JP2000041693A - ガラクトオリゴ糖の製造方法 - Google Patents
ガラクトオリゴ糖の製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 高温下での製造が可能で雑菌の汚染の可能性
が少なく、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が
高いガラクトオリゴ糖の製造方法を提供する。 【解決手段】 乳糖又は乳糖含有物にサーマス属に属す
る微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼを作用させる
ことを特徴とするガラクトオリゴ糖の製造方法、望まし
くは、サーマス属に属する微生物が、微工研菌寄第９１
８４号（FERM BP-1678）、微工研菌寄第９１８５号（FE
RM BP-1679）、微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-168
0）、又はこれらの混合菌株から選択されるいずれかの
菌株である前記ガラクトオリゴ糖の製造方法。
が少なく、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が
高いガラクトオリゴ糖の製造方法を提供する。 【解決手段】 乳糖又は乳糖含有物にサーマス属に属す
る微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼを作用させる
ことを特徴とするガラクトオリゴ糖の製造方法、望まし
くは、サーマス属に属する微生物が、微工研菌寄第９１
８４号（FERM BP-1678）、微工研菌寄第９１８５号（FE
RM BP-1679）、微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-168
0）、又はこれらの混合菌株から選択されるいずれかの
菌株である前記ガラクトオリゴ糖の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ガラクトオリゴ糖
の製造方法に関するものである。詳しくは、本発明は、
サーマス（Thermus ）属に属する微生物に由来するβ−
ガラクトシダーゼを使用することから、７０℃以上の高
温下での製造が可能で雑菌の汚染の可能性が少なく、原
料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が高いガラクト
オリゴ糖の製造方法に関するものである。
の製造方法に関するものである。詳しくは、本発明は、
サーマス（Thermus ）属に属する微生物に由来するβ−
ガラクトシダーゼを使用することから、７０℃以上の高
温下での製造が可能で雑菌の汚染の可能性が少なく、原
料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が高いガラクト
オリゴ糖の製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、ガラクトオリゴ糖の製造方法とし
ては、β−ガラクトシダーゼを使用する方法が知られて
いる。β−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−ガラクトシドガ
ラクトヒドロラーゼ、EC3.2.1.23）は、β−Ｄ−ガラク
トシド結合を分解する酵素であり、哺乳動物の小腸、組
織等に広く分布し、ラクトースの消化、複合糖質の代謝
等に関与することが知られている。また、β−ガラクト
シダーゼは、前記哺乳動物に限らず、各種植物又は微生
物にも存在しており、近年これらの各種起源の酵素、例
えば、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、クラ
イベロマイセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、
アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger ）等の微
生物起源の酵素について、そのガラクトース転移作用を
利用して、乳糖からのガラクトオリゴ糖の製造に有用で
あることが示されている。ヒトの腸内有用細菌であるビ
フィズス菌の増殖促進物質としてガラクトオリゴ糖が注
目されており、微生物起源のβ−ガラクトシダーゼのガ
ラクトオリゴ糖製造への応用が期待されている。
ては、β−ガラクトシダーゼを使用する方法が知られて
いる。β−ガラクトシダーゼ（β−Ｄ−ガラクトシドガ
ラクトヒドロラーゼ、EC3.2.1.23）は、β−Ｄ−ガラク
トシド結合を分解する酵素であり、哺乳動物の小腸、組
織等に広く分布し、ラクトースの消化、複合糖質の代謝
等に関与することが知られている。また、β−ガラクト
シダーゼは、前記哺乳動物に限らず、各種植物又は微生
物にも存在しており、近年これらの各種起源の酵素、例
えば、エシェリキア・コリ（Escherichia coli）、クラ
イベロマイセス・ラクチス（Kluyveromyces lactis）、
アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger ）等の微
生物起源の酵素について、そのガラクトース転移作用を
利用して、乳糖からのガラクトオリゴ糖の製造に有用で
あることが示されている。ヒトの腸内有用細菌であるビ
フィズス菌の増殖促進物質としてガラクトオリゴ糖が注
目されており、微生物起源のβ−ガラクトシダーゼのガ
ラクトオリゴ糖製造への応用が期待されている。
【０００３】しかしながら、微生物起源のβ−ガラクト
シダーゼに限らず、一般にβ−ガラクトシダーゼの糖転
移反応は、乳糖の加水分解反応と競合するものであり、
上記糖転移反応を優先させて所望のガラクトオリゴ糖を
収率よく製造することは、一般に非常に困難である。即
ち、上記反応においては、所望のオリゴ糖と共に、競合
する加水分解反応によってグルコース、ガラクトースが
生産され、しかも一旦生成したオリゴ糖も加水分解を受
けて単糖に変換され、オリゴ糖生成量はかなり低くな
る。事実、微生物起源の各種β−ガラクトシダーゼのガ
ラクトオリゴ糖生成量は、酵素の種類、基質とする乳糖
の濃度、酵素濃度（活性）、反応条件等にかかわらず、
最大でも約２５％（重量。以下、特に断りのない限り同
じ。）程度に過ぎないことが報告されている［以上、雪
印乳業技術研究所報告、第７８号、第１９〜２６頁、１
９８２年；バイオケミストリー（Biochemistry）、第１
５巻、第９号、第１９９４〜２００１頁、１９７６年；
ジャーナル・デイリー・サイエンス（Journal Dairy Sc
ience ）、第６１巻、第１号、第３３〜３８頁、１９７
８年、及び第６８巻、第３号、第５８１〜５８８頁、１
９８５年に記載されている。］。
シダーゼに限らず、一般にβ−ガラクトシダーゼの糖転
移反応は、乳糖の加水分解反応と競合するものであり、
上記糖転移反応を優先させて所望のガラクトオリゴ糖を
収率よく製造することは、一般に非常に困難である。即
ち、上記反応においては、所望のオリゴ糖と共に、競合
する加水分解反応によってグルコース、ガラクトースが
生産され、しかも一旦生成したオリゴ糖も加水分解を受
けて単糖に変換され、オリゴ糖生成量はかなり低くな
る。事実、微生物起源の各種β−ガラクトシダーゼのガ
ラクトオリゴ糖生成量は、酵素の種類、基質とする乳糖
の濃度、酵素濃度（活性）、反応条件等にかかわらず、
最大でも約２５％（重量。以下、特に断りのない限り同
じ。）程度に過ぎないことが報告されている［以上、雪
印乳業技術研究所報告、第７８号、第１９〜２６頁、１
９８２年；バイオケミストリー（Biochemistry）、第１
５巻、第９号、第１９９４〜２００１頁、１９７６年；
ジャーナル・デイリー・サイエンス（Journal Dairy Sc
ience ）、第６１巻、第１号、第３３〜３８頁、１９７
８年、及び第６８巻、第３号、第５８１〜５８８頁、１
９８５年に記載されている。］。
【０００４】一方、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖
の収率を改善した例として、バシラス・サーキュランス
（Bacillus circulans）由来の２種類のβ−ガラクトシ
ダーゼを含む粗酵素を使用し、３０％以上の乳糖濃度の
溶液に前記粗酵素を作用させ、３０〜４０％の高収率で
ガラクトオリゴ糖を製造する方法が開示されている（特
公平３−５４５５９号公報。以下、従来技術１と記載す
る。）。
の収率を改善した例として、バシラス・サーキュランス
（Bacillus circulans）由来の２種類のβ−ガラクトシ
ダーゼを含む粗酵素を使用し、３０％以上の乳糖濃度の
溶液に前記粗酵素を作用させ、３０〜４０％の高収率で
ガラクトオリゴ糖を製造する方法が開示されている（特
公平３−５４５５９号公報。以下、従来技術１と記載す
る。）。
【０００５】また、前記従来技術１の粗酵素の酵素化学
的性質は米国特許第４２３７２３０号明細書（対応する
日本公開特許；特開昭５３−１４８５９１号公報。以
下、従来技術２と記載する。）に記載されるとおりであ
り、その耐熱性は低く、従来技術２の公開公報第６図に
示されるとおり、６５℃で大部分が失活する。
的性質は米国特許第４２３７２３０号明細書（対応する
日本公開特許；特開昭５３−１４８５９１号公報。以
下、従来技術２と記載する。）に記載されるとおりであ
り、その耐熱性は低く、従来技術２の公開公報第６図に
示されるとおり、６５℃で大部分が失活する。
【０００６】しかしながら、これらの従来技術には、次
に記載するとおりの不都合があった。
に記載するとおりの不都合があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】前記従来の技術に開示
されるとおり、微生物起源のβ−ガラクトシダーゼを使
用したガラクトオリゴ糖の製造方法は公知であったが、
前記のとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収
率が約２５％程度と低収率であるという問題点を有して
いた。また、この問題点を解決するため、バシラス・サ
ーキュランス（Bacillus circulans）由来の２種類のβ
−ガラクトシダーゼを含む粗酵素を使用して、３０〜４
０％の高収率でガラクトオリゴ糖を製造する前記従来技
術１のガラクトオリゴ糖の製造方法が知られているが、
この製造方法に使用される酵素は前記従来技術２に記載
されるとおり、耐熱性が低く、７０℃以上の高温下での
ガラクトオリゴ糖の製造には使用できないという問題点
を有していた。
されるとおり、微生物起源のβ−ガラクトシダーゼを使
用したガラクトオリゴ糖の製造方法は公知であったが、
前記のとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収
率が約２５％程度と低収率であるという問題点を有して
いた。また、この問題点を解決するため、バシラス・サ
ーキュランス（Bacillus circulans）由来の２種類のβ
−ガラクトシダーゼを含む粗酵素を使用して、３０〜４
０％の高収率でガラクトオリゴ糖を製造する前記従来技
術１のガラクトオリゴ糖の製造方法が知られているが、
この製造方法に使用される酵素は前記従来技術２に記載
されるとおり、耐熱性が低く、７０℃以上の高温下での
ガラクトオリゴ糖の製造には使用できないという問題点
を有していた。
【０００８】更に、従来、サーマス属に属する微生物に
由来するβ−ガラクトシダーゼを単独で使用した原料乳
糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が高いガラクトオリ
ゴ糖の製造方法については一切知られていなかった。
由来するβ−ガラクトシダーゼを単独で使用した原料乳
糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が高いガラクトオリ
ゴ糖の製造方法については一切知られていなかった。
【０００９】本発明者らは、前記従来技術に鑑みて、乳
糖又は乳糖含有物にサーマス属に属する微生物に由来す
るβ−ガラクトシダーゼを作用させることにより、７０
℃以上の高温下における製造が可能であり、雑菌による
汚染の可能性が少なく、原料乳糖に対するガラクトオリ
ゴ糖の収率が高いという効果が奏せられることを見い出
し、本発明を完成した。
糖又は乳糖含有物にサーマス属に属する微生物に由来す
るβ−ガラクトシダーゼを作用させることにより、７０
℃以上の高温下における製造が可能であり、雑菌による
汚染の可能性が少なく、原料乳糖に対するガラクトオリ
ゴ糖の収率が高いという効果が奏せられることを見い出
し、本発明を完成した。
【００１０】また、サーマス属に属する微生物が、微工
研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）、微工研菌寄第９
１８５号（FERM BP-1679）、微工研菌寄第９１８６号
（FERMBP-1680）、又はこれらの混合菌株から選択され
るいずれかのものであることにより、反応生成物による
阻害が少なく、より一層の原料乳糖に対するガラクトオ
リゴ糖の収率が高いという効果が奏されることを見い出
し、本発明を完成した。
研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）、微工研菌寄第９
１８５号（FERM BP-1679）、微工研菌寄第９１８６号
（FERMBP-1680）、又はこれらの混合菌株から選択され
るいずれかのものであることにより、反応生成物による
阻害が少なく、より一層の原料乳糖に対するガラクトオ
リゴ糖の収率が高いという効果が奏されることを見い出
し、本発明を完成した。
【００１１】本発明の目的は、従来法の欠点を解消し、
高温下における製造が可能であり、雑菌による汚染の可
能性が少なく、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収
率が高いガラクトオリゴ糖の製造方法を提供することで
ある。
高温下における製造が可能であり、雑菌による汚染の可
能性が少なく、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収
率が高いガラクトオリゴ糖の製造方法を提供することで
ある。
【００１２】
【課題を解決するための手段】前記課題を解決する本発
明は、乳糖又は乳糖含有物にサーマス属に属する微生物
に由来するβ−ガラクトシダーゼを作用させることを特
徴とするガラクトオリゴ糖の製造方法であり、サーマス
属に属する微生物が微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-
1678）、微工研菌寄第９１８５号（FERM BP-1679）、微
工研菌寄第９１８６号（FERM BP-1680）、又はこれらの
混合菌株から選択されるいずれかの菌株であること（以
下、態様１と記載する。）を望ましい態様としてもい
る。
明は、乳糖又は乳糖含有物にサーマス属に属する微生物
に由来するβ−ガラクトシダーゼを作用させることを特
徴とするガラクトオリゴ糖の製造方法であり、サーマス
属に属する微生物が微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-
1678）、微工研菌寄第９１８５号（FERM BP-1679）、微
工研菌寄第９１８６号（FERM BP-1680）、又はこれらの
混合菌株から選択されるいずれかの菌株であること（以
下、態様１と記載する。）を望ましい態様としてもい
る。
【００１３】
【発明の実施の形態】次に、本発明について詳細に説明
する。
する。
【００１４】本発明の方法に使用する乳糖又は乳糖含有
物としては、ホエーの蛋白質を除去し、濃縮し、結晶化
することにより分離された乳糖又は、全乳、脱脂乳、ホ
エー等の乳糖含有物を使用することができ、簡便には市
販の乳糖（例えば、三栄源エフ・エフ・アイ社製等。）
を使用することができる。
物としては、ホエーの蛋白質を除去し、濃縮し、結晶化
することにより分離された乳糖又は、全乳、脱脂乳、ホ
エー等の乳糖含有物を使用することができ、簡便には市
販の乳糖（例えば、三栄源エフ・エフ・アイ社製等。）
を使用することができる。
【００１５】本発明の方法に使用する酵素であるβ−ガ
ラクトシダーゼは、サーマス属に属する微生物に由来す
るβ−ガラクトシダーゼであればいずれであっても使用
することができるが、米国特許第５４３２０７８号明細
書に記載されるとおり、他のサーマス属に属する微生物
に比較して反応生成物による阻害が少なく、工業技術院
生命工学工業技術研究所（旧名称：工業技術院微生物工
業技術研究所）にブタペスト条約に基づく国際寄託がさ
れている微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）、微
工研菌寄第９１８５号（FERM BP-1679）、微工研菌寄第
９１８６号（FERM BP-1680）、又はこれらの混合菌株か
ら選択されるいずれかのサーマス属に属する微生物に由
来するβ−ガラクトシダーゼを使用することが望まし
い。
ラクトシダーゼは、サーマス属に属する微生物に由来す
るβ−ガラクトシダーゼであればいずれであっても使用
することができるが、米国特許第５４３２０７８号明細
書に記載されるとおり、他のサーマス属に属する微生物
に比較して反応生成物による阻害が少なく、工業技術院
生命工学工業技術研究所（旧名称：工業技術院微生物工
業技術研究所）にブタペスト条約に基づく国際寄託がさ
れている微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）、微
工研菌寄第９１８５号（FERM BP-1679）、微工研菌寄第
９１８６号（FERM BP-1680）、又はこれらの混合菌株か
ら選択されるいずれかのサーマス属に属する微生物に由
来するβ−ガラクトシダーゼを使用することが望まし
い。
【００１６】本発明の方法に使用するβ−ガラクトシダ
ーゼをサーマス属に属する微生物から製造する方法は、
常法により製造することができるが、具体的には例え
ば、参考例に詳記するとおり、米国特許第５４３２０７
８号明細書に開示された方法に従って、サーマス属に属
する微生物を培養し、集菌し、菌体を破砕し、粗酵素を
抽出し、硫酸アンモニウムで沈殿し、透析し、イオン交
換樹脂及びゲル濾過処理を適宜組合せて精製し、β−ガ
ラクトシダーゼを製造することができる。
ーゼをサーマス属に属する微生物から製造する方法は、
常法により製造することができるが、具体的には例え
ば、参考例に詳記するとおり、米国特許第５４３２０７
８号明細書に開示された方法に従って、サーマス属に属
する微生物を培養し、集菌し、菌体を破砕し、粗酵素を
抽出し、硫酸アンモニウムで沈殿し、透析し、イオン交
換樹脂及びゲル濾過処理を適宜組合せて精製し、β−ガ
ラクトシダーゼを製造することができる。
【００１７】本発明の方法のβ−ガラクトシダーゼの作
用条件のうち、基質である乳糖は、５〜５０％の乳糖濃
度の溶液として使用することができるが、後記する試験
例から明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリ
ゴ糖の収率の点から、２５〜４５％の乳糖濃度の溶液を
使用することが望ましい。
用条件のうち、基質である乳糖は、５〜５０％の乳糖濃
度の溶液として使用することができるが、後記する試験
例から明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリ
ゴ糖の収率の点から、２５〜４５％の乳糖濃度の溶液を
使用することが望ましい。
【００１８】本発明の方法のβ−ガラクトシダーゼの作
用条件のうち、酵素の使用量は、基質である乳糖１ｇに
対して１〜１００単位の割合で使用することができる
が、後記する試験例から明らかなとおり、原料乳糖に対
するガラクトオリゴ糖の収率の点から、乳糖１ｇに対し
て１５〜４５単位の割合で使用することが望ましい。
用条件のうち、酵素の使用量は、基質である乳糖１ｇに
対して１〜１００単位の割合で使用することができる
が、後記する試験例から明らかなとおり、原料乳糖に対
するガラクトオリゴ糖の収率の点から、乳糖１ｇに対し
て１５〜４５単位の割合で使用することが望ましい。
【００１９】本発明の方法のβ−ガラクトシダーゼの作
用条件のうち、作用温度は、サーマス属に属する微生物
に由来するβ−ガラクトシダーゼの至適作用温度（７０
〜９０℃）であり、かつ雑菌の汚染の可能性が少ない７
０℃以上の高温で実施される。
用条件のうち、作用温度は、サーマス属に属する微生物
に由来するβ−ガラクトシダーゼの至適作用温度（７０
〜９０℃）であり、かつ雑菌の汚染の可能性が少ない７
０℃以上の高温で実施される。
【００２０】本発明の方法のβ−ガラクトシダーゼの作
用条件のうち、作用ｐＨは、格別の制限はなく、通常、
使用酵素の種類により、ｐＨ４〜８の範囲から選択され
るが、後記する試験例から明らかなとおり、原料乳糖に
対するガラクトオリゴ糖の収率の点から、ｐＨ５〜７の
範囲で実施されることが望ましい。具体的には、前記乳
糖溶液に酵素を添加する前に、使用酵素の種類によりｐ
Ｈ５〜７の範囲内で酸又はアルカリ剤の添加により所望
のｐＨに調整することにより実施される。この場合に酸
としては塩酸、クエン酸、リン酸等を例示することがで
き、また、アルカリ剤としては水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、炭酸カリウム等を例示することができる。
用条件のうち、作用ｐＨは、格別の制限はなく、通常、
使用酵素の種類により、ｐＨ４〜８の範囲から選択され
るが、後記する試験例から明らかなとおり、原料乳糖に
対するガラクトオリゴ糖の収率の点から、ｐＨ５〜７の
範囲で実施されることが望ましい。具体的には、前記乳
糖溶液に酵素を添加する前に、使用酵素の種類によりｐ
Ｈ５〜７の範囲内で酸又はアルカリ剤の添加により所望
のｐＨに調整することにより実施される。この場合に酸
としては塩酸、クエン酸、リン酸等を例示することがで
き、また、アルカリ剤としては水酸化ナトリウム、水酸
化カリウム、炭酸カリウム等を例示することができる。
【００２１】本発明の方法のβ−ガラクトシダーゼの作
用条件のうち、作用時間は、乳糖濃度、使用酵素の種類
及び組合せ、酵素の使用量、作用温度、作用ｐＨ等の条
件によって糖転移反応の進行状態が異なり、一概に決定
できないが、作用時間が短い場合未反応乳糖が残り、作
用時間が長い場合、ガラクトオリゴ糖が分解されること
から、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率の点か
ら、概ね２〜７時間で実施される。
用条件のうち、作用時間は、乳糖濃度、使用酵素の種類
及び組合せ、酵素の使用量、作用温度、作用ｐＨ等の条
件によって糖転移反応の進行状態が異なり、一概に決定
できないが、作用時間が短い場合未反応乳糖が残り、作
用時間が長い場合、ガラクトオリゴ糖が分解されること
から、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率の点か
ら、概ね２〜７時間で実施される。
【００２２】本発明の方法のβ−ガラクトシダーゼの作
用の制御は、温度によって実施することが可能であり、
反応溶液の温度を３０℃以下の低温に冷却することによ
り、実質的に酵素反応を停止することができる。
用の制御は、温度によって実施することが可能であり、
反応溶液の温度を３０℃以下の低温に冷却することによ
り、実質的に酵素反応を停止することができる。
【００２３】本発明の方法で得られたガラクトオリゴ糖
を含有する溶液は、そのまま、濃縮液又は乾燥粉末とし
て使用することもでき、更に、必要に応じて反応溶液を
公知の精製方法で精製し、ガラクトオリゴ糖濃度を高め
ることができる。精製は種々の方法で実施することがで
きるが、例えば、前記ガラクトオリゴ糖を含有する反応
溶液をイオン交換樹脂で処理して予備的に精製し、のち
活性炭カラムに通液してこれにガラクトオリゴ糖を吸着
させ、次いでアルコール水溶液で溶出させる方法、又は
前記ガラクトオリゴ糖を含有する溶液に単糖類及び二糖
類を資化する微生物を接種し、培養して単糖類及び二糖
類を消費させることによりガラクトオリゴ糖を単離する
方法を例示することができる。
を含有する溶液は、そのまま、濃縮液又は乾燥粉末とし
て使用することもでき、更に、必要に応じて反応溶液を
公知の精製方法で精製し、ガラクトオリゴ糖濃度を高め
ることができる。精製は種々の方法で実施することがで
きるが、例えば、前記ガラクトオリゴ糖を含有する反応
溶液をイオン交換樹脂で処理して予備的に精製し、のち
活性炭カラムに通液してこれにガラクトオリゴ糖を吸着
させ、次いでアルコール水溶液で溶出させる方法、又は
前記ガラクトオリゴ糖を含有する溶液に単糖類及び二糖
類を資化する微生物を接種し、培養して単糖類及び二糖
類を消費させることによりガラクトオリゴ糖を単離する
方法を例示することができる。
【００２４】前記のとおりの乳糖又は乳糖含有物にサー
マス属に属する微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼ
を作用させることを特徴とする本発明のガラクトオリゴ
糖の製造方法は、後記する試験例及び実施例からも明ら
かなとおり、７０℃以上の高温下での製造が可能である
から、雑菌による汚染の可能性が少なく、原料乳糖に対
するガラクトオリゴ糖の収率が高いガラクトオリゴ糖の
製造方法である。
マス属に属する微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼ
を作用させることを特徴とする本発明のガラクトオリゴ
糖の製造方法は、後記する試験例及び実施例からも明ら
かなとおり、７０℃以上の高温下での製造が可能である
から、雑菌による汚染の可能性が少なく、原料乳糖に対
するガラクトオリゴ糖の収率が高いガラクトオリゴ糖の
製造方法である。
【００２５】また、本発明の態様１において、サーマス
属に属する微生物が、微工研菌寄第９１８４号（FERM B
P-1678）、微工研菌寄第９１８５号（FERM BP-1679）、
微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-1680）、又はこれら
の混合菌株から選択されるいずれかの菌株であることに
より、米国特許第５４３２０７８号明細書に記載される
とおり、他のサーマス属に属する菌株に比較して反応生
成物による阻害が少なく、より一層の原料乳糖に対する
ガラクトオリゴ糖の収率が高いという効果が奏される。
属に属する微生物が、微工研菌寄第９１８４号（FERM B
P-1678）、微工研菌寄第９１８５号（FERM BP-1679）、
微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-1680）、又はこれら
の混合菌株から選択されるいずれかの菌株であることに
より、米国特許第５４３２０７８号明細書に記載される
とおり、他のサーマス属に属する菌株に比較して反応生
成物による阻害が少なく、より一層の原料乳糖に対する
ガラクトオリゴ糖の収率が高いという効果が奏される。
【００２６】次に試験例を示して本発明を詳細に説明す
るが、本発明においては、次の試験方法を採用した。
るが、本発明においては、次の試験方法を採用した。
【００２７】（１）β−ガラクトシダーゼの活性測定法 １．５０％のＯ−ニトロフェニル−β−ガラクトピラノ
シド（以下、ＯＮＰＧと記載する。）を含有する０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）２．４ｍｌに本酵素液
０．１ｍｌを添加し、７０℃、１０分間反応させ、のち
１０％Ｎａ2 ＣＯ3 液２．５ｍｌを添加して反応を停止
する。生成したＯ−ニトロフェノールの量を４２０ｎｍ
における吸光度を測定し、１分間に１μｍｏｌのＯ−ニ
トロフェノールを遊離する酵素量を１単位として定量し
た。
シド（以下、ＯＮＰＧと記載する。）を含有する０．１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．５）２．４ｍｌに本酵素液
０．１ｍｌを添加し、７０℃、１０分間反応させ、のち
１０％Ｎａ2 ＣＯ3 液２．５ｍｌを添加して反応を停止
する。生成したＯ−ニトロフェノールの量を４２０ｎｍ
における吸光度を測定し、１分間に１μｍｏｌのＯ−ニ
トロフェノールを遊離する酵素量を１単位として定量し
た。
【００２８】（２）ガラクトオリゴ糖の生成量の測定法 乳糖又は乳糖含有物のβ−ガラクトシダ−ゼ処理で得ら
れた酵素反応生成物をゲル濾過法［バイオゲルＰ−２
（バイオラッドラボラトリ−ズ社製）］を用いて定量す
ることにより、ガラクトオリゴ糖の生成量を測定した。
れた酵素反応生成物をゲル濾過法［バイオゲルＰ−２
（バイオラッドラボラトリ−ズ社製）］を用いて定量す
ることにより、ガラクトオリゴ糖の生成量を測定した。
【００２９】（３）原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖
の収率の算出方法 前記（２）項で測定されたガラクトオリゴ糖の生成量
（ｇ／ｍｌ）及び酵素反応生成物の総量から、得られた
ガラクトオリゴ糖の総量を換算し、次の式により原料乳
糖に対するガラクトオリゴ糖の収率を算出した。 ガラクトオリゴ糖の収率（％）＝（ガラクトオリゴ糖の
総量／原料乳糖の総量）×１００
の収率の算出方法 前記（２）項で測定されたガラクトオリゴ糖の生成量
（ｇ／ｍｌ）及び酵素反応生成物の総量から、得られた
ガラクトオリゴ糖の総量を換算し、次の式により原料乳
糖に対するガラクトオリゴ糖の収率を算出した。 ガラクトオリゴ糖の収率（％）＝（ガラクトオリゴ糖の
総量／原料乳糖の総量）×１００
【００３０】試験例１ この試験は、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率
を指標として、基質である乳糖の濃度の範囲を調べるた
めに行った。
を指標として、基質である乳糖の濃度の範囲を調べるた
めに行った。
【００３１】（１）被検試料の調製 表１に示すとおり、基質である乳糖溶液中の乳糖濃度を
変更したことを除き、実施例１と同一の方法により、７
種類のガラクトオリゴ糖含有溶液試料を調製した。
変更したことを除き、実施例１と同一の方法により、７
種類のガラクトオリゴ糖含有溶液試料を調製した。
【００３２】（２）試験方法 各試料の原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率を、
前記の試験方法により試験した。
前記の試験方法により試験した。
【００３３】（３）試験結果 この試験の結果は、表１に示すとおりである。表１から
明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
一層優れた収率を達成するためには、２５〜４５％の乳
糖濃度の溶液を使用することが望ましいことが判明し
た。
明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
一層優れた収率を達成するためには、２５〜４５％の乳
糖濃度の溶液を使用することが望ましいことが判明し
た。
【００３４】尚、乳糖含有物の種類を適宜変更し、サー
マス属に属する微生物を微工研菌寄第９１８５号（FERM
BP-1679）若しくは微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-
1680）に変更することによりβ−ガラクトシダーゼの種
類を適宜変更し、又は酵素の使用量を乳糖１ｇに対して
１５〜４５単位、及び作用ｐＨをｐＨ５〜７の範囲でそ
れぞれ適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得ら
れた。
マス属に属する微生物を微工研菌寄第９１８５号（FERM
BP-1679）若しくは微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-
1680）に変更することによりβ−ガラクトシダーゼの種
類を適宜変更し、又は酵素の使用量を乳糖１ｇに対して
１５〜４５単位、及び作用ｐＨをｐＨ５〜７の範囲でそ
れぞれ適宜変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得ら
れた。
【００３５】
【表１】
【００３６】試験例２ この試験は、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率
を指標として、酵素の使用量の範囲を調べるために行っ
た。
を指標として、酵素の使用量の範囲を調べるために行っ
た。
【００３７】（１）被検試料の調製 表２に示すとおり、酵素の使用量を変更したことを除
き、実施例１と同一の方法により、９種類のガラクトオ
リゴ糖含有溶液試料を調製した。
き、実施例１と同一の方法により、９種類のガラクトオ
リゴ糖含有溶液試料を調製した。
【００３８】（２）試験方法 各試料の原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率を、
前記の試験方法により試験した。
前記の試験方法により試験した。
【００３９】（３）試験結果 この試験の結果は、表２に示すとおりである。表２から
明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
一層優れた収率を達成するためには、乳糖１ｇに対して
１５〜４５単位の酵素を使用することが望ましいことが
判明した。
明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
一層優れた収率を達成するためには、乳糖１ｇに対して
１５〜４５単位の酵素を使用することが望ましいことが
判明した。
【００４０】尚、乳糖含有物の種類を適宜変更し、サー
マス属に属する微生物を微工研菌寄第９１８５号（FERM
BP-1679）若しくは微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-
1680）に変更することによりβ−ガラクトシダーゼの種
類を適宜変更し、又は基質である乳糖の濃度を２５〜４
５％、及び作用ｐＨをｐＨ５〜７の範囲でそれぞれ適宜
変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
マス属に属する微生物を微工研菌寄第９１８５号（FERM
BP-1679）若しくは微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-
1680）に変更することによりβ−ガラクトシダーゼの種
類を適宜変更し、又は基質である乳糖の濃度を２５〜４
５％、及び作用ｐＨをｐＨ５〜７の範囲でそれぞれ適宜
変更して試験したが、ほぼ同様の結果が得られた。
【００４１】
【表２】
【００４２】試験例３ この試験は、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率
を指標として、作用ｐＨの範囲を調べるために行った。
を指標として、作用ｐＨの範囲を調べるために行った。
【００４３】（１）被検試料の調製 表３に示すとおり、作用ｐＨを変更したことを除き、実
施例１と同一の方法により、５種類のガラクトオリゴ糖
含有溶液試料を調製した。
施例１と同一の方法により、５種類のガラクトオリゴ糖
含有溶液試料を調製した。
【００４４】（２）試験方法 各試料の原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率を、
前記の試験方法により試験した。
前記の試験方法により試験した。
【００４５】（３）試験結果 この試験の結果は、表３に示すとおりである。表３から
明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
一層優れた収率を達成するためには、作用ｐＨとして、
ｐＨ５〜７の範囲で実施することが望ましいことが判明
した。
明らかなとおり、原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
一層優れた収率を達成するためには、作用ｐＨとして、
ｐＨ５〜７の範囲で実施することが望ましいことが判明
した。
【００４６】尚、乳糖含有物の種類を適宜変更し、サー
マス属に属する微生物を微工研菌寄第９１８５号（FERM
BP-1679）若しくは微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-
1680）に変更することによりβ−ガラクトシダーゼの種
類を適宜変更し、又は、基質である乳糖の濃度を２５〜
４５％、及び酵素の使用量を乳糖１ｇに対して１５〜４
５単位の範囲でそれぞれ適宜変更して試験したが、ほぼ
同様の結果が得られた。
マス属に属する微生物を微工研菌寄第９１８５号（FERM
BP-1679）若しくは微工研菌寄第９１８６号（FERM BP-
1680）に変更することによりβ−ガラクトシダーゼの種
類を適宜変更し、又は、基質である乳糖の濃度を２５〜
４５％、及び酵素の使用量を乳糖１ｇに対して１５〜４
５単位の範囲でそれぞれ適宜変更して試験したが、ほぼ
同様の結果が得られた。
【００４７】
【表３】
【００４８】参考例 サーマス・エスピー（Thermus sp. ）微工研菌寄第９１
８４号（FERM BP-1678）の微生物を、０．２％グルコー
ス、０．２％酵母エキス、０．２％トリプトン、１０．
０％の無機塩類液（溶液１ｌ中に１．０ｇニトリロ三酢
酸、０．６ｇＣａＳＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ、１．０ｇＭｇＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．０８ｇＮａＣｌ、１．０３ｇＫＮＯ
3 、６．８９ｇＮａＮＯ3 、１．１１ｇＮａ2 ＨＰＯ4
を含む）、１．０％の塩化第二鉄溶液（溶液１ｌ中に
０．２８ｇＦｅＣｌ3 ・６Ｈ2 Ｏを含む）、１．０％の
微量元素溶液（溶液１ｌ中に０．５ｍｌＨ2 ＳＯ4 、
２．２ｇＭｎＳＯ4 ・Ｈ2 Ｏ、０．５ｇＺｎＳＯ4 ・７
Ｈ2 Ｏ、０．５ｇＨ3 ＢＯ3 、０．０１６ｇＣｕＳＯ4
・５Ｈ2 Ｏ、０．２５ｇＮａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ、
０．０４６ｇＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏを含む）、０．００
１％のチアミン塩酸塩、０．００１％のニコチン酸アミ
ド、０．００１％のビオチン、０．００１％のパラアミ
ノ安息香酸を含有し、ＮａＯＨによりｐＨ７．６に調整
した液体培地１０ｌに植菌し、２０ｌ容のジャーファー
メンター内で７０℃で２４時間通気培養した。培養液の
酵素活性は、培養液１ｍｌ当たり０．８４単位であっ
た。
８４号（FERM BP-1678）の微生物を、０．２％グルコー
ス、０．２％酵母エキス、０．２％トリプトン、１０．
０％の無機塩類液（溶液１ｌ中に１．０ｇニトリロ三酢
酸、０．６ｇＣａＳＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ、１．０ｇＭｇＳＯ
4 ・７Ｈ2 Ｏ、０．０８ｇＮａＣｌ、１．０３ｇＫＮＯ
3 、６．８９ｇＮａＮＯ3 、１．１１ｇＮａ2 ＨＰＯ4
を含む）、１．０％の塩化第二鉄溶液（溶液１ｌ中に
０．２８ｇＦｅＣｌ3 ・６Ｈ2 Ｏを含む）、１．０％の
微量元素溶液（溶液１ｌ中に０．５ｍｌＨ2 ＳＯ4 、
２．２ｇＭｎＳＯ4 ・Ｈ2 Ｏ、０．５ｇＺｎＳＯ4 ・７
Ｈ2 Ｏ、０．５ｇＨ3 ＢＯ3 、０．０１６ｇＣｕＳＯ4
・５Ｈ2 Ｏ、０．２５ｇＮａ2 ＭｏＯ4 ・２Ｈ2 Ｏ、
０．０４６ｇＣｏＣｌ2 ・６Ｈ2 Ｏを含む）、０．００
１％のチアミン塩酸塩、０．００１％のニコチン酸アミ
ド、０．００１％のビオチン、０．００１％のパラアミ
ノ安息香酸を含有し、ＮａＯＨによりｐＨ７．６に調整
した液体培地１０ｌに植菌し、２０ｌ容のジャーファー
メンター内で７０℃で２４時間通気培養した。培養液の
酵素活性は、培養液１ｍｌ当たり０．８４単位であっ
た。
【００４９】この培養液を、２０℃にて１２，０００
ｇ、３０分間遠心分離し、菌体を集菌し、１０７ｇの菌
体を得た。この菌体に約６００ｍｌの抽出用リン酸緩衝
液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）を加え、ミルにより磨砕し
酵素を抽出した。抽出液を４０，０００ｇ、６０分間遠
心し上清を採取した。沈澱に更に４００ｍｌの上記抽出
用リン酸緩衝液を加え再度抽出した後、同様に遠心し上
清を採取した。これを最初の上清に合わせ粗酵素抽出液
９７５ｍｌを得た。この粗酵素液に硫酸アンモニウム３
８０ｇを加え６０％飽和とし、一晩静置し沈澱を生成せ
しめた。次に沈澱を３０，０００ｇ、６０分間の遠心分
離により集め、約３０ｍｌのリン酸緩衝液（１０ｍＭ、
ｐＨ７．０）に溶解したのち、同緩衝液で透析した。透
析した酵素液中の沈澱を４０，０００ｇ、６０分間の遠
心により除去したのち、酵素液をリン酸緩衝液（１０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．０）で平衡化したＤＥＡＥ−ＴＯＹＯＰＥ
ＡＲＬカラム（５×４５ｃｍ）に吸着させた。次いで、
０〜０．５ＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液（１０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．０）の濃度勾配法によって酵素を抽出し
た。溶出した活性画分４８．０ｍｌを限外濾過膜（アミ
コン社製ＰＭ−１０）を用いて約１０ｍｌに濃縮した
後、０．１ＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液（１０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．０）を用いて一夜透析した。この酵素液を
０．１ＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐ
Ｈ７．０）で平衡化したセファクリルＳ−３００のゲル
濾過カラムに通液し、３つの活性画分を分離した。３つ
の活性画分を混合し、リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ
７．０）を用いて一夜透析し、のち同緩衝液で平衡化し
たパラアミノフェニルベーダーディチオガラクトピラノ
シド（p-amino phenyl−β−Ｄ−thiogalactopyranosid
e ）を共有結合させたセファローズ４Ｂカラム（１．０
×１５．０ｃｍ）に吸着させた。このカラムをリン酸緩
衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）で充分に洗浄し、０．１
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１０．０）を通液して酵素を溶出
し、活性画分を分離し、本酵素約８．５ｍｇを得た。
ｇ、３０分間遠心分離し、菌体を集菌し、１０７ｇの菌
体を得た。この菌体に約６００ｍｌの抽出用リン酸緩衝
液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）を加え、ミルにより磨砕し
酵素を抽出した。抽出液を４０，０００ｇ、６０分間遠
心し上清を採取した。沈澱に更に４００ｍｌの上記抽出
用リン酸緩衝液を加え再度抽出した後、同様に遠心し上
清を採取した。これを最初の上清に合わせ粗酵素抽出液
９７５ｍｌを得た。この粗酵素液に硫酸アンモニウム３
８０ｇを加え６０％飽和とし、一晩静置し沈澱を生成せ
しめた。次に沈澱を３０，０００ｇ、６０分間の遠心分
離により集め、約３０ｍｌのリン酸緩衝液（１０ｍＭ、
ｐＨ７．０）に溶解したのち、同緩衝液で透析した。透
析した酵素液中の沈澱を４０，０００ｇ、６０分間の遠
心により除去したのち、酵素液をリン酸緩衝液（１０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．０）で平衡化したＤＥＡＥ−ＴＯＹＯＰＥ
ＡＲＬカラム（５×４５ｃｍ）に吸着させた。次いで、
０〜０．５ＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液（１０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．０）の濃度勾配法によって酵素を抽出し
た。溶出した活性画分４８．０ｍｌを限外濾過膜（アミ
コン社製ＰＭ−１０）を用いて約１０ｍｌに濃縮した
後、０．１ＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液（１０ｍ
Ｍ、ｐＨ７．０）を用いて一夜透析した。この酵素液を
０．１ＭのＮａＣｌを含むリン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐ
Ｈ７．０）で平衡化したセファクリルＳ−３００のゲル
濾過カラムに通液し、３つの活性画分を分離した。３つ
の活性画分を混合し、リン酸緩衝液（１０ｍＭ、ｐＨ
７．０）を用いて一夜透析し、のち同緩衝液で平衡化し
たパラアミノフェニルベーダーディチオガラクトピラノ
シド（p-amino phenyl−β−Ｄ−thiogalactopyranosid
e ）を共有結合させたセファローズ４Ｂカラム（１．０
×１５．０ｃｍ）に吸着させた。このカラムをリン酸緩
衝液（１０ｍＭ、ｐＨ７．０）で充分に洗浄し、０．１
Ｍホウ酸緩衝液（ｐＨ１０．０）を通液して酵素を溶出
し、活性画分を分離し、本酵素約８．５ｍｇを得た。
【００５０】次に実施例を示して本発明を更に詳細に説
明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。
明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものでは
ない。
【００５１】
【実施例】実施例１ 乳糖（三栄源エフ・エフ・アイ社製）０．４ｋｇを水道
水０．６ｌに分散し、混合し、該混合液に水道水を添加
して総量を１ｌに調整し、次いでプロペラ攪拌機により
攪拌しながら７０℃で５分間溶解し、ｐＨ６．０の原料
溶液約１ｌを調製した。次いで、該原料溶液に、参考例
１と同一の方法により製造したサーマス・エスピー（Th
ermus sp. ）微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）
の微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼ８，０００単
位を添加し、７０℃で４時間糖転移反応を実施し、のち
３０℃以下の低温に冷却して実質的に酵素反応を停止
し、ガラクトオリゴ糖含有溶液約１ｌを得た。この製造
の間、開放系で実施したにもかかわらず、雑菌の汚染は
全く認められなかった。
水０．６ｌに分散し、混合し、該混合液に水道水を添加
して総量を１ｌに調整し、次いでプロペラ攪拌機により
攪拌しながら７０℃で５分間溶解し、ｐＨ６．０の原料
溶液約１ｌを調製した。次いで、該原料溶液に、参考例
１と同一の方法により製造したサーマス・エスピー（Th
ermus sp. ）微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）
の微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼ８，０００単
位を添加し、７０℃で４時間糖転移反応を実施し、のち
３０℃以下の低温に冷却して実質的に酵素反応を停止
し、ガラクトオリゴ糖含有溶液約１ｌを得た。この製造
の間、開放系で実施したにもかかわらず、雑菌の汚染は
全く認められなかった。
【００５２】得られたガラクトオリゴ糖を含有する溶液
を、前記試験方法により試験した結果、ガラクトオリゴ
糖の生成量は０．１６１（ｇ／ｍｌ）であり、この結果
から産出される原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収
率は、４０．５％の高い値を示した。
を、前記試験方法により試験した結果、ガラクトオリゴ
糖の生成量は０．１６１（ｇ／ｍｌ）であり、この結果
から産出される原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収
率は、４０．５％の高い値を示した。
【００５３】次いで、活性炭（武田薬品工業社製）及び
セライト（東京ケイ藻土社製）を１：１で混合し、水で
スラリー状態にした活性炭を充填した直径４０ｃｍ×長
さ６０ｃｍのカラムに、前記ガラクトオリゴ糖含有溶液
を流速１０ｍｌ／分で通液してガラクトオリゴ糖を吸着
させ、十分量の水を通液して、単糖類を溶出し、更に、
十分量の５％濃度のエタノール溶液を通液して、二糖類
を溶出し、のち２０％濃度のエタノール溶液を通液して
ガラクトオリゴ糖を溶出した。
セライト（東京ケイ藻土社製）を１：１で混合し、水で
スラリー状態にした活性炭を充填した直径４０ｃｍ×長
さ６０ｃｍのカラムに、前記ガラクトオリゴ糖含有溶液
を流速１０ｍｌ／分で通液してガラクトオリゴ糖を吸着
させ、十分量の水を通液して、単糖類を溶出し、更に、
十分量の５％濃度のエタノール溶液を通液して、二糖類
を溶出し、のち２０％濃度のエタノール溶液を通液して
ガラクトオリゴ糖を溶出した。
【００５４】得られたガラクトオリゴ糖の溶出液を減圧
濃縮し、凍結乾燥し、白色のガラクトオリゴ糖約０．１
３３ｋｇを製造した。
濃縮し、凍結乾燥し、白色のガラクトオリゴ糖約０．１
３３ｋｇを製造した。
【００５５】実施例２ 乳糖含有率７０％の乾燥ホエー粉末（森永乳業社製）
０．５ｋｇ（乳糖含量０．３５ｋｇ）を水道水０．５ｌ
に分散し、混合し、１規定水酸化ナトリウムによりｐＨ
６．５に調整し、この混合液に水道水を添加して総量を
１ｌに調整し、次いでプロペラ攪拌機により攪拌しなが
ら７０℃で５分間分散溶解し、ｐＨ６．５の原料溶液約
１ｌを調製した。
０．５ｋｇ（乳糖含量０．３５ｋｇ）を水道水０．５ｌ
に分散し、混合し、１規定水酸化ナトリウムによりｐＨ
６．５に調整し、この混合液に水道水を添加して総量を
１ｌに調整し、次いでプロペラ攪拌機により攪拌しなが
ら７０℃で５分間分散溶解し、ｐＨ６．５の原料溶液約
１ｌを調製した。
【００５６】次いで、該原料溶液に、参考例１と同一の
方法により製造したサーマス・エスピー（Thermus sp.
）微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）の微生物
に由来するβ−ガラクトシダーゼ１１，０００単位を添
加し、７０℃で２時間糖転移反応を実施し、のち３０℃
以下の低温に冷却し、実質的に酵素反応を停止し、ガラ
クトオリゴ糖含有溶液約１ｌを得た。この製造の間、開
放系で実施したにもかかわらず、雑菌の汚染は全く認め
られなかった。
方法により製造したサーマス・エスピー（Thermus sp.
）微工研菌寄第９１８４号（FERM BP-1678）の微生物
に由来するβ−ガラクトシダーゼ１１，０００単位を添
加し、７０℃で２時間糖転移反応を実施し、のち３０℃
以下の低温に冷却し、実質的に酵素反応を停止し、ガラ
クトオリゴ糖含有溶液約１ｌを得た。この製造の間、開
放系で実施したにもかかわらず、雑菌の汚染は全く認め
られなかった。
【００５７】得られたガラクトオリゴ糖を含有する溶液
は、前記の試験方法により試験した結果、ガラクトオリ
ゴ糖の生成量は０．１４６（ｇ／ｍｌ）であり、この結
果より産出される原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
収率は、４１．７％の高い値を示した。
は、前記の試験方法により試験した結果、ガラクトオリ
ゴ糖の生成量は０．１４６（ｇ／ｍｌ）であり、この結
果より産出される原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の
収率は、４１．７％の高い値を示した。
【００５８】
【発明の効果】以上詳記したとおり、本発明は、ガラク
トオリゴ糖の製造方法に関するものであり、本発明によ
り奏せられる効果は次のとおりである。 １）７０℃以上の高温下での製造が可能で雑菌の汚染の
可能性が少ない。 ２）原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が高い。
トオリゴ糖の製造方法に関するものであり、本発明によ
り奏せられる効果は次のとおりである。 １）７０℃以上の高温下での製造が可能で雑菌の汚染の
可能性が少ない。 ２）原料乳糖に対するガラクトオリゴ糖の収率が高い。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B050 CC01 DD02 LL01 LL02 4B064 AF04 CA02 CA21 CC03 CC06 CC07 CC09 CD09 DA01 DA10
Claims (2)
- 【請求項１】 乳糖又は乳糖含有物にサーマス属に属す
る微生物に由来するβ−ガラクトシダーゼを作用させる
ことを特徴とするガラクトオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項２】 サーマス属に属する微生物が、微工研菌
寄第９１８４号（FERM BP-1678）、微工研菌寄第９１８
５号（FERM BP-1679）、微工研菌寄第９１８６号（FERM
BP-1680）、又はこれらの混合菌株から選択されるいず
れかの菌株である請求項１に記載のガラクトオリゴ糖の
製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10226506A JP2000041693A (ja) | 1998-07-27 | 1998-07-27 | ガラクトオリゴ糖の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10226506A JP2000041693A (ja) | 1998-07-27 | 1998-07-27 | ガラクトオリゴ糖の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000041693A true JP2000041693A (ja) | 2000-02-15 |
Family
ID=16846198
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10226506A Pending JP2000041693A (ja) | 1998-07-27 | 1998-07-27 | ガラクトオリゴ糖の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000041693A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001245690A (ja) * | 2000-03-03 | 2001-09-11 | Yakult Honsha Co Ltd | グリコシドまたはオリゴ糖の製造方法 |
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-
1998
- 1998-07-27 JP JP10226506A patent/JP2000041693A/ja active Pending
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