JP2000157285A - Ｌｄ７８遺伝子群ケモカインとホモログペプチド - Google Patents
Ｌｄ７８遺伝子群ケモカインとホモログペプチドInfo
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- JP2000157285A JP2000157285A JP10375852A JP37585298A JP2000157285A JP 2000157285 A JP2000157285 A JP 2000157285A JP 10375852 A JP10375852 A JP 10375852A JP 37585298 A JP37585298 A JP 37585298A JP 2000157285 A JP2000157285 A JP 2000157285A
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Abstract
(57)【要約】
本発明は、新規のケモカインＬＤ７８遺伝子群を同定
し、コードするアミノ酸配列及びヌクレオチドを提供す
る。本発明には、ＬＤ７８遺伝子群をコードするヌクレ
オチド配列の検出のためのハイブリダイゼーションプロ
ーブまたはオリゴヌクレオチド、ＬＤ７８遺伝子群をコ
ードする核酸分子に基づく、炎症または疾病の診断テス
ト方法、ＡＩＤＳ、癌の治療も含まれる。 【課題】本発明は、ＨＩＶ感染症における病気進行の度
合いを予測する方法である。また、ＨＩＶ感染症の新規
の治療法、癌の治療法に関するものである。 【解決手段】我々により単離された遺伝子群の数をＰＣ
Ｒ法により解析することにより病気進行の度合いを予測
する。また、この遺伝子群のポリペプチドを用いてＨＩ
Ｖ感染の治療、癌の治療を行う方法を提示する。
し、コードするアミノ酸配列及びヌクレオチドを提供す
る。本発明には、ＬＤ７８遺伝子群をコードするヌクレ
オチド配列の検出のためのハイブリダイゼーションプロ
ーブまたはオリゴヌクレオチド、ＬＤ７８遺伝子群をコ
ードする核酸分子に基づく、炎症または疾病の診断テス
ト方法、ＡＩＤＳ、癌の治療も含まれる。 【課題】本発明は、ＨＩＶ感染症における病気進行の度
合いを予測する方法である。また、ＨＩＶ感染症の新規
の治療法、癌の治療法に関するものである。 【解決手段】我々により単離された遺伝子群の数をＰＣ
Ｒ法により解析することにより病気進行の度合いを予測
する。また、この遺伝子群のポリペプチドを用いてＨＩ
Ｖ感染の治療、癌の治療を行う方法を提示する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規のケモカイン
ＬＤ７８遺伝子群を同定し、コードするアミノ酸配列及
びヌクレオチドを提供する。本発明には、ＬＤ７８遺伝
子群をコードするヌクレオチド配列の検出のためのハイ
ブリダイゼーションプローブまたはオリゴヌクレオチ
ド、ＬＤ７８遺伝子群をコードする核酸分子に基づく、
疾病の診断テスト方法、ＡＩＤＳ、癌の治療も含まれ
る。
ＬＤ７８遺伝子群を同定し、コードするアミノ酸配列及
びヌクレオチドを提供する。本発明には、ＬＤ７８遺伝
子群をコードするヌクレオチド配列の検出のためのハイ
ブリダイゼーションプローブまたはオリゴヌクレオチ
ド、ＬＤ７８遺伝子群をコードする核酸分子に基づく、
疾病の診断テスト方法、ＡＩＤＳ、癌の治療も含まれ
る。
【０００２】
【従来の技術】ＨＩＶ感染症における病気進行の度合い
を予測する方法についての遺伝子学的方法は確立されて
いず、病気進行の度合いに応じて治療法を選択すること
が困難である。ＨＩＶ感染症の治療においては、薬剤の
開発により改善してきているが、まだ、完全にウイルス
を消滅させることはできていない。また、薬剤耐性ウイ
ルスが出現するため薬剤が無効になってしまう症例が多
い。癌の治療法においては、手術による切除、抗癌剤、
放射線治療を用いた方法が開発されているが、まだ十分
な物ではなく、死因の第一である事に変わりない。
を予測する方法についての遺伝子学的方法は確立されて
いず、病気進行の度合いに応じて治療法を選択すること
が困難である。ＨＩＶ感染症の治療においては、薬剤の
開発により改善してきているが、まだ、完全にウイルス
を消滅させることはできていない。また、薬剤耐性ウイ
ルスが出現するため薬剤が無効になってしまう症例が多
い。癌の治療法においては、手術による切除、抗癌剤、
放射線治療を用いた方法が開発されているが、まだ十分
な物ではなく、死因の第一である事に変わりない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従って、ＨＩＶ感染症
における病気進行の度合いを遺伝子で予測することが望
まれている。ＨＩＶ感染症の治療においては、薬剤耐性
ウイルスが出現するなどの問題があるため、異なった観
点からの治療法の開発が望まれている。ケモカインは抗
ウイルス活性が報告されているが、有効濃度が高く１０
０から１０００ｎｇ／ｍｌと高いため、臨床的に実用性
が低いと考えられている。そこで、有効濃度が低いケモ
カインが望まれている。癌の治療法においては、癌の生
物学的特徴を分子標的として治療する方法が望まれてい
るが、抗体を用いた方法が開発されているが、まだ十分
な物ではない。
における病気進行の度合いを遺伝子で予測することが望
まれている。ＨＩＶ感染症の治療においては、薬剤耐性
ウイルスが出現するなどの問題があるため、異なった観
点からの治療法の開発が望まれている。ケモカインは抗
ウイルス活性が報告されているが、有効濃度が高く１０
０から１０００ｎｇ／ｍｌと高いため、臨床的に実用性
が低いと考えられている。そこで、有効濃度が低いケモ
カインが望まれている。癌の治療法においては、癌の生
物学的特徴を分子標的として治療する方法が望まれてい
るが、抗体を用いた方法が開発されているが、まだ十分
な物ではない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】抗ウイルス効果を持つヒ
トＬＤ７８（マウスのＭＩＰ−１αに相当する）遺伝子
（Ｏｂａｒｕ ｅｔａｌ．ＪＢ ９９，８８５−９４，
１９８６）に相同性の高い遺伝子群が存在することを最
近見い出した。この遺伝子群は１０個以上の遺伝子から
なり、互いに９４％から９８％の相同性を有する。この
遺伝子群の最大の特徴は、この遺伝子群の遺伝子を全て
持つヒトから一部分を持つヒトまで種々のパターンが存
在することである。このように遺伝子の部分欠損を含む
遺伝子のポリモルフィズムはこれ迄報告されていない。
塩基配列決定の結果、この遺伝子群には９３アミノ酸残
基の内５個のアミノ酸残基が種々の組み合わせで異なっ
ている遺伝子が存在した。２１、２２、２５、６２、７
０番目のアミノ酸残基が異なっており、２１、２２、２
５アミノ酸残基は第一エクソンに含まれ、６２アミノ酸
残基は、第二エクソン、７０アミノ酸残基は、第三エク
ソンに含まれていた。２１、２２アミノ酸残基を基にＬ
Ｄ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群に分類した。制限酵素Ｓｃｒ
ＦＩまたはＡｖａｌｌは、ＬＤ７８Ｂ群の２１、２２ア
ミノ酸残基をコードする領域を切断するが、ＬＤ７８Ａ
群を切断しない。このことを利用したＰＣＲ−ＲＦＬＰ
法により、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群の遺伝子の相対
的量を比較した。ＨＩＶ感染症の治療において、これら
のＬＤ７８遺伝子群のポリペプチドを酵母で発現させ、
ウイルス増殖抑制活性があるかを評価する。癌の治療法
においては、これらのＬＤ７８遺伝子群のポリペプチド
を酵母で発現させ、癌増殖抑制があるかを観察する。
トＬＤ７８（マウスのＭＩＰ−１αに相当する）遺伝子
（Ｏｂａｒｕ ｅｔａｌ．ＪＢ ９９，８８５−９４，
