HUT67496A

HUT67496A - Methylen-oxindole derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions compsiring them

Info

Publication number: HUT67496A
Application number: HU9300723A
Authority: HU
Inventors: Antonio Longo; Franco Buzzetti; Maristella Colombo
Original assignee: Erba Carlo Spa
Priority date: 1991-07-12
Filing date: 1992-07-10
Publication date: 1995-04-28
Also published as: AU2277792A; IL102383A0; EP0525472A2; KR930702337A; DE69232093T2; DK0552329T3; TW202444B; EP0525472A3; NZ243454A; CA2091058C; JP3188701B2; WO1993001182A1; IL102383A; PT552329E; JPH06501494A; CA2091058A1; IE922253A1; EP0552329A1; US5409949A; EP0552329B1

Description

A bejelentés napja: 1992. 07. 10.

Elsőbbsége: 1991. 07. 12. (9115160.5) Nagy-Britannia

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP92/01569

A nemzetközi közzététel száma: WO 93/01182

A találmány tárgya eljárás az (I) általános képletű, új indolszármazékok és gyógyszerészetileg elfogadható sóik, valamint e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására.

A találmány szerint az (I) általános képletű vegyületeket - a képletben bizonyos megszorításokkal

R (a) általános képletű csoport, ahol R4 hidrogénatom, illetve hidroxi-, alