JP2000201687A - 遺伝子増幅法 - Google Patents
遺伝子増幅法Info
- Publication number
- JP2000201687A JP2000201687A JP11063476A JP6347699A JP2000201687A JP 2000201687 A JP2000201687 A JP 2000201687A JP 11063476 A JP11063476 A JP 11063476A JP 6347699 A JP6347699 A JP 6347699A JP 2000201687 A JP2000201687 A JP 2000201687A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- probes
- probe
- gene
- pair
- target gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 85
- 230000003321 amplification Effects 0.000 title description 9
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 title description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 158
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 78
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 claims abstract description 51
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 37
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 36
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 27
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims abstract description 18
- 108020004518 RNA Probes Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 239000003391 RNA probe Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 claims description 54
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 5
- 101001007348 Arachis hypogaea Galactose-binding lectin Proteins 0.000 claims 2
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 abstract description 16
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 24
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 9
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 8
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 6
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 3
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N (4-methyl-2-oxochromen-7-yl) dihydrogen phosphate Chemical compound C1=C(OP(O)(O)=O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C BCHIXGBGRHLSBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical compound C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QIVUCLWGARAQIO-OLIXTKCUSA-N (3s)-n-[(3s,5s,6r)-6-methyl-2-oxo-1-(2,2,2-trifluoroethyl)-5-(2,3,6-trifluorophenyl)piperidin-3-yl]-2-oxospiro[1h-pyrrolo[2,3-b]pyridine-3,6'-5,7-dihydrocyclopenta[b]pyridine]-3'-carboxamide Chemical compound C1([C@H]2[C@H](N(C(=O)[C@@H](NC(=O)C=3C=C4C[C@]5(CC4=NC=3)C3=CC=CN=C3NC5=O)C2)CC(F)(F)F)C)=C(F)C=CC(F)=C1F QIVUCLWGARAQIO-OLIXTKCUSA-N 0.000 description 1
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical class NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 1
- 102100033029 Carbonic anhydrase-related protein 11 Human genes 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- 101000867841 Homo sapiens Carbonic anhydrase-related protein 11 Proteins 0.000 description 1
- 101001075218 Homo sapiens Gastrokine-1 Proteins 0.000 description 1
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical class C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000004637 bakelite Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000002687 intercalation Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/682—Signal amplification
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
く遺伝子の増幅を行なうことができるようにした遺伝子
増幅方法を提供する。 【解決手段】お互いに相補的な部分が3カ所以上の数か
