JP2000505543A

JP2000505543A - 検定試薬および対照試薬として使用される試薬

Info

Publication number: JP2000505543A
Application number: JP9526990A
Authority: JP
Inventors: ハケツト，ジヨン・アール，ジユニア; ホフ，ジエーン・エイ; オストロー，デイビツド・エイチ; ゴールデン，アラン・エム
Original assignee: アボツト・ラボラトリーズ
Priority date: 1996-01-23
Filing date: 1997-01-17
Publication date: 2000-05-09
Anticipated expiration: 2017-01-17
Also published as: JP3486418B2; ATE247832T1; WO1997027486A1; CA2243943A1; US6015662A; ES2205169T3; DE69724292T2; EP1018019B1; CA2243943C; DE69724292D1; EP1018019A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、予め決めたリガンドに特異的に結合し、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを有し、特異性および親和性が均一である試薬の使用法に関する。この試薬は、所望のリガンドに特異的な抗体を定性的または定量的に測定するよう設計された診断キットのための検定（標準）試薬および／または対照試薬の製造において、連続的に生産することができる。例えば、本発明は、ヒト抗体を測定する測定法およびキットの検定（標準）試薬および／または陽性対照試薬として用いることのできる組み換えマウス−ヒトキメラ抗体を包含する。キメラ抗体を作成するのに、いずれの種も用いることができ、相当するいずれの種の抗体の存在も検出することができる。

Description

【発明の詳細な説明】検定試薬および対照試薬として使用される試薬発明の背景発明の分野本発明は、診断測定およびキットにおいて検定試薬(calibrator)（標準試薬）および／または対照試薬(control)としての試薬を用いる方法に関する。更に詳しくは、所望のリガンドに特異的な抗体を定性的または定量的に測定するよう設計された診断測定およびキットにおける検定試薬および／または対照試薬の製造において、抗原陽性血漿または血清の代わりに、１種以上のこれらの試薬を用いることができる。試薬自体は、予め決めたリガンドに特異的に結合し、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを有し、特異性および親和性が均質である。試薬は、ハイブリドーマおよび／または組み換えＤＮＡ技術の使用により製造することができる。背景情報抗体は、ジスルフィド結合により結合した２つの同一の軽（Ｌ）および２つの同一の重（Ｈ）ポリペプチド鎖から成る多重ドメイン蛋白質である（図１）。ＬおよびＨ鎖の両方のアミノ末端ドメインは、アミノ酸配列およびコンホメーションにおいてかなりの多様性を示し、可変部（Ｖ）領域と呼ばれる。各Ｖ領域内に、リガンド結合ポケットを形成する、高可変部領域または相補性決定領域（ＣＤＲｓ）と呼ばれる例外的可変性の３つのセグメントが存在する。ＬおよびＨ鎖の両方の他のドメインは、不変部領域を構成する。不変部領域は、リガンド結合に関与せず、変化はより制限されている。不変部領域は、種特異的であり、サイズ、電荷、アミノ酸組成、グリコシル化および生物学的機能を含む重鎖不変部領域の差異に基づき種々のクラスおよびサブクラスに分けることができる（カラヤンノポロスＬ．（Carayannopoulos L.）およびカプラＪ．Ｄ．（Capra J.D.）、免疫グロブリンの構造および機能、基礎免疫学、３版、ポールＷ．Ｅ．(Paul W.E.)編、ラーベンプレス(Raven Press)、ニューヨーク、２８３−３１４ページ（１９９３））。免疫系は、事実上いずれの物質も認識することのできる著しく多様なレパートリーの抗体分子を生み出す。抗原（即ち、免疫応答を引き出すことのできる物質、例えば、蛋白質、炭水化物、核酸、脂質、または担体に共役したハプテン）の感作により生じた一次抗体応答は、主としてＩｇＭクラスの抗体の産生をもたらす。この応答は、抗原の異なるエピトープに対する抗体の不均一な混合物が産生されることから、事実上、ポリクローナルである。同じ抗原による引き続く又は長引いた感作は、一般に親和性がより高く（エピトープと抗体結合部位との間の結合強度の尺度）且つほとんど全てのＩｇＧクラスから成る、一次応答で観察されるそれより顕著に大きい抗体力価により特徴付けられる二次応答をもたらす。特異的ＩｇＭ力価は、一般的に、特異的ＩｇＧ力価よりも急速に小さくなる。結果として、血清または他の生物学的液中に存在する特異的抗体のクラスの監視は、特異的抗原（例えば、感染因子）に対する個々の免疫状態の指標を提供する。抗体のクラスは、自己免疫の場合の臨床的関連性があり得、またＩｇＥクラス抗体の産生と関係するＩ型過敏性（アレルギー応答）を監視するためのものでもあり得る（ロイトＩ．（Roitt I）編、免疫学、ゴワーメディカルパブリッシング（Gower M edical Publishing）、ロンドン、イギリス（１９８５）；ポールＷ．Ｅ．編、基礎免疫学、３版、ラーベンプレス、ニューヨーク（１９９３））。クラスに関わりなく、抗体分子は、高親和性および特異性（関与するエピトープと他のエピトープとを区別する能力）でリガンドに結合し、それを理想的免疫診断試薬にする。免疫測定法は、感染因子、生理学的機能、アレルギー、自己免疫、癌、製剤、および薬物乱用を監視する迅速で高感度の方法を提供する。手動および自動化免疫測定法は、一般的抗体応答、特異的抗原に対する抗体、および診断に関連のある抗原またはハプテンを測定するように設計されてきた。不均質免疫測定法は、通常、多数の反応工程から成り、最終的に、試験結果を得るために、遊離のリアクタントからの免疫複合反応物の分離を必要とする。対照的に、均質免疫測定法は、遊離反応物からの複合反応物の分離を必要としない液相システムである。免疫測定法は、多数の異なるフォーマットで開発されてきたが、２つの主な系：（１）競合的測定法、および（２）非競合的測定法（例えば、イムノメトリック、サンドイッチ）に分けることができる。不均質免疫測定法の両方の系にとって、結合および遊離の反応物の分離のための固相生化学が、革命的であることを証明された。抗体または抗原試薬は、共有的に又は非共有的（例えば、イオン的、疎水的）に固相に結合できる。共有結合の結合剤は、公知であり、固相の一部であってもよいし又は被覆前にそれに誘導してもよい。免疫測定法に用いる固相の例としては、多孔性および非多孔性材料、ラテックス粒子、磁気粒子、微粒子、ビーズ、膜、マイクロタイターウェルおよびプラスチックチューブがある。固相材料および抗原または抗体を標識する方法の選択は、所望の測定フォーマット遂行特性に基づいて決定する。ある免疫測定法では、標識を必要としない。例えば、抗原が、赤血球のような検出可能な粒子上に存在する場合、反応性は、凝集に基づいて樹立することができる。あるいは、抗原−抗体反応は、可視的変化（例えば、放射免疫拡散法）をもたらすことができる。多くの場合、免疫測定法に用いる抗体または抗原試薬の１つを、シグナル発生化合物または「標識」に結合させる。このシグナル発生化合物または「標識」は、それ自体検出可能であるか、または１種以上の更なる化合物と反応して検出可能な生成物を生成することができる。シグナル発生化合物の例としては、色原体、ラジオアイソトープ（例えば、¹²⁵Ｉ、¹³¹Ｉ、³²Ｐ、³Ｈ、³⁵Ｓおよび¹⁴Ｃ）、蛍光化合物（例えば、フルオレセイン、ローダミン）、化学発光化合物、粒子（可視的または蛍光）、核酸、錯化剤、または酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、酸性ホスファターゼ、西洋わさびペルオキシダーゼ、ベーターガラクトシダーゼ、およびリボヌクレアーゼ）のような触媒が挙げられる。酵素使用の場合、色原性、蛍光性または発光性基質の添加は、検出可能なシグナルの発生をもたらす。時間により分解される蛍光、内反射蛍光、増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応法）およびラマン分光法のような他の検出システムも有用である。免疫測定法は、目的の抗原（例えば、感染因子、自己抗原、アレルゲン）に特異的な抗体の存在を調べるために生物学的液（例えば、血漿、血清、脳脊髄液、唾液、涙、鼻洗浄液、または組織および細胞の水性抽出物）を監視するために開発されてきた。多くの場合、これらの特異的抗体免疫測定法は、抗体クラスまたはサブクラスに特異的であるように設計されてきた。ヒトの特異的抗体を監視するのに普通に用いられる２つの一般的フォーマットがある：（１）抗原を、固相上に存在させ、特異的抗体を含有するヒト生物学的液を、抗原と反応させ、次いで、抗原に結合した抗体を、シグナル発生化合物に結合した抗−ヒト抗体で検出する、および（２）抗−ヒト抗体を、固相に結合させ、特異的抗体を含有するヒト生物学的液を、抗体と反応させ、次いで、シグナル発生化合物に結合した抗原を加えて特異的抗体を検出する。両方のフォーマットにおいて、抗−ヒト抗体試薬は、ポリクローナルであってもよいし、またはモノクローナルであってもよい。更に、抗−ヒト抗体試薬は、測定の意図した目的に依存して、全ての抗体クラスを認識できるものであってもよいし、あるいは、抗体の特定のクラスもしくはサブクラスに特異的であるものであってもよい。この試薬の反応性は、それを構成する抗体のスペクトル及びそれらが結合する特定の抗体不変部領域エピトープに依存している。不変部領域エピトープは、抗体応答を生じさせることのできる抗原決定基である。不変部領域エピトープの例としては、種間不変エピトープ（クラスまたはサブクラス特異的エピトープ）、およびアロタイプエピトープ（種の全構成員ではなく、ある構成員に存在）が挙げられる。不変部領域エピトープに結合する抗−ヒト抗体試薬の製造法および試験法は、当業界に周知である。他の種における特異的抗体応答を監視する測定法は、当業者により同様の様式で設計することができる。特異的抗体を検出するように設計された免疫測定法は、抗体活性の尺度を提供する。この尺度は、抗体力価、例えば、中間点または終点力価で表わすこともできるし、または比較標準と比較した単位（活性もしくは重量）で表すこともできる。免疫測定法およびキットは、典型的には、検定試薬（標準試薬）および／または陽性対照試薬として機能する測定される特異的抗体を含有する１種以上の成分を含む。検定試薬（標準試薬）を用いて抗体濃度の内挿法の検定（標準）曲線を確立するか、あるいは、単一の検定試薬を、陽性／陰性カットオフ近くで用いることができる。陽性対照は、測定性能特性を確立するのに用いられ、試薬の保全の有用な指標である。更に、特異的抗体を検出するための免疫測定法およびキットは、通常、目的の抗原と反応する抗体を含有しない血清または血漿のような陰性対照を含む。好ましくは、検定試薬および陽性の対照試薬は、測定される特異的抗体または化学的にそれと類似した物質で調製する。理想的には、検定試薬および対照試薬は、試験される被分析物（特異的抗体）に類似した方法でその他の測定成分と相互作用するように作成する。検定試薬および陽性対照試薬は、通常、抗原陽性血漿または血清から誘導される既知量の特異的抗体（ポリクローナル抗体）を陰性対照試薬中にスパイクすることにより作成する。しばしば、特異的抗体の種々の濃度を含有する複数の検定試薬が含まれ、それによって測定法が測定するよう設計されている濃度の範囲を広げる。定量的免疫測定法は、結果を内挿法により推定することのできる検定（標準）曲線を樹立するために８種までの検定試薬（標準試薬）を含んでいてもよい。検定試薬および対照試薬にアサインされた特異的抗体の量は、一次比較標準に対して標準化する。抗体活性の場合、比較標準は、しばしば、定量、定性、および特異性のような特性を経験的に特徴付けてきた個々の又はプールした血清を用いて樹立する。比較標準は、活性の相対単位を当てはめてもよいし、または抗体の重量であってもよい。定性的免疫測定法には、陽性／陰性カットオフ近くにセットされた、単一の検定試薬(標準試薬)を用いることができる。ある製造元は、単一の検定試薬（標準試薬）を指標検定試薬と呼ぶ（ボラーＡ．(Voller A.)等、８０年代の免疫測定法、ユニバーステイパークプレス(University Park Press)、ボルチモア（１９８１）；アルバーチニＡ．(Albertini A.)およびエキンスＲ．(Ekins R.)編、モノクローナル抗体および免疫測定法の開発、エルセヴィア／ノース−ホーランドビオメディカルプレス(Elsevier/North-Holland Biomedical Press)、ニューヨーク（１９８１）；バトラーＪ．(Butler J.)編、固相免疫測定法の免疫化学、ＣＲＣプレス、ボカ・ラトン(Boca Raton)（１９９１））。免疫測定用抗体−捕獲に基づく免疫測定法の２つの例は、アボットラボラトリーズにより製造されたＩＭｘＴｏｘｏＩｇＭおよびＴｏｘｏＩｇＧ（図２）抗体測定法である。両方の測定法は、ヒトの血清または血漿中のトキソプラズマ・コンディ（Toxoplasma gondii)に対する抗体を測定する自動化微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）である（サフォードＪ．Ｗ．(Safford J.W.)等，Clin，Pa thol．44:238-242(1991)）。一方の測定法は、最近の感染または急性感染を示すＩｇＭ抗体を定性的に測定し、他方の測定法は、慢性または過去の感染を示すＩｇＧを定量的に測定する。しばしば無症状で成人に感染する偏性細胞内寄生虫であるトキソプラズマ・ゴンディは、急性後天性妊産婦感染中に起きる経胎盤感染により、胎児に深刻な結果をもたらすことがある（レミングトンＪ．Ｓ．（Remi ngton J．S.)およびクラヘンブールＪ．Ｌ．(Krahenbuhl J.L.)、包括的免疫学（Ａ．Ｊ．ナミアス(A.J．Nahmias)およびオレイリー(O'Reilly)編）327-371ページ、プレナム(Plenum)、ニューヨーク／ロンドン（1982）；レミングトンＪ．Ｓ．、子宮内感染：出産欠陥起源 Ser 4:47-56．The National Foundation of t he March of Dimes，ニューヨーク(1968)）。トキソプラズマ・ゴンディ特異的ＩｇＭまたはＩｇＧ抗体の存在を調査することによる妊産婦免疫状態の測定は、妊娠するかどうかの決定の助けとなり、また血清陰性の個体においては、急性感染を示すセロコンバージョンを監視することができる(デズモントＧ．（Desmonts G. ）およびコベルーＪ．（Couvreur J.），NewEngl．J．Med．290:1110-1116 (197 4);マッキャベＲ．（McCabe R.）および Remington J.S.，New Engl．J．Med． 318:313-317(1988);シバリックＤ．（Sibalic D.）等，Gynecol．Obstet．Inves t．36:91-95(1993))。これらの測定法は、トキソプラズマ・ゴンディ抗原で被覆した微粒子を固相として用いる。被覆した微粒子に試料を加えてトキソプラズマ・ゴンディに特異的な抗体を結合させる。次に、トキソプラズマ・ゴンディ抗原に複合体化したＩｇＭ（またはＩｇＧ）クラス抗体に特異的に結合する、アルカリホスファターゼ共役抗−ヒトＩｇＭ（または抗−ヒトＩｇＧ）を加える。適切な基質の添加後、酵素が触媒するターンオーバーの速度を、蛍光に基づいて監視する。ＩｇＭおよびＩｇＧ抗−トキソプラズマ・ゴンディ測定用検定試薬および陽性対照試薬は、トキソプラズマ・ゴンディに反応性のヒト供血者から集めた血漿から調製する。高タイター血漿または血清は、伝統的に、所定の抗原に特異的なヒト抗体の存在を監視するよう設計された診断測定法およびキットの対照試薬および／または検定試薬（標準試薬）源として役立ってきた。これらには、ヒト免疫不全ウィルス−１、ヒト免疫不全ウィルス− ２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、風疹ウィルス、トキソプラズマ・ゴンディ、トリパノソーマ・クルージ(Trypanosoma cruzi)、クリプトコックス・ネオホルマンス(Cryptococcus neoformans)、ヒストプラスマ・カプスラツム(Histoplasma capsulatum)、ヘリコバクター・ピロリ(Helicobacter py lori)、およびストレプトコッカス・ピオゲネス(Streptococcus pyogenes)に対する抗体を検出する試験が含まれる。検定試薬（標準試薬）および／または対照試薬の製造にヒト抗原陽性血漿または血清を用いることは、（１）高力価、高い特異性を有し且つ他の感染因子に対する抗体を含有しない大容量の血漿または血清源を求める困難性の増大、（２）測定の性能に影響を与える力価および特異性に関して、時間経過の間のロット間のかなりの変動、（３）ポリクローンナルであること（抗体クラス、特異性および親和性の不均質）に起因する抗血清の特性化についての固有の制限、および（４）価格を含む、いくつかの著しい欠点がある。事実、ある場合には、供給源問題により、抗原陽性ヒト血漿に基づく検定試薬および／または対照試薬の製造を維持するのは不可能であることが有り得る。ＩｇＭ抗体の高力価源を見つけることは、これらが、通常、急性感染した個体から得られることから、特に困難であるはずである。例えば、米国で風疹に対して反応性のＩｇＭ源を求めることは、予防接種プログラムが成功していて困難である。適切な抗原陽性血漿または血清源の供給が、より困難になってきたことから、検定試薬および対照試薬の製造に関連した価格が増加し、この経済的負担は、最終的には、患者にかかってくる。特異的抗体の水準を監視するよう設計された診断測定法およびキット用検定試薬（標準試薬）および／または陽性対照試薬の代替製造法は、著しい進展を意味する。マウス：ヒトのキメラ抗体のような遺伝子工学による抗体は、抗−ヒト抗体共役物の特異性試験およびヒトの全免疫グロブリン免疫測定の品質管理のための品質管理試薬として用いることができる。これらのキメラ抗体は、比較標準での特異的抗体の定量のための有用な試薬であるかもしれないことが、更に提起された。キメラ抗体は、異なる抗原に特異的な比較標準での抗体の量を内挿法により挿入する不均質な量−応答曲線を確立するのに用いられるであろう(ハミルトンＲ.Ｇ.(Hamilton R.G.),Ann．Bi ol．Clin．48:473-477(1990)；バトラーＪ．Ｅ．およびハミルトンＲ．Ｇ．、固相免疫測定法の免疫化学、バトラーＪ.Ｅ.編、ＣＲＣプレス、ボカラトン、17 3-198ページ(1991)。「不均質」とは、それに対するキメラ抗体が特異的である抗原が定義されたことを示すが、特異的抗体が監視されている抗原に関係しない。本発明は、２つの重要な点：（１）提起された試薬は、抗原特異的抗体応答を監視するよう設計された免疫測定法およびキットの検定試薬（標準試薬）および／または陽性対照試薬の製造において、抗原陽性血漿または血清の代替物として用いることを意図していること、および（２）提起された試薬は、測定される特異的抗体が結合する同じまたは「均質」抗原に結合する点で前述のものと異なる。均質抗原に結合する試薬の使用は、検定試薬、陽性対照試薬、および供試標本が、同一の条件下で同じ抗原に反応することにより特異的抗体活性のより現実的な尺度を提供する点で好ましく、且つ、測定を実施している時点で供試抗原の完全さを監視できるという更なる有利性を有する。特異的ヒト抗体を検出するよう設計された免疫測定法の陽性対照試薬の製造のための１つの代替材料源は、抗−ヒト抗体と反応する非ヒト免疫抗体である（米国特許５，００８，１８３）。非ヒト免疫（ポリクローナル）血清の使用は、（ａ）測定の性能に影響を与え得る抗体クラス組成、力価、特異性および親和性についての時間経過によるロット間の変動、；（ｂ）ポリクローナル組成であることによる血清の特徴付けの困難性（例えば、不均質な親和性および特異性）；（ｃ）限定された供給；および（ｄ）感染因子の場合、生体を免疫感作に用いる場合のバイオハザードの可能性、を含むいくつかの欠点がある。ＩｇＭ測定用検定試薬および対照試薬の製造のための代替材料源は、特異的非ＩｇＭ抗体部分に共有結合した非特異的ＩｇＭ免疫グロブリン部分の複合抗体である（米国特許５，４７８，７５３）。複合抗体を作成するための免疫血清の使用は、上記で概説した全ての本質的欠点を有する。更に、複合抗体を構築するのに用いる免疫および非免疫部分の両方の供給源を求め精製する必要がある。更には、化学的に架橋した生成物は、結合した非免疫抗体部分の数および位置に関して不均質であろう。事実、結合部位近くの結合は、特異的抗体による抗原結合の立体干渉をもたらすことがある。リガンドに結合し、１つ以上の不変部領域エピトープを有し、そして特異性および親和性が均質である（即ち、全ての分子は、特異性および親和性の性質に関して均一である）本発明で説明する試薬の使用は、検定試薬および陽性対照試薬の製造に免疫血清を用いることに関係する全ての問題を解決する。更に、不変部領域エピトープは、試薬の必須部分（即ち、リガンド結合ドメインに直接接合した）であることから、より均一な組成物が得られる。