JP2000503627A - コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ・ムーカルから抽出される化合物、同化合物を含有する抽出物、及び、これらの化粧品等における使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ・ムーカルから抽出された式（Ｉ）で表される化合物を開示する。式中、Ｒは、ａ）ＣＨ₂ＯＨ、又は、ｂ）ＣＯＯＨ及びこれらの塩又はエステルである。この化合物及びこれを含有する抽出物は、しわを防止するのに有効な化粧剤である。

Description

【発明の詳細な説明】 コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ・ムーカルから抽出される化合物、同 化合物を含有する抽出物、及び、これらの化粧品等における使用 本発明は、コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ・ムーカル（Ｃｏｍｍｉ ｐｈｏｒａ ｍｕｋｕｌ）の抽出物の、特にしわ防止剤としての化粧品における 使用に関する。本発明は、更に、新規の工業化合物である、同抽出物から単離さ れた高い活性を有する２種類の化合物、及び、これら新規化合物の誘導体に関す る。 周知のように、コミフォーラ・ムーカルという植物は、カンラン科に属する植 物である。コミフォーラ・ムーカルは、インド原産の植物で、インドの伝統的な 医薬品やアーユルヴェーダの医薬品において極めて広範囲に使用されている。こ のアーユルヴェーダは、肥満、脂質障害、リューマチ性の病気を治療することが 知られていた。 本明細書では、「ガガル（ｇｕｇｇｕｌ）」という言葉で、この植物そのもの と、これから採れる樹脂の両方を指す。この植物は、高さが１．２〜１．８ｍの 小さい樹木か灌木であり、本来はインドで生育する植物である。一般的な方法で この植物に切れ目を付けると、これのゴム状樹脂を採取することができる。 最近になって、ＵＳ−Ａ−４８４７０７１、ＵＳ−Ａ−４８４７０６９、ＵＳ −Ａ−４９４６６７１及びＵＳ−Ａ−４９５４３３２は、ＵＶ照射からの保護を 目的とした、フリーラジカル吸収剤と抗炎症剤を含有する局所用組成物を開示し ている。これらの文献では、多数の抗炎症剤のうちの１つとして、ガガル又はガ ガル抽出物が挙げられている。 また、ＥＰ−Ａ−５１３６７１も、コミフォーラ・ムーカルの親油性抽出物を 活性成分として含有する組成物を開示しており、この抽出物は、コミフォーラ・ ムーカルの幹の樹脂等から取得しており、ガガルステロンを高い割合で含有する ものである。開示された組成物は、にきびや良性の前立腺肥大の治療に関して、 抗炎症活性、免疫調節活性又は抗アンドロゲン活性を有するものと記述されてい る。 本発明者らは、コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ・ムーカルから得ら れる抽出物が、驚くべきことに、しわ防止活性を有しており、皮膚の外観を改善 するためや、大きいしわの深さを軽減し小さいしわを取り除くための化粧剤とし て使用できることを見出した。 出願人は、この知見に基づき、上記活性を発揮する活性留分を同定することを 目的として組織的に研究を行い、この活性留分が、問題の活性に対して非常に有 効な２種類の新規化合物を含有することを見出した。この２種類の化合物は、コ ミフォーラ・ムーカルの抽出物から単離して完全に同定することができた。従っ て、この２種類の化合物は、しわ防止用の化粧剤として強力な活性を有する新規 の工業化合物である。 本発明は、また、本発明により単離された２種類の新規化合物の誘導体にも関 する。 すなわち、第一の本発明は、式（Ｉ）で表される化合物に関する。 式中、Ｒは、 ａ）ＣＨ₂ＯＨ、又は、 ｂ）ＣＯＯＨ 及びこれらの塩若しくはエステルである。 本発明は、特に、新規の工業化合物である式(II)で表される化合物に関する。式中、Ｒは、 ａ）ＣＨ₂ＯＨ、この場合、式IIａで表される化合物に相当する、 ｂ）ＣＯＯＨ、この場合、式IIｂで表される化合物に相当する、 ｃ） 式中、Ｒ₁は、炭素数が１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基、特にメチル基 を表す、 ｄ）ＣＯＯＭ、式中、Ｍは、アルカリ金属、好ましくはナトリウム若しくはカリ ウム、又は、四級アンモニウム若しくはアミン基を表す、 ｅ）ＣＯＯＭ’_0.5、式中、Ｍ’は、アルカリ土類金属、好ましくはカルシウム を表す、又は、 ｆ）ＣＯＯＲ₂、式中、Ｒ₂は、炭素数が１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基 を表す。 本発明は、中でも、以下の式IIａ及びIIｂで表される二種類の新規工業化合物 に関する。 詳細は後に記述するが、この二種類の化合物は、植物コミフォーラ・ムーカル から単離したもので、種々の分析手段を用いて完全に同定を行った。 式IIａの化合物は、実験式がＣ₃₀Ｈ₅₀０₃であり、「コミフェロール（ｃｏｍ ｍｉｐｈｅｒｏｌ）」と称することにする。この正式名称は、以下のとおり：（ ５Ｒ，１０Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）−３−オキソポリポダ−１３Ｅ，１７Ｅ，２１Ｅ− トリエン−８，３０−ジオール。 これの酸誘導体である式IIｂの化合物は、実験式がＣ₃₀Ｈ₄₈０₄であり、「コ ミフェリン（ｃｏｍｍｉｐｈｅｒｉｎ）」と称することにする。この化合物は、 （５Ｒ，１０Ｓ，８Ｒ，９Ｒ）−８−ヒドロキシ−３−オキソポリポダ−１３Ｅ ，１７Ｅ，２１Ｅ−トリエン−３０−オイック酸である。 式IIａ及びIIｂで表される化合物を指す上記の正式名称は、これらに対応する 炭化水素の名前に基づいたものである。この炭化水素とは、α−ポリポダテトラ エンであり、例えば、植物のポリポディオデス・フォルモサン（Ｐｏｌｙｐｏｄ ｉｏｄｅｓ ｆｏｒｍｏｓａｎｅ）に関するヨーコ・アライ（Ｙｏｋｏ Ａｒａ ｉ）ら、テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒ ｓ）、１９９２年、３３（１０）、１３２５〜８頁において既に公知である。炭 素原子は、以下のように番号が付いている。 ポリポダンの炭素骨格を有する各種トリテルペン誘導体は、ウラボシ科のシダ 等の他の植物において既に同定されている。例として、ポリポディウム・バルガ ール（Ｐｏｌｙｐｏｄｉｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）、ポリポディウム・ファウリエ （Ｐ．ｆａｕｒｉｅｉ）及びポリポディウム・バージナヌム（Ｐ．ｖｉｒｇｉｎ ｉａｎｕｍ）（Ｙ．アライ（Ａｒａｉ）ら、フィトケミストリー（ｐｈｙｔｏｃ ｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１９９１年、３０（１０）、３３６９〜３３７７頁；Ｋ． シオジマ（Ｓｈｉｏｊｉｍａ）ら、テトラヘドロン・レターズ（Ｔｅｔｒａｈｅ ｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ）、１９８３年、２４、５７５３頁）、アスピジアセ ア（Ａｓｐｉｄｉａｃｅａｅ）（Ｍ．ニシザワ（Ｎｉｓｈｉｚａｗａ）ら、ジャ ーナル・オブ・ケミカル・ソサイエティー、ケミカル・コミュニケーション（Ｊ ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ.,Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．）、１９８４年、Ｎｏ．７、４ ６７〜８頁）、並びに、チェロプロリアセア（Ｃｈｅｉｒｏｐｌｅｕｒｉａｃｅ ａｅ）（Ｒ．カルナヤ（Ｋａｒｎａｙａ）ら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ ．１９９０年、３８（８）、２１３０〜２頁）が挙げられる。 第二の本発明は、上記コミフォーラ・ムーカルから、上記二種類の化合物IIａ 及びIIｂ、上記化合物IIａのアセチル化化合物等のアシル化誘導体、並びに、上 記化合物IIｂの塩及びエステルの製造方法に関する。 各種方法を用いて、コミフォーラ・ムーカルから、式IIａ及びIIｂで表される 化合物を単離することができる。 このような方法においては、コミフォーラ・ムーカルの樹脂を出発原料として 、多数の連続抽出や分留を行うのが好適である。 すなわち、特に好適な方法としては、コミフォーラ・ムーカルの樹脂に対して 溶媒又は溶媒の混合物を用いた最初のいわゆる抽出を行った後、得られた抽出物 を数段階で分離し、本発明の化合物を少なくとも１つ含有する活性留分を単離す る方法が挙げられる。 最初の抽出工程は、様々な極性を有する各種の溶媒を用いて行うことができる 。 極性を増加させるために、この工程で用いられる溶媒の例として、次の化合物 が挙げられる。 ―石油エーテル、これにより粗樹脂の１６重量％が抽出される ―ジクロロメタン、これにより粗樹脂の２６重量％が抽出される ―酢酸エチル、これにより粗樹脂の３０．５重量％が抽出される ―エタノール、これにより粗樹脂の２６．５重量％が抽出される 図１は、本発明において、コミフォーラ・ムーカルの樹脂の抽出物から、式II ａ及びIIｂで表される化合物を単離するための各種手順を概略的に示したもので ある。 図１の手順によると、本発明の最初の抽出物をコミフォーラ・ムーカルの樹脂 から得る。この抽出物を抽出物Ｇとする。 上記抽出物Ｇは、上記樹脂の凝集体を粉砕したのち、９６％エタノールを用い て４５℃で抽出することにより得られる。 次に、抽出物Ｇに対して、第一の方法として、高速液体クロマトグラフィーに よる一連の分留を行う。得られた各留分に関して、以下で説明する方法を用いて 、培養繊維芽細胞に対する脂肪形成活性を調べる。以上のような一連の分留を行 うことで、最終的に、活性を有する留分ＦIIＢが得られる。この留分は、クロマ トグラフィーで特徴的なピークを持つため同定できる。 より具体的には述べると、上記第一の方法では、上記抽出物Ｇから最も活性の 高い留分を単離するために、上記抽出物Ｇをまず手順Ｂで処理する。この手順Ｂ では、高速液体クロマトグラフィーで、上記抽出物Ｇを三つの留分に分離するこ とができる。Ｆは、抽出物Ｇの９２．５％を占め、ＦIIIは４．５％、ＦIVは３ ％ である。上記留分ＦIIIは、主要成分としてステロールを含有し、上記留分ＦIV の主要成分は、クロマトグラフィーのカラムをジクロロメタンで洗浄したことに より生じた化合物であることが確認された。 次いで、上記留分Ｆを、液体クロマトグラフィーによる分離を行う手順Ｃで処 理すると、二つの留分ＦＩとＦIIが得られる。上記留分ＦＩは、ほぼ不活性であ るので、廃棄した。この留分ＦＩは、Ｆの２１．５％を構成し、本質的にステロ ン（Ｚ―及びＥ―ガガルステロン）からなるものである。 上記留分ＦIIは、脂肪形成活性を有しているので、液体クロマトグラフィーを 用いて更に分留を行って、３つの留分に分離させることができる。ＦIIＡは、抽 出物Ｇの１９．５％を構成し、ＦIIＢは２０％、ＦIIＣは３１．５％である。上 記留分ＦIIＢが、この三つの留分の中で最も活性が高いものである。この留分Ｆ IIＢに対応するピークの位置はクロマトグラフィーで同定した。 第二の方法では、手順Ｅに従って上記抽出物Ｇから直接分留することにより、 上記留分ＦIIＢのピークに対応する活性留分ＦIIＢ１を得ることが可能である。 次いで、上記抽出物ＦIIＢ１から、上記式IIａ及びIIｂで表される２つの化合 物を分取高速液体クロマトグラフィーにより分離することができる。 上記化合物IIａ及びIIｂは、活性がほぼ等しいことが判明しており、完全に精 製されて、以下の条件で液体クロマトグラフィーにより単離することができた。 ―カラム：ＲＰ１８リコルスファー（Ｌｉｃｈｒｏｓｐｈｅｒ）５μｍ １２５×４ｍｍ ―混合物：水＋０．１％ＣＦ₂ＣＯＯＨ アセトニトリル ―ＵＶ検出：λ＝２１０ｎｍ 上記式IIａで表される化合物は、次に、従来の方法によるアセチル化等のアシ ル化を行って、対応するアセチル化誘導体等のアシル化誘導体を得ることができ る。 上記式IIｂで表される化合物は、分子鎖末端にある酸性基を塩基で中和するこ とにより、上述したような対応する塩の一つに容易に変換することができる。 同様に、従来法で上記化合物IIｂを低分子量のアルコールと反応させることに より、上記化合物IIｂのエステル化化合物が容易に得られる。 以上のような上記化合物IIａのアシル化反応又は上記化合物IIｂのエステル化 反応若しくは塩化反応は、活性な化合物IIａ及びIIｂの両方を含有する混合物、 特に上記混合物ＦIIＢ１を直接用いて行うこともできる。 例えば、無水酢酸を用いた上記IIａのアセチル化は、以下の手順に従って、上 記留分ＦIIＢ１を処理することにより行うことができる。ジクロロメタン（１容 量）にＦIIＢ１を溶かし、１容量のピリジンを加えた後、ＦIIＢ１の１当量に対 し１．２当量の無水酢酸を加え、一晩室温で反応させる。 出願人は、植物コミフォーラ・ムーカルの抽出物、特に式IIａ又はIIｂの化合 物を多く含有する抽出物が、驚くべきことに、繊維芽細胞内部の脂肪形成を刺激 する効果を有することを見出した。この効果によって、繊維芽細胞の細胞容積が 増加して、細胞外タンパク質ネットワークとより接触することになる。この結果 、真皮が正常な状態に戻って、大小のしわの深さを軽減することができるので、 しわが目立ちにくくなる。従って、出願人は、上記効果を利用して、皮膚の外観 を改善することのできる新規の溶液を提案することができる。 すなわち、第三の本発明は、大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し 、皮膚により滑らかな外観を与えるための化粧剤としての、コミフォーラ属の植 物、特にコミフォーラ・ムーカルから得られる少なくとも１つの抽出物の使用に 関する。 上記使用においては、上記植物コミフォーラ・ムーカルの各種抽出物、特に上 述したような、式Ｉ、II、IIａ若しくはIIｂで表される化合物、これらの混合物 、又は、これらの誘導体を多く含有する抽出物が用いられる。 第一の態様では、上記植物コミフォーラ・ムーカルの抽出物として、ガガルと 呼ばれるゴム状樹脂が用いられる。 第二の態様では、上記植物コミフォーラ・ムーカルの抽出物として、上記樹脂 の凝集体を粉砕した後、溶媒で抽出して得られる抽出物が用いられる。上述のよ うに、この目的には種々の溶媒が用いられる。 しかしながら、ブェロニカＲ．マイヤー、プラクティカル・ハイパフォーマン ス・リキッド・クロマトグラフィー、１９８８年、ジョン・ウィリー・アンド・ サンズ、１２１〜１２２頁（Ｖｅｒｏｎｉｋａ Ｒ．Ｍｅｙｅｒ，Ｐｒａｃｔｉ ｃａｌ Ｈｉｇｈ−ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏ ｇｒａｐｈｙ（１９８８），Ｊｏｈｎ Ｗｉ１ｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ｐｐ．１２０− １２１）等で公知のように極性により溶媒を分類すると、極性パラメーターｐ’ が５．５未満の溶媒を用いるのが好ましく、より好ましくは０．１〜４．５のも のである。 上記抽出物は、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、シクロヘキサン 、ｎ−デカン、ジクロロメタン、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、クロロ ホルム、エタノール、酢酸エチル、アセトン及びメタノールからなる群より選択 される有機溶媒又はそれらの混合物を用いて抽出することにより好適に得られる 。 第３の態様では、抽出物は、式Ｉ又はII、特に式IIａ又はIIｂで表される化合 物の少なくとも１つに関して、上述した抽出物を濃縮したものであってもよい。 図１の図式で明白に例示しているように、本発明の化合物の含有比が高い留分 は、例えば、抽出物Ｇを高速液体クロマトグラフィーや超臨界二酸化炭素抽出等 の一連の各種分離工程で処理することにより得られる。 本発明の特に好ましい態様によれば、上述したような皮膚の表面を改善するた めの化粧剤として、式Ｉ又はII、特に式IIａ又はIIｂで表される化合物の少なく とも１つが用いられる。 第４の本発明は、式Ｉ若しくはII、特に式IIａ若しくはIIｂで表される化合物 、又は、これらの化合物の少なくとも１つを含有する植物抽出物、特にコミフォ ーラ属の植物の抽出物、中でも植物コミフォーラ・ムーカルの抽出物の少なくと も１つを、好ましくは、特に化粧学的に許容される賦形剤又は担体と共に含有す ることを特徴とする特に化粧用に用いられる組成物に関する。 上記組成物は、式Ｉ若しくはII、特に式IIａ若しくはIIｂで表される化合物の 少なくとも１つを０．００１〜１重量％含有するのが好ましく、より好ましくは 、０．０１〜０．１重量％である。 また、上記組成物は、上記化合物の少なくとも１つを含有するコミフォーラ・ ムーカルの抽出物、特にこの植物の樹脂の抽出物を０．００５〜５重量％含有す るのが好ましく、より好ましくは、０．０５〜１重量％である。 本発明の化粧用組成物の形態としては特に限定されず、例えば、溶液状、乳液 状、ゲル状又はクリーム状のものでよい。 上記化粧用組成物の第一の態様によれば、上記化粧用組成物は、更に、フィブ ロネクチン合成及び／又はコラーゲン合成に対して活性を有する化合物を化粧学 的に有効な量で含有する。 フィブロネクチン合成に対して活性な化合物としては、例えば、ガラクトリピ ド、及び、ガラクトシルグリセリドが挙げられる。これの使用は、１９９５年２ 月１５日出願のフランス特許出願９５．０１７１４（未公開）に記載されている 。 コラーゲン合成に対して活性な化合物としては、ビタミンＣが例示される。 本発明は、更に、大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚のよ り滑らかな外観を得るための化粧処置方法であって、上記化合物又は上記化合物 を含有する植物抽出物を、好ましくは、化粧学的に許容される賦形剤に配合した 状態で、顔等の皮膚の処置すべき箇所に有効量塗布して、上記表面改善効果を得 ることを特徴とする化粧処置方法にも関する。 上記化粧処置方法の第一の態様によれば、上記植物抽出物は、植物コミフォー ラ・ムーカルの抽出物である。 この他の本発明の特質及び利点は、以下に実施例を掲げてより詳しく説明する が、これらは例示であって、本発明はこれら実施例にのみ限定されるものではな い。実施例 実施例１：本発明の抽出物Ｇの調製 コミフォーラ・ムーカルの樹脂の凝集体を粉砕した後、抽出して抽出物Ｇを得 る。 ４５℃の９５％エタノールを用いて、次に示す方法で抽出物Ｇを調製した。冷 却器と攪拌機を備えた５００ｍｌの丸底フラスコに、樹脂１０ｇとエタノール２ ００ｍｌを添加し、ホットプレートで加熱した。 攪拌と抽出は２時間しか行わなかったが、高い収率を得るには、４〜５時間か けるのが望ましい。 抽出の後、ろ過を行って、更に減圧下で濃縮した。 抽出物の収率は、約２５重量％であった。実施例２：抽出物Ｇからの留分ＦIIＢ１の調製 この実施例は、図１の図式に対応している。以下の表１では、使用するクロマ トグラフィーのカラムの性質、検出器の種類、及び、溶離液の性質に関して、手 順Ｂ、Ｃ、Ｄ並びにＥを詳細に記載した。 表１ コミフォーラ・ムーカル 実施例３：留分ＦIIＢ１からの化合物IIａ及びIIｂの単離 分取液体クロマトグラフィーを用いて２種類の化合物IIａ及びIIｂを分離し、 再生法による無勾配溶離液を用いたＣ１８カラムによって精製した。化合物IIａ 及びIIｂは、２１０ｎｍで検出・確認した。 質量分析法によって、式IIａ及びIIｂで表される２種類の化合物を完全に同定 した所、ＮＭＲで推定した実験式が証明された。 炭素ＮＭＲで得られた化合物IIａ及びIIｂの結果は、以下の表２及び３で示す 。表２ 化合物IIａの各炭素基の化学シフト 表３ 化合物IIｂの各炭素基の化学シフト 実施例４：超臨界二酸化炭素による抽出 以下の二工程に従って、２４０ｇの粉末状粗樹脂の抽出を行った。 ―工程１ この工程は、純粋な二酸化炭素を用いて、１５０ｂａｒ、４０℃で通常の装置 で行った。 二酸化炭素の消費量は、抽出する樹脂２４ｋｇに対して、２０００ｋｇであっ た。 抽出物の収率は、最初の樹脂の約１２．５０％であった。この抽出物は、廃棄 した。 ―工程２ この工程は、９８％二酸化炭素を９８重量％と、エタノール２重量％とを含有 する混合物を用いて、同じ装置により行った。 粗樹脂２４ｋｇに対して、１０００ｋｇの二酸化炭素を使用した（すなわち、 樹脂２４０ｇに対し二酸化炭素１８ｋｇ） 抽出収率は、最初の樹脂の約１０％であった。この抽出により、化合物IIａ及 びIIｂの濃縮されたいわゆるＳＦＥ（超臨界流体抽出物）を、粗樹脂に対する濃 縮係数が６〜８で得た。実施例５：本発明の抽出物及び化合物の活性に関する試験 １．培養 細胞として、３Ｔ３ Ｆ４４２Ａを用いた。この細胞は、グリーン，Ｈ．とケ ヒンド，Ｃ．，セル，１巻、１９７４年、１１３頁（Ｇｒｅｅｎ，Ｈ．＆Ｋｅｈ ｉｎｄｅ，Ｃ．， Ｃｅｌｌ １（１９７４）１１３）記載の方法によれば、培 養条件次第では脂肪細胞に変換する能力を有するものとして選択されたマウス前 脂肪細胞の細胞株である。 この細胞株は、生体外における脂肪細胞の分化を研究するためのモデルとして 実際に用いられている。 増殖過程において単分子層のとき、３Ｔ３ Ｆ４４２Ａは、繊維芽細胞の形態 及び酵素特質を有する。 最初に集密しているこの細胞は、分裂を終えると、初期の分化過程に移行する 。この分化により、脂肪細胞へ変換した細胞のコロニーが形成される。 この分化とともに、数種の蛋白質を生合成するように変化して、種々の酵素活 性（アセチルＣｏＡカルボキシラーゼ、ＡＴＰ―クエン酸―リアーゼ、脂肪酸合 成酵素、ホスホエノールピルビン酸キナーゼ、及び、グリセロ―３―リン酸デヒ ドロゲナーゼ（Ｇ₃ＰＤＨ））が増加する。 この実施例における目的は、グリセロ―３―リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ₃Ｐ ＤＨ）とサイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）という２つの分化標識化合物の発現を 測定することにある。 公知のように、酵素Ｇ₃ＰＤＨは、繊維芽細胞においてグリセロール―３―リ ン酸を形成させるが、このグリセロール―３―リン酸は細胞内脂質（トリグリセ リド）の合成に関与する。従って、Ｇ₃ＰＤＨの活性が上昇すると、グリセロー ル―３―リン酸が合成されることになる。 更に、細胞内の脂肪分解反応では、細胞内メディエーターであるｃＡＭＰの量 が増加することが知られている。細胞内で形成されたｃＡＭＰは、次に細胞外媒 体へと分泌される。従って、培養培地におけるｃＡＭＰの含有量の減少は、トリ グリセリドの分解が減少すること、すなわち、この脂質が細胞内で蓄積されてい ることを意味する。 上記２種類の分化標識化合物を用いて、コミフォーラ・ムーカルの樹脂（抽出 物Ｇ）、留分ＦIIＢ１、並びに、化合物IIａ及びIIｂを調査した。 子ウシ血清（ＣＳ）５％とウシ胎児血清（ＦＣＳ）５％とを添加したダルベッ コ修正イーグル培地（ＤＭＥＭ）で、径３５ｍｍのペトリ皿にて上記繊維芽細胞 を培養した。各実験は、３つの試料で行った。 処理中の培地は、ＤＭＥＭにウシ胎児血清１０％を添加したものであった。 本発明の化合物又は抽出物をエタノールに溶解させて、最終濃度が５μｇ／ｍ ｌになるように培地に添加した。 培養操作は、以下のようにして行った。 Ｄ＋０日：ＤＭＥＭ＋５％ＣＳ、５％ＦＣＳに接種 Ｄ＋２日：培地の取り替え Ｄ＋５日：ＤＭＥＭ、１０％ＦＣＳにて、５μｇ／ｍｌのコミフォーラ・ムー カルの樹脂（抽出物Ｇ）、ＦIIＢＩ、IIａ、又は、IIｂの処理 Ｄ＋６日：培養媒体におけるｃＡＭＰの定量 Ｄ＋７及びＤ＋９日：Ｄ＋５に行ったものと同等の処理 Ｄ＋１２日：細胞をすりつぶして、Ｇ₃ＰＤＨの定量 ２．サイクリックアデノシン３，５−モノリン酸（ｃＡＭＰ）の定量 ｃＡＭＰの定量は、抗原抗体競合の原理に基づいて、放射線免疫検定ＲＩＡ （フランスのイムノテク（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ）社製の装置、１１１７参照） により行った。前もって抗ｃＡＭＰ抗体を固定化した試験管に、ヨウ素１２５で 放射能標識したｃＡＭＰを添加して試料と標準試料を培養した。 