ら構成される一対のプローブの複数対を用いて、互い違
いに交差するようにハイブリダイゼーションさせること
により、2本鎖の高分子を形成させるようにした。
Description
ローブ、この特殊なプローブの交差(交互)結合を利用
した遺伝子増幅法、この遺伝子増幅法によってターゲッ
ト遺伝子を直接検出する方法及び抗原・抗体を検出する
方法に関する。
ために、Polymerase chain reaction 法(以下、PCR
法)に代表される核酸合成酵素を用いて遺伝子を増幅す
る方法やあらかじめ一本鎖DNAが枝分かれした高分子
のDNAをハイブリダイゼーションさせて遺伝子を増幅
する方法(以下、分岐DNAプローブ法)等が開発され
ている。
ト遺伝子にそうほてきなプライマー(またはプライマ
ー)をアニーリング(ハイブリダイゼーション)させ、
耐熱性の核酸合成酵素を用いて、温度の上下によって遺
伝子を増幅させる方法であるが、遺伝子の増幅から検出
までに時間がかかりまた高価であり、ターゲット遺伝子
にそうほてきなプライマーのデザインによっては増幅効
率や特異性が変化する。
の増幅は、枝分かれした高分子の一本鎖DNAプローブ
をあらかじめ合成しておき、ターゲット遺伝子にハイブ
リダイゼーションさせることにより、ターゲット遺伝子
を検出する方法であるが、枝分かれした高分子の一本鎖
DNAプローブをターゲット遺伝子にハイブリダイゼー
ションさせるためには、分岐DNAプローブが高分子で
あるため時間がかかり、また、枝分かれした高分子の分
岐DNAプローブの大きさに限界があるため、ターゲッ
ト遺伝子の検出には限界があった。
来技術の問題点に鑑みて発明されたもので、酵素や枝分
かれしたDNAを用いずに、効率よく遺伝子の増幅を行
うことができるようにした方法を提供することを目的と
するものである。
ために、本発明の遺伝子増幅方法は、お互いに相補的な
部分が3カ所以上の数から構成される一対(2つ一組)
のプローブの複数対を用いて、互い違いに交差するよう
にハイブリダイゼーションさせることにより、2本鎖の
高分子を形成させるものである。
のプローブとしては、DNAプローブ同士、DNAプロ
ーブとRNAプローブ、又はRNAプローブ同士、PN
A(Peptide Nucleic Acid 又は Polyamide Nucleic Ac
id)プローブ同士、PNAプローブとDNAプローブ、
又はPNAプローブとRNAプローブ同士をあげること
ができる。
イブリダイゼーションする時に必ず3カ所以上の相補的
な部分の中で、1カ所ずつが特異的にハイブリダイゼー
ションするように構成される。
の態様は、一対のプローブのうち、一方のプローブの一
部分の遺伝子をターゲット遺伝子と相補的な遺伝子とな
るように構成し、ターゲット遺伝子と一対のプローブの
複数対をハイブリダイゼーションさせた後、上記した遺
伝子増幅方法で2本鎖の高分子を形成させ、プローブを
増幅して検出するものである。
は、一対のプローブのうち、一方のプローブの一部分の
遺伝子を抗原・抗体等に結合しているターゲット遺伝子
と相補的な遺伝子となるように構成し、ターゲット遺伝
子と一対のプローブの複数対をハイブリダイゼーション
させた後、上記した遺伝子増幅方法で2本鎖の高分子を
形成させ、プローブを増幅して検出するものである。
の態様は、一対のプローブとは別に、一対のプローブの
うちどちらか一方のプローブの一部分の遺伝子とターゲ
ット遺伝子に相補的なプローブを用いて、あらかじめタ
ーゲット遺伝子とハイブリダイゼーションさせた後、上
記した遺伝子増幅方法で一対のプローブの複数対をハイ
ブリダイゼーションさせ、2本鎖の高分子を形成させて
プローブを増幅して検出するものである。
は、一対のプローブとは別に、一対のプローブのうちど
ちらか一方のプローブの一部分の遺伝子と抗原・抗体等
に結合しているターゲット遺伝子に相補的なプローブを
用いて、あらかじめターゲット遺伝子とハイブリダイゼ
ーションさせた後、上記した遺伝子増幅方法で一対のプ
ローブの複数対をハイブリダイゼーションさせ、2本鎖
の高分子の形成により検出するものである。
上記した遺伝子増幅方法で増幅したプローブに、エチジ
ウムブロミド、Oligreen、SYBR Gree
n等のインターカレーティング色素を結合させて増幅し
た高分子を蛍光により検出することができる。
記した遺伝子増幅方法で増幅したプローブに、エチジウ
ムブロミド、Oligreen、SYBR Green
等のインターカレーティング色素を結合させて抗原・抗
体等に結合しているターゲット遺伝子を蛍光により検出
することができる。
て、上記した遺伝子増幅方法で増幅させる一対のプロー
ブにあらかじめ検出のための標識物質として、125Iや
32P等のラジオアイソトープ、ジゴキシゲニンやアクリ
ジニウム・エステル等の発光・発色物質、ジオキセタン
等の発光物質や4−メチルウンベリフェリルリン酸等の
蛍光物質を利用するためのアルカリフォスファターゼ、
アビジンに結合した蛍光・発光・発色物質等を利用する
ためのビオチン等、蛍光共鳴エネルギー転移(FRE
T)を利用するためのドナー蛍光色素とアクセプター蛍
光色素を付加させておき、ターゲット遺伝子を検出する
ことも可能である。
上記した遺伝子増幅方法で増幅させる一対のプローブに
あらかじめ検出のための標識物質として、125Iや32P
等のラジオアイソトープ、ジゴキシゲニンやアクリジニ
ウム・エステル等の発光・発色物質、ジオキセタン等の
発光物質や4−メチルウンベリフェリルリン酸等の蛍光
物質を利用するためのアルカリフォスファターゼ、アビ
ジンに結合した蛍光・発光・発色物質等を利用するため
のビオチン等、蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)を
利用するためのドナー蛍光色素とアクセプター蛍光色素
を付加させておき、抗原・抗体を検出することも可能で
ある。
的な部分が3カ所以上の数から構成されるものである。
ーブ同士、DNAプローブとRNAプローブ、又はRN
Aプローブ同士、PNAプローブ同士、PNAプローブ
とDNAプローブ、又はPNAプローブとRNAプロー
ブ同士をあげることができる。
のプローブの複数対を用いて、互い違いに交差するよう
にハイブリダイゼーションさせることにより形成される
ものである。
ブの場合は、リン酸と糖と塩基(アデニン・チミン・グ
アニン・シトシン)を成分とする一本鎖断片であり、R
NAプローブの場合は、塩基がアデニン・ウラシル・グ
アニン・シトシンを成分とする一本鎖断片である。PN
Aは、DNAの「リン酸と糖」の骨格が、「N−(2−
アミノエチル)グリシン誘導体」に置き換わった構造
で、塩基の成分はDNA・RNAと同じである。
10塩基から1000塩基の範囲で使用するが、最も好
適には10塩基から100塩基の範囲のものを使用す
る。
な部分の塩基の種類は特に限定されるものではない。ま
た、1本のプローブ内にある相補的な部分同士の長さは
それぞれ等しくても、異なっていてもかまわない。
ーションさせ、2本鎖の高分子を形成させるために使用
するプローブの本数は、102〜1015本の範囲で用い
られる。
図面に基づいて説明するが、これらの実施の形態は例示
的に示されるもので、本発明の技術思想から逸脱しない
限り種々の変形が可能なことはいうまでもない。
模式図である。同図において、No.1のDNAプロー
ブは、X領域、Y領域及びZ領域を有し、No.2のD
NAプローブは、X´領域、Y´領域及びZ´領域を有
している。
のDNAプローブは、両者をハイブリダイゼーションさ
せたとき、X領域はX´領域とだけ結合し、Y領域はY
´領域とだけ結合し、Z領域はZ´領域とだけ結合する
ような構成とされている(図2)。
3カ所以上の数から構成される一対のDNAプローブ同
士を用いて、互い違いに交差するようにハイブリダイゼ
ーションさせた場合は、図2に示したように、X領域は
X´領域とだけ結合し、Y領域はY´領域とだけ結合
し、Z領域はZ´領域とだけ結合し、3つの結合パター
ンで一対のプローブが互い違いにハイブリダイゼーショ
ンする。
り、2本のプローブが互い違いに結合する。具体的に
は、図3に示したように、No.1のDNAプローブ及
びNo.2のDNAプローブが立体的に互い違いに結合
し、高分子となる。
で互い違いにハイブリダイゼーションした一対のプロー
ブの複数対は、図3に模式的な一例を示したように2本
鎖の高分子を形成させることができる。
示すと図4のように示される。図5は図3の結合パター
ンを変えた模式図で、図5の模式図の立体的な概念構造
の一例は図6のように示される。
NAプローブ同士、PNAプローブ同士、PNAプロー
ブとDNAプローブ、又はPNAプローブとRNAプロ
ーブ同士の場合も、そのハイブリダイゼーションの原理
は、図3に示したDNAプローブ同士の場合と同様であ
る。
ば、のDNAプローブどうしの場合は、図7に示した
ように、No.3プローブとNo.4プローブをハイブ
リダイゼーションさせたとき、制限酵素による切断部位
(下線の部分がHae IIIという酵素で切断される)が
できるように構成することもできる。つまり、立体的に
プローブどうしが互い違いに結合し高分子になった後、
その後の別の実験操作にその高分子がクロスコンタミネ
ーションしないように、制限酵素を用いて防止すること
ができる(図8)。
ば、のDNAプローブどうしの場合は、図9に示した
ように、一本のプローブの中でお互いに相補的になる部
分の長さは、それぞれ均等である必要はなく、No.5
プローブとNo.6プローブをハイブリダイゼーション
させたとき、X領域とX´領域は24塩基でハイブリダ
イゼーションし、Y領域とY´領域は22塩基でハイブ
リダイゼーションし、Z領域とZ´領域は20塩基でハ
イブリダイゼーションする(図10)。
の態様をさらに具体的な例でいえば、図11に示したよ
うに、一対のプローブのうち、一方のプローブの一部分
の遺伝子をターゲット遺伝子と相補的な遺伝子となるよ
うに構成し、ターゲット遺伝子とハイブリダイゼーショ
ンさせた後、本発明の遺伝子増幅方法で一対のプローブ
の複数対をハイブリダイゼーションさせ、2本鎖の高分
子を形成させてプローブを増幅して検出するものであ
る。
の態様をさらに具体的な例でいえば、図12に示したよ
うに、一対のプローブとは別に、一対のプローブのうち
どちらか一方のプローブの一部分の遺伝子とターゲット
遺伝子に相補的なプローブを用いて、あらかじめターゲ
ット遺伝子とハイブリダイゼーションさせた後、上記し
た遺伝子増幅方法で一対のプローブの複数対をハイブリ
ダイゼーションさせ、2本鎖の高分子を形成させてプロ
ーブを増幅して検出するものである。
をさらに具体的な例でいえば、図13に示したように、
一対のプローブのうち、一方のプローブの一部分の遺伝
子を抗原・抗体に結合しているターゲット遺伝子と相補
的な遺伝子となるように構成し、本発明の遺伝子増幅方
法で一対のプローブの複数対をハイブリダイゼーション
させ、2本鎖の高分子を形成させて抗原・抗体を検出す
るものである。
が、本発明がこれらの実施例に限定されるものでないこ
とは勿論である。
ーブを用いて、ハイブリダイゼーションの温度による遺
伝子増幅の効果を証明した。
幅用プローブ2を使用。 2)緩衝液として20×SSC(333mM-NaCl,333mM-C6H
5O7Na3・2H2O,pH 7.0)を使用。
ー/μLに調製した遺伝子増幅用プローブ1と遺伝子増
幅用プローブ2をそれぞれ5μLずつ加え、40μLの
20×SSCを加えて蓋をした後、94℃で30秒間煮
沸し、50℃,52℃,54℃,56℃,58℃,60
℃,62℃,64℃,66℃,68℃,70℃,でそれ
ぞれ30分間加温した。
て電気泳動し、エチジウムブロミド染色により遺伝子増
幅の効果を確認した。
V,30分間の電気泳動による実施例1の成績を写真を
用いて示したものである。
さによって分けることができるゲルで、一般的に0.5
%のアガロースゲルは、30,000〜40.000塩
基対のDNA分子の分離に用いられるものである。
がハイブリダイゼーションの温度に依存して互い違いに
正確に2本鎖の高分子を形成した結果として、温度の上
昇とともに0.5%のアガロースゲルではもはや泳動で
きないほどに大きくなった高分子が示されている。
ーブで増幅された高分子が制限酵素によって切断される
ことを証明した。
幅用プローブ4を使用。 2)制限酵素として、Hae III(タカラ酒造社製)を
使用。 3)制限酵素用緩衝液としてM-Buffer(タカラ酒造社
製)を使用。 4)緩衝液として20×SSC(333mM-NaCl,333mM-C6H
5O7Na3・2H2O,pH 7.0)を使用。
ー/μLに調製した遺伝子増幅用プローブ3と遺伝子増
幅用プローブ4をそれぞれ5μLずつ加え、5μLの2
0×SSCと35μLの滅菌蒸留水を加えて蓋をした反
応液Aと同じく1013コピー/μLに調製した遺伝子増
幅用プローブ3と遺伝子増幅用プローブ4をそれぞれ
2.5μLずつ加え、5μLの20×SSCと40μL
の滅菌蒸留水を加えて蓋をした反応液Bを94℃で30
秒間煮沸し、62℃でそれぞれ30分間加温した。
5μLのM-Bufferと5μLのHae IIIを加えて、3
7℃で24時間反応させ、2%のアガロースゲルを用い
て電気泳動し、エチジウムブロミド染色により遺増幅さ
れた高分子の制限酵素による切断を確認した。
V,30分間の電気泳動による実施例2の成績を写真を
用いて示したものである。
た一対のDNAプローブが制限酵素によって最小単位に
まで切断されたことが示されている。
幅用プローブ6を使用。 2)B/F分離用の固相に、ストレプトアビジンを結合
させた磁性体ビーズを使用。(商品名:Streptavidin M
agneSphere/Promega社製)。 3)緩衝液として20×SSCと0.5×SSC(20
×SSCの40倍希釈液)を使用。
ー/10μL,102コピー/10μL,103コピー/
10μL,104コピー/10μL,105コピー/10
μL,106コピー/10μL,107コピー/10μ
L,108コピー/10μL,109コピー/10μL,
1010コピー/10μLとなるように調製した合成HC
V−RNAをそれぞれ10μLずつ加え、次に1013コ
ピー/μLに調製したHCV−RNA捕捉用プローブ
B、プローブC、プローブD、プローブEをそれぞれ1
μL、1013コピー/μLに調製した遺伝子増幅用プロ
ーブ5を10μL、及び20×SSCを25μLを加え
る。マイクロチューブの蓋を閉めてミキサーで混和した
後、62℃で60分間加温する。
イクロチューブに1013コピー/μLに調製した遺伝子
増幅用プローブ6を5μLずつ加えて、マイクロチュー
ブの蓋を閉めてミキサーで混和した後、62℃で60分
間加温する。
イクロチューブに10μLのStreptavidin MagneSphere
