ITFI20010114A1 - Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla - Google Patents
Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla Download PDFInfo
- Publication number
- ITFI20010114A1 ITFI20010114A1 IT2001FI000114A ITFI20010114A ITFI20010114A1 IT FI20010114 A1 ITFI20010114 A1 IT FI20010114A1 IT 2001FI000114 A IT2001FI000114 A IT 2001FI000114A IT FI20010114 A ITFI20010114 A IT FI20010114A IT FI20010114 A1 ITFI20010114 A1 IT FI20010114A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- glycopeptides
- group
- amino acids
- resin
- fmoc
- Prior art date
Links
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 24
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 9
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 title abstract description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 6
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 34
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 34
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 33
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 229920000361 Poly(styrene)-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 claims description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 5
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 4
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 3
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- -1 β-D-glucopyranosyl Chemical group 0.000 claims description 3
- IXUZXIMQZIMPSQ-WDIAKOBKSA-N (2R)-2-aminobutanedioic acid (2S)-2,5-diaminopentanoic acid Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O.N[C@H](CC(O)=O)C(O)=O IXUZXIMQZIMPSQ-WDIAKOBKSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003875 Wang resin Substances 0.000 claims description 2
- NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N [4-[(4-methylphenyl)methoxy]phenyl]methanol Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1COC1=CC=C(CO)C=C1 NERFNHBZJXXFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 claims description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 claims description 2
- 108010049063 ornithylaspartate Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003566 oxetanyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims 2
- DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N (2S,5R,10R,13R)-16-{[(2R,3S,4R,5R)-3-{[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy}-5-(ethylamino)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-5-(4-aminobutyl)-10-carbamoyl-2,13-dimethyl-4,7,12,15-tetraoxo-3,6,11,14-tetraazaheptadecan-1-oic acid Chemical compound NCCCC[C@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)C(C)O[C@@H]1[C@@H](NCC)C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DQJCDTNMLBYVAY-ZXXIYAEKSA-N 0.000 claims 1
- KXEZMFBYNCMTDN-JTFAZQEDSA-N 1-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-2,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]ethanone Chemical compound CC(=O)[C@]1(N)C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O KXEZMFBYNCMTDN-JTFAZQEDSA-N 0.000 claims 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 claims 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-methylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UGNIYGNGCNXHTR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 5
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- QTWZCODKTSUZJN-LJAQVGFWSA-N (2s)-5-[[amino-[(2,2,5,7,8-pentamethyl-3,4-dihydrochromen-6-yl)sulfonylamino]methylidene]amino]-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2C2=CC=CC=C2C1COC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)NS(=O)(=O)C(C(C)=C1C)=C(C)C2=C1OC(C)(C)CC2 QTWZCODKTSUZJN-LJAQVGFWSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 NDKDFTQNXLHCGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012317 TBTU Substances 0.000 description 3
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 3
- ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N (2s)-1-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonyl)pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ZPGDWQNBZYOZTI-SFHVURJKSA-N 0.000 description 2
- XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(1-tritylimidazol-4-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C(N=C1)=CN1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XXMYDXUIZKNHDT-QNGWXLTQSA-N 0.000 description 2
- ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]indol-3-yl]propanoic acid Chemical compound C12=CC=CC=C2N(C(=O)OC(C)(C)C)C=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 ADOHASQZJSJZBT-SANMLTNESA-N 0.000 description 2
- JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[4-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]phenyl]propanoic acid Chemical compound C1=CC(OC(C)(C)C)=CC=C1C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21 JAUKCFULLJFBFN-VWLOTQADSA-N 0.000 description 2
- SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-phenylpropanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC1C2=CC=CC=C2C2=CC=CC=C21)C1=CC=CC=C1 SJVFAHZPLIXNDH-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylpentanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 CBPJQFCAFFNICX-IBGZPJMESA-N 0.000 description 2
- BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 BUBGAUHBELNDEW-SFHVURJKSA-N 0.000 description 2
- UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-6-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CCCCNC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 UMRUUWFGLGNQLI-QFIPXVFZSA-N 0.000 description 2
- KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)butanedioic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 KSDTXRUIZMTBNV-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 QWXZOFZKSQXPDC-NSHDSACASA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 2
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N triphenylphosphine Chemical compound C1=CC=CC=C1P(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RIOQSEWOXXDEQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MPVGCCAXXFLGIU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-(prop-2-enoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](CNC(=O)OCC=C)C(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 MPVGCCAXXFLGIU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N (2s)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H](COC(C)(C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 REITVGIIZHFVGU-IBGZPJMESA-N 0.000 description 1
- LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N (2s,3r)-2-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)-3-[(2-methylpropan-2-yl)oxy]butanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)N[C@@H]([C@H](OC(C)(C)C)C)C(O)=O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LZOLWEQBVPVDPR-VLIAUNLRSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- LINBWYYLPWJQHE-UHFFFAOYSA-N 3-(9h-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(COC(=O)NCCC(=O)O)C3=CC=CC=C3C2=C1 LINBWYYLPWJQHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101100030361 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pph-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 230000004090 etiopathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000005640 glucopyranosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N hydrofluoric acid Substances F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- APRJFNLVTJWEPP-UHFFFAOYSA-M n,n-diethylcarbamate Chemical compound CCN(CC)C([O-])=O APRJFNLVTJWEPP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N n-(2,4-dichloro-5-propan-2-yloxyphenyl)acetamide Chemical compound CC(C)OC1=CC(NC(C)=O)=C(Cl)C=C1Cl QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007830 nerve conduction Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000009528 severe injury Effects 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
- C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
- C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4713—Autoimmune diseases, e.g. Insulin-dependent diabetes mellitus, multiple sclerosis, rheumathoid arthritis, systemic lupus erythematosus; Autoantigens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Domanda di brevetto per Invenzione Industriale dal titolo:
Glicopeptidi, loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla
Campo dell’invenzione
La presente invenzione si riferisce a glicopeptidi formati da 11 - 24 amminoacidi capaci di identificare anticorpi nella sclerosi multipla e quindi utili come mezzi diagnostici o per il trattamento terapeutico di detta patologia.
Stato dell'arte
La sclerosi multipla (SM) è una malattia demielinizzante infiammatoria del sistema nervoso centrale altamente invalidante e quindi di elevato impatto sociale. Essa causa la degradazione della materia bianca del sistema nervoso centrale (mielina) portando a gravi danni nella trasmissione del segnale nervoso.
L’eziopatogenesi della malattia non è stata ancora chiarita in modo definitivo, ma si ipotizza che un processo autoimmune diretto contro le principali proteine mieliniche sia un importante meccanismo patogenico della malattia. Il danno alla mielina è molto probabilmente dovuto ad un’azione sinergica della risposta cellulare T e della risposta anticorpale contro proteine e glicoproteine mieliniche. In particolare gli autoanticorpi possono giocare un ruolo chiave nell’attivazione dei macrofagi, nella demielinizzazione, e nel blocco della conduzione nervosa.
In un precedente studio [A.M. Papini et al., Proceedings of thè 10<th >International Congress of Immunology, Monduzzi Editore, International Proceeding Division Bologna, Italy (1998), pp. 1239-1244] è stata dimostrata la possibilità di identificare anticorpi nella SM specifici per mezzo di un peptide glicosilato costituito dalla sequenza di 21 amminoacidi della glicoproteina oligodendrocitica della mielina (MOG) (dalla posizione 30 alla 50), e indicato dalla formula Asn<31>(Glc)hMOG(30-50).
E’ evidente l'interesse a sviluppare nuovi peptidi glicosilati capaci di svolgere la funzione di identificazione degli anticorpi suddetti con maggiore efficienza e quindi utilizzabili sia per la diagnosi che per il trattamento della sclerosi multipla.
Sommario dell’invenzione
La presente invenzione si riferisce a glicopeptidi di 11 - 24 amminoacidi contenenti un tetrapeptide di formula (I):
X-Asn(G)-Y-Z (I)
in cui:
X = amminoacido portante un gruppo amminico o carbossilico sulla catena laterale;
Y = Pro, Gly;
G è uno zucchero
Z = Ala, Val, Ile, His
Descrizione dettagliata dell’invenzione
E’ stato ora sorprendentemente trovato, ed è un oggetto della presente invenzione, che glicopeptidi corti, costituiti da 11 - 24 amminoacidi, contenenti il tetrapeptide come sopra definito svolgono un’azione di riconoscimento molto efficace degli anticorpi tipici della SM e sono quindi utili per la sua diagnosi o il suo trattamento terapeutico.
Preferiti secondo la presente invenzione sono glicopeptidi di formula (II):
A-B-X-Asn(G)-Y-Z-C-D (II)
in cui:
Y e G sono come sopra definiti;
A = 2 - 5 amminoacidi o assente
B e C = amminoacidi trifunzionali formanti fra loro un ponte lattamico tramite le rispettive catene laterali o assenti;
D = 5 - 15 amminoacidi;
X = Giu, Asp, Lys, Arg, Orn, Dap;
Z = Ala, Val, Ile, His.
Per amminoacidi trifunzionali formanti fra loro un ponte lattamico come sopra definiti si intendono, ad esempio le coppie Dap-Asp o Asp-Dap, Dab-GIu o Glu-Dab, Orn-Asp o Asp-Orn e quelle formate da altri amminoacidi, ad esempio non naturali, aventi analoghe caratteristiche. Per zucchero si intende preferibilmente: mono e disaccaridi del tipo Glc, ecc.
Per amminoacidi, quando non diversamente definiti, si intendono amminoacidi naturali o non naturali.
Ovviamente i residui A, se presente, e D possono contenere un opportuno spaziatore alchilico per allungare la catena ove per spaziatori alchilici, nel senso qui utilizzato, si intendono co-amminoacidi a catena alchilica lineare ove n è 2 - 6.
Come si può notare la presenza del tetrapeptide di formula (I), come sopra definito, può indurre un ripiegamento nella conformazione del peptide che può perciò assumere una forma “ad uncino" (quando il tetrapeptide è presente nella parte terminale del peptide) o “a forcina" (quando il tetrapeptide è presente nella parte centrale del peptide). Queste conformazioni consentono un’ottimale legame degli autoanticorpi dei pazienti, fatto questo che è essenziale per le inaspettate proprietà dei peptidi secondo l'invenzione.
Particolarmente preferiti secondo l’invenzione sono i peptidi rappresentati dalle seguenti sequenze:
1 .
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
I peptidi come sopra definiti possono inoltre contenere un gruppo -HN- in C-terminale (ove n = 2-6) in modo da consentirne l’aggancio ad una resina come richiesto per il loro utilizzo pratico in diagnostica o per il trattamento terapeutico.
I peptidi secondo l’invenzione si possono preparare secondo le metodiche note per sintesi in fase solida o liquida.
Particolarmente utile risulta la tecnica in fase solida, ben nota agli esperti dell'arte, in base alla quale il residuo C-terminale è legato covalentemente ad un’opportuno supporto solido, ad esempio polistirene (resina di Wang), polistirene-poliossietilene (resina Tentagel o PEG-PS) oppure copolimeri di glicol polietilenico e poliacrilamide (resina PEGA), ed i successivi amminoacidi sono aggiunti sequenzialmente, tramite acilazione del gruppo amminico del residuo legato alla resina, ad es. tramite l’anidride simmetrica deN’amminoacido entrante, opportunamente protetto, ove necessario, sulla catena laterale. Al termine della sintesi il peptide grezzo è ottenuto per trattamento della resina con un opportuno acido, ad es. acido fluoridrico o trifluoroacetico, e separato per precipitazione da etere etilico e successiva liofilizzazione, il peptide è infine purificato ricorrendo a tecniche cromatografiche, quale ad es. HPLC preparativa. E’ inoltre possibile mantenere il peptide sintetico legato al supporto solido (ad es., polistirene-poliossietilene resina Tentagel o PEG-PS), procedendo alla deprotezione selettiva delle catene laterali con un opportuno reagente.
Alternativamente, sempre secondo tecniche note, si procede all’attacco dei peptidi agli opportuni supporti in modo da formare i corrispondenti coniugati utilizzabili praticamente in diagnostica o in terapia. I supporti preferiti a questo scopo includono le resine insolubili in acqua e completamente compatibili con fluidi organici come: il gel di silice, la cellulosa, il poliacrilato, il sefarosio ed analoghi, nonché le stesse resine normalmente utilizzate dagli esperti dell'arte per la preparazione di peptidi sintetici, quali esempio la resina di Wang, polistirenepoliossietilene (resina Tentagel o PEG-PS) oppure copolimeri di glicol polietilenico e poliacrilamide (completamente compatibili con acqua) tipo resina PEGA e analoghe più stabili quali POEPS (poliossietilenepolistirene), POEPOP (poliossietilene-poliossipropilene), così come resine macroporose descritte per il loro interesse per la glicosilazione in fase solida di peptidi, quali ad esempio SPOCC (PEG sostituito con ossetano) [Rademann, J; Grotli, M; Meldal, M; and Bock, K. J. Am. Chem. Soc. 1999, 121 , 5459-5466] o suoi derivati tipo EXPO3000 (copolimero con tetrakis-[4-(3-metil-ossetan-3-ylmetil)-fenil]-silano) [Tornee, C.W.; and Meldal M. In: Peptides 2000, J. Martinez and J.A. Fehrentz (Eds.) EDK, Paris, France 2001].
Qui di seguito si riporta, a titolo esemplificativo, la preparazione di alcuni peptidi secondo l'invenzione.
Esempio 1. Sintesi di un peptide lineare
Preparazione di H-Thr-Pro-Arg-Val-Glu-Arg-Asn(Glc)-Gly-His-Ser-Val-Phe-Leu-Ala-Pro-Tyr-Gly-Trp-Met-Val-Lys-OH
La resina Fmoc-Lys(Boc)-NovaSyn (0.5 g, 0.11 mmol/g) è stata fatta rigonfiare in DMF per 1 h a temperatura ambiente ed impaccata in una colonna di vetro (150 x 15 mm) di un sintetizzatore semiautomatico a flusso continuo. Dopo deprotezione del gruppo amminico presente sulla resina con una soluzione di piperidina al 20% in DMF, per l'inserimento di ogni amminoacido è stata caricata in colonna una soluzione contenente Fmoc-amminoacido (2.5 eq., 0.137 mmol) sciolti in DMF (1.3 mi), e come reagenti attivanti HOBt (2.5 eq, 0.137 mmol), TBTU (2.5 eq, 0.137 mmol) e NMM (3.75 eq, 0.205 mmol).
Nell'ordine sono stati utilizzati i seguenti amminoacidi:
I ) Fmoc-Val-OH
2) Fmoc-Met-OH
3) Fmoc-Trp(Boc)-OH
4) Fmoc-Gly-OH
5) Fmoc-Tyr(tBu)-OH
6) Fmoc-Pro-OH
7) Fmoc-Ala-OH
8) Fmoc-Leu-OH
9) Fmoc-Phe-OH
10) Fmoc-Val-OH
I I ) Fmoc-Ser(tBu)-OH
12) Fmoc-His(Trt)-OH
13) Fmoc-Gly-OH
14) Fmoc-Asn(Glc)-OH
glucopiranosil)-L-Asn-OPfp)
15) Fmoc-Arg(Pmc)-OH
16) Fmoc-Glu(OtBu)-OH-17) Fmoc-Val-OH
18) Fmoc-Arg(Pmc)-OH
19) Fmoc-Pro-OH-20) Fmoc-Thr(tBu)-OH
Completata la sintesi, la resina è stata deprotetta con piperidina al 20% in DMF, filtrata, lavata con DMF, DCM ed etere, infine è stata essiccata sotto vuoto. Il peptide grezzo è stato ottenuto per trattamento della resina con una miscela di TFA/fenolo/anisolo/etanditiolo (94:2:2:2) (10 mi), mantenuta sotto agitazione per 30 min a 0 °C ed a temperatura ambiente per 1.5 h. La resina è stata filtrata e lavata con TFA ed il filtrato concentrato a metà volume sotto vuoto. Il peptide è stato precipitato per trattamento con etere a freddo. Il precipitato ottenuto è stato liofilizzato recuperando 112 mg di peptide grezzo.
La deacetilazione è stata ottenuta aggiungendo goccia a goccia una soluzione di NaOMe 0.1 M in MeOH, fino a pH = 12, ad una soluzione del peptide in MeOH anidro (15 ml) mantenuta sotto agitazione inl atmosfera di azoto. La soluzione di NaOMe era stata preparata aggiungendo sodio metallico (270 mg in ligroina, 117mmol) a MeOH distillato (11 ml) in atmosfera di azoto. Dopo 1 h alla miscela è stato aggiunto ghiaccio secco fino a neutralità. La soluzione è stata concentrata ottenendo il peptide grezzo, che è stato purificato tramite HPLC semipreparativa ( purezza HPLC superiore al 97%).
Caratterizzazione: ESI-MS: trovato: [M+3H]3+ m/z = 869.9, [M+2H]2+ m/z = 1304.2; calcolato: PM monoisotopico = 2605.38.
Gli altri peptidi lineari sono stati preparati seguendo la stessa metodica, ma utilizzando i necessari amminoacidi nell'opportuna sequenza.
Esempio 2. Sintesi di un peptide ciclico.
Preparazione di H-Thr-Pro-Arg-Val-ciclo[Dap-Arg-Asn(Glc)-Gly-His-Asp]-Val-Phe-Leu-Ala-Pro-Tyr-Gly-Trp-Met-Val-Lys-OH
La resina TentaGel SPHB-Lys(Boc)-Fmoc (1.00 g, 0.22 mmol/g) è stata trattata come descritto nell’esempio 1. Per ogni accoppiamento sono stati utilizzati 4 eq di Fmoc-amminoacidi (0.88 mmol) sciolti in DMF (1.3 mi), e come reagenti attivanti HOBt (4 eq, 0.88 mmol) e TBTU (4 eq, 0.88 mmol,) e NMM (6 eq, 1.68 mmol,).
Nell’ordine sono stati utilizzati i seguenti amminoacidi:
1 ) Fmoc-Val-OH
2) Fmoc-Met-OH
3) Fmoc-Trp(Boc)-OH
4) Fmoc-Gly-OH
5) Fmoc-Tyr(tBu)-OH
6) Fmoc-Pro-OH
7) Fmoc-Ala-OH
8) Fmoc-Leu-OH
9) Fmoc-Phe-OH
10) Fmoc-Val-OH
11 ) Fmoc-Asp(OAII)-OH
12) Fmoc-His(Trt)-OH
13) Fmoc-Gly-OFI
14) Fmoc-Asn(Glc)-OPfp
15) Fmoc-Arg(Pmc)-OH
16) Fmoc-Dap(Alloc)-OH
17) Fmoc-Val-OH
18) Fmoc-Arg(Pmc)-OH
19) Fmoc-Pro-OFI
20) Fmoc-Thr(tBu)-OFI
Completata la sintesi, sono stati eliminati selettivamente i gruppi protettori allilici dalle catene laterali di Dap e Asp per trattamento con una soluzione di Pd(PPh3)4 (3 eq) in 7.5 mi di CHCI3/AcOH/ NMM 37:2:1 in atmosfera di Argon. La miscela di rezione è stata lasciata sotto agitazione al braccio meccanico per 3h a temperatura ambiente. La resina è stata quindi filtrata e lavata 3 volte con una soluzione di DIPEA 0.5 % in DMF, 3 volte con una soluzione di dietilcarbammato di Na 0.05% in DMF, 3 volte con DMF e 3 volte con DCM.
Per la successiva reazione di ciclizzazione, la resina è stata fatta rigonfiare in beuta in DMF per 1 h. E’ stata quindi aggiunta NMM (4 eq.) e dopo 10 minuti, PyBOP (4 eq.). La miscela di reazione è stata lasciata sotto agitazione al braccio meccanico per 3 giorni a temperatura ambiente. La resina è stata filtrata e lavata più volte con DMF, DCM e Et20 e infine seccata sotto vuoto.
Successivamente, la resina è stata deprotetta da Fmoc con piperidina al 20% in DMF, procedendo poi al distacco del peptide ed al suo isolamento esattamente come descritto all’esempio 1 .
Esempio 3. Sintesi di un peptide legato alla resina.
Preparazione di H-Thr-Pro-Arg-Val-Glu-Arg-Asn(Glc)-Gly-His-Ser-Val-Phe-Leu-Ala-Pro-Tyr-Gly-Trp-Met-Val-Lys-(βAla)3-PEG-PS
La resina base PEG-PS, in forma amminica (1 g, 0.09 eq) è stata fatta rigonfiare in DMF per 1 h a temperatura ambiente ed impaccata in una colonna di vetro (150 x 15 mm) di un sintetizzatore semiautomatico a flusso continuo. Per l’accoppiamento del primo amminoacido è stata caricata in colonna una soluzione contenente Fmoc- βAla-OH (4 eq., 0.36 mmol) sciolti in DMF (1.5 mi), e come reagenti attivanti HOBt (4 eq., 0.36 mmol), TBTU (4 eq., 0.36 mmol) e NMM (6 eq, 0.54 mmol). La reazione procede per 1 h e successivamente, dopo gli opportuni lavaggi, si procede alla deprotezione della funzione amminica, per trattamento con piperidina al 20% in DMF. Si ripete il ciclo di accoppiamento di βAla per altre due volte e quindi si procede con le stesse modalità ad accoppiare un residuo di Fmoc-Lys(Boc)-OH. Successivamente si procede alla costruzione dell'intera sequenza peptidica, esattamente come indicato nell’esempio 1. Dopo l’ultimo trattamento con piperidina, il peptide-resina viene deprotetto per trattamento con una miscela di TFA/fenolo/anisolo/etanditiolo (94:2:2:2) (10 ml), sotto agitazione per 30 min a 0 °C ed a temperatura ambiente per 1.5 h, lavato accuratamente e seccato a pressione ridotta.
Esempio 4. Coniugazione di un peptide alla resina.
Un peptide libero, lineare oppure ciclico, preparato come descritto negli esempi 1 e 2, rispettivamente, è coniugato alla resina sefarosio preattivata con CNBr, secondo gli usuali protocolli di reazione consigliati dalla ditta produttrice in modo da ottenere la coniugazione resina-peptide. Il prodotto così ottenuto è utilizzabile tal quale ad esempio per la preparazione di piastre per la diagnosi o il trattamento di pazienti affetti da SM [vedi anche qui di seguito].
Uso diagnostico
Per uso diagnostico i glicopeptidi oggetto della invenzione sono diluiti e adsorbiti a plastiche leganti in pozzetti di piastre per microtitolazione (sistemi ELISA). Il siero o plasma dei pazienti viene quindi aggiunto in una serie di concentrazioni (diluizioni) diverse. L’autoanticorpo specifico per i nostri prodotti si lega al peptide adsorbito alla plastica. Secondo la tecnica nota agli esperti deN’arte, ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay), le molecole di autoanticorpi legate ai glicopeptidi vengono quindi evidenziate con il legame di opportuni anticorpi rivelatori aggiunti alle piastre ELISA che riconoscono il frammento costante delle immunoglobuline. Tali anticorpi rivelatori, in quanto coniugati con opportuni enzimi, possono essere rivelati mediante una reazione colorimetrica: l’assorbanza sviluppata è proporzionale alla quantità di autoanticorpi specifici legati. Quantitativamente il risultato è espresso come titolo anticorpale, definito come il reciproco della diluizione a cui non si osserva più reazione.
Il titolo anticorpale, come sopra definito, è stato misurato in diversi pazienti affetti da Sclerosi multipla; i glicopeptidi secondo l’invenzione hanno rivelato titoli di anticorpi più elevati rispetto a quelli misurati con i glicopetidi noti.
Uso terapeutico
I peptidi secondo l'invenzione, in forma libera oppure legati alle opportune resine, possono essere utilizzati per il trattamento di pazienti affetti da sclerosi multipla in quanto, grazie alla loro elevata specificità di riconoscimento anticorpale, possono essere utilizzati per neutralizzare e/o allontanare selettivamente gli autoanticorpi.
Claims (1)
- RIVENDICAZIONI 1. Glicopeptidi costituiti da 11 - 24 amminoacidi contenenti un tetrapeptide di formula (I):in cui: X = amminoacido portante un gruppo amminico o carbossilico sulla catena laterale ; Y = Pro, Gly; G = zucchero Z = Ala, Val, Ile, His 2. Glicopeptidi secondo la rivendicazione 1 in cui gli amminoacidi sono gli amminoacidi naturali o amminoacidi non naturali. 3. Glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 e 2 di formula (II):in cui: Y e G sono come sopra definiti; A è un gruppo di 2 - 5 amminoacidi o è assente; B e C sono amminoacidi trifunzionali capaci di formare tra loro un ponte lattamico tramite le rispettive catene laterali o sono entrambi assenti; D rappresenta un gruppo di 5 - 15 amminoacidi; X è un amminoacido scelto nel gruppo costituito da: Giu, Asp, Lys, Arg, Orn, Dap; Z è un amminoacido scelto nel gruppo costituito da: Ala, Val, Ile, His. 4. Glicopeptidi secondo la rivendicazione 3 in cui B e C rappresentano le coppie: Dap-Asp o Asp-Dap, Dab-GIu o Glu-Dab, Orn-Asp o Asp-Orn e quelle formate da altri amminoacidi, aventi analoghe caratteristiche. 5. Glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 - 4 in cui lo zucchero è scelto nel gruppo costituito da mono- e disaccaridi quali β-D-glucopiranosile (Glc), 2-acetilglucosammina (GIcNAc), cellobiosio e analoghi. 6. Glicopeptidi secondo la rivendicazione 5 in cui lo zucchero è β-D-glucopiranosile (Glc), 7. Glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 - 6 rappresentati dalle formule seguenti:8. Glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 - 7 contenenti, in posizione non terminale, uno spaziatore alchilico 9. Glicopeptidi secondo la rivendicazione 8 in cui detto spaziatore alchilico è un gruppo di formula ove n è compreso fra 2 e 6. 10. Glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 - 9 contenenti inoltre un gruppo H in C-terminale ove n è compreso fra 2 - 6. 1 1 . Processo per la preparazione in fase solida di glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 - 10 in cui. a) il residuo C-terminale è legato covalentemente ad un’opportuno supporto solido; b) i successivi amminoacidi sono aggiunti sequenzialmente, tramite acilazione del gruppo amminico del residuo legato alla resina; c) il peptide grezzo è raccolto per trattamento della resina con un opportuno acido; d) il peptide è purificato ricorrendo a tecniche cromatografiche; e) il peptide è eventualmente attaccato ad un opportuno supporto solido. 12. Processo secondo la rivendicazione 11 in cui il supporto solido dello stadio (a) è scelto nel gruppo costituito da: gel di silice, la cellulosa, il poliacrilato, il sefarosio ed analoghi, polistirene (resina di Wang), polistirene-poliossietilene (resina Tentagel o PEG-PS), copolimeri di glicol polietilenico e poliacrilamide (resina PEGA), POEPS (poliossietilene-polistirene), POEPOP (poliossietilenepoliossipropilene), SPOCC (PEG sostituito con ossetano) o suoi derivati. 13. Processo secondo la rivendicazione 12 in cui il supporto solido dello stadio (e), se presente, è scelto nel gruppo costituito da: gel di silice, cellulosa, poliacrilato, sefarosio. 14. Coniugati costituiti da una resina insolubile in acqua e completamente compatibile con fluidi organici ed un glicopeptide secondo le rivendicazioni 1 - 10. 15. Coniugati secondo la rivendicazione 14 in cui la resina è sefarosio, cellulosa e gel di silice. 16. Piastre per diagnosi contenenti i glicopeptidi secondo le rivendicazioni 1 - 10. 17. Metodo diagnostico in cui si utilizzano i glicopeptidi liberi secondo le rivendicazioni 1 - 10. 18. Metodo diagnostico in cui si utilizzano i coniugati secondo le rivendicazioni 14 e 15.
Priority Applications (16)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2001FI000114A ITFI20010114A1 (it) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla |
| IL15947902A IL159479A0 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
| DE60226324T DE60226324T2 (de) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glykopeptide, deren herstellung und verwendung in der diagnose oder behandlung von multipler sklerose |
| PL368158A PL207174B1 (pl) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glikopeptydy, sposób ich wytwarzania, koniugaty glikopeptydów, płytki do diagnozy, metody diagnostyczne i zestaw do diagnozowania stwardnienia rozsianego |
| AU2002316989A AU2002316989B2 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
| PCT/EP2002/006767 WO2003000733A2 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
| CA2451347A CA2451347C (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
| CZ2004122A CZ2004122A3 (cs) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glykopeptidy |
| US10/482,044 US7037893B2 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
| HU0400262A HUP0400262A3 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the treatment of multiple sclerosis |
| PT02745396T PT1406927E (pt) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glicopéptidos, sua preparação e utilização no diagnóstico ou no tratamento terapêutico da esclerose múltipla |
| AT02745396T ATE393785T1 (de) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glykopeptide, deren herstellung und verwendung in der diagnose oder behandlung von multipler sklerose |
| DK02745396T DK1406927T3 (da) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptider, fremstilling og anvendelse deraf til diagnosticering eller terapeutisk behandling af dissemineret sklerose |
| EP02745396A EP1406927B1 (en) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
| ES02745396T ES2305258T3 (es) | 2001-06-22 | 2002-06-19 | Glicopeptidos, su preparacion y su uso en el diagnostico o tratamiento terapeutico de esclerosis multiple. |
| IL159479A IL159479A (en) | 2001-06-22 | 2003-12-21 | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT2001FI000114A ITFI20010114A1 (it) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITFI20010114A1 true ITFI20010114A1 (it) | 2002-12-22 |
Family
ID=11442221
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT2001FI000114A ITFI20010114A1 (it) | 2001-06-22 | 2001-06-22 | Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7037893B2 (it) |
| EP (1) | EP1406927B1 (it) |
| AT (1) | ATE393785T1 (it) |
| AU (1) | AU2002316989B2 (it) |
| CA (1) | CA2451347C (it) |
| CZ (1) | CZ2004122A3 (it) |
| DE (1) | DE60226324T2 (it) |
| DK (1) | DK1406927T3 (it) |
| ES (1) | ES2305258T3 (it) |
| HU (1) | HUP0400262A3 (it) |
| IL (2) | IL159479A0 (it) |
| IT (1) | ITFI20010114A1 (it) |
| PL (1) | PL207174B1 (it) |
| PT (1) | PT1406927E (it) |
| WO (1) | WO2003000733A2 (it) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITFI20010114A1 (it) | 2001-06-22 | 2002-12-22 | Univ Firenze | Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla |
| ITFI20010144A1 (it) * | 2001-07-25 | 2003-01-25 | Univ Firenze | Colonne per immunoassorbimento per sottrazione di autoanticorpi dal sangue con tecniche di plasmafiltrazione selettiva |
| BR0313194A (pt) * | 2002-08-02 | 2005-07-12 | Glycominds Ltd | Método para diagnose de esclerose múltipla |
| US8216791B2 (en) | 2005-01-31 | 2012-07-10 | Glycominds Ltd. | Method for diagnosing multiple sclerosis |
| US7572592B2 (en) | 2005-01-31 | 2009-08-11 | Glycominds Ltd | Method for diagnosing multiple sclerosis |
| US20080267988A1 (en) * | 2007-04-11 | 2008-10-30 | Enteron Limited Partnership | Myelin specific IgE unencumbered by corresponding blocking antibodies as a causative factor in multiple sclerosis |
| MX2009011007A (es) | 2007-04-12 | 2009-12-04 | Apitope Int Nv | Biomarcadores para esclerosis multiple. |
| ATE514711T1 (de) | 2007-10-16 | 2011-07-15 | Toscana Biomarkers S R L | Galactosylierte peptide, deren zubereitung und verwendung zur diagnose von autoimmunerkrankungen |
| US20100203569A1 (en) | 2009-02-12 | 2010-08-12 | Glycominks LTD | Method for Evaluating Risk in Multiple Sclerosis |
| ITFI20120164A1 (it) | 2012-06-05 | 2013-12-06 | Azienda Ospedaliera Universitaria S Enese 50 | Nuovi peptidi glicosilati. |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0922057A1 (en) * | 1996-03-28 | 1999-06-16 | Immulogic Pharmaceutical Corporation | Myelin oligodendrocyte glycoprotein peptides and uses thereof |
| AU3789099A (en) | 1998-05-05 | 1999-11-23 | Corixa Corporation | Myelin basic protein peptides and uses thereof |
| WO2000012126A1 (en) | 1998-08-26 | 2000-03-09 | The Regents Of The University Of California | Autoantibody inhibitors |
| ITFI20010114A1 (it) | 2001-06-22 | 2002-12-22 | Univ Firenze | Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla |
| ITRM20010408A1 (it) * | 2001-07-10 | 2003-01-10 | Univ Napoli Federico Ii | Mini-anticorpo umano citotossico per cellule tumorali che esprimono il recettore erbb2. |
-
2001
- 2001-06-22 IT IT2001FI000114A patent/ITFI20010114A1/it unknown
-
2002
- 2002-06-19 ES ES02745396T patent/ES2305258T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-19 WO PCT/EP2002/006767 patent/WO2003000733A2/en active IP Right Grant
- 2002-06-19 HU HU0400262A patent/HUP0400262A3/hu unknown
- 2002-06-19 US US10/482,044 patent/US7037893B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-19 DE DE60226324T patent/DE60226324T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-19 AU AU2002316989A patent/AU2002316989B2/en not_active Ceased
- 2002-06-19 CZ CZ2004122A patent/CZ2004122A3/cs unknown
- 2002-06-19 AT AT02745396T patent/ATE393785T1/de active
- 2002-06-19 PT PT02745396T patent/PT1406927E/pt unknown
- 2002-06-19 PL PL368158A patent/PL207174B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2002-06-19 EP EP02745396A patent/EP1406927B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-06-19 DK DK02745396T patent/DK1406927T3/da active
- 2002-06-19 CA CA2451347A patent/CA2451347C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-06-19 IL IL15947902A patent/IL159479A0/xx unknown
-
2003
- 2003-12-21 IL IL159479A patent/IL159479A/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2002316989B2 (en) | 2006-10-26 |
| EP1406927B1 (en) | 2008-04-30 |
| PL368158A1 (en) | 2005-03-21 |
| PL207174B1 (pl) | 2010-11-30 |
| DE60226324D1 (de) | 2008-06-12 |
| CA2451347A1 (en) | 2003-01-03 |
| WO2003000733A2 (en) | 2003-01-03 |
| WO2003000733A3 (en) | 2003-11-13 |
| IL159479A0 (en) | 2004-06-01 |
| DE60226324T2 (de) | 2009-07-09 |
| IL159479A (en) | 2010-12-30 |
| EP1406927A2 (en) | 2004-04-14 |
| ATE393785T1 (de) | 2008-05-15 |
| US7037893B2 (en) | 2006-05-02 |
| ES2305258T3 (es) | 2008-11-01 |
| CA2451347C (en) | 2011-07-19 |
| US20040235713A1 (en) | 2004-11-25 |
| DK1406927T3 (da) | 2008-08-18 |
| HUP0400262A2 (hu) | 2004-08-30 |
| HUP0400262A3 (en) | 2008-05-28 |
| CZ2004122A3 (cs) | 2004-07-14 |
| PT1406927E (pt) | 2008-07-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109641946A (zh) | 胰高血糖素样肽的制备方法 | |
| CN102241743A (zh) | 含有天冬酰胺糖链的糖肽制造方法以及该糖肽 | |
| EP3517543B1 (en) | Manufacture of glucagon peptides | |
| ITFI20010114A1 (it) | Glicopeptidi,loro preparazione e loro uso nella diagnosi o nel trattamento terapeutico della sclerosi multipla | |
| EP2090582B1 (en) | Binding molecules for human factor VIII and factor VIII-like proteins | |
| Young et al. | Immunochemical studies on tobacco mosaic virus protein. V. The solid-phase synthesis of peptides of an antigenically active decapeptide of tobacco mosaic virus protein and the reaction of these peptides with antibodies to the whole protein | |
| Vuljanic et al. | Piperidine is preferred to morpholine for Fmoc cleavage in solid phase glycopeptide synthesis as exemplified by preparation of glycopeptides related to HIV gp120 and mucins | |
| KR102243870B1 (ko) | 환상 펩타이드, 어피니티 크로마토그래피 담체, 표지화 항체, 항체 약물 복합체 및 의약 제제 | |
| KR101609840B1 (ko) | 항체의 Ｆｃ 부위 결합 펩타이드를 이용한 항체 정제용 흡착 칼럼 | |
| EP2614371B1 (en) | Method for labeling of compounds | |
| KR20140011357A (ko) | 시알릴 당쇄를 갖는 당펩티드의 제조방법, 당해 제조방법에 사용하는 시알릴 당쇄 부가 아미노산 유도체 및 당해 당펩티드 | |
| AU2002316989A1 (en) | Glycopeptides, their preparation and use in the diagnosis or therapeutic treatment of multiple sclerosis | |
| Ball et al. | Engineering the prion protein using chemical synthesis | |
| KR20110067097A (ko) | 당단백질의 제조방법 및 스크리닝 방법 | |
| Kosch et al. | Synthesis of glycopeptide derivatives of Peptide T on a solid phase using an allylic linkage | |
| Ichiyanagi et al. | Synthesis of mucin-type glycopeptide (β hCG 130–145) by on-resin fragment condensation of the glycopeptide segments carrying unmasked oligosaccharides | |
| Calvete et al. | Localization of an O-glycosylation site in the α-subunit of the human platelet integrin GPIIb/IIIa involved in Baka (HPA-3a) alloantigen expression | |
| JP4339797B2 (ja) | 非標的部位のアミンが保護されたペプチド、その製造方法、及びこれを利用したｐｅｇが特異的に接合されたペプチドの製造方法 | |
| CA2828688C (en) | Method for preparing multiple antigen glycopeptide carbohydrate conjugates | |
| KR101966301B1 (ko) | 높은 항체결합용량과 온화한 용출 조건을 가진 항체정제용 흡착 리간드 및 그 용도 | |
| Valembois et al. | Continuous flow synthesis of a biologically active small protein and a large peptide. | |
| SPATOLA et al. | Phase transfer catalysis in solid phase peptide synthesis: Preparation of cyclo [Xxx‐Pro‐Gly‐Yyy‐Pro‐Gly] model peptides and their conformational analysis | |
| Scolaro et al. | Solid‐phase synthesis of bombesin by continuous flow procedure using Fmoc‐amino acids | |
| WO1997026280A1 (en) | Isolation of fibrinogen by affinity chromatography | |
| KR101664338B1 (ko) | 면역글로불린 Ｇ의 Ｆｃ 부위에 선택적으로 결합하는 신규 펩타이드 |