IT8219704A1 - Agente di proliferazione per bifidobatteri - Google Patents

Agente di proliferazione per bifidobatteri

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IT8219704A1 ITMI1982A019704A IT1970482A IT8219704A1 IT 8219704 A1 IT8219704 A1 IT 8219704A1 IT MI1982A019704 A ITMI1982A019704 A IT MI1982A019704A IT 1970482 A IT1970482 A IT 1970482A IT 8219704 A1 IT8219704 A1 IT 8219704A1
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Description

DESCRIZIONE dell'invenzione industriale dal titolo: "AGENTE DI PROLIFERAZIONE PER BIFIDOBATTERI"
della ditta giapponese KUREHA KAGAKU KOGYO KABUSHIKI KAISHA, con sede in TOKYO (Giappone) - depositata il 1 7 FEB.1982 oon N? 1 97 04 A/ 82 Inventori : Ch.ikao YOSHIKUMI , Katsuo SAKURAI , Yoshio OMURA , Mayumi NOHARA , Takao ANDO e Isamu MOTOKAWA
RIASSUNTO
Un agente di proliferazione per bifidobatteri secondo l'invenzione comprendente ciclodestrina come ingrediente attivo fa proliferare nell'intestino soltanto i bifidobatteri senza disturbare la flora batterica intestinale.
La presente invenzione riguarda un agente di proliferazione per bifidobatteri.
Il termine "bifidobatteri" ? usato nel presente contesto come termine generico per i batteri apparte-<? >rienti al genere Bifiaobacterium (vedere il "Manual of Determinative Bacteriology " di Bergey, ottava edizione, pagine 659-676, Baltimora, The Williams & Wilkins Company), i quali sono noti come batteri utili abitanti negli intestini umani. In altri termini, i bifidobatteri svolgono importanti funzioni nel conservare la salute umana impedendo le infezioni intestinali e fornendo all'ospite sostanze nutrienti senza produrre sostanze nocive come animine ed ammoniaca.
In particolare si afferma che la mortalit? e la sono superiori nei bambini allattati artificialmente che non nei bambini allattati al seno, poich? il numero di bifidobatteri nell'intestino dei primi ? inferiore a quello dei secondi e la necessit? di una proliferazione intestinale di bifidobatteri risulta notevolmente accresciuta.
D'altra parte, in considerazione dell'utilit? dei bifidobatteri come accennato sopra, ? stato proposto di somministrare i bifidobatteri stessi in forma farmaceutica e vari tipi di preparazioni contenenti bifidobatteri sono risultati commercialmente disponibili. Tuttavia i Bifidobatteri sono generalmente instabili e soggetti a morire durante l'immagazzinamento per un lungo periodo ed ? di conseguenza considerato difficile conservare nella preparazione la voluta quantit? di bifidobatteri vivi. E' inoltre difficile per i bifidobatteri fissarsi o proliferare per un lungo periodo negli intestini, sebbene siano somministrati artificialmente bifidobatteri vivi.
La richiedente ha studiato la proliferazione intestinaie dei bifidobatteri, ha trovato che la proliferazione dei soli bifidobatteri risulta estremamente notevole senza influenzare altri batteri intestinali quando ad uri uomo viene somministrata ciclodestrina ed ? quindi pervenuta alla presente invenzione.
Pi? esattamente, secondo la presente invenzione, i bifidobatteri non sono introdotti dall'esterno nel corpo vivente, ma sono fatti proliferare nel corpo vivente .
L'agente di proliferazione dei bifidobatteri secondo l'invenzione contiene ciclodestrina come ingrediente attivo. La ciclodestrina usata in questa invenzione comprende la alfa-, beta- e gamma-ciclodestrina. Le propriet? fisicochimiche di queste ciclodestrine sono riportate nella Tabella 1.
? ? ??
- 4 -
TABELLA 1
?-ciclodestrina ? -ciclodestri ria Y-ciclodestrina Numero di ui?
t? di glucosio
Peso mole 973 1135 1297
colare
Diametro del- 5 - 6 7 - 8<' >9 - 10
La cavit?
