JP2000072770A

JP2000072770A - 新規ペンタヒドロキシインドリジジン化合物およびαグルコシダーゼ阻害剤

Info

Publication number: JP2000072770A
Application number: JP10245307A
Authority: JP
Inventors: Yasunori Momose; 弥寿徳百瀬
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1998-08-31
Filing date: 1998-08-31
Publication date: 2000-03-07

Abstract

(57)【要約】【課題】民間的に用いられている安全なユーゲニア・
ユニフローラの糖尿病、肥満に対する有効性の作用機
序、作用成分を明らかにし、糖尿病や肥満に臨床応用で
きるαグルコシダーゼ阻害剤を提供する。また、ユーゲ
ニア・ユニフローラから抽出される新規ペンタヒドロキ
シインドリジジン化合物を提供する。【解決手段】ユーゲニア・ユニフローラの抽出物また
は粉末を有効成分とするαグルコシダーゼ阻害剤であ
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規ペンタヒドロ
キシインドリジジン化合物および糖尿病、肥満等の治療
に有用であるαグルコシダーゼ阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】糖尿病、肥満においては、食後の急速な
血糖の上昇が病態の悪化につながるとされている。この
ため、腸管において、二糖類を分解するスクラーゼやマ
ルターゼなどの酵素（αグルコシダーゼ）の活性を阻害
することで、急激な、血糖の上昇がおこらないようにす
る薬剤が臨床的に用いられている。しかし、従来のαグ
ルコシダーゼ阻害剤には副作用として、放屁などの腸管
ガス症状の他、最近では、肝障害も報告されている。か
かる副作用は、αグルコシダーゼ阻害による糖類の未消
化に起因するものであり、酵素阻害作用が強いものほ
ど、副作用も強くあらわれる。したがって、酵素阻害作
用が強いものが必ずしも望まれているわけではない。

【０００３】一方、ユーゲニア・ユニフローラ（Eugeni
a uniflora L.）はパラグアイ、ブラジルなどに自生す
るフトモモ科の亜高木であり、その葉の煎液は民間的に
安全な解熱、健胃、リューマチ、発汗、下痢どめ、高コ
レステロール血症、高血圧等に用いられる他、糖尿病、
肥満に対しても用いられている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ユーゲ
ニア・ユニフローラの糖尿病、肥満に対する有効性の作
用機序、作用成分は全く不明であり、ユーゲニア・ユニ
フローラをどのような病態に、どのように加工して服用
すれば有効であるかについては、全く知られていなかっ
た。

【０００５】そこで本発明の目的は、民間的に用いられ
ている安全なユーゲニア・ユニフローラの糖尿病、肥満
に対する有効性の作用機序、作用成分を明らかにし、糖
尿病や肥満に臨床応用できるαグルコシダーゼ阻害剤を
提供することにある。

【０００６】また、本発明の他の目的は、ユーゲニア・
ユニフローラから抽出される新規ペンタヒドロキシイン
ドリジジン化合物を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の事
情に鑑み経験的に安全性が確保されている民間薬の中か
らαグルコシダーゼ阻害作用を有する薬物を見出すべく
鋭意研究を重ねた結果、ユーゲニア・ユニフローラの抽
出物である新規化合物等やユーゲニア・ユニフローラの
粉末を有効成分として含有する薬剤が、腸管ガス症状や
肝障害等の副作用を伴うことなく、αグルコシダーゼ阻
害効果を有することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。

【０００８】すなわち、本発明は、下記の通りである。（１）次式（Ｉ）、で表される（−）−（１Ｓ，２Ｒ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，
８ａＲ）−１，２，６，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジンである。

【０００９】（２）次式（II）、で表される（＋）−（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，
８ａＳ）−１，２，５，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジンである。

【００１０】（３）ユーゲニア・ユニフローラの抽出物
または粉末を有効成分とするαグルコシダーゼ阻害剤で
ある。

【００１１】（４）前記ユーゲニア・ユニフローラの
抽出物として、次式（Ｉ）、で表される（−）−（１Ｓ，２Ｒ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，
８ａＲ）−１，２，６，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジン、次式（II）、で表される（＋）−（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，
８ａＳ）−１，２，５，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジン、および次式（III）、で表される（＋）−（３α，４α，５β）−１−メチル
ピペリジン−３，４，５−トリオールからなる群から選
ばれる１種または２種以上を有効成分として含有するα
グルコシダーゼ阻害剤である。

【００１２】ここで、本発明のαグルコシダーゼ阻害剤
とは、αグルコシダーゼの阻害を目的として使用される
医薬を指称し、例えば、糖尿病、肥満等の疾病の治療に
有効な医薬のことをいう。

【００１３】

【発明の実施の形態】本発明の有効成分であるユーゲニ
ア・ユニフローラは、それらを抽出して得られる抽出物
あるいは粉砕して得られる粉末の形態で用いられるが、
その他どのような形態としてもよい。

【００１４】ユーゲニア・ユニフローラの抽出物として
は、各種水系溶剤抽出物が挙げられるが、水抽出物を用
いることが好ましい。

【００１５】具体的な前記抽出物の調製例としては、ユ
ーゲニア・ユニフローラを４倍量の熱水で抽出し、得ら
れた抽出液を濾過する方法が挙げられる。この抽出物
は、必要に応じて乾燥させ、乾燥粉末とすることもでき
る。

【００１６】本発明の有効成分は、経口剤として投与す
ることができる。本発明において使用し得る医薬品用担
体は、剤型に応じて選択することができ、経口剤の場合
には、例えば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カ
ルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩等
を利用することができる。また、経口剤の調製にあたっ
ては、更に結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動
性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を配合することがで
きる。これらの具体例としては、以下に示すものが挙げ
られる。

【００１７】結合剤デンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、
ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピ
ルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポ
リビニルピロリドン、マクロゴール等である。

【００１８】崩壊剤デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロー
スカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒ
ドロキシプロピルセルロース等である。

【００１９】界面活性剤ラウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸
エステル、ポリソルベート８０等である。

【００２０】滑沢剤タルク、ロウ類、水素添加植物油、ショ糖脂肪酸エステ
ル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウ
ム、ステアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコー
ル等である。

【００２１】流動性促進剤軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケ
イ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等である。

【００２２】また、本発明の有効成分は、懸濁液、エマ
ルジョン、シロップ剤、エリキシル剤等の経口用の液剤
としても投与することができ、これらの各種剤型には、
矯味矯臭剤、着色剤を配合することができる。

【００２３】本発明の有効成分の投与量は、投与経路、
疾患の程度、被投与者の年齢等によって異なるが、一般
には経口投与の場合、大人１日当たり、１〜１０ｇ程度
となる量を１〜３回に分けて投与すればよい。

【００２４】なお、本発明で用いられる有効成分は、α
グルコシダーゼ阻害剤としては全く知られていなかった
が、上述の解熱等に対し民間薬として長年用いられてき
たものであり、安全性が確認されているので、安心して
使用することができる。

【００２５】

【実施例】次に本発明を実施例、実験例および製剤例を
挙げ更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例等に
何ら制約されるものではない。

【００２６】実施例１ユーゲニア・ユニフローラの乾燥葉を４倍量の蒸留水で
１時間攪拌抽出し、熱時濾過後、濾液をスプレードライ
し、熱水抽出エキス（収率１８．９％）を得た（被験薬
Ａ）。

【００２７】実施例２実施例１で得た熱水抽出エキス（収率１８．９％）５０
０ｇを蒸留水５リットルに溶解し、不溶物を濾過後、濾
液を強酸型陽イオン交換樹脂アンバーライト（Ａｍｂｅ
ｒｌｉｔｅ）ＩＲ−１２０Ｂ（Ｈ^＋ｆｏｒｍ，５００
ｍｌ，オルガノ）に通導した。吸着部を０．５Ｎ−ＮＨ
_４ＯＨを用いて溶出させ、減圧濃縮後、凍結乾燥して２
４．９ｇの褐色アメ状のエキスを得た。

【００２８】このエキスを蒸留水に溶かし、弱酸型陽イ
オン交換樹脂アンバーライトＣＧ−５０（Ｈ^＋ｆｏｒ
ｍ，３００ｍｌ，オルガノ）に通導して、同様にして
２．１ｇの褐色アメ状の吸着部を得た。該吸着部１．９
５ｇを少量の蒸留水に溶かし、透析膜シームレスセルロ
ースチューブ３０（和光純薬）に詰め、攪拌しながら蒸
留水２リットル中で１２時間、２回透析を行った。得ら
れた外液を減圧濃縮後凍結乾燥し、１．９０ｇのエキス
を得た。

【００２９】これをさらに陰イオン交換樹脂ＤＥＡＥセ
ルロース−ＳＨカラム（Ｃｌ−ｆｏｒｍ，２．２×５０
ｃｍ，和光純薬）に通導し、蒸留水１リットルを流して
溶出した液を減圧濃縮後凍結乾燥し、１．８８ｇのエキ
スを得た。

【００３０】このエキスを少量の蒸留水に溶かし、シリ
カゲル６０（７０−２３０メッシュ，ＭＥＲＣＫ）を少
量加え、減圧下で水を留去して、シリカゲルに吸着させ
たものを、２−プロパノール（２−ＰｒＯＨ）で充填し
たシリカゲルカラム（２．２×５０ｃｍ）に積層した。
これに２−ＰｒＯＨ／アセトール（ＡｃＯＨ）／Ｈ_２Ｏ
混合液を流し、最初は試験管に２００滴づつ、次いで１
００ｍｌづつ分取して、画分Ａ（試験管：２３〜７０
本、２−ＰｒＯＨ／ＡｃＯＨ／Ｈ_２Ｏ＝８００／１／
２，６１３ｍｇ）および画分Ｂ（試験管：７１〜１４０
本＋１００ｍｌ：１〜１６，２−ＰｒＯＨ／ＡｃＯＨ／
Ｈ_２Ｏ＝８００／１／２〜４００／１／２，８５９ｍ
ｇ）に粗分画した。

【００３１】画分Ａをピリジン６ｍｌに溶かし、無水酢
酸２ｍｌを加えて４０時間攪拌の後減圧下で溶媒を留去
し、残渣からクロロホルム可溶分（Ｆ−Ａ−Ａｃ）を得
た。これを濃縮ゾーン付シリカゲル６０Ｆ２５４プレー
ト（ＭＥＲＣＫ）にスポットし、ｎ−ヘキサン／酢酸エ
チル（ＡｃＯＥｔ）＝１／２で展開し、３本の帯に分か
れた部分を削りとり溶出させ、Ｒｆ値の大きいものから
順にＦ−Ａ−Ａｃ−１（１４８ｍｇ）、Ｆ−Ａ−Ａｃ−
２（１６ｍｇ）、Ｆ−Ａ−Ａｃ−３（３３６ｍｇ）とし
た。

【００３２】１１３ｍｇのＦ−Ａ−Ａｃ−１を５０％メ
タノールに溶かし、アンモニアアルカリ性で１時間還流
後、減圧下でアンモニアとメタノールを除去し、アンバ
ーライトＣＧ−５０に通導して吸着部を０．５Ｎ−ＮＨ
_４ＯＨで溶出させた。これにはニンヒドリン反応、クロ
リン−ｏ−トリジン反応共に陽性を示す化合物が含まれ
ていたので、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
で分取して、１１．５ｍｇの（−）−（１Ｓ，２Ｒ，６
Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，８ａＲ）−１，２，６，７，８−ペン
タヒドロキシインドリジジン（熱水抽出エキスに対して
収率０．０００３％）を得た（被験薬Ｂ）。ＨＰＬＣの
条件は、ポンプ：Ｍｏｄｅｌ５１０（Ｗａｔｅｒｓ）、
インジェクター；ＭｏｄｅｌＵ６Ｋ（Ｗａｔｅｒｓ）、
ガードカラム：アサヒパック（Ａｓａｈｉｐａｃｋ）Ｏ
ＤＰ−１３０Ｇ７Ｂ（Ｓｈｏｄｅｘ）、検出：ＲＩＳ
Ｅ−１１（Ｓｈｏｄｅｘ）、移動相：ＣＨ_３ＣＮ／Ｈ_２
Ｏ＝１５／８５、流速：１．５ｍｌ／ｍｉｎ、カラム温
度：室温、とした。

【００３３】同様にして、２２０ｍｇのＦ−Ａ−Ａｃ−
３より、１３．０ｍｇの（−）−（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，
７Ｒ，８Ｓ，８ａＳ）−１，２，５，７，８−ペンタヒ
ドロキシインドリジジン（熱水抽出エキスに対して収率
０．００４％）を得た（被験薬Ｃ）。

【００３４】次に画分Ｂをシリカゲルに吸着させ、Ａｃ
ＯＥｔで充填したカラム（１．６×４０ｃｍ）に積層
し、ＡｃＯＥｔ／メタノール（ＭｅＯＨ）混合液で溶出
させた。この手順を繰り返し、ニンヒドリン反応、クロ
リン−ｏ−トリジン反応ともに陽性を示す化合物を、そ
れを含む画分（ＡｃＯＥｔ／ＭｅＯＨ＝１０／１，４７
ｍｇ）からＨＰＬＣにて分取し、１６．１ｍｇの（＋）
−（３α，４α，５β）−１−メチルピペリジン−３，
４，５−トリオール（熱水抽出エキスに対して収率０．
００３％）を得た（被験薬Ｄ）。

【００３５】実験例１ラット小腸刷子縁膜に５倍量の５０ｍＭマンニトール／
２ｍＭトリス塩酸緩衝液を加え、氷冷下で２分間ホモゲ
ナイズ後、１Ｍ−ＣａＣｌ_２を最終濃度１０ｍＭになる
まで添加し、低温で２０分間攪拌した。これを遠心分離
（５，０００ｒｐｍ，３０分間）し、上清を再度遠心分
離（１５，０００ｒｐｍ，３０分間）して、その沈殿物
を１０ｍＭマレイン酸水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ
５．８）で２回洗浄した（１５，０００ｒｐｍ，３０分
間）。こうして得られた沈殿物を、１０ｍＭマレイン酸
水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．８）を用いて適宣希
釈し、αグルコシダーゼ液とした。このαグルコシダー
ゼ液２０μｌと、それぞれ蒸留水に溶解した被験薬Ａ、
被験薬Ｂ、被験薬Ｃおよび被験薬Ｄ２０μｌづつとを混
合し、３７℃、１０分間インキュベートした。この混合
液に基質としてマルトースまたはスクロース（２０ｍｇ
／ｍｌ，ｉｎ２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８））
４０μｌを添加し、３７℃、１０分間インキュベート
し、反応液中で生成したグルコースをグルコースオキシ
ダーゼ法にて測定した。試料中に基質となる糖が存在す
る可能性があるので、各サンプルごとにブランク（基質
のかわりに緩衝液を添加したもの）をとり、その値でグ
ルコース値を補正し、次式により阻害率を算出した。阻害率（％）＝（（（被験薬非添加群のグルコース濃
度）−（被験薬添加群のグルコース濃度））／（被験薬
非添加群のグルコース濃度））×１００

【００３６】実験例１の結果を下記の表１、表２に示
す。

【表１】

【００３７】

【表２】

【００３８】実験例２一晩絶食させた６週齢のＩＣＲ系雄性マウスに対し、被
験薬Ａ（１００ｍｇ／ｋｇ／１０ｍｌ）とスクロース
（２ｇ／ｋｇ／１０ｍｌ）との混合液を経口投与した。
経口投与直前（０時）と、経口投与から０．５、１．
０、２．０、３．０時間経過後に、マウスの眼底静脈か
ら採血して、血中のグルコース濃度をグルコースオキシ
ダーゼ法にて測定した。

【００３９】実験例２の結果を表３に示す。

【表３】

【００４０】実験例１および実験例２の結果から、本発
明の有効成分がαグルコシダーゼ（マルターゼ、スクラ
ーゼ）を阻害し、糖摂取後の血糖の上昇を抑制すること
が証明された。

【００４１】製剤例１顆粒剤の調製：実施例１の被験薬Ａの粉末２００ｇを乳
糖８９ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇと混合
し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径２０ｍ
ｍ、重量２．３ｇのスラッグ錠を得た。このスラッグ錠
をオシレーターで粉砕し、整粒後篩別し、粒径２０〜５
０メッシュの顆粒剤を得た。

【００４２】製剤例２錠剤の調製：実施例１の被験薬Ａの粉末２００ｍｇを微
結晶セルロース２０ｇおよびステアリン酸マグネシウム
５ｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、
直径７ｍｍ、重量２２５ｍｇの錠剤を製造した。本錠１
錠中には、実施例１の被験薬Ａの粉末を２００ｍｇ含有
する。

【００４３】製剤例３カプセル剤の調製：実施例１の被験薬Ａの粉末５００ｍ
ｇを硬カプセルに充填して、カプセル剤を調製した。

【００４４】製剤例４錠剤の調製：（１）コーンスターチ４４ｇ（２）結晶セルロース４０ｇ（３）カルボキシメチルセルロースカルシウム５ｇ（４）軽質無水ケイ酸０．５ｇ（５）ステアリン酸マグネシウム０．５ｇ（６）実施例１の被験薬Ａの粉末１０ｇ計１００ｇ

【００４５】上記の処方に従って、（１）〜（６）を均
一に混合し、打錠機にて圧縮成型して一錠２００ｍｇの
錠剤を得た。

【００４６】この錠剤一錠には、実施例１の被験薬Ａ２
０ｍｇが含有されており、成人１日１０〜２０錠を数回
に分けて服用する。

【００４７】製剤例５顆粒剤の調製：実施例２の被験薬Ｂの粉末２００ｇを乳
糖８９ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇと混合
し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径２０ｍ
ｍ、重量２．３ｇのスラッグ錠を得た。このスラッグ錠
をオシレーターで粉砕し、整粒後篩別し、粒径２０〜５
０メッシュの顆粒剤を得た。

【００４８】製剤例６錠剤の調製：実施例２の被験薬Ｂの粉末２００ｍｇを微
結晶セルロース２０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウ
ム５ｍｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠
し、直径７ｍｍ、重量２２５ｍｇの錠剤を製造した。本
錠１錠中には、実施例２の被験薬Ｂの粉末を２００ｍｇ
含有する。

【００４９】製剤例７カプセル剤の調製：実施例２の被験薬Ｂの粉末５００ｍ
ｇを硬カプセルに充填し、カプセル剤を調製した。

【００５０】製剤例８顆粒剤の調製：実施例２の被験薬Ｃの粉末２００ｇを乳
糖８９ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇと混合
し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径２０ｍ
ｍ、重量２．３ｇのスラッグ錠を得た。このスラッグ錠
をオシレーターで粉砕し、整粒後篩別し、粒径２０〜５
０メッシュの顆粒剤を得た。

【００５１】製剤例９錠剤の調製：実施例２の被験薬Ｃの粉末２００ｍｇを微
結晶セルロース２０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウ
ム５ｍｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠
し、直径７ｍｍ、重量２２５ｍｇの錠剤を製造した。本
錠１錠中には、実施例２の被験薬Ｃの粉末を２００ｍｇ
含有する。

【００５２】製剤例１０カプセル剤の調製：実施例２の被験薬Ｃの粉末５００ｍ
ｇを硬カプセルに充填し、カプセル剤を調製した。

【００５３】製剤例１１顆粒剤の調製：実施例２の被験薬Ｄの粉末２００ｇを乳
糖８９ｇおよびステアリン酸マグネシウム１ｇと混合
し、この混合物を単発式打錠機にて打錠し、直径２０ｍ
ｍ、重量２．３ｇのスラッグ錠を得た。このスラッグ錠
をオシレーターで粉砕し、整粒後篩別し、粒径２０〜５
０メッシュの顆粒剤を得た。

【００５４】製剤例１２錠剤の調製：実施例２の被験薬Ｄの粉末２００ｍｇを微
結晶セルロース２０ｍｇおよびステアリン酸マグネシウ
ム５ｍｇと混合し、この混合物を単発式打錠機にて打錠
し、直径７ｍｍ、重量２２５ｍｇの錠剤を製造した。本
錠１錠中には、実施例２の被験薬Ｄの粉末を２００ｍｇ
含有する。

【００５５】製剤例１３カプセル剤の調製：実施例２の被験薬Ｄの粉末５００ｍ
ｇを硬カプセルに充填し、カプセル剤を調製した。

【００５６】

【発明の効果】以上説明してきたように、本発明におい
ては、民間的に用いられている安全なユーゲニア・ユニ
フローラの糖尿病、肥満に対する有効性の作用機序、作
用成分が明らかとなり、糖尿病や肥満に臨床応用できる
αグルコシダーゼ阻害剤を得ることができた。また、前
記ユーゲニア・ユニフローラから新規ペンタヒドロキシ
インドリジジン化合物を抽出することができた。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次式（Ｉ）、で表される（−）−（１Ｓ，２Ｒ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，
８ａＲ）−１，２，６，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジン。
【請求項２】次式（II）、で表される（＋）−（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，
８ａＳ）−１，２，５，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジン。
【請求項３】ユーゲニア・ユニフローラの抽出物また
は粉末を有効成分とするαグルコシダーゼ阻害剤。
【請求項４】前記ユーゲニア・ユニフローラの抽出物
として、次式（Ｉ）、で表される（−）−（１Ｓ，２Ｒ，６Ｓ，７Ｒ，８Ｒ，
８ａＲ）−１，２，６，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジン、次式（II）、で表される（＋）−（１Ｓ，２Ｒ，５Ｒ，７Ｒ，８Ｓ，
８ａＳ）−１，２，５，７，８−ペンタヒドロキシイン
ドリジジン、および次式（III）、で表される（＋）−（３α，４α，５β）−１−メチル
ピペリジン−３，４，５−トリオールからなる群から選
ばれる１種または２種以上を有効成分として含有するα
グルコシダーゼ阻害剤。