JP2000270887A - Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 - Google Patents
Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法Info
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- JP2000270887A JP2000270887A JP8094899A JP8094899A JP2000270887A JP 2000270887 A JP2000270887 A JP 2000270887A JP 8094899 A JP8094899 A JP 8094899A JP 8094899 A JP8094899 A JP 8094899A JP 2000270887 A JP2000270887 A JP 2000270887A
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- naphthyl
- alanine
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- methylhydantoin
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 非天然型アミノ酸であるＤ−３−（２−ナフ
チル）アラニンを効率よく製造する方法の提供。 【解決手段】 ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダ
ントインに、Ｄ−５−（２−ナフチル）メチルヒダント
インからＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを生成する
能力を有する微生物の菌体及び／またはその処理物を水
性媒体中で作用させ、該水性媒体中にＤ−３−（２−ナ
フチル）アラニンを生成蓄積せしめ、該水性媒体中から
Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンを採取することを特
徴とするＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方
法。
チル）アラニンを効率よく製造する方法の提供。 【解決手段】 ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダ
ントインに、Ｄ−５−（２−ナフチル）メチルヒダント
インからＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを生成する
能力を有する微生物の菌体及び／またはその処理物を水
性媒体中で作用させ、該水性媒体中にＤ−３−（２−ナ
フチル）アラニンを生成蓄積せしめ、該水性媒体中から
Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンを採取することを特
徴とするＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬・農薬等の合
成中間体として有用なＤ−３−（２−ナフチル）アラニ
ンの生物化学的製造方法に関する。
成中間体として有用なＤ−３−（２−ナフチル）アラニ
ンの生物化学的製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】天然に
存在する光学活性アミノ酸の多くは、微生物を用いた発
酵法や天然物からの抽出法により製造されている。しか
しながらＤ−３−（２−ナフチル）アラニンは非天然型
アミノ酸であるため、従来のような発酵法や抽出法によ
っては工業的に製造されてはいなかった。一般に光学活
性アミノ酸を製造する方法としては、有機化学的合成法
により製造したＤＬ−アミノ酸を光学分割する方法がよ
く知られている（Ｂｕｌｌ．Ａｇｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．Ｊａｐ．，２１，３０４（１９５７）；Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７６，６０４５（１９５４）；
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１８８，６５７（１９５
１））。しかしながら、ＤＬ−アミノ酸の光学分割は操
作が煩雑であり、収率も低くなるという欠点を有してい
る。
存在する光学活性アミノ酸の多くは、微生物を用いた発
酵法や天然物からの抽出法により製造されている。しか
しながらＤ−３−（２−ナフチル）アラニンは非天然型
アミノ酸であるため、従来のような発酵法や抽出法によ
っては工業的に製造されてはいなかった。一般に光学活
性アミノ酸を製造する方法としては、有機化学的合成法
により製造したＤＬ−アミノ酸を光学分割する方法がよ
く知られている（Ｂｕｌｌ．Ａｇｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．Ｊａｐ．，２１，３０４（１９５７）；Ｊ．Ａｍ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，７６，６０４５（１９５４）；
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１８８，６５７（１９５
１））。しかしながら、ＤＬ−アミノ酸の光学分割は操
作が煩雑であり、収率も低くなるという欠点を有してい
る。
【０００３】また、Ｄ−アミノ酸を製造する方法とし
て、ＤＬ体の５−置換ヒダントイン類にヒダントイン環
を不斉的に開裂加水分解する能力を有する、シュードモ
ナス属等の微生物の菌体、固定化菌体又は菌体破砕物を
作用させることによりＤ−アミノ酸を取得する方法が知
られているが、主に天然型のＤ型アミノ酸に関してのみ
であった（特開昭５４−８９０８８号公報；同５５−１
１５６９号公報；同５５−１５３５９５号公報等）。従
って、非天然型のＤ型アミノ酸、具体的には、Ｄ−３−
（２−ナフチル）アラニンの高収率な製造方法の確立が
期待されていた。
て、ＤＬ体の５−置換ヒダントイン類にヒダントイン環
を不斉的に開裂加水分解する能力を有する、シュードモ
ナス属等の微生物の菌体、固定化菌体又は菌体破砕物を
作用させることによりＤ−アミノ酸を取得する方法が知
られているが、主に天然型のＤ型アミノ酸に関してのみ
であった（特開昭５４−８９０８８号公報；同５５−１
１５６９号公報；同５５−１５３５９５号公報等）。従
って、非天然型のＤ型アミノ酸、具体的には、Ｄ−３−
（２−ナフチル）アラニンの高収率な製造方法の確立が
期待されていた。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らはＤ−３−
（２−ナフチル）アラニンの工業的製法につき鋭意検討
した結果、原料としてのＤＬ−５−（２−ナフチル）メ
チルヒダントインにある種の微生物の菌体及び／または
その処理物を作用させれば、該原料が生物化学的に加水
分解し、目的とするＤ−３−（２−ナフチル）アラニン
が高効率に製造出来ることを初めて見い出し、本発明を
完成するに至った。
（２−ナフチル）アラニンの工業的製法につき鋭意検討
した結果、原料としてのＤＬ−５−（２−ナフチル）メ
チルヒダントインにある種の微生物の菌体及び／または
その処理物を作用させれば、該原料が生物化学的に加水
分解し、目的とするＤ−３−（２−ナフチル）アラニン
が高効率に製造出来ることを初めて見い出し、本発明を
完成するに至った。
【０００５】即ち本発明は、ＤＬ−５−（２−ナフチ
ル）メチルヒダントインに、Ｄ−５−（２−ナフチル）
メチルヒダントインからＤ−３−（２−ナフチル）アラ
ニンを生成する能力を有する微生物の菌体及び／または
その処理物を水性媒体中で作用させ、該水性媒体中にＤ
−３−（２−ナフチル）アラニンを生成蓄積せしめ、該
水性媒体中からＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを採
取することを特徴とするＤ−３−（２−ナフチル）アラ
ニンの製造方法を提供するものである。
ル）メチルヒダントインに、Ｄ−５−（２−ナフチル）
メチルヒダントインからＤ−３−（２−ナフチル）アラ
ニンを生成する能力を有する微生物の菌体及び／または
その処理物を水性媒体中で作用させ、該水性媒体中にＤ
−３−（２−ナフチル）アラニンを生成蓄積せしめ、該
水性媒体中からＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを採
取することを特徴とするＤ−３−（２−ナフチル）アラ
ニンの製造方法を提供するものである。
【０００６】本発明において原料として用いられる５−
（２−ナフチル）メチルヒダントインは、ＤＬ体はもち
ろんＤ体もまた利用できるが、化学合成で安価に製造さ
れるＤＬ体が好適に用いられる。又、Ｌ体の５−（２−
ナフチル）メチルヒダントインは、酵素的に又は／およ
び化学的に容易にラセミ化されＤＬ体に変換される為、
ラセミ化反応を共存させることでＬ体もまた原料として
利用することが出来る。
（２−ナフチル）メチルヒダントインは、ＤＬ体はもち
ろんＤ体もまた利用できるが、化学合成で安価に製造さ
れるＤＬ体が好適に用いられる。又、Ｌ体の５−（２−
ナフチル）メチルヒダントインは、酵素的に又は／およ
び化学的に容易にラセミ化されＤＬ体に変換される為、
ラセミ化反応を共存させることでＬ体もまた原料として
利用することが出来る。
【０００７】本発明で使用される微生物は、Ｄ−５−
（２−ナフチル）メチルヒダントインを選択的に開裂加
水分解してＤ−３−（２−ナフチル）アラニンに変換す
る能力を有するものであれば特に限定はされない。かか
る微生物としては、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ）属、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、フラボ
バクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属及び
／またはパラコッカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属から
なる群より選ばれる微生物等が挙げられる。
（２−ナフチル）メチルヒダントインを選択的に開裂加
水分解してＤ−３−（２−ナフチル）アラニンに変換す
る能力を有するものであれば特に限定はされない。かか
る微生物としては、アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ）属、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、フラボ
バクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属及び
／またはパラコッカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属から
なる群より選ばれる微生物等が挙げられる。
【０００８】アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属する微生物としては例えばアグロバク
テリウム ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）等が挙げられ、具体的には
ＮＲＲＬ Ｂ１１２９１（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに保存）やＭＣＩ３６６２等が挙
げられる。
ｒｉｕｍ）属に属する微生物としては例えばアグロバク
テリウム ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）等が挙げられ、具体的には
ＮＲＲＬ Ｂ１１２９１（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ
Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎに保存）やＭＣＩ３６６２等が挙
げられる。
【０００９】アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅ
ｓ）属に属する微生物としては例えばアルカリゲネス
アクアマリヌス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ａｑｕａｍ
ａｒｉｎｕｓ）等が挙げられ、具体的にはＦＥＲＭ Ｐ
−４２２９（工業技術院生命工学工業技術研究所に保
存）等が挙げられる。アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物としては例えばアルス
ロバクター クリスタロポイエテス（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｃｒｙｓｔａｌｌｏｐｏｉｅｔｅｓ）等が挙
げられ、具体的にはＪＣＭ２５２２（Ｊａｐａｎ Ｃｏ
ｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ
ｓ：理化学研究所微生物系統保存施設に保存）等が挙げ
られる。
ｓ）属に属する微生物としては例えばアルカリゲネス
アクアマリヌス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ ａｑｕａｍ
ａｒｉｎｕｓ）等が挙げられ、具体的にはＦＥＲＭ Ｐ
−４２２９（工業技術院生命工学工業技術研究所に保
存）等が挙げられる。アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏ
ｂａｃｔｅｒ）属に属する微生物としては例えばアルス
ロバクター クリスタロポイエテス（Ａｒｔｈｒｏｂａ
ｃｔｅｒ ｃｒｙｓｔａｌｌｏｐｏｉｅｔｅｓ）等が挙
げられ、具体的にはＪＣＭ２５２２（Ｊａｐａｎ Ｃｏ
ｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ
ｓ：理化学研究所微生物系統保存施設に保存）等が挙げ
られる。
【００１０】バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属する
微生物としては例えばバチルス リケニフォルミス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）等が挙
げられ、具体的にはＩＦＯ１２１９９やＩＦＯ１２２０
０（財団法人 発酵研究所に保存）等が挙げられる。フ
ラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属
に属する微生物としては例えばフラボバクテリウム ヒ
ダントイノフィラム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｈｙｄａｎｔｏｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）等が挙げられ、具
体的にはＦＥＲＭ Ｐ−４８１９（工業技術院生命工学
工業技術研究所に保存）等が挙げられる。
微生物としては例えばバチルス リケニフォルミス（Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）等が挙
げられ、具体的にはＩＦＯ１２１９９やＩＦＯ１２２０
０（財団法人 発酵研究所に保存）等が挙げられる。フ
ラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属
に属する微生物としては例えばフラボバクテリウム ヒ
ダントイノフィラム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｈｙｄａｎｔｏｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）等が挙げられ、具
体的にはＦＥＲＭ Ｐ−４８１９（工業技術院生命工学
工業技術研究所に保存）等が挙げられる。
【００１１】パラコッカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ）属
に属する微生物としては例えばパラコッカス デニトリ
フィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆ
ｉｃａｎｓ）等が挙げられ、具体的にはＦＥＲＭ Ｐ−
４３４９（工業技術院生命工学工業技術研究所に保存）
等が挙げられる。前述したアグロバクテリウム ラジオ
バクター（ＭＣＩ３６６２）の菌学的性質は以下の通り
である。なお、アグロバクテリウム ラジオバクター
（ＭＣＩ３６６２）は、工業技術院生命工学工業技術研
究所に受託番号：ＦＥＲＭＰ−１７３１２として寄託さ
れている。
に属する微生物としては例えばパラコッカス デニトリ
フィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉｆ
ｉｃａｎｓ）等が挙げられ、具体的にはＦＥＲＭ Ｐ−
４３４９（工業技術院生命工学工業技術研究所に保存）
等が挙げられる。前述したアグロバクテリウム ラジオ
バクター（ＭＣＩ３６６２）の菌学的性質は以下の通り
である。なお、アグロバクテリウム ラジオバクター
（ＭＣＩ３６６２）は、工業技術院生命工学工業技術研
究所に受託番号：ＦＥＲＭＰ−１７３１２として寄託さ
れている。
【００１２】ＭＣＩ３６６２菌株の菌学的性質 １．形態的性質 （１）細胞の形 桿状 （２）細胞の多形性 なし （３）運動性 なし （４）胞子の有無 なし ２．培養的性質 （１）肉汁寒天平板培養 ３０℃ １〜２日間培養後円形、半レンズ状、 うす黄、不透明、光沢のコロニーを形成、コロ ニー表面は平滑 （２）肉汁液体培養 混濁が見られるが、液面における膜の形成はな い。 （３）肉汁ゼラチン穿刺培養 ゼラチン液化なし （４）リトマス・ミルク リトマス脱色 ペプトン化、凝固はなし ３．生理学的性質 （１）グラム染色 陰性 （２）硝酸塩の還元 陰性 （３）脱膣反応 陰性 （４）ＭＲテスト 陰性 （５）ＶＰテスト 陰性 （６）インドールの生成 陰性 （７）硫化水素の生成 陰性 （８）デンプンの加水分解 陰性 （９）クエン酸の利用 クリステンセン培地上 陽性 （１０）無機窒素源の利用 ＮＯ3 陽性 ＮＨ4 陽性 （１１）色素の生成 なし （１２）ウレアーゼ 陽性 （１３）オキシダーゼ 陽性 （１４）カタラーゼ 陽性 （１５）生育の範囲 ：温度 ４〜３７℃ ：ｐＨ ６〜９ （１６）酸素に対する態度 嫌気条件下で生育せず （１７）Ｏ−Ｆテスト 酸化型 （１８）糖類からの酸の生成 Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−マンノース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｄ−ガラクトース ＋ マルトース ＋ シュークロース ＋ ラクトース ＋ トレハロース ＋ Ｄ−ソルビトール ＋ Ｄ−マンニトール ＋ イノシトール ＋ グリセリン ＋ デンプン − エリスリトール − ＋：酸を生成する、−：生成しない、±：どちらともいえない （１９）その他の諸性質 アルギニンジヒドロラーゼ 陽性 エスクリンの分解 陽性 β−ガラクトシダーゼ 陽性 有機酸の利用 グルコン酸 陽性 ＤＬ−リンゴ酸 陽性 アジピン酸 陰性 ｎ−カプリン酸 陽性 ５．化学分類学的性質 （１）主要なイソプレノイドキノン ユビキノン Ｑ１０ （２）ＤＮＡ中のＧ＋Ｃ含量 ５９．５ モル％
【００１３】６．分類学的考察 （１）属の同定 本菌株ＭＣＩ３６６２株は１）グラム陰性桿菌、２）絶
対好気性、３）芽胞を形成しない、４）運動性なし、
５）Ｏ−Ｆテストは酸化型、６）硫化水素を生成しな
い、７）ウレアーゼ陽性、８）主要なイソプレノイドキ
ノンはユビキノンＱ１０を有する、９）ＤＮＡ中のＧ＋
Ｃ含量は５９．５モル％などの特徴を持っている。これ
らの特徴から、本菌株はバージェイズマニュアル・シス
テマティック・バクテリオロジー〔Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ〕第１巻、２３４〜２５６頁（１９８
４）に記載されているリゾビアシーエ科（Ｒｈｉｚｏｂ
ｉａｃｅａｅ）に含まれる、アグロバクテリウム属（Ａ
ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びリゾビウム属（Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍ）に帰属することが示唆された。
対好気性、３）芽胞を形成しない、４）運動性なし、
５）Ｏ−Ｆテストは酸化型、６）硫化水素を生成しな
い、７）ウレアーゼ陽性、８）主要なイソプレノイドキ
ノンはユビキノンＱ１０を有する、９）ＤＮＡ中のＧ＋
Ｃ含量は５９．５モル％などの特徴を持っている。これ
らの特徴から、本菌株はバージェイズマニュアル・シス
テマティック・バクテリオロジー〔Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ
Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌｏｇｙ〕第１巻、２３４〜２５６頁（１９８
４）に記載されているリゾビアシーエ科（Ｒｈｉｚｏｂ
ｉａｃｅａｅ）に含まれる、アグロバクテリウム属（Ａ
ｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）及びリゾビウム属（Ｒｈｉ
ｚｏｂｉｕｍ）に帰属することが示唆された。
【００１４】（２）種の同定 現在、１６Ｓ ｒＲＮＡ塩基配列の解析結果から、アグ
ロバクテリウム属とリゾビウム属は属レベルでまとまっ
た菌群であることが判明している。従って本菌株の種を
決定するため、１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列（１４４５
塩基）を決定した。得られた結果に基づくデータベース
検索により、本菌株はアグロバクテリウム ツメファシ
エンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃ
ｉｅｎｓ）に最も近縁であることが判明した。
ロバクテリウム属とリゾビウム属は属レベルでまとまっ
た菌群であることが判明している。従って本菌株の種を
決定するため、１６Ｓ ｒＲＮＡの塩基配列（１４４５
塩基）を決定した。得られた結果に基づくデータベース
検索により、本菌株はアグロバクテリウム ツメファシ
エンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃ
ｉｅｎｓ）に最も近縁であることが判明した。
【００１５】インターナショナル ジャーナル オブ
システマティック バクテリオロジー〔Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ〕第４３巻、６９４−７０
２頁（１９９３）によると、アグロバクテリウム属には
アグロバクテリウム ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）、アグロバクテリウム ラディオバク
ター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリ
ウム リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）、アグ
ロバクテリウム ビティス（Ａ．ｖｉｔｉｓ）及びアグ
ロバクテリウムルビ（Ａ．ｒｕｂｉ）の５種が知られて
いるが、アグロバクテリウム ツメファシエンス（Ａ．
ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）とアグロバクテリウム ラデ
ィオバクター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）は１６Ｓ
ｒＲＮＡの解析から同一種として統合され、アグロバ
クテリウム ラディオバクターとなっている。従って本
菌株はアグロバクテリウム ラディオバクターと９９．
６％の相同値を示し、他種（相同値９４．６〜９７．７
％）より高い相同性を示した。さらに生理学的性質にお
いても、１）３７℃での生育、２）エリスリトールの資
化性、３）アルギニンジヒドロラーゼの有無などの点で
明らかに他種とは区別された。
システマティック バクテリオロジー〔Ｉｎｔｅｒｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ〕第４３巻、６９４−７０
２頁（１９９３）によると、アグロバクテリウム属には
アグロバクテリウム ツメファシエンス（Ａ．ｔｕｍｅ
ｆａｃｉｅｎｓ）、アグロバクテリウム ラディオバク
ター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）、アグロバクテリ
ウム リゾゲネス（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）、アグ
ロバクテリウム ビティス（Ａ．ｖｉｔｉｓ）及びアグ
ロバクテリウムルビ（Ａ．ｒｕｂｉ）の５種が知られて
いるが、アグロバクテリウム ツメファシエンス（Ａ．
ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）とアグロバクテリウム ラデ
ィオバクター（Ａ．ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）は１６Ｓ
ｒＲＮＡの解析から同一種として統合され、アグロバ
クテリウム ラディオバクターとなっている。従って本
菌株はアグロバクテリウム ラディオバクターと９９．
６％の相同値を示し、他種（相同値９４．６〜９７．７
％）より高い相同性を示した。さらに生理学的性質にお
いても、１）３７℃での生育、２）エリスリトールの資
化性、３）アルギニンジヒドロラーゼの有無などの点で
明らかに他種とは区別された。
【００１６】以上の結果から、本菌株ＭＣＩ３６６２株
をアグロバクテリウム ラディオバクター（Ａｇｒｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）と同定し
た。本発明で用いられる微生物は、上記微生物から、Ｕ
Ｖ照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）処理、
亜硝酸処理、アクリジン処理等により誘導される変異
株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺
伝学的手法により誘導される組換え株等であってもよ
い。
をアグロバクテリウム ラディオバクター（Ａｇｒｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄｉｏｂａｃｔｅｒ）と同定し
た。本発明で用いられる微生物は、上記微生物から、Ｕ
Ｖ照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロソグアニジン（ＮＴ
Ｇ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭＳ）処理、
亜硝酸処理、アクリジン処理等により誘導される変異
株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺
伝学的手法により誘導される組換え株等であってもよ
い。
【００１７】本発明の製造方法においては、上記微生物
の１種あるいは２種以上が菌体及び／またはその処理物
として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して
得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌
体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理し
たもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵
素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができ
る。また、これらの菌体及び／または菌体処理物から、
Ｄ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインにのみ選
択的に作用して、それを開裂加水分解してＤ−３−（２
−ナフチル）アラニンを生成する能力を有する酵素画分
を粗精製物あるいは精製物として取り出して用いること
も可能である。さらには、このようにして得られた菌体
又は／および菌体処理物又は／および酵素画分等をポリ
アクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等の担体に固定
化したもの等を用いることも可能である。そこで本明細
書において、「菌体及び／またはその処理物」の用語
は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及びそれらの
固定化物全てを含有する概念として用いられる。
の１種あるいは２種以上が菌体及び／またはその処理物
として用いられる。具体的には、上記微生物を培養して
得られた菌体をそのまま、あるいは培養して得られた菌
体を公知の手法で処理したもの、即ち、アセトン処理し
たもの、凍結乾燥処理したもの、菌体を物理的または酵
素的に破砕したもの等の菌体処理物を用いることができ
る。また、これらの菌体及び／または菌体処理物から、
Ｄ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインにのみ選
択的に作用して、それを開裂加水分解してＤ−３−（２
−ナフチル）アラニンを生成する能力を有する酵素画分
を粗精製物あるいは精製物として取り出して用いること
も可能である。さらには、このようにして得られた菌体
又は／および菌体処理物又は／および酵素画分等をポリ
アクリルアミドゲル、カラギーナンゲル等の担体に固定
化したもの等を用いることも可能である。そこで本明細
書において、「菌体及び／またはその処理物」の用語
は、上述の菌体、菌体処理物、酵素画分、及びそれらの
固定化物全てを含有する概念として用いられる。
【００１８】本発明において、これらの微生物を、予め
ヒダントイン類を含む培地中で培養させた場合に、該微
生物のヒダントイン環の不斉的開裂加水分解能が増強さ
れている場合があるのでヒダントイン類を含む培地中で
培養することが望ましいが、それに限定されるものでは
ない。ＵＶ照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロソグアニジ
ン（ＮＴＧ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭ
Ｓ）処理、亜硝酸処理、アクリジン処理等による変異
株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺
伝学的手法により誘導された組換え株で、誘導物質なし
に高い活性が得られる菌株を用いることも可能である。
ヒダントイン類を含む培地中で培養させた場合に、該微
生物のヒダントイン環の不斉的開裂加水分解能が増強さ
れている場合があるのでヒダントイン類を含む培地中で
培養することが望ましいが、それに限定されるものでは
ない。ＵＶ照射、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロソグアニジ
ン（ＮＴＧ）処理、エチルメタンスルホネート（ＥＭ
Ｓ）処理、亜硝酸処理、アクリジン処理等による変異
株、あるいは細胞融合もしくは遺伝子組換え法などの遺
伝学的手法により誘導された組換え株で、誘導物質なし
に高い活性が得られる菌株を用いることも可能である。
【００１９】本発明における微生物の培養培地として
は、通常の炭素源、窒素源、無機イオンを含有する一般
的な培地が使用できる。さらにビタミン、アミノ酸など
の有機微量栄養素を添加することもできる。炭素源とし
てはグルコース、シュクロース等の炭水化物、フマル
酸、リンゴ酸等の有機酸、アルコール類その他が適宜使
用される。窒素源としては、アンモニウム塩や硝酸塩な
どの無機窒素源、あるいは酵母エキスやペプトン等の有
機窒素源が適宜使用される。本発明においては主に酵母
エキスが０．１〜０．５％で用いられ、好ましくは０．
３〜１％である。無機イオンとしては、マグネシウムイ
オン、カリウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、リ
ン酸イオンその他が必要に応じて適宜使用される。本発
明においては、主に硫酸マグネシウム０．０１〜０．１
％、リン酸二水素カリウム０．０５〜０．５％、リン酸
水素二カリウム０．１〜１％、硫酸マンガン０．００１
〜０．０５％が用いられる。
は、通常の炭素源、窒素源、無機イオンを含有する一般
的な培地が使用できる。さらにビタミン、アミノ酸など
の有機微量栄養素を添加することもできる。炭素源とし
てはグルコース、シュクロース等の炭水化物、フマル
酸、リンゴ酸等の有機酸、アルコール類その他が適宜使
用される。窒素源としては、アンモニウム塩や硝酸塩な
どの無機窒素源、あるいは酵母エキスやペプトン等の有
機窒素源が適宜使用される。本発明においては主に酵母
エキスが０．１〜０．５％で用いられ、好ましくは０．
３〜１％である。無機イオンとしては、マグネシウムイ
オン、カリウムイオン、鉄イオン、マンガンイオン、リ
ン酸イオンその他が必要に応じて適宜使用される。本発
明においては、主に硫酸マグネシウム０．０１〜０．１
％、リン酸二水素カリウム０．０５〜０．５％、リン酸
水素二カリウム０．１〜１％、硫酸マンガン０．００１
〜０．０５％が用いられる。
【００２０】又、必要に応じて反応を触媒する酵素を菌
体内に著量生合成させる為の誘導物質として添加する５
−置換ヒダントイン類としては特に限定されるものでは
ないが、例えばメチルヒダントイン、イソプロピルヒダ
ントイン、ヒダントイン、メチルチオエチルヒダントイ
ン、５−（２，２−ジメチルプロピル）ヒダントイン等
が使用される。好ましくは、メチルヒダントイン又はイ
ソプロピルヒダントインが用いられる。
体内に著量生合成させる為の誘導物質として添加する５
−置換ヒダントイン類としては特に限定されるものでは
ないが、例えばメチルヒダントイン、イソプロピルヒダ
ントイン、ヒダントイン、メチルチオエチルヒダントイ
ン、５−（２，２−ジメチルプロピル）ヒダントイン等
が使用される。好ましくは、メチルヒダントイン又はイ
ソプロピルヒダントインが用いられる。
【００２１】前記微生物を培養する際に必要に応じ５−
置換ヒダントイン類を培地に添加する場合には、はじめ
から５−置換ヒダントイン類を含有した培地で培養して
もよいし、培養途中から添加してもよい。５−置換ヒダ
ントイン類の培地への添加量は特に制限されるものでは
ないが、一般的には０．０００１〜３重量％、より好ま
しくは０．００１〜１重量％が用いられる。
置換ヒダントイン類を培地に添加する場合には、はじめ
から５−置換ヒダントイン類を含有した培地で培養して
もよいし、培養途中から添加してもよい。５−置換ヒダ
ントイン類の培地への添加量は特に制限されるものでは
ないが、一般的には０．０００１〜３重量％、より好ま
しくは０．００１〜１重量％が用いられる。
【００２２】培養は好気的条件下に、前記培地中で１５
〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃で、ｐＨ４〜９、好
ましくはｐＨ５〜８の範囲に制御しつつ５〜７２時間、
好ましくは１２〜４８時間行うことが出来る。反応は、
前述した如く、微生物菌体又は／およびその処理物を原
料としてＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントイ
ンに作用させることにより行なわれる。
〜５０℃、好ましくは２５〜４０℃で、ｐＨ４〜９、好
ましくはｐＨ５〜８の範囲に制御しつつ５〜７２時間、
好ましくは１２〜４８時間行うことが出来る。反応は、
前述した如く、微生物菌体又は／およびその処理物を原
料としてＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントイ
ンに作用させることにより行なわれる。
【００２３】微生物菌体を作用させる場合、前述の培養
条件にて十分に菌を生育させた後、菌体を分離し洗浄
後、水あるいは適当な緩衝液に懸濁させ、原料としてＤ
Ｌ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインを飽和濃
度以上添加する。ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒ
ダントインは水性媒体に対する溶解度は低いが、反応の
進行と共に溶解する。ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチ
ルヒダントインの添加量は、特に制限されるものではな
いが、一般に０．０５〜１０重量％、好ましくは０．１
〜４重量％である。反応は１０〜５０℃、好ましくは２
５〜４０℃の温度で、ｐＨは４．０〜１０．０、好まし
くは７．０〜９．０で、水性媒体中又は／および該水性
媒体を含有する容器中を窒素で置換した後、１〜１４
日、通常は１〜７日間程度撹拌しながら実施する。
条件にて十分に菌を生育させた後、菌体を分離し洗浄
後、水あるいは適当な緩衝液に懸濁させ、原料としてＤ
Ｌ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインを飽和濃
度以上添加する。ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒ
ダントインは水性媒体に対する溶解度は低いが、反応の
進行と共に溶解する。ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチ
ルヒダントインの添加量は、特に制限されるものではな
いが、一般に０．０５〜１０重量％、好ましくは０．１
〜４重量％である。反応は１０〜５０℃、好ましくは２
５〜４０℃の温度で、ｐＨは４．０〜１０．０、好まし
くは７．０〜９．０で、水性媒体中又は／および該水性
媒体を含有する容器中を窒素で置換した後、１〜１４
日、通常は１〜７日間程度撹拌しながら実施する。
【００２４】菌体処理物を作用させる場合、タンパク質
重量で１０〜１００ｍｇ程度の菌体破砕物等を含む０．
０１〜１Ｍの緩衝液（ｐＨ７〜９）等の水性媒体に、Ｄ
Ｌ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインを上記範
囲で添加後反応させることが出来る。なお、本発明でい
う水性媒体とは、水または例えばリン酸バッファー等の
適当な緩衝液を意味する。このようにして水性媒体中に
生成したＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの反応終了
液からの分離精製は常法通り公知の方法、例えば酸で沈
殿させる酸晶析方法、あるいは合成吸着剤等を用いたカ
ラムクロマトグラフィー法等で行なうことが出来る。
重量で１０〜１００ｍｇ程度の菌体破砕物等を含む０．
０１〜１Ｍの緩衝液（ｐＨ７〜９）等の水性媒体に、Ｄ
Ｌ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインを上記範
囲で添加後反応させることが出来る。なお、本発明でい
う水性媒体とは、水または例えばリン酸バッファー等の
適当な緩衝液を意味する。このようにして水性媒体中に
生成したＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの反応終了
液からの分離精製は常法通り公知の方法、例えば酸で沈
殿させる酸晶析方法、あるいは合成吸着剤等を用いたカ
ラムクロマトグラフィー法等で行なうことが出来る。
【００２５】
【実施例】以下、本発明の実施例を挙げるが、その要旨
を越えない限り以下の実施例に限定されるものではな
い。 実施例１ グルコース１ｇ、酵母エキス１ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．
３ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4０．１ｇＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ５
０ｍｇ、ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １ｍｇ、５−イソプロ
ピルヒダントイン０．３ｇを水１００ｍｌに溶解した培
地を、２０ｍｌづつ２００ｍｌ容量のバッフル付きフラ
スコに分注し、１２０℃で２０分間殺菌した。３０℃に
冷却後、普通寒天培地上で２４時間培養した下記の各菌
株を１白金耳づつ接種し、３０℃、２０時間、１６０ｒ
ｐｍのロータリーシェーカーで培養した。
を越えない限り以下の実施例に限定されるものではな
い。 実施例１ グルコース１ｇ、酵母エキス１ｇ、Ｋ2 ＨＰＯ4 ０．
３ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4０．１ｇＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ５
０ｍｇ、ＭｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ １ｍｇ、５−イソプロ
ピルヒダントイン０．３ｇを水１００ｍｌに溶解した培
地を、２０ｍｌづつ２００ｍｌ容量のバッフル付きフラ
スコに分注し、１２０℃で２０分間殺菌した。３０℃に
冷却後、普通寒天培地上で２４時間培養した下記の各菌
株を１白金耳づつ接種し、３０℃、２０時間、１６０ｒ
ｐｍのロータリーシェーカーで培養した。
【００２６】 実施菌株 菌株Ａ Agrobacterium radiobacter ＮＲＲＬ Ｂ１１２９１ 菌株Ｂ Agrobacterium radiobacter ＭＣＩ３６６２ 菌株Ｃ Alcaligenes aquamarinus ＦＥＲＭ Ｐ−４２２９ 菌株Ｄ Arthrobacter crystallopoietes ＪＣＭ２５２２ 菌株Ｅ Bacillus licheniformis ＩＦＯ１２１９９ 菌株Ｆ Bacillus licheniformis ＩＦＯ１２２００ 菌株Ｇ Flavobacterium hydantoinophilum ＦＥＲＭ Ｐ−４８１９ 菌株Ｈ Paracoccus denitrificans ＦＥＲＭ Ｐ−４３４９
【００２７】２０時間後それぞれの培養物を回収し、菌
体を遠心分離によって分離した。分離した菌体を再度１
００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁洗浄し、遠心
分離によって菌体を分離した。該分離菌体を１０ｍｌの
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁し、５０ｍｌ
容量の蓋付き遠沈管に入れ、ＤＬ−５−（２−ナフチ
ル）メチルヒダントインを０．１ｇ添加した。遠沈管を
窒素置換した後、蓋を閉め、３０℃にて２４時間撹拌
し、反応を行った。２４時間後、遠沈管に１規定度のＮ
ａＯＨ １ｍｌを加え反応終了液をアルカリ性にし、生
成した未溶解のＤ−３−（２−ナフチル）アラニンおよ
び未反応のＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダント
インを完全に溶解した後、遠心分離により菌体を除去し
た。シリカゲルの薄相クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を
用いて、得られた反応上清中のＤ−３−（２−ナフチ
ル）アラニンの生成を確認した。更に、ＨＰＬＣによ
り、未反応基質およびＤ−３−（２−ナフチル）アラニ
ンの定量と光学純度の測定を行った。又、反応終了液か
らＨＰＬＣによりＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの
画分を分取後、濃縮乾固し採取量を定量した。結果を下
表に示した。
体を遠心分離によって分離した。分離した菌体を再度１
００ｍＭのリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁洗浄し、遠心
分離によって菌体を分離した。該分離菌体を１０ｍｌの
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁し、５０ｍｌ
容量の蓋付き遠沈管に入れ、ＤＬ−５−（２−ナフチ
ル）メチルヒダントインを０．１ｇ添加した。遠沈管を
窒素置換した後、蓋を閉め、３０℃にて２４時間撹拌
し、反応を行った。２４時間後、遠沈管に１規定度のＮ
ａＯＨ １ｍｌを加え反応終了液をアルカリ性にし、生
成した未溶解のＤ−３−（２−ナフチル）アラニンおよ
び未反応のＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダント
インを完全に溶解した後、遠心分離により菌体を除去し
た。シリカゲルの薄相クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を
用いて、得られた反応上清中のＤ−３−（２−ナフチ
ル）アラニンの生成を確認した。更に、ＨＰＬＣによ
り、未反応基質およびＤ−３−（２−ナフチル）アラニ
ンの定量と光学純度の測定を行った。又、反応終了液か
らＨＰＬＣによりＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの
画分を分取後、濃縮乾固し採取量を定量した。結果を下
表に示した。
【００２８】 Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニン生成量と光学純度 菌株 蓄積量 採取量 光学純度 菌株Ａ ８．２ｇ／ｌ ６４ ｍｇ ９６．０％ｅｅ 菌株Ｂ ８．０ｇ／ｌ ６４ ｍｇ ９８．１％ｅｅ 菌株Ｃ ８．０ｇ／ｌ ６３ ｍｇ ９５．１％ｅｅ 菌株Ｄ ０．８ｇ／ｌ ６ ｍｇ ９５．９％ｅｅ 菌株Ｅ ０．５ｇ／ｌ ４ ｍｇ ９４．９％ｅｅ 菌株Ｆ ０．５ｇ／ｌ ４ ｍｇ ９５．８％ｅｅ 菌株Ｇ ７．９ｇ／ｌ ６０ ｍｇ ９５．８％ｅｅ 菌株Ｈ ３．０ｇ／ｌ ２２ ｍｇ ９４．０％ｅｅ
【００２９】実施例２ 上記菌株Ｂ（ＭＣＩ３６６２）を実施例１と同様の条件
で培養して菌体を得た。この休止菌体を１０ｍｌの１０
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁し、５０ｍｌ容量
の蓋付き遠沈管に入れ、ＤＬ−５−（２−ナフチル）メ
チルヒダントインを０．３ｇ添加した。遠沈管を窒素置
換した後、蓋を閉め、３０℃にて５５時間撹拌し、反応
を行った。５５時間後、シリカゲルのＴＬＣにて未反応
のＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインがな
いことを確認した。遠沈管に１規定度のＮａＯＨ １ｍ
ｌを加えて生成した未溶解のＤ−３−（２−ナフチル）
アラニンを完全に溶解した後、遠心分離により菌体を除
去した。この反応上清に１規定度のＨＣｌを滴下し、ｐ
Ｈ７としたところ、結晶が析出し、系内が白濁した。遠
心分離によりこの白色結晶を分離し、水および有機溶媒
で数回洗浄した後、真空乾燥し、白色の粉体を１９２ｍ
ｇ得た。この結晶の一部を０．０１規定度のＮａＯＨに
溶解し、ＨＰＬＣで測定した結果、Ｄ−３−（２−ナフ
チル）アラニンの純度は９９．０％以上であった。さら
にＨＰＬＣにて光学純度を測定した結果、各々９９．５
％ｅｅであった。なお、上記実施例にて用いたＨＰＬＣ
の分析条件は以下の通りである。
で培養して菌体を得た。この休止菌体を１０ｍｌの１０
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７）に懸濁し、５０ｍｌ容量
の蓋付き遠沈管に入れ、ＤＬ−５−（２−ナフチル）メ
チルヒダントインを０．３ｇ添加した。遠沈管を窒素置
換した後、蓋を閉め、３０℃にて５５時間撹拌し、反応
を行った。５５時間後、シリカゲルのＴＬＣにて未反応
のＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダントインがな
いことを確認した。遠沈管に１規定度のＮａＯＨ １ｍ
ｌを加えて生成した未溶解のＤ−３−（２−ナフチル）
アラニンを完全に溶解した後、遠心分離により菌体を除
去した。この反応上清に１規定度のＨＣｌを滴下し、ｐ
Ｈ７としたところ、結晶が析出し、系内が白濁した。遠
心分離によりこの白色結晶を分離し、水および有機溶媒
で数回洗浄した後、真空乾燥し、白色の粉体を１９２ｍ
ｇ得た。この結晶の一部を０．０１規定度のＮａＯＨに
溶解し、ＨＰＬＣで測定した結果、Ｄ−３−（２−ナフ
チル）アラニンの純度は９９．０％以上であった。さら
にＨＰＬＣにて光学純度を測定した結果、各々９９．５
％ｅｅであった。なお、上記実施例にて用いたＨＰＬＣ
の分析条件は以下の通りである。
【００３０】高速液体クロマトグラフィー分析条件Ａ（定量分析用） カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ ５Ｃ１８ＡＲ ４．６ｍｍＩ．Ｄ．×２５０ｍｍ（ナカライテスク
（株）） 溶離液：４０％アセトニトリル水溶液（ＫＨ2 ＰＯ4
４ｇ／ｌ、Ｈ3 ＰＯ4 １．５ｍｌ／ｌ） 流 速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：ｒ．ｔ． 検出器：ＵＶ ２２０ｎｍ
（株）） 溶離液：４０％アセトニトリル水溶液（ＫＨ2 ＰＯ4
４ｇ／ｌ、Ｈ3 ＰＯ4 １．５ｍｌ／ｌ） 流 速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：ｒ．ｔ． 検出器：ＵＶ ２２０ｎｍ
【００３１】高速液体クロマトグラフィー分析条件Ｂ（光学純度測定
用） カラム：ＣＲＯＷＮＰＡＣ ＣＲ（＋） ０．４ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ（ダイセル化学工業
（株）） 溶離液：１５％メタノール水溶液（６０％過塩素酸０．
９ｍｌ／ｌ） 流 速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：ｒ．ｔ． 検出器：ＵＶ ２１０ｎｍ
用） カラム：ＣＲＯＷＮＰＡＣ ＣＲ（＋） ０．４ｍｍＩ．Ｄ．×１５０ｍｍ（ダイセル化学工業
（株）） 溶離液：１５％メタノール水溶液（６０％過塩素酸０．
９ｍｌ／ｌ） 流 速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ カラム温度：ｒ．ｔ． 検出器：ＵＶ ２１０ｎｍ
【００３２】
【発明の効果】本発明によれば、医薬・農薬の合成中間
体として有用なＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを高
収率で得ることが出来る。
体として有用なＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを高
収率で得ることが出来る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） (Ｃ１２Ｐ 13/06 Ｃ１２Ｒ 1:06） (Ｃ１２Ｐ 13/06 Ｃ１２Ｒ 1:10） (Ｃ１２Ｐ 13/06 Ｃ１２Ｒ 1:20） (72)発明者 指田 玲子 神奈川県横浜市青葉区鴨志田町1000番地 三菱化学株式会社横浜総合研究所内 Ｆターム(参考） 4B064 AE03 AE04 CA02 CC03 CD12 DA01 DA11
Claims (3)
- 【請求項１】 ＤＬ−５−（２−ナフチル）メチルヒダ
ントインに、Ｄ−５−（２−ナフチル）メチルヒダント
インからＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを生成する
能力を有する微生物の菌体及び／またはその処理物を水
性媒体中で作用させ、該水性媒体中にＤ−３−（２−ナ
フチル）アラニンを生成蓄積せしめ、該水性媒体中から
Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンを採取することを特
徴とするＤ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方
法。 - 【請求項２】 Ｄ−５−（２−ナフチル）メチルヒダン
トインからＤ−３−（２−ナフチル）アラニンを生成す
る能力を有する微生物がアグロバクテリウム（Ａｇｒｏ
ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌ
ｉｇｅｎｅｓ）属、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂ
ａｃｔｅｒ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、フ
ラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属、及び／またはパラコッカス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕ
ｓ）属からなる群より選ばれる微生物である請求項１記
載の製造方法。 - 【請求項３】 アグロバクテリウム（Ａｇｒｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ）属に属する微生物がアグロバクテリウム
ラジオバクター（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒａｄ
ｉｏｂａｃｔｅｒ）、アルカリゲネス（Ａｌｃａｌｉｇ
ｅｎｅｓ）属に属する微生物がアルカリゲネス アクア
マリヌス（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓａｑｕａｍａｒｉｎ
ｕｓ）、アルスロバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ）属に属する微生物がアルスロバクター クリスタロ
ポイエテス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｒｙｓｔａ
ｌｌｏｐｏｉｅｔｅｓ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ）属に属する微生物がバチルス リケニフォルミス
（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）、
フラボバクテリウム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属に属する微生物がフラボバクテリウム ヒダントイノ
フィラム（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｈｙｄａｎ
ｔｏｉｎｏｐｈｉｌｕｍ）、パラコッカス（Ｐａｒａｃ
ｏｃｃｕｓ）属に属する微生物がパラコッカス デニト
リフィカンス（Ｐａｒａｃｏｃｃｕｓ ｄｅｎｉｔｒｉ
ｆｉｃａｎｓ）である請求項２記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8094899A JP3873512B2 (ja) | 1999-03-25 | 1999-03-25 | Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8094899A JP3873512B2 (ja) | 1999-03-25 | 1999-03-25 | Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000270887A true JP2000270887A (ja) | 2000-10-03 |
| JP3873512B2 JP3873512B2 (ja) | 2007-01-24 |
Family
ID=13732733
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8094899A Expired - Fee Related JP3873512B2 (ja) | 1999-03-25 | 1999-03-25 | Ｄ−３−（２−ナフチル）アラニンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3873512B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015091265A (ja) * | 2008-10-29 | 2015-05-14 | 株式会社カネカ | Ｌ−アミノ酸の製造方法 |
-
1999
- 1999-03-25 JP JP8094899A patent/JP3873512B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2015091265A (ja) * | 2008-10-29 | 2015-05-14 | 株式会社カネカ | Ｌ−アミノ酸の製造方法 |
| US9464306B2 (en) | 2008-10-29 | 2016-10-11 | Kaneka Corporation | Method for producing L-amino acid |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3873512B2 (ja) | 2007-01-24 |
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