CN115960236A - 一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 - Google Patents
一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115960236A CN115960236A CN202310012152.2A CN202310012152A CN115960236A CN 115960236 A CN115960236 A CN 115960236A CN 202310012152 A CN202310012152 A CN 202310012152A CN 115960236 A CN115960236 A CN 115960236A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- monoclonal antibody
- seq
- solution
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 69
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 title claims description 11
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 title claims description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 title description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 59
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 49
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 32
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 20
- 101001033312 Homo sapiens Interleukin-4 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 17
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 16
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 16
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 15
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 10
- 102000054663 human IL4R Human genes 0.000 claims description 10
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 8
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 8
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 6
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims description 5
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 claims description 3
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 claims 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 abstract 1
- 108040006852 interleukin-4 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 47
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 25
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 25
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 6
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 5
- 101001002709 Homo sapiens Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 102000055229 human IL4 Human genes 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241001334141 Rugopharynx alpha Species 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010000134 Vascular Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 description 2
- 102100023543 Vascular cell adhesion protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010009137 Chronic sinusitis Diseases 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000018682 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010066719 Interleukin Receptor Common gamma Subunit Proteins 0.000 description 1
- 101710112663 Interleukin-13 receptor subunit alpha-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100020791 Interleukin-13 receptor subunit alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000000592 Nasal Polyps Diseases 0.000 description 1
- 241000283977 Oryctolagus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001552 airway epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000005057 airway smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 208000027157 chronic rhinosinusitis Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229950003468 dupilumab Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 208000024711 extrinsic asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000035778 pathophysiological process Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013062 quality control Sample Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本申请涉及一种抗体;它的重链、轻链;相应的可变域以及相应的互补决定域;以及在间接ELISA分析中使用该抗体作为二抗所建立的酶联免疫分析方法。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,尤其涉及一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法。
背景技术
人白介素4受体α(人IL-4Rα,或hIL-4Rα)亚单位是一种高亲和力结合IL-4的140kD的I型跨膜蛋白,IL-4与之结合后募集共同γ链(IL-2等多种细胞因子的共同受体亚单位)组成IL-4的I型受体,或者募集IL-13Rα1组成IL-4的II型受体(该受体可与IL-13结合介导其生物学效应),从而进行信号的转导,因而IL-4Rα可以介导IL-4、IL-13的生物学活性。体外研究表明,IL-4和IL-13通过I/II型受体激活多种细胞(诸如T细胞、B细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、气道平滑肌细胞、呼吸道上皮细胞、肺成纤维细胞和内皮细胞等)的效应功能。抗人白介素4受体α单克隆抗体为特异性结合人白介素4受体α(hIL-4Rα)的IgG4型人源化单克隆抗体;其亲本抗体由经人白介素4受体α免疫的新西兰兔B细胞筛选获得,亲本兔抗体经人源化改造后得到抗人白介素4受体α单克隆抗体。
本申请中待检测的抗人白介素4受体α单克隆抗体是江苏荃信生物医药股份有限公司的QX005N,该抗人白介素4受体α单克隆抗体在中国专利文献CN 110746507 B中有所描述。具体来说,IL-4Rα可以介导IL-4、IL-13的生物学活性。IL-4是促使初始Th细胞(辅助性T细胞)分化发育为Th2的关键细胞因子,其可以促进B细胞表达CD23、MHC II(主要组织相容性复合物)、细胞活化和IgE的分泌,并可促进上调B细胞、肥大细胞等表达IgE受体,增强其反应性,同时它能够促进血管内皮细胞释放血管细胞粘附分子1(VCAM-1)进而诱使T细胞、单核细胞、嗜酸/碱性粒细胞向炎症部位的转移。Th-2细胞因子过表达可引起特应性皮炎的事实已在转基因小鼠模型中得到证实。目前,IL-4Rα相关抗体药物已经被批准上市,有Dupilumab(IL-4Rα靶向抗体,DUP)用于治疗特异性皮炎、哮喘、慢性鼻窦炎伴鼻息肉。江苏荃信生物医药股份有限公司开发了商品代号为QX005N的抗IL-4Rα单克隆抗体作为药物使用。
对于药物而言,药物代谢动力学是应用动力学的原理与数学处理的方法,定量描述药物在体内动态变化的规律,研究以不同途径进入人体的药物,其吸收、分布、代谢、排泄的过程。因此药代动力学的研究将有利于药物安全性和有效性的评价。生物样品常用的分析方法包括色谱法和免疫法。色谱法灵敏度较低,试验过程繁琐,且回收率不稳定。免疫法是以特异性抗原-抗体反应为基础的分析方法,是当前非临床和临床生物样品检测方法中最为常用的一种。由于抗人IL-4Rα单克隆抗体属于蛋白大分子,适合使用酶联免疫分析方法进行测定,而且兔抗抗人IL-4Rα单克隆抗体体作为第二抗体与酶标检测抗体的结合使用,减少血清中无关蛋白的干扰。
间接ELISA是指先将抗原结合到ELISA板上,然后加入待检测抗体与抗原特异性结合,接着加入特异性抗抗体,最后加入酶标检测抗体并利用底物发生显色反应。这样,待测抗体与二抗的特异性结合,结合了酶标检测抗体与与二抗的结合,不仅起到了多级放大作用,而且提供了更大的灵活性,也需要更少的标记抗体,更经济。达到检测未知抗体分子的目的,具有高灵敏度、高特异性和稳定性等优点。
发明内容
基于以上原因,亟待开发一种特异性强、灵敏度高的基于酶联免疫分析法的定量测定血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的方法。
1.一种单克隆抗体,其特征在于,所述单克隆抗体包括重链和轻链,所述重链和轻链分别包含3个互补决定区CDR区,它们的氨基酸序列为:
重链互补决定区HCDR1区:SEQ ID NO:1:SAYMS;
重链互补决定区HCDR2区:SEQ ID NO:2:IIYPSRSTYYASWVKG;
重链互补决定区HCDR3区:SEQ ID NO:3:GSVNNDDSSWDI;
轻链互补决定区LCDR1区:SEQ ID NO:4:QASQRISNYLS;
轻链互补决定区LCDR2区:SEQ ID NO:5:AANLAS;
轻链互补决定区LCDR3区:SEQ ID NO:6:QSNYDSASSNYGA。
2.根据项1所述的单克隆抗体,所述抗体包括重链和轻链,其特征在于,所述重链和轻链分别包括一个可变域CVR区,它们的氨基酸序列为:
重链可变域HCVR区:SEQ ID NO:7:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSAYMSWVRQAPGKGLEYIGIIY
PSRSTYYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSVNNDDS SWDIWGPGTLVTVSL;
轻链可变域LCVR区:SEQ ID NO:8:
AEVVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQRISNYLSWYQQKPGQPPKLLI
YYAANLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSNYDSASSN YGAFGGGTGVVVK。
3.根据项2所述的单克隆抗体,其特征在于,所述抗体包括重链和轻链,它们的氨基酸序列为:
重链的氨基酸序列:SEQ ID NO:9:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSAYMSWVRQAPGKGLEYIGIIY
PSRSTYYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSVNNDDS
SWDIWGPGTLVTVSLGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPE
PVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHP
ATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTC
VVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQ
DWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSR
SVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK;
轻链的氨基酸序列:SEQ ID NO:10:
AEVVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQRISNYLSWYQQKPGQPPKLLI
YYAANLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSNYDSASSN
YGAFGGGTGVVVKGDPVAPTVLIFPPSADLVATGTVTIVCVANKYFPDV
TVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC。
4.一种用于检测抗人IL-4Rα单克隆抗体的试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:抗原和第二抗体;
其中,抗原是IL-4Rα且被固定在酶联板上;而所述第二抗体是根据权利要求3所述的单克隆抗体。
5.根据项4所述的试剂盒,其特征在于,所述待检测的抗人IL-4Rα单克隆抗体是QX005N;
所述QX005N的LCDR1具有SEQ ID NO:11(RASESVYKNNRLS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR2具有SEQ ID NO:12(EASKVAS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR3具有SEQ ID NO:13(AGAYRGNIYP)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR1具有SEQ ID NO:14(TNSMS)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR2具有SEQ ID NO:15(IIGSSGYMDYASWAKG)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR3具有SEQ ID NO:16(HGDSSSFAL)的氨基酸序列。
6.根据项4或5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括:
辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG检测抗体;洗液、底物显色液、终止液;
用来制作标准曲线的、已知含量的抗人IL-4Rα单克隆抗体标准品以及相应的稀释液。
7.根据项6所述的试剂盒,其特征在于,
所述洗液是PBS溶液与吐温20的混合液(V/V:100/0.05),所述显色液是TMB显色液,所述终止液是纯化水与磷酸的混合液(V/V:4/1)。
8.根据项7所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒是间接酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
9.使用根据项8所述的试剂盒依照间接ELISA法对抗人IL-4Rα单克隆抗体进行含量测定的方法。
10.如项9所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,该方法包括下述步骤:
-使用人IL-4Rα作为抗原包被酶联板;用洗液洗板;
-使已知浓度的抗人IL-4Rα单克隆抗体标准品用所述稀释液稀释为稀释列并与包被抗原反应;温育;用洗液洗板;
-加入项3所述的单克隆抗体作为第二抗体;用洗液洗板;
-依次加入酶标检测抗体;底物显色液;终止液;
-测定由上述得到的反应液在特定波长下的吸光值,制成标准曲线;
并且:
-使用人IL-4Rα作为抗原包被酶联板;用洗液洗板;
-使待测抗人IL-4Rα单克隆抗体样品与包被抗原反应;温育;用洗液洗板;
-加入根据项3所述的单克隆抗体作为第二抗体;用洗液洗板;
-依次加入酶标检测抗体;底物显色液;终止液;
-测定由上述得到的反应液在特定波长下的吸光值,由上面步骤得到的标准曲线计算待测抗人IL-4Rα单克隆抗体样品的浓度。
11.如项10所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,所述单克隆抗体样品与抗原反应时温育的条件为:室温下约110rpm、2h左右置于摇床。
12.如项10所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,所使用的洗液、显色液和终止液分别是:PBS溶液与吐温20的混合液(V/V:100/0.05)、TMB显色液、纯化水与磷酸的混合液(V/V:4/1);而所述特定波长是450nm。
13.如项10所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,加入检测抗体、底物后的显色条件是:室温下约110rpm避光置于摇床。
14.如项9至13的任一项所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,所述待检测的抗人IL-4Rα单克隆抗体是QX005N;
所述QX005N的LCDR1具有SEQ ID NO:11(RASESVYKNNRLS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR2具有SEQ ID NO:12(EASKVAS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR3具有SEQ ID NO:13(AGAYRGNIYP)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR1具有SEQ ID NO:14(TNSMS)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR2具有SEQ ID NO:15(IIGSSGYMDYASWAKG)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR3具有SEQ ID NO:16(HGDSSSFAL)的氨基酸序列。
发明的技术效果
采用本申请的技术方案,得到了下述有益效果:首先,以兔抗抗人IL-4Rα单克隆抗体为第二抗体,建立了定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法;第二,本申请所建立的方法有效定量范围很宽,为50~2500ng/ml,对抗人IL-4Rα单克隆抗体的定量下限为50ng/ml,灵敏度高;第三,本发明所建立的方法重复性好,板间重复实验变异系数为4.7%~15.0%,小于20%;第四,本发明所建立的方法个体选择性好,10/10个个体满足在定量下限的浓度水平上准确度和精密度符合接受范围;第五,本发明可用于检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量,可用于临床评价抗人IL-4Rα单克隆抗体的药代动力学特征,从而评估其安全性和有效性。
附图说明
图1为本发明中酶联免疫分析方法的示意图;
图2为方法标准曲线四参数拟合曲线图。
具体实施方案
需要说明的是,在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解,技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异来作为区分组件的方式,而是以组件在功能上的差异来作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为一开放式用语,故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方案,然所述描述乃以说明书的一般原则为目的,并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本申请在第一方面涉及一种抗体。
在一个具体的实施方案中,提供了一种单克隆抗体,所述单克隆抗体包括重链和轻链,所述重链和轻链分别包含3个互补决定区CDR区,它们的氨基酸序列为:
重链互补决定区HCDR1区:SEQ ID NO:1:SAYMS;
重链互补决定区HCDR2区:SEQ ID NO:2:IIYPSRSTYYASWVKG;
重链互补决定区HCDR3区:SEQ ID NO:3:GSVNNDDSSWDI;
轻链互补决定区LCDR1区:SEQ ID NO:4:QASQRISNYLS;
轻链互补决定区LCDR2区:SEQ ID NO:5:AANLAS;
轻链互补决定区LCDR3区:SEQ ID NO:6:QSNYDSASSNYGA。
在本说明书的上下文中,“单克隆抗体”表示得自基本上同源的抗体的群体的抗体,即,构成所述群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位,单克隆抗体制品的每种单克隆抗体针对抗原上的单个决定簇。因而,术语“单克隆”指示所述抗体得自基本上同源的抗体群体的特征,并且不应解释为需要通过任何特定方法生产所述抗体。例如,要根据本发明使用的单克隆抗体可以通过多种技术来制备,所述技术包括、但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法、和使用包含人免疫球蛋白基因座的全部或部分的转基因动物的方法,本文描述了这样的方法和其它示例性的制备单克隆抗体的方法。单克隆抗体在结构上包括有重链和轻链。
在本说明书的上下文中,CDR为complement determine region(互补决定区)的缩写,也称“超变区”。LCDR为轻链超变区的缩写,HCDR为重链超变区的缩写。一般地,抗体的重链和轻链均具有3个CDR,它们共同组成Ig的抗原结合部位(antigen-binding site)。在该部位,抗体在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补。在下文中,在分析技术中使用本申请要求保护的单克隆抗体作为“二抗”或“抗抗体”与抗人IL-4Rα单克隆抗体发生特异性结合,即是依赖此处限定的CDR区对抗人IL-4Rα单克隆抗体上特定抗原决定簇的特异结合能力。
在又一具体实施方案中,提供了一种单克隆抗体,所述单克隆抗体包括重链和轻链,其中,所述重链和轻链分别包括一个可变域CVR区,它们的氨基酸序列为:
重链可变域HCVR区:SEQ ID NO:7:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSAYMSWVRQAPGKGLEYIGIIY
PSRSTYYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSVNNDDS SWDIWGPGTLVTVSL;
轻链可变域LCVR区:SEQ ID NO:8:
AEVVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQRISNYLSWYQQKPGQPPKLLI
YYAANLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSNYDSASSN YGAFGGGTGVVVK。
在本说明书的上下文中,CVR是“可变域”的英文缩写,该定义是相对“恒定域”而言。重链和轻链的可变域都包括三个上述“互补决定区”。
在再一具体实施方案中,提供了一种单克隆抗体,所述单克隆抗体包括重链和轻链,它们的氨基酸序列为:
重链:SEQ ID NO:9:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSAYMSWVRQAPGKGLEYIGIIYPSRSTYYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSVNNDDSSWDIWGPGTLVTVSLGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK;
轻链:SEQ ID NO:10:
AEVVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQRISNYLSWYQQKPGQPPKLLI
YYAANLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSNYDSASSN
YGAFGGGTGVVVKGDPVAPTVLIFPPSADLVATGTVTIVCVANKYFPDV
TVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC。
本申请在第二方面涉及一种试剂盒。
在一个具体实施方案中,提供了一种用于检测抗人IL-4Rα单克隆抗体的试剂盒,其中,该试剂盒包括:抗原和第二抗体;
其中,抗原是IL-4Rα且被固定在酶联板上;而所述第二抗体是前述兔抗抗人IL-4Rα单克隆抗体。
在又一具体实施方案中,提供了一种试剂盒,其中,所述待检测的抗人IL-4Rα单克隆抗体是QX005N;所述QX005N的LCDR1具有SEQ ID NO:11(RASESVYKNNRLS)的氨基酸序列,
LCDR2具有SEQ ID NO:12(EASKVAS)的氨基酸序列,
LCDR3具有SEQ ID NO:13(AGAYRGNIYP)的氨基酸序列,
HCDR1具有SEQ ID NO:14(TNSMS)的氨基酸序列,
HCDR2具有SEQ ID NO:15(IIGSSGYMDYASWAKG)的氨基酸序列,HCDR3具有SEQ IDNO:16(HGDSSSFAL)的氨基酸序列。
在本说明书的上下文中,人白介素4受体α(Human Interleukin-4receptorsubunit alpha,hIL-4Rα)表示一种源自人的膜蛋白。IL-4Rα是一种高亲和力结合IL-4的I型跨膜蛋白,可以介导IL-4、IL-13的生物学活性。IL-4/IL13通路能够引起细胞因子诱导反应,包括促炎细胞因子、趋化因子和IgE的释放,并在特应性皮炎和哮喘等自身免疫性疾病的病理生理过程中起重要作用。本申请的单克隆抗体是特异性识别IL-4Rα的中和性抗体,其能够与IL-4Rα特异性结合。
在本说明书的上下文中,“抗人IL-4Rα单克隆抗体”表示这样的单克隆抗体:其能够以足够的亲和力结合人IL-4Rα,使得所述单克隆抗体可用于鉴定/检测人IL-4Rα,也可以作为抗体药物使用,例如作为治疗自身免疫性疾病的药物使用。因此,在下文用本申请的试剂盒建立的间接ELISA方法可以作为此类抗体药物的药代动力学研究的分析手段来使用。
在又一具体实施方案中提供了一种试剂盒,其中,该试剂盒还包括:
辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体;
洗液、底物显色液、终止液;
用来制作标准曲线的、已知含量的抗人IL-4Rα单克隆抗体标准品以及相应的稀释液。
在本说明书的上下文中,“标准曲线”是指待测样品的含量与分析方法的可测量量(例如吸光度值)之间的线性关系,以借助其实现对待测样品的定量分析。
在再一具体实施方案中,提供了一种试剂盒,其中,所述洗液是PBS溶液与吐温20的混合液(V/V:100/0.05),所述显色液是TMB显色液,所述终止液是纯化水与磷酸的混合液(V/V:4/1)。
在又一具体实施方案中,提供了一种试剂盒,其中,该试剂盒是间接酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒。
本申请在第三方面涉及对单克隆抗体进行含量测定的方法。
在一个具体实施方案中,提供了:使用前述试剂盒依照间接ELISA法对抗人IL-4Rα单克隆抗体进行含量测定的方法。
在又一具体实施方案中,提供了:前述对抗人IL-4Rα单克隆抗体进行含量测定的方法,其中,该方法包括下述步骤:
-使用人IL-4Rα作为抗原包被酶联板;用洗液洗板;
-使已知浓度的抗人IL-4Rα单克隆抗体标准品用所述稀释液稀释为稀释列并与包被抗原反应;温育;用洗液洗板;
-加入前述兔抗抗人IL-4Rα单克隆抗体作为第二抗体;用洗液洗板;
-依次加入酶标检测抗体;底物显色液;终止液;
-测定由上述得到的反应液在特定波长下的吸光值,制成标准曲线;
并且:
-使用人IL-4Rα作为抗原包被酶联板;用洗液洗板;
-使待测抗人IL-4Rα单克隆抗体样品与包被抗原反应;温育;用洗液洗板;
-加入前述兔抗抗人IL-4Rα单克隆抗体作为第二抗体;用洗液洗板;
-依次加入酶标检测抗体;底物显色液;终止液;
-测定由上述得到的反应液在特定波长下的吸光值,由上面步骤得到的标准曲线计算待测抗人IL-4Rα单克隆抗体样品的浓度。
在再一具体实施方案中,提供了一种单克隆抗体含量测定方法,其中,所述单克隆抗体样品与抗原反应时温育的条件为:室温下约110rpm、2h左右置于摇床。
在又一具体实施方案中,提供了一种单克隆抗体含量测定方法,其中,所使用的洗液、显色液和终止液分别是PBS溶液与吐温20的混合(V/V:100/0.05)、TMB显色液、纯化水与磷酸的混合液(V/V:4/1);而特定波长是450nm。
在再一具体实施方案中,提供了一种单克隆抗体含量测定方法,其中,加入检测抗体、底物后的显色条件是:室温下约110rpm避光置于摇床。
在一个具体实施方式中,提供了一种单克隆抗体含量测定方法,其中,所述检测的抗人IL-4Rα单克隆抗体是QX005N;所述QX005N的
LCDR1具有SEQ ID NO:11(RASESVYKNNRLS)的氨基酸序列,
LCDR2具有SEQ ID NO:12(EASKVAS)的氨基酸序列,
LCDR3具有SEQ ID NO:13(AGAYRGNIYP)的氨基酸序列,
HCDR1具有SEQ ID NO:14(TNSMS)的氨基酸序列,
HCDR2具有SEQ ID NO:15(IIGSSGYMDYASWAKG)的氨基酸序列,HCDR3具有SEQ IDNO:16(HGDSSSFAL)的氨基酸序列。
根据本申请所建立的间接ELISA方法可以参见图1。
<实施例>
下面将参照附图更详细地描述本发明的具体实施例。虽然附图中显示了本发明的具体实施例,然而应当理解,可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反,提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明,并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
实施例1第二抗体的制备与纯化
用抗人IL-4Rα单克隆抗体(F(ab)2)作为抗原进行兔子免疫,通过B细胞克隆技术筛选出能够与该单克隆抗体结合、不阻断抗人IL-4Rα单克隆抗体与其靶点人IL-4Rα结合、且不和同型其它人IgG发生交叉反应的非中和性兔单克隆抗体。
实施例2对由实施例1制成的单克隆抗体进行性能鉴定
1、结合活性鉴定
使用抗人IL-4Rα单克隆抗体和人IgG作为抗原包被酶联板;使系列稀释的实施例1中的单克隆抗体与包被抗原反应;依次加入显色抗体;底物显色液;终止液;进行结合活性实验。结果显示,该单克隆抗体与抗人IL-4Rα单克隆抗体有较好结合活性,且与同型IgG不发生交叉反应。
2、中和活性鉴定
使用人IL-4Rα作为抗原包被酶联板;将定量抗人IL-4Rα单克隆抗体和系列稀释的实施例1中的兔单克隆抗体的孵育物加入与包被抗原反应;依次加入显色抗体;底物显色液;终止液;进行中和活性实验。结果显示,该兔单克隆抗体不阻断抗人IL-4Rα单克隆抗体和其靶点人IL-4Rα的结合,因此不具备中和活性。
实施例3使用依实施例1制得的“二抗”构建Elisa试剂盒
抗原是人IL-4Rα且被固定在酶联板上;抗人IL-4Rα单克隆抗体可以与包被抗原结合;实施例1制得的“二抗”作为第二抗体;辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体作为检测抗体。
实验过程:
包被:人IL-4Rα用1×PBS稀释至0.5μg/ml,100μl/孔,2-8℃包被过夜;
封闭:200μl/孔封闭液,室温封闭2h;
加样:标准品和质控品加样前统一用稀释液进行MRD稀释50倍;100μl/孔,室温温育2h;
加二抗:用稀释液加实施例1制得的“二抗”稀释至10ng/ml,100μl/孔,室温避光孵育60min;
加检测抗体:用稀释液将辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG抗体稀释至20ng/ml,室温避光孵育1h;
显色:100μl/孔加入TMB显色液,室温避光20min;
终止及读数:100μl/孔加入终止液;在450nm处读取OD值(以650nm作为参考)
试剂信息:
1×PBS:23.48gPBS粉末溶解于2000ml超纯水中;
清洗液:每1000ml1×PBS加入500μl Tween 20;
稀释液/封闭液:称取2.5g BSA,用1×PBS 500ml使其溶解,加入250μlTween 20及250μl Proclin 300,充分混匀;
TMB显色液的配制:取等体积的A液和B液,冷却至室温后充分混匀即可使用,避光,现配现用;
终止液:100ml H3PO4,加到400ml超纯水中;
人混合血清:10个个体空白血清等体积混匀;
实施例4定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法的建立
1、定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法标准曲线的建立
将抗人IL-4Rα单克隆抗体用人混合血清稀释成39.06,78.13,156.25,312.5,625,1250,2500,5000ng/ml,在确定的最佳实验条件下进行酶联免疫分析实验。以检测抗人IL-4Rα单克隆抗体浓度为横坐标,OD450值为纵坐标绘制四参数曲线,如图2所示,发现抗人IL-4Rα单克隆抗体浓度在50~2500ng/ml范围内,曲线具有较好的回收率。
结果见下表1,表明本发明建立的酶联免疫分析方法的标曲浓度为39.06(锚定点),78.13,156.25,312.5,625,1250,2500(ULOQ),5000ng/ml(锚定点)。方法定量范围为50~2500ng/ml,39.06,5000ng/ml作为锚定点用于改善标曲的拟合(回收率不做要求)。所建立的标准曲线可以参见图2。
表1:方法标曲建立各浓度点回收率统计
注:*标记为锚定点,回收率不作要求
2、定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法的方法学研究
2.1定量范围
不同实验人员于不同天用建立的定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法评估6个独立批次的标准曲线。
结果如表2所示,除锚定点外,在LLOQ和ULOQ浓度水平:批间准确度RE%在-0.4%~2.0%范围内,精密度CV%在2.0~9.0%范围内。2500ng/mL和50ng/mL可作为方法的定量上限和定量下限。
表2:方法定量范围研究
2.2准确度和精密度
实验人员至少2天用建立的定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法评估6个独立批次的质控样品(包括LLOQ、LQC、MQC、HQC、ULOQ)。
结果如表3所示,在LLOQ和ULOQ浓度水平:批间准确度RE%在-4.2%~1.4%范围内,精密度CV%在6.9%~12.7%范围内。在QC浓度水平:批间准确度RE%在-5.1%~1%范围内,精密度CV%在4.7%~15%范围内。
表3:方法准确度和精密度研究
2.3选择性
用建立的定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法,通过向至少10个个体来源的空白基质,添加LLOQ浓度水平的抗人人IL-4Rα单克隆抗体来考察。
结果如表4所示,10个个体来源的空白样品响应值均低于LLOQ,10个个体来源LLOQ水平质控样品批内准确度RE%在-2.5%~5%范围内。
表4:方法选择性研究
实施例5使用依实施例3构建的Elisa试剂盒依实施例4建立的方法对血清中的抗人IL-4Rα单克隆抗体进行含量测定
使用稀释液对待测抗人IL-4Rα单克隆抗体样品进行MRD稀释50倍,然后用2%血清稀释液进行合适倍数的稀释,以落入标曲定量范围为宜;使用依实施例3构建的Elisa试剂盒依实施例4建立的方法对血清中的抗人IL-4Rα单克隆抗体进行含量测定。
综上所述,本发所明提供的一种定量检测血清中抗人IL-4Rα单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法,是一种通过人IL-4Rα包被酶标板形成固相载体,与待检生物样品中抗人IL-4Rα单克隆抗体结合,再通过特异性第二抗体和检测抗体,形成固相抗原-抗体-酶标抗体复合物。由于筛选获得的第二抗体(二抗)具有很强的特异性,所以本发明中所建立方法的特异性强,灵敏度高,具有好的精密度和准确度。
尽管以上结合附图对本发明的实施方案进行了描述,但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域,上述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的,而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下,还可以做出很多种的形式,这些均属于本发明保护之列。
Claims (14)
1.一种单克隆抗体,其特征在于,所述单克隆抗体包括重链和轻链,所述重链和轻链分别包含3个互补决定区CDR区,它们的氨基酸序列为:
重链互补决定区HCDR1区:SEQ ID NO:1:SAYMS;
重链互补决定区HCDR2区:SEQ ID NO:2:IIYPSRSTYYASWVKG;
重链互补决定区HCDR3区:SEQ ID NO:3:GSVNNDDSSWDI;
轻链互补决定区LCDR1区:SEQ ID NO:4:QASQRISNYLS;
轻链互补决定区LCDR2区:SEQ ID NO:5:AANLAS;
轻链互补决定区LCDR3区:SEQ ID NO:6:QSNYDSASSNYGA。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体,所述抗体包括重链和轻链,其特征在于,所述重链和轻链分别包括一个可变域CVR区,它们的氨基酸序列为:
重链可变域HCVR区:SEQ ID NO:7:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSAYMSWVRQAPGKGLEYIGIIY PSRSTYYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSVNNDDS SWDIWGPGTLVTVSL;
轻链可变域LCVR区:SEQ ID NO:8:
AEVVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQRISNYLSWYQQKPGQPPKLLI YYAANLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSNYDSASSN YGAFGGGTGVVVK。
3.根据权利要求2所述的单克隆抗体,其特征在于,所述抗体包括重链和轻链,它们的氨基酸序列为:
重链的氨基酸序列:SEQ ID NO:9:
QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSAYMSWVRQAPGKGLEYIGIIYPSRSTYYASWVKGRFTISKTSTTVDLKITSPTTEDTATYFCARGSVNNDDSSWDIWGPGTLVTVSLGQPKAPSVFPLAPCCGDTPSSTVTLGCLVKGYLPEPVTVTWNSGTLTNGVRTFPSVRQSSGLYSLSSVVSVTSSSQPVTCNVAHPATNTKVDKTVAPSTCSKPTCPPPELLGGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSQDDPEVQFTWYINNEQVRTARPPLREQQFNSTIRVVSTLPIAHQDWLRGKEFKCKVHNKALPAPIEKTISKARGQPLEPKVYTMGPPREELSSRSVSLTCMINGFYPSDISVEWEKNGKAEDNYKTTPAVLDSDGSYFLYSKLSVPTSEWQRGDVFTCSVMHEALHNHYTQKSISRSPGK;
轻链的氨基酸序列:SEQ ID NO:10:
AEVVMTQTPASVEAAVGGTVTINCQASQRISNYLSWYQQKPGQPPKLLIYYAANLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDLECADAATYYCQSNYDSASSNYGAFGGGTGVVVKGDPVAPTVLIFPPSADLVATGTVTIVCVANKYFPDVTVTWEVDGTTQTTGIENSKTPQNSADCTYNLSSTLTLTSTQYNSHKEYTCKVTQGTTSVVQSFNRGDC。
4.一种用于检测抗人白介素4受体α单克隆抗体的试剂盒,其特征在于,该试剂盒包括:抗原和第二抗体;
其中,抗原是人白介素4受体α且被固定在酶联板上;而所述第二抗体是根据权利要求3所述的单克隆抗体。
5.根据权利要求4所述的试剂盒,其特征在于,所述待检测的抗人白介素4受体α单克隆抗体是QX005N;
所述QX005N的LCDR1具有SEQ ID NO:11(RASESVYKNNRLS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR2具有SEQ ID NO:12(EASKVAS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR3具有SEQ ID NO:13(AGAYRGNIYP)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR1具有SEQ ID NO:14(TNSMS)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR2具有SEQ ID NO:15(IIGSSGYMDYASWAKG)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR3具有SEQ ID NO:16(HGDSSSFAL)的氨基酸序列。
6.根据权利要求4或5所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括:
辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG检测抗体;洗液、底物显色液、终止液;
用来制作标准曲线的、已知含量的抗人白介素4受体α单克隆抗体标准品以及相应的稀释液。
7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,
所述洗液是PBS溶液与吐温20的混合液(V/V:100/0.05),所述显色液是TMB显色液,所述终止液是纯化水与磷酸的混合液(V/V:4/1)。
8.根据权利要求7所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒是间接酶联免疫吸附测定试剂盒。
9.使用根据权利要求8所述的试剂盒依照间接ELISA法对抗人白介素4受体α单克隆抗体进行含量测定的方法。
10.如权利要求9所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,该方法包括下述步骤:
-使用人白介素4受体α作为抗原包被酶联板;用洗液洗板;
-使已知浓度的抗人白介素4受体α单克隆抗体标准品用所述稀释液稀释为稀释列并与包被抗原反应;温育;用洗液洗板;
-加入权利要求3所述的单克隆抗体作为第二抗体;用洗液洗板;
-依次加入酶标检测抗体;底物显色液;终止液;
-测定由上述得到的反应液在特定波长下的吸光值,制成标准曲线;
并且:
-使用人白介素4受体α作为抗原包被酶联板;用洗液洗板;
-使待测抗人白介素4受体α单克隆抗体样品与包被抗原反应;温育;用洗液洗板;
-加入根据权利要求3所述的单克隆抗体作为第二抗体;用洗液洗板;
-依次加入酶标检测抗体;底物显色液;终止液;
-测定由上述得到的反应液在特定波长下的吸光值,由上面步骤得到的标准曲线计算待测抗人白介素4受体α单克隆抗体样品的浓度。
11.如权利要求10所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,所述单克隆抗体样品与抗原反应时温育的条件为:室温下约110rpm、2h左右置于摇床。
12.如权利要求10所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,所使用的洗液、显色液和终止液分别是:PBS溶液与吐温20的混合液(V/V:100/0.05)、TMB显色液、纯化水与磷酸的混合液(V/V:4/1);而所述特定波长是450nm。
13.如权利要求10所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,加入酶标检测抗体、底物后的显色条件是:室温下约110rpm避光置于摇床。
14.如权利要求9至13的任一项所述的单克隆抗体含量测定方法,其特征在于,所述待检测的抗人白介素4受体α单克隆抗体是QX005N;
所述QX005N的LCDR1具有SEQ ID NO:11(RASESVYKNNRLS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR2具有SEQ ID NO:12(EASKVAS)的氨基酸序列,
所述QX005N的LCDR3具有SEQ ID NO:13(AGAYRGNIYP)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR1具有SEQ ID NO:14(TNSMS)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR2具有SEQ ID NO:15(IIGSSGYMDYASWAKG)的氨基酸序列,
所述QX005N的HCDR3具有SEQ ID NO:16(HGDSSSFAL)的氨基酸序列。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310012152.2A CN115960236A (zh) | 2023-01-05 | 2023-01-05 | 一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202310012152.2A CN115960236A (zh) | 2023-01-05 | 2023-01-05 | 一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115960236A true CN115960236A (zh) | 2023-04-14 |
Family
ID=87354691
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202310012152.2A Pending CN115960236A (zh) | 2023-01-05 | 2023-01-05 | 一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115960236A (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110382002A (zh) * | 2017-03-09 | 2019-10-25 | Mab发现股份有限公司 | 特异性结合人il-1r7的抗体 |
CN110746507A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-02-04 | 江苏荃信生物医药有限公司 | 抗人白介素4受体α单克隆抗体及其应用 |
CN112300285A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-02-02 | 江苏荃信生物医药有限公司 | 一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 |
WO2021128946A1 (zh) * | 2019-12-26 | 2021-07-01 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 抗SpA5蛋白的单克隆抗体及其应用和包含其的试剂盒 |
-
2023
- 2023-01-05 CN CN202310012152.2A patent/CN115960236A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110382002A (zh) * | 2017-03-09 | 2019-10-25 | Mab发现股份有限公司 | 特异性结合人il-1r7的抗体 |
CN110746507A (zh) * | 2018-12-25 | 2020-02-04 | 江苏荃信生物医药有限公司 | 抗人白介素4受体α单克隆抗体及其应用 |
US20220073631A1 (en) * | 2018-12-25 | 2022-03-10 | Qyuns Therapeutics Co., Ltd. | Monoclonal antibody against human interleukin-4 receptor alpha and use thereof |
WO2021128946A1 (zh) * | 2019-12-26 | 2021-07-01 | 成都欧林生物科技股份有限公司 | 抗SpA5蛋白的单克隆抗体及其应用和包含其的试剂盒 |
CN112300285A (zh) * | 2020-11-06 | 2021-02-02 | 江苏荃信生物医药有限公司 | 一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
杨光勇等: "重组抗IL-4R单链抗体的表达与检测", 黑龙江畜牧兽医, vol. 2017, no. 05, 10 March 2017 (2017-03-10), pages 164 - 167 * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2564202B1 (en) | Methods for detecting anti-drug antibodies | |
US20020142356A1 (en) | Immunoassay for C-reactive protein | |
DeForge et al. | Evaluation of heterophilic antibody blocking agents in reducing false positive interference in immunoassays for IL-17AA, IL-17FF, and IL-17AF | |
EP1554576B9 (en) | Identification of high affinity molecules by limited dilution screening | |
EP1653233B1 (en) | Method for determining antibodies of a particular class using an immune complex-specific antibody | |
CN112142841B (zh) | 一种新的抗人il-17a单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 | |
Kim et al. | Premature antibodies with rapid reaction kinetics and their characterization for diagnostic applications | |
TW201802472A (zh) | 抗人類血紅素單株抗體或抗體套組、抗人類血紅素單株抗體固定化不可溶性載體粒子、及使用其等之測定試劑或測定方法 | |
CN108409841B (zh) | 用于检测特异性过敏原IgE的单域结合蛋白及应用 | |
CN117110602A (zh) | 检测神经丝蛋白轻链的试剂盒与方法 | |
CN112300285B (zh) | 一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 | |
KR102426782B1 (ko) | SARS-CoV-2 RBD 항원 특이적 항체를 포함하는 진단용 조성물 또는 키트 | |
EP4286850A1 (en) | Immunological assay method | |
CN115960236A (zh) | 一种定量检测血清中抗人白介素4受体α单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 | |
CN112625129B (zh) | 一种抗人白介素23及包含其的试剂盒及其检测方法 | |
JP2000146973A (ja) | Iv型コラーゲンの免疫測定法及び試薬 | |
CN117417452B (zh) | 一种抗抗人干扰素α受体1(IFNAR1)单克隆抗体的单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 | |
CN109696461B (zh) | 一种治疗性抗体的放行检测方法 | |
Salimi-Moosavi et al. | A multifactorial screening strategy to identify anti-idiotypic reagents for bioanalytical support of antibody therapeutics | |
CN116514981B (zh) | 一种新的抗人il-23单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 | |
CN115947844B (zh) | 一种新的抗人il-33单克隆抗体、包含其的试剂盒及其检测方法 | |
CN116143929B (zh) | 抗重组人凝血因子VIIa-Fc融合蛋白的抗体及其应用 | |
CN117003870B (zh) | 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 | |
CN112067819B (zh) | 一种基于细胞水平的结合膜蛋白抗体的筛选方法 | |
CN116675771A (zh) | 一种抗人tslp单克隆抗体、包含其的试剂盒以及检查方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |