CN117003870B - 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 - Google Patents
一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117003870B CN117003870B CN202311278809.6A CN202311278809A CN117003870B CN 117003870 B CN117003870 B CN 117003870B CN 202311278809 A CN202311278809 A CN 202311278809A CN 117003870 B CN117003870 B CN 117003870B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- hybridoma cell
- adalimumab
- cgmcc
- cell strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229960002964 adalimumab Drugs 0.000 title claims abstract description 97
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims abstract description 76
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 67
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000012224 working solution Substances 0.000 claims description 47
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 claims description 42
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 27
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 23
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 22
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 20
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 7
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 7
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 claims description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 5
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 4
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 abstract description 13
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 abstract description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 7
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 abstract description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 abstract 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 12
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 9
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 7
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 description 5
- 229960001743 golimumab Drugs 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 238000002796 luminescence method Methods 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- XYIPYISRNJUPBA-UHFFFAOYSA-N [3-(3'-methoxyspiro[adamantane-2,4'-dioxetane]-3'-yl)phenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound O1OC2(C3CC4CC(C3)CC2C4)C1(OC)C1=CC=CC(OP(O)(O)=O)=C1 XYIPYISRNJUPBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006303 immediate early viral mRNA transcription Effects 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 101000611183 Homo sapiens Tumor necrosis factor Proteins 0.000 description 1
- 206010023203 Joint destruction Diseases 0.000 description 1
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 description 1
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 102000057041 human TNF Human genes 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
- G01N33/54326—Magnetic particles
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/577—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving monoclonal antibodies binding reaction mechanisms characterised by the use of monoclonal antibodies; monoclonal antibodies per se are classified with their corresponding antigens
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用。本发明制备阿达木(Fab)2片段免疫原,对小鼠进行免疫,筛选抗阿达木(Fab)2片段独特型抗体,最后发现以抗体Adm‑C‑2为捕获抗体,以Adm‑H‑5为检测抗体的配对方式具备更高的信噪比,即更好的灵敏度,采用该配对建立阿达木单抗游离血液浓度的检测方法,同多种其他TNF‑α靶向药物均无交叉反应,特异性高,精确度高。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用。
背景技术
阿达木单抗(Adalimumab)是一种针对人肿瘤坏死因子(TNF-α)的重组人IgG1单克隆抗体。阿达木单抗是通过重组DNA技术在哺乳动物细胞中表达而生产获得,通过特异性结合TNF-α并阻断其与p55和p75细胞表面TNF受体的相互作用。肿瘤坏死因子是一种自然产生的细胞因子,参与正常的炎症和免疫反应。在类风湿性关节炎,包括幼年特发性关节炎,银屑病的滑膜液中发现TNF-α水平升高。肿瘤坏死因子在关节炎和强直性脊柱炎患者得病理炎症和关节破坏中都起着重要作用。银屑病中也发现肿瘤坏死因子水平升高。因此,监测阿达木抗体的血药浓度水平能够提高疗效和安全性。
然而,国内临床实践针对阿达木抗体的血药浓度开展的监测方案很少,这与阿达木抗体的血药浓度检测方法繁琐、人们缺乏血药浓度监测的意识等有关。阿达木抗体的检测分析主要有ELISA,LC-MS法,但LC-MS法分析时间较长,操作复杂,难以满足临床检验对高效能的要求,ELSIA法自动化程度低,测试时间长,满足不了临床高通量、快速准确的检测需求。
CN 108535490 A公开了一种抑制TNF-α的生物制剂血药浓度检测方法及检测试剂。该方法采用针对靶向TNF-α的抗体药物的抗体作为捕获肽,以及TNF-α蛋白作为标记检测物。从原理上所有的TNF-α的抗体药物都会对检测试剂产生干扰,从而影响检测的特异性。并且在实施例中的表2的数据显示基于该发明的试剂在5-20ug/mL范围内,R2为0.9972,线性关系有待进一步提高。
CN 111024958 A公开了一种用于检测单抗药物和抗单抗药物抗体的试剂及其应用,该方法采用针对靶向TNF-α的抗体药物的抗体作为捕获肽,以及生物素化的TNF-α蛋白作为检测物,从原理上所有的TNF-α的抗体药物都会对检测试剂产生干扰,从而影响检测的特异性。由于引入了生物素链霉亲和素系统,增加了试剂成本和潜在生物素干扰可能性。
CN 112213489 A公开了一种人血浆中阿达木单抗含量的检测方法。该发明采用TNF-α抗原进行捕获阿达木抗体,配合抗人IgG抗体进行检测。从原理上很多TNF-α的抗体药物都会对检测试剂产生干扰,从而影响检测的特异性。
综上所述,目前公开的阿达木抗体的药物监测方法都需要使用TNF-α抗原参与反应,这就导致了其他针对TNF-α的药物(如,英夫利西,戈利木,依那西普等)会对阿达木抗体的检测产生干扰,特异性和灵敏性较低。
发明内容
本发明的目的在于弥补现有技术的不足,提高阿达木抗体检测的灵敏性和特异性。
为了实现上述目的,本发明提供了一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合,所述杂交瘤细胞株组合包括杂交瘤细胞株Adm-C-2和杂交瘤细胞株Adm-H-5;
所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
本发明还提供了一种检测阿达木单抗的抗体组合,所述抗体组合包括捕获抗体和检测抗体;
所述捕获抗体包括杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述检测抗体包括杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
本发明还提供了上述技术方案所述的杂交瘤细胞株组合或抗体组合在制备检测阿达木单抗的产品中的应用。
本发明还提供了上述技术方案所述的杂交瘤细胞株组合或抗体组合在制备监测阿达木单抗的血药浓度水平的产品中的应用。
本发明还提供了一种检测阿达木单抗的试剂盒,所述试剂盒包括磁微粒工作液、抗体工作液和指示液;
所述磁微粒工作液包括捕获抗体偶联磁微粒和磁珠缓冲液;所述捕获抗体包括杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述抗体工作液包括示踪物标记的检测抗体和抗体稀释液;所述检测抗体包括杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
优选的,所述磁微粒工作液中捕获抗体偶联磁微粒的浓度为0.2~0.6mg/mL;
所述抗体工作液中示踪物标记的检测抗体的浓度为0.1~2μg/mL。
优选的,所述捕获抗体偶联磁微粒中磁珠和捕获抗体的质量比为(50~500):1。
优选的,所述示踪物标记的检测抗体包括示踪物、检测抗体和偶联剂;
所述示踪物、检测抗体和偶联剂的质量比为1:(0.2~1):(0.2~1)。
优选的,所述磁珠缓冲液包括TBST;
优选的,所述抗体稀释液包括50mM 2-吗啉乙磺酸、5mg/mL牛血清白蛋白、0.9mg/mL氯化钠和1mM MgCl2;所述抗体稀释液的pH为6.7,溶剂为PBS;
所述指示液包括发光液;
所述示踪物包括碱性磷酸酶。
本发明还提供了一种非诊断和治疗目的的阿达木单抗游离血液浓度的检测方法,包括如下步骤:
将待检测样品和不同浓度的标准品分别和磁微粒工作液混合,37℃孵育5min,去除上清,得到包被磁珠;将所述包被磁珠和抗体工作液混合,37℃孵育5min,去除上清,得到检测磁珠;将所述检测磁珠和发光液混合,统计发光值;
利用不同浓度的标准品测定的发光值建立标准曲线,将待检测样品的检测结果带入所述标准曲线,即为所述待检测样品中阿达木单抗游离血液浓度;
所述磁微粒工作液为上述技术方案所述试剂盒中的磁微粒工作液;
所述抗体工作液为上述技术方案所述试剂盒中的抗体工作液。
有益效果:
本发明提供了一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合,包括杂交瘤细胞株Adm-C-2和杂交瘤细胞株Adm-H-5;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。利用本发明所述杂交瘤细胞株组合产生的抗体能够特异性检测阿达木单抗,监测阿达木单抗的血药浓度水平,实施例结果表明,利用所述杂交瘤细胞株组合产生的抗体进行检测时具备更高的信噪比(28),灵敏度高,并且在检测阿达木单抗的过程中,同多种其他TNF-α靶向药物均无交叉反应,特异性高,精确度高。
生物保藏信息
杂交瘤细胞株Adm-C-2,分类命名为杂交瘤细胞,于2023年07月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:中国,北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮编:100101,保藏编号为CGMCC No.45636;
杂交瘤细胞株Adm-H-5,分类命名为杂交瘤细胞,于2023年07月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,地址:中国,北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,邮编:100101,保藏编号为CGMCC No.45637。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为阿达木(Fab)2片段SDS-PAGE电泳图;
图2为磁微粒发光法检测阿达木抗体游离血药浓度时的定标曲线。
具体实施方式
本发明提供了一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合,所述杂交瘤细胞株组合包括杂交瘤细胞株Adm-C-2和杂交瘤细胞株Adm-H-5;
所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
本发明还提供了一种检测阿达木单抗的抗体组合,所述抗体组合包括捕获抗体和检测抗体;
所述捕获抗体包括杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述检测抗体包括杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
本发明利用杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体作为捕获抗体,以杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体为检测抗体特异性检测阿达木单抗,具备更高的信噪比,即更好的灵敏度,在检测阿达木单抗的过程中,同多种其他TNF-α靶向药物均无交叉反应,特异性高。
根据本发明杂交瘤细胞株组合和抗体组合的优势,所述杂交瘤细胞株组合或抗体组合在制备检测阿达木单抗的产品和/或监测阿达木单抗的血药浓度水平的产品中的应用同样属于本发明的保护范围。在本发明中,所述产品优选包括试剂盒,进一步优选包括磁微粒化学发光检测试剂盒。
本发明还提供了一种检测阿达木单抗的试剂盒,所述试剂盒包括磁微粒工作液、抗体工作液和指示液;
所述磁微粒工作液包括捕获抗体偶联磁微粒和磁珠缓冲液;所述捕获抗体包括杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述抗体工作液包括示踪物标记的检测抗体和抗体稀释液;所述检测抗体包括杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
在本发明中,所述磁微粒工作液中捕获抗体偶联磁微粒的浓度优选为0.2~0.6mg/mL,进一步优选为0.4mg/mL;所述捕获抗体偶联磁微粒中磁珠和捕获抗体的质量比优选为(50~500):1,进一步优选为(50~100):1,更优选为50:1。本发明所述磁珠优选包括Dynalbeads M280 Tosyl磁珠,购买自赛默飞生物制药(杭州)有限公司。本发明所述磁微粒缓冲液优选包括TBST。
在本发明中,所述捕获抗体偶联磁微粒的制备方法优选包括:将50mM pH8.0的硼酸盐缓冲液和磁珠混合,得到磁珠缓冲液后和所述捕获抗体混合,37℃震荡反应8h,磁吸去除上清,得到所述捕获抗体偶联磁微粒。
在本发明中,所述抗体工作液中示踪物标记的检测抗体的浓度优选为0.1~2μg/mL,进一步优选为0.5~1.5μg/mL,最优选为1μg/mL。
在本发明中,所述示踪物标记的检测抗体优选包括示踪物、检测抗体和偶联剂;所述示踪物、检测抗体和偶联剂的质量比优选为1:(0.2~1):(0.2~1),进一步优选为1:0.5:0.5。本发明所述示踪物优选包括碱性磷酸酶;所述偶联剂优选包括戊二醛。本发明优选将所述示踪物、检测抗体和偶联剂混合,室温混匀2h,得到所述示踪物标记的检测抗体。
在本发明中,所述抗体稀释液优选包括50mM 2-吗啉乙磺酸、5mg/mL牛血清白蛋白、0.9mg/mL氯化钠和1mM MgCl2;所述抗体稀释液的pH优选为6.7,溶剂优选为PBS。本发明所述指示液优选包括发光液。
本发明还提供了一种非诊断和治疗目的的阿达木单抗游离血液浓度的检测方法,包括如下步骤:
将待检测样品和不同浓度的标准品分别和磁微粒工作液混合5min后去除上清,得到包被磁珠;将所述包被磁珠和抗体工作液混合,37℃孵育5min,去除上清,得到检测磁珠;将所述检测磁珠和发光液混合,统计发光值;
利用不同浓度的标准品测定的发光值建立标准曲线,将待检测样品的检测结果带入所述标准曲线,即为所述待检测样品中阿达木单抗游离血液浓度;
所述磁微粒工作液为上述技术方案所述试剂盒中的磁微粒工作液;
所述抗体工作液为上述技术方案所述试剂盒中的抗体工作液。
本发明利用所述磁微粒工作液孵育待检测样品,磁微粒工作液中的包被Adm-C-2包被待检测样品中的阿达木单抗,后续利用抗体工作液中的捕获抗体Adm-H-5与包被Adm-C-2配对,通过检测发光值,实现阿达木单抗游离血液浓度的检测。
基于本发明提供的试剂盒和检测方法能够特异性检测阿达木单抗,实施例结果表明,在检测阿达木单抗的同时,同多种其他TNF-α靶向药物均无交叉反应,特异性高,并且精密度高。
为了进一步说明本发明,下面结合附图和实施例对本发明提供的一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
阿达木(Fab)2片段免疫原的制备,由如下步骤组成:
(1)将20mg阿达木抗体用20mM 磷酸盐缓冲液(PB,pH7.4)稀释到5mg/mL,总体积4mL,加入2mg IdeZ蛋白酶(购买自北京德奥平生物技术有限公司),37℃孵育30min,得到孵育产物;
(2)利用ProteinA柱吸附步骤(1)所得孵育产物中未反应的全长抗体和切割下的Fc段,得到第一产物;利用Ni亲和层析去除第一产物中的IdeZ酶,收集流穿液,采用OD280测定浓度,并进行SDS-PAGE鉴定和-20℃冷冻保存。SDS-PAGE检测结果如图1所示。
根据图1可以看出,对全长的阿达木抗体切割后,能够得到阿达木(Fab)2片段。在SDS-PAGE上轻链Fab和重链Fab的分子量相近,因此表现出重合的电泳条带。
实施例2
抗阿达木(Fab)2片段独特型抗体的制备
抗阿达木独特型单克隆抗体的制备采用杂交瘤细胞融合技术,具体步骤为:
用PBS缓冲液将实施例1中制备得到的阿达木(Fab)2片段免疫原分别稀释到1mg/mL,加入等体积的弗氏完全佐剂,乳化完全,小鼠按照0.1mg/只的剂量进行首次免疫;间隔4周后,取1mg实施例1中制备得到阿达木(Fab)2片段免疫原同弗式不完全佐剂等体积混合乳化后,对一免后的小鼠按照0.1mg/只的剂量进行第二次免疫;
3天后,取第二次免疫脾细胞同Sp2/0细胞融合,获得多株杂交瘤细胞并进行编号;采用阿达木药物(2μg/mL)包被ELISA 96孔板,对杂交瘤细胞的培养上清,进行效价测定,对效价检测阳性的克隆再进行竞争性筛选:
竞争性筛选采用阿达木药物(2μg/mL)包被ELISA 96孔板,每孔50μL,加入10μg/mLTNF-α蛋白,以及杂交瘤细胞的培养上清,采用常规ELISA方法,测定OD450值。选取细胞效价测定强阳性,同时竞争性筛选弱阳性或阴性的克隆,最终筛选到13个产生竞争性抗阿达木独特型抗体的杂交瘤细胞,具体信息如表1所示。
表1 抗阿达木(Fab)2片段独特型抗体效价检测
注:OD450>1为强阳性,OD450≤0.3为弱阳性或阴性。
实施例3
配对抗体的筛选;
分别以实施例2得到的抗体作为捕获抗体或检测抗体,其中检测抗体和HRP(辣根过氧化物酶)偶联,得到阿达木独特型抗体-HRP偶联物,采用棋盘法,筛选配对抗体:
采用检测抗体(2μg/mL)包被ELISA 96孔板,加入5μg/mL的阿达木药物,每孔50μL,反应30min后,用PBST清洗3次,加入2μg/mL抗阿达木独特型抗体-HRP偶联物,每孔50μL,反应30min后,用PBST清洗3次,加入TMB显色液,采用酶标仪读取OD450值,结果记为S5;同时设置不添加阿达木药物的处理方式作为对照,酶标仪读取OD450值,结果记为S0,计算信噪比(S5/S0)。本次筛选有且仅有2个配对方式,具体信息如表2。
表2 配对抗体的筛选结果
根据表2可以看出,以抗体Adm-C-2为捕获抗体,以Adm-H-5为检测抗体的配对方式具备更高的信噪比,即更好的灵敏度,后续采用该配对进行阿达木单抗游离血液浓度检测方法的建立,将产生抗体Adm-C-2的杂交瘤细胞Adm-C-2,以及产生抗体Adm-H-5的杂交瘤细胞Adm-H-5分别进行保藏。
实施例4
一种阿达木抗体的游离血液浓度的检测方法的建立(微粒发光法)
1.磁微粒工作液的配制
将50mg Dynal beads M280 Tosyl磁珠,稀释在2mL 50mM pH8.0的硼酸盐缓冲液中,加入1mg实施例2中杂交瘤细胞Adm-C-2产生的抗阿达木Adm-C-2抗体,混匀后,37℃震荡反应8h;磁吸去除上清,加入TBST(50mM Tris、0.9wt% NaCl、0.1wt% TW20和余量的超纯水,pH7.4),37℃反应12h;磁吸去除上清,加入TBST,稀释到0.2~0.6mg/mL,得到磁微粒工作液,2~8℃保存待用。
2.抗体工作液的配制
1mg碱性磷酸酶溶解在1mL PBS中,加入0.5mg实施例2中杂交瘤细胞Adm-H-5产生的抗阿达木Adm-H-5抗体,混合均匀,加入10μl 50wt.%的戊二醛溶液,室温混匀2h,透析到PBS中,用抗体稀释液(50mM MES、0.9wt%NaCl、5mg/mL BSA、1mM MgCl2和余量的超纯水,pH6.7),稀释到1μg/mL,得到抗体工作液。
3.定标曲线的绘制
利用未经过阿达木单抗治疗的人血清基质稀释阿达木单抗,配置不同浓度的阿达木校准品(阿达木单抗的浓度依次为0、0.5、2、5、20和50μg/mL)
利用PBS对校准品进行10倍稀释,取20μL稀释后的校准品和50μL步骤1得到的磁微粒工作液混合5min后清洗,去除上清,再加入50μL步骤2得到的抗体工作液,37℃孵育反应5min,清洗,加入AMPPD发光液显色,统计发光值,绘制标准曲线,结果如表3和图2所示。
表3 微粒发光法阿达木单抗游离血药浓度定标曲线数据
根据表3和图2,磁微粒发光法得到的定标曲线为:四参数方程式:Y = (A - D) /[1 + (X/C)B] + D;其中:A=10286.51367;B=0.97843552;C=421.9403381;D=83082232;相关系数R2:0.999。
4.精密度检测:利用未经过戈利木单抗治疗的人血清基质稀释戈利木单抗,配制高和低两个浓度的阿达木单抗溶液,在一次实验中每个浓度点测10孔,并按照SD/Mean计算批内变异系数(CV),其中高浓度阿达木单抗溶液中阿达木单抗的浓度为10.0μg/mL;低浓度阿达木单抗溶液中阿达木单抗的浓度为2.0μg/mL;
取20μL待检测样品和50μL步骤1得到的磁微粒工作液混合5min后清洗,去除上清,再加入50μL步骤2得到的抗体工作液,37℃孵育反应5min,清洗,加入AMPPD发光液显色,统计发光值,代入步骤3定标曲线,计算阿达木单抗浓度,结果如表4所示。
表4 精密度检测结果
根据表4可以看出,采用Adm-C-2/Adm-H-5配对抗体制备的磁微粒发光法对阿达木单抗浓度进行测定时精密度高,可以用于阿达木单抗的含量测定。
5.交叉反应检测
选择5种交叉反应物(人IgG1蛋白、依那西普蛋白、英夫利昔单抗、乌司奴单抗和戈利木单抗),利用未经过戈利木单抗治疗的人血清基质将5种交叉反应物蛋白分别稀释至50μg/mL;利用未经过阿达木单抗治疗的人血清基质稀释戈利木单抗,配制高和低两个浓度的阿达木单抗溶液,其中高浓度阿达木单抗溶液中阿达木单抗的浓度为30μg/mL;低浓度阿达木单抗溶液中阿达木单抗的浓度为8μg/mL;计算交叉反应率;
取20μL待检测样品和50μL步骤1得到的磁微粒工作液混合5min后清洗,去除上清,再加入50μL步骤2得到的抗体工作液,37℃孵育反应5min,清洗,加入AMPPD发光液显色,统计发光值,代入步骤3定标曲线,计算阿达木单抗浓度,按照下述公式计算交叉反应率,结果如表5所示;
交叉反应率=(实测浓度-理论浓度)/交叉反应物浓度×100%
表5 交叉反应结果
根据表5可以看出,本发明采用Adm-C-2/Adm-H-5配对抗体建立的磁微粒发光法检测阿达木单抗浓度时,同多种其他TNF-α靶向药物均无交叉反应,特异性高。
根据上述内容可以看出,本发明采用Adm-C-2/Adm-H-5配对抗体对阿达木单抗进行检测时具有较高的灵敏度、特异性和精密度,能够满足阿达木单抗的检测要求。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (10)
1.一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合,其特征在于,所述杂交瘤细胞株组合包括杂交瘤细胞株Adm-C-2和杂交瘤细胞株Adm-H-5;
所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
2.一种检测阿达木单抗的抗体组合,其特征在于,所述抗体组合包括捕获抗体和检测抗体;
