JP2000501620A - areA,pepC及び/又はpepE遺伝子が不活性化されている菌類 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.areA遺伝子が、機能的AreA活性化因子を供給するような態様で発現され得 ないように、組換えDNA 技法により修飾されており、そして細胞外プロテアーゼ PecC及び/又はPepEをコードする遺伝子が、機能的プロテアーゼを生成するため に発現され得ない態様で不活性化されている菌類。 2.前記不活性化が、areA,pepC及び/又はpepE遺伝子のすべて又は一部の欠 失により得られている請求の範囲第1項記載の菌類。 3.前記不活性化が、areA及びpepE遺伝子のすべて又は一部の欠失により得ら れている請求の範囲第1項記載の菌類。 4.前記不活性化が、areA,pepC及び/又はpepE遺伝子自体の発現を調節する 発現シグナルの調節を妨げることによって得られている請求の範囲第1項記載の 菌類。 5.前記不活性化が、areA及びpepE遺伝子自体の発現を調節する発現シグナル の調節を妨げることによって得られている請求の範囲第1項記載の菌類。 6.前記不活性化が、アンチセンス技法を用いることによって得られている請 求の範囲第1項記載の菌類。 7.前記不活性化が、areA,pepC及び/又はpepE遺伝子の内部に余分のDNA を 挿入することによって得られている請求の範囲第1項記載の菌類。 8.糸状菌であり、好ましくはアスペルギラス、トリコダーマ、ヒュミコラ、 カンジダ、アクレモニウム、フサリウム及びペニシリウムから成る群から選択さ れた属に属する請求の範囲第1〜7のいづれか1項記載の菌類。 9.A.オリザエ、A.ニガー、A.アワモリ、A.ホエニシス 、A.ジャポニカス、A.ホエチダス、A.ニジュランス、T.リーセイ、T. ハルジアナム、H.インソレンス、H.ラヌギノサ、F.グラミネアラム、F. ソラニ、P.クリソゲナム及び他のものから成る群から選択された種に属する請 求の範囲第8項記載の菌類。 10.不活性化がareA,pepC及び/又はpepE遺伝子の欠失により得られている、 請求の範囲第1項記載の菌類を生成するための方法であって、 i)注目の菌類からのareA,pepC及び/又はpepE遺伝子をクローニングし、 ii)内部部分が置換され、欠失され、又は余分なDNA が挿入されている、areA 遺伝子、pepC遺伝子、及び/又はpepE遺伝子の1つをそれぞれが含んで成るDNA 構造体を生成し、 iii)前記構造体により前記菌類を形質転換し、そして iv)areA-,pepC-、及び/又はpepE-である形質転換体を単離することを含ん で成る方法。 11.不活性化がareA及びpepE遺伝子の欠失により得られている、請求の範囲第 1項記載の菌類を生成するための方法であって、 i)注目の菌類からのareA及びpepE遺伝子をクローニングし、 ii)内部部分が置換され、欠失され、又は余分なDNA が挿入されている、areA 及びpepE遺伝子の1つをそれぞれが含んで成るDNA 構造体を生成し、 iii)前記構造体により前記菌類を形質転換し、そして iv)areA-及びpepE-である形質転換体を単離することを含んで成る方法。 12.不活性化がareA、及びpepC遺伝子の欠失により得られている、請求の範囲 第1項記載の菌類を生成するための方法であって、 i)注目の菌類からのareA、及びpepC遺伝子をクローニングし、 ii)内部部分が置換され、欠失され、又は余分なDNA が挿入されている、areA 遺伝子、及びpepC遺伝子の1つをそれぞれが含んで成るDNA 構造体を生成し、 iii)前記構造体により前記菌類を形質転換し、そして iv)areA-及びpepC-である形質転換体を単離することを含んで成る方法。 13.不活性化がpepC及びpepE遺伝子の欠失により得られている、請求の範囲第 1項記載の菌類を生成するための方法であって、 i)興味ある菌類からのpepC及びpepE遺伝子をクローニングし、 ii)内部部分が置換され、欠失され、又は余分なDNA が挿入されている、pepC 及びpepE遺伝子間の1つをそれぞれが含んで成るDNA構造体を生成し、 iii)前記構造体により前記菌類を形質転換し、そして iv)pepC-及びpepE-である形質転換体を単離することを含んで成る方法。 14.不活性化がアンチセンス技法を用いることによって得られている、請求の 範囲第1項記載の菌類を生成するための方法であって、 i)areA遺伝子、pepC遺伝子及び/又はpepE遺伝子から転写されるmRNAに対し て相補的なRNA 分子の合成を生ぜしめる個々の発現プラスミドの構成、 ii)前記発現プラスミド、及び別のプラスミド又は前記同じプラスミドのいづ れか上の適切なマーカーによる宿主菌類の形質転換、 iii)前記マーカーを用いての形質転換体の選択、及び iv)AreA,PepC及び/又はPepE生成物の合成の低下を示す株についての選択さ れた形質転換体のスクリーニングを含んで成る方法。 15.