(以下、磁性体ビーズ)を加え、37℃で30分間反応
する。反応後、磁石を用いて磁性体ビーズをトラップ
し、上清を除去した後、0.5×SSCを50μLと1
00μg/mLに調製したエチジウムブロミド(和光純
薬社製)を10μL加えて、室温で20分間反応させ
る。
ップし、上清を除去した後、0.5×SSCを50μL
加え、直ちに磁石を用いて磁性体ビーズをトラップし、
上清を除去した後、0.5×SSCを50μL加えて、
全量を平底の96ウェルプレートに移して下から紫外線
を照射し、エチジウムブロミドのインタカレーションに
よって蛍光を発するようになった増幅遺伝子を写真撮影
する。
し、エチジウムブロミドの蛍光を写真で撮影した状態を
示すものである。
10コピー/10μLで一番強い蛍光が認められ、合成H
CV−RNAの量に応じて、段階的に蛍光が弱くなって
いった。
幅用プローブ7を使用。 2)B/F分離用の固相に、96ウェルプレートを使
用。(商品名:NucleoLinkTM/Nunc社製) 3)Peroxidase Conjugated Streptavidinとして、
「HRP-Streptavidin/ZYMED LABORATORIES,INC.」を使
用。4)発色試薬として、「ペルオキシダーゼ用発色キ
ットT/住友ベークライト社製」を使用。 5)酵素反応停止液として、2N-H2SO4を使用。 6)緩衝液として20×SSCと0.5×SSCを使
用。
だし、特別なブロッキング処理は施していない)してい
る96ウェルプレート(NucleoLinkTM/Nunc社製)の各
ウェルに、0コピー/10μL,103コピー/10μ
L,104コピー/10μL,105コピー/10μL,
106コピー/10μL,107コピー/10μLとなる
ように調製した合成HCV−RNAをそれぞれ10μL
ずつ加え、次に1011コピー/μLに調製したプローブ
C、プローブD、プローブEをそれぞれ10μL、10
11コピー/μLに調製した遺伝子増幅用プローブ5を1
0μL、及び20×SSCを60μLを加える。
加熱し、62℃で60分間加温する。室温まで温度が下
がったら、それぞれのマイクロチューブに1011コピー
/μLに調製した遺伝子増幅用プローブ5を10μL、
遺伝子増幅用プローブ7を20μLずつ加える。ピペッ
トで混和した後、94℃で30秒間加熱し、62℃で6
0分間加温する。
en20を含む0.5×SSCで4回洗浄し、各ウェルに
「HRP-Streptavidin」を100μL加え、37℃で20
分間加温する。各ウェルの液を吸引除去した後、0.1
%-Tween20を含む0.5×SSCで4回洗浄する。
トT」を100μL加えて、暗所(室温)で10分間反
応させる。反応後、酵素反応停止液を100μL加え、
波長450nmでの吸光度を測定する。
イゼーションして2本鎖の高分子を形成した一対のDN
Aプローブのうち、一方に標識されていた Peroxidase
Conjugated Streptavidin が発色することによっ
て、加えた103〜107コピーまでの合成HCV−RN
Aの量に応じて発色が確認された。
方法によれば、核酸合成酵素や枝分かれしたDNAを用
いずに、効率よく遺伝子の増幅を行うことができる。
によれば、上記した遺伝子増幅方法を利用することによ
って効率よく抗原・抗体を検出することができる。
式図である。
式図である。
イゼーションした場合にできる高分子の形成を示した模
式図である。
模式図である。
模式図である。
本)のDNAプローブの一例を示す模式図である。
分子になった後、制限酵素を用いて切断した場合の一例
を示す模式図である。
分の長さ異なる一対(2本)のDNAプローブの一例を
示す模式図である。
いにハイブリダイゼーションした場合にできる高分子の
形成を示した模式図である。
ゲット遺伝子を直接検出する方法を示した模式図で、ま
ずターゲット遺伝子に対して、ターゲット遺伝子と本発
明の一対のDNAプローブ(図中の増幅遺伝子)に相補
的な領域を持つプローブをハイブリダイゼーションさ
せ、その後、本発明の一対のDNAプローブ(図中の増
幅遺伝子1と増幅遺伝子2)を加えることにより、本発
明の一対のDNAプローブは、ターゲット遺伝子にハイ
ブリダイゼーションした状態で2本鎖の高分子を形成す
るため、容易にターゲット遺伝子を検出することができ
ることを示した図面である。
部分の遺伝子をターゲット遺伝子と相補的な遺伝子とな
るように構成したDNAプローブ(図中の増幅遺伝子
1)とそのDNAプローブに対して対をなすDNAプロ
ーブ(図中の増幅遺伝子1)を用いて、ターゲット遺伝
子と一対のプローブの複数対をハイブリダイゼーション
させ、2本鎖の高分子を形成させ、ターゲット遺伝子を
検出する方法を示す模式図である。
様を示す構成図である。
8)
V,30分間の電気泳動による実施例1の成績を写真を
用いて示したものである。
がハイブリダイゼーションの温度に依存して互い違いに
正確に2本鎖の高分子を形成した結果として、温度の上
昇とともに0.5%のアガロースゲルではもはや泳動で
きないほどに大きくなった高分子が示されている。
V,30分間の電気泳動による実施例2の成績を写真を
用いて示したものである。
し、エチジウムブロミドの蛍光を写真で撮影した状態を
示すものである。
10コピー/10μLで一番強い蛍光が認められ、合成H
CV−RNAの量に応じて、段階的に蛍光が弱くなって
いった。
Claims (14)
- 【請求項1】 お互いに相補的な部分が3カ所以上の数
から構成される一対のプローブの複数対を用いて、互い
違いに交差するようにハイブリダイゼーションさせるこ
とにより、2本鎖の高分子を形成させることを特徴とす
る遺伝子増幅方法。 - 【請求項2】 前記一対のプローブが、DNAプローブ
同士、DNAプローブとRNAプローブ、又はRNAプ
ローブ同士、PNAプローブ同士、PNAプローブとD
NAプローブ、又はPNAプローブとRNAプローブ同
士であることを特徴とする請求項1記載の遺伝子増幅方
法。 - 【請求項3】 前記一対のプローブの構成は、1対1で
ハイブリダイゼーションする時に必ず3カ所以上の相補
的な部分の中で、1カ所ずつが特異的にハイブリダイゼ
ーションするように構成されることを特徴とする請求項
1又は2記載の遺伝子増幅方法。 - 【請求項4】 一対のプローブのうち、一方のプローブ
の一部分の遺伝子をターゲット遺伝子と相補的な遺伝子
となるように構成し、請求項1〜3のいずれか1項記載
の方法でターゲット遺伝子と一対のプローブの複数対を
ハイブリダイゼーションさせ、2本鎖の高分子を形成さ
せてプローブを増幅し、ターゲット遺伝子を検出するこ
とを特徴とするターゲット遺伝子検出方法。 - 【請求項5】 一対のプローブのうち、一方のプローブ
の一部分の遺伝子を抗原・抗体に結合しているターゲッ
ト遺伝子と相補的な遺伝子となるように構成し、請求項
1〜3のいずれか1項記載の方法でターゲット遺伝子と
一対のプローブの複数対をハイブリダイゼーションさ
せ、2本鎖の高分子を形成させて抗原・抗体を検出する
ことを特徴とする抗原・抗体検出方法。 - 【請求項6】 一対のプローブとは別に、一対のプロー
ブのうちどちらか一方のプローブの一部分の遺伝子とタ
ーゲット遺伝子に相補的なプローブを用いて、あらかじ
めターゲット遺伝子にハイブリダイゼーションさせた
後、請求項1〜3のいずれか1項記載の方法で一対のプ
ローブをハイブリダイゼーションさせ、2本鎖の高分子
を形成させてプローブを増幅し、ターゲット遺伝子を検
出することを特徴とするターゲット遺伝子検出方法。 - 【請求項7】 一対のプローブとは別に、一対のプロー
ブのうちどちらか一方のプローブの一部分の遺伝子と抗
原・抗体に結合しているターゲット遺伝子に相補的なプ
ローブを用いて、あらかじめターゲット遺伝子にハイブ
リダイゼーションさせた後、請求項1〜3のいずれか1
項記載の方法で一対のプローブをハイブリダイゼーショ
ンさせ、2本鎖の高分子形成により抗原・抗体を検出す
ることを特徴とする抗原・抗体検出方法。 - 【請求項8】 前記増幅したプローブに、蛍光物質を結
合させ、ターゲット遺伝子を発光させて検出することを
特徴とする請求項4又は6記載のターゲット遺伝子検出
方法方法。 - 【請求項9】 前記増幅したプローブに、蛍光物質を結
合させ、抗原・抗体に結合しているターゲット遺伝子を
発光させて抗原・抗体を検出することを特徴とする請求
項5又は7記載の抗原・抗体検出方法。 - 【請求項10】 前記増幅させるプローブに、あらかじ
め検出のための標識物質を付加させておき、ターゲット
遺伝子を検出することを特徴とする請求項4又は6記載
のターゲット遺伝子検出方法。 - 【請求項11】 前記増幅させるプローブに、あらかじ
め検出のための標識物質を付加させておき、抗原・抗体
を検出することを特徴とする請求項5又は7記載の抗原
・抗体検出方法。 - 【請求項12】 お互いに相補的な部分が3カ所以上の
数から構成されることを特徴とする一対のプローブ。 - 【請求項13】 前記一対のプローブがDNAプローブ
同士、DNAプローブとRNAプローブ又はRNAプロ
ーブ同士、PNAプローブ同士、PNAプローブとDN
Aプローブ又はPNAプローブとRNAプローブ同士で
あることを特徴とする請求項12記載のプローブ。 - 【請求項14】 請求項12又は13記載の一対のプロ
ーブの複数対を用いて、互い違いに交差するようにハイ
ブリダイゼーションさせることによって形成された2本
鎖の高分子。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP06347699A JP3267576B2 (ja) | 1998-11-09 | 1999-03-10 | プローブ高分子の形成方法 |
US09/292,563 US6261846B1 (en) | 1998-11-09 | 1999-04-15 | Gene amplifying method |
DE69927113T DE69927113T2 (de) | 1998-11-09 | 1999-11-03 | Methode zur Genvervielfältigung |
EP99121773A EP1002877B1 (en) | 1998-11-09 | 1999-11-03 | Gene amplifying method |
AT99121773T ATE304059T1 (de) | 1998-11-09 | 1999-11-03 | Methode zur genvervielfältigung |
ES99121773T ES2248953T3 (es) | 1998-11-09 | 1999-11-03 | Procedimiento de amplificacion genetica. |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP31805698 | 1998-11-09 | ||
JP10-318056 | 1998-11-09 | ||
JP06347699A JP3267576B2 (ja) | 1998-11-09 | 1999-03-10 | プローブ高分子の形成方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2000201687A true JP2000201687A (ja) | 2000-07-25 |
JP3267576B2 JP3267576B2 (ja) | 2002-03-18 |
Family
ID=26404605
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP06347699A Expired - Lifetime JP3267576B2 (ja) | 1998-11-09 | 1999-03-10 | プローブ高分子の形成方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6261846B1 (ja) |
EP (1) | EP1002877B1 (ja) |
JP (1) | JP3267576B2 (ja) |
AT (1) | ATE304059T1 (ja) |
DE (1) | DE69927113T2 (ja) |
ES (1) | ES2248953T3 (ja) |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2002031192A1 (fr) * | 2000-10-11 | 2002-04-18 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Procede de construction d"un autoassemblage de sondes et leur procede de detection |
US7060814B2 (en) | 2000-03-31 | 2006-06-13 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Probe for constructing probe-polymer method of constructing probe-polymer and utilization thereof |
WO2006093150A1 (ja) * | 2005-02-28 | 2006-09-08 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | シグナル増幅方法 |
WO2007108378A1 (ja) * | 2006-03-15 | 2007-09-27 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | シグナルプローブポリマーの形成方法 |
US7393636B2 (en) | 2001-11-08 | 2008-07-01 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Method for forming self-assembly substance using oligonucleotide synthesized by gene amplification reaction, self-assembly substance and method for detecting gene |
US7632639B2 (en) | 2003-02-21 | 2009-12-15 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Signal amplification method for detecting mutated gene |
WO2010087409A1 (ja) * | 2009-01-29 | 2010-08-05 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | 核酸の検出方法 |
US7862998B2 (en) | 2005-02-28 | 2011-01-04 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Assist probe and method of using the same |
KR20210050250A (ko) * | 2019-10-28 | 2021-05-07 | 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 | 핵산분해효소 연쇄 반응 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030211496A1 (en) * | 2000-03-29 | 2003-11-13 | Getts Robert C | Quality control reagents for nucleic acid microarrays |
AU7873001A (en) * | 2000-08-30 | 2002-03-13 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Method of detecting gene |
US20050130139A1 (en) * | 2001-09-28 | 2005-06-16 | Mitsugu Usui | Method f amplifying dna chip signals |
US20040029142A1 (en) * | 2002-02-11 | 2004-02-12 | Schon Eric A. | Concatenation-based nucleic acid detection compositions and methods |
CA2515734C (en) * | 2003-02-14 | 2013-04-09 | Eisai Co., Ltd. | Signal amplification method for detecting expressed gene |
US7306915B2 (en) | 2004-03-22 | 2007-12-11 | Sysmex Corporation | Probe set for detection of target substance and detection method using the same |
CN100547080C (zh) | 2004-04-28 | 2009-10-07 | 卫材R&D管理有限公司 | 杂交方法 |
JPWO2006028162A1 (ja) | 2004-09-08 | 2008-05-08 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | シグナルプローブポリマーの形成方法 |
KR101230970B1 (ko) * | 2005-02-28 | 2013-02-07 | 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 | 어시스트프로브 및 그의 이용방법 |
JP3941828B2 (ja) * | 2005-09-15 | 2007-07-04 | トヨタ自動車株式会社 | 内燃機関の空燃比制御装置 |
US20090117560A1 (en) | 2005-09-27 | 2009-05-07 | Toshihiko Fujikawa | Method of Forming Self Assembly Substance on Microsphere and Method of Detecting Target Analyte |
JP2010532986A (ja) | 2007-07-09 | 2010-10-21 | マイクロセンス メドテック リミテッド | 改良された微生物の検出 |
US20100256007A1 (en) * | 2007-10-24 | 2010-10-07 | Mitsugu Usui | Nucleic acid probe, and method of forming probe-polymer |
EP2213751A1 (en) | 2007-10-31 | 2010-08-04 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Polymer for detection of target substance, and method for detection of target substance |
EP2851425A1 (en) | 2012-05-15 | 2015-03-25 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Rna detection method and detection kit |
US10457980B2 (en) | 2013-04-30 | 2019-10-29 | California Institute Of Technology | Multiplex labeling of molecules by sequential hybridization barcoding |
US10510435B2 (en) | 2013-04-30 | 2019-12-17 | California Institute Of Technology | Error correction of multiplex imaging analysis by sequential hybridization |
GB201914538D0 (en) | 2019-10-08 | 2019-11-20 | Momentum Bioscience Ltd | Microorganism capture from antimicrobial-containing solution |
JP7062803B1 (ja) | 2021-03-31 | 2022-05-06 | 積水メディカル株式会社 | 抗薬物抗体測定方法 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1260372A (en) * | 1984-04-27 | 1989-09-26 | Elazar Rabbani | Hybridization method for the detection of genetic materials |
US5273882A (en) * | 1985-06-13 | 1993-12-28 | Amgen | Method and kit for performing nucleic acid hybridization assays |
US5175270A (en) * | 1986-09-10 | 1992-12-29 | Polyprobe, Inc. | Reagents for detecting and assaying nucleic acid sequences |
CA2039517C (en) * | 1990-04-03 | 2006-11-07 | David Segev | Dna probe signal amplification |
US5424413A (en) * | 1992-01-22 | 1995-06-13 | Gen-Probe Incorporated | Branched nucleic acid probes |
AU1730395A (en) * | 1994-01-14 | 1995-08-01 | Aprogenex, Inc. | Populations of non-adjacent hybridization probes |
US5561043A (en) * | 1994-01-31 | 1996-10-01 | Trustees Of Boston University | Self-assembling multimeric nucleic acid constructs |
US5605793A (en) * | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
US5834252A (en) * | 1995-04-18 | 1998-11-10 | Glaxo Group Limited | End-complementary polymerase reaction |
US5942391A (en) * | 1994-06-22 | 1999-08-24 | Mount Sinai School Of Medicine | Nucleic acid amplification method: ramification-extension amplification method (RAM) |
-
1999
- 1999-03-10 JP JP06347699A patent/JP3267576B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1999-04-15 US US09/292,563 patent/US6261846B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-03 ES ES99121773T patent/ES2248953T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-03 EP EP99121773A patent/EP1002877B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-11-03 AT AT99121773T patent/ATE304059T1/de not_active IP Right Cessation
- 1999-11-03 DE DE69927113T patent/DE69927113T2/de not_active Expired - Lifetime
Cited By (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7060814B2 (en) | 2000-03-31 | 2006-06-13 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Probe for constructing probe-polymer method of constructing probe-polymer and utilization thereof |
US7122310B2 (en) | 2000-10-11 | 2006-10-17 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Methods of constructing self-assembly of probes and method of detecting the same |
WO2002031192A1 (fr) * | 2000-10-11 | 2002-04-18 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Procede de construction d"un autoassemblage de sondes et leur procede de detection |
US7393636B2 (en) | 2001-11-08 | 2008-07-01 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Method for forming self-assembly substance using oligonucleotide synthesized by gene amplification reaction, self-assembly substance and method for detecting gene |
US7632639B2 (en) | 2003-02-21 | 2009-12-15 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Signal amplification method for detecting mutated gene |
JPWO2006093150A1 (ja) * | 2005-02-28 | 2008-08-07 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | シグナル増幅方法 |
WO2006093150A1 (ja) * | 2005-02-28 | 2006-09-08 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | シグナル増幅方法 |
US7862998B2 (en) | 2005-02-28 | 2011-01-04 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Assist probe and method of using the same |
WO2007108378A1 (ja) * | 2006-03-15 | 2007-09-27 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | シグナルプローブポリマーの形成方法 |
JPWO2007108378A1 (ja) * | 2006-03-15 | 2009-08-06 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | シグナルプローブポリマーの形成方法 |
US7927804B2 (en) | 2006-03-15 | 2011-04-19 | Eisai & Managment Co., Ltd. | Method of forming signal probe-polymer |
WO2010087409A1 (ja) * | 2009-01-29 | 2010-08-05 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | 核酸の検出方法 |
KR20210050250A (ko) * | 2019-10-28 | 2021-05-07 | 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 | 핵산분해효소 연쇄 반응 |
KR102261979B1 (ko) * | 2019-10-28 | 2021-06-07 | 재단법인 대구경북첨단의료산업진흥재단 | 핵산분해효소 연쇄 반응 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1002877B1 (en) | 2005-09-07 |
EP1002877A3 (en) | 2002-02-20 |
ES2248953T3 (es) | 2006-03-16 |
DE69927113T2 (de) | 2006-01-19 |
US6261846B1 (en) | 2001-07-17 |
US20010019835A1 (en) | 2001-09-06 |
JP3267576B2 (ja) | 2002-03-18 |
DE69927113D1 (de) | 2005-10-13 |
EP1002877A2 (en) | 2000-05-24 |
ATE304059T1 (de) | 2005-09-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP3267576B2 (ja) | プローブ高分子の形成方法 | |
CA2366231C (en) | One step sample preparation and detection of nucleic acids in complex biological samples | |
CA2250706C (en) | Method and reagent for detecting multiple nucleic acid sequences in a test sample | |
US6001614A (en) | Methods of synthesizing labeled polynucleotides by ligation of multiple oligomers | |
EP0826069B1 (en) | Wide dynamic range nucleic acid detection using an aggregate primer series | |
JP5330250B2 (ja) | 核酸の蛍光検出のための二本鎖プローブ | |
CA2595729A1 (en) | Methods and compositions for increased dynamic range detection of nucleic acid molecules | |
US20140315747A1 (en) | Bifunctional oligonucleotide probe for universal real time multianalyte detection | |
WO1997023647A1 (en) | Homogeneous amplification and detection of nucleic acids | |
KR100446358B1 (ko) | 프로우브 중합체 제작용 프로우브, 프로우브 중합체의 제작방법 및 그 이용 | |
JPH05508074A (ja) | インビトロにおける増幅を用いたポリヌクレオチド捕捉アッセイ | |
JP5099920B2 (ja) | 核酸試験用対照 | |
JP2021531778A (ja) | 核酸検出方法 | |
JPH09503910A (ja) | トラコーマ・クラミジア検出のためのオリゴヌクレオチド及び方法 | |
JP2004298197A (ja) | 溶液相サンドイッチハイブリダイゼーションアッセイに用いるためのhivプローブ | |
BRPI0801480B1 (pt) | métodos para detectar pelo menos um ácido nucleico alvo em uma pluralidade de ácidos nucleicos e para detectar cada um dentre uma pluralidade de ácidos nucleicos alvos, e, método multiplex para detectar uma pluralidade de dnas alvos | |
JPH07502655A (ja) | 溶液相サンドイッチハイブリダイゼーションアッセイに用いるためのcmvプローブ | |
CN106460065A (zh) | 用于基因组应用和治疗应用的核酸分子的克隆复制和扩增的系统和方法 | |
JPH05508323A (ja) | 蛍光分極によるdna/rnaの検出 | |
JP2015508995A (ja) | 核酸ハイブリダイゼーションプローブ | |
EP1785491A1 (en) | Dual-purpose primers and probes for providing enhanced hybridization assays by disruption of secondary structure formation | |
US20230059514A1 (en) | Virus detection | |
EP1017855B1 (en) | Methods of synthesizing polynucleotides by ligation of multiple oligomers | |
EP2824180B1 (en) | Method for detecting target nucleic acid | |
JP2023550568A (ja) | コンカテマーを用いた分析物検出方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080111 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090111 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090111 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100111 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110111 Year of fee payment: 9 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120111 Year of fee payment: 10 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120111 Year of fee payment: 10 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120111 Year of fee payment: 10 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130111 Year of fee payment: 11 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313111 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |