JP2000135083A - ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造法 - Google Patents
ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸を簡便かつ
大量に、しかも安価に製造することのできる新しい製造
方法と、この製造方法に用いる遺伝子組換え生物を提供
する。 【解決手段】 ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵
素遺伝子と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導
入して作出した形質転換微生物と、この形質転換微生物
を炭素源存在下で増殖させ、この増殖微生物からポリ−
３−ヒドロキシアルカン酸を単離・精製することを特徴
とするポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造方法。
大量に、しかも安価に製造することのできる新しい製造
方法と、この製造方法に用いる遺伝子組換え生物を提供
する。 【解決手段】 ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵
素遺伝子と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導
入して作出した形質転換微生物と、この形質転換微生物
を炭素源存在下で増殖させ、この増殖微生物からポリ−
３−ヒドロキシアルカン酸を単離・精製することを特徴
とするポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】この出願は、ポリ−３−ヒド
ロキシアルカン酸の製造方法と、このポリ−３−ヒドロ
キシアルカン酸を大量に産生する遺伝子組換え生物に関
するものである。さらに詳しくは、この出願は、代替プ
ラスチック等として有用な高純度のポリ−３−ヒドロキ
シアルカン酸を簡便かつ大量に、しかも安価に製造する
方法と、この方法に用いる新規生物に関するものであ
る。
ロキシアルカン酸の製造方法と、このポリ−３−ヒドロ
キシアルカン酸を大量に産生する遺伝子組換え生物に関
するものである。さらに詳しくは、この出願は、代替プ
ラスチック等として有用な高純度のポリ−３−ヒドロキ
シアルカン酸を簡便かつ大量に、しかも安価に製造する
方法と、この方法に用いる新規生物に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸（以
下、「Ｐ（３ＨＡ）」と記載することがある）は、３−
ヒドロキシアルカン酸の２以上がエステル結合等により
重合した化合物の総称であり、例えば、ポリ−３−ヒド
ロキシブタン酸、ポリ−３−ヒドロキシヘキサン酸等が
ある。
下、「Ｐ（３ＨＡ）」と記載することがある）は、３−
ヒドロキシアルカン酸の２以上がエステル結合等により
重合した化合物の総称であり、例えば、ポリ−３−ヒド
ロキシブタン酸、ポリ−３−ヒドロキシヘキサン酸等が
ある。
【０００３】このＰ（３ＨＡ）は、近年、代替プラスチ
ック等への利用が有望視されているが、化学合成による
製造はコスト高となるため、バイオリアクター等による
遺伝子工学的製造方法が検討されている。この遺伝子工
学的方法によるＰ（３ＨＡ）の製造では、Ｐ（３ＨＡ）
を蓄積しない大腸菌等の宿主生物に他の生物由来のＰ
（３ＨＡ）重合酵素の遺伝子を導入して宿主生物を形質
転換し、この形質転換体をグルコース等の炭素源を含む
培地で培養する方法が試みられてきた。大腸菌等のＰ
（３ＨＡ）非蓄積生物は、その重合酵素を産生しないた
めにＰ（３ＨＡ）を蓄積しないと考えられるからであ
る。
ック等への利用が有望視されているが、化学合成による
製造はコスト高となるため、バイオリアクター等による
遺伝子工学的製造方法が検討されている。この遺伝子工
学的方法によるＰ（３ＨＡ）の製造では、Ｐ（３ＨＡ）
を蓄積しない大腸菌等の宿主生物に他の生物由来のＰ
（３ＨＡ）重合酵素の遺伝子を導入して宿主生物を形質
転換し、この形質転換体をグルコース等の炭素源を含む
培地で培養する方法が試みられてきた。大腸菌等のＰ
（３ＨＡ）非蓄積生物は、その重合酵素を産生しないた
めにＰ（３ＨＡ）を蓄積しないと考えられるからであ
る。
【０００４】しかしながら、Ｐ（３ＨＡ）非蓄積生物に
重合酵素遺伝子を導入しただけではその形質転換体にお
けるＰ（３ＨＡ）蓄積能を増大させることはできないこ
とから、大腸菌等におけるＰ（３ＨＡ）の非蓄積性は、
その生物がＰ（３ＨＡ）重合酵素を産生しないことだけ
ではなく、ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵素の
基質となる３−ヒドロキシアシルＣｏＡの産生能が極め
て低いことによるものであると推測されている。そこ
で、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子とともに、３−ヒドロ
キシアシルＣｏＡの産生を促進するための脂肪酸合成酵
素遺伝子を宿主生物に導入することが試みが報告されて
いる（Ｗilliams 等：Protein Expr. Purif. 7:203-21
1, 1996）。この従来方法では、ラット由来の脂肪酸合
成酵素の変異遺伝子と、Ａlcaligenes eutrophus由来の
ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵素遺伝子とを昆
虫（Ｓpodoptera frugiperda）細胞に導入し、昆虫細胞
用培地で３日間培養した結果、培地１リットル当たり60
0 mgの乾燥細胞、１mgのポリ−３−ヒドロキシアルカン
酸を得ることに成功している。
重合酵素遺伝子を導入しただけではその形質転換体にお
けるＰ（３ＨＡ）蓄積能を増大させることはできないこ
とから、大腸菌等におけるＰ（３ＨＡ）の非蓄積性は、
その生物がＰ（３ＨＡ）重合酵素を産生しないことだけ
ではなく、ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵素の
基質となる３−ヒドロキシアシルＣｏＡの産生能が極め
て低いことによるものであると推測されている。そこ
で、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子とともに、３−ヒドロ
キシアシルＣｏＡの産生を促進するための脂肪酸合成酵
素遺伝子を宿主生物に導入することが試みが報告されて
いる（Ｗilliams 等：Protein Expr. Purif. 7:203-21
1, 1996）。この従来方法では、ラット由来の脂肪酸合
成酵素の変異遺伝子と、Ａlcaligenes eutrophus由来の
ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵素遺伝子とを昆
虫（Ｓpodoptera frugiperda）細胞に導入し、昆虫細胞
用培地で３日間培養した結果、培地１リットル当たり60
0 mgの乾燥細胞、１mgのポリ−３−ヒドロキシアルカン
酸を得ることに成功している。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、Ｗilli
ams 等の従来方法では、得られるＰ（３ＨＡ）は、乾燥
細胞重量当たり0.17％と極めて少量であり、工業的規模
での大量製造には適さない。また、宿主生物が昆虫細胞
であるため、培養に特別な技術を必要とするといった問
題点も存在した。
ams 等の従来方法では、得られるＰ（３ＨＡ）は、乾燥
細胞重量当たり0.17％と極めて少量であり、工業的規模
での大量製造には適さない。また、宿主生物が昆虫細胞
であるため、培養に特別な技術を必要とするといった問
題点も存在した。
【０００６】この出願の発明は、以上のとおりの事情に
鑑みてなされたものであって、従来方法の問題点を解消
し、高純度のＰ（３ＨＡ）を簡便かつ大量に、しかも安
価に製造することのできる新しいＰ（３ＨＡ）製造方法
を提供することを課題としている。またこの出願の発明
は、この製造方法に用いる遺伝子組換え生物を提供する
ことを課題としている。
鑑みてなされたものであって、従来方法の問題点を解消
し、高純度のＰ（３ＨＡ）を簡便かつ大量に、しかも安
価に製造することのできる新しいＰ（３ＨＡ）製造方法
を提供することを課題としている。またこの出願の発明
は、この製造方法に用いる遺伝子組換え生物を提供する
ことを課題としている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】この出願は、前記の課題
を解決する発明として、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子
と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導入して形
質転換し、この形質転換微生物を炭素源存在下で増殖さ
せ、この増殖微生物からＰ（３ＨＡ）を単離・精製する
ことを特徴とするＰ（３ＨＡ）の製造方法を提供する。
を解決する発明として、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子
と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導入して形
質転換し、この形質転換微生物を炭素源存在下で増殖さ
せ、この増殖微生物からＰ（３ＨＡ）を単離・精製する
ことを特徴とするＰ（３ＨＡ）の製造方法を提供する。
【０００８】またこの出願は、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺
伝子と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導入す
ることによって作出された形質転換微生物を提供する。
なお、これらの発明においては、宿主微生物が大腸菌で
あることを好ましい態様としている。また、脂肪酸合成
酵素遺伝子が微生物由来の脂肪酸合成酵素遺伝子群を構
成する遺伝子の１種または２種以上であること、そして
この場合の微生物が大腸菌であることを別の好ましい態
様としてもいる。
伝子と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導入す
ることによって作出された形質転換微生物を提供する。
なお、これらの発明においては、宿主微生物が大腸菌で
あることを好ましい態様としている。また、脂肪酸合成
酵素遺伝子が微生物由来の脂肪酸合成酵素遺伝子群を構
成する遺伝子の１種または２種以上であること、そして
この場合の微生物が大腸菌であることを別の好ましい態
様としてもいる。
【０００９】さらにこの出願は、前記の方法に使用する
発現ベクターとして、グラム陰性細菌用広宿主域発現ベ
クターｐＪＲＤＴrc１を提供する。
発現ベクターとして、グラム陰性細菌用広宿主域発現ベ
クターｐＪＲＤＴrc１を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】この発明の方法に使用するＰ（３
ＨＡ）重合酵素遺伝子は、各種のＰ（３ＨＡ）蓄積生物
に由来する遺伝子を用いることができる。そのような遺
伝子としては例えば、Ａeromonas caviae 由来のＰ（３
ＨＡ）重合酵素遺伝子 phaＣAC（Fukui et al., J. Bac
teriol. 179:4821-4830, 1997 ）、Ａlcaligenes eutro
phus由来のＰ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子 phbＣＡe （Pe
oples et al., J. Biol. Chem.262:15298-15303, 1989
）、Pseudomonas aeruginosa由来の重合酵素遺伝子 ph
aＣ１Ｐa （Timm et al., Eur. J. Biochem. 209:15-3
0, 1992 ）等である。
ＨＡ）重合酵素遺伝子は、各種のＰ（３ＨＡ）蓄積生物
に由来する遺伝子を用いることができる。そのような遺
伝子としては例えば、Ａeromonas caviae 由来のＰ（３
ＨＡ）重合酵素遺伝子 phaＣAC（Fukui et al., J. Bac
teriol. 179:4821-4830, 1997 ）、Ａlcaligenes eutro
phus由来のＰ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子 phbＣＡe （Pe
oples et al., J. Biol. Chem.262:15298-15303, 1989
）、Pseudomonas aeruginosa由来の重合酵素遺伝子 ph
aＣ１Ｐa （Timm et al., Eur. J. Biochem. 209:15-3
0, 1992 ）等である。
【００１１】あるいは、これらの公知遺伝子をプローブ
として、任意生物種のゲノムＤＮＡから単離したＰ（３
ＨＡ）重合酵素遺伝子を用いることもできる。これらの
Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子は、微生物用の発現ベクタ
ーに組み込み、この組換えベクターを定法に従って大腸
菌等の微生物に導入することによって形質転換微生物を
作出することができる。発現ベクターは、微生物中で複
製可能なオリジン、プロモーター、リボソーム結合部
位、遺伝子クローニング部位、ターミネーター等を有す
る公知の微生物用発現ベクター（例えば、大腸菌用発現
ベクターとしては、ｐＵＣ系、ｐＢluescript II、ｐＥ
Ｔ発現システム、ｐＧＥＸ発現システム）などを用いる
ことができる。また、この出願の発明者らが新たに構築
したプラスミドベクターｐＪＲＤＴrc１（図１）を用い
ることもできる。このｐＪＲＤＴｒｃ１は、図１に示し
たように、市販のｐＴrc99ＡとｐＪＲＤ215とを組み合
わせて構築した新規ベクターであり、そのマルチクロー
ニングサイトに前記のＰ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子 pha
ＣAC等を確実に連結することができる。 この発明の方
法に使用する脂肪酸合成酵素遺伝子は、真核生物や微生
物由来の公知の遺伝子である。例えば、大腸菌Ｅscheri
chia coli 由来の脂肪酸合成酵素遺伝子 fab（Battner
et al., Science 277:1453-1474, 1997 ）、Bacillus s
ubtilis 由来の脂肪酸合成酵素遺伝子 fab（Kunst et a
l., Nature 390:249-256, 1997）等であり、これらを単
独もしくは複数組み合わせて使用することができる。
として、任意生物種のゲノムＤＮＡから単離したＰ（３
ＨＡ）重合酵素遺伝子を用いることもできる。これらの
Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子は、微生物用の発現ベクタ
ーに組み込み、この組換えベクターを定法に従って大腸
菌等の微生物に導入することによって形質転換微生物を
作出することができる。発現ベクターは、微生物中で複
製可能なオリジン、プロモーター、リボソーム結合部
位、遺伝子クローニング部位、ターミネーター等を有す
る公知の微生物用発現ベクター（例えば、大腸菌用発現
ベクターとしては、ｐＵＣ系、ｐＢluescript II、ｐＥ
Ｔ発現システム、ｐＧＥＸ発現システム）などを用いる
ことができる。また、この出願の発明者らが新たに構築
したプラスミドベクターｐＪＲＤＴrc１（図１）を用い
ることもできる。このｐＪＲＤＴｒｃ１は、図１に示し
たように、市販のｐＴrc99ＡとｐＪＲＤ215とを組み合
わせて構築した新規ベクターであり、そのマルチクロー
ニングサイトに前記のＰ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子 pha
ＣAC等を確実に連結することができる。 この発明の方
法に使用する脂肪酸合成酵素遺伝子は、真核生物や微生
物由来の公知の遺伝子である。例えば、大腸菌Ｅscheri
chia coli 由来の脂肪酸合成酵素遺伝子 fab（Battner
et al., Science 277:1453-1474, 1997 ）、Bacillus s
ubtilis 由来の脂肪酸合成酵素遺伝子 fab（Kunst et a
l., Nature 390:249-256, 1997）等であり、これらを単
独もしくは複数組み合わせて使用することができる。
【００１２】このような脂肪酸合成酵素遺伝子（群）
は、前記Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子と同様に、公知の
微生物用発現ベクターに組み込んで宿主細胞に導入する
ことができる。以上のとおりに構築したＰ（３ＨＡ）重
合酵素遺伝子発現ベクターおよび脂肪酸合成酵素発現ベ
クターは、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リポソー
ム法、ＤＥＡＥデキストラン法など公知の方法により同
一の宿主微生物に導入する。そして、発現ベクター中の
耐性遺伝子による薬剤耐性等を用いて両遺伝子により形
質転換した微生物を単離することができる。
は、前記Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子と同様に、公知の
微生物用発現ベクターに組み込んで宿主細胞に導入する
ことができる。以上のとおりに構築したＰ（３ＨＡ）重
合酵素遺伝子発現ベクターおよび脂肪酸合成酵素発現ベ
クターは、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リポソー
ム法、ＤＥＡＥデキストラン法など公知の方法により同
一の宿主微生物に導入する。そして、発現ベクター中の
耐性遺伝子による薬剤耐性等を用いて両遺伝子により形
質転換した微生物を単離することができる。
【００１３】このようにして作出した形質転換微生物
を、炭素源存在下で、必要に応じて遺伝子の発現誘導処
置を施すなどして増殖させることにより、微生物体内に
Ｐ（３ＨＡ）を蓄積させることができる。炭素源は、グ
ルコースやフラクトース等の糖類、または脂肪酸類を制
限なく用いることができる。蓄積されたＰ（３ＨＡ）は
公知の方法により単離・精製することができる。例え
ば、大腸菌の場合には、培養液から遠心分離等により菌
体を集め、これを凍結乾燥し、乾燥菌体を酸−メタノー
ル分解し、分解物からクロロホルム抽出によってＰ（３
ＨＡ）を単離することができる。そして、各種クロマト
グラフィー等により精製することができる。
を、炭素源存在下で、必要に応じて遺伝子の発現誘導処
置を施すなどして増殖させることにより、微生物体内に
Ｐ（３ＨＡ）を蓄積させることができる。炭素源は、グ
ルコースやフラクトース等の糖類、または脂肪酸類を制
限なく用いることができる。蓄積されたＰ（３ＨＡ）は
公知の方法により単離・精製することができる。例え
ば、大腸菌の場合には、培養液から遠心分離等により菌
体を集め、これを凍結乾燥し、乾燥菌体を酸−メタノー
ル分解し、分解物からクロロホルム抽出によってＰ（３
ＨＡ）を単離することができる。そして、各種クロマト
グラフィー等により精製することができる。
【００１４】以下、実施例を示し、この発明についてさ
らに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例
に限定されるものではない。
らに詳細かつ具体的に説明するが、この発明は以下の例
に限定されるものではない。
【００１５】
【実施例】実施例１ Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子（Ａeromonas caviae ＦＡ
440 株由来の phaＣAC遺伝子）をｐＪＲＤＴrc１に組み
込み、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子発現ベクターを構築
した（図１）。一方、Ｅscherichia coli ＨＢ101 株由
来の脂肪酸合成酵素遺伝子 fabＨ、fabＤ、fabＧ、acp
ＰおよびfabＦ遺伝子群を連続してｐＵＣ118 にクロー
ニングし、このクローンから図２に示したように、fab
Ｈを含む断片、fabＤを含む断片、および全遺伝子群を
含む断片を切り出し、各々をｐＢluescriptII ＫＳ(+)
に組み込んで脂肪酸合成酵素遺伝子発現ベクター（それ
ぞれ、ｐＸbＨ1.0 、ｐＥＥv1.6、ｐＸｂＳac5.0 ）を
構築した。
440 株由来の phaＣAC遺伝子）をｐＪＲＤＴrc１に組み
込み、Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子発現ベクターを構築
した（図１）。一方、Ｅscherichia coli ＨＢ101 株由
来の脂肪酸合成酵素遺伝子 fabＨ、fabＤ、fabＧ、acp
ＰおよびfabＦ遺伝子群を連続してｐＵＣ118 にクロー
ニングし、このクローンから図２に示したように、fab
Ｈを含む断片、fabＤを含む断片、および全遺伝子群を
含む断片を切り出し、各々をｐＢluescriptII ＫＳ(+)
に組み込んで脂肪酸合成酵素遺伝子発現ベクター（それ
ぞれ、ｐＸbＨ1.0 、ｐＥＥv1.6、ｐＸｂＳac5.0 ）を
構築した。
【００１６】Ｐ（３ＨＡ）重合酵素遺伝子発現ベクター
と脂肪酸合成酵素遺伝子のいずれかを組み合わせてＥsc
herichia coli ＨＢ101 株に同時に導入し、形質転換大
腸菌を得た。これらの形質転換菌をＬＢ（Ｌuria−Ｂer
tani）培地で30℃で12時間培養した後、遺伝子発現誘導
剤としてＩＰＴＧ（Ｉsopropyl−β−Ｄ(-) −thiogala
ctopyranoside ）を最終濃度１mMになるように添加して
４時間培養した。次いで、グルコース（最終濃度10 g／
リットル）を添加し、さらに24時間培養した。
と脂肪酸合成酵素遺伝子のいずれかを組み合わせてＥsc
herichia coli ＨＢ101 株に同時に導入し、形質転換大
腸菌を得た。これらの形質転換菌をＬＢ（Ｌuria−Ｂer
tani）培地で30℃で12時間培養した後、遺伝子発現誘導
剤としてＩＰＴＧ（Ｉsopropyl−β−Ｄ(-) −thiogala
ctopyranoside ）を最終濃度１mMになるように添加して
４時間培養した。次いで、グルコース（最終濃度10 g／
リットル）を添加し、さらに24時間培養した。
【００１７】培養終了後、培養液を遠心分離して菌体を
集め、凍結乾燥し、乾燥菌体を酸−エタノール分解し、
クロロホルム抽出した後、ガスクロマトグラフィーでＰ
（３ＨＡ）の収量およびその組成比を検出した。なお、
比較対照として、 phaＣAC遺伝子のみを導入した遺伝子
組換え大腸菌についても同様に培養し、Ｐ（３ＨＡ）の
有無を調べた。
集め、凍結乾燥し、乾燥菌体を酸−エタノール分解し、
クロロホルム抽出した後、ガスクロマトグラフィーでＰ
（３ＨＡ）の収量およびその組成比を検出した。なお、
比較対照として、 phaＣAC遺伝子のみを導入した遺伝子
組換え大腸菌についても同様に培養し、Ｐ（３ＨＡ）の
有無を調べた。
【００１８】結果は表１に示したとおりである。Ｐ（３
ＨＡ）重合酵素遺伝子と脂肪酸合成酵素遺伝子群とを導
入した形質転換菌からは、モノマーユニットがＲ−３−
ヒドロキシブタン酸：100 ％の３ＨＢホモポリマーが得
られたのに対し、比較対象として試験した phaＣAC遺伝
子のみを導入した形質転換菌からはポリ−３−ヒドロキ
シアルカン酸は検出されなかった。また、３ＨＢの収率
は、 fabＨ、fabＤ、fabＧ、acpＰおよびfabＦ遺伝子群
を全て導入した菌が乾燥菌体重量当たり10.3％と最も高
く、次いで、fabＨ（6.3 ％）、fabＤ（4.6 ％）であっ
た。
ＨＡ）重合酵素遺伝子と脂肪酸合成酵素遺伝子群とを導
入した形質転換菌からは、モノマーユニットがＲ−３−
ヒドロキシブタン酸：100 ％の３ＨＢホモポリマーが得
られたのに対し、比較対象として試験した phaＣAC遺伝
子のみを導入した形質転換菌からはポリ−３−ヒドロキ
シアルカン酸は検出されなかった。また、３ＨＢの収率
は、 fabＨ、fabＤ、fabＧ、acpＰおよびfabＦ遺伝子群
を全て導入した菌が乾燥菌体重量当たり10.3％と最も高
く、次いで、fabＨ（6.3 ％）、fabＤ（4.6 ％）であっ
た。
【００１９】
【表１】
【００２０】
【発明の効果】以上詳しく説明したとおり、この出願に
よって、Ｐ（３ＨＡ）の遺伝子工学的手法による製造方
法と、この製造方法に用いる遺伝子組換え生物が提供さ
れる。これらの発明によって、高純度のポリ−３−ヒド
ロキシアルカン酸を簡便かつ大量に、しかも安価に製造
することが可能となる。
よって、Ｐ（３ＨＡ）の遺伝子工学的手法による製造方
法と、この製造方法に用いる遺伝子組換え生物が提供さ
れる。これらの発明によって、高純度のポリ−３−ヒド
ロキシアルカン酸を簡便かつ大量に、しかも安価に製造
することが可能となる。
【図１】この発明に用いることのできるｐＪＲＤＴrc１
の構成を示した模式図である。
の構成を示した模式図である。
【図２】実施例で構築した脂肪酸合成酵素遺伝子発現ベ
クターの挿入遺伝子の関係を示した模式図である。
クターの挿入遺伝子の関係を示した模式図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 7/42 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 7/44 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 7/62 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 福居 俊昭 埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所 内 (72)発明者 土肥 義治 埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所 内 Ｆターム(参考） 4B024 AA03 BA80 CA02 DA06 GA11 GA19 HA03 4B064 AD08 AD61 CA02 CA19 CC01 CC24 CD09 CE08 DA16 4B065 AA26X AA26Y AB01 AC14 AC16 AC20 BA02 BA30 BB01 BD14 BD15 BD16 BD50 CA11 CA12 CA60
Claims (9)
- 【請求項１】 ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵
素遺伝子と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導
入して形質転換し、この形質転換微生物を炭素源存在下
で増殖させ、この増殖微生物からポリ−３−ヒドロキシ
アルカン酸を単離・精製することを特徴とするポリ−３
−ヒドロキシアルカン酸の製造方法。 - 【請求項２】 宿主微生物が大腸菌である請求項１の製
造方法。 - 【請求項３】 脂肪酸合成酵素遺伝子が微生物由来の脂
肪酸合成酵素遺伝子群を構成する遺伝子の１種または２
種以上である請求項１または２の製造方法。 - 【請求項４】 微生物が大腸菌である請求項３の製造方
法。 - 【請求項５】 ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸重合酵
素遺伝子と、脂肪酸合成酵素遺伝子とを宿主微生物に導
入することによって作出された形質転換微生物。 - 【請求項６】 宿主微生物が大腸菌である請求項５の形
質転換微生物。 - 【請求項７】 脂肪酸合成酵素遺伝子が微生物由来の脂
肪酸合成酵素遺伝子群を構成する遺伝子の１種または２
種以上である請求項５または６の形質転換微生物。 - 【請求項８】 微生物が大腸菌である請求項７の形質転
換微生物。 - 【請求項９】 グラム陰性細菌用広宿主域発現ベクター
ｐＪＲＤＴrc１。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26879198A JP4258577B2 (ja) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造法 |
| PCT/JP1999/005185 WO2000017340A1 (fr) | 1998-09-22 | 1999-09-22 | Procede de production d'acide poly-3-hydroxyalcanoique |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26879198A JP4258577B2 (ja) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000135083A true JP2000135083A (ja) | 2000-05-16 |
| JP4258577B2 JP4258577B2 (ja) | 2009-04-30 |
Family
ID=17463331
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26879198A Expired - Fee Related JP4258577B2 (ja) | 1998-09-22 | 1998-09-22 | ポリ−３−ヒドロキシアルカン酸の製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4258577B2 (ja) |
| WO (1) | WO2000017340A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006025375A1 (ja) | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Riken | 熱安定性バイオポリエステル |
| JPWO2006101176A1 (ja) * | 2005-03-24 | 2008-09-04 | 株式会社カネカ | 超高分子量ポリエステルを蓄積する微生物 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0644875B2 (ja) * | 1986-08-26 | 1994-06-15 | 日本化薬株式会社 | 組換え遺伝子産物の製造方法 |
| JPH03272680A (ja) * | 1990-03-20 | 1991-12-04 | Res Assoc Util Of Light Oil | 遺伝子組換え菌株の培養方法 |
| WO1997022711A1 (en) * | 1995-12-19 | 1997-06-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Metabolic engineering of polyhydroxyalkanoate monomer synthases |
| JPH11276180A (ja) * | 1998-03-31 | 1999-10-12 | Rikagaku Kenkyusho | ポリエステル合成能を有する植物及びポリエステルの製造方法 |
-
1998
- 1998-09-22 JP JP26879198A patent/JP4258577B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-09-22 WO PCT/JP1999/005185 patent/WO2000017340A1/ja active Application Filing
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006025375A1 (ja) | 2004-08-31 | 2006-03-09 | Riken | 熱安定性バイオポリエステル |
| JPWO2006101176A1 (ja) * | 2005-03-24 | 2008-09-04 | 株式会社カネカ | 超高分子量ポリエステルを蓄積する微生物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2000017340A1 (fr) | 2000-03-30 |
| JP4258577B2 (ja) | 2009-04-30 |
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