所述捕获抗体为杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述检测抗体为杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株组合或权利要求2所述的抗体组合在制备检测阿达木单抗的产品中的应用。
4.权利要求1所述的杂交瘤细胞株组合或权利要求2所述的抗体组合在制备监测阿达木单抗的血药浓度水平的产品中的应用。
5.一种检测阿达木单抗的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括磁微粒工作液、抗体工作液和指示液;
所述磁微粒工作液包括捕获抗体偶联磁微粒和磁珠缓冲液;所述捕获抗体为杂交瘤细胞株Adm-C-2产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-C-2保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45636;
所述抗体工作液包括示踪物标记的检测抗体和抗体稀释液;所述检测抗体为杂交瘤细胞株Adm-H-5产生的抗体;所述杂交瘤细胞株Adm-H-5保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.45637。
6.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述磁微粒工作液中捕获抗体偶联磁微粒的浓度为0.2~0.6mg/mL;
所述抗体工作液中示踪物标记的检测抗体的浓度为0.1~2μg/mL。
7.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述捕获抗体偶联磁微粒中磁珠和捕获抗体的质量比为50~500:1。
8.根据权利要求6所述的试剂盒,其特征在于,所述示踪物标记的检测抗体包括示踪物、检测抗体和偶联剂;
所述示踪物、检测抗体和偶联剂的质量比为1:0.2~1:0.2~1。
9.根据权利要求5所述的试剂盒,其特征在于,所述磁珠缓冲液包括TBST;
所述抗体稀释液包括50mM 2-吗啉乙磺酸、5mg/mL牛血清白蛋白、0.9mg/mL氯化钠和1mM MgCl2;所述抗体稀释液的pH为6.7,溶剂为PBS;
所述指示液包括发光液;
所述示踪物包括碱性磷酸酶。
10.一种非诊断和治疗目的的阿达木单抗游离血液浓度的检测方法,其特征在于,包括如下步骤:
将待检测样品和不同浓度的标准品分别和磁微粒工作液混合,37℃孵育5min,去除上清,得到包被磁珠;将所述包被磁珠和抗体工作液混合,37℃孵育5min,去除上清,得到检测磁珠;将所述检测磁珠和发光液混合,统计发光值;
利用不同浓度的标准品测定的发光值建立标准曲线,将待检测样品的检测结果带入所述标准曲线,得到所述待检测样品中阿达木单抗游离血液浓度;
所述磁微粒工作液为权利要求5~9任一项所述试剂盒中的磁微粒工作液;
所述抗体工作液为权利要求5~9任一项所述试剂盒中的抗体工作液。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311278809.6A CN117003870B (zh) | 2023-10-07 | 2023-10-07 | 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202311278809.6A CN117003870B (zh) | 2023-10-07 | 2023-10-07 | 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117003870A CN117003870A (zh) | 2023-11-07 |
CN117003870B true CN117003870B (zh) | 2023-12-12 |
Family
ID=88573059
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202311278809.6A Active CN117003870B (zh) | 2023-10-07 | 2023-10-07 | 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117003870B (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101802005A (zh) * | 2007-08-28 | 2010-08-11 | 艾博特生物技术有限公司 | 包括关于阿达木单抗的结合蛋白质的组合物和方法 |
CN108535490A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-09-14 | 苏州和锐生物科技有限公司 | 生物制剂血药浓度检测方法及试剂 |
CN111024958A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-04-17 | 同昕生物技术(北京)有限公司 | 用于检测单抗药物和抗单抗药物抗体的试剂及其应用 |
WO2022012610A1 (en) * | 2020-07-16 | 2022-01-20 | Porton Biologics Ltd | Compositions and methods to target anti-tnf-alpha antibody |
-
2023
- 2023-10-07 CN CN202311278809.6A patent/CN117003870B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101802005A (zh) * | 2007-08-28 | 2010-08-11 | 艾博特生物技术有限公司 | 包括关于阿达木单抗的结合蛋白质的组合物和方法 |
CN108535490A (zh) * | 2017-03-06 | 2018-09-14 | 苏州和锐生物科技有限公司 | 生物制剂血药浓度检测方法及试剂 |
CN111024958A (zh) * | 2020-03-11 | 2020-04-17 | 同昕生物技术(北京)有限公司 | 用于检测单抗药物和抗单抗药物抗体的试剂及其应用 |
WO2022012610A1 (en) * | 2020-07-16 | 2022-01-20 | Porton Biologics Ltd | Compositions and methods to target anti-tnf-alpha antibody |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
人源化抗人TNF-α单克隆抗体在转基因小鼠体内的药效学实验;袁杰;吴英良;苏冬梅;;沈阳药科大学学报(第02期);全文 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN117003870A (zh) | 2023-11-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN112679605B (zh) | 针对新型冠状病毒核衣壳蛋白的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
KR102549704B1 (ko) | Pivka-ii의 측정 방법, 및 pivka-ii 면역측정 시약 또는 키트의 제조 방법 | |
CN114878833A (zh) | 一种检测抗过氧化物还原酶-1-IgG抗体的试剂盒 | |
CN113150133B (zh) | 针对SARS-CoV-2的单克隆抗体或其抗原结合片段 | |
CN113447649B (zh) | 一种检测抗粘着斑蛋白-IgG抗体的试剂盒 | |
CN114634576A (zh) | 抗pivka-ii单克隆抗体及其应用 | |
CN117003870B (zh) | 一种用于检测阿达木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 | |
CN109069600A (zh) | Il-21抗体及其用途 | |
CN114720691B (zh) | 一种检测生物标志物的试剂盒及其制备方法和应用 | |
CN117003882B (zh) | 一种用于检测戈利木单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 | |
CN117187189B (zh) | 一种用于检测乌司奴单抗的杂交瘤细胞株组合和抗体组合及其应用 | |
KR20010025027A (ko) | 면역측정시약 및 면역측정법 | |
CN112300285B (zh) | 一种定量检测血清中抗人白介素17单克隆抗体含量的酶联免疫分析方法 | |
JP6867529B1 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ検出用抗体 | |
CN111793136A (zh) | 一种nmp22抗体对及其应用 | |
CN117074693A (zh) | 一种英夫利西的检测试剂及其制备方法和检测方法与应用 | |
CN113447657B (zh) | 一种检测抗乌头酸水合酶-IgG抗体的检测试剂盒 | |
Lamche et al. | Highly sensitive enzyme immunoassays for antibodies to human tumor necrosis factor (TNF-α) and lymphotoxin (TNF-β) | |
KR20140132410A (ko) | 간섭 펩티드 및 미생물 검출 방법 | |
CN212180821U (zh) | 用于检测新型冠状病毒抗体的蛋白芯片试剂盒 | |
CN113563479B (zh) | 包虫病诊断试剂盒 | |
US9546220B2 (en) | Compositions, antibodies, asthma diagnosis methods, and methods for preparing antibodies | |
EP3919509A1 (en) | Method for immunological analysis of free aim in biological sample | |
CN116023464A (zh) | 一种nrf1d蛋白的抗原肽及其抗体和试剂盒 | |
Germani et al. | Competitive erythroimmunoassay for detecting Clostridium perfringens type A enterotoxin in stool specimens |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |