JP2019509486A - 非侵襲的分子対照 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図1
Description
Claims (32)
- 目的の状態の存在または不存在を決定するための非侵襲的分子対照を製造する方法であって、
目的の状態のための陽性対照を予め決定すること、
目的の状態のための第1の対照マーカーを含む第1の細胞外小胞を産生する、陽性対照のための第1の細胞株を選択すること、
選択された第1の細胞株からの第1の細胞外小胞の産生を増幅すること、
選択された第1の細胞株から、産生された対照マーカーを単離すること、
単離された第1の対照マーカーから第1の対照マーカーを定量すること、
単離された対照血漿に加えるために、第1の対照マーカーの体積を決定すること、
対照試料から対照血漿を単離すること、
単離された対照血漿を対照安定化剤によって処理すること、
当該体積の第1の対照マーカーに加えるために、対照血漿の体積を決定すること、
当該体積の対照血漿を当該体積の第1の対照マーカーと組み合わせること、および
非侵襲的分子対照を生成すること
を含む、方法。 - 目的の状態が妊娠である、請求項1に記載の方法。
- 選択された第1の細胞株がTov 21Gであり、
第1の対照マーカーが高メチル化ras関連ドメイン含有タンパク質1プロモーター領域である、
請求項2に記載の方法。 - 選択された第1の細胞株がJARであり、
第1の対照マーカーが胎盤特異的4メッセンジャーリボ核酸である、
請求項2に記載の方法。 - 選択された第1の細胞株がJARであり、
第1の対照マーカーがメタロプロテアーゼタンパク質12胎盤タンパク質である、
請求項2に記載の方法。 - 目的の状態が21トリソミーである、請求項1に記載の方法。
- 選択された第1の細胞株がDetroit 532であり、
第1の対照マーカーが21番染色体のセントロメアである、
請求項6に記載の方法。 - 選択された第1の細胞株がJARであり、
第1の対照マーカーが胎盤特異的4メッセンジャーリボ核酸である、
請求項6に記載の方法。 - 目的の状態が18トリソミーである、
請求項1に記載の方法。 - 選択された第1の細胞株がJARであり、
第1の対照マーカーがメタロプロテアーゼタンパク質12胎盤タンパク質である、
請求項9に記載の方法。 - 目的の状態のための二次対照マーカーを含む第2の細胞外小胞を産生する、陽性対照のための第2の細胞株を選択することであって、
二次対照マーカーは高メチル化ras関連ドメイン含有タンパク質1プロモーター領域であること、
選択された第2の細胞株からの第2の細胞外小胞の産生を増幅すること、
選択された第2の細胞株から、産生された第2の対照マーカーを単離すること、
単離された第2の対照マーカーから第2の対照マーカーを定量すること、
単離された対照血漿に加えるために、第2の対照マーカーの体積を決定すること、
当該体積の二次対照マーカーを、当該体積の対照血漿および当該体積の第1の対照マーカーと組み合わせること、ならびに
非侵襲的分子対照を生成すること
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 目的の状態が大腸がんである、請求項1に記載の方法。
- 選択された第1の細胞株がHCT 116であり、
第1の対照マーカーが、カーステン・ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログエキソン2 G13Dである、
請求項12に記載の方法。 - 第1の細胞外小胞の放出を増幅することが、第1の細胞株を、5−15mMの有効濃度を有するイオノフォアであるモネンシンによって、摂氏37度で5パーセント二酸化炭素の湿潤雰囲気中、少なくとも24時間処理することをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 対照安定化剤が、0.05−0.5重量/体積パーセントの濃度の2−ブロモ−2ニトロプロパン−1,3−ジオールである、請求項1に記載の方法。
- 対照安定化剤が、0.1−0.5重量/体積パーセントの濃度のアミノカプロン酸である、請求項16に記載の方法。
- 対照安定化剤が、0.15−0.2重量/体積パーセントのイミダゾリジニル尿素をさらに含む、請求項13に記載の方法。
- 対照安定化剤が、0.15−0.2重量/体積パーセントのイミダゾリジニル尿素をさらに含む、請求項15に記載の方法。
- 試料がヒト血液である、請求項1に記載の方法。
- 試料がヒト尿である、請求項1に記載の方法。
- 対照試料が動物起源由来の血液である、請求項18に記載の方法。
- 対照試料が人工血漿である、請求項18に記載の方法。
- 対照試料が合成尿である、請求項20に記載の方法。
- 目的の状態の存在または不存在を決定するために、試料を非侵襲的分子対照に対して分析する方法であって、
試料における第1の対照マーカーを定量すること、
非侵襲的分子対照における第1の対照マーカーを定量すること、
非侵襲的分子対照における第1の対照マーカーの示された百分率を、試料における予め決定された第1の対照マーカーの閾値と比較することを含み、
非侵襲的分子対照を予め決定することは、
目的の状態のための陽性対照を予め決定すること、
目的の状態の存在または不存在を決定すること、
目的の状態のための第1の対照マーカーを含む第1の細胞外小胞を産生する、陽性対照のための第1の細胞株を予め選択すること、
選択された第1の細胞株からの第1の細胞外小胞の産生を増幅すること、
選択された第1の細胞株から、産生された第1の対照マーカーを単離すること、
単離された第1の対照マーカーから第1の対照マーカーを定量すること、
単離された対照血漿に加えるために、第1の対照マーカーの体積を決定すること、
対照試料から対照血漿を単離すること、
単離された対照血漿を対照安定化剤によって処理すること、
当該体積の第1の対照マーカーに加えるために、当該体積の対照血漿を決定すること、および
当該体積の対照血漿を当該体積の対照マーカーと組み合わせて、非侵襲的分子対照を生成すること
を含む方法。 - 決定することは、第1の対照マーカーのためにデオキシリボ核酸配列決定を介して試料を分析することをさらに含む、請求項24に記載の方法。
- 決定することは、逆転写酵素ドロップレットデジタルポリメラーゼ連鎖反応を介して試料を分析することを含む、請求項24に記載の方法。
- 決定することは、酵素結合免疫吸着アッセイを介して試料を分析することをさらに含む、請求項24に記載の方法。
- 目的の状態の存在または不存在を決定するために、試料を非侵襲的分子対照に対して分析する方法であって、
試料における二次対照マーカーを定量すること、
非侵襲的分子対照における二次対照マーカーを定量すること、
非侵襲的分子対照における二次対照マーカーの示された百分率を、試料における予め決定された対照マーカーの閾値と比較することを含み、
非侵襲的分子対照を予め決定することは、
目的の状態のための陽性対照を予め決定すること、
目的の状態の存在または不存在を決定すること、
目的の状態のための第1の対照マーカーを含む細胞外小胞を産生する、陽性対照のための第1の細胞株を予め選択すること、
選択された第1の細胞株からの細胞外小胞の産生を増幅すること、
選択された第1の細胞株から、産生された対照マーカーを単離すること、
単離された対照マーカーから第1の対照マーカーを定量すること、
単離された対照血漿に加えるために、第1の対照マーカーの体積を決定すること、
対照試料から対照血漿を単離すること、
単離された対照血漿を対照安定化剤によって処理すること、
当該体積の第1の対照マーカーに加えるために、対照血漿の体積を決定すること、
当該体積の対照血漿を、当該体積の第1の対照マーカーと組み合わせること、
目的の状態のための二次対照マーカーを含む第2の細胞外小胞を産生する、陽性対照のための第2の細胞を予め選択すること、
選択された第2の細胞株からの第2の細胞外小胞の産生を増幅すること、
選択された第2の細胞株から、産生された第2の対照マーカーを単離すること、
単離された第2の対照マーカーから第2の対照マーカーを定量すること、
単離された対照血漿に加えるために、第2の対照マーカーの体積を決定すること、
当該体積の二次対照マーカーを、当該体積の対照血漿および当該体積の第1の対照マーカーと組み合わせること、ならびに
非侵襲的分子対照を生成すること
を含む、方法。 - 決定することは、第1の対照のためにデオキシリボ核酸配列決定を介して試料を分析することをさらに含む、請求項24に記載の方法。
- 非侵襲的分子対照の総体積の10−20パーセントを構成する第1の対照マーカーであって、
高メチル化ras関連ドメイン含有タンパク質プロモーター領域、21番染色体のセントロメア、およびカーステン・ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログエキソン2 G13Dからなる群から選択される第1の対照マーカー、
非侵襲的分子対照の総体積の10−30パーセント(重量/体積)の対照充填剤であって、
低メチル化ras関連ドメイン含有タンパク質プロモーター領域および野生型カーステン・ラット肉腫ウイルスがん遺伝子ホモログエキソン2 G13Dからなる群から選択される対照充填剤、
非侵襲的分子対照の総体積の0.1−5パーセント(重量/体積)を構成する対照安定化剤、ならびに
非侵襲的分子対照の総体積の30−80パーセント(重量/体積)を構成する対照血漿であって、
生体液である対照血漿
を含む非侵襲的分子対照。 - 1ミリリットルあたり250−750コピーの対照マーカーを含む第1の対照マーカーであって、
胎盤特異的4メッセンジャーリボ核酸である第1の対照マーカー、
非侵襲的分子対照の総体積の30−80パーセント(重量/体積)を構成する対照血漿であって、
生体液である対照血漿、ならびに
0.05−0.5重量/体積%の2−ブロモ−2ニトロプロパン−1,3−ジオール、0.1−0.5重量/体積%のアミノカプロン酸、0.15−0.2重量/体積%のイミダゾリジニル尿素、およびこれらの組合せからなる群から選択される対照安定化剤
を含む非侵襲的分子対照。 - 1ミリリットルあたり0.15−0.5マイクログラムを含む第1の対照マーカーであって、
メタロプロテアーゼタンパク質12である第1の対照マーカー、
非侵襲的分子対照の総体積の30−80パーセント(重量/体積)を構成する対照血漿であって、
生体液である対照血漿、ならびに
0.05−0.5重量/体積%の2−ブロモ−2ニトロプロパン−1,3−ジオール、0.1−0.5重量/体積%のアミノカプロン酸、0.15−0.2重量/体積%のイミダゾリジニル尿素、およびこれらの組合せからなる群から選択される対照安定化剤
を含む非侵襲的分子対照。
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