JP2000219656A - ３−ニトロ−ｏ−トルイル酸の単離精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】３−ニトロ−ｏ−トルイル酸と５−ニトロ−ｏ
−トルイル酸を主成分とする混合物から、３−ニトロ−
ｏ−トルイル酸のみを効率よく単離精製しうる方法を提
供すること。 【解決手段】３−ニトロ−ｏ−トルイル酸と５−ニトロ
−ｏ−トルイル酸を主成分とする混合物を溶媒中に懸濁
または溶解させたのち、これにアミンを添加し、生成し
た３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩と５−ニトロ−
ｏ−トルイル酸アミン塩の溶媒に対する溶解度の差を利
用して３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩を優先的に
結晶として単離することを特徴とする３−ニトロ−ｏ−
トルイル酸の単離精製法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、３−ニトロ−ｏ−
トルイル酸の単離精製法に関する。さらに詳しくは、種
々の位置異性体を含むニトロ−ｏ−トルイル酸から、Ｈ
ＩＶ関連疾患治療薬として有用なアミド誘導体の合成中
間体（国際公開第97/11937号パンフレット) 、抗菌剤と
して有用なベンゾヘテロ環化合物の合成中間体 (特開平
1-230558号公報) などとして有用な３−ニトロ−ｏ−ト
ルイル酸を結晶として単離精製する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸を製
造する方法としては、ｏ−キシレンから合成されたｏ−
トルイル酸を硝酸、硝酸塩などでニトロ化することによ
って製造する方法が知られている。

【０００３】しかしながら、この製造方法では、ｏ−ト
ルイル酸のベンゼン環の第３位が特異的にニトロ化され
た３−ニトロ−ｏ−トルイル酸のみを得ることができ
ず、これと第５位、６位などがニトロ化された化合物と
の混合物が生成する。

【０００４】したがって、この混合物から３−ニトロ−
ｏ−トルイル酸のみを得るためには、不必要な異性体で
ある第５位、６位などがニトロ化された化合物をこの混
合物から分離除去しなければならない。

【０００５】ところが、この混合物は位置異性体の混合
物であるため、各化合物は互いに極めて類似した物理的
性質および化学的性質を有することから、晶析技術、蒸
留技術などによっては、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸の
みを効率よく分離精製することが困難である。

【０００６】また、従来、晶析技術、蒸留技術などを利
用しない位置異性体を単離方法としては、一般的な芳香
族化合物の位置異性体の分離法である、膜リアクターに
よる方法〔石川治男ほか著「ジャーナル・オブ・ケミカ
ル・エンジニアリング・オブ・ジャパン[J. Chem. Eng.
Japan] 」1989（22）18頁〕、高圧晶析法〔安田稔ほか
著「化学工学」55（1991）287 頁（精製晶析）〕、ゾー
ンメルティング法〔松岡正邦ほか著「化学工学」55（19
91）290 頁（圧力晶析によるパラクレゾールの製造）〕
などが知られている。しかしながら、これらの方法は、
そのほとんどが汎用的な方法ではなく、特別な装置を必
要とすることが多いことから、前記混合物から３−ニト
ロ−ｏ−トルイル酸のみを単離精製することが困難であ
る。

【０００７】したがって、近年、前記混合物から３−ニ
トロ−ｏ−トルイル酸のみを効率よく単離精製しうる方
法の開発が待ち望まれている。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、前記従来技
術に鑑みてなされたものであり、３−ニトロ−ｏ−トル
イル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸を主成分とする混
合物から、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸のみを効率よく
単離精製しうる方法を提供することを目的とする。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明の要旨は、３−ニ
トロ−ｏ−トルイル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸を
主成分とする混合物を溶媒中に懸濁または溶解させたの
ち、これにアミンを添加し、生成した３−ニトロ−ｏ−
トルイル酸アミン塩と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミ
ン塩の溶媒に対する溶解度の差を利用して３−ニトロ−
ｏ−トルイル酸アミン塩を優先的に結晶として単離する
ことを特徴とする３−ニトロ−ｏ−トルイル酸の単離精
製法に関する。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明の３−ニトロ−ｏ−トルイ
ル酸の単離精製法によれば、３−ニトロ−ｏ−トルイル
酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸を主成分とする混合物
を溶媒中に懸濁または溶解させたのち、これにアミンを
添加し、生成した３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩
と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩の溶媒に対する
溶解度の差を利用して３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミ
ン塩を優先的に結晶として単離することにより、３−ニ
トロ−ｏ−トルイル酸を３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ア
ミン塩として単離精製することができる。

【００１１】本発明においては、３−ニトロ−ｏ−トル
イル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸を主成分とする混
合物にアミンを添加する点に、１つの大きな特徴があ
る。このように前記混合物にアミンを添加した場合に
は、生成した各アミン塩は、互いに相異なる物理的性質
および化学的性質を発現するようになる。さらに、溶媒
に対する各アミン塩の溶解度の相違を利用した場合に
は、目的とする３−ニトロ−ｏ−トルイル酸を３−ニト
ロ−ｏ−トルイル酸アミン塩の形で前記混合物から容易
に、効率よく単離精製することができるという格別顕著
に優れた効果が発現される。

【００１２】ニトロ−ｏ−トルイル酸を調製する方法と
しては、既知の方法を採用することができる。かかる方
法の代表例としては、例えば、ｏ−トルイル酸と濃硫酸
および硝酸カリウムを用いる方法〔ジアカロン・エイ
(Giacalone. A.)ら著、ガゼッタ・チミカ・イタリアー
ナ[Gazz. Chim. Ital.] 1935 (65) 840 頁〕、ｏ−トル
イル酸と発煙硝酸を用いる方法〔ジャコブセン(Jacobse
n)、ウィエルス(Wierss)著、ケミッシェ・ベリヒテ[Che
m. Ber.] 1883 (16) 1957 頁〕などがあげられるが、本
発明はかかる例示のみに限定されるものではない。

【００１３】本発明においては、まず、ｏ−トルイル酸
をニトロ化することによって得られた３−ニトロ−ｏ−
トルイル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸を主成分とす
る混合物を溶媒中に懸濁または溶解させる。なお、「３
−ニトロ−ｏ−トルイル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル
酸を主成分とする」とは、該混合物中に３−ニトロ−ｏ
−トルイル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸とが５０重
量％以上含有されていることをいう。

【００１４】前記溶媒としては、極性有機溶媒、非極性
有機溶媒および水があげられ、これらは単独でまたは２
種以上を混合して用いることができる。

【００１５】極性有機溶媒としては、メチルアルコー
ル、エチルアルコール、イソプロピルアルコールなどの
アルコール系溶媒をはじめ、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホルム
アミド、ジメチルスルホキシド、アセトニトリル、アセ
トンなどがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を
混合して用いることができる。

【００１６】また、非極性有機溶媒としては、ベンゼ
ン、トルエン、キシレン、ヘキサンなどの炭化水素系溶
媒、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、クロロホ
ルム、四塩化炭素などのハロゲン系溶媒、酢酸メチル、
酢酸エチル、酢酸ブチルなどのエステル系溶媒；イソプ
ロピルエーテル、テトラヒドロフランなどのエーテル系
溶媒などがあげられ、これらは単独でまたは２種以上を
混合して用いることができる。

【００１７】使用される溶媒の種類は、生成させるアミ
ン塩の種類によって異なる。該溶媒としては、一般に、
生成する３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩の溶解度
を小さくし、不純物である５−ニトロ−ｏ−トルイル酸
アミン塩の溶解度を大きくする溶媒を適宜選択して使用
することが好ましい。

【００１８】溶媒の使用量は、前記混合物を完全に溶解
させることができる量であってもよく、あるいは生成し
たアミン塩を溶媒中で懸濁させることができる量であっ
てもよい。溶媒の使用量は、特に限定がないが、通常、
前記混合物１００重量部に対して、２００〜２００００
重量部程度、好ましくは３００〜１５０００重量部程度
であることが望ましい。

【００１９】次に、前記混合物を溶媒中に懸濁または溶
解させて得られた懸濁液または溶液にアミンを添加す
る。

【００２０】本発明に用いるアミンとしては、第１級脂
肪族アミン、第２級脂肪族アミン、第３級脂肪族アミン
および芳香族アミンが好ましい。

【００２１】第１級脂肪族アミンの代表例としては、メ
チルアミン、エチルアミン、ｎ−プロピルアミン、イソ
プロピルアミン、ブチルアミンなどがあげられる。第２
級脂肪族アミンの代表例としては、ジエチルアミン、ジ
−ｎ−プロピルアミン、ジイソプロピルアミン、ジ−ｎ
−ブチルアミンなどがあげられる。第３級脂肪族アミン
の代表例としては、トリエチルアミン、トリ−ｎ−プロ
ピルアミンなどがあげられる。また、芳香族アミンの代
表例としては、アニリン、ジクロロアニリン、ジフルオ
ロアニリン、クロロフルオロアニリン、トルイジン、ジ
メチルアミノピリジン、インドール、ナフチルアミン、
フェニレンジアミン、ナフタレンジアミン、ジフェニル
アミンなどがあげられる。これらのアミンは、本発明に
おいて不要である５−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩
の溶解度を高める目的で、単独で用いることのほか、２
種以上を混合して用いてもよい。

【００２２】アミンの添加量は、特に限定がないが、通
常、前記混合物に含まれているニトロ−ｏ−トルイル酸
１モルに対して、０．５〜１．５モル程度、好ましくは
０．７〜１．３モル程度であることが望ましい。

【００２３】なお、本発明においては、溶媒は、アミン
の種類に応じて適宜選択して用いることが好ましい。

【００２４】その具体例としては、例えば、アミンとし
てジエチルアミンを用いる場合、溶媒としてメチルアル
コール、イソプロピルアルコール、トルエン、塩化メチ
レン、１，２−ジクロロエタン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルホ
ルムアミド、アセトン、アセトニトリル、酢酸エチル、
イソプロピルエーテル、テトラヒドロフランなどを用い
ることが好ましく、とりわけ１，２−ジクロロエタン、
酢酸エチル、テトラヒドロフラン、トルエンなどを用い
ることが好ましい。アミンとしてイソプロピルアミンを
用いる場合、溶媒としてイソプロピルアルコール、１，
２−ジクロロエタン、アセトニトリル、酢酸エチル、ト
ルエン、テトラヒドロフラン、水などを用いることが好
ましく、とりわけ酢酸エチルなどを用いることが好まし
い。アミンとしてジイソプロピルアミンを用いる場合、
溶媒として酢酸エチル、１，２−ジクロロエタン、トル
エン、イソプロピルアルコール、アセトニトリル、テト
ラヒドロフラン、水などを用いることが好ましく、とり
わけ酢酸エチル、１，２−ジクロロエタン、トルエンな
どを用いることが好ましい。アミンとしてジ−ｎ−ブチ
ルアミンを用いる場合、溶媒として酢酸エチル、トルエ
ン、イソプロピルアルコール、１，２−ジクロロエタン
などを用いることが好ましく、とりわけ酢酸エチル、ト
ルエンなどを用いることが好ましい。アミンとしてジク
ロロアニリン、ジフルオロアニリンなどのアニリン類を
用いる場合、溶媒としてイソプロピルアルコール、酢酸
エチル、１，２−ジクロロエタン、トルエンなどが好ま
しく、とりわけ酢酸エチル、イソプロピルアルコールな
どを用いることが好ましい。

【００２５】前記懸濁液または溶液にアミンを添加する
際の溶媒の液温は、特に限定がないが、通常、速やかに
アミン塩を生成させる観点から、１０〜７０℃程度であ
ることが好ましい。なお、反応の際の雰囲気も特に限定
がなく、通常、空気であってもよく、例えば窒素ガス、
アルゴンガスなどの不活性ガスであってもよい。

【００２６】反応終了後、反応液中には、主として３−
ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩と５−ニトロ−ｏ−ト
ルイル酸アミン塩が生成している。反応液中から、本発
明における目的化合物である３−ニトロ−ｏ−トルイル
酸アミン塩を晶析させる際の温度は、通常、−１０〜５
０℃程度であることが好ましく、工業規模で容易に操作
しうる観点から０〜３０℃であることが好ましい。

【００２７】晶析後の反応液中には、３−ニトロ−ｏ−
トルイル酸アミン塩が晶析しているが、他方、５−ニト
ロ−ｏ−トルイル酸アミン塩のほとんどは溶解した状態
であり、結晶としてほとんど析出していない。

【００２８】したがって、前記反応液を固液分離するこ
とにより、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩を結晶
として単離することができる。

【００２９】以上説明したように、本発明の単離精製法
によれば、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸をアミン塩の結
晶として５−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩から効率
よく単離精製することができる。

【００３０】なお、生成した３−ニトロ−ｏ−トルイル
酸アミン塩は、そのままの状態で使用することができる
が、該３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩を脱塩させ
て、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸として使用することも
できる。

【００３１】３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩の脱
塩は、例えば、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩を
前記溶媒に溶解または懸濁させ、これに塩酸などの酸を
添加し、ｐＨを１程度以下に調整することによって容易
に行なうことができる。脱塩後は、固液分離することに
より、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸を結晶として回収す
ることができる。

【００３２】

【実施例】次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細
に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定される
ものではない。

【００３３】実施例１ ３−ニトロ−ｏ−トルイル酸38重量％および５−ニトロ
−ｏ−トルイル酸54.5重量％を含むニトロトルイル酸20
ｇを酢酸エチル450 ｍｌに室温 (約26℃) で懸濁させ、
これにジエチルアミン8.96ｇ (ニトロ−ｏ−トルイル酸
１モルに対して1.2 モル) を添加した後、６０℃に加温
し、溶解させた。

【００３４】次に、得られた溶液を室温まで冷却し、３
−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩および５−
ニトロ−ｏ−トルイル酸を生成させた。

【００３５】1.5 時間攪拌した後、26℃で反応液の固液
分離を行ない、高速液体クロマトグラフィーにより定量
を行なったところ、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチ
ルアミン塩56重量％および５−ニトロ−ｏ−トルイル酸
ジエチルアミン塩 4.9重量％を含む結晶10.05 ｇが得ら
れていた。

【００３６】以上の結果から、３−ニトロ−ｏ−トルイ
ル酸ジエチルアミン塩の収率は74.1重量％であり、取得
した結晶における３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチル
アミン塩の精製比は92％であった。

【００３７】なお、各実施例において、精製比は、式： 〔精製比〕＝〔３−ニトロ−ｏ−トルイル酸またはその
アミン塩の量（モル）〕÷〔３−ニトロ−ｏ−トルイル
酸またはそのアミン塩の量（モル）＋５−ニトロ−ｏ−
トルイル酸またはそのアミン塩の量（モル）〕×100
（％） にしたがって求めた。

【００３８】実施例２ 実施例１において、反応液を固液分離する際の温度を26
℃から０℃に変更したほかは、実施例１と同様にして３
−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩を単離精製
したところ、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミ
ン塩の収率は85.9重量％に上昇し、精製比は85.1％とな
った。

【００３９】実施例３ 実施例１において、溶媒として酢酸エチル450 ｍｌの代
わりにテトラヒドロフラン120 ｍｌを用いたほかは、実
施例１と同様にして３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチ
ルアミン塩を単離精製したところ、３−ニトロ−ｏ−ト
ルイル酸ジエチルアミン塩の収率は79.9重量％であり、
精製比は88.4％であった。

【００４０】実施例４〜７ 実施例１において、ニトロ−ｏ−トルイル酸１モルに対
するジエチルアミンの量、ならびに溶媒の種類およびそ
の量を表１に示すように変更したほかは、実施例１と同
様にして３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩
を単離精製した。その結果を表１に示す。

【００４１】

【表１】

【００４２】実施例８〜１１ 実施例１において、アミンとしてジエチルアミン（ニト
ロ−ｏ−トルイル酸１モルに対する量：1.2 モル）の代
わりに、ニトロ−ｏ−トルイル酸１モルに対して、表２
に示す割合のジエチルアミンとアニリンとの混合物を用
いたほかは、実施例１と同様にして３−ニトロ−ｏ−ト
ルイル酸ジエチルアミン塩を単離精製した。その結果を
表２に示す。

【００４３】

【表２】

【００４４】実施例12 ３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩63.1重量
％および５−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩
6.4重量％を含むジエチルアミン塩10.0ｇ (３−ニトロ
−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩の精製比90.8％) を
水400 ｍｌに懸濁し、室温下塩酸でpHを１以下とし、脱
塩させた。１時間攪拌後、固液分離を行なったところ、
３−ニトロ−ｏ−トルイル酸92.2重量％および５−ニト
ロ−ｏ−トルイル酸 5.9重量％を含む結晶6.48ｇが得ら
れた。このとき、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチル
アミン塩からの３−ニトロ−ｏ−トルイル酸の収率は9
4.7重量％であり、取得結晶の精製比は94％であった。

【００４５】実施例13 ３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩63.1重量
％および５−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩
6.4重量％を含むジエチルアミン塩10.0ｇ (３−ニトロ
−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩の精製比90.8％) を
水200 ｍｌに懸濁し、室温下水酸化ナトリウムでpHを12
以下とし、溶解させた。得られた溶液をトルエン50ｍｌ
で３回洗浄した後、塩酸でpHを１以下とし、脱塩させ
た。１時間攪拌した後、固液分離を行なったところ、３
−ニトロ−ｏ−トルイル酸88.1重量％および５−ニトロ
−ｏ−トルイル酸 7.8重量％を含む結晶6.93ｇが得られ
た。このとき、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルア
ミン塩からの３−ニトロ−ｏ−トルイル酸の収率は96.7
重量％で、取得結晶の精製比は91.9％であった。

【００４６】実施例14 ３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩63.1重量
％および５−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩
6.4重量％を含むジエチルアミン塩10.0ｇ (３−ニトロ
−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩の精製比90.8％) を
酢酸エチル400ｍｌと水200 ｍｌとの混合溶媒に溶解
し、塩酸でpHを１以下とし、脱塩させた。水層を分液
後、酢酸エチル層を濃縮乾固したところ、３−ニトロ−
ｏ−トルイル酸90.2重量％および５−ニトロ−ｏ−トル
イル酸 8.1重量％を含む結晶7.00ｇが得られた。このと
き、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエチルアミン塩から
の３−ニトロ−ｏ−トルイル酸の収率は100 重量％で、
取得結晶の精製比は91.8％であった。

【００４７】実施例12〜14の結果から、本発明の単離精
製法によって得られた３−ニトロ−ｏ−トルイル酸ジエ
チルアミン塩を脱塩させることにより、３−ニトロ−ｏ
−トルイル酸を容易に効率よく得ることができることが
わかる。

【００４８】実施例15〜33 実施例１において、アミンの種類およびその添加量なら
びに溶媒の種類およびその添加量を表３に示すように変
更したほかは、実施例１と同様にして３−ニトロ−ｏ−
トルイル酸ジエチルアミン塩の単離精製を行なった。そ
の結果を表３に示す。

【００４９】

【表３】

【００５０】以上の結果から、上記実施例の分離精製法
によれば、従来、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸と５−ニ
トロ−ｏ−トルイル酸との単離が困難とされていた３−
ニトロ−ｏ−トルイル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸
との混合物から、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸をそのア
ミン塩の結晶として選択性よく分離精製することができ
ることがわかる。

【００５１】

【発明の効果】本発明の方法によれば、３−ニトロ−ｏ
−トルイル酸と５−ニトロ−ｏ−トルイル酸との混合物
から、３−ニトロ−ｏ−トルイル酸のみをアミン塩とし
て効率よく単離精製することができるという効果が奏さ
れる。

【００５２】したがって、本発明の方法を採用すれば、
種々の位置異性体を含むニトロ−ｏ−トルイル酸から、
ＨＩＶ関連疾患治療薬として有用なアミド誘導体の合成
中間体、抗菌剤として有用なベンゾヘテロ環化合物の合
成中間体などとして有用な３−ニトロ−ｏ−トルイル酸
を工業的規模で生産することができるという効果が奏さ
れる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 濱田 篤志 埼玉県草加市旭町２丁目５番地３ サンハ イツ松原208号 Ｆターム(参考） 4H006 AA02 AC51 AD15 AD30 BA51 BB11 BB12 BB13 BB15 BB16 BB17 BB20 BB21 BC33 BJ10 BS30 BU26

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ３−ニトロ−ｏ−トルイル酸と５−ニト
   ロ−ｏ−トルイル酸を主成分とする混合物を溶媒中に懸
   濁または溶解させたのち、これにアミンを添加し、生成
   した３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩と５−ニトロ
   −ｏ−トルイル酸アミン塩の溶媒に対する溶解度の差を
   利用して３−ニトロ−ｏ−トルイル酸アミン塩を優先的
   に結晶として単離することを特徴とする３−ニトロ−ｏ
   −トルイル酸の単離精製法。
2. 【請求項２】 アミンが第１級脂肪族アミン、第２級脂
   肪族アミン、第３級脂肪族アミンまたは芳香族アミンで
   ある請求項１記載の単離精製法。
3. 【請求項３】 アミンがジエチルアミンであり、溶媒が
   酢酸エチル、テトラヒドロフラン、１，２−ジクロロエ
   タンまたはトルエンである請求項１記載の単離精製法。
4. 【請求項４】 アミンがイソプロピルアミンであり、溶
   媒が酢酸エチルである請求項１記載の単離精製法。
5. 【請求項５】 アミンがジイソプロピルアミンであり、
   溶媒が酢酸エチル、１，２−ジクロロエタンまたはトル
   エンである請求項１記載の単離精製法。
6. 【請求項６】 アミンがジ−ｎ−ブチルアミンであり、
   溶媒が酢酸エチルまたはトルエンである請求項１記載の
   単離精製法。