JP2000105236A - 分析方法および自動分析装置 - Google Patents
分析方法および自動分析装置Info
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- JP2000105236A JP2000105236A JP10274606A JP27460698A JP2000105236A JP 2000105236 A JP2000105236 A JP 2000105236A JP 10274606 A JP10274606 A JP 10274606A JP 27460698 A JP27460698 A JP 27460698A JP 2000105236 A JP2000105236 A JP 2000105236A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】標識された物質と固定化された物質を利用して
試料液中の目的物質を測定する方法において、より高感
度な測定方法とその測定方法を使用する自動分析装置を
提供する。 【解決手段】反応容器２０に試料液と固定化抗体３５と
標識抗体３４を分注し反応させ結合体３８を生成させた
のち、反応容器２０に磁石３９を接近させ、結合体３８
を未反応の標識抗体３４と分離した後、遊離剤１４を作
用させ結合体３８から標識抗体３６を遊離させる。遊離
してきた標識抗体３６の標識３７の量を測定する。
試料液中の目的物質を測定する方法において、より高感
度な測定方法とその測定方法を使用する自動分析装置を
提供する。 【解決手段】反応容器２０に試料液と固定化抗体３５と
標識抗体３４を分注し反応させ結合体３８を生成させた
のち、反応容器２０に磁石３９を接近させ、結合体３８
を未反応の標識抗体３４と分離した後、遊離剤１４を作
用させ結合体３８から標識抗体３６を遊離させる。遊離
してきた標識抗体３６の標識３７の量を測定する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は試料液中の目的物質
を検出するための方法と自動分析装置に関わり、特に固
相に固定化された物質を使用して高感度に目的物質の検
出を行う方法と該方法を使用するための自動分析装置に
関わる。
を検出するための方法と自動分析装置に関わり、特に固
相に固定化された物質を使用して高感度に目的物質の検
出を行う方法と該方法を使用するための自動分析装置に
関わる。
【０００２】
【従来の技術】従来から液中の目的物質を測定する方法
は種々存在するが、このうち標識された物質と固定化さ
れた物質を利用して測定する方法は、抗原抗体反応やＤ
ＮＡプローブを使用して血漿または血清中の化学物質を
測定する分野において特に発達してきた。抗原抗体反応
を使用する方法としてはたとえば“臨床検査技術学１３
「臨床免疫学」（１９９４．５．１ 医学書院発行）”
の第６３頁から第６７頁に述べられているような標識物
に放射性同位元素を使用した放射免疫測定法（ＲＩＡ
法）や、酵素を用いた酵素免疫測定法（ＥＩＡ法），蛍
光色素を使用した蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）等が広く
知られている。
は種々存在するが、このうち標識された物質と固定化さ
れた物質を利用して測定する方法は、抗原抗体反応やＤ
ＮＡプローブを使用して血漿または血清中の化学物質を
測定する分野において特に発達してきた。抗原抗体反応
を使用する方法としてはたとえば“臨床検査技術学１３
「臨床免疫学」（１９９４．５．１ 医学書院発行）”
の第６３頁から第６７頁に述べられているような標識物
に放射性同位元素を使用した放射免疫測定法（ＲＩＡ
法）や、酵素を用いた酵素免疫測定法（ＥＩＡ法），蛍
光色素を使用した蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）等が広く
知られている。
【０００３】これらは主に標識抗体と固相に固定化され
た抗体をそれに対する血清中の抗原を結合させた後、未
反応の標識抗体を洗い流し（Ｂ／Ｆ分離）、反応により
生成した結合体の標識抗体の標識物の濃度を測定するこ
とにより試料液中の目的物質の濃度を測定している。
た抗体をそれに対する血清中の抗原を結合させた後、未
反応の標識抗体を洗い流し（Ｂ／Ｆ分離）、反応により
生成した結合体の標識抗体の標識物の濃度を測定するこ
とにより試料液中の目的物質の濃度を測定している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】上記の方法では通常、
反応により固相に捕捉された標識されている物質（上記
例の場合は標識抗体）の標識物をそのまま測定してい
る。この方法では標識物を測定する時に固相も一緒に測
定されるため、測定液中に存在する固相が標識物の検出
反応を阻害したり、また固相の混在が検出時のブランク
レベルの不安定化の要因となり、測定の感度が低下する
という問題点があった。
反応により固相に捕捉された標識されている物質（上記
例の場合は標識抗体）の標識物をそのまま測定してい
る。この方法では標識物を測定する時に固相も一緒に測
定されるため、測定液中に存在する固相が標識物の検出
反応を阻害したり、また固相の混在が検出時のブランク
レベルの不安定化の要因となり、測定の感度が低下する
という問題点があった。
【０００５】
【課題を解決するための手段】かかる問題点を解決する
ために発明者らは未反応の標識物質を洗い流した後、固
相に捕捉された標識物または標識物結合体を遊離させ固
相を除去し、遊離してきた標識物または標識物結合体の
みを検出することによって、固相の混在により発生する
検出反応の阻害を防ぎ、また、検出時のブランクを安定
にかつ低レベルにおさえることで、より高感度な測定方
法と該測定方法を適用するのに最適な自動分析装置を発
明するに至った。
ために発明者らは未反応の標識物質を洗い流した後、固
相に捕捉された標識物または標識物結合体を遊離させ固
相を除去し、遊離してきた標識物または標識物結合体の
みを検出することによって、固相の混在により発生する
検出反応の阻害を防ぎ、また、検出時のブランクを安定
にかつ低レベルにおさえることで、より高感度な測定方
法と該測定方法を適用するのに最適な自動分析装置を発
明するに至った。
【０００６】
【発明の実施の形態】以下、本発明を実施例に基づいて
説明する。図１は本発明の分析方法を実施するのにもっ
とも最適な一実施例の装置の構成図である。図２は本発
明の一実施例を示す反応系の模式図である。図１を用い
て実際の装置の動作を説明する。図１においてピペッタ
８は先端にディスポーザブルなピペッタチップ９が接続
されており、ピペッタチップ９はトレイ１８上に複数個
セットされており、グリッパ１７により必要に応じてピ
ペッタチップ装着位置１９１まで運ばれる。サンプルカ
ップ１に分注されている試料はサンプルディスク２にセ
ットされている。
説明する。図１は本発明の分析方法を実施するのにもっ
とも最適な一実施例の装置の構成図である。図２は本発
明の一実施例を示す反応系の模式図である。図１を用い
て実際の装置の動作を説明する。図１においてピペッタ
８は先端にディスポーザブルなピペッタチップ９が接続
されており、ピペッタチップ９はトレイ１８上に複数個
セットされており、グリッパ１７により必要に応じてピ
ペッタチップ装着位置１９１まで運ばれる。サンプルカ
ップ１に分注されている試料はサンプルディスク２にセ
ットされている。
【０００７】サンプルディスク２は図示されていないパ
ルスモータにより任意に回転できるようになっており、
サンプル吸引時にはサンプル吸引ポジション１０までサ
ンプルカップ１を移動させることができる。また反応に
必要な試薬はすべて試薬ボトル３に入って試薬ディスク
４上にセットされている。試薬ボトル３は複数個のより
小さなボトルから構成されており、小さなボトル内には
それぞれ反応に必要な複数種類の試薬が収納されてい
る。
ルスモータにより任意に回転できるようになっており、
サンプル吸引時にはサンプル吸引ポジション１０までサ
ンプルカップ１を移動させることができる。また反応に
必要な試薬はすべて試薬ボトル３に入って試薬ディスク
４上にセットされている。試薬ボトル３は複数個のより
小さなボトルから構成されており、小さなボトル内には
それぞれ反応に必要な複数種類の試薬が収納されてい
る。
【０００８】試薬ディスク４は図示されないパルスモー
タにより任意に回転することが可能であり、必要に応じ
て試薬ボトル３を試薬吸引ポジション１１に移動させる
ことが可能である。また、使い捨ての反応容器２０はト
レイ７上に複数個セットされており必要に応じてグリッ
パ１７にてサンプル−試薬分注ポジション１９に運ば
れ、反応に必要な試薬とサンプルを分注される。
タにより任意に回転することが可能であり、必要に応じ
て試薬ボトル３を試薬吸引ポジション１１に移動させる
ことが可能である。また、使い捨ての反応容器２０はト
レイ７上に複数個セットされており必要に応じてグリッ
パ１７にてサンプル−試薬分注ポジション１９に運ば
れ、反応に必要な試薬とサンプルを分注される。
【０００９】試薬とサンプルが分注された反応容器２０
はグリッパ１７にてインキュベータ５上に運ばれ、図２
に示されるような反応に必要な時間だけ恒温された後、
グリッパ１７にてＢ／Ｆ分離部１３に移動後、未反応の
標識結合物質を除去し、遊離剤１４が分注される。その
後、遊離してきた標識物または標識結合物質をシッパー
１２にて吸引し、フロー液１５にて検出部１６に導入さ
れる。検出部に導入された遊離した標識物または標識結
合物質の標識量を検出，測定し、測定結果をデータ処理
部３２にて処理後、データ出力部３３に出力される。
はグリッパ１７にてインキュベータ５上に運ばれ、図２
に示されるような反応に必要な時間だけ恒温された後、
グリッパ１７にてＢ／Ｆ分離部１３に移動後、未反応の
標識結合物質を除去し、遊離剤１４が分注される。その
後、遊離してきた標識物または標識結合物質をシッパー
１２にて吸引し、フロー液１５にて検出部１６に導入さ
れる。検出部に導入された遊離した標識物または標識結
合物質の標識量を検出，測定し、測定結果をデータ処理
部３２にて処理後、データ出力部３３に出力される。
【００１０】本発明の分析方法による反応過程の一実施
例を図２を用いて説明する。図２の反応例は抗原抗体反
応を利用して目的物の検出を行う実施例の一つである。
図２において３４は磁性体粒子に固定化された固定化抗
体、３５は試料液中の目的抗原、３６は標識物により標
識された標識抗体、３７は標識抗体に使用されている標
識物、１４は反応により生成した固定化抗体−目的抗原
−標識抗体から標識抗体を特異的に遊離させるための遊
離剤である。固定化抗体３４，標識抗体３６は図１に示
された試薬ボトル３にそれぞれ収納されており、目的抗
原３５は図１に示されたサンプルカップ１に収納されて
いる試料中に存在する。
例を図２を用いて説明する。図２の反応例は抗原抗体反
応を利用して目的物の検出を行う実施例の一つである。
図２において３４は磁性体粒子に固定化された固定化抗
体、３５は試料液中の目的抗原、３６は標識物により標
識された標識抗体、３７は標識抗体に使用されている標
識物、１４は反応により生成した固定化抗体−目的抗原
−標識抗体から標識抗体を特異的に遊離させるための遊
離剤である。固定化抗体３４，標識抗体３６は図１に示
された試薬ボトル３にそれぞれ収納されており、目的抗
原３５は図１に示されたサンプルカップ１に収納されて
いる試料中に存在する。
【００１１】図２において、反応は以下のように進行す
る。まず、ａ）反応容器２０に試料と固定化抗体３４を
分注し、試料中の目的抗原３５と固定化抗体３４を反応
させ結合体を生成させる。ｂ）標識抗体３４を加え反応
させ固定化抗体３４と目的抗原３５と標識抗体３４の結
合体３８を生成させる。ｃ）反応容器２０に磁石３９を
接近させ、結合体３８を未反応の標識抗体３４と分離す
る。この後、図示されていないが緩衝液にて結合体３８
を洗浄してもよい。ｄ）遊離剤１４を作用させ結合体３
８から標識抗体３６を遊離させる。ｅ）遊離してきた標
識抗体３６の標識３７の量を測定する。本実施例におい
て遊離剤１４としてはたとえば各種のプロテアーゼが最
適である。また標識物３７としてはローダミンなどの蛍
光色素が最適である。
る。まず、ａ）反応容器２０に試料と固定化抗体３４を
分注し、試料中の目的抗原３５と固定化抗体３４を反応
させ結合体を生成させる。ｂ）標識抗体３４を加え反応
させ固定化抗体３４と目的抗原３５と標識抗体３４の結
合体３８を生成させる。ｃ）反応容器２０に磁石３９を
接近させ、結合体３８を未反応の標識抗体３４と分離す
る。この後、図示されていないが緩衝液にて結合体３８
を洗浄してもよい。ｄ）遊離剤１４を作用させ結合体３
８から標識抗体３６を遊離させる。ｅ）遊離してきた標
識抗体３６の標識３７の量を測定する。本実施例におい
て遊離剤１４としてはたとえば各種のプロテアーゼが最
適である。また標識物３７としてはローダミンなどの蛍
光色素が最適である。
【００１２】図３に本方法を用いて甲状腺刺激ホルモン
（ＴＳＨ）の検出を行った際の希釈系列の直線性のグラ
フを従来法であるＦＩＡ法で測定した場合のものと比較
して示した。図３において実線４０は本方法を用いて測
定を行った場合の希釈系列の直線性を、波線４１は従来
法であるＦＩＡ法を用いて測定を行った場合の希釈系列
の直線を示している。
（ＴＳＨ）の検出を行った際の希釈系列の直線性のグラ
フを従来法であるＦＩＡ法で測定した場合のものと比較
して示した。図３において実線４０は本方法を用いて測
定を行った場合の希釈系列の直線性を、波線４１は従来
法であるＦＩＡ法を用いて測定を行った場合の希釈系列
の直線を示している。
【００１３】また、本実施例において標識物としてルテ
ニウム（II）トリスビピリジルなどの金属錯体やグルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素等の
酵素を使用してもかまわない。酵素を使用した場合には
遊離してきた酵素に基質を加えて反応させ検出する工程
が必要となる。
ニウム（II）トリスビピリジルなどの金属錯体やグルコ
ース−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素等の
酵素を使用してもかまわない。酵素を使用した場合には
遊離してきた酵素に基質を加えて反応させ検出する工程
が必要となる。
【００１４】また、本実施例では抗体，抗原を例として
あげたがこれらはＤＮＡプローブやＲＮＡプローブを使
用しても有効である。この場合は標識物３４としてはロ
ーダミンなどの蛍光色素，ルテニウム（II）トリスビピ
リジルなどの金属錯体も最適であるが、グルコース−６
−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素を用いること
も有効である。また、この場合、遊離剤１４としては使
用したプローブの塩基配列により選択性の高いＨａｅII
I 等の制限酵素を用いることが有効である。
あげたがこれらはＤＮＡプローブやＲＮＡプローブを使
用しても有効である。この場合は標識物３４としてはロ
ーダミンなどの蛍光色素，ルテニウム（II）トリスビピ
リジルなどの金属錯体も最適であるが、グルコース−６
−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素を用いること
も有効である。また、この場合、遊離剤１４としては使
用したプローブの塩基配列により選択性の高いＨａｅII
I 等の制限酵素を用いることが有効である。
【００１５】また、標識物を遊離させる工程としては遊
離剤を使用するほかに反応液のｐＨを変化させたり、温
度を変化させることも有効である。また、結合体３８に
対して超音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識物
３７を遊離させてもよい。
離剤を使用するほかに反応液のｐＨを変化させたり、温
度を変化させることも有効である。また、結合体３８に
対して超音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識物
３７を遊離させてもよい。
【００１６】また、固定化する固相としては磁性体粒子
の他にポリスチレンビーズなどを使用してもかまわな
い。固相としてポリスチレンビーズを用いた場合にはＢ
／Ｆ分離に磁石の代わりにメンブレンフィルターを用い
ることが望ましい。
の他にポリスチレンビーズなどを使用してもかまわな
い。固相としてポリスチレンビーズを用いた場合にはＢ
／Ｆ分離に磁石の代わりにメンブレンフィルターを用い
ることが望ましい。
【００１７】また、図２では目的抗原３５−固定化抗体
３４−標識抗体３６の結合体３８を生成させるサンドウ
ィッチ法を例にしたが、もちろん競合法を用いて固定化
抗体３４−標識抗体３６と固定化抗体３４−目的抗原３
５の２種類の結合体を生成させその後、固定化抗体３４
−標識抗体３６から標識抗体３６または標識物３７を遊
離させて測定してもかまわない。その場合も標識物３７
としてルテニウム(II)トリスビピリジルなどの金属錯体
やグルコース−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素
酵素等の酵素標識が有効であるのは同様である。
３４−標識抗体３６の結合体３８を生成させるサンドウ
ィッチ法を例にしたが、もちろん競合法を用いて固定化
抗体３４−標識抗体３６と固定化抗体３４−目的抗原３
５の２種類の結合体を生成させその後、固定化抗体３４
−標識抗体３６から標識抗体３６または標識物３７を遊
離させて測定してもかまわない。その場合も標識物３７
としてルテニウム(II)トリスビピリジルなどの金属錯体
やグルコース−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素
酵素等の酵素標識が有効であるのは同様である。
【００１８】また、遊離剤１４としてはたとえばプロテ
アーゼ等が最適であることも同様であり、結合体から標
識抗体３６または標識物３７を遊離させる工程として、
遊離剤を使用するほかに反応液のｐＨを変化させたり、
温度を変化させることも有効であるのは同様である。ま
た、固定化抗体３４−標識抗体３６の結合体に対して超
音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識抗体３６を
遊離させてもよいのも同様である。また、固相としてア
ビジンでコーティングされた磁性体粒子を使用してもよ
い。
アーゼ等が最適であることも同様であり、結合体から標
識抗体３６または標識物３７を遊離させる工程として、
遊離剤を使用するほかに反応液のｐＨを変化させたり、
温度を変化させることも有効であるのは同様である。ま
た、固定化抗体３４−標識抗体３６の結合体に対して超
音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識抗体３６を
遊離させてもよいのも同様である。また、固相としてア
ビジンでコーティングされた磁性体粒子を使用してもよ
い。
【００１９】この場合の反応過程を図４を用いて説明す
る。図４において４２はアビジンコートされた磁性体粒
子、４３はビオチン化された抗体、４４は試料液中の目
的抗原、４５は標識抗体、１４は遊離剤、２０は反応容
器、３９は磁性体粒子を捕捉するための磁石である。ア
ビジンコートされた磁性体粒子４２，ビオチン化抗体４
３，標識抗体４５はそれぞれ図１に示される試薬ボトル
３に収納されており、目的抗原４４は同じく図１のサン
プルカップ１に収納されているものとする。
る。図４において４２はアビジンコートされた磁性体粒
子、４３はビオチン化された抗体、４４は試料液中の目
的抗原、４５は標識抗体、１４は遊離剤、２０は反応容
器、３９は磁性体粒子を捕捉するための磁石である。ア
ビジンコートされた磁性体粒子４２，ビオチン化抗体４
３，標識抗体４５はそれぞれ図１に示される試薬ボトル
３に収納されており、目的抗原４４は同じく図１のサン
プルカップ１に収納されているものとする。
【００２０】まず、ａ）反応容器２０にアビジンコート
された磁性体粒子４２，ビオチン化抗体４３，目的抗原
４４，標識抗体４５を分注し、反応させて磁性体粒子４
２−ビオチン化抗体４３−目的抗原４４−標識抗体４５
の結合体を生成させる。ｂ）反応後、磁石を用いて未反
応のビオチン化抗体４３,標識抗体４５を除去し、ｃ)遊
離剤１４を作用させて結合体のアビジン−ビオチン結合
を切断し、ｄ）遊離してきたビオチン化抗体４３−目的
抗原４４−標識抗体４５結合体の標識物４６の量を測定
する。
された磁性体粒子４２，ビオチン化抗体４３，目的抗原
４４，標識抗体４５を分注し、反応させて磁性体粒子４
２−ビオチン化抗体４３−目的抗原４４−標識抗体４５
の結合体を生成させる。ｂ）反応後、磁石を用いて未反
応のビオチン化抗体４３,標識抗体４５を除去し、ｃ)遊
離剤１４を作用させて結合体のアビジン−ビオチン結合
を切断し、ｄ）遊離してきたビオチン化抗体４３−目的
抗原４４−標識抗体４５結合体の標識物４６の量を測定
する。
【００２１】この場合、遊離剤１４としては塩酸グアニ
ジンを用いることが望ましい。しかし図２の例で示した
通りプロテアーゼなどを遊離剤と使用して目的抗原４４
−標識抗体４５のあいだの結合を切断し、標識抗体４５
のみを遊離させてもかまわない。また、標識物４６とし
て図２の例と同様にローダミンなどの蛍光色素，ルテニ
ウム（II）トリスビピリジルなどの金属錯体やグルコー
ス−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素等の酵
素標識が有効であるのはいうまでもない。
ジンを用いることが望ましい。しかし図２の例で示した
通りプロテアーゼなどを遊離剤と使用して目的抗原４４
−標識抗体４５のあいだの結合を切断し、標識抗体４５
のみを遊離させてもかまわない。また、標識物４６とし
て図２の例と同様にローダミンなどの蛍光色素，ルテニ
ウム（II）トリスビピリジルなどの金属錯体やグルコー
ス−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素等の酵
素標識が有効であるのはいうまでもない。
【００２２】また、本実施例でも抗体，抗原を例として
あげたがこれらはＤＮＡプローブやＲＮＡプローブを使
用しても有効であるのは図２の例と同様である。この場
合も標識物４６としてはローダミンなどの蛍光色素，ル
テニウム（II）トリスビピリジルなどの金属錯体も最適
であるがグルコース−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸
脱水素酵素を用いることも有効である。また、この場
合、遊離剤１４としては使用したプローブの塩基配列に
より選択性の高いＨａｅIII 等の制限酵素を用いること
がより有効である。
あげたがこれらはＤＮＡプローブやＲＮＡプローブを使
用しても有効であるのは図２の例と同様である。この場
合も標識物４６としてはローダミンなどの蛍光色素，ル
テニウム（II）トリスビピリジルなどの金属錯体も最適
であるがグルコース−６−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸
脱水素酵素を用いることも有効である。また、この場
合、遊離剤１４としては使用したプローブの塩基配列に
より選択性の高いＨａｅIII 等の制限酵素を用いること
がより有効である。
【００２３】また、標識物を遊離させる工程としては遊
離剤を使用するほかに反応液のｐＨを変化させたり、温
度を変化させることも有効である。また、結合体に対し
て超音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識物４４
を遊離させてもよい。
離剤を使用するほかに反応液のｐＨを変化させたり、温
度を変化させることも有効である。また、結合体に対し
て超音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識物４４
を遊離させてもよい。
【００２４】また、固定化する固相としてはアビジンコ
ートの磁性体粒子の他にアビジンコートのポリスチレン
ビーズなどを使用してもかまわない。固相としてアビジ
ンコートのポリスチレンビーズを用いた場合にはＢ／Ｆ
分離に磁石の代わりにメンブレンフィルターを用いるこ
とが望ましい。
ートの磁性体粒子の他にアビジンコートのポリスチレン
ビーズなどを使用してもかまわない。固相としてアビジ
ンコートのポリスチレンビーズを用いた場合にはＢ／Ｆ
分離に磁石の代わりにメンブレンフィルターを用いるこ
とが望ましい。
【００２５】また、図４では磁性体粒子４２−ビオチン
化抗体４３−目的抗原４４−標識抗体４５の結合体を生
成させるサンドウィッチ法を例にしたが、もちろん競合
法を用いて磁性体粒子４２−ビオチン化抗体４３−標識
抗体４５の結合体を磁性体粒子４２−ビオチン化抗体４
３−目的抗原４４の結合体と競合的に生成させその後、
遊離剤を作用させてビオチン化抗体４３−標識抗体４５
を遊離させて測定してもかまわない。その場合も標識物
４６としてローダミンなどの蛍光色素、ルテニウム（I
I）トリスビピリジルなどの金属錯体やグルコース−６
−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素等の酵素標識
が有効であるのは同様である。
化抗体４３−目的抗原４４−標識抗体４５の結合体を生
成させるサンドウィッチ法を例にしたが、もちろん競合
法を用いて磁性体粒子４２−ビオチン化抗体４３−標識
抗体４５の結合体を磁性体粒子４２−ビオチン化抗体４
３−目的抗原４４の結合体と競合的に生成させその後、
遊離剤を作用させてビオチン化抗体４３−標識抗体４５
を遊離させて測定してもかまわない。その場合も標識物
４６としてローダミンなどの蛍光色素、ルテニウム（I
I）トリスビピリジルなどの金属錯体やグルコース−６
−リン酸脱水素酵素やリンゴ酸脱水素酵素等の酵素標識
が有効であるのは同様である。
【００２６】また、遊離剤としてはたとえば塩酸グアニ
ジン，プロテアーゼ等が最適であることも同様であり、
標識物を遊離させる工程として、遊離剤を使用するほか
に反応液のｐＨを変化させたり、温度を変化させること
も有効であるのは図２の例と同様である。また、結合体
に対して超音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識
物４６を遊離させてもよいのも同様である。もちろん本
発明は以上に述べた実施例にのみ限定されないことは言
うまでもない。
ジン，プロテアーゼ等が最適であることも同様であり、
標識物を遊離させる工程として、遊離剤を使用するほか
に反応液のｐＨを変化させたり、温度を変化させること
も有効であるのは図２の例と同様である。また、結合体
に対して超音波を作用させ、結合体の架橋を切断し標識
物４６を遊離させてもよいのも同様である。もちろん本
発明は以上に述べた実施例にのみ限定されないことは言
うまでもない。
【００２７】
【発明の効果】本発明によれば、未反応の標識物質を洗
い流した後、固相に捕捉された標識物または標識物結合
体を遊離させ固相を除去し、遊離してきた標識物または
標識物結合体のみを検出するために固相の混在により発
生する検出反応の阻害を防ぐことが可能であり、また、
検出時のブランクを安定にかつ低レベルにおさえること
が可能であるので、より高感度な測定方法と該測定方法
を適用するのに最適な自動分析装置を提供することがで
きる。
い流した後、固相に捕捉された標識物または標識物結合
体を遊離させ固相を除去し、遊離してきた標識物または
標識物結合体のみを検出するために固相の混在により発
生する検出反応の阻害を防ぐことが可能であり、また、
検出時のブランクを安定にかつ低レベルにおさえること
が可能であるので、より高感度な測定方法と該測定方法
を適用するのに最適な自動分析装置を提供することがで
きる。
【図１】本発明の一実施例の自動分析装置の該略図。
【図２】本発明の一実施例の反応過程を示す該略図。
【図３】図２の実施例で測定を行ったＴＳＨの直線性と
ＦＩＡ法で測定を行ったＴＳＨの直線性の違いを示す特
性図。
ＦＩＡ法で測定を行ったＴＳＨの直線性の違いを示す特
性図。
【図４】本発明の別の一実施例の反応過程を示す該略
図。
図。
１…サンプルカップ、２…サンプルディスク、３…試薬
ボトル、４…試薬ディスク、５…インキュベータ、６…
シッピングポジション、７…反応容器トレイ、８…ピペ
ッタ、９…ピペットチップ、１０…サンプル吸引ポジシ
ョン、１１…試薬吸引ポジション、１２…シッパー、１
３…Ｂ／Ｆ分離部、１４…遊離剤、１５…フロー液、１
６…検出部、１７…グリッパー、１８…ピペッタチップ
トレイ、１９…試薬・サンプル分注部、２０…反応容
器、１９１…ピペッタチップ装着位置、３２…データ処
理部、３３…データ出力部、３４…固定化抗体、３５…
試料中の目的抗原、３６，４５…標識抗体、３７，４６
…標識物、３８…固定化抗体−目的抗原−標識抗体結合
体、３９…磁石、４０…本発明の測定方法で測定した場
合のＴＳＨの希釈系列の直線、４１…ＦＩＡ法で測定し
た場合のＴＳＨの希釈系列の直線、４２…アビジンコー
ト磁性体粒子、４３…ビオチン化抗体、４４…目的抗
原、１９１…ピペッタチップ装着位置。
ボトル、４…試薬ディスク、５…インキュベータ、６…
シッピングポジション、７…反応容器トレイ、８…ピペ
ッタ、９…ピペットチップ、１０…サンプル吸引ポジシ
ョン、１１…試薬吸引ポジション、１２…シッパー、１
３…Ｂ／Ｆ分離部、１４…遊離剤、１５…フロー液、１
６…検出部、１７…グリッパー、１８…ピペッタチップ
トレイ、１９…試薬・サンプル分注部、２０…反応容
器、１９１…ピペッタチップ装着位置、３２…データ処
理部、３３…データ出力部、３４…固定化抗体、３５…
試料中の目的抗原、３６，４５…標識抗体、３７，４６
…標識物、３８…固定化抗体−目的抗原−標識抗体結合
体、３９…磁石、４０…本発明の測定方法で測定した場
合のＴＳＨの希釈系列の直線、４１…ＦＩＡ法で測定し
た場合のＴＳＨの希釈系列の直線、４２…アビジンコー
ト磁性体粒子、４３…ビオチン化抗体、４４…目的抗
原、１９１…ピペッタチップ装着位置。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/543 ５２５ Ｇ０１Ｎ 33/543 ５２５Ｗ ５２５Ｚ 33/53 33/53 Ｕ
Claims (20)
- 【請求項１】試料中の目的物質を測定するための方法に
おいて、ａ）固相に固定化されている物質Ｘと、ｂ）標
識物によって標識されている物質Ｙを、ｃ）試料中の目
的物質と物質Ｘと物質Ｙの特異的な結合反応により物質
Ｘ−目的物質−物質Ｙの結合体を生成させ、ｄ）未反応
の物質Ｙを除去し、ｅ）物質Ｘ−目的物質−物質Ｙの結
合体から物質Ｙの標識物を遊離させた後に検出すること
で試料中の目的物質を検出することを特徴とする分析方
法。 - 【請求項２】試料中の目的物質を測定するための方法に
おいて、ａ）固相に固定化されている物質Ｘと、ｂ）標
識物によって標識されている物質Ｙを、ｃ）試料中の目
的物質と物質Ｘと物質Ｙの競合的な結合反応により物質
Ｘ−目的物質結合体と物質Ｘ−物質Ｙ結合体の２種類の
結合体を生成させ、ｄ)未反応の物質Ｙを除去し、ｅ)物
質Ｘ−物質Ｙの結合体から物質Ｙの標識物を遊離させた
後に検出することで試料中の目的物質を検出することを
特徴とする分析方法。 - 【請求項３】試料中の目的物質を測定するための方法に
おいて、ａ）表面に反応基がコーティングされている固
相と、ｂ）該固相の反応基と特異的に反応する反応基を
もつ物質Ｘと、ｃ）標識物によって標識されている物質
Ｙを、ｄ）試料中の目的物質と該固相と物質Ｘと物質Ｙ
の特異的な結合反応により固相−物質Ｘ−目的物質−物
質Ｙ結合体の結合体を生成させ、ｅ）未反応の物質Ｙを
除去し、ｅ）固相−物質Ｘ−目的物質−物質Ｙ結合体か
ら物質Ｙの標識物を遊離させた後に検出することで試料
中の目的物質を検出することを特徴とする分析方法。 - 【請求項４】試料中の目的物質を測定するための方法に
おいて、ａ）表面に反応基がコーティングされている固
相と、ｂ）該固相の反応基と特異的に反応する反応基を
もつ物質Ｘと、ｃ）標識物によって標識されている物質
Ｙをｄ）該固相と物質Ｘを特異的な反応により結合させ
た後、試料中の目的物質と固相−物質Ｘと物質Ｙの競合
的な結合反応により固相−物質Ｘ−目的物質結合体と固
相−物質Ｘ−物質Ｙ結合体の２種類の結合体を生成さ
せ、ｅ）未反応の物質Ｙを除去し、ｅ）固相−物質Ｘ−
物質Ｙの結合体から物質Ｙの標識物を遊離させた後に検
出することで試料中の目的物質を検出することを特徴と
する分析方法。 - 【請求項５】上記請求項１から４のいずれか１項記載の
分析方法において、結合体から標識物を遊離させる際に
標識物を含む結合体を固相から遊離させてから標識物を
検出することを特徴とした分析方法。 - 【請求項６】上記請求項３又は４の分析方法において、
固相の反応基と物質Ｘの反応基の代わりにアビジンとビ
オチンを使用することを特徴とする分析方法。 - 【請求項７】上記請求項１から６のいずれか１項記載の
分析方法において、物質Ｘ，Ｙが抗原または抗体である
ことを特徴とする分析方法。 - 【請求項８】上記請求項１と３から６のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｘ，ＹがＤＮＡプローブま
たはＲＮＡプローブであることを特徴とする分析方法。 - 【請求項９】上記請求項１から８のいずれか１項記載の
分析方法において、固相がポリスチレンビーズまたは磁
性体粒子であることを特徴とする分析方法。 - 【請求項１０】上記請求項１から８のいずれか１項記載
の分析方法において、物質Ｙの標識物が酵素であること
を特徴とする分析方法。 - 【請求項１１】上記請求項１から８のいずれか１項記載
の分析方法において、物質Ｙの標識物が金属錯体である
ことを特徴とする分析方法。 - 【請求項１２】上記請求項１から８のいずれか１項記載
の分析方法において、物質Ｙの標識物が蛍光色素である
ことを特徴とする分析方法。 - 【請求項１３】上記請求項１から１２のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｙの標識物を遊離させる手
段として各種のプロテアーゼを用いることを特徴とする
分析方法。 - 【請求項１４】上記請求項１から１２のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｙの標識物を遊離させる手
段として各種のヌクレアーゼを用いることを特徴とする
分析方法。 - 【請求項１５】上記請求項１から１２のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｙの標識物を遊離させる手
段として超音波を用いることを特徴とする分析方法。 - 【請求項１６】上記請求項１から１２のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｙの標識物を遊離させる手
段として反応液のｐＨを変化させることを特徴とする分
析方法。 - 【請求項１７】上記請求項１から１２のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｙの標識物を遊離させる手
段として温度変化を用いることを特徴とする分析方法。 - 【請求項１８】上記請求項１から１２のいずれか１項記
載の分析方法において、物質Ｙの標識物を遊離させる手
段として蛋白変性剤を用いることを特徴とする分析方
法。 - 【請求項１９】試料中の目的物質を検出するための自動
分析装置において、試料分注する工程と分注された試料
に標識試薬と固定化試薬を分注し反応させる工程と、未
反応の標識試薬と固相に反応した標識試薬を分離する工
程と、固相に反応した標識試薬から標識物または標識物
を含む結合体を遊離させる工程と、遊離してきた標識物
または標識物を含む結合体を測定する工程と、測定した
標識物の量から試料中の目的物質の量を計算する工程を
有することを特徴とした自動分析装置。 - 【請求項２０】試料中の目的物質を検出するための自動
分析装置において、試料分注する工程と、分注された試
料に標識試薬と反応基付きの固相と該固相と特異的に結
合する反応基をもつ試薬を分注し反応させる工程と、未
反応の標識試薬と固相に反応した標識試薬を分離する工
程と、固相に反応した標識試薬から標識物または標識物
を含む結合体を遊離させる工程と、遊離してきた標識物
または標識物を含む結合体を測定する工程と、測定した
標識物の量から試料中の目的物質の量を計算する工程を
有することを特徴とした自動分析装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10274606A JP2000105236A (ja) | 1998-09-29 | 1998-09-29 | 分析方法および自動分析装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10274606A JP2000105236A (ja) | 1998-09-29 | 1998-09-29 | 分析方法および自動分析装置 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000105236A true JP2000105236A (ja) | 2000-04-11 |
Family
ID=17544085
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10274606A Pending JP2000105236A (ja) | 1998-09-29 | 1998-09-29 | 分析方法および自動分析装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000105236A (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002040025A (ja) * | 2000-07-27 | 2002-02-06 | Internatl Reagents Corp | 検体測定方法 |
| JP2004361334A (ja) * | 2003-06-06 | 2004-12-24 | Satake Corp | ダイオキシン類の測定方法及び装置 |
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| JP2009287949A (ja) * | 2008-05-27 | 2009-12-10 | Yoshihiro Ishikawa | 抗体又は抗原の定量方法 |
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| CN108732145A (zh) * | 2017-04-13 | 2018-11-02 | 希森美康株式会社 | 受检物质的信息获取方法 |
| JP2020060587A (ja) * | 2015-03-31 | 2020-04-16 | シスメックス株式会社 | 免疫測定装置 |
-
1998
- 1998-09-29 JP JP10274606A patent/JP2000105236A/ja active Pending
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