更には、本発明の試薬は、ほとんど無制限の量を容易且つ再現可能に生産することができ、測定に用いる抗原の定量および完全さを監視するのにも有用である。発明の概要伝統的に、所定の抗原(例えば、ヒト免疫不全ウィルス−１、ヒト免疫不全ウィルス−２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス− ２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＧＢ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、風疹ウィルス、トキソプラズマ・ゴンディ、トリパノソーマ・クルージ、クリプトコックス・ネオホルマンス、ヒストプラスマ・カプスラツム、ヘリコバクター・ピロリ、およびストレプトコッカス・ピオゲネス)に特異的なヒト抗体の存在を検出するよう設計された診断測定法およびキットは、検定試薬（標準試薬）および対照試薬を製造するのに抗原陽性ヒト血漿（ポリクローナル抗体）または血清を用いてきた。これとは反対に、本発明は、このような診断測定法およびキットにおいてこのような血漿または血清の代わりに、検定試薬（標準試薬）および／または対照試薬としての試薬を用いる方法に関する。更に詳しくは、これらの試薬の１つ以上を、所望のリガンドに特異的な抗体を定性的又は定量的に測定するよう設計された診断測定法およびキット用の検定試薬（標準試薬）および／または対照試薬として、抗原陽性血漿または血清の代わりに、用いることができる。試薬自体は、予め決めたリガンドに特異的に結合し、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを有し、そして特異性および親和性が均質または均一である。試薬は、ハイブリドーマおよび／または組み換えＤＮＡ技術の使用により製造することができる。更に詳しくは、本発明は、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を包含し、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｃ）抗原に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、この試薬は、抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である。また、本発明は、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を含み、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｃ）抗原に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、上記２種以上の試薬のそれぞれが、この抗原上の異なるエピトープに結合し、特異性および親和性に関して均質である。更に、本発明は、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を包含し、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）その結果できた抗原／抗体複合体に、結合した抗体に共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下にて直接または間接共役物を加えること、この共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成り、（ｃ）シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｄ）抗原に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含む試薬をこの対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、この試薬は、抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である。本発明は、更に、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を含み、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）その結果できた抗原／抗体複合体に、結合した抗体に共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下にて直接または間接共役物を加えること、この共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成り、（ｃ）シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、この供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｄ）抗原に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを、含んで成り、ここで、改良として、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、上記２種以上の試薬のそれぞれが、抗原上の異なるエピトープに結合し、特異性および親和性に関して均質である。上記の全ての方法において、試薬は、測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した、１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体、測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体、免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体、および測定される抗体と同じ宿主種から誘導された、又は免疫学的交叉反応性に基づいて宿主種に関連する種から誘導された抗体不変部領域又はその断片に接合したポリペプチドから成る群から選ぶことができる。キメラモノクローナル抗体は、齧歯類から誘導されたＨおよびＬ鎖可変部領域ならびにヒトから誘導されたＨおよびＬ鎖不変部領域遺伝子を含んで成ることができる。更に、キメラモノクローナル抗体は、トキソプラズマ・ゴンディに特異的に、更に詳しくはその蛋白質Ｐ３０またはＰ６６に特異的に結合することができる。１つの試薬が関与する方法において、キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、このようなものが試薬である場合、図６に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができる。キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図６に示すアミノ酸配列を有することができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すアミノ酸配列を有することができる。あるいは、キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図９に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができる。キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すアミノ酸配列を有することができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図９に示すアミノ酸配列を有することができる。それぞれがキメラモノクローナル抗体である１種より多い試薬が関与する上記方法において、２種以上の試薬の一方を表すＨ鎖可変部領域は、図６に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、２種以上の試薬の同じ一方を表すキメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、２種以上の試薬の他方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、２種以上の試薬のこの他方のＬ鎖可変部領域は、図９に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができる。２種以上の試薬の一方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図６に示すアミノ酸配列を有し、２種以上の試薬の一方を表すキメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すアミノ酸配列を有することができ、そしてこの２種以上の試薬の他方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すアミノ酸配列を有することができ、２種以上の試薬のこの他方のＬ鎖可変部領域は、図９に示すアミノ酸配列を有することができる。上記の方法において、供試試料中に検出しようとする抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭから成る群から選ばれる。抗原は、感染因子、自己抗原、アレルゲンおよび医薬化合物から成る群から選ぶことができる。感染因子は、寄生虫、細菌、真菌、酵母およびウィルスから成る群から選ぶことができる。更に詳しくは、ウィルスは、ヒト免疫不全ウィルス−１、ヒト免疫不全ウィルス−２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＧＢ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、および風疹ウィルスから成る群から選ぶことができる。寄生虫は、トキソプラズマ・ゴンディおよびトリパノソーマ・クルージから成る群から選ぶことができる。真菌は、ヒストプラスマ・カプスラツムおよびクリプトコックス・ネオホルマンスから成る群から選ぶことができ、そして細菌は、ヘリコバクター・ピロリおよびストレプトコッカス・ピオゲネスから成る群から選ぶことができる。また、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗原、およびｂ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である)を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットも包含する。また、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗原、およびｂ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬(ここで、２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、この抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である)を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットも含む。加えて、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗原、ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成る直接または間接共役物、およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬(ここで、試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である)を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットを含む。更に、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗原、ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成る直接または間接共役物、およびｃ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットを含む。上記の全てのキットにおいて、試薬は、測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体、測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体、免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体、および測定される抗体と同じ宿主種から誘導された、又は免疫学的交叉反応性に基づいて宿主種に関連する種から誘導された抗体不変部領域又はその断片に接合したポリペプチドから成る群から選ぶことができる。試薬が、キメラモノクローナル抗体である場合、それは、齧歯類から誘導されたＨおよびＬ鎖可変部領域ならびにヒトから誘導されたＨおよびＬ鎖不変部領域遺伝子を含んで成る。更に、検出しようとする抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥNＩｇＧおよびＩｇＭから成る群から選ぶことができる。キットの抗原は、感染因子、自己抗原、アレルゲンおよび医薬化合物から成る群から選ぶことができる。感染因子は、寄生虫、細菌、真菌、酵母およびウィルスから成る群から選ぶことができる。更に詳しくは、ウィルスは、ヒト免疫不全ウィルス−１、ヒト免疫不全ウィルス−２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＧＢ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、および風疹ウィルスから成る群から選ぶことができる。寄生虫は、トキソプラズマ・ゴンディおよびトリパノソーマ・クルージから成る群から選ぶことができる。真菌は、ヒストプラスマ・カプスラツムおよびクリプトコックス・ネオホルマンスから成る群から選ぶことができ、そして細菌は、ヘリコバクター・ピロリおよびストレプトコッカス・ピオゲネスから成る群から選ぶことができる。加えて、本発明は、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を含み、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗−抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｃ）抗−抗体に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、この試薬は、この抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である。また、本発明は、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を含み、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗−抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｃ）抗−抗体に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで、２種以上の試薬のそれぞれが、抗原上の異なるエピトープに結合し、特異性および親和性に関して均質である。更に、本発明は、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を含み、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗−抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）その結果できた抗−抗体／抗体複合体に共役物を、結合した抗体に共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で加えること、この共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成り、（ｃ）シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｄ）抗−抗体に対する抗体を含んで成る試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで、試薬は、抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である。更に、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する本発明の他の方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗−抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）その結果できた抗−抗体／抗体複合体に共役物を、結合した抗体に共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で加えること、この共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成り、（ｃ）シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、この供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、そして（ｄ）抗−抗体に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで、２種以上の試薬のそれぞれが、抗原上の異なるエピトープに結合し、ユニークな特異性および親和性を有する。上記で直接提供された方法において、試薬は、測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体、測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体、免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体、および測定される抗体と同じ宿主種から誘導された、又は免疫学的交叉反応性に基づいて宿主種に関連する種から誘導された抗体不変部領域又はその断片に接合したポリペプチドから成る群から選ぶことができる。試薬が、キメラモノクローナル抗体である場合、それは、齧歯類から誘導されたＨおよびＬ鎖可変部領域ならびにヒトから誘導されたＨおよびＬ鎖不変部領域遺伝子を含んで成る。キメラモノクローナル抗体は、トキソプラズマ・ゴンディに特異的に結合することができる。更に詳しくは、キメラモノクローナル抗体は、トキソプラズマ・ゴンディの蛋白質Ｐ３０または蛋白質Ｐ６６に結合することができる。１つの試薬が関与する方法において、試薬が、キメラモノクローナル抗体である場合、キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図６に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができる。キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図６に示すアミノ酸配列を有することができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すアミノ酸配列を有することができる。あるいは、キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図９に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができる。キメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すアミノ酸配列を有することができ、キメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図９に示すアミノ酸配列を有することができる。１種より多い試薬が関与する方法において、２種以上の試薬の一方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図６に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、２種以上の試薬の一方を表すキメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、２種以上の試薬の他方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができ、２種以上の試薬のこの他方のＬ鎖可変部領域は、図９に示すヌクレオチド配列又はその対立遺伝子変異体によりコードされることができる。