培養後、試験管の内容物を吸い上げ、ガンマ計測器で残留放射能を計測した。 ｃＡＭＰの既知の６つの濃度を利用して標準曲線を用意し、この検定曲線により 試料における濃度を決定した。 細胞がｃＡＭＰを産出して分泌するので、培養培地に含まれるｃＡＭＰを測定 することになる。より正確にいうと、２４時間以内に培養培地で分泌されたｃＡ ＭＰの量を測定することになる。 ３．グリセロ―３―リン酸デヒドロゲナーゼ（Ｇ₃ＰＤＨ）の活性の測定 細胞をすりつぶして、４℃のＴＲＩＳ−ＨＣｌ緩衝溶液（２５ｍＭ，ｐＨ７． ４）と１ｍＭのＥＤＴＡ中で激しく均一化して、細胞の単分子層を回収した。す りつぶした細胞を遠心分離にかけ、その直後の上澄み液でＧ₃ＰＤＨの活性を測 定した。 Ｇ₃ＰＤＨは、以下の反応を触媒する。 時間を関数とする、捕酵素ＮＡＤＨ（水素化ニコチンアミドアデニンジヌクレ オチド）のＮＡＤへの変換率は、上記酵素反応の速度、従って酵素Ｇ₃ＰＤＨの 活性度を表し、３４０ｎｍの分光測光法により測定した。 上記酵素反応の初期速度に相当する吸収差異（（ΔＡｂｓ）／分）の計算も可 能である。 この結果は、活性比、すなわち、変換されたＮＡＤＨのｎｍｏｌ／分／細胞蛋 白質ｍｇ（細胞蛋白質の全量は、ＢＣＡ―ＰＩＥＲＣＥ法：蛋白質定量試薬を用 いて測定した）で表示した。 ４．１．Ｇ₃ＰＤＨ活性 酵素Ｇ。ＰＤＨの活性を評価した実験結果を以下の表４に示す。 この酵素の活性促進に関する本発明の化合物の活性度Ａ₁は、次式に従って算 出した。式中、Ｖ_pは、本発明の化合物で処理した培養におけるＮＡＤＨの変換率（ｎｍ ｏｌ／分／細胞蛋白質ｍｇで表示）を３つの実験に関して平均した値であり、Ｖ_t は、コントロールの培養における上記変換率の平均値である。 表４から明らかなように、本発明の抽出物Ｇ、留分ＦIIＢ１並びに化合物IIａ 及びIIｂはいずれも、繊維芽細胞培養における酵素Ｇ₃ＰＤＨの活性度を、コン トロール培養におけるこの酵素の活性度と比較すると極めて大きく増加させる。 実際、この酵素の活性度は、抽出物Ｇの作用により３倍に増加し、化合物IIｂの 作用により７倍に増加している。従って、本発明の抽出物又は化合物が、細胞内 トリグリセリド合成の増加に実質的に寄与していることが明らかとなった。 ４．２．ｃＡＭＰの定量 調製された各種培養の培地で２４時間以内に分泌されたｃＡＭＰの量を表５に 示す。ここでは、ｎｍｏｌ／培地のリットルで表示した。細胞によるｃＡＭＰの 分泌に対する本発明の抽出物の活性度Ａ₂は、細胞内の脂肪分解反応に直接関与 するもので、次式により算出した。 式中、ｑ_pは、本発明の抽出物で処理した培養培地に分泌されたｃＡＭＰの量を ３つの実験に関して平均した値を、ｎｍｏｌ／１／２４時間で表示したものであ り、 ｑ_tは、コントロール培養における平均量である。 表５の結果より、培養培地に分泌されたｃＡＭＰの量は、コントロール培養の 場合よりも、本発明の抽出物で処理した培養の場合のほうが少ないことが分かる 。 従って、処理された培養の細胞では、コントロール培養の細胞の場合よりも、 脂肪分解が著しく減少することが明らかである。 以上の実験より、本発明の化合物は、酵素Ｇ₃ＰＤＨの活性の増加により証明 された脂質合成の促進、及び、処理培養におけるｃＡＭＰ含量の減少により証明 された脂質分解の制限という２つの相補的な事実により、細胞内脂質の量を増加 させる作用を有することが実証された。 更に、２つの化合物IIａ及びIIｂを使用した場合に最良の結果が得られ、これ らの化合物が、本発明の抽出物及び留分が有する脂肪形成活性の因子であるよう に考えられる。 従って、本発明の化合物は、繊維芽細胞における脂肪細胞の分化を促進する。 また、この細胞は、脂質が蓄積するために容積が増加し、細胞外タンパク質ネッ トワークとより接触しやすくなるため、この結果、真皮が強固になる。このよう に真皮に張りが生じると、大小のしわの深さが減少して、皮膚表面がよりなめら かな外観を得る。実施例６：しわ防止クリーム 以下の調製手順に従って、目的組成物に対する重量％で表示した以下の構成成 分を混合し、しわ防止クリームを調製した。 以下の成分から混合物Ａを調製した： 以下の成分からなる混合物Ｂを添加した。 グリセロール ５．００ 水 ５８．５３ カルボポール（Ｃａｒｂｏｐｏｌ）９４０ ０．２０ 次いで、下記のようなＣ、Ｄ及びＥを添加した。 Ｃ：１０％水酸化ナトリウム溶液 ０．０７ Ｄ：コムギタンパク質 ５．００ Ｅ：香料 ０．３０実施例７：しわ防止活性を有するゲル状アイライナー 以下の成分Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥを混合して組成物を調製した。以下の構成要 素は、目的組成物に対する重量％で表示した。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年７月２５日（１９９７．７．２５） 【補正内容】 請求の範囲 １． 