不活性化がアンチセンス技法を用いることによって得られている、請求の 範囲第1項記載の菌類を生成するための方法であって、 i)areA遺伝子、及びpepE遺伝子から転写されるmRNAに対して相補的なRNA 分 子の合成を生ぜしめる個々の発現プラスミドの構成、 ii)前記発現プラスミド、及び別のプラスミド又は前記同じプラスミドのいづ れか上の適切なマーカーによる宿主菌類の形質転換、 iii)前記マーカーを用いての形質転換体の選択、及び iv)AreA,PepC及びPepE生成物の合成の低下を示す株についての選択された形 質転換体のスクリーニングを含んで成る方法。 16.請求の範囲第1〜9のいづれか1項記載の菌類が適切な条件下で適切な増 殖培地において培養され、そして所望の遺伝子生成物が回収され、そして精製さ れる、所望の遺伝子生成物の製造方法。 17.所望の遺伝子生成物をコードするDNA 配列を菌類のゲノム中に機能的な態 様で組込むために形質転換されている請求の範囲第1〜9のいづれか1項記載の 菌類が、適切な条件下で適切な増殖培地において培養され、そして所望の遺伝子 生成物が回収され、そして精製される、所望する遺伝子生成物の生成方法。 18.所望のポリペプチドを製造するための方法であって、菌類を適切な増殖培 地において培養し、そして前記培養物から前記ポリペプチドを回収することを含 んで成り、ここで前記菌類が前記ポリペプチド又はその前駆体の発現を前記菌類 において引き起こすことができる組換えDNA 構造体を担持し、そしてさらに、前 記菌類の野生型よりも低い量の機能的AreA,PepC及び/又はPepEを生成すること によって特徴づけられている方法。 19.前記菌類が、前記菌類のゲノム中に組込まれる場合、機能的AreA,PepC及 び/又はPepEの低められた生成を引き起こすことがで きるDNA 構造体により前記菌類の親を形質転換することを含んで成る方法により 、野生型量よりも低い量のAreA,PepC及び/又はPepEを生成するよう修飾されて いる請求の範囲第18項記載の方法。 20.前記ポリペプチドが、前記菌類により細胞外培地に分泌される請求の範囲 第18項記載の方法。 21.前記菌類が、類似する菌類よりも高い量の前記ポリペプチドを生成し、こ こで前記類似する菌類は前記菌類の野生型により生成される量に類似する量でAr eA,PepC及び/又はPepEを生成し、そして前記類似する菌類が他のすべての点に おいて前記菌類と同一である請求の範囲第18項記載の方法。 22.前記遺伝子生成物が分泌されるタンパク質である請求の範囲第14又は15〜 21のいづれか1項記載の方法。 23.前記所望する遺伝子生成物が産業用ペプチド又はタンパク質、好ましくは 酵素である請求の範囲第14〜20のいづれか1項記載の方法。 24.前記酵素が、プロテアーゼ、リパーゼ、クチナーゼ、セルラーゼ、キモシ ンから成る群から選択される請求の範囲第23項記載の方法。 25.前記所望する遺伝子生成物が、治療的活性ペプチド又はタンパク質である 請求の範囲第15〜22のいづれか1項記載の方法。 26.前記治療的活性ペプチド又はタンパク質が、インスリン、成長ホルモン、 グルカゴン、ソマトスタチン、インターフェロン、PDGF、第VII因子、第VIII因 子、ウロキナーゼ、tPA、EPO 又はTPO から成る群から選択される請求の範囲第2 5項記載の方法。 27.請求の範囲第15〜26のいづれか1項記載の方法に従って生成される遺伝子 生成物。 28.A.オリザエからのpepC遺伝子(配列番号1)又はその機能 的対立遺伝子をコードするDNA 配列。 29.A.オリザエからのPepCプロテアーゼ(配列番号2)。 30.請求の範囲第29項記載のPepCプロテアーゼの製造方法であって、請求の範 囲第28項記載のDNA 配列を含んで成るDNA 構造体により適切な宿主を形質転換し 、前記PepCプロテアーゼを生成することができる形質転換体を選択し、前記形質 転換体を適切な培地において培養し、そして前記培養物から前記PepCプロテアー ゼを回収することを含んで成る方法。 31.A.オリザエからのpepE遺伝子(配列番号3)又はその機能的対立遺伝子 をコードするDNA 配列。 32.A.オリザエからのPepEプロテアーゼ(配列番号4)。 33.請求の範囲第32項記載のPepEプロテアーゼの製造方法であって、請求の範 囲第31項記載のDNA 配列を含んで成るDNA 構造体により適切な宿主を形質転換し 、前記PepEプロテアーゼを生成することができる形質転換体を選択し、前記形質 転換体を適切な培地において培養し、そして前記培養物から前記PepEプロテアー ゼを回収することを含んで成る方法。 34.前記宿主が、請求の範囲第1〜9のいづれか1項記載の菌類である請求の 範囲第30又は33項記載の方法。 35.前記宿主がA.オリザエであり、そして請求の範囲第28又は31項記載のDN A 配列を含んで成る前記DNA 構造体が前記PepC又はPepEプロテアーゼをコードす る遺伝子の余分なコピーを供給する請求の範囲第30,33又は34項記載の方法。
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A02 | Decision of refusal |
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