２種以上の試薬の一方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図６に示すアミノ酸配列を有し、２種以上の試薬のこの一方を表すキメラモノクローナル抗体のＬ鎖可変部領域は、図７に示すアミノ酸配列を有することができ、そして２種以上の試薬の他方を表すキメラモノクローナル抗体のＨ鎖可変部領域は、図８に示すアミノ酸配列を有することができ、２種以上の試薬のこの他方のＬ鎖可変部領域は、図９に示すアミノ酸配列を有することができる。この供試試料中の検出しようとする抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭから成る群から選ぶことができる。抗原は、感染因子、自己抗原、アレルゲンおよび医薬化合物から成る群から選ぶことができる。感染因子は、寄生虫、細菌、真菌、酵母およびウィルスから成る群から選ぶことができる。更に詳しくは、ウィルスは、ヒト免疫不全ウィルス−１、ヒト免疫不全ウィルス−２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＧＢ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、および風疹ウィルスから成る群から選ぶことができる。寄生虫は、トキソプラズマ・ゴンディおよびトリパノソーマ・クルージから成る群から選ぶことができる。真菌は、ヒストプラスマ・カプスラツムおよびクリプトコックス・ネオホルマンスから成る群から選ぶことができ、そして細菌は、ヘリコバクター・ピロリおよびストレプトコッカス・ピオゲネスから成る群から選ぶことができる。また、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗−抗体、ｂ）抗体に特異的な抗原、およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットも含む。加えて、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗−抗体、ｂ）抗体に特異的な抗原、およびｃ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、この抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットも含む。更に、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗−抗体、ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成る直接または間接共役物、およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットを包含する。また、本発明は、ａ）抗体に特異的な抗−抗体、ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成る直接または間接共役物、およびｃ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬( ここで、２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、この抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である)を含んで成る、供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットを含む。すぐ上のキットにおいて、試薬は、測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体、測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体、免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体、および測定される抗体と同じ宿主種から誘導された、又は免疫学的交叉反応性に基づいて宿主種に関連する種から誘導された抗体不変部領域又はその断片に接合したポリペプチドから成る群から選ぶことができる。キメラモノクローナル抗体が、それぞれのキットの試薬である場合、それは、齧歯類から誘導されたＨおよびＬ鎖可変部領域ならびにヒトから誘導されたＨおよびＬ鎖不変部領域遺伝子を含んで成る。供試試料中の検出しようとする抗体は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭから成る群から選ぶことができる。抗原は、感染因子、自己抗原、アレルゲンおよび医薬化合物から成る群から選ばれる。感染因子は、寄生虫、細菌、真菌、酵母およびウィルスから成る群から選ぶことができる。更に詳しくは、ウィルスは、ヒト免疫不全ウィルス−１、ヒト免疫不全ウィルス−２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＧＢ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、および風疹ウィルスから成る群から選ぶことができる。寄生虫は、トキソプラズマ・ゴンディおよびトリパノソーマ・クルージから成る群から選ぶことができる。真菌は、ヒストプラスマ・カプスラツムおよびクリプトコックス・ネオホルマンスから成る群から選ぶことができ、そして細菌は、ヘリコバクター・ピロリおよびストレプトコッカス・ピオゲネスから成る群から選ぶことができる。また、本発明は、１種より多い抗原に対して開発された、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法を包含し、ここで、この方法は、（ａ）抗体を含有する疑いのある供試試料と抗体に特異的な抗原とを、それぞれ、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させること、（ｂ）抗原／抗体複合体に直接または間接共役物を、結合した抗体に共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で加えること、この共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成り、（ｃ）シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出すること、および（ｄ）抗原に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いること、を含んで成り、ここで、改良として、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、この試薬のそれぞれが、それぞれ、この抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である。それぞれの試薬は、測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体、測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体、免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体、および測定される抗体と同じ宿主種から誘導された、又は免疫学的交叉反応性に基づいて宿主種に関連する種から誘導された抗体不変部領域又はその断片に接合したポリペプチドから成る群から選ぶことができる。他の全ての方法に関する前記の特徴は、同様にこの方法に当てはまる。また、本発明は、１種より多い抗原に対して開発された、供試試料中に存在するかもしれない抗体の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）それぞれ、抗体に特異的な抗原、ｂ）それぞれが、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成る直接または間接共役物、およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、それぞれの抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成るキットを含む。このキットにおいて、それぞれの試薬は、測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体、測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体、免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体、および測定される抗体と同じ宿主種から誘導された、又は免疫学的交叉反応性に基づいて宿主種に関連する種から誘導された抗体不変部領域又はその断片に接合したポリペプチドから成る群から選ぶことができる。他のキットに関する前述の特徴は、同様にこのキットに当てはまる。図面の簡単な説明図１は、抗体分子の基本的構造を具体的に説明する。２つの同一の重（Ｈ）鎖は、４または５個のいずれかのドメイン（抗体のクラスに依存して）およびヒンジ領域から成り、一方、軽（Ｌ）鎖は２つのドメインから成る。ＨおよびＬ鎖のアミノ末端ドメインは、可変部（Ｖ）領域と呼ばれ、抗原結合活性に関与する。ＨおよびＬ鎖に存在する他のドメインは、不変部領域を構成する。これは、マウスのＶ領域がヒトの不変部領域に結合しているマウス−ヒトキメラ抗体の描写である。図２は、アボットＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ自動化抗体捕獲−型免疫測定に関与する工程を示す。図３は、ゲノム構造にヒトＩｇＧ１（ｈｕＣγ１）およびヒトカッパ不変部領域遺伝子（ｈｕＣκ）を有する抗体発現ベクターｐｄＨＬ２を示す。両方の転写単位は、上流免疫グロブリンＨ鎖エンハンサー要素（Ｅ_H）およびマウスメタロチオネインＩプロモーター（Ｐ_MT）を有する。Ｖκ領域（ＸｂａＩ−ＢａｍＨＩ）およびＶ_H領域（ＸｈｏＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ）カセットの挿入は、完全な抗体の発現をもたらす。また、このベクターは、ＳＶ４０初期領域エンハンサーの制御下のプラスミドｐＢＲ３２２および改変したマウスジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子から誘導された細菌の複製開始点（ｏｒｉ）およびβ−ラクタマーゼ（ａｍｐ）遺伝子、プロモーターならびにポリアデニル化（ポリＡ）シグナル配列を有する。ＤＨＦＲマーカー遺伝子は、メトトレキセートを用いた哺乳類細胞の選択および増幅を可能にする。キメラＩｇＭ構築物ｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１は、ｐｄＨＬ２の改造バージョンである。ｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１では、ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩ部位間に位置するスタファー断片は、５−４６５−２１０Ｖκカセット（図７）により置換されている。５−４６５−２１０Ｖ_Hカセット（図６）は、ＸｈｏＩおよびＨいｎｄＩＩＩ部位間に位置するスタファー断片に取って代わっている。更に、ヒトＩｇＧ１は、ヒトＩｇＭ不変部領域（ｈｕＣμ）遺伝子のゲノミッククローンにより置換されている。ｈｕＣμクローンは、ＳｐｅＩからＥｃｏＲＶ／ＰｖｕＩＩ接合部に及ぶ。制限部位の略号は、Ｂ，ＢａｍＨＩ；Ｈ，Ｅ，ＥａｇＩ；ＥＶ、ＥｃｏＲＶ；ＨｉｎｄＩＩＩ；Ｐ，ＰｖｕＩＩ；ＳＩＩ，ＳａｃＩＩ；Ｓ，ＳａｌＩ；Ｓｐ，ＳｐｅＩ；Ｘｂ，ＸｂａＩ；およびＸｈ，ＸｈｏＩである。図４は、発現構築物ｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１を作成するのに関与する鍵となる工程の図式的表現を示す。この発現ベクターは、マウスのハイブリドーマ５− ４６５−２１０由来のＨおよびＬ鎖Ｖ領域およびヒト不変部領域遺伝子から成るマウス−ヒトキメラＩｇＭ抗体をコードする。このキメラ抗体は、トキソプラズマ・ゴンディのＰ３０に特異的である。図５は、発現ベクターｐＪＨ３−１９−９５Ａを構築するのに用いた手順の概要を示す。この発現構築物は、マウスハイブリドーマ１−７０６−１３９から誘導されたＨおよびＬ鎖Ｖ領域ならびにヒト不変部領域遺伝子を有するマウス− ヒトキメラＩｇＭ抗体をコードする。このキメラＩｇＭ抗体は、トキソプラズマ・ゴンディのＰ６６に選択的に結合する。図６は、ハイブリドーマ５−４６５−２１０からクローン化したＶ_HｃＤＮＡを有するＶ_Hカセットのヌクレオチド配列（配列番号：２参照）を具体的に説明する。演繹されるアミノ酸配列を、下に一文字記号により示す（配列番号：１参照）。成熟蛋白質の最初のアミノ酸を、（＋１）で示し、不変部領域へのＪ_H２のスプライス点を、矢印で示し、カバットＥ．Ａ．(Kabat E.A.)等（免疫学的目的の蛋白質配列、５版、米国厚生省（Department of Health and Hum an Services）、ベテスダ、ＭＤ（１９９１））により定義された相補性決定領域（ＣＤＲｓ）を示す。ＰＣＲ法に用いた縮重センスプライマーは、ｃＤＮＡからヌクレオチド４１に及ぶこのＶ_H断片を増幅する。注目すべき他の特徴：（１ −３９）、クローニング部位（ＸｈｏＩ）を有するセンストランスファープライマー；（１６−７２）、リーダー配列；（７３−３６６）、Ｈ鎖Ｖ−遺伝子；（３６７−３８４）、Ｈ鎖Ｄセグメント：（３８５−４２９）、Ｈ鎖Ｊ_H２−ミニ遺伝子；（４３０−４４７）、アンチセンストランスファープライマーから誘導されたスプライス部位配列およびＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位。図７は、ハイブリドーマ５−４６５−２１０からクローン化したＶκｃＤＮＡを有するＶ_Lカセットのヌクレオチド配列（配列番号：４参照）を表す。演鐸されるアミノ酸配列を、一文字記号により示す（配列番号：３参照）。成熟蛋白質の最初のアミノ酸を、（＋１）で示し、Ｊκ２およびＣκ遺伝子のスプライス点を、矢印で示し、そして図６におけるように示したＣＤＲｓを示す。ＰＣＲ法に用いたセンスプライマーは、ｃＤＮＡから４５の位置に及ぶＶκ領域を増幅する。注目すべき更なる配列：（１−４０）、ＸｂａＩクローニング部位を含むセンストランスファープライマー配列；（１７−７６）、リーダー配列；（７７−３７３）、κ鎖Ｖ−遺伝子；（３７４−４０９）、Ｊκ−ミニ遺伝子；（４１０−４２８）、アンチセンストランスファープライマー中に組み込まれるスプライス部位配列およびＢａｍＨＩクローニング部位。図８は、ハイブリドーマ１−７０６−１３９からクローン化したＶ_HｃＤＮＡを有するＶ_Hカセットのヌクレオチド配列（配列番号：６参照）を示す。演繹されるアミノ酸配列を、一文字記号により示す（配列番号：５参照）。成熟蛋白質の最初のアミノ酸を、（＋１）で示し、Ｊ_H４および不変部領域間のスプライス接合部を、矢印で示し、そして図６におけるように測定したＣＤＲｓを示す。ＰＣＲ法に用いた縮合プライマー（センス）は、４１の位置に及ぶＶ_HｃＤＮＡを増幅する。更に注目すべき特徴としては：（１−３５）、ＸｈｏＩクローニング部位およびリーダー配列の５’末端を含むセンストランスファープライマー；（１２−６８）、リーダー配列；（６９−３６２）、Ｈ鎖Ｖ−遺伝子；（３６３−３８０）、推測したＤ−ミニ遺伝子配列^*；（３８１−４３４）、Ｊ_H４−ミニ遺伝子；（４３４−４５２）アンチセンストランスファープライマー中に組み込まれるスプライスおよびＨｉｎｄＩＩＩクローニング部位が挙げられる。^*ＤおよびＪ−ミニ遺伝子間の正確な境界は、測定できなかった。図９は、ハイブリドーマ１−７０６−１３９からクローン化したＶκ領域を有するＶ_Lカセットのヌクレオチド配列（配列番号：８参照）を表す。演繹されるアミノ酸配列を、一文字記号で示す（配列番号：７参照）。成熟蛋白質の最初のアミノ酸を、（＋１）で示し、Ｊκ１−ミニ遺伝子およびＣκ遺伝子間のスプライス点を、矢印で示し、そして図６におけるように測定したＣＤＲｓを示す。ｃＤＮＡ由来のＶκ領域のＰＣＲ増幅に用いた縮合センスプライマーの３’末端は、４２の位置に存在する。他の特徴としては：（１−３９）、ＸｂａＩクローニング部位および５’リーダー配列を含むセンストランスファープライマー配列；（１３−６９）、リーダー配列；（７０−３６８）、κＶ−遺伝子；（３６９−４０５）、Ｊκ１−ミニ遺伝子；（４０６−４２４）、アンチセンストランスファープライマー中に組み込まれるスプライスおよびＢａｍＨＩクローング部位。図１０は、ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ測定における陽性ヒト血清誘導検定試薬と比較した抗−Ｐ６６キメラＩｇＧの検定曲線を示す。速度カウント（カウント／秒／秒）を、Ｙ軸上に示す。図１１は、ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＭ測定における陽性ヒト血清誘導検定試薬と比較した抗−Ｐ６６キメラＩｇＭ抗体について得られた検定曲線を具体的に示す。指標検定試薬の７１０の速度（速度カウント＝カウント／秒／秒）は、１２．３μｇ／ｍｌの濃度で抗−Ｐ６６キメラＩｇＭと釣り合った。図１２は、ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ測定における検定試薬として一般に用いられる陽性ヒト血清と比較した抗−Ｐ３０キメラＩｇＧ用検定曲線を示す。速度カウント（カウント／秒／秒）を、Ｙ軸上に示す。図１３は、検定試薬用陽性ヒト血清と共に抗−Ｐ３０キメラＩｇＭ抗体用のＩＭｘに関して実験した希釈度曲線を具体的に示す。指標検定試薬の５６０の速度（速度カウント＝カウント／秒／秒）は、８．４μｇ／ｍｌの濃度で抗−Ｐ３０キメラＩｇＭとうまく釣り合った。図１４は、Ｂ検定試薬水準（０．００３６ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ３０＋０．０１０ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ６６）で４５℃で全ての試薬に対して実施した加速安定性分析を表す。ヒト血清検定試薬と比較したキメラＩｇＧ組み換え抗体の差異は、観察されなかった。しかしながら、１２日までに、微粒子上のＰ３０エピトープの４０％が、もはや抗−Ｐ３０キメラ抗体により認識されない。ｒ＝測定試薬；ｃ＝検定試薬。図１５は、Ｆ検定試薬希釈物（０．１１ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ３０＋０．３０５ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ３０）を用いた４５℃で貯蔵した試薬の加速安定性分析を示す。ヒト血清検定試薬と比較したキメラＩｇＧ組み換え抗体の差異は、観察されなかった。しかしながら、１２日までに、微粒子上のＰ３０エピトープの４０％が、もはや抗−Ｐ３０キメラ抗体により認識されない。ｒ＝測定試薬；ｃ＝検定試薬。図１６は、７個の独立した抗原（Ａｇ）ロットに対する、Ｂ検定試薬（０．００３７ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ３０ＩｇＧ１＋０．０２０ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ６６ＩｇＧ１）またはＦ検定試薬（０．０１１ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ３０ＩｇＧ１および０．６１ｍｇ／ｍｌ抗−Ｐ６６キメラＩｇＧ１）に相当するモノクローナル抗体と陽性ヒト血清で製造した検定試薬（ｃａｌｓ）との混合物の比較を具体的に示す。ｒ＝測定試薬；ｃ＝検定試薬。発明の詳細な説明本発明は、診断キットおよび測定における検定試薬(標準試薬)および／または対照試薬としての試薬の使用方法に関する。更に詳しくは、所望のリガンドに特異的な抗体を定性的または定量的に測定するよう設計された診断キットおよび測定の検定試薬および対照試薬の製造に、血漿または血清の代わりに、１種以上のこれらの試薬を用いることができる。試薬自体は、予め決めたリガンドに特異的に結合し、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを有し、特異性および親和性が均質である。試薬は、ハイブリドーマおよび／または組み換えＤＮＡ技術の使用により連続して製造することができる。上記と同一の試薬のいくつかの態様が存する。これらの態様は、例えば、以下の通りである：１）測定される抗体と同じ宿主種から誘導された不変部領域遺伝子に接合した１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖可変部領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体；２）測定される抗体と同じ宿主種から誘導されたモノクローナル抗体；３）免疫学的交叉反応性に基づいて、測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体；および４）所望の宿主種の抗体不変部領域または不変部領域の一部に接合した予め決めたリガンドに特異的に結合するポリペプチド。上記でリストアップした態様を、下記に詳細に説明する。１）キメラモノクローナル抗体：本発明のこの態様において、診断測定法またはキットの検定試薬または対照試薬として用いる試薬は、１つの宿主種由来のＨおよびＬ鎖不変部領域に接合した別の宿主種由来のＨおよびＬ鎖Ｖ領域を含んで成るキメラモノクローナル抗体分子である。ＨおよびＬ鎖Ｖ領域は、それらに限定される訳ではないが、齧歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、抗体を産生するいずれの脊椎動物からも誘導することができる。抗体Ｖ領域源およびそれらが誘導される方法は、主として、便宜性および当業者等に公知の技術に基づく。例えば、ＨおよびＬ鎖Ｖ領域（リガンド結合活性に関与する部分の抗体分子を含んで成る）は、単一のＢ細胞、Ｂ細胞ハイブリドーマ、インビトロで増殖したＢ細胞、またはインビボで増殖したＢ細胞、例えば、ＳＣＩＤマウス中のヒトＢ細胞（シモンソンＡ．Ｃ．(S imonsson A.C)等，Bio／Techniques 18 (5):862-869 (1995)；バンチェルーＪ． (Banchereau J.)等，Science 251:70-72 (1991)；アモロソＫ.(Amoroso K.)およびリプスキーＰ．Ｅ．(Lipsky P.E.),J.Immunol．145:3155-3161(1990）;ヅチョサルＭ．Ａ．(Duchosal M.A)等，Nature 355:258-262(1992)）から単離することができる。抗体Ｖ領域は、当業界で公知の標準手法またはこれらの手法の変法によりクローン化することができる。例えば、Ｖ領域は、下記の実施例ＩＩＩで説明する方法によりクローン化することができる。あるいは、所望の結合活性を有する抗体ＨおよびＬ鎖Ｖ領域セットは、細菌、例えば大腸菌内で、例えば、Ｆａｂ断片（Ｖ_Hおよび重鎖不変部領域の最初のドメインのヘテロダイマー、ならびに完全軽鎖）、Ｆｖ断片（ＨおよびＬ鎖Ｖ領域ドメインのヘテロダイマー）、または一本鎖Ｆｖ（ペプチドリンカーにより結合したＶ_HおよびＶ_Lドメインのヘテロダイマー）としての発現によりスクリーニングすることもできるし、又は、ラムダ現した組み合わせライブラリーの使用を介して選ぶこともできるし、または他のいずれかの生物学的（例えば、レトロウィルスもしくはポリソーム）または非生物学的システムでのデスプレイによりスクリーニングすることもできる（ベターＭ．(Better M.)等,Science，240:1041-1043(1988)；スケラＡ．(Skerra A.)およびプルックスンＡ．(Pluckthun A.),Science,240:1038-1041(1988);ヒューズＷ.Ｄ.(Huse W.D.)等，Science,246:1275-1281 (1989)；マッカファティＪ．(Mc Cafferty J.)等，Nature 348:552-554(1990)；カングＡ．Ｓ．(Kang A.S.)等，P roc．Natl．Acad．Sci．USA 88:4363-4366 (1991)；フッツＰ．(Fuchs P.)等，B io/Technology 9:1369-1372(1991)；フランシスコＪ．(Francisco J.)等，Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 90:10444-10448(1993);マセアキスＬ．Ｃ．(Mattheaki s L.C.)等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA91:9022-9026(1994)）。ライブラリーは、免疫したまたは免疫していない宿主から単離した本来のＶ領域、合成もしくは半合成Ｖ領域、または改変Ｖ領域(マークスＪ.Ｄ.(Marks J.D.)等，J．Mol．B iol．222:581-597(1991);バーバス(Barbas)Ｃ．Ｆ．ＩＩＩ等,Proc．Natl．Acad ．Sci．USA 89:4457-4461 (1992)）から成ることができる。後者の例としては、インビトロ突然変異誘発による特異性および／または親和性の適正調整か挙けられる。抗体ｖ領域組み合わせ（ＨおよびＬ）の最も重要な性質は、それＶ、リガンドに対し所望の性質の特異性および親和性を有する結合部位を形成することである。必要とする特異性および親和性は、意図する用途により、そして測定フォーマットおよび所望の性能特性（例えば、感度、特異性、精度、および再現性）のような特性に依存して指図される。例えば、インビボで血清学的応答を模倣する、抗原上の１つの特定の遺伝的優性のエピトープ（リガンド）に特異的な検定試薬または対照抗体を必要とする場合、キメラ抗体を得るのに用いるＨおよびＬ鎖Ｖ領域セットは、この基準により選ぶことができる。抗体不変部領域遺伝子は、それらに限定される訳ではないが、齧歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、いずれの脊椎動物種からも誘導することができる。宿主種の選択は、意図する目的により規定される。抗体不変部領域は、測定される抗体と同じ宿主種、または近い関係のものから誘導する。キメラモノクローナル抗体は、組み換えＤＮＡ技術の使用を通じて生産することができる。例えば、キメラ抗体は、標的均質組み換えにより得ることができる（ペル(Pell)Ｈ．Ｐ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 86:8507:8511 (1989)）。あるいは、抗体ＨおよびＬ鎖Ｖ領域遺伝子は、異なる宿主種から誘導した抗体ＨおよびＬ鎖不変部領域遺伝子を有する哺乳類発現ベクター中にクローンすることができる。発現構築物の適切な宿主細胞への導入は、規定された特性の完全なキメラ抗体の産生をもたらす（モリソン(Morrison)Ｓ．Ｌ.等，Proc．Natl．Aca d．Sci．USA 81:6851-6855(1984)）。染色体外要素として安定に組み込まれた又は存在するのいずれかである真核生物抗体発現ベクターは、当業者等により述べられ且つ知られている。ＨおよびＬ鎖転写単位は、別々のプラスミドにより別個に、または同じベクターにより共に宿主細胞中に導入することができる。抗体発現ベクターの１例は、ゲノム構造にヒトＩｇＧ１（ｈｕＣγ１）およびヒトカッパ不変部領域（ｈｕＣκ）を有するプラスミド即ちｐｄＨＬ２（図３）である（ギリーズ(Gillies)Ｓ．Ｄ．等，J．Immunol．Methods 125:191-202(198 9))。両方の転写単位は、上流免疫グロブリンＨ鎖エンハンサー要素（Ｅ_H）およびマウスのメタロチオネインＩプロモターを有する。Ｖκ領域およびＶ_H領域カセットの挿入は、完全な抗体の発現をもたらす。それぞれのＶ遺伝子カセットは、５’免疫グロブリンリーダー配列およびＶ遺伝子のスプライスドナー部位３’を有する。また、このベクターは、ＳＶ４０初期領域エンハンサーの制御下のプラスミドｐＢＲ３２２から誘導された細菌の複製開始点（ｏｒｉ）およびβ−ラクタマーゼ遺伝子および改変したマウスジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子、プロモーターならびにポリアデニル化シグナル配列を有する。ＤＨＦＲマーカー遺伝子は、メトトレキセートを用いた哺乳類細胞の選択および増幅を可能にする。キメラ抗体を生産するのに用いる発現ベクターは、それらに限定される訳ではないが、齧歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、抗体を産生する脊椎動物種から単離したいずれかの不変部領域遺伝子（例えば、ヒトでは：κ、λ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ）を有するように改造することができる。定義により、ＨおよびＬ鎖Ｖ領域を誘導する宿主種は、抗体不変部領域を誘導するそれと異なる。用いるベクターシステムに依存して、多数の異なる不死化細胞系が、好適な宿主として役立つことができ、これらとしては、骨髄腫（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３）、ハイブリドーマ（Ｓｐ２／０−Ａｇ１４）、リンパ腫およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられるが、これらに制限される訳ではない。発現構築物は、それらに限定される訳ではないが、燐酸カルシウム沈殿、プロトプラスト融合、リポフェクション、レトロウィルス誘導シャトルベクター、およびエレクトロボレーションを含む種々の技術を用いて導入することができる。適切な発現は、培地中への組み換え抗体の分泌をもたらす。あるいは、細胞を溶解し、引き続き抗体を精製することができる。キメラ抗体分子又はその断片は、それらに限定される訳ではないが、バキュロウィルス、酵母、大腸菌のような細菌、およびインビトロでラビットの網状赤血球溶解物のような無細胞システムを含む他のシステムで生産することもできる（ハセマン(Hasemann)Ｃ．およびカプラ(Capra)Ｊ．Ｄ．Proc．Natl．Acad． Sci.USA 87:3942-3946(1990)；ホルウィッツ(Horwitz)Ａ．Ｈ．等，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 85:8678-8682(1988)；プラックスン(Pluckthun)Ａ．,Bio/Tec hnology 9:545-551(1991)；ニコルス(Nicholls)等，J．Biol．Chem．268(7):530 2-5308(1993)）。まとめると、キメラモノクローナル抗体は、１つの宿主種のＨおよびＬ鎖抗体不変部領域に結合した、別の宿主種のＨおよびＬ鎖Ｖ領域から誘導した少なくとも２つ（例えば、ＩｇＧ）そして１０まで（例えばペンタメリックＩｇＭ）の同一の結合部位を含んで成る。ＨおよびＬ鎖Ｖ領域は、所望のリガンドに対する結合特異性および親和性に関与する。ＨおよびＬ鎖不変部領域源は、測定しようとする抗体の宿主種により決定され、好ましくは、それと同じものである。不変部領域は、リガンド結合活性がないが、特定の不変部領域に特異的な血清学的に確認可能なエピトープ（リガンド）を提供し、従って、他の不変部領域とそれとを区別する手段を提供する。例えば、Ｓｐ２／０−Ａｇ１４のような不死化宿主細胞中でのキメラ抗体をコードするＨおよびＬ鎖遺伝子の発現は、予め決めた均質な特異性および親和性のモノクローナルキメラ抗体の生産をもたらす。従って、単一の規定された結合特異性のＶ領域、ならびにＨおよびＬ鎖不変部領域エピトープを有するキメラ抗体の連続した供給源が提供される。１種以上のこれらの試薬は、特定の抗体のレベルを定性的または定量的に測定するよう設計された診断測定法およびキットの検定試薬および／または対照試薬として有用である。この態様の１つの特定の例は、検定試薬および／または対照試薬としての用途のための、ヒトＨおよびＬ鎖不変部領域に接合したマウスＨおよびＬ鎖Ｖ領域を有する組み換えキメラ抗体である。本発明のこの態様は、態様（４）の説明に続く実施例で詳細に具体的に説明する。２）測定される抗体と同じ宿主種から誘導されるモノクローナル抗体：本発明のこの態様において、モノクローナル抗体は、齧歯類（即ち、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル、およびヒトのような、抗体を産生するいすれの脊椎動物、即ち哺乳類種又はそれ以外からも誘導することができる。選ばれる宿主種は、意図する測定の目的またはキットによる。例えば、ヒトの抗体を測定する場合、モノクローナル抗体は、マウス：ヒトヘテロハイブリドーマ、ヒト：ヒトハイブリドーマのような伝統的ハイブリドーマ技術により、またはＥＢウィルス感染のような不死化の他の手段により、ヒトＢ細胞から確立することができる（ノウィンスキー(Nowinski)Ｒ．等，Science 21 0:537-539 (1980)；オルソン(Olsson)Ｌ．およびカプラン(Kaplan)Ｈ．Ｓ.,Proc .Natl.Acad.Sci.USA 77:5429-5431（1988）；ロセン(Rosen)Ａ．Ｍ．等，Nature 267:52-54(1977)）。ヒトＨおよびＬ鎖免疫グロブリン座の一部のゲノムクローンを有するトランスジェニックマウスの近年の創出は、所望の特異性のモノクローナルヒト抗体を分泌するマウス：マウスハイブリドーマをも樹立する機会を提供する（ロンバーグ(Lonberg)Ｎ.等，Nature 368:856-859(1994);グリーン(Gree n)Ｌ．Ｌ．等，Nature Genetics 7:13-21 (1994)）。また、ヒト抗体は、組み換えＤＮＡ技術の使用を通じて創出することができる。例えば、ＨおよびＬ鎖Ｖ領域（リガンド結合活性に関与する部分の抗体分子を含んで成る）は、単一のヒトＢ細胞、インビトロで増殖したヒトＢ細胞、またはＳＣＩＤマウス中で増殖したヒトＢ細胞（シモンソンＡ．Ｃ．等， Bio/Techniques 18(5):862-869(1995)；バンチェルーＪ．等，Science 251:70-7 2 (1991)；アモロソＫ．およびリプスキーＰ．Ｅ．，Ｊ．Immunol．145:3155-31 61 (1990)；ヅチョサルＭ．Ａ．等，Nature 355:258-262(1992)）から単離することができる。抗体Ｖ領域は、当業界で公知の標準手法またはこれらの手法の変法によりクローン化することができる。例えば、Ｖ領域は、下記の実施例ＩＩＩで説明する方法によりクローン化することができる。あるいは、所望の結合活性を有するヒトＨおよびＬ鎖Ｖ領域セットは、細菌、例えば大腸菌内での発現により、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、または一本鎖Ｆｖとしてスクリーニングすることもできるし、またはラムダファージ内、バクテリオファージの表面上、細菌の表面上で発現した組み合わせライブラリーの使用を介して選ぶこともできるし、又は、他のいずれかの生物学的（例えば、レトロウィルスもしくはポリソーム）または非生物学的システムでのデスプレイによりスクリーニングすることもできる（ベターＭ．等Science，240:1041-1043(198 8);スケラＡ.およびプルックスンＡ.,Science，240:1038-1041 (1988)；ヒューズＷ．Ｄ．等，Science，246:1275-1281 (1989)；マッカファティＪ．等，Nature 348:552-554(1990)；カングＡ．Ｓ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:4363-4366(1991);フッツＰ．等，Bio/Techno logy 9:1369-1372(1991);フランシスコＪ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90 :10444-10448(1993)；マセアキスＬ．Ｃ．等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91:9022- 9026(1994)）。抗体ライブラリーは、免疫した、または免疫していないヒト由来の本来のＶ領域、合成もしくは半合成Ｖ領域、または改変Ｖ領域（マークスＪ．Ｄ.等,J．Hol.Biol.222:581-597(1991)；バーバスＣ．Ｆ．ＩＩＩ等，Proc．Nat l．Acad．Sci．USA 89:4457-4461 (1992)）から成ることができる。後者の例としては、インビトロ突然変異誘発による特異性および／または親和性の適正調整が挙げられる。Ｖ領域を選ぶ主たる基準は、リガンド結合特性の基準による。ヒト抗体を測定する場合、ヒトＨおよびＬ鎖Ｖ領域遺伝子を、ヒトＨおよびＬ鎖不変部領域遺伝子を有する哺乳類発現ベクター内にクローン化する。適切な宿主細胞への発現構築物の導入は、規定された特異性の完全なヒト抗体の産生をもたらす（ドライ(Dorai)Ｈ．等，Hybridoma 11 (5):667-675(1992)）。染色体外要素として安定に組み込まれた又は存在しているいずれかの抗体用の多数の真核生物発現ベクターが、説明されており、これらは、当業者等に公知である。ＨおよびＬ鎖転写単位は、別々のプラスミドにより個々に、または同じベクターにより共に宿主細胞中に導入することができる。適切な発現ベクターの１例は、ゲノム構造にヒトＩｇＧ１（ｈｕＣγ１）およびヒトカッパ不変部領域（ｈｕＣκ）遺伝子を有するプラスミド即ちｐｄＨＬ２（図３）である（ギリーズ(Gillies)Ｓ．Ｄ．等，J．Immunol．Methods 125:191 -202(1989)）。両方の転写単位は、上流免疫グロブリンＨ鎖エンハンサー要素（Ｅ_H）およびマウスのメタロチオネインＩプロモーターを有する。Ｖκ領域およびＶ_H領域カセットの挿入は、完全な抗体の発現をもたらす。それぞれのＶ遺伝子カセットは、５’免疫グロブリンリーダー配列およびＶ遺伝子のスプライスドナー部位３’を有する。また、このベクターは、ＳＶ４０初期領域エンハンサーの制御下のプラスミドｐＢＲ３２２から誘導された細菌の複製開始点およびβ− ラクタマーゼ遺伝子および改変したマウスジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子、プロモーターならびにポリアデニル化シグナル配列を有する。ＤＨＦＲマーカー遺伝子は、メトトレキセートを用いた哺乳類細胞の選択および増幅を可能にする。抗体発現べクターは、それらに限定される訳ではないが、醤歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、抗体を産生する脊椎動物種から単離した不変部領域遺伝子（ヒトの場合：κ、λ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ）を有するように改造することができる。同様に、抗体ＨおよびＬ鎖Ｖ領域は、それらに限定される訳ではないが、齧歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、抗体を産生する脊椎動物種から単離することができる。同じ宿主種から誘導したＨおよびＬ鎖不変部領域を有する抗体発現ベクター中へのＨおよびＬ鎖Ｖ領域の導入は、組み換えモノクローナル抗体の形成をもたらす。従って、いずれのクラスまたはサブクラスのモノクローナル抗体も、組み換えＤＮＡ、ハイブリドーマ、又はこれらの技術の組み合わせの使用を通じて、抗体を産生するいずれの脊椎動物種からも生産することができる。選ばれる宿主種は、測定の意図する目的に依存する。発現ベクターに依存して、多数の異なる不死化細胞系が、好適な宿主として役立つことができ、これらとしては、骨髄腫（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３）、ハイブリドーマ（Ｓｐ２／０−Ａｇ１４）、リンパ腫およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられるが、これらに制限される訳ではない。発現構築物は、それらに限定される訳ではないが、燐酸カルシウム沈殿、プロトプラスト融合、リポフェクション、レトロウィルス誘導シャトルベクター、およびエレクトロボレーションを含む種々の技術を用いて導入することができる。適切な発現は、培地中への組み換え抗体の分泌をもたらす。あるいは、細胞を溶解し、引き続き抗体を精製することができる。抗体分子又はその断片は、それらに限定される訳ではないが、バキュロウィルス、酵母、大腸菌のような細菌、およびインビトロでラビットの網状赤血球溶解物のような無細胞システムを含む他のシステムで生産することもできる（ハセマンＣ．およびカプラＪ．Ｄ．Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:3942-3946(1990) ；ホルウィッツＡ．Ｈ．等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:8678-8682 (1988)；プラックスンＡ．，Bio/Technology 9:545-551(1991)；ニコルス等，J．Biol．Chem．268(7):5302-5308(1993)）。ハイブリドーマ、組み換えＤＮＡ、又はこれらの技術の組み合わせにより生産したモノクローナル抗体は、ＨおよびＬ鎖Ｖ領域により決められた所望のリガンドに対する特異性および親和性を有する少なくとも２つ（例えば、ＩｇＧ）そして１０まで（例えばペンタメリックＩｇＭ）の同一の結合部位を有することができる。完全な抗体は、全てのＨおよびＬ鎖不変部領域、従って、全ての関連抗原エピトープを有する。更には、抗体はモノクローナルであり、従って、単一のわかった特異性および親和性を有し、無制限の量で製造することができる。１種以上のこれらの試薬は、特定の抗体のレベルを定性的または定量的に測定するよう設計された診断測定法およびキットの検定試薬および／または対照試薬として用いることができる。３）免疫学的交叉反応に基づいて測定されるそれに関連する種から誘導されたモノクローナル抗体本発明の更なる態様には、測定しようとするそれに密接に関連する種から誘導されるモノクローナル抗体が含まれる。種の近縁関係は、不変部領域エピトープの免疫学的交叉反応性を基準として定義される。少なくとも１つの不変部領域エピトープが、測定される種のそれと同じであるか又は実質的に同じである。共有するエピトープは、化学的に同一でなくてもよいが、三次構造における化学的類似性を示す。モノクローナル抗体は、齧歯類（即ち、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル、およびヒトのような、抗体を産生するいずれの脊椎動物、即ち哺乳類種又はそれ以外からも誘導することができる。選ばれる宿主種は、意図する測定の目的および、測定しようとする抗体の種の１つ以上の不変部領域エピトープに特異的に結合する試薬との反応性の基準による。例えば、ヒトの抗体を測定する場合、チンパンジーのような他の霊長類から得たモノクローナル抗体は、検定試薬または対照として十分である。チンパンジーおよびヒトの抗体不変部領域配列間の分子レベルでの相違は、ヒトのアロタイプ間のそれとほぼ等しい（エルリッヒ(Ehrlich)Ｐ．Ｈ．等，Hum．Antibod．Hybri domas 1:23-26(1990);エルリッヒＰ．Ｈ．等，Mol．Immunol．28-319-322(1991) ）。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマまたは組み換えＤＮＡ技術の使用を通じてチンパンジーから誘導することができる。後者の場合、ＨおよびＬ鎖Ｖ領域（リガンド結合活性に関与する部分の抗体分子を含んで成る）は、単一のチンパンジーＢ細胞、インビトロまたはインビボ（例えば、ＳＣＩＤマウス中で）で増殖したチンパンジーＢ細胞から単離することができる。抗体Ｖ領域は、当業界で公知の標準手法、又はこれらの手法の変法によりクローン化することができる。例えば、Ｖ領域は、下記の実施例ＩＩＩで説明する方法によりクローン化することができる。あるいは、所望の結合活性を有するチンパンジーＨおよびＬ鎖Ｖ領域セットは、細菌、例えば大腸菌内での発現により、例えば、Ｆａｂ断片、Ｆｖ断片、または一本鎖Ｆｖとしてスクリーニングすることもできるし、またはラムダファージ内、バクテリオファージの表面上、細菌の表面上で発現した組み合わせライブラリーの使用を介して選ぶこともできるし、又は、他のいずれかの生物学的（例えば、レトロウィルスもしくはポリソーム）または非生物学的システムでのデスプレイによりスクリーニングすることもできる（ベターＭ．等Science，240:1041- 1043 (1988)；スケラＡ．およびプルックスンＡ．，Science,240:1038-1041(198 8)；ヒューズＷ．Ｄ．等,Science， 246:1275-1281 (1989)；マッカファティＪ．等，Nature 348:552-554(1990);カングＡ．Ｓ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 88:4363-4366（1991）；フッツＰ．等，Bio/Technology 9:1369-1372(1991)；フランシスコＪ．等，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 90:10444-10448(1993)；マセアキスＬ．Ｃ．等，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 91:9022-9026(1994)）。抗体ライブラリーは、免疫感作した、または免疫感作していないチンパンジー由来の本来のＶ領域、合成もしくは半合成Ｖ領域、または改変チンパンジーＶ領域から成ることができる。後者の例としては、インビトロ突然変異誘発による特異性および／または親和性の適正調整が挙げられる。Ｖ領域を選ぶ主たる基準は、リガンド結合特性の基準による。チンパンジーＨおよびＬ鎖Ｖ領域遺伝子は、チンパンジー不変部領域遺伝子を有する哺乳類発現ベクター内にクローン化することができる。適切な宿主細胞への発現構築物の導入は、規定された特異性の完全なチンパンジー抗体の産生をもたらす。染色体外要素として安定に組み込まれた又は存在しているいずれかの抗体用の多数の真核生物発現ベクターが、説明されており、これらは、当業者等に公知である。ＨおよびＬ鎖転写単位は、別々のプラスミドにより個々に、または同じベクターにより共に宿主細胞中に導入することができる。チンパンジー抗体を発現するよう改造することのできる発現ベクターの１例は、プラスミドｐｄＨＬ２（図３）である。このベクターは、ゲノム構造にヒトＩｇＧ１（ｈｕＣγ１）およびヒトカッパ不変部領域（ｈｕＣκ）遺伝子を有する（ギリーズＳ．Ｄ．等，J．Immunol．Methods 125:191-202(1989)）。両方の転写単位は、上流免疫グロブリンＨ鎖エンハンサー要素（Ｅ_H）およびマウスのメタロチオネインＩプロモーターを有する。Ｖκ領域およびＶ_H領域カセットの挿入は、完全な抗体の発現をもたらす。それぞれのＶ遺伝子カセットは、５’免疫グロブリンリーダー配列およびＶ遺伝子のスプライスドナー部位３’を有する。また、このベクターは、ＳＶ４０初期領域エンハンサーの制御下のプラスミドｐＢＲ３２２から誘導された細菌の複製開始点およびβ−ラクタマーゼ遺伝子および改変したマウスジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）遺伝子、プロモーターならびにポリアデニル化シグナル配列を有する。ＤＨＦＲマーカー遺伝子は、メトトレキセートを用いた哺乳類細胞の選択および増幅を可能にする。抗体発現ベクターは、それらに限定される訳ではないが、齧歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、抗体を産生する脊椎動物種から単離した不変部領域遺伝子（ヒトの場合：κ、λ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＥ）を有するように改造することができる。同様に、抗体ＨおよびＬ鎖Ｖ領域は、それらに限定される訳ではないが、齧歯類（例えば、マウス、ハムスター、ラット）、ニワトリ、ラビット、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ブタ、サル（例えば、チンパンジー）、およびヒトを含む、抗体を産生するいすれの脊椎動物種からも単離することができる。同じ宿主種から誘導したＨおよびＬ鎖不変部領域を有する抗体発現ベクター中へのＨおよびＬ鎖Ｖ領域の導入は、組み換えモノクローナル抗体の形成をもたらす。従って、いずれのクラスまたはサブクラスのモノクローナル抗体も、組み換えＤＮＡ、ハイブリドーマ、又はこれらの技術の組み合わせの使用を通じて、抗体を産生するいずれの脊椎動物種からも生産することができる。選ばれる宿主種は、測定の意図する目的に依存する。ベクターシステムに依存して、多数の異なる不死化細胞系が、好適な宿主として役立つことができる。これらとしては、骨髄腫（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３）、ハイブリドーマ（Ｓｐ２／０−Ａｇ１４）、リンパ腫およびチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞が挙げられるが、これらに制限される訳ではない。発現構築物は、それらに限定される訳ではないが、燐酸カルシウム沈殿、プロトプラスト融合、リポフェクション、レトロウィルス誘導シャトルベクター、およびエレクトロポレーションを含む種々の技術を用いて導入することができる。適切な発現は、培地中への組み換えチンパンジー抗体の分泌をもたらす。あるいは、細胞を溶解し、引き続き抗体を精製することができる。抗体分子又はその断片は、それらに限定される訳ではないが、バキュロウィルス、酵母、大腸菌のような細菌、およびインビトロでラビットの網状赤血球溶解物のような無細胞システムを含む他のシステムで生産することもできる（ハセマンＣ．およびカプラＪ．Ｄ．Proc．Natl．Acad．Sci．USA 87:3942-3946(1990) ；ホルウィッツＡ．Ｈ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 85:8678-8682 (1988) ；プラックスンＡ．，Bio/Technology 9:545-551 (1991)；ニコルス等，J．Biol．Chem．268(7):5302-5308(1993)）。ハイブリドーマ、組み換えＤＮＡ、又はこれらの技術の組み合わせにより生産したモノクローナル抗体は、ＨおよびＬ鎖Ｖ領域により決められた所望のリガンドに対する特異性および親和性を有する少なくとも２つ（例えば、ＩｇＧ）そして１０まで（ペンタメリックＩｇＭ）の同一の結合部位を有することができる。完全な抗体は、全てのＨおよびＬ鎖不変部領域、従って、全ての関連抗原エピトープを有する。更には、抗体はモノクローナルであり、従って、単一のわかった特異性および親和性を有し、無制限の量で製造することができる。１種以上のこれらの試薬は、特定の抗体のレベルを定性的または定量的に測定するよう設計された診断測定法およびキットの検定試薬および／または対照試薬として用いることができる。４）所望の宿主種の抗体不変部領域に接合した、予め決めたリガンドに結合するポリペプチド本発明の第４の態様は、所望の宿主の抗体不変部領域または抗体不変部領域の一部（１つ以上の不変部領域ドメインまたは抗体不変部領域から誘導された１つ以上の個々のエピトープ）に接合した、予め決めたリガンドに対して特異的に結合することのできるポリペプチドに関する。これとしては、所望の種の抗体不変部領域の全てまたは一部に接合した以下のいずれかのものが挙げられる：（１）抗体分子のＣＤＲから誘導したもの、または、例えばファージデスプレイ技術の使用を通じて、リガンド特異性を基準として選んだもののような短いポリペプチド；（２）ミニボディのような抗体ドメイン又はその誘導体；（３）Ｆｖ断片；および（４）一本鎖Ｆｖ断片（レヴィ(Levi)Ｍ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:4374-4378(1993)；スミス(Smith)Ｇ．Ｐ．Science228:1315-1317(1985)；マーチン(Martin)Ｆ．等，EMBO J．13(22):5303-5309(1994)）。この分子は、１つ以上のポリペプチド鎖から成ることができる。この態様は、当業界で周知の種々の細菌ベクターを用いて容易に製造することができる。抗体断片及びその誘導体は、それに限定する訳ではないが真核生物細胞を含む他の宿主システム内で製造することもできる（シュ(Shu)Ｌ．等，Proc．Natl．Acad．Sci．USA 90:7995-7999(1993)）。この態様から誘導される試薬は、選ばれたリガンドに所望の特異性および親和性で結合すポリペプチドを有する。このポリペプチドは、全ての抗体不変部領域、不変部領域の１つ以上のドメイン、または選択した不変部領域の１つ以上のエピトープに接合する。抗体不変部領域又はその断片の選択は、意図する用途により規定される。これらの試薬は、真核生物発現システムで生産しようと原核生物発現システムで生産しようと、予め決めたリガンドに結合し、特異性および親和性が均一であることから事実上「モノクローナル」であり、そして少なくとも１つの不変部領域エピトープを有する試薬の継続的供給源を提供する。１種以上のこれらの試薬を、特定の抗体のレベルを定性的または定量的に測定するよう設計された診断測定法およびキットの検定試薬および／または対照試薬として用いることができる。態様１−４で述べたいずれの試薬も、免疫測定用検定試薬（標準試薬）および／または対照試薬を製造するのに、個別に用いることができるし、あるいは１種以上のこれらの試薬を用いることができる。検定試薬および／または対照試薬は、（ａ）所定の抗原上の異なるエピトープ、（ｂ）１つより多い抗原上の１つ以上の異なるエピトープ（例えば、トキソプラズマのＰ３０およびＰ６６蛋白質）、または１つより多い供給源から誘導された抗原上の１つ以上のエピトープ（例えば、同じ測定法でＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２の両方に対する抗体を監視するための、ＨＩＶ−１のｇｐ４１抗原およびＨＩＶ−２由来のｇｐ３６抗原）を認識する２種以上の試薬の混合物から成ることができることが考えられる。検定試薬（標準試薬）および／または対照試薬を製造するのにこれらの試薬をいくつ用いるかに関する判断は、測定フォーマットおよび所望の性能特性（例えば、特異性、感度、精度、再現性）に依存し、経験的観察に基づいており、当業界で公知の方法により決定することができる。診断測定法およびキットの検定試薬（標準試薬）および／または対照試薬の製造のための高力価陽性ヒト血漿または血清源の代替物としての前述のいずれかの試薬の使用は、いくつかの重要な利益をもたらす：（１）入手可能性：これらの試薬は、大量に容易且つ再現可能に製造することができる。生産規模は、要求に合わせて容易に作り変えることができ、継続可能な社内供給を提供する。（２）均質性：これらの試薬の全てが、特異性および親和性が均一である点で事実上「モノクローナル」である。これは、ロット間の変動を劇的に減少させる。これは、抗体濃度、特異的抗体の力価、及びそれにより免疫測定の性能に影響する特異性が変動するヒト血漿プールと対照的である。（３）エピトープ特異性の制御：試薬の特異性および親和性を容易に規定することができる。これは、免疫測定の性能および製造能力に対しより高い水準の制御を提供する。（４）検定試薬および対照試薬のより完全な特徴付けが可能、従って試薬の品質を保証し、および固相上への抗原の被覆を監視するのに有用である可能性がある試薬も提供し、従ってロット間の抗原濃度の変動が減少する。ある測定法では、１種以上の蛋白質抗原を、固相上に被覆する。例えば、蛋白質を微粒子上に被覆するとき、ポリクローナルでの被覆を監視する場合、それらを個々に被覆し引き続きこれらの微粒子を混合することが必要であろう。対照的に、これらの試薬を用い、ビーズを、全蛋白質と共被覆することができ、それぞれの濃度を測定することができる。また、これらの試薬は、抗原上の特異的エピトープの安定性および／またはロット間の一貫性を評価する道具を提供する。（５）減少した生産コスト：試薬の均質な性質と結びついた無限の入手可能性は、精製方法論の最適化に役立ち、両方とも、製造、検査および規制関連コストを減少させるのに貢献し、そして（６）安全性：検定試薬および対照試薬を製造するのに生物学的液（例えば、血漿、血清）を用いることは、バイオハザードの可能性がある。検定試薬および／または対照試薬を製造するのに生物学的液をこれらの試薬で置き換えることは、それらの製品に関係するバイオハザードの危険を著しく減少させるはずである。感染因子(例えば、ヒト免疫不全ウイルス−１、ヒト免疫不全ウィルス−２、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−１、ヒトＴ−細胞白血病ウィルス−２、サイトメガロウィルス、Ａ型肝炎ウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、Ｃ型肝炎ウィルス、Ｄ型肝炎ウィルス、Ｅ型肝炎ウィルス、ＧＢ型肝炎ウィルス、ＲＳウィルス、風疹ウィルス、トキソプラズマ・ゴンディ、トリパノソーマ・クルージ、クリプトコックス・ネオホルマンス、ヒストプラスマ・カプスラツム、ヘリコバクター・ピロリ、およびストレプトコッカス・ビオゲネス)に対する抗体を検出または監視する測定法およびキットにおける使用に加えて、本発明で述べた試薬は、他のいかなる抗原に対する抗体応答を監視するのにもやはり用いることができる。特に、これらの試薬は、自己抗原、アレルゲン、医薬品、および他の環境抗原に対する抗体を監視するキットおよび測定法に用いることができる。これらの測定法は、全ての反応性抗体、あるいは、反応性抗体の特定のクラスもしくはサブクラスを監視／測定するよう設計することができる。説明した試薬は、ヒトならびに抗体応答を発生させることのできる他のいずれの脊椎動物種の抗体応答を監視するための検定試薬および／または対照試薬として有用であり、従って、ヒトに医学的に及び獣医学的に応用される。本発明は、以下の非制限的実施例を用いることにより具体的に説明することができる。実施例Ｉ細胞系の調製トキソプラズマ蛋白質Ｐ６６およびＰ３０にそれぞれ特異的なハイブリドーマ１−７０６−１３９（ＩｇＧ２ｂ／κ）および５−４６５−２１０（ＩｇＧ２ａ／κ）を、アボットラボラトリーズ（Abbott Park，IL）で、非分泌ハイブリドーマＳｐ２／０−Ａｇ１４と免疫感作したスイスウェブスター脾臓細胞との融合により確立した。ハイブリドーマを、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、８ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕペニシリン／ｍｌおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを追加したＩＭＤＭ（５５０ｍｇグルコース／Ｌ）（完全ＩＭＤＭ）中に継代した。エレクトロポレーションに用いるＳｐ２／０Ａｇ１４細胞（アボットラボラトリーズ；アメリカンタイプカルチャーコレクション(American Type Culture Collection),Rockville，MD）を、１０％ＦＢＳ、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、１０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１０μｇ／ｍｌのゲンタマイシンを追加したＬ−グルタミン酸を含有する高グルコースＤ−ＭＥＭ（完全Ｄ−ＭＥＭ）中に継代した。プロトプラスト融合によるトランスフェクションに用いるＳｐ２／０Ａｇ１４細胞（アボットラボラトリーズ）を、２０％ＦＢＳ、０．８μｇ／ｍｌの８−アザグアニン（シグマケミカルカンパニー(Sigma Chemical Company)、セントルイス、MO）、５０Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを追加したＤ−ＭＥＭ（カタログ＃１１９９５）中に継代した。キメラ抗体を分泌するトランスフェクタントを、シグマ、アドリアラボラトリーズ（コロンブス(Columbus)、OH）またはレデレール(Lederele)ラボラトリーズ（カロライナ、プエルトリコ）から購入した０．１μＭのメトトレキセート（ＭＴＸ）追加完全ＩＭＤＭ中に継代した。断らない限り、全ての組織培養培地およびサプルメントは、ＢＲＬライフテクノロジーズ(Life Technologies)（ガイセルスバーグ(Gaithersbu rg)，MD）から購入した。細胞は、３７℃５％ＣＯ₂中で培養した。実施例ＩＩクローニング特に断らない限り、クローニングおよび配列決定用プライマーは、オペロンテクノロジーズ（Operon Technologies）Inc（アラメダ(Alameda)，CA）から購入した。免疫グロブリン可変部（Ｖ）領域の単離および断片の導入に用いるプライマーを、高性能液体クロマトグラフィーで精製した。製造元の仕様書に従い、ＡｍｐｌｉＴａｑＤＮＡポリメラーゼを含む、パーキン−エルマージーンアンプキット(Perkin-Elmer Gene Amp Kits)(パーキン−エルマーコーポレーション(Perkin-Elmer Corporation)、フォスターシティ(Foster City)，CA）から得た試薬を、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）増幅に用いた。逆転写およびＰＣＲ反応法を、ジーンアンプ(GeneAmp)９６００サーマルサイクラー(therma l cycler)（パーキン−エルマー）により実施した。制限酵素を、ＢＲＬライフテクノロジーズまたはニューイングランドバイオラボ(New England BioLabs)（ビバリー(Beverly),MA）から購入し、製造元により推奨された通りに消化を行った。特に断らない限り、クローニングに用いるＤＮＡ断片は、低融点（ＬＭＰ）アガロース（ＦＭＣコーポレーション、ロックランド(Rockland)，ME）により単離した。手短に説明すると、所望の断片をゲルから切り離し、小片に賽の目に切り、エッペンドルフのマイクロフュージチューブ内の４００μｌのＴＥ［１ｍＭのエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ；ｐＨ８．０：ＢＲＬライフテクノロジーズ）、１０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸塩（トリス−ＨＣｌ；ｐＨ８．０；ＢＲＬライフテクノロジーズ）］に加えた。アガロースを６８℃で溶解し、１分間の攪拌および、マイクロセントリフュージ内での１４，０００ｘｇでの遠心分離により８００μｌのバッファー飽和フェノール（ＢＲＬライフテクノロジーズ）で抽出した。水相を、新たなチューブに移し、１／１０容量の１０ＭのＬｉＣｌ₂（シグマケミカル、セントルイス、MO）を加えた。チューブを上記のように５分間遠心分離した。水相を新たなチューブに移し、２．５倍容量の無水エタノール（−２０℃、マッコルミックディスチリング(McCormick Distillin g) Co.，ウェストン(Weston)，MO）で沈殿させた。ＤＮＡを、上記のように１５分間ペレット化し、７０％エタノール（−２０℃）で２回洗浄した。ＤＮＡを、Ｈ₂ＯまたはＴＥ中に再懸濁した。連結を、ストラタジーンＤＮＡライゲーションキット（ストラタジーンクローニングシステムズ(Stratagene Cloning Syst ems)、ラジョラ(La Jolla)，CA）を用い製造元により推奨された通りに実施した。プロトプラスト融合研究を除いて、細菌の形質転換を、ＭＡＸエフィシェンシー(EFFICIENCY)ＤＨ５α（ＢＲＬライフテクノロジーズ）コンピテント細胞を用い製造元のプロトコールに従って実施した。所望のクローンを同定するための形質転換体のスクリーニングを、ミニプレップＤＮＡの制限消化分析および／またはコロニーＰＣＲ法により達成した。ミニプレップＤＮＡを、製造元の仕様書に従い、マジックミニプレップピュアリフィケーションシステム(Magic M iniprep Purification System）（プロメガコーポレーション(Promega Corpor ation)、マジソン(Madison)，WI)またはイージープレッププラスミドプレップキット(Easy Prep Plasmid Prep Kit)(ファルマシアバイオテク(Pharmacia Biotech) Inc.,ピスカタウェイ(Piscataway)，NJ) を用いて調製した。コロニーＰＣＲスクリーニングには、個々のコロニーを形質転換プレートから拾い、１００μｌの滅菌Ｈ₂Ｏを入れた滅菌した平底の９６− ウェルのプレート（コスター(Costar)、キャンブリッジ(Cambridge)，MA）に移した。容量の１／３を第二のプレートに移し、４℃で貯蔵した。もとの９６−ウェルのプレートを５分間マイクロ波にかけて細胞を破壊した。次いで、１μｌ容量を、鋳型としてＰＣＲ用チユーブに移した。１μｌの１０ＸＰＣＲバッファー、１μｌの２ｍＭのｄＮＴＰｓ、１μｌ（１０ピコモル）のセンスプライマー、１μｌ（１０ピコモル）のアンチ−センスプライマー、０．０８μｌのＡｍｐｌｉＴａｑＤＮＡポリメラーゼ（０．４単位）、および４．２μｌのＨ₂Ｏを含有する９μｌのＰＣＲマスターミックスを、ＰＣＲ用チューブに加えた。全てのＰＣＲ試薬は、パーキン−エルマーコーポレーションから購入した。反応物は、通常、９４℃で３０秒、５０−６０℃（プライマーのアニーリング温度に依存して）で３０秒および７２℃で６０秒を２０−２５サイクルで増幅した。プライマーは、インサートに依存し、サイクル条件は、プライマーのアニーリング温度および予期される生成物の鎖長に基づき改変した。サイクリング後、約１／３の反応物容量を、分析のためアガロースゲルに載せた。所望のクローンを有するコロニーを、トランスファープレートから増殖させた。実施例ＩＩＩハイブリドーマからの可変部領域の単離、発現ベクターの構築および可変部領域の発現ベクター中への導入ｉ）免疫グロブリン可変部領域の単離：ファルマシアクィックプレップｍＲＮＡピュアリフィケーションキットを用い、製造元の仕様書によって１×１０⁷ハイブリドーマ細胞からｍＲＮＡを単離した。第一鎖相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）合成およびＰＣＲ増幅を、パーキンエルマージーンアンプＲＮＡＰＣＲキットを用いて実施した。重（Ｈ）鎖Ｖ領域の特異的ｃＤＮＡ合成には、９０ｎｇの精製ハイブリドーマｍＲＮＡおよび、両方ともＢｇｌＩＩ部位を有する１０ピコモルのプライマーＭ−ＩｇＧ２ｂ（表１）またはＭ−ＩｇＧ２ａを、それぞれ、１−７０６−１３９および５−４６５−２１０に用いた。両方のカッパ（κ）軽鎖可変部（Ｖ）領域の特異的ｃＤＮＡプライミングを、ＢｇｌＩＩ部位を有するプライマーＭＫ−ＲＥＶを用いて行った。逆転写反応物を、４２℃で６０分間、次いで９９℃で５分間インキュベートした。ＰＣＲ反応（１００μｌ容量；５０ピコモルの各プライマー）を、製造元の仕様書によりセットアップした。１− ７０６−１３９Ｖ_H領域増幅には、センスプライマーＭＨＶ−９およびプライマーＭ−ＩｇＧ２ｂを用いた。１−７０６−１３９Ｖκ領域を、ＭＫＶ−１（センス）およびＭＫ−ＲＥＶプライマーで増幅した。５−４６５−２１０Ｖ_H領域増幅には、プライマーＭＨＶ−７（センス）およびＭ−ＩｇＧ２ａを用いた。５ー４６５−２１０Ｖκ領域の増幅は、ＭＫＶ−２（センス）およびＭＫ−ＲＥＶプライマーで実施した。全てのセンスプライマーは、ＳａｌＩ部位を有した。増幅は、３０サイクルの９４℃で３０秒、５２℃で３０秒および７２℃で６０秒から成った。ＰＣＲで誘導した生成物を、プロメガマジックＰＣＲプレップＤＮＡピュアリフィケーションシステム（マジソン，ＷＩ）により単離した。Ｖ_HおよびＶκ断片を、ＳａｌＩおよびＢｇｌＩＩで消化し、ＳａｌＩおよびＢａｍＨＩ消化ｐＵＣ１８（ＢＲＬライフテクノロジーズ）中に連結した。プラスミドｐＪＨ６−２０−９４Ａ１およびｐＪＨ６−１４−９４Ａ５は、ハイブリドーマ１−７０６−１３９からクローン化したＶ_HおよびＶκ領域をそれそれ有する。プラスミドｐＪＨ６−３０−９４Ａ１およびｐＪＨ７−３１−９４Ｄ３は、ハイブリドーマ５−４６５−２１０から単離したＶ_HおよびＶκ領域をそれそれ有する。表１ハイブリドーマＶ領域の単離に用いたプライマーｉｉ）ヒトＩｇＭ発現ベクター構築：免疫グロブリン発現ベクターｐｄＨＬ２（図３；ギリーズＳ．Ｄ．等，(1989) J．Immunol．Methods 125:191-202）を、ヒトＩｇＧ１不変部領域（Ｃγ１）をヒトＩｇＭ不変部領域（Ｃμ）のゲノムクローンで置き換えることによりヒトＩｇＭ（図４）の発現用に改造した。初めの工程は、Ｃγ１の最初のエクソンのＳａｃＩＩ部位３１塩基対上流中にＳｐｅＩ制限部位を導入することであった。コード鎖オリゴヌクレオチドＳｐｅ−１、即ち5'd[GGAACTAGTGGAGC]3'（配列番号：１８）を、オリゴヌクレオチドＳｐｅ−２、即ち5'd[TCCACTAGTTCCGC]3'（ＳａｃＩＩが突き出たままにしておく）（配列番号：１９）にアニールし、ＳａｃＩＩ消化ｐｄＨＬ２中に連結してベクターｐＡＧ／ＳｐｅＩを得た。ｐＡＧ／ＳｐｅＩ中のＣγ１遺伝子は、ＳｐｅＩおよびＥａｇＩ（終始コドンの７塩基対下流に位置する）部位を両端に有し、これらの酵素を用いた二重消化により除去された。鋳型として１ｎｇのベクターＨ＋Ｌカセット＃１（８／８９）ハイランド(Hyland)（アボットバイオテク）ならびにＳｐｅＩ部位および３’ −ｈｕＭＥａｇを有する、ＥａｇＩ部位を有する５０ピコモルのプライマー５’ｈｕＭ−Ｂ（表２）を用いたＰＣＲ増幅により、Ｃμ の分泌部分のゲノムクローンを有する断片を得た。増幅は、２４サイクルの９４ ℃で３０秒、６３℃で３０秒および７２℃で９０秒から成った。１８８０塩基対のＩｇＭＣμ生成物（ドライＨ．およびギリーズＳ．Ｄ.,Nucleic Acids Resear ch 17:6412(1989)における２１９から２０９９の位置）を、ゲルで単離し、ＳｐｅＩおよびＥａｇＩで二重消化し、ｐＡＧ／ＳｐｅＩ（ＩｇＧ１遺伝子を置換）中にクローン化してｐＡＧ／ＳｐｅＩ／ｈｕＭを得た。プラスミドｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏおよびｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏＸｏ５ −４６５を、それそれ１−７０６−１３９および５−４６５−２１０Ｖ領域のｐＡＧ／ＳｐｅＩ／ｈｕＭ中への導入により構築した（下記節参照）。これらの構築物での予備研究において、組み換えＩｇＭ発現が低レベルであったことから、構築物を更に改造した。本来のＩｇＭポリＡシグナル配列を有するＣμ遺伝子の分泌部分のゲノムクローンを、上記で概説した条件下で、鋳型として１ｎｇのプラスミドｐＮ・χ−μＴＮＰＤＮＡ（マークシャルマン(Marc Shulman)博士、トロント大学、トロント、オンタリオから入手；ボウリアン (Boulianne)Ｇ．Ｌ．等，Nature 312:643-646(1984)）並びにそれぞれ５０ピコモルのプライマー５’ｈｕＭ−Ｂおよび３’ａｍｐ−ｈｏＭ（ＥｃｏＲＶ部位を有する）を用いてＰＣＲ増幅した。ゲルで単離したＣμ（ワード(Word)Ｃ．Ｊ．等，International Immunology 1:296-309(1989)における１２８から２２７８までの位置）ＰＣＲ生成物を、製造元の推奨する条件に従い、ベクターｐＧＥＭ− Ｔ（プロメガコーポレーション、マジソン，WI）中にライゲートした。Ｃμインサートを有するクローンを、同定し、ｐＧＥＭ／ＩｇＭと命名した。全ＩｇＭインサートを配列決定してその完全さを証明した。プラスミドｐＧＥＭ／ＩｇＭを、Ｃμエクソン１の本来の５’イントロン配列上流を伸長することにより改造した。イントロン断片（ワードＣ．Ｊ．等，Inte rnational Immunology 1:296-309(1989)における１７の位置の５’末端）を、鋳型として１ｎｇのｐＮ・χ−μＴＮＰプラスミドＤＮＡ並びにＳｐｅＩ部位および３−ＳＰＬ（両方ともアボットで合成）を有するそれぞれ５０ピコモルのプライマー５−ＳＰＬ／Ｓｐｅを用いてＰＣＲ増幅した。２４サイクルの９４℃で３０秒間、６０℃で３０秒間および７２℃で４５秒間後、イントロン断片を、フェノール／クロロホルム抽出し、沈殿させた。両方のイントロン生成物およびｐＧＥＭ／ＩｇＭベクターを、ＳｐｅＩおよびＢｓｕ３６Ｉ（ニューイングランドバイオラボズ(New England Biolabs)）で消化し、ゲルで単離し、ライゲートしてヒトＣμ遺伝子構築物ｐＪＨ２−１４−９５Ａ３を得た。このイントロンインサートを、配列決定により特徴付けた。プラスミドｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏ５−４６５は、そのＣμ遺伝子セグメントを、ｐＪＨ２−１４−９５Ａ３に存在する本来の５’イントロンおよびポリＡシグナル配列を有するヒトＣμ遺伝子セグメント（完全Ｃμと称する）で置き換えることにより改造した。プラスミドｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏ５−４６５を、ＳｐｅＩおよびＰｖｕＩＩ（Ｃγ１ポリＡ付加部位の下流；ジェンバンク登録番号＃Ｚ１７３７０の２１３７の位置）で二重消化し、ベクターの骨格をゲルで単離した。ＳｐｅＩおよびＥｃｏＲＶでの消化により、完全Ｃμ遺伝子をｐＪＨ２−１４−９５Ａ３から離した。ゲルで単離した断片のライゲーションにより、プラスミドｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１（図３）をもたらした。この発現ベクターは、ハイブリドーマ５−４６５−２１０から単離したマウスＶ_HおよびＶ κ遺伝子、ならびにヒトＣ_μおよびＣ_κ遺伝子のゲノムクローンを有する。ハイブリドーマ１−７０６−１３９からクローン化したＶκおよびＶ_H遺伝子を有する、この発現ベクターの第二バージョンであるｐＪＨ３−１９−９５Ａを、ｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１中のＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ断片（カッパ不変部領域Ｖκ５−４６５−２１０およびＶ_H５−４６５−２１０を含有）をプラスミドｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏから単離した類似のＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ断片（図５）で置き換えることにより構築した。最終的発現ベクターｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１およびｐＪＨ３−１９−９５Ａを、両方とも、プロトプラスト融合によるトランスフェクションに備えて大腸菌Ｃ６００Ｒ−（アメリカンタイプカルチャーコレクション）中に導入した。ｉｉｉ）免疫グロブリンＶ領域のＩｇＭ発現ベクター中への導入：ハイブリドーマからクローン化したＶκおよびＶ_H領域を、ヒトＣκおよびヒトＣμの転写単位を有する免疫グロブリン発現ベクターｐＡＧ／ＳｐｅＩ／ｈｕＭ中にカセットとして導入した。ＶκおよびＶ_H領域の適切な発現は、５’リーダー配列および３’スプライスドナー接合部の部分の付加を必要とする。これらの領域を、発現ベクター中への連続的ＰＣＲが仲介するＶκおよびＶ_H領域の導入に用いるプライマー（表２）内に組み込んだ。１−７０６−１３９Ｖκ遺伝子の導入には、ＸｂａＩ部位を有する５’（リーダー）プライマーＶＫ１−７０６−５’、ならびにスプライス結合部およびＢａｍＨＩ部位を有する３’プライマーＶＫ１− ７０６−３’を用いた。１−７０６−１３９Ｖ_H領域増幅には、ＸｈｏＩ部位を有する５’（リーダー）プライマーＶＨ１−７０６−５’、およびＨｉｎｄＩＩＩ部位を有する３’プライマーＶＨ１−７０６−３’を用いた。５−４６５−２１０Ｖκ遺伝子導入には、ＸｂａＩ部位を有する５’（リーダー）プライマーＶＫ５−４６５−５’、およびＢａｍＨＩ部位を有する３’プライマーＶＫ５−４６５−３’を用いた。５−４６５−２１０Ｖ_H遺伝子導入には、ＸｈｏＩ部位を有する５’（リーダー）プライマーＶＨ５−４６５−５′およびＨｉｎｄＩＩＩ部位を有する３’プライマーＶＨ５−４６５−３’を用いた。１００μｌ容量の反応物は、５０ピコモルの各プライマーおよび１ｎｇのプラスミド鋳型［ｐＪＨ６−１４−９４Ａ５（１−７０６−１３９Ｖκ）；ｐＪＨ６−２０−９４Ａ１（１−７０６−１３９Ｖ_H）；ｐＪＨ７−３１−９４Ｄ３（５−４６５−２１０Ｖκ）；またはｐＪＨ６−３０−９４Ａ１（５−４６５−２１０Ｖ_H）を含有した。増幅は、２２サイクルの９４℃で３０秒間、６２℃で３０秒間および７２℃で６０秒間から成った。ＰＣＲ誘導Ｖκ生成物を、ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩで消化し、ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩで消化したベクター（ｐＡＧ／ＳｐｅＩ／ｈｕＭ）中にクローン化した。引き続き、Ｖ_H生成物を、ＸｈｏＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを用いｖκ含有ベクター中に導入した。ＶκおよびＶ_Hインサートの完全さを、配列決定分析により確かめた。その結果できた発現ベクターｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏおよびｐＡＧ／ｈｕＭ／ｔｏｘｏ５−４６５は、それそれ、１−７０６−１３９および５−４６５−２１０Ｖ領域セット（ＶκおよびＶ_H）を有する。表２ＩｇＭ発現ベクターの構築用プライマーｉｖ）マウスＶ領域セットのヒトＩｇＧ１発現ベクター中への導入：ＩｇＧ１としてハイブリドーマ１−７０６−１３９からクローン化した機能的ＶκおよびＶ_H領域の発現用構築物を得るために、これらの領域の両方を包含するＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ断片を、ｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏから切り取り、ＸｂａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ消化ｐｄＨＬ２中に導入してｐＪＨ９−１４− ９４／４．１と命名した発現構築物を得た。同じ手法を用いて、ハイブリドーマ５−４６５−２１０から単離したＶκおよびＶ_H遺伝子セットを、プラスミドｐＡＧ／ｈｕＭ／αｔｏｘｏ５−４６５からｐｄＨＬ２中に導入して発現構築物ｐｄＨＬ−２／５−４６５（クローン１）を得た。実施例ＩＶ発現ベクター内の可変部領域の配列決定配列決定用プラスミド鋳型を、マジックミニプレップもしくはマキシプレップＤＮＡピュアリフィケーションシステム（プロメガ）、イージープレッププラスミドプレップキット（ファルマシア）で、またはＣｓＣｌバンディング（サムブルーク(Sambrook)Ｊ.等,Molecular Cloning,２版,Cold Spring Harbor，NewYork，Cold，Spring Harbor Press (1989)）により調製した。キットを用いたプラスミドの調製に当たっては、製造元の推薦する手法に従った。ヌクレオチド配列は、シーケナーゼ７−デアザ−ｄＧＴＰＤＮＡシーケンシングキット（アマーシャムライフサイエンス(Amersham Life Science)Inc.，A rlington Heights，IL）を用いシーケナーゼバージョン１．０により手動で、またはファルマシアオートリードシーケンシングキット(Pharmacia Aut o Read Sequencing Kit)およびＡＬＦＤＮＡシーケンサーを用いた自動配列決定により決定した。ベクタープライマー（表３）ＡＬＦＭ１３ユニバーサル（ファルマシア）およびＡＬＦＭ１３リバース（ファルマシア）を、Ｖ_HおよびＶκインサートの配列決定に用いた。ＡｍｐｌｉＴａｑＤＮＡポリメラーゼが引き起こすエラーを監視するために、ＰＣＲで生じたＶＨおよびＶκ領域の多数のクローンを配列決定した。哺乳類発現ベクター中にクローン化したＶ_HおよびＶκ断片の配列決定に用いたプライマーとしては、プライマー：ｐｄＨＬ２−４Ｆ、ｐｄＨＬ２−７Ｆ、ｐｄＨＬ２−４３、ｐｄＨＬ２−４４、ｐｄＨＬ２−５２およびｐｄＨＬ２−５３が含まれた。更に、１−７０６−１３９Ｖ_HにはＴ１７０６Ｈ−ＡおよびＴ１７０６Ｈ− Ｂ；１−７０６−１３９ＶκにはＴ１７０６Ｋ−ＡおよびＴ１７０６Ｋ−Ｂ；５ −４６５−２１０Ｖ_HにはＴ５４６５Ｈ−Ａ、Ｔ５４６５Ｈ−Ｂ、およびＴ５４６５Ｈ−Ｃ；ならびに５−４６５−２１０からクローン化したＶκ領域にはＴ５４６５Ｋ−Ａ、Ｔ５４６５Ｋ−Ｂ、およびＴ５４６５Ｋ−Ｃを使用した。ヒトＩｇＭゲノムクローンの配列決定に用いたプライマーを、表４に掲載した。表３発現ベクター内の可変部領域インサートを配列決定するためのプライマー表４ＩｇＭ不変部領域のゲノミッククローンの配列決定プライマー実施例Ｖ発現ベクターの宿主細胞内へのトランスフェクションエレクトロポレーションに用いるプラスミドを、ＣｓＣｌバンディング（サムブルークＪ．等，Molecular Cloning,２版，Cold Spring Harbor, New York, Co ld, Spring Harbor Press(1989)）により精製した。エレクトロボレーションによりトランスフェクションするために、対数増殖期のＳｐ２／０−Ａｇ１４細胞を回収し、１０ｍｌのダルベッコの燐酸緩衝生理食塩水（Ｄ−ＰＢＳ、ＢＲＬライフテクノロジーズ）中で２回洗浄し、１×１０⁷細胞／ｍｌの濃度になるようＤ−ＰＢＳに再懸濁した。１０μｇのＳａｌＩにて線状化したプラスミドＤＮＡを、合計１ｍｌのＤ−ＰＢＳ中の１×１０⁷Ｓｐ２／０−Ａｇ１４細胞を入れた０．４ｃｍの空間のあるバイオ−ラッド（メルビル、ＮＹ）エレクトロポレーションキュベットに加えた。ＤＮＡおよび細胞を氷上で１０分インキュベートした。キュべットを、０．１８ｋｖおよび９６０μＦの電気容量にセットしたバイオラッドジーンパルサーのチャンバに入れた。電流を流し、ｐＨ勾配を排除するため、キュベットを混合した。プレーティングする前に、細胞を５分間氷上に置いた。細胞を、１９ｍｌの完全Ｄ−ＭＥＭ培地に移し、穏やかに混合した。１００μｌの細胞懸濁液を、２個の９６−ウェル組織培養クラスター（平底；コスター）の各ウェルに加え、５％ＣＯ₂中で３７℃でインキュベートした。２４時間後、０．１μＭのＭＴＸ（シグマ）を追加した１００μｌの完全Ｄ−ＭＥＭを各ウェルに加え、プレートを上記のようにインキュベートした。４８時間後、１００μｌの培地を各ウェルから除去し、０．１μＭのＭＴＸを有する１００μｌの完全Ｄ−ＭＥＭを加え直した。このプロセスを、４８時間後繰り返した。コロニーが出現し始めるまで、プレートを、引き続き１０から２１日間インキュベートした。上澄を、ＭＴＸ耐性コロニーを有するウェルから回収し、キメラ抗体の存在をＥＬＩＳＡ（下記参照）により測定した。Ｓｐ２／０−Ａｇ１４トランスフェクタントを確立するのに用いた第二の方法は、プロトプラスト融合技法（サンドリーゴールデン（Sandri-Golden）Ｒ．Ｍ．等，Molecular and Cellular Biology 1:743-752(1981)；ギリーズＳ．Ｄ．等，Cell 33:717-728(1983)）の改造バージョンであった。プラスミドを大脳菌Ｃ６００Ｒ^-中で増殖させてプロトプラストを得た。細菌を、１０ｍｇ／ｍｌのＭ９塩（ＢＲＬライフテクノロジーズ）、０．８％カザミノ酸（ディフコ、デトロイト、ＭＩ）、０．５％グルコース（ＢＲＬライフテクノロジーズ）、０．１ｍＭのＣａＣｌ₂（シグマ）、１ｍＭのＭｇＳＯ₄（シグマ）、および５０μｇ／ｍｌのアンビシリン（シグマ）を含有する５０ｍｌの培地中で、６００ｎｍで０．５−０．６の吸収になるまで、激しく通気しながら３７℃で生育させた。クロラムフェニコール（シグマ）を、２００μｇ／ｍｌになるように加え、培養物を更に１８−２２時間上記のようにインキュベートした。細胞を、４℃で１１００ｘｇで１２分間ペレット化し、４℃で０．０５Ｍのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ８．０（ＢＲＬライフテクノロジーズ）中の２０％シヨ糖（シグマ）２．５ｍｌに再懸濁した。０．２５Ｍのトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）中の５ｍｇ／ｍｌのリゾチーム（ファルマシア）溶液を加え、混合物を氷上に置いた。５分のインキュベーション後、１．０ｍｌの０．２５ＭのＥＤＴＡ（ｐＨ８．０；ＢＲＬライフテクノロジーズ）を加え、混合物を更に５分間氷上に保った。次いで、１ｍｌの０．０５Ｍトリス−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）を徐々に加えた。懸濁液を３７℃で１０分間インキュベートした。引き続き、室温で、１０ｍＭのＭｇＣｌ₂（シグマ）および１０％シヨ糖（シグマ）を追加した２０ｍｌのＤ−ＭＥＭ（カタログ＃１１９９５、ＢＲＬライフテクノロジーズ）を用いて徐々にプロトプラスト溶液を希釈した。この混合物を、室温で２．５時間保った。対数増殖期に回収した約５×１０⁶Ｓｐ２／０Ａｇ１４細胞を、３５０ｘｇで５分間ペレット化した。細胞を、プロトプラスト懸濁液中に穏やかに再懸濁した。この懸濁液を、６０ｍｍの皿に移し、６５０ｘｇで８分間遠心分離した。上澄を吸い取り、３７℃に予め温めたＰＢＳ中の１．５ｍｌの５０％ｗ／ｖＰＥＧ（シグマハイブリマックス）を加えた。ＰＥＧ添加時点から９０秒が経過するまで、皿を１１０ｘｇで遠心分離した。２個の５ｍｌおよび１個の１０ｍｌ容量の予め温めた溶液（１％ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍｌのペニシリンおよび５０ μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを追加したＤ−ＭＥＭ）中に、ピペットを用いて細胞を穏やかに再懸濁し、これを、１５ｍｌの洗浄溶液を入れた５０ｍｌの遠心チューブに加えた。２２５ｘｇで７．５分間の遠心分離後、細胞を、プレーティング培地（１０％ＦＢＳ、５０Ｕ／ｍｌのペニシリン、５０μｇ／ｍｌのストレプトマイシンおよび１００μｇ／ｍｌのカナマイシン（シグマ）を追加したＤ−ＭＥＭ）に再葱濁し、１個の９６−ウェルの皿にプレーティングし、３７℃でインキュベートした。２４時間（１日目）後、選択培地（１０％ＦＢＳおよび０．１μＭのＭＴＭを追加したＤ−ＭＥＭ）を加えた。５日目に、ウェル当たり５０μｌの選択培地を加えた。２日後、１００μｌ／ウェルを除去し、ウェル当たり１００μｌの新たな選択培地を加えた。ＭＴＸ耐性コロニーを、ＥＬＩＳＡ測定によりキメラ抗体の分泌を調査した。実施例ＶＩトランスフェクタントによるキメラ抗体産生を判定するための測定トランスフェクタントのキメラＩｇＧ１産生をＥＬＩＳＡにより測定した。ＥＩＡプレート（９６−ウェル、ヌンクイムロン(Nunc Immulon)，Naperville， IL）を、１．５μｇ／ｍｌの１００μｌのマウス抗−ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖；ジャクソンイムノリサーチ(Jackson Immuno Research),West Grove，PA）で被覆し、３７℃で１時間インキュベートした。ＣａまたはＭｇを含まない1Ｘダルベッコの燐酸緩衝生理食塩水（Ｄ−ＰＢＳ；ＢＲＬライフテクノロジーズ）中で、プレートを４回洗浄した。１ＸＤ−ＰＢＳ中の２．０％無脂肪粉ミルク（カーネーションカンパニー(Car nation Company)、ロサンゼルス、CA）２００μｌで３７℃で１時間ウェルをブロックした。プレートを、上記の通りに洗浄した。２％無脂肪粉ミルクおよび０．０５％ツウィーン−２０（バイオラッド）含有１ＸＤ−ＰＢＳ中で希釈した精製したヒトＩｇＧ（ジャクソンイムノリサーチ）または精製したキメラＩｇＧ１抗体（アボットラボラトリーズ）を、標準として用いた。標準および培養物上澄を、１００μｌ／ウェルで重複してプレートに加え、３７℃で１時間インキュベートし、次いで、０．１％ツウィーン２０含有Ｄ−ＰＢＳ中で４回洗浄した。各ウェルに、西洋わさびペルオシキダーゼに共役したマウス抗−ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ鎖）を０．４５μｇ／ｍｌで１００μｌ加え、３７℃で１時間インキュベートした。プレートを、上記の通りに洗浄した。この測定法は、ＯＰＤ試薬キット（アボットラボラトリーズ）を用いて発色させ、バイオ−ラッド９６−ウェルプレートリーダーにより読み取った。ＥＬＩＳＡを、キメラＩｇＭの産生を測定するよう改変した。プレートを、Ｄ −ＰＢＳ中の０．３６μｇ／ｍｌのヤギ抗−ヒトＩｇＭ（Ｆｃ₅ _μ−特異的、ジャクソンイムノリサーチ）で被覆した。クロムピュア（ChromPure）ヒトＩｇＭ（骨髄種、全体の分子、ジャクソンイムノリサーチ）を、標準として用いた。０．８μｇ／ｍｌのペルオキシダーゼ−標識ヤギ抗−ヒトＩｇＭ（Ｆｃ₅ _μ、ジャクソンイムノリサーチ）を、酵素抗体共役物として用いた。抗体濃度を、放射免疫拡散法（ＲＩＤ）により測定した。７つの１４日齢の細胞培養物上澄を、攪拌し、ついで、それぞれＩｇＧおよびＩｇＭ用に５または１０μｌの試料を、各ウェルのヒトＩｇＧまたはヒトＩｇＭＲＩＤプレート（ザバインディングサイト(The Binding Site)、サンジエゴ、ＣＡ）に供した。１セットの標準（２５、５０、Ｖ５、１００および１５０μｇ／ｍｌ）を、各プレート上で実施した。キメラＩｇＧ１用標準は、蛋白質Ａ精製抗−Ｐ６６ＩｇＧ１であり、ＩｇＭ標準は、クロムピュアヒトＩｇＭ（ジャクソンイムノリサーチ）であった。プレートを、裏返して３５−３７℃で１６−２２時間インキュベートした。各輪の直径を、ＲＩＤエレクトロニックプレートリーダー（ザバインディングサイト）を用いミリメートルの単位で測定し、これを、ザバインディングサイトにより提供される検定プレートで検定した。実施例ＶＩＩ組み換え抗体の精製キメラＩｇＧ１抗体を精製するために、初めに培養物上澄を、０．１％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍ燐酸ナトリウム（ｐＨ８．２）に対して一晩透析し、次いで、０．２μＭのフィルターを介して濾過した。調製物を、次いで、２５０− ５００ｃｍ／時でバイオラッド低圧クロマトグラフィーシステムを用い、パーセプティブバイオシステムズポロス（PerSeptive Biosystems Poros）５０Ａ樹脂（キャンブリッジ、ＭＡ）を充填したカラムを通過させた。抗体を、０．１Ｍクエン酸塩、０．１５ＭのＮａＣｌｐＨ３．０で溶出し、プールした画分を、ＰＢＳ（１０ｍＭの燐酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣＬ）ｐＨ７．２に対して透析した。キメラＩｇＭ抗体を精製するために、培養物上澄をＨ₂Ｏで１：１に希釈し、調製物を、ＰＢＳで平衡にした１７５ｍｌのＤＥＡＥファーストフロー(FastFlo w)樹脂（ファルマシア）を充填したカラムに１０ｍｌ／分の流速でかけた。抗体を１０ｍＭの燐酸ナトリウム、３００ｍＭのＮａＣｌｐＨ７．２で溶出した。実施例ＶＩＩＩトキソプラズマ・ゴンディ測定ｉ）ハイブリドーマ選択：免疫因子に特異的なヒト抗体を測定するよう設計された免疫測定における対照試薬および検定試薬としてキメラマウス−ヒトモノクローナル抗体を用いる可能性を確立するために、トキソプラズマ・ゴンディ測定をモデルシステムとして選択したものであり、これは、本発明の一態様を表す。モノクローナル抗体のパネルを、トキソプラズマ・ゴンディで免疫したマウスから確立した。このパネルは、多数の異なるトキソプラズマ・ゴンディ抗原に特異的であった。第一段階は、所望の特性の親和性および特異性を有するモノクローナル抗体を同定することであった。診断に有用な２種のトキソプラズマ・ゴンディ蛋白質に反応するモノクローナル抗体Ｐ６６およびＰ３０を選んだ。免疫支配エピトープに反応するものを同定しようとして、ヒト陽性血漿のトキソプラズマ・ゴンディへの結合を阻害する能力を基準として、モノクローナル抗体をスクリーニングした。この分析（データは示さず）に基づいて、それぞれ、トキソプラズマ・ゴンディのＰ６６およびＰ３０に特異的な２種のモノクローナル抗体、１−７０６−１３９および５−４６５−２１０を選択した。ｉｉ）抗体可変部領域のクローニングおよび配列決定：モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞は、ｃＤＮＡ調製用ｍＲＮＡ源として役立った。発現したＨおよびＬ鎖Ｖ領域のクローニングを容易にするために、不変部領域の５’末端にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドをプライマーとして用いて特異的ｃＤＮＡ合成を行った。Ｖ_HｃＤＮＡには、ＩｇＧ２ｂまたはＩｇＧ２ａ−特異的プライマーを、それぞれ、ハイブリドーマ１−７０６−１３９および５−４６５−２１０から単離したｍＲＮＡと共に用いた。両方のＶ_LｃＤＮＡは、マウスκ不変部領域プライマーで開始した。抗体Ｖ領域のＰＣＲ増幅は、不変部領域プライマーと連結して保存Ｖ_HおよびＶκ遺伝子リーダー配列（ジョーンズ(Jones)Ｓ．Ｔ．およびベンディグ(Bendig)Ｍ．Ｍ．，Bio/T echnology 9:88-89(1991)）にアニールする縮重プライマーを用いて実施した。増幅生成物をｐＵＣ１８中にクローン化し、配列決定した。Ｔａｑポリメラーゼが誘導したエラーを解消するために、各ＰＣＲ生成物の多数のクローンを、配列決定した。ハイブリドーマ５−４６５−２１０から単離したＶ_HおよびＶ_LｃＤＮＡ配列を、それらの最終カセットフォーマットで図６および７に示す。このＶ_HｃＤＮＡは、リーダー配列、Ｖ_H遺伝子、およびＪ_H２に再配置されたＤ領域から成る完全Ｖ領域遺伝子をコードする。このＶ_H遺伝子は、マウスのサブグループＩＩＢの構成員であると考えられる（カバット(Kabat)Ｅ．Ａ.等、免疫学的目的の蛋白質配列、５版、米国厚生省、ベテスダ、ＭＤ（１９９１））。縮重リーダー領域増幅プライマーは、ヌクレオチド４１に及ぶことから、実際のｃＤＮＡ配列は、４２の位置で始まり、４３０の位置に及ぶ。このＶ_LｃＤＮＡは、リーダー配列およびＪκ−ミニジーンに再配置されたＶκ遺伝子から成る。このＶκ遺伝子は、明らかにＶκＩＩＩサブグループの構成員である。Ｊκセグメントは、ＢＡＬＢ／ｃマウス株から単離したＪκ２−ミニジーンの公開された生殖細胞系配列由来の４つのミスマッチを含む（サカノ(Sakano)Ｈ．等，Nature 280:288-294 (1979 )；マックス(Max)Ｅ．Ｅ．等，Pro.Nat'l Acad．Sci．USA 76:3450-3454(1979) ；マックスＥ．Ｅ．等，Ｊ．Biol．Chem．256-5116-5120(1981)）。これらのミスマッチは、体細胞突然変異を反映しているかもしれないし、またはスイスウェブスター（Swiss Webster）マウスをこの研究に用いたことから、生殖細胞系配列の相違を表しているのかもしれない。発現Ｖκ領域を単離するために用いた縮重リーダー領域プライマーは、ヌクレオチド４５に及んだ、従って実際のｃＤＮＡ配列は、４６の位置から４０９の位置に及ぶ。ハイブリドーマ１−７０６−１３９からクローン化したＶ_HｃＤＮＡ配列を図８に具体的に示す。縮重リーダー領域ＰＣＲプライマーは、残基４１で終わるので、本物のｃＤＮＡ配列は、位置４２から４３４に及ぶ。発現したＶ_H領域は、リーダー配列、明らかにサブグループＩＩＡ（カバットＥ．Ａ．等、免疫学的目的の蛋白質配列、５版、米国厚生省、ベテスダ、ＭＤ（１９９１））由来のＶ_H 遺伝子、ＤセグメントおよびＪ_H４−ミニジーンを含む。ＤおよびＪ_H４セグメント間の正確な境界は、測定することができなかった。ハイブリドーマ１−７０６ −１３９から単離したＶ_LｃＤＮＡの配列を図９に示す。Ｖ_L断片を増幅するのに用いたプライマーは、ヌクレオチド４２で終わることから、実際のｃＤＮＡ配列は、４３から４０５に及ぶ。Ｖ_LｃＤＮＡは、リーダー配列および、Ｊκ１に再配置された、サブグループＶκＩＩ由来であると考えられるＶκ遺伝子から成る。ｉｉｉ）発現ベクター構築：この研究の目的は、マウスのハイブリドーマから誘導されたＶ領域およびヒト不変部領域を有するキメラマウス−ヒト抗体を生産することである。発現を容易にするために、Ｖ_HおよびＶ_L鎖ｃＤＮＡを、完全５’リーダー配列、３’スプライスドナー部位、およびフランキングクローニング部位を有するように改造した。５’末端での必要な要素および各Ｖ領域に特異的な３’配列を有する合成オリゴヌクレオチドでのＰＣＲ増幅により、Ｖ_HおよびＶ_Lトランスファーカセット（図６−９）を得た。本来のリーダー配列を含むデータベース内の他のＶ領域配列に対するその相同性に基づいて、各Ｖ遺伝子にとって好適なリーダー配列を決定した。全ての場合において、リーダーＶ領域イントロンは、排除されていた。合成イントロン断片を組み込むことにより、ｃＤＮＡのＶＤＪまたはＶＪエクソンの３’末端で、スプライスドナー部位を各Ｖ領域カセット内に再生した。Ｖおよび不変部領域間のスプライス部位結合部は、両方のコード配列の完全さを維持するのに役立つ。更に、これは、Ｖカセットを不変部領域の上流に置くことを可能にし、システムを融通がきくようにする。改造したｃＤＮＡを、次いで、哺乳類発現ベクター内の、高レベルの発現を提供する制御配列の下流に導入した。ベクターｐｄＨＬ２（図３）は、マウス免疫グロブリンＨ−鎖エンハンサーおよびメタロチオネインＩプロモーターの制御下の抗体ＨおよびＬ鎖遺伝子の両方の転写単位を有する。プラスミドｐｄＨＬ２は、ゲノム構造にヒトカッパ（Ｃκ）およびヒトＩｇＧ１（Ｃγ１）不変部領域遺伝子を有する（ギリーズ等，J．of Immunol．Methods 125:191-202 (1989)）。マウスのＶ_HおよびＶκ領域カセットの導入は、マウス−ヒトキメラ抗体の発現をもたらす。更に、ｐｄＨＬ２は、ＭＴＸ耐性に基づくトランスフェクタントの選択を可能にする突然変異したＤＨＦＲ遺伝子を有する（ギリーズ等，J．of lm munol．Methods 125:191-202(1989)）。５−４６５−２１０Ｖ_HおよびＶκｃＤＮＡカセットを、ｐｄＨＬ２中に導入して発現ベクターｐｄＨＬ−２／５−４６５を得た。このベクターは、Ｐ３０に特異的なキメラＩｇＧ１抗体をコードしている。同様に、１−７０６−１３９Ｖ_HおよびＶκ領域カセットを、ｐｄＨＬ２中にクローン化して、Ｐ６６抗原に特異的なキメラＩｇＧ１抗体をコードするｐＪＨ９−１４−９４／４．１を得た。キメラマウス−ヒトＩｇＭクラス抗体を生産するために、Ｃγ１遺伝子をヒトＩｇＭ（Ｃμ）遺伝子（図４）のゲノムクローンで置換することにより、ｐｄＨＬ２を改造した。Ｃμを有する発現ベクターを、ｐＡＧ／ＳｐｅＩ／ｈｕＭと命名した。この第一生成ＩｇＭベクター中に、Ｃγ１の下流に元々存在する翻訳されない３’およびポリＡシグナル配列が保持されていた。キメラＩｇＭ発現構築物を、このベクター中へのＶκおよびＶ_Hカセットの連続導入により得た。これらの構築物を用いた予備実験で、全てのトランスフェクタントは、非常に低い（＜１μｇ／ｍｌ）キメラＩｇＭの分泌レベルであった（データは示さず）。キメラＩｇＭ生産を増強しようとして、Ｃμ遺伝子およびポリＡシグナル配列（元々Ｃγ１の下流）を、本来の５’イントロン（スプライスアクセプター部位を有する）、翻訳されない３’、およびポリＡシグナル配列（図４）を含むヒトＣμの分泌部分のゲノムクローンで置換した新たな構築物を得た。Ｃμクローンの配列分析は、公開された生殖細胞系配列（ワードＣ．Ｊ．等，Intermationa l Immunology 1:296-309(1989)）に比べて只１個の塩基の変化、Ｃμ３−Ｃμ４イントロンの残基１５８３と１５８４の間のＴの挿入があった。この変化が、Ｃμ遺伝子の発現を達成するとは予期していなかった。５−４６５−２１０Ｖ_HおよびＶκ領域を有するＩｇＭ発現構築物を、ｐＪＨ２−２４−９５Ｂ１（図３）と命名した。５−４６５−２１０Ｖ領域セットの１−７０６−１３９Ｖ_HおよびＶκカセットを有するＸｂａＩ−ＨｉｎｄＩＩＩ断片での置換により、Ｐ６６に特異的なキメラＩｇＭをコードするプラスミドｐＪＨ３−１９−９５Ａを得た。ｉｖ）キメラ抗体の発現：キメラ抗体発現構築物を、非生産Ｓｐ２／０Ａｇ１４細胞中にトランスフェクションした。両方のＩｇＧ１構築物を、エレクトロポレーションにより導入し、一方、キメラＩｇＭ構築物を、プロトプラスト融合によりトランスフェクションした。トランスフェクタントを、０．１μＭのＭＴＸの存在下で選択した。各トランスフェクション由来の多数のＭＴＸ耐性コロニーを、抗−ヒト抗体ＥＬＩＳＡを用いキメラ抗体の産生についてスクリーニングした。陽性を示したものを、増殖させクローン化した。トランスフェクタントの分泌レベルを、放射免疫拡散法により測定した（表５）。高レベルのキメラ抗体を分泌するクローンを、更にサブクローン化した。抗−Ｐ３０および抗−Ｐ６０キメラＩｇＧ１抗体の観察された産生レベルは、９０μｇ／ｍｌ以上であった。１００μｇ／ｍｌを超えるレベルで抗−Ｐ３０キメラＩｇＭ抗体を分泌するトランスフェクタントを、プロトプラスト融合により得た。抗−Ｐ６６キメラＩｇＭ構築物のトランスフェクションは、より限定された成功であった。キメラＩｇＭを分泌するトランスフェクタントを得たが、分泌レベルは、むしろ低かった（＜１μｇ／ｍｌ）。これらすべてのトランスフェクタントは、０．１ μＭのＭＴＸ上で保存された。以前の研究に基づき、ＭＴＸ濃度を増加により、キメラ抗体の生産を更に増大させることができる可能性がある（ギリーズ等，J ．of Immunol．Methods 125:191-202(1989)；ロー(Lo)Ｋ.Ｍ.およびＳ.Ｄ.ギリーズ，Biochimeca et Biophysica Acta 1088:217-224(1991)）。４つのケースの内３つにおいて、トランスフェクタントにより産生された組み換えキメラ抗体の発現レベルは、それらが誘導されたハイブリドーマの抗体生産レベルを実際に超えていた。経済的製造を可能にするのに要求される分泌レベルが達成された。この組み換えシステムの別の有利性は、同一の結合特異性を有する異なるクラスの抗体(即ち、ＩｇＧ１およびＩｇＭ)を容易に得ることができることである。下記の表５は、上記の手法を用いて製造したキメラ抗体の発現レベルを示す。表５キメラ抗体発現レベル ^*細胞を、０．５×１０⁶の濃度で接種した。発現レベルを、ＲＩＤ測定により、クローンでは７日目に、サブクローン（Ｓ）では１４日目に測定した。ｖ）キメラ抗体の測定性能：キメラ抗体が、その本来の抗原−結合活性を保持し且つ対照試薬／検定試薬として機能することができるかどうかを測定するために、免疫測定法により調査した。ＤＥＡＥにより分画したＡ蛋白質精製キメラＩｇＧ１抗体およびキメラＩｇＭを、アボットラボラトリーズＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧおよびＩｇＭ測定法（サフォード(Safford)Ｊ．Ｗ．等，J．Clin．Pathol．44:238-242(1991)）でトキソプラズマ・ゴンディに対する免疫反応性について調査した。これらの測定法は、ヒト血清および血漿中のトキソプラズマ・ゴンディに対する抗体の定量的（ＩｇＧ）および定性的（ＩｇＭ）測定のために設計した自動微粒子酵素免疫測定法（ＭＥＩＡ）である。ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ測定法の基本工程を、図２に示す。この測定法は、トキソプラズマ・ゴンディ抗原で被覆した微粒子を固相として用いる。標本を、被覆微粒子に加えてトキソプラズマ・ゴンディに特異的な抗体を結合させる。次いで、微粒子をガラス繊維マトリクス上に移し、よく洗浄して未結合の抗体を除去する。引き続き、微粒子上のトキソプラズマ・ゴンディ抗原に複合体化したＩｇＧクラス抗体に特異的に結合するアルカリホスファターゼ共役ヤギ抗−ヒトＩｇＧ抗体を加える。未結合の抗体を洗い流し、基質である燐酸４−メチルウンベリフェリル（ＭＵＰ）の添加により、抗原−患者ＩｇＧ−抗−ヒトＩｇＧ共役複合体を検出する。アルカリホスファターゼによるＭＵＰの脱ホスホリル化は、ＩＭｘ装置により測定される蛍光化合物メチルウンベリフェロン（ＭＵ）の形成の速度により評価することができる（フィオレ(Fiore)Ｍ．等，Clin．Chem.34:1726-1732(1988)）。この定量的測定法は、検定曲線を確立するのに６種の検定試薬の１セットを含んでいる。検定試薬は、６つの異なる濃度０、１０、５０、７５、１５０、および３００ＩＵＩｇＧ抗体／ｍｌでヒト血清中に希釈したヒト抗−トキソプラズマＩｇＧ抗体で調製する。検定試薬は、抗−トキソプラズマ血清用世界保健機構国際標準を基準とする。標本の代わりに検定試薬で実施し、検定曲線をプロットする。結果を、６つの点の検定曲線から内挿法により推定して標本中のＩｇＧ水準を定量する。この測定法のために、抗−トキソプラズマＩｇＧ陽性対照をヒト抗−トキソプラズマ・ゴンディＩｇＧ２０ＩＵ／ｍｌをヒト血清中に希釈して、調製する。アボットラボラトリーズにより作製されたＩＭｘＴｏｘｏＩｇＭアッセイは、トキソプラズマ・ゴンディに対するＩｇＭ抗体の定性的測定のために設計された自動化ＭＥＩＡである。測定フォーマットは、ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ測定と同様であるが、アルカリホスファターゼ共役物は、ヤギ抗−ヒトＩｇＭ抗体である。測定の結果は、指標検定試薬に対する標本カウントの比率である指標値として表す。指標検定試薬は、ヒト血清中のヒト抗−トキソプラズマＩｇＭ抗体を用いて調製し、陽性／陰性カットオフ近くにセットする。陽性の対照試薬を、同じ方法で調製し、指標検定試薬に１．５Ｘの指標値を与えるようセットする。１１．５９ｍｇ／ｍｌの開始濃度の精製した抗−Ｐ６６キメラＩｇＧ１抗体の二倍連続希釈物およびＩＭｘＴｏｘｏ陽性対照血清を、陰性ヒト血清中に調製した（検定試薬希釈物）。希釈物を、重複して実験し、速度カウントを測定した。抗−Ｐ６６キメラＩｇＧ１抗体は、０．７ｍｇ／ｍｌを超える濃度で平坦な曲線を有し、１１．５９ｍｇ／ｍｌで２０７０の速度カウントに達した（図１０）。３００ＩＵ／ｍｌの検定試薬（ＩＭｘ検定試薬Ｆ）の速度カウントは、２５７２であった。抗−Ｐ６６キメラＩｇＧ１抗体で観察される曲線の上端での平坦化は、おそらく、ＩＭｘキット内の抗−Ｐ６６結合部位の飽和を反映している。モノクローナルキメラＩｇＭ抗体の性能を調査するために、０．２１０ｍｇ／ｍｌの精製した抗−Ｐ６６ＩｇＭおよびＩＭｘＴｏｘｏＩｇＭ陽性対照試薬を、指標検定試薬希釈で連続して二倍に希釈した。これらの希釈物を重複して実験し、陽性の対照および指標検定試薬と比較した（図１１）。陽性の対照試薬および指標検定試薬と同等の速度カウントの予測値を、希釈物曲線から読み取って抗体濃度を決定した。７１０の指標検定試薬の速度および１０７８の陽性対照試薬の速度は、それぞれ、０．０１２３ｍｇ／ｍｌおよび０．０２０９ｍｇ／ｍｌのキメラＩｇＭで達成された。これらのデータは、モノクローナル抗−Ｐ６６キメラＩｇＭは、この測定における許容することのできる指標検定試薬および陽性の対照試薬として機能することを示している。従って、抗−Ｐ６６キメラ抗体は、この測定法のための指標検定試薬および陽性の対照試薬の製造における陽性ヒト血漿の代わりにすることができると考えられる。抗−Ｐ６６キメラＩｇＧ１と対照的に、速度カウントは、調査した最も高い濃度でさえ平坦になるとは考えられない。これは、エピトープ密度が、２つの測定でほぼ同等であると予想されることから、ＩｇＧ１とＩｇＭ間の構造的差異に起因しているかもしれない。ほとんどのＩｇＭは、ダイマ一構造のＩｇＧ１と比較して、より多数の不変部領域エピトープを提供するペンタマーとして分泌される。おそらく、ＴｏｘｏＩｇＭ測定の場合、より多くの酵素結合二次抗体（抗−ヒトＩｇＭ）が、ＴｏｘｏＩｇＧ測定（抗− ヒトＩｇＧ）に比較して抗原−抗体複合体に結合し、シグナルの更なる増幅をもたらす。０．８７ｍｇ／ｍｌの濃度の精製した抗−Ｐ３０キメラＩｇＧ１抗体およびＩＭｘＴｏｘｏ陽性ヒト血清（検定試薬Ｆ、３００ＩＵ／ｍｌ）を検定試薬希釈剤中で連続して二倍に希釈して、測定の動的範囲（０−３００ＩＵ／ｍｌ）にわたる抗体レベルを提供する。これらの希釈物を重複して実験し、速度カウント（カウント／秒／秒）を、希釈曲線から読み取った。キメラ抗−Ｐ３０ＩｇＧ１抗体および陽性の対照血清は、平行の希釈曲線を有した（図１２）。３００ＩＵ／ｍｌのヒト血清検定試薬（Ｆ検定試薬）は、３０１５の速度カウントを有していた。抗−Ｐ３０キメラＩｇＧ１は、０．１１ｍｇ／ｍｌの濃度で同等の速度カウントに達した。抗−Ｐ３０キメラ抗体で得られた曲線の平坦部は、０．８７ｍｇ／ｍｌの濃度で観察された４２６１の速度カウントまでに全く観察されなかった。これらのデータに基づき、抗−Ｐ３０キメラＩｇＧ１は、ＩＭｘ検４定曲線のための許容することのできるシグナルを達成した。これらのデータは、Ｐ３０上の単一のエピトープに特異的な１種のキメラ抗体は、この測定法の検定試薬および対照試薬として用いられている陽性ヒト血清に置き換わりうる可能性を有することを示す。キメラＩｇＭ抗体の性能を調査するために、０．１０４ｍｇ／ｍｌの精製した抗−Ｐ３０ＩｇＭおよびＩＭｘＴｏｘｏＩｇＭ陽性対照試薬を、二倍連続希釈で指標検定試薬希釈剤中に希釈した。これらの希釈物を重複して実験し、陽性対照試薬および指標検定試薬と比較した（図１３）。陽性対照試薬および指標検定試薬に対して同等の速度カウントの予測値を、これらの希釈曲線から読み取り、抗体の濃度を決定した。５６０の指標検定試薬の速度、および１０５０の陽性対照試薬の速度は、それぞれ、０．００８４ｍｇ／ｍｌおよび０．０１４５ｍｇ／ｍｌの抗−Ｐ３０キメラＩｇＭで達成された。これらのデータは、許容することのできるＩＭｘカットオフ値が、モノクローナル抗−Ｐ３０キメラＩｇＭ抗体で得ることができることを示す。ｖｉ）促進された試薬安定性の調査：ＴｏｘｏＩｇＧ測定フォーマットにおけるキメラＩｇＧ抗体の促進された安定性分析を、４５℃で１２日間までの熱ストレスにより実施した。抗−Ｐ３０キメラＩｇＧ１および２種のモノクローナル抗体（抗−Ｐ３０＋抗−Ｐ６６ＩｇＧ１）の混合物について、ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ測定における測定検定曲線に対し、希釈を重複して行った。２点間の曲線の当てはめを用いて現在のヒト抗体検定試薬に釣り合うのに必要なキメラ抗体の濃度を予想した。安定性分析には、２種の検定試薬レベル、１０ＩＵ／ｍｌのＢ検定試薬および３００ＩＵ／ｍｌのＦ検定試薬を調査した。Ｂ検定試薬と同等の速度カウントが、０．００３６ｍｇ／ｍｌの抗−Ｐ３０ＩｇＧ１または０．００３６ｍｇ／ｍｌの抗−Ｐ３０および０１０ｍｇ／ｍｌの抗−Ｐ６６ＩｇＧ１の混合物で達成された。キット試薬および検定試薬を、２−８℃または４５℃で１２日間まで貯蔵した。０、４、８および１２日目に、試験試薬で測定を行い、標準ヒトＢ検定試薬に対してパフォーマンスをプロットした（図１４）。全てのキット試薬およびキメラ抗体は、２−８℃で安定であった。対照的に、キット試薬を４５℃で貯蔵した場合、４日までに、標準ヒトＢ検定試薬と比較して、抗−Ｐ３０ＩｇＧ１で観察された速度カウントは３０％減少した。４５℃で１２日までに、抗−Ｐ３０ＩｇＧ１で得られたシグナルは、約５０％減少した。これらの条件下で、標準ヒト検定試薬抗体と同じくらい安定であることから、活性の損失は、キメラＩｇＧ１の安定性の欠如によるものではなかった。速度カウントの減少は、このモノクロ−ナルキメラ抗体により認識されるＰ３０エピトープの損失によると考えられる。キメラ抗体混合物を調査した場合、性能特性は、ヒト抗体検定試薬で観察されるものと同様であつた。モノクローナル抗−Ｐ６６抗体により認識されるＰ６６エピトープは、これらの条件下でより安定であり、Ｐ３０エピトープの熱ストレス誘導の損失を補っていると考えられる。Ｆ検定試薬レベルを達成するために、０．１１０ｍｇ／ｍｌの抗−Ｐ３０ＩｇＧ１または０．１１０抗−Ｐ３０および０．３０５ｍｇ／ｍｌの抗−Ｐ６６ＩｇＧ１の混合物を用いた。標準ヒト検定試薬で観察されるパフォーマンスに比較して試験試薬での測定パフォーマンスを、図１５に示す。全てのキット試薬およびキメラ抗体は、２−８℃で貯蔵した場合、安定であった。Ｂ検定試薬レベルで観察された結果と同様、４５℃で貯蔵した場合、抗−Ｐ３０抗体で速度カウントの漸進的減少が観察された。抗−Ｐ３０および抗−Ｐ６６モノクローナルの組み合わせは、４５℃での熱ストレス後でさえも本来のヒトＦ検定試薬に比較して許容することのできる安定性特性を示した。キメラ抗−Ｐ３０抗体が、ヒト検定試薬抗体に比較して安定性における差異を全く示さないことから、抗−Ｐ３０キメラ抗体での安定性の損失は、このモノクローナルにより認識されるＰ３０エピトープの損失によると考えられる。これらのデータは、商業的製造に適した安定性特性を有するキメラ抗体を生産することができることを示している。熱ストレスのＰ３０エピトープで観察される緩慢な減衰は、キメラ抗体により認識されるエピトープの慎重な選択の重要性を強調している。このケースでは、モノクローナルキメラ抗体の結合特性とボリクローナル抗血清のそれとの間で比較した。後者の場合、所定の抗原（例えば、Ｐ３０）上の多数のエピトープが認識され、いずれか１つのエピトープの損失を識別することができない。この技術の有利性は、Ｖ領域のクローニングおよびキメラ抗体を生産する前に、所望の性質を求めて候補のマウスモノクローナル抗体をスクリーニングすることができることである。キメラ抗体の性質は、元のドナー抗体のそれを反映している。ＩＭｘＴｏｘｏＩｇＧ測定には、抗−Ｐ３０および抗−Ｐ６６キメラ抗体を混合することにより、組み合わさった特性は、標準ヒト抗体検定試薬と同等の性能レベルを提供する。これは、キメラ抗体を、陽性のヒト血清の代わりに対照試薬および検定試薬として用いることができることを確かにしている。ある場合には、１種のモノクローナルキメラ抗体で十分である。別の場合には、所望の測定性能特性に達するのに１種より多いキメラ抗体をプールする必要がある。ｖｉｉ）抗原ロット間の変動の分析：キメラ抗体により認識されるＰ３０およびＰ６６エピトープの発現に著しいロット間の変動があるかどうかを調査するために、Ｂ検定試薬およびＦ検定試薬レベルでの抗−Ｐ３０および抗−Ｐ６６キメラ抗体の混合物を、多数の抗原ロットについて調査した。７つの独立した抗原のロットを用いたこの分析結果を図１６に示す。抗−Ｐ６６および抗−Ｐ３０キメラ抗体の両方の混合物のパフォーマンスは、現在のＩＭｘヒト血清検定試薬に匹敵していた（測定の変動内）。これは、更に、陽性ヒト抗体の代用品としてのマウス−ヒトキメラ抗体の可能性を確かにするものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ホフ，ジエーン・エイアメリカ合衆国、イリノイ・60563、ネパービル、イースト・トウエルブス・アベニユー・313 (72)発明者オストロー，デイビツド・エイチアメリカ合衆国、イリノイ・60047、レイク・チユーリツヒ、マンチエスター・コート・985 (72)発明者ゴールデン，アラン・エムアメリカ合衆国、イリノイ・60091、ウイルメツト、ローレル・レイン・2516

Claims

【特許請求の範囲】１．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｃ）当該抗原に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該試薬は、当該抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質であることを特徴とする、前記方法。２．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｃ）当該抗原に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該２種以上の試薬のそれぞれが、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、特異性および親和性に関して均質である、前記方法。３．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）その結果できた当該抗原／抗体複合体に、当該結合した抗体に当該共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で、直接または間接共役物を加え、当該共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成り、（ｃ）当該シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｄ）当該抗原に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該試薬は、当該抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である、前記方法。４．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）その結果できた当該抗原／抗体複合体に、当該結合した抗体に当該共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で、直接または間接共役物を加え、ここで、当該共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成り、（ｃ）当該シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｄ）当該抗原に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該２種以上の試薬のそれぞれが、当該抗原土の異なるエピトープに結合し、特異性および親和性に関して均質である、前記方法。５．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗原；およびｂ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成ることを特徴とする、前記キット。６．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗原；およびｂ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。７．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗原；ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成る直接または間接共役物；およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。８．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗原；ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成る直接または間接共役物；およびｃ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。９．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗−抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｃ）当該抗−抗体に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで、改良が、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該試薬は、当該抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質であることを特徴とする、前記方法。１０．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗− 抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｃ）当該抗−抗体に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該２種以上の試薬のそれぞれが、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、特異性および親和性に関して均質である、前記方法。１１．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗− 抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）その結果できた当該抗−抗体／抗体複合体に共役物を、当該結合した抗体に当該共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で加え、当該共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成り、（ｃ）当該シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｄ）当該抗−抗体に対する抗体を含んで成る試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで、改良が、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該試薬は、当該抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である、前記方法。１２．供試試料中に存在するかもしれない抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗− 抗体とを、抗−抗体／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）その結果できた当該抗−抗体／抗体複合体に、当該結合した抗体に当該共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で共役物を加え、当該共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成り、（ｃ）当該シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｄ）当該抗−抗体に結合する２種以上の試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る２種以上の試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、当該２種以上の試薬のそれぞれが、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、ユニークな特異性および親和性を有する、前記方法。１３．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗−抗体；ｂ）当該抗体に特異的な抗原；およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。１４．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗−抗体；ｂ）当該抗体に特異的な抗原；およびｃ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（ここで、当該２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。１５．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗−抗体；ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成る直接または間接共役物；およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該試薬は、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。１６．供試試料中の抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）当該抗体に特異的な抗−抗体；ｂ）検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗原を含んで成る直接または間接共役物；およびｃ）２種以上の試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該２種以上の試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、当該抗原上の異なるエピトープに結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。１７．供試試料中に存在するかもしれない、１種以上の抗原に対して発現した抗体の存在を検出する方法であって、（ａ）それぞれ、当該抗体を含有する疑いのある当該供試試料と当該抗体に特異的な抗原とを、抗原／抗体複合体の形成を可能にするのに十分な時間および条件下で接触させ、（ｂ）当該抗原／抗体複合体に、当該結合した抗体に当該共役物が結合するのを可能にするのに十分な時間および条件下で直接または間接共役物を加え、ここで、当該共役物は、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成り、（ｃ）当該シグナル発生化合物により生じたシグナルを検出することにより、当該供試試料中に存在するかもしれない当該抗体の存在を検出し、そして（ｄ）当該抗原に結合する試薬を対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで改良が、それぞれが１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成る試薬を当該対照試薬または検定試薬として用いることを含んで成り、ここで、当該試薬のそれぞれが、それぞれ当該抗原に結合し、特異性および親和性に関して均質である、前記方法。１８．供試試料中に存在するかもしれない、１種以上の抗原に対して発現した抗体の存在を測定するためのキットであって、ａ）それぞれ、当該抗体に特異的な抗原；ｂ）それぞれが、検出可能なシグナルを発生することのできるシグナル発生化合物に結合した抗体を含んで成る直接または間接共役物；およびｃ）試薬を含んで成る対照試薬または検定試薬（当該試薬のそれぞれが、１つ以上の抗体不変部領域エピトープを含んで成り、それぞれの当該抗原に結合し、そして特異性および親和性に関して均質である）を含んで成る、前記キット。