JP2000007546A

JP2000007546A - 色素沈着防止剤並びにこれを利用する皮膚化粧料および皮膚外用剤

Info

Publication number: JP2000007546A
Application number: JP17127398A
Authority: JP
Inventors: Koji Miyazaki; 幸司宮▲崎▼; Yumiko Nishida; 由美子西田; Fukiko Nishisaka; 扶岐子西坂; Kazumasa Kimura; 一雅木村; Minoru Ichioka; 稔市岡; Makoto Owaki; 真大脇
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 1998-06-18
Filing date: 1998-06-18
Publication date: 2000-01-11

Abstract

(57)【要約】【課題】従来提供されたものに比べ、より優れたメラ
ニン生成抑制作用および樹状突起形成抑制作用を有し、
しかも安全性、安定性の優れた色素沈着防止剤を提供す
ること。【解決手段】次の式（１）【化１】（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ水素原子または糖
残基示す）で表されるヒドランゲノールまたはその誘導
体を有効成分として含有し、この化合物の有するメラニ
ン生成抑制作用および樹状突起形成抑制作用を利用する
色素沈着防止剤並びにこれを配合する皮膚化粧料および
皮膚外用剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト表皮のメラニ
ン細胞のメラニン生成および樹状突起形成を抑制し皮膚
の黒化を防止する作用を有する色素沈着防止剤並びにこ
れを含有する皮膚化粧料および外用薬剤に関するもので
ある。

【０００２】

【従来の技術】しみ、そばかすおよび日焼け後の皮膚の
色素沈着は、加齢に伴なって発生が増加し、しかも消失
しにくくなるため、中高年齢者では大きな悩みである。
これら色素沈着症の詳細な発症機構は、未だ明確にさ
れていないが、日光からの紫外線の刺激、ホルモン分泌
の異常、遺伝的素因が原因でメラニン細胞が活性化さ
れ、メラニン色素が過剰に合成されることで生じるもの
と考えられている。

【０００３】色素沈着の原因の一つであるメラニン色素
は、表皮の基底層に存在するメラニン細胞中でアミノ酸
のチロシンからチロシナーゼの作用で合成される。そ
して、合成されたメラニン色素は、メラニン細胞の樹状
突起を介して隣接した表皮細胞に渡され、表皮細胞の角
化と共に皮膚が黒化すると考えられている。

【０００４】従来、チロシナーゼの活性を阻害する物質
を用いてメラニン生成を抑制し皮膚の黒化を防止する試
みがなされ、その結果、ビタミンＣ、グルタチオン、ア
ルブチン、コウジ酸、ハイドロキノン、種々の植物抽出
物や胎盤抽出物等に有効性が確認された。また、アル
ブチンが樹状突起形成を抑制することも知られている。

【０００５】しかしながら、これらの物質は、メラニン
生成抑制作用等が不十分で、また、安全性、安定性に問
題があるものもあり、色素沈着防止剤として使用するに
は必ずしも満足できるものではなかった。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】したがって本発明の目
的は、安定性、安全性とメラニン生成抑制作用、樹状突
起形成抑制作用のいずれにおいても優れ、色素沈着防止
剤として従来のものよりも優れた物質を見出し、これを
有効成分とする色素沈着防止剤を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らはより優れた
メラニン生成抑制作用を有する物質について、天然抽出
物を中心に探索を行っていたところ、日本薬局方に記載
された生薬アマチャの抽出物がメラニン生成抑制作用を
有することを見出した。さらに検討したところ、生薬
アマチャに含まれる後記式（１）のヒドランゲノールお
よびその誘導体（以下、「ヒドランゲノール類」とい
う）が活性物質であること、およびこのものは優れたメ
ラニン生成の抑制効果を有すると共に安全性も高く、広
く化粧料、外用剤などに配合できることを確認した。
また、ヒドランゲノール類（１）のメラニン生成抑制作
用は、アスコルビン酸またはその塩との組合せにより相
乗的に向上することを見出した。

【０００８】本発明は、上記知見に基づいて完成された
ものであり、次の式（１）

【化２】（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ水素原子または糖
残基を示す）で表されるヒドランゲノール類を有効成分
として含有することを特徴とする色素沈着防止剤を提供
するものである。また本発明は、上記ヒドランゲノール
類（１）とアスコルビン酸またはその塩を配合してなる
色素沈着防止剤を提供するものである。更に本発明は、
これらの色素沈着防止剤を含む皮膚化粧料や皮膚外用剤
を提供するものである。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明の色素沈着防止剤の有効成
分であるヒドランゲノール類（１）は、日本薬局方に記
載された生薬アマチャ（ Hydrangeae Dulcls Follum ）
に含まれるイソクマリン化合物である。

【００１０】この、ヒドランゲノール類（１）は、生薬
アマチャを有機溶媒で抽出した後、ろ過または遠心分離
により固形物を除去し、シリカゲルカラム、ＨＰＬＣ等
のクロマトグラフィー法で精製することにより得られ
る。この精製物中には、Ｒ_１およびＲ_２が水素原子で
あるヒドランゲノール類（１）と、Ｒ_１、Ｒ_２が糖残基
である化合物が含まれており、必要により、薬学雑誌、
第１１４巻、第３号、第１７６頁〜第１８１頁や日本生
薬学会第４０回年会講演要旨集、第１８８頁（１９９３
年９月）等に記載の方法により分離することができる
が、一般的にはその必要はない。なお、ヒドランゲノ
ール類（１）の、Ｒ_１、Ｒ_２における糖残基の例として
は、グルコース残基等が挙げられる。

【００１１】また、本発明でヒドランゲノール類と併用
することのできるアスコルビン酸もしくはその塩（以
下、「アスコルビン酸類」という）としては、アスコル
ビン酸（ビタミンＣ）を初め、アスコルビン酸リン酸エ
ステル塩、アスコルビン酸硫酸エステル塩等が挙げられ
る。また、アスコルビン酸類として、アスコルビン酸
類を含む植物の抽出液等を使用することもできる。

【００１２】本発明の色素沈着防止剤は、上記のヒドラ
ンゲノール類（１）あるいはこれとアスコルビン酸類と
を必要に応じて適切な担体と組み合わせることにより調
製される。使用される担体としては、アルコール、植
物油、ワセリン等が挙げられ、これに更に乳化剤等を添
加してもよい。

【００１３】本発明の色素沈着防止剤は、これを化粧料
や外用剤に添加し、美白作用を有する皮膚化粧料や皮膚
外用剤を製造することができる。この化粧料等の製造
に当たっては、常法による化粧料等の製造の任意の段階
で、本発明による色素沈着防止剤を適量添加すればよ
い。

【００１４】色素沈着防止剤の添加量は、用いるヒドラ
ンゲノール類（１）の効果の強さや化粧料、外用剤の種
類によって異なるが、多くの場合、ヒドランゲノール
（式（１）中、Ｒ_１＝Ｒ_２＝Ｈ）として０.０００１〜
５０重量％程度、望ましくは０.００１〜１０重量％を
添加することにより好結果を得ることができる。ま
た、ヒドランゲノール類（１）とアスコルビン酸類を併
用する場合は、ヒドランゲノールとして、０.０００１
〜２５重量％程度、好ましくは０.００１〜１０重量
％、アスコルビン酸類をアスコルビン酸として、０.０
００１〜２５重量％程度、好ましくは０.００１〜１０
重量％添加すればよい。なお、ヒドランゲノール類
（１）とアスコルビン酸類の配合比率は特に制約される
ものではないが、好ましい相乗効果を得るためには、
１：１００００〜１０：１程度とすることが望ましい。

【００１５】かくして得られる皮膚化粧料の例として
は、クリーム、乳液、化粧水、その他各種の油性化粧
料、粉末化粧料、パック剤、浴用剤等が挙げられる。
また、皮膚外用剤の例としては、軟膏剤、硬膏剤、液剤
（酒精剤、チンキ剤、ローション剤等）、湿布剤（ハッ
プ剤、パスター剤）、リニメント剤、クリーム剤、乳化
剤が挙げられる。

【００１６】なお、本発明の皮膚化粧料を製造する場
合、上記の色素沈着防止剤の他、化粧料製造に通常使用
される非イオン界面活性剤、陰イオン界面活性剤、両性
界面活性剤等の乳化剤；植物油、動物油、高級脂肪酸、
高級アルコール、合成エステル油、ワックス類、シリコ
ーン油等の油性物質；水、香料、防腐剤、顔料、皮膚栄
養剤、皮膚賦活剤、保湿剤、紫外線防止剤、ｐＨ調節剤
等は、ほとんどの場合、そのまま使用することができ、
基本的な化粧料処方の変更を必要とすることはない。

【００１７】

【作用】本発明の色素沈着防止剤は、ヒドランゲノール
類の有するメラニン生成抑制作用を利用して、色素沈着
を防止するものである。

【００１８】

【実施例】以下、実施例を示し、本発明を更に詳しく説
明するが、本発明はこれら実施例によりなんら制約され
るものではない。

【００１９】実施例１ヒドランゲノール類の生薬アマチャからの単離：生薬ア
マチャ１０ｇにエタノール１００ｍｌを加え、室温、
暗所、浸潰抽出を１週間行い、固形物除去後、減圧下で
エタノールを留去した。その結果、１００１.２ｍｇの
抽出物（アマチャエタノール抽出物）を得た。この抽
出物に１００ｍｌのｎ−ヘキサンを加え、攪拌後、遠心
分離（室温、７００ｇ、１０分間）し、不溶物（６０
５.５ｍｇ）を減圧乾固後、１００ｍｌのベンゼンに溶
解した。遠心分離（室温、７００ｇ、１０分間）によ
り不溶物を除去した後、シリカゲルカラム（Ｓｉｌｉｃ
ａｇｅｌ６０、ナカライテスク（株）、２０ｇ、２.
５×１１ｃｍ、５４ｍｌ、サンプル量、５０ｍｌ）に吸
着させ、ベンゼン１００ｍｌ、ベンゼン−クロロホル
ム混液（１：３）１５０ｍｌ、クロロホルム１００ｍ
ｌで非極性物質を溶出した。さらに、クロロホルム２
００ｍｌ、クロロホルム−アセトン混液（２：１）１
００ｍｌでヒドランゲノールを含む画分を溶出した。

【００２０】上記溶出液を減圧乾固した後、得られた固
形物（２８７.２ｍｇ）を２.８ｍｌのメタノールに溶解
し、ゲルろ過（ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０、Ｐｈａ
ｒｍａｃｉａＢｉｏｔｅｃｈ、３０ｇ、１.６×６０ｃ
ｍ、１２０ｍｌ、溶出液：メタノール、流速：０.３ｍ
ｌ／分、サンプル量、１.４ｍｌ）で分画し、６ｍｌず
つ分取した。画分２２〜２７を混合し、減圧乾固後、
固形物（１６０.１ｍｇ）をエタノール−水（１：
１）、４ｍｌに溶解し、Ｓｅｐ−ｐａｋＯＤＳ（Ｗａ
ｔｅｒｓ、３６０ｍｇ×４）で固相抽出した。

【００２１】この溶出液を減圧乾固し、得られた固形物
（１３４.９ｍｇ）をクロロホルム−アセトン混液
（９：１）、９ｍｌに溶解し、Ｓｅｐ−ｐａｋｓｉｌ
ｉｃａ（Ｗａｔｅｒｓ、５００ｍｇ×３）で再度固相抽
出した。溶出液を減圧乾固し、固形物（１２５.５ｍ
ｇ）を得た。最後に、これをクロロホルム−アセトン
混液（９：１）１２５５μｌに溶解し、ＨＰＬＣ（ｉ
ｎｅｒｔｓｉｌｓｉｌｉｃａ、ジーエルサイエンス、
１×２５ｃｍ、カラム温度、４０℃、移動相、クロロホ
ルム−アセトン混液（９：１）、流速４ｍｌ／分、３１
５ｎｍで検出、注入量、５０μｌ）で分画し、６.５０
０分に溶出された活性物質のピークを分取した。その結
果、活性物質が４５.４ｍｇ得られた。

【００２２】上で得られた活性物質のマススペクトル並
びに^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲの結果は次の通りで
ある。

【００２３】（マススペクトル）活性物質をＥ１／マ
ススペクトル法で分析したところ、分子イオンピークは
２５６であった。

【００２４】（ＮＭＲ）アセトン−ｄ_６中で測定し
た活性物質の^１Ｈ−ＮＭＲ、^１３Ｃ−ＮＭＲのスペクト
ルのシグナルおよびその帰属を表１に示す。

【００２５】

【表１】

【００２６】得られた活性物質のＥ１／マススペクトル
法で測定した分子量の２５６と、^１Ｈ−ＮＭＲシグナル
および^１３Ｃ−ＮＭＲシグナルは、何れも下に示すヒド
ランゲノールの構造式を支持し、また、Ｙｏｓｈｉｋａ
ｗａら（Ｃｈｅｍ.Ｐｈａｒｍ.Ｂｕｌｌ.、４４
（８）、１４４０−１４４７、１９９６）およびＳｕｚ
ｕｋｉら（Ａｇｒｉ.Ｂｉｏｌ.Ｃｈｅｍ.、４１、２０
５−２０６、１９７７）により報告さているヒドランゲ
ノールの結果と一致したことより、本活性物質は下式の
ヒドランゲノールと同定された。

【００２７】

【化３】

【００２８】実施例２メラニン生成抑制効果試験１：マウス由来のＢ１６メラ
ノーマ培養細胞を培養用９６ウェルプレートの各ウェル
に５×１０^３個分注し、１０％牛胎児血清、ペニシリン
（１００Ｕ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ
／ｍｌ）およびアンホテリシンＢ（０.２５μｇ／ｍ
ｌ）を含むダルベッコ変法ＭＥＭ培地を用い、ＣＯ_２イ
ンキュベーター（９５％空気、５％ＣＯ_２）内、３７℃
の条件下で培養した。培養２４時間後に０.５ｍＭテオ
フィリンを含む新鮮な上記培地に交換し、種々の濃度の
試料（エタノール溶液）および対照のエタノール（最終
濃度１％）を添加した。さらに３日間培養し、以下の
方法で、メラニン生成抑制効果、細胞毒性を評価した。

【００２９】（メラニン生成抑制効果の測定方法）
９６ウェルプレートを遠心分離（７００ｇ、１０分間、
４℃）し、得られた培養上清に等量の１０％エタノール
含有０.３６Ｍ−ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６.８）を加え
ｐＨ調整した。この溶液および同様にｐＨ調整した合
成メラニン溶液の４７５ｎｍ−６６０ｎｍの吸光度より
細胞外メラニン量を求め、メラニン生成抑制効果を評価
した。５０％阻害濃度（１Ｃ_５０）で示したメラニン
生成抑制効果を表２に示す。

【００３０】

【表２】

【００３１】（細胞毒性の評価方法）前記のマウス
由来のＢ１６メラノーマ細胞を培養したウェルより培地
を完全に除去し、ＰＢＳによる洗浄、次いで風乾した。
これに０.４％クリスタルバイオレットメタノール溶液
を添加し、室温で３０分間、細胞を固定、染色し、水
洗、風乾後、５９０ｎｍ−６６０ｎｍの吸光度を測定
し、細胞毒性がないことを確認した。

【００３２】実施例３メラニン生成抑制効果試験２：マウス由来のＢ１６メラ
ノーマ培養細胞を培養用６ウェルプレートの各ウェルに
１×１０^５個分注し、実施例２と同様に培養した。こ
の培養細胞について、以下の方法で総メラニン量を測定
した。

【００３３】（メラニン量の測定方法）マウス由来
のＢ１６メラノーマ細胞を培養したウェルより培地を除
去した後、この細胞をトリプシン処理し、ＰＢＳ、次い
でエタノールで洗浄した。その後、細胞を風乾し、こ
れを１Ｍ−ＮａＯＨ中、８０℃で３０分間、加熱溶解し
た。加熱溶解した溶液および同様に溶解した合成メラニ
ン（シグマケミカル社製）溶液について４７５ｎｍ−６
６０ｎｍの吸光度を測定し、細胞内メラニン量を求め
た。

【００３４】一方、ウェルより除去した培地を遠心分離
（７００ｇ、１０分間、４℃）し、得られた上清に等量
の１０％エタノール含有０.３６Ｍ−ＨＥＰＥＳ緩衝液
（ｐＨ６.８）を加えｐＨ調整した。次いでこの溶液お
よび同様にｐＨ調整した合成メラニン溶液について４７
５ｎｍ−６６０ｎｍの吸光度を測定し、細胞外メラニン
量を求めた。細胞内メラニン量および細胞外メラニン
量の合計を総メラニン量とした。

【００３５】なお、細胞毒性は、ＢＣＡプロテインアッ
セイキット（ピアース社製）で測定した細胞の１Ｍ−Ｎ
ａＯＨ溶解液のタンパク量より評価した。各被検試料
の総メラニン量測定結果は、細胞毒性が認められなかっ
た濃度まで、対照の測定値を１００としたパーセントで
示す。

【００３６】

【表３】

【００３７】実施例４樹状突起形成抑制効果試験：マウス由来のＢ１６メラノ
ーマ培養細胞を培養用６ウェルプレートの各ウェルに４
×１０^４個分注し、実施例２と同様に培養した。

【００３８】培養５時間後に牛胎児血清を含まない新鮮
な上記培地に交換し、種々の濃度の試料（エタノール溶
液）および対照のエタノール（最終濃度１％）を添加し
た。さらに１９時間培養し、位相差顕微鏡（オリンパス
社製）で細胞の写真を撮り、樹状突起形成細胞（細胞の
直径または短径より長い樹状突起をもつ細胞）の数を数
え、樹状突起形成細胞数／総細胞数を求めた。表４に
この結果を対照の測定値を１００としたパーセントで示
す。

【００３９】

【表４】

【００４０】実施例５ヒドランゲノールとＬ−アスコルビン酸リン酸マグネシ
ウム塩の相乗的なメラニン生成抑制効果：表５に示した
各試料のメラニン生成抑制効果を実施例２のメラニン抑
制効果試験１の方法で調べた。なお、Ｌ−アスコルビ
ン酸リン酸マグネシウム塩（Ｌ−ＡｓＡ−ＰＭｇ；和光
純薬社製）は、培地に溶解し、ろ過滅菌した。メラニ
ン生成抑制率で表した結果も表５に併せて示す。

【００４１】

【表５】

【００４２】以上の結果から、ヒドランゲノール類
（１）のメラニン生成抑制効果（実施例２および３）お
よび樹状突起形成の抑制効果（実施例４）は、比較のコ
ウジ酸、アルブチンより何れも２０倍以上高く、その色
素沈着防止効果は、コウジ酸、アルブチンより優れてい
た。また、ヒドランゲノールは、Ｌ−ＡｓＡ−ＰＭｇ
との併用により、相乗的にメラニン生成を抑制すること
が明らかになった（実施例５）。

【００４３】実施例６化粧水：下記組成の化粧水を常法により製造し
た。（組成）ヒドランゲノール０.５重量％Ｌ−ＡｓＡ−ＰＭｇ３.０重量％エタノール１０.０重量％１,３−ブチレングリコール２.０重量％ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油０.０５重量％（５０Ｅ.Ｏ.）パラオキシ安息香酸メチル０.１重量％香料０.１重量％精製水残部

【００４４】得られた化粧水は美白作用に優れ、且つさ
っぱりした使用感のものであった。また、保存安定性も
良好であった。

【００４５】実施例７乳液下記組成の乳液を常法により製造した。（組成）ヒドランゲノール１.０重量％ステアリン酸２.０重量％流動パラフィン６.０重量％スクワラン２.０重量％ソルビタンモノステアレート１.５重量％ポリオキシエチレンソルビタン２.０重量％モノステアレート（２０Ｅ.Ｏ.）パラオキシ安息香酸メチル０.０５重量％１,３−ブチレングリコール０.１重量％香料０.１５重量％精製水残部

【００４６】得られた乳液は美白作用に優れ、しっとり
した使用感のものであった。また、保存安定性にも優
れていた。

【００４７】実施例８クリーム：下記組成のクリームを常法により製造し
た。（組成）ヒドランゲノール１.０重量％流動パラフィン２３.０重量％ワセリン７.０重量％ベヘニルアルコール１.０重量％ステアリン酸２.０重量％ミツロウ２.０重量％ソルビタンモノステアレート１.５重量％ポリオキシエチレンソルビタン２.５重量％モノステアレート（２０Ｅ.Ｏ.）パラオキシ安息香酸ブチル０.０５重量％１,３−ブチレングリコール３.０重量％パラオキシ安息香酸メチル０.１重量％香料０.１５重量％精製水残部

【００４８】得られたクリームは美白作用に優れ、使用
感も良好であった。また、保存安定性にも優れていた。

【００４９】実施例９軟膏：下記組成の軟膏を常法により製造した。（組成）ヒドランゲノール５.０重量％日本薬局方親水軟膏９５.０重量％

【００５０】本軟膏を一日２回シミの部位に塗布（２ｍ
ｇ／ｃｍ^２）したところ、優れた美白作用がみられ、ま
た、保存安定性も良好であった。

【００５１】

【発明の効果】ヒドランゲノール類を有効成分とする本
発明の色素沈着防止剤は、ヒト表皮のメラニン細胞のメ
ラニン生成および樹状突起形成を抑制し、優れた美白作
用を有するものである。そして、ヒドランゲノール類
は、古くから飲用、服用されていた生薬アマチャに含ま
れる成分であることから明らかなごとく、安全性に優れ
たものである。さらに、ヒドランゲノール類を含む本
発明の色素沈着防止剤は、使用感、安定性にも優れてい
るものである。従って、この色素沈着防止剤は、これを
美白効果を目的とする皮膚化粧料や皮膚外用剤の添加、
配合成分として有効に利用することができる。以上

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｋ // Ａ６１Ｋ 9/06 9/06 ＧＣ０７Ｄ 311/76 Ｃ０７Ｄ 311/76 (72)発明者西坂扶岐子東京都港区東新橋１丁目１番19号株式会社ヤクルト本社内 (72)発明者木村一雅東京都港区東新橋１丁目１番19号株式会社ヤクルト本社内 (72)発明者市岡稔東京都港区東新橋１丁目１番19号株式会社ヤクルト本社内 (72)発明者大脇真東京都港区東新橋１丁目１番19号株式会社ヤクルト本社内Ｆターム(参考） 4C062 GG08 4C076 AA07 AA12 AA17 BB31 CC18 DD08F DD37A DD37E DD38E DD38N DD38X DD45R FF12 FF15 FF16 FF39 FF43 4C083 AA082 AA112 AC012 AC022 AC072 AC102 AC122 AC242 AC422 AC432 AC442 AC482 AC841 AC842 AD641 AD642 BB51 CC02 CC04 CC05 DD22 DD23 DD27 DD31 EE01 EE06 EE09 EE16 FF01

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の式（１）【化１】（式中、Ｒ_１およびＲ_２は、それぞれ水素原子または糖
残基を示す）で表されるヒドランゲノールまたはその誘
導体を有効成分として含有することを特徴とする色素沈
着防止剤。
【請求項２】更にアスコルビン酸もしくはその塩を含
有する請求項第１項記載の色素沈着防止剤。
【請求項３】請求項第１項または第２項記載の色素沈
着防止剤を含有することを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項４】美白化粧料である請求項第３項記載の皮
膚化粧料。
【請求項５】請求項第１項または第２項記載の色素沈
着防止剤を含有することを特徴とする皮膚外用剤。