号寄託日３Ｄ６．１６．１ＨＢ-１２０９３１９９６年４月３０日この寄託は特許手続上の微生物の寄託の国際的承認に関するブタペスト条約の規定に基づいてなされた。これは寄託の日から３０年間生存可能な培養が維持される。微生物はブタペスト条約の期間の元でＡＴＣＣによって生存され、関連する米国特許の許可による公開又はいずれかの米国又は外国の特許出願の公表に培養物の子孫の恒久的且つ非制限的な利用を保証する、ジェネンテック社とＡＴＣＣとの間の同意を条件として、最初に所有され及び米国特許法§１２２及びそれに応じるコミッショナーの役割に従うそれによって権利付与される特許及び商標の米国コミッショナーによって決定される一つの利用性を保証する(８８６０Ｇ６３８に特別の関係を持つ３７ＣＦＲ§1.14を含む)。特許出願人の譲受人はもし寄託した培養物が適当な条件の元で培養した場合に死滅又は紛失又は破損する場合に、それらを同じ培養物の生存している標本と速やかに交代するとの通知を了解する。寄託した株の生存性はその特許法に従ういずれかの政府の権限の元に与えられた権利の違反における発明の実施に対するライセンスとして構成されるべきではない。上述に記された明細書は本発明の実施について当業者が十分に可能であると確信される。本発明は、寄託物の実施態様が本発明の態様の説明を意図し且つ機能的な均等物であるいずれかの培養物はこの発明の範囲内であることから、寄託した培養物によって範囲を制限されるものではない。ここでの材料の寄託は、それのベストモードを含む本発明のいずれかの態様の実施を可能とするために不適切なここでの明細書の記載に許可を与えるためのものではなく、それを表現する特別な説明に請求される範囲の制限として解釈するべきでない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 1/16 Ａ６１Ｐ 1/16 13/12 13/12 Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/08 15/02 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｐ 21/08 33/577 ＢＧ０１Ｎ 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ 33/577 5/00 Ｂ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者テイボー，ケリーエイチアメリカ合衆国カリフォルニア 94010 ヒルズボローラクエスタ 1053

Claims

【特許請求の範囲】１．ＨＧＦレセプターに特異的に結合する肝細胞成長因子(ＨＧＦ)レセプターアゴニスト。２．抗体である請求項１のアゴニスト。３．モノクローナル抗体である請求項２の抗体。４．ｃ-Ｍｅｔレセプターに結合する抗体である請求項２の抗体。５． American Type Culture Collection Accession Number ATCC HB-12093の下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって作られるモノクローナル抗体の生物学的特徴を有する請求項２の抗体。６． American Type Culture Collection Accession Number ATCC HB-12093 bi ndsの下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって作られるモノクローナル抗体に対するエピトープと実質的に同じエピトープに結合する抗体である請求項２の抗体。７． American Type Culture Collection Accession Number ATCC HB-12093の下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって作られるモノクローナル抗体。８．請求項１のＨＧＦレセプターアゴニストをコード化する分離した核酸。９．上記アゴニストがAmerican Type Culture Collection Accession Number ATCC HB-12093の下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって作られるモノクローナル抗体である請求項８の核酸。１０．請求項３の抗体を作るハイブリドーマ細胞系。１１． American Type Culture Collection Accession Number ATCC HB-12093 の下に寄託したハイブリドーマ細胞系。１２．請求項１のアゴニストと製薬的に許容される媒体とを備える組成物。１３．上記アゴニストが、American Type Culture Collection Accession Num ber ATCC HB-12093の下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって作られるモノクローナル抗体である請求項１２の組成物。１４．哺乳動物にＨＧＦレセプターアゴニストの有効な量を投与することを備える、哺乳動物における病的肝臓状態の治療方法。１５．上記アゴニストが、American Type Culture Collection Accession Num ber ATCC HB-12093の下に寄託したハイブリドーマ細胞系によって作られるモノクローナル抗体である請求項１４の方法。１６．上記病的肝臓状態が急性腎不全である請求項１４の方法。１７．肝細胞増殖を刺激するためのＨＧＦレセプターアゴニストの有効な量に肝細胞をさらすこと及び増殖している肝細胞内に望ましい遺伝物質を導入することを備える、遺伝子治療方法。１８．上記肝細胞がインビボでＨＧＦレセプターアゴニストにさらされる請求項１７の方法。１９．容器；上記容器上の標識；及び上記容器内に包含された組成物；ここで該組成物は病的肝臓状態を治療するために有効であり、上記容器上の標識は、該組成物が病的肝臓状態の治療のために用いることができることを表示し、該組成物における活性剤はＨＧＦレセプターアゴニストを含む、を備える製造物。２０．上記アゴニストが抗体である請求項１９の製造物。２１．哺乳動物にＨＧＦレセプターアゴニストを投与するための指示をさらに備えた請求項１９の操作装置。２２．第１の容器、該容器上の標識、及び該容器内に包含された組成物；ここで該組成物は病的肝臓状態を治療するために有効であり、上記容器上の標識は、該組成物が病的肝臓状態の治療のために用いることができることを表示し、及び該組成物における活性剤はＨＧＦレセプターアゴニストを含む；製薬的に許容される緩衝液を備える第２の容器；及び病的肝臓状態を治療するためにＨＧＦレセプターアゴニストを用いるための指示とを備えるキット。２３．容器；上記容器上の標識；及び上記容器内に包含された組成物；ここで該組成物はＨＧＦレセプターの検出又は純化のために有効であり、該容器上の標識は該組成物がＨＧＦレセプターの検出又は純化のために使用できることを示し、且つ上記組成物中の活性剤はＨＧＦレセプターアゴニストを含むとを備える製造物。２４．上記アゴニストが抗体である請求項２３の製造物。２５．第１の容器、上記容器上の標識、及び上記容器内に収容された組成物；ここで該組成物はＨＧＦレセプターの検出又は純化のために有効であり、該容器上の標識は該組成物がＨＧＦレセプターの検出又は純化のために使用できることを示し、且つ上記組成物中の活性剤はＨＧＦレセプターアゴニストを含む；製薬上許容される緩衝液を備える第２の容器；及びＨＧＦレセプターを検出又は純化するためにＨＧＦレセプターアゴニストを用いるための指示とを備えるキット。