式（Ｉ）で表される化合物： 式中、Ｒは、 ａ）ＣＨ₂ＯＨ、又は、 ｂ）ＣＯＯＨ 及びこれらの塩若しくはエステルである。 ２． 式（II）で表される請求項１記載の化合物： 式中、Ｒは、 ａ）ＣＨ₂ＯＨ、この場合、式IIａで表される化合物に相当する、 ｂ）ＣＯＯＨ、この場合、式IIｂで表される化合物に相当する、 ｃ） 式中、Ｒ₁は、炭素数が１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基、特にメチル基 を表す、 ６． 抽出時に用いる溶媒は、極性パラメーターｐ’が５．５未満、好ましくは ０．１〜５を示すものである請求項５記載の製造方法。 ７． 抽出時に用いる溶媒は、ｎ―ペンタン、ｎ―ヘキサン、石油エーテル、シ クロヘキサン、ｎ―デカン、ジクロロメタン、イソプロパノール、ｎ―プロパノ ール、クロロホルム、エタノール、酢酸エチル、アセトン及びメタノールからな る群より選択されるものである請求項６記載の製造方法。 ８． 大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚によりなめらかな 外観を与えるための化粧剤としての、コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ ・ムーカルから得られる少なくとも１つの抽出物の使用。 ９． 抽出物は、ガガル（ｇｕｇｇｕｌ）とも呼ばれる植物コミフォーラ・ムー カルの樹脂の抽出物である請求項８記載の使用。 １０． 抽出物は、樹脂の凝集体を粉砕した後、極性ｐ’が５．５未満、好まし くは０．１〜５を示す溶媒で抽出することにより得られるものである請求項８又 は９記載の使用。 １１． 抽出時に用いる溶媒は、ｎ―ペンタン、ｎ―ヘキサン、石油エーテル、 シクロヘキサン、ｎ―デカン、ジクロロメタン、イソプロパノール、ｎ―プロパ ノール、クロロホルム、エタノール、酢酸エチル、アセトン及びメタノールから なる群より選択されるものである請求項１０記載の使用。 １２． 抽出物は、コミフォーラを超臨界状態にある二酸化炭素を用いて抽出す ることにより得られるものである請求項８又は９記載の使用。 １３． 抽出物は、分留の結果、特に、請求項１０又は１１において記載されて いる抽出物の高速液体クロマトグラフィーによる分留の結果、請求項１、２、３ 又は４記載の化合物が濃縮されたものである請求項８、９、１０、１１又は１２ 記載の使用。 １４． 大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚によりなめらか な外観を与えるための化粧剤としての、請求項１、２、３又は４記載の少なくと も１つの化合物の使用。 １５． 請求項１、２、３若しくは４記載の化合物、又は、これらの化合物の１ つを含有する植物抽出物、特にコミフォーラ属の植物の抽出物、中でも植物コミ フォーラ・ムーカルの抽出物を、化粧学的に許容される賦形剤又は担体と共に含 有することを特徴とする化粧用組成物。 １６． 請求項１、２、３又は４記載の化合物の少なくとも１つを０．００５〜 ５重量％、好ましくは０．０１−０．１重量％含有する請求項１５記載の組成物 。 １７． 請求項１、２、３又は４記載の化合物の少なくとも１つを含有するコミ フォーラ・ムーカルの抽出物を０．００５〜５重量％、好ましくは０．０５〜１ 重量％含有する請求項１５又は１６記載の組成物。 １８． コミフォーラ・ムーカルの抽出物は、この植物の樹脂の抽出物である請 求項１７記載の組成物。 １９． ガラクトリピド及びガラクトシルグリセリド等の、フィブロネクチン合 成に対して活性な化合物を更に含有する請求項１５、１６、１７又は１８記載の 組成物。 ２０． ビタミンＣ等の、コラーゲン合成に対して活性な化合物を更に含有する 請求項１５、１６、１７、１８又は１９記載の組成物。 ２１． 大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚のより滑らかな 外観を得るための化粧処置方法であって、請求項１、２、３若しくは４記載の化 合物又は前記化合物を含有する植物抽出物を、好ましくは、化粧学的に許容され る賦形剤に配合した状態で、顔等の皮膚の処置すべき箇所に有効量塗布して、上 記表面改善効果を得ることを特徴とする化粧処置方法。 １ ２２． 植物抽出物は、請求項８、９、１０、１１、１２又は１３記載の植物コ ミフォーラ・ムーカルの抽出物である請求項２１記載の化粧処置方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 式（Ｉ）で表される化合物： 式中、Ｒは、 ａ）ＣＨ₂ＯＨ、又は、 ｂ）ＣＯＯＨ 及びこれらの塩若しくはエステルである。 ２． 