Profondit? 7 - 8 7 - 8 7 - 8
della cavit?
Forma crista_l aciculare Drismatica prismatica lina 1)
Potere rotat?
rio specifico 150,5? 162,5? 177,4?
2)
Solubilit? in
acqua (g/??? mi 14,5 1,85 23,2
a 25?C)
Note : 1) ricristalllzzata dall'acqua
2<) >Ciri acqua)
La tossicit? e le attivit? farmacologiche delle ciclodestrine usate nella presente invenzione sono esaminate nel modo seguente .
(1) Tossicit? acuta
Ciascuna ciclodestrina (ou, ?_ e ?-) ? somministra-
ta per le seguenti vie a ratti e topi ed ? misurata
la LDbu. I risultati sono mostrati nella Tabella 2.
TABELLA 2
Via di som Animale da LD50 (g/Kg)
ministrazio l.ahnf'ito?-ciclo- ??ciclo? ?-ciclone rio
destrina destrina destrina
>12,5 >12,5 >12,5 Topo i
? >12,5 >12,5 >12,5 Orale
Ratto ? >12 >12 >12
? >12 >12 >12
,9 > 0,9 > 0,9 Topo ? > 0
Sottocu- ? > 0,9 > 0,9 > 0,9 tane?
Ratto ? > ?,5 > 1,5 > 1,5 ? > 1,5 > 1,5 > 1,5
0,9 Topo ? > 0,9 > 0,9 >
Intraperi- ? > 0,9 > 0,9 > 0,9 toneale
Ratto ? > 1,2 > 1,2 > 1,2
? > 1,2 > 1,2 > 1,2
Come si vede dalla Tabella 2, le ciclodestrine usa--
te secondo l'invenzione presentano una bassa tossici-
t? acuta.
(2) Attivit? batterica
L'attivit? antibatterica della ciclodestrina con-
tro i seguenti batteri ? stata esaminata con il raetoto di diluizione su piastra di agar secondo il metodo normalizzato pubblicato dalla Japanese Society of Chemotherapy . I metodi di prova sono i seguenti:
(a) Attivit? antibatterica contro batteri aerobici Specie di batteri provata N? di deposito del ceppo Escherichia coli IF0 12734
Staphylococcus aureus IAM 1011 Bacillus subtilis IAM 1069
Dopo inoculazione ai ciascun batterio nel mezzo di coltura costituito da brodo di triptofano-soia ed incubazione per 18 ore a 37?C, viene preparata una sog
spensione acquosa contenente 10 cellule di batteri proliferati per mi. Viene preparata una piastra di agar miscelando una parte in volume di ciascuna soluzione. acquosa contenente alfa-, beta- o gamma-ciclodestrina alla concentrazione di 400, 800 o 1600 micr? grammi per mi con nove parti in volume di un mezzo di coltura di agar per infusione cardiaca come mezzo di coltura per esaminare la sensibilit? del farmaco e versando il mezzo di coltura miscelato in ciascuna capsula ai Petri.
Dopo aver spalmato ciascuna sospensione acquosa del batterio sulla superficie cella piastra di agar tracciando una riga di 2 cm di lunghezza con un'ansa di platino, i batteri sono incubati per 18 ore a 37?0 e la concentrazione di ciclodestrina nel mezzo di cultura alla quale la crescita ? completamente inibita viene adottata come MIC (concentrazione minima di inibizione ).
?(b) Attivit? antibatterica contro batteri anaerobioi Specie ni batteri provata N? di deposito del ceppo Bacteroides fragills ATCC 25285 L.actobacillus casei IAM 1118 Bifidobacterium bifidum ATCC 15696 Bifidobacterium adolescente ATCC 15703 Bifidobacterium infantis ATCC 15697 Bifidobacterium pseudolongum ATCC 25526
Ad eccezione che per l'impiego di un mezzo di coltura in brodo GAM come mezzo per la proliferazione aei batteri e di un mezzo di coltura di agar GAM per esaminare la sensibilit? al farmaco del batteri, nonoht: per incubazione del mezzo di coltura inoculato secondo :i1 metodo di Gaspak (concentrazione di bioosirio di carbonio del 5% in volume) per 24 ore a 37<?>C, la MIC ? stata ottenuta con le stesse procedure illustrate in (a)<' >.
1 risultati aelle prove in (a) e (b) hanno mostrato che in MIC di ciascun tipo di ciclodestrina c supcriore a 1600 microgrammi/mi di sospensione acquosa, l<'>ulto che dimostra che la ciclodestrina non possiede apprezzabile attivit? antibatterica.
(3) Mutagenicit?
La mutageriicit? della ciclodestrina ? stata esaminata secondo il metodo descritto in "Guidebook for Test of Mutagenicity of Microorganisms " (edito dalla Sezione Ricerche per le Sostanze Chimiche, Dipartimento della sicurezza e della salute, Minist?ro del Lavoro , Giappone).
Dopo aver incubato per 20 minuti a 37?C la miscela di 0,5 mi di tampone al fosfato, 0,05 mi della soluzione acquosa di ciclodestrina (alfa-, beta- o gammaciclodestrina in dose di 5000 microgrammi per piastra anche alla massima concentrazione) e 0,1 mi di sospensione acquosa di Salmonella typhimurium TA 98 o TA 100, entrambe le quali sono state originariamente isolate da Ames et.al. ed ottenute dal National Ifistitute of Genetica, Giappone come batterio di prova, la coltura batterica incubata ? stratificata sul mezzo di coltura minimo e la coltura stratificata ? incubata per 48 ore a 37?C. E' quindi contato il numero -delle colonie?soggette a reversione nel mezzo di coltura.
Il numero di colonie soggette a reversione di ciascun ceppo batterico non ha mostrato alcun incremento sigtiificativo rispetto a quello di controllo (vierie aggiunta acqua anzich? la soluzione acquosa ai ciclodestrina) .
Come si vede dai risultati di (3)F la ciclodestrina non mostra sostanzialmente mutagenicit?.
L'attivit? della ciclodestrina nel far proliferare i bifidobatteri ? stata riconosciuta in base ai risultati delle prove descritte in seguito. Pi? precisamente la ciclodestrina ? somministrata per via orale ad animali da esperimento come topi alla dose di 2 g/Kg di peso corporeo al giorno per due settimane e, 7 giorni dopo la somministrazione, nelle feci degli animali da esperimento ? contato secondo il metodo convenzionale il numero di batteri intestinali vivi come bifidobatteri, Escherichia coli, Lactobacilli e Bacteroides sp. La ciclodestrina mostra un notevole effetto nel lar proliferare specificamente soltanto i bifidobatteri ad un ritmo pari fino a 90 volte. In altri termini, quando l'agente per la proliferazione di bifidobatteri secondo l'invenzione ? somministrato al corpo vivente, ? possibile far proliferare nel- -l'intestino del corpo vivente soltanto i bifidobatteri senza disturbare la flora batterica intraintestinale.
Di conseguenza, l'agente di proliferazione per bifidobatteri secondo l'invenzione comporta un effetto di miglioramento sui sintomi di disturbi intestinali come diarrea, enterite, indigestione e costipazione ed ? anche utile come farmaco terapeutico per l'encefalopatia epatogena.
Inoltre, aggiungendo ciclodestrina secondo l'invenzione ad alimenti, bevande e piatti raffinati ? anche possibile ottenere la proliferazione di bifidobatteri intestinali .
Allo scopo di applicare la ciclodestrina come agente di proliferazione per bifidobatteri, ? preferibile usare la ciclodestrina sola oppure in miscela con u?n diluente farmaceuticamente accettabile oppure un altro farmaco, somministrandola sotto forma di dose unitaria secondo la composizione farmaceutica. Ad esempio, la composizione farmaceutica pu? prendere varie forme come polvere, granuli, compresse, confetti, capsule, sospensioni, soluzioni, emulsioni e fiale.
Inoltre come diluente possono essere usate sostanze solide, sostanze liquide, sostanze semisolide, oppure la capsula ingeribile per via orale pu? essere incorporata nel diluente. Come diluenti effettivi pos-.
essere
sono ad esempio/elencati eccipienti, riempitivi, agenti coniuganti, agenti imbibenti, disintegranti, tensioattivi, agenti lubrificanti, agenti disperdenti, tamponi, profumi, conservanti, agenti ausiliari per la dissoluzione e solventi. Il diluente ? usato da solo o in combinazione di pi? di due tipi.
L'agente di proliferazione della presente invenzione contiene da 0,01 a 100% in peso di ciclodestrina come ingrediente attivo nei casi usuali ed ? somministrato per via orale o parenterale, tuttavia la somministrazione orale ? preferibile.
Il dosaggio dell'agente di proliferazione secondo l'invenzione dipende dalla razza, dall'et?, dai sintomi e dalle differenze individuali dell'ospite, tuttavia nei casi usuali in cui viene effettuata la somministrazione orale ad un uomo, pu? essere somministrato da 0,01 a 1 g per Kg di peso corporeo al giorno, preferibilmente da 0,1 a 0,5 g/Kg/giorno, la somministrazione effettiva essendo effettuata da uno a quattro volte/giorno, suddividendo la dose giornaliera per uno fino a quattro.
I vantaggi della presente invenzione saranno illustrati con riferimento ai seguenti esempi:
ESEMPIO 1
Sono preparati due tipi di soluzioni acquose contenenti ciascuna il 20% in peso di alfa-ciclodestrina o gamma-ciclodestrina ed un tipo di sospensione acquosa contenente il 20% in peso di beta-ciclodestrina, nonch? un tipo di soluzione acquosa contenente il 20% ir; peso di destrina come controllo.
Ciascuna ?soluzione o soperisione ? somministrata a topi femmina C3H/He otto settimane dopo la nascita,
un gruppo essendo costituito da cinque animali ed il numero di gruppi essendo quattro, il dosaggio essendo
2-,0 g di ciclodestrina/Kg di peso corporeo/giorno in continuazione per 2 settimane.
Prima della somministrazione e sette giorni dopo
sono raccolte le feci di ciascun topo e, dopo aver diluito le feci raccolte con 100 volte di un tampone fosfatico anaerobico ed aver macinato le feci diluite, in ciascun mezzo di coltura sono inoculati 0,1 mi delle feci macinate (vedere Tabella 3) per la specie batterica indicata ed i mezzi di coltura cos? inoculati
sono incubati a 37?C per uno fino a cinque giorni in condizioni aerobiche o anaerobiche (a seconda del metodo anaerobii-o di cruneIta in scatola).
TABELLA 3
Specie batterica Mezzo di coltura Cori dizioni ai coltura Bifidobacteria agar BS anaerobiche, 37?C, 5 LactobaciIli agar LBS come sopra
bui:Loroiduu ??. agar NBGT come sopra Kacherichia coli agar DHL aerobiche, 37<?>C, un giornc Dopo che l'incubazione ? terminata, viene contato il.numero di bifidobatteri , Escherichia coli, LactobaciIli e Bacteroides sp . nel mezzo di coltura. I risultati sono riportati nelle Tabelle da 4 a 7, il conteggio essendo la media di cinque topi.
TABELLA 4 oc-ciclodestrina
Conta vitale ^ <J >Entit? ai proli-Specie batterica
prima (A) 7 giorni dopo (B) ferazione (B/A) della somministrazione
bif idobacteria 5,4 x IO<5 >6,5 x IO<7 >120 .
Lactobacilli 8,8 x 10? 8,8 x IO<8 >1,00
Bacteroides sp. 8,6 x IO<8 >8,4 x IO<8 >0,98 Escherichia coli 6,2 x IO<6 >9,0 x IO<6 >1,45
Nota: 1) per g di feci
TABELLA 5 ?-ciclode?trina
Conta vitale Entit? di proli-Specie batterica
prima (A) 7 giornidopo (B) ferazione (R/A) della somministrazione
8
bifidobuc Leria 1,3 X IO<5 >1,8 x 10 1385-Lac tobaci ]Ii 9
1.5 x IO<9 >2,2 x 10 1,47
Bacteroides sp . 8
3.5 x IO<8 >3.7 x 10 1,06 Escherichia coli 4,0 x IO 6<6 >5.8 x 10 1,45
Nota: 1) per g di feci
? ? ? ? ? ?
- 14 -
TABELLA 6 ? -ciclodeatrina
I
Specie batterica Conta vitale 1)
Entit? di proliprima (A) 7 giorni???? (B) feraziorie (H/A/ delle sommini31rp zione
bifidobacteria 2.0 x IO<4 >1,8 x IO<6 >90
LacLubacil1i 9.0 X IO<8 >7,0 x IO<8 >0,78 Iloc'Lei.ui11eu Li y . 1.0 x IO<8 >3,0 x IO<8 >3,00 Eschorichia coli 7,5 x IO<6 >7,0 x IO<6 >0,93
Nota: 1) per g ai feci
TABELLA 7 destrina (per confronto)
_ Corita vitale _ _ Entit? di proli-Specie batterica
orima (A) 7 giorni dopo (B<1>)ferazione (B/A) nella somministrazione _
bifidobacLcri-.i 2,3 x IO<5 >1,6 x IO<5 >0,70 Lactobaci i1i 5.0 x IO<8 >6,0 x IO<8 >1,20 Hucteroid' ;jp. 3,2 x IO<8 >8,0 x IO<8 >2,50
Et;cl'ieridiia coli 9.0 x IO<6 >7,2 x IO<6 >0,80
Nota: 1) per g di feci
Come ::i. vede nelle Tabelle da 4 a 6, la ciclodestrina fa proliferare specificamente soltanto i bifidoInvitteri rie11'Inteatino del corpo vivente con un tao
so di proliferazione superiore a 90 volte e, d'altra parte, la destrina non mostra tale attivit? per la proliferazione di bifidobatteri come si rileva dalla Tabella 7- Inoltre, nelle feci di tutti gli animali a cui ? somministrata ciclodestrina non vengono osservate anomalie.
? ESEMPIO 2
i
10 parti in peso di alfa-, beta- o gamma-ciclodejstrina, 15 parti in peso di ossido di magnesio pesani <? >,te e 75 parti in peso di lattosio sono uniformamente miscelate per preparare composizioni in polvere. Inol^ itre vengono preparate composizioni incapsulate ponen-'do le composizioni polverulente in capsule. i
ESEMPIO 3
1 Questo esempio mostra un'applicazione della comp<^-sizione incapsulata contenente beta-ciclodestrina co-, j j me ingrediente attivo in persone normali. , A tre volontari maschi adulti sani ? somministra--ta la composizione incapsulata preparata nell'Esempio 2 ogni giorno per due settimane in continuazione ad un dosaggio di 10 g di ciclodestrina/giorno. Prima e dopo la somministrazione complessiva sono raccolti campioni di feci provenienti dalle tre persone e sono determinati, secondo le procedure mostrate nell'Esempio 1, i numeri di batteri (compresi bifidobatteri) contenuti nel campione.
Come risultato delle determinazioni, si ? osservato che il numero di bifidobatteri nelle feci raccolte dopo la somministrazione mostra ?un incremento compreso fra circa 10 e 100 volte rispetto a quello del-
Ile feci raccolte prima della somministrazione. Inoltre, <r>
nelle feci della persona le cui feci contenevano un fumer? relativamente grande di bifidobatteri prima della somministrazione, non ? stato notato un aumento itanto rilevante nel numero di bifidobatteri contenuti nelle feci raccolte dopo la somministrazione.

Claims (2)

RIVENDICAZIONI
1. Agente di proliferazione per bifidobatteri com-^prendente ciclodestrina come ingrediente attivo.
|
2. Agente secondo la rivendicazione 1, in cui la ciclodestrina ? beta-ciclodestrina.
PP? KUREHA KABUSHIKI KAISHA
BREVETTI?*. ;/VlAo ;;?Ufficiai' ;;<?>LA/eg/4796 ;*
IT19704/82A 1981-02-18 1982-02-17 Agente di proliferazione per bifidobatteri IT1150191B (it)

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