１９８６）に相同性の高い遺伝子群が存在することを最
近見い出した。この遺伝子群は１０個以上の遺伝子から
なり、互いに９４％から９８％の相同性を有する。この
遺伝子群の最大の特徴は、この遺伝子群の遺伝子を全て
持つヒトから一部分を持つヒトまで種々のパターンが存
在することである。このように遺伝子の部分欠損を含む
遺伝子のポリモルフィズムはこれ迄報告されていない。
塩基配列決定の結果、この遺伝子群には９３アミノ酸残
基の内５個のアミノ酸残基が種々の組み合わせで異なっ
ている遺伝子が存在した。２１、２２、２５、６２、７
０番目のアミノ酸残基が異なっており、２１、２２、２
５アミノ酸残基は第一エクソンに含まれ、６２アミノ酸
残基は、第二エクソン、７０アミノ酸残基は、第三エク
ソンに含まれていた。２１、２２アミノ酸残基を基にＬ
Ｄ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群に分類した。制限酵素Ｓｃｒ
ＦＩまたはＡｖａｌｌは、ＬＤ７８Ｂ群の２１、２２ア
ミノ酸残基をコードする領域を切断するが、ＬＤ７８Ａ
群を切断しない。このことを利用したＰＣＲ−ＲＦＬＰ
法により、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群の遺伝子の相対
的量を比較した。ＨＩＶ感染症の治療において、これら
のＬＤ７８遺伝子群のポリペプチドを酵母で発現させ、
ウイルス増殖抑制活性があるかを評価する。癌の治療法
においては、これらのＬＤ７８遺伝子群のポリペプチド
を酵母で発現させ、癌増殖抑制があるかを観察する。
【０００５】
【発明の実施の形態】遺伝子群の単離：ＬＤ７８−Ｇ
５’：ＡＣＴＡＡｇＡＡＴＡｇＣＣＴＴｇｇｇＴＴｇＡ
Ｃ、ＬＤ７８−Ｇ３’：ＴＴＣＣＣＴＣＣＡＴＴＴＣＡ
ＣＣＴＣＴＴＣＣのプライマーを用いてＰＣＲを行い、
全長のＬＤ７８遺伝子を増幅する。このＤＮＡを制限酵
素ＭｓｐＩとＳｔｕＩと切断し、１．２％のアガロース
で電気泳動する。エチジウムブロミドで染色すると、個
人により持つ遺伝子が異なっているため、検出されるバ
ンドが異なっている。このＤＮＡをＴＡ ｃｌｏｎｉｎ
ｇｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）によりクロ
ーニングし、制限酵素切断地図が異なる遺伝子を単離し
塩基配列を決定する（図１）。この方法により１０個の
異なる制限酵素切断地図をもつ遺伝子が単離された（図
２）。塩基配列の結果これらの遺伝子は９６−９８％の
相同性を持つことが明らかになった。アミノ酸配列で
は、ＬＤ７８α（Ｏｂａｒｕ ｅｔ ａｌ．ＪＢ ９
９，８８５−９４，１９８６）、ＬＤ７８β（Ｎａｋａ
ｏ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ
ｌ．，１０（７）：３６４６−３６５８（１９９０））
と同一の物の他に、アミノ酸残基が６２番と７０番が異
なる配列が見い出された。このように、ＬＤ７８αとＬ
Ｄ７８βと異なるアミノ酸配列をもつ、これらの配列は
データベースにおいても検出されず新規と思われる（図
３）。 病気進行の予測：これらの遺伝子群を２１、２２アミノ
酸残基をもとに、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群に２群に
大別した。ヒトの末梢血リンパ球からＤＮＡを抽出し ＬＤ７８ｃｏｐ５’：ｇｔｃａｔｇａｇｔｔａｇａｇｃ
ｔｇａｇａｇｔｔａｇａｇ ＬＤ７８ｃｏｐ３’：ｔｇ
ａｔｇｔｇｇｔｃｔａａｃｃａｔｇｇｃｃａｇａｇａｇ
ｔプライマーでＰＣＲし、制限酵素Ａｖａｌｌで切断す
ると、ＬＤ７８Ｂ群は、切断されるが、ＬＤ７８Ａ群は
切断されない（図４）。２％のアガロースで電気泳動す
ると、ＬＤ７８Ｂ群は２７０ｂｐ、ＬＤ７８Ａ群は３４
０ｂｐのバンドが検出される。これをＣＣＤカメラを用
いたデンシトグラフで解析し、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８
Ｂ群の遺伝子の数を比較することができる。 同様にＬＤ７８−６２８Ｃ：ａｇａｃｔａｇｇａｇｇｇ
ｃｔａａｇａｃｃ、ＬＤ７８−３６５：ＡＴＧＣＡＧＧ
ＴＣＴＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴでＰＣＲを行い、
制限酵素ＳｃｒＦＩで切断すると、ＬＤ７８Ｂ群は、切
断されるが、ＬＤ７８Ａ群は切断されない（図５）。２
％のアガロースで電気泳動すると、ＬＤ７８Ｂ群は２０
６ｂｐ、ＬＤ７８Ａ群は２６２ｂｐのバンドが検出され
る。これをＣＣＤカメラを用いたデンシトグラフで解析
し、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群の遺伝子の数を比較す
ることができる。 抗ウイルス効果：ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群の遺伝子
を酵母発現ベクター（Ｐｉｃｈｉａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ Ｋｉｔ Ｉｎｖｉｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）に導入
し、培養上清を濃縮し、イオン交換カラム（ＨｉＴｒａ
ｐＳＰ）で分画し、逆相カラム（Ｖｙｄａｃ Ｐｒｏｔ
Ｃ４）で分離した。このポリペプチドをヒト子宮頚癌
の細胞株（Ｈｅｌａ ｃｅｌｌ）にＣＤ４とβ−ｇａｌ
ＬＴＲとケモカインレセプターの一つＣＣＲ５を発現さ
せた細胞株に２時間培養した後、ＨＩＶウイルス液を加
え２日間培養する。その後、Ｘ−ｇａｌを加えると感染
した細胞では、ＨＩＶ上の遺伝子ｔａｔが発現されＬＴ
Ｒを活性化しガラクトシダーゼの発現を増加し、Ｘ−ｇ
ａｌを分解し青色に細胞核が染まる。この青染した細胞
核を数えることにより感染の阻止効果が評価できる。 抗腫瘍効果：ヒト子宮頚癌の細胞株（Ｈｅｌａ ｃｅｌ
ｌ）にケモカインレセプターの一つＣＣＲ５を発現させ
た細胞株にＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群のポリペプチド
を加え一晩培養し、観察する。また生細胞数をＷＳＴ１
法を用いて計測する。
５’：ＡＣＴＡＡｇＡＡＴＡｇＣＣＴＴｇｇｇＴＴｇＡ
Ｃ、ＬＤ７８−Ｇ３’：ＴＴＣＣＣＴＣＣＡＴＴＴＣＡ
ＣＣＴＣＴＴＣＣのプライマーを用いてＰＣＲを行い、
全長のＬＤ７８遺伝子を増幅する。このＤＮＡを制限酵
素ＭｓｐＩとＳｔｕＩと切断し、１．２％のアガロース
で電気泳動する。エチジウムブロミドで染色すると、個
人により持つ遺伝子が異なっているため、検出されるバ
ンドが異なっている。このＤＮＡをＴＡ ｃｌｏｎｉｎ
ｇｋｉｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）によりクロ
ーニングし、制限酵素切断地図が異なる遺伝子を単離し
塩基配列を決定する（図１）。この方法により１０個の
異なる制限酵素切断地図をもつ遺伝子が単離された（図
２）。塩基配列の結果これらの遺伝子は９６−９８％の
相同性を持つことが明らかになった。アミノ酸配列で
は、ＬＤ７８α（Ｏｂａｒｕ ｅｔ ａｌ．ＪＢ ９
９，８８５−９４，１９８６）、ＬＤ７８β（Ｎａｋａ
ｏ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌ．ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ
ｌ．，１０（７）：３６４６−３６５８（１９９０））
と同一の物の他に、アミノ酸残基が６２番と７０番が異
なる配列が見い出された。このように、ＬＤ７８αとＬ
Ｄ７８βと異なるアミノ酸配列をもつ、これらの配列は
データベースにおいても検出されず新規と思われる（図
３）。 病気進行の予測：これらの遺伝子群を２１、２２アミノ
酸残基をもとに、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群に２群に
大別した。ヒトの末梢血リンパ球からＤＮＡを抽出し ＬＤ７８ｃｏｐ５’：ｇｔｃａｔｇａｇｔｔａｇａｇｃ
ｔｇａｇａｇｔｔａｇａｇ ＬＤ７８ｃｏｐ３’：ｔｇ
ａｔｇｔｇｇｔｃｔａａｃｃａｔｇｇｃｃａｇａｇａｇ
ｔプライマーでＰＣＲし、制限酵素Ａｖａｌｌで切断す
ると、ＬＤ７８Ｂ群は、切断されるが、ＬＤ７８Ａ群は
切断されない（図４）。２％のアガロースで電気泳動す
ると、ＬＤ７８Ｂ群は２７０ｂｐ、ＬＤ７８Ａ群は３４
０ｂｐのバンドが検出される。これをＣＣＤカメラを用
いたデンシトグラフで解析し、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８
Ｂ群の遺伝子の数を比較することができる。 同様にＬＤ７８−６２８Ｃ：ａｇａｃｔａｇｇａｇｇｇ
ｃｔａａｇａｃｃ、ＬＤ７８−３６５：ＡＴＧＣＡＧＧ
ＴＣＴＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴでＰＣＲを行い、
制限酵素ＳｃｒＦＩで切断すると、ＬＤ７８Ｂ群は、切
断されるが、ＬＤ７８Ａ群は切断されない（図５）。２
％のアガロースで電気泳動すると、ＬＤ７８Ｂ群は２０
６ｂｐ、ＬＤ７８Ａ群は２６２ｂｐのバンドが検出され
る。これをＣＣＤカメラを用いたデンシトグラフで解析
し、ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群の遺伝子の数を比較す
ることができる。 抗ウイルス効果：ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群の遺伝子
を酵母発現ベクター（Ｐｉｃｈｉａ Ｅｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎ Ｋｉｔ Ｉｎｖｉｒｏｇｅｎ，ＵＳＡ）に導入
し、培養上清を濃縮し、イオン交換カラム（ＨｉＴｒａ
ｐＳＰ）で分画し、逆相カラム（Ｖｙｄａｃ Ｐｒｏｔ
Ｃ４）で分離した。このポリペプチドをヒト子宮頚癌
の細胞株（Ｈｅｌａ ｃｅｌｌ）にＣＤ４とβ−ｇａｌ
ＬＴＲとケモカインレセプターの一つＣＣＲ５を発現さ
せた細胞株に２時間培養した後、ＨＩＶウイルス液を加
え２日間培養する。その後、Ｘ−ｇａｌを加えると感染
した細胞では、ＨＩＶ上の遺伝子ｔａｔが発現されＬＴ
Ｒを活性化しガラクトシダーゼの発現を増加し、Ｘ−ｇ
ａｌを分解し青色に細胞核が染まる。この青染した細胞
核を数えることにより感染の阻止効果が評価できる。 抗腫瘍効果：ヒト子宮頚癌の細胞株（Ｈｅｌａ ｃｅｌ
ｌ）にケモカインレセプターの一つＣＣＲ５を発現させ
た細胞株にＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群のポリペプチド
を加え一晩培養し、観察する。また生細胞数をＷＳＴ１
法を用いて計測する。
【０００６】
【発明の効果】病気進行の予測： 長期非進行者２０例
と進行者５０例を上記の方法、制限酵素Ａｖａｌｌを用
いた方法で解析したところ、長期非進行者では、ＬＤ７
８Ａ群が優位であり、進行者ではＬＤ７８Ｂ群が優位で
あった（図６）。また、同様に、長期非進行者２０例と
進行者５０例を上記の方法、制限酵素ＳｃｒＦＩを用い
た方法で解析したところ、長期非進行者では、ＬＤ７８
Ａ群が優位であり、進行者ではＬＤ７８Ｂ群が優位であ
った（図７）。このように、制限酵素Ａｖａｌｌまた
は、ＳｃｒＦＩを用いた何れの方法でも長期非進行者で
は、ＬＤ７８Ａ群が優位であり、進行者ではＬＤ７８Ｂ
群が優位であり、この方法の有益性がしめされている。 抗ウイルス効果：ＬＤ７８Ａ群とＢ群の抗ウイルス効果
は、ＬＤ７８Ｂが、ＬＤ７８Ａより抗ウイルス効果が２
０倍以上強い事が分かった（図８）。ＬＤ７８−αでは
既に、抗ウイルス効果が知られているが、本発明ではそ
れより強い抗ウイルス活性を有しており、ＨＩＶの感染
阻止に非常に有益と思われる。 抗腫瘍効果：ＬＤ７８Ａ群とＢ群の抗腫瘍効果を上記の
方法で観察した。ＬＤ７８Ｂ群のポリペプチドでは、細
胞核が濃縮し、細胞質が崩壊しているのが観察される。
しかし、ＬＤ７８Ａ群のポリペプチドでは、何ら変化
は、観察されなかった。また、生細胞数をＷＳＴ１アッ
セイで調べたところ、ＬＤ７８Ｂ群のポリペプチドで
は、濃度依存性に生細胞数が減少したのに対してＬＤ７
８Ａ群のポリペプチドでは生細胞数の減少は認められな
かった（図９）。このことは、ＬＤ７８Ｂ群のポリペプ
チドにより強い抗腫瘍効果があることを示している。こ
のような活性は、これまでケモカインにおいては、全く
報告がなく新規の活性である。また、このような活性の
存在は、癌の治療法に新しい戦略を与えると言う点で極
めて有益と思われる。
と進行者５０例を上記の方法、制限酵素Ａｖａｌｌを用
いた方法で解析したところ、長期非進行者では、ＬＤ７
８Ａ群が優位であり、進行者ではＬＤ７８Ｂ群が優位で
あった（図６）。また、同様に、長期非進行者２０例と
進行者５０例を上記の方法、制限酵素ＳｃｒＦＩを用い
た方法で解析したところ、長期非進行者では、ＬＤ７８
Ａ群が優位であり、進行者ではＬＤ７８Ｂ群が優位であ
った（図７）。このように、制限酵素Ａｖａｌｌまた
は、ＳｃｒＦＩを用いた何れの方法でも長期非進行者で
は、ＬＤ７８Ａ群が優位であり、進行者ではＬＤ７８Ｂ
群が優位であり、この方法の有益性がしめされている。 抗ウイルス効果：ＬＤ７８Ａ群とＢ群の抗ウイルス効果
は、ＬＤ７８Ｂが、ＬＤ７８Ａより抗ウイルス効果が２
０倍以上強い事が分かった（図８）。ＬＤ７８−αでは
既に、抗ウイルス効果が知られているが、本発明ではそ
れより強い抗ウイルス活性を有しており、ＨＩＶの感染
阻止に非常に有益と思われる。 抗腫瘍効果：ＬＤ７８Ａ群とＢ群の抗腫瘍効果を上記の
方法で観察した。ＬＤ７８Ｂ群のポリペプチドでは、細
胞核が濃縮し、細胞質が崩壊しているのが観察される。
しかし、ＬＤ７８Ａ群のポリペプチドでは、何ら変化
は、観察されなかった。また、生細胞数をＷＳＴ１アッ
セイで調べたところ、ＬＤ７８Ｂ群のポリペプチドで
は、濃度依存性に生細胞数が減少したのに対してＬＤ７
８Ａ群のポリペプチドでは生細胞数の減少は認められな
かった（図９）。このことは、ＬＤ７８Ｂ群のポリペプ
チドにより強い抗腫瘍効果があることを示している。こ
のような活性は、これまでケモカインにおいては、全く
報告がなく新規の活性である。また、このような活性の
存在は、癌の治療法に新しい戦略を与えると言う点で極
めて有益と思われる。
【０００７】
【図１】ＬＤ７８遺伝子群の単離：ヒト末梢血ＤＮＡを
ＰＣＲし、ＬＤ７８遺伝子群を増幅し制限酵素で切断し
１．３％アガロースゲルで電気泳動すると、個人のもつ
ＬＤ７８遺伝子群の組み合わせが違うため、出現するバ
ンドの組み合わせが異なる。また遺伝子をサブクローニ
ングし遺伝子群のなかの一つ一つの遺伝子を単離し塩基
配列を決定する。
ＰＣＲし、ＬＤ７８遺伝子群を増幅し制限酵素で切断し
１．３％アガロースゲルで電気泳動すると、個人のもつ
ＬＤ７８遺伝子群の組み合わせが違うため、出現するバ
ンドの組み合わせが異なる。また遺伝子をサブクローニ
ングし遺伝子群のなかの一つ一つの遺伝子を単離し塩基
配列を決定する。
【図２】ＬＤ７８遺伝子群の制限酵素切断地図：少なく
とも１０個の遺伝子が単離された。
とも１０個の遺伝子が単離された。
【図３】ＬＤ７８遺伝子群のアミノ酸配列の比較：五個
のアミノ酸が異なっている。
のアミノ酸が異なっている。
【図４】ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群遺伝子数の比較
（Ａｖａｌｌ）： ＬＤ７８ｃｏｐ５’：ｇｔｃａｔｇａｇｔｔａｇａｇｃ
ｔｇａｇａｇｔｔａｇａｇ ＬＤ７８ｃｏｐ３’：ｔｇ
ａｔｇｔｇｇｔｃｔａａｃｃａｔｇｇｃｃａｇａｇａｇ
ｔプライマーでＰＣＲし、制限酵素Ａｖａｌｌで切断す
ると、ＬＤ７８Ｂ群は、切断されるが、ＬＤ７８Ａ群は
切断されない。２％のアガロースで電気泳動すると、Ｌ
Ｄ７８Ｂ群は２７０ｂｐ、ＬＤ７８Ａ群は３４０ｂｐの
バンドが検出される。これをＣＣＤカメラで撮影し各バ
ンドの濃さを決めた。
（Ａｖａｌｌ）： ＬＤ７８ｃｏｐ５’：ｇｔｃａｔｇａｇｔｔａｇａｇｃ
ｔｇａｇａｇｔｔａｇａｇ ＬＤ７８ｃｏｐ３’：ｔｇ
ａｔｇｔｇｇｔｃｔａａｃｃａｔｇｇｃｃａｇａｇａｇ
ｔプライマーでＰＣＲし、制限酵素Ａｖａｌｌで切断す
ると、ＬＤ７８Ｂ群は、切断されるが、ＬＤ７８Ａ群は
切断されない。２％のアガロースで電気泳動すると、Ｌ
Ｄ７８Ｂ群は２７０ｂｐ、ＬＤ７８Ａ群は３４０ｂｐの
バンドが検出される。これをＣＣＤカメラで撮影し各バ
ンドの濃さを決めた。
【図５】ＬＤ７８Ａ群とＬＤ７８Ｂ群遺伝子数の比較
（ＳｃｒＦＩ） ＬＤ７８−６２８Ｃ：ａｇａｃｔａｇｇａｇｇｇｃｔａ
ａｇａｃｃ、ＬＤ７８−３６５：ＡＴＧＣＡＧＧＴＣＴ
ＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴでＰＣＲを行い、制限酵
素ＳｃｒＦＩで切断すると、ＬＤ７８Ｂ群は、切断され
るが、ＬＤ７８Ａ群は切断されない。２％のアガロース
で電気泳動すると、ＬＤ７８Ｂ群は２０６ｂｐ、ＬＤ７
８Ａ群は２６２ｂｐのバンドが検出される。これをＣＣ
Ｄカメラで撮影し各バンドの濃さを決めた。
（ＳｃｒＦＩ） ＬＤ７８−６２８Ｃ：ａｇａｃｔａｇｇａｇｇｇｃｔａ
ａｇａｃｃ、ＬＤ７８−３６５：ＡＴＧＣＡＧＧＴＣＴ
ＣＣＡＣＴＧＣＴＧＣＣＣＴＴでＰＣＲを行い、制限酵
素ＳｃｒＦＩで切断すると、ＬＤ７８Ｂ群は、切断され
るが、ＬＤ７８Ａ群は切断されない。２％のアガロース
で電気泳動すると、ＬＤ７８Ｂ群は２０６ｂｐ、ＬＤ７
８Ａ群は２６２ｂｐのバンドが検出される。これをＣＣ
Ｄカメラで撮影し各バンドの濃さを決めた。
【図６】ＬＤ７８−Ａ群とＬＤ７８−Ｂ群遺伝子数の比
較（Ａｖａｌｌ）：デンシトグラフで解析した結果、Ｌ
Ｄ７８Ｂ群由来のバンドの濃さをＬＤ７８Ａ群由来のバ
ンドの濃さで割った数値をプロットしてある。丸は症例
を表している。ＬＴＮＰは長期非進行者、Ｐは進行者で
ある。
較（Ａｖａｌｌ）：デンシトグラフで解析した結果、Ｌ
Ｄ７８Ｂ群由来のバンドの濃さをＬＤ７８Ａ群由来のバ
ンドの濃さで割った数値をプロットしてある。丸は症例
を表している。ＬＴＮＰは長期非進行者、Ｐは進行者で
ある。
【図７】ＬＤ７８−Ａ群とＬＤ７８−Ｂ群遺伝子数の比
較（ＳｃｒＦＩ）デンシトグラフで解析した結果、ＬＤ
７８Ｂ群由来のバンドの濃さをＬＤ７８Ａ群由来のバン
ドの濃さで割った数値をプロットしてある。丸は症例を
表している。ＬＴＮＰは長期非進行者、Ｐは進行者であ
る。
較（ＳｃｒＦＩ）デンシトグラフで解析した結果、ＬＤ
７８Ｂ群由来のバンドの濃さをＬＤ７８Ａ群由来のバン
ドの濃さで割った数値をプロットしてある。丸は症例を
表している。ＬＴＮＰは長期非進行者、Ｐは進行者であ
る。
【図８】ＬＤ７８ＡとＬＤ７８Ｂの抗ウイルス効果（Ｍ
ＡＧＩ／ＣＣＲ５） 青染した細胞核の数を計測した。
ＡＧＩ／ＣＣＲ５） 青染した細胞核の数を計測した。
【図９】ＬＤ７８ＡとＬＤ７８Ｂの抗腫瘍効果（ＷＳＴ
−１アッセイの原理） 各濃度における４５０ｎｍの吸光度をプロットしてい
る。
−１アッセイの原理） 各濃度における４５０ｎｍの吸光度をプロットしてい
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ａ６１Ｋ 37/02
Claims (4)
- 【請求項１】ＬＤ７８遺伝子群のポリペプチド、または
その相補的ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
配列を含むことを特徴とする精製ポリヌクレオチド。 - 【請求項２】生物学的試料においてＬＤ７８遺伝子群を
コードするヌクレオチド配列を検出するための診断テス
ト方法であって、ａ）前記生物学的試料と、配列番号：
１のヌクレオチド配列を含む第１ヌクレオチド配列、若
しくはそのフラグメントとを、核酸ハイブリダイゼーシ
ョン複合体の形成に適切な条件の下で結合する過程と、
ｂ）前記ハイブリダイゼーション複合体を検出する過程
であって、前記複合体の存在が、前記生物学的試料にお
けるＬＤ７８遺伝子群をコードする第２ヌクレオチド配
列の存在と相関している、該過程と、ｃ）前記試料にお
ける前記第２ヌクレオチド配列の量と標準値とを比較
し、前記第２ヌクレオチド配列の量が前記標準値と異な
っているか否かを判定する過程であって、前記第２ヌク
レオチド配列の異常レベルの存在が、炎症に関連する状
態と正の相関を有する、該過程とを有することを特徴と
する診断テスト方法。 - 【請求項３】ＨＩＶに関連する疾病を治療するための薬
化学的組成物であって、効果的な量の、請求項１に記載
のポリペプチド配列と、薬化学的に適格な担体とを有す
ることを特徴とするＨＩＶに関連する疾病を治療するた
めの薬化学的組成物。 - 【請求項４】癌に関連する疾病を患う患者を治療する方
法であって、前記患者に、請求項１に記載の前記薬化学
的組成物を効果的な量投与する過程を含むことを特徴と
する癌に関連する疾病を患う患者を治療する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10375852A JP2000157285A (ja) | 1998-11-30 | 1998-11-30 | Ｌｄ７８遺伝子群ケモカインとホモログペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10375852A JP2000157285A (ja) | 1998-11-30 | 1998-11-30 | Ｌｄ７８遺伝子群ケモカインとホモログペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000157285A true JP2000157285A (ja) | 2000-06-13 |
Family
ID=18506164
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10375852A Pending JP2000157285A (ja) | 1998-11-30 | 1998-11-30 | Ｌｄ７８遺伝子群ケモカインとホモログペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000157285A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006080171A1 (ja) * | 2005-01-31 | 2006-08-03 | Effector Cell Institute, Inc. | 免疫増強剤 |
-
1998
- 1998-11-30 JP JP10375852A patent/JP2000157285A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006080171A1 (ja) * | 2005-01-31 | 2006-08-03 | Effector Cell Institute, Inc. | 免疫増強剤 |
| JPWO2006080171A1 (ja) * | 2005-01-31 | 2008-06-19 | 株式会社 エフェクター細胞研究所 | 免疫増強剤 |
| US7662781B2 (en) | 2005-01-31 | 2010-02-16 | Eci, Inc. | Immunopotentiating agent |
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