式(II)で表される化合物： 式中、Ｒは、 ａ）ＣＨ₂ＯＨ、この場合、式IIａで表される化合物に相当する、 ｂ）ＣＯＯＨ、この場合、式IIｂで表される化合物に相当する、 ｃ） 式中、Ｒ₁は、炭素数が１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基、特にメチル基 を表す、 ｄ）ＣＯＯＭ、式中、Ｍは、アルカリ金属、好ましくはナトリウム若しくはカリ ウム、又は、四級アンモニウム若しくはアミン基を表す、 ｅ）ＣＯＯＭ’_0.5、式中、Ｍ’は、アルカリ土類金属、好ましくはカルシウム を表す、又は、 ｆ）ＣＯＯＲ₂、式中、Ｒ₂は、炭素数が１〜６の直鎖状又は分枝状のアルキル基 を表す。 ３． 式（IIａ）で表される請求項２記載の化合物： ４． 式（IIｂ）で表される請求項２記載の化合物： ５． コミフォーラ・ムーカル（Ｃｏｍｍｉｐｈｏｒａ ｍｕｋｎｌ）の樹脂を 有機溶媒による抽出工程で処理し抽出物Ｇという抽出物を得て、前記抽出物Ｇを 少なくとも１段階の分留工程で処理し式IIａの化合物及び／又は式IIｂの化合物 を主要成分とする留分を単離して、所望により、化合物IIａのアシル化又は化合 物IIｂの塩化若しくはエステル化を行うことからなることを特徴とする請求項１ 、２、３又は４記載の化合物の製造方法。 ６． 抽出時に用いる溶媒は、極性パラメーターｐ’が５．５未満、好ましくは ０．１〜５を示すものである請求項５記載の製造方法。 ７． 抽出時に用いる溶媒は、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、シ クロヘキサン、ｎ−デカン、ジクロロメタン、イソプロパノール、ｎ−プロパノ ール、クロロホルム、エタノール、酢酸エチル、アセトン及びメタノールからな る群より選択されるものである請求項６記載の製造方法。 ８． 大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚によりなめらかな 外観を与えるための化粧剤としての、コミフォーラ属の植物、特にコミフォーラ ・ムーカルから得られる少なくとも１つの抽出物の使用。 ９． 抽出物は、ガガル（ｇｕｇｇｕｌ）とも呼ばれる植物コミフォーラ・ムー カルの樹脂の抽出物である請求項８記載の使用。 １０． 抽出物は、樹脂の凝集体を粉砕した後、極性ｐ’が５．５未満、好まし くは０．１〜５を示す溶媒で抽出することにより得られるものである請求項８又 は９記載の使用。 １１． 抽出時に用いる溶媒は、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、 シクロヘキサン、ｎ−デカン、ジクロロメタン、イソプロパノール、ｎ−プロパ ノール、クロロホルム、エタノール、酢酸エチル、アセトン及びメタノールから なる群より選択されるものである請求項１０記載の使用。 １２． 抽出物は、コミフォーラを超臨界状態にある二酸化炭素を用いて抽出す ることにより得られるものである請求項８又は９記載の使用。 １３． 抽出物は、分留の結果、特に、請求項１０又は１１において記載されて いる抽出物の高速液体クロマトグラフィーによる分留の結果、請求項１、２、３ 又は４記載の化合物が濃縮されたものである請求項８、９、１０、１１又は１２ 記載の使用。 １４． 大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚によりなめらか な外観を与えるための化粧剤としての、請求項ｌ、２、３又は４記載の少なくと も１つの化合物の使用。 １５． 請求項１、２、３若しくは４記載の化合物、又は、これらの化合物の１ つを含有する植物抽出物、特にコミフォーラ属の植物の抽出物、中でも植物コミ フォーラ・ムーカルの抽出物を、好ましくは、特に化粧学的に許容される賦形剤 又は担体と共に含有することを特徴とする特に化粧用に用いられる組成物。 １６． 請求項１、２、３又は４記載の化合物の少なくとも１つを０．００５〜 ５重量％、好ましくは０．０１〜０．１重量％含有する請求項１５記載の組成物 。 １７． 請求項１、２、３又は４記載の化合物の少なくとも１つを含有するコミ フォーラ・ムーカルの抽出物を０．００５〜５重量％、好ましくは０．０５〜１ 重量％含有する請求項１５又は１６記載の組成物。 １８． コミフォーラ・ムーカルの抽出物は、この植物の樹脂の抽出物である請 求項１７記載の組成物。 １９． ガラクトリピド及びガラクトシルグリセリド等の、フィブロネクチン合 成に対して活性な化合物を更に含有する請求項１５、１６、１７又は１８記載の 組成物。 ２０． ビタミンＣ等の、コラーゲン合成に対して活性な化合物を更に含有する 請求項１５、１６、１７、１８又は１９記載の組成物。 ２１． 大小のしわの深さを軽減して皮膚の表面を改善し、皮膚のより滑らかな 外観を得るための化粧処置方法であって、請求項１、２、３若しくは４記載の化 合物又は前記化合物を含有する植物抽出物を、好ましくは、化粧学的に許容され る賦形剤に配合した状態で、顔等の皮膚の処置すべき箇所に有効量塗布して、上 記表面改善効果を得ることを特徴とする化粧処置方法。 ２２． 植物抽出物は、請求項８、９、１０、１１、１２又は１３記載の植物コ ミフォーラ・ムーカルの抽出物である請求項２１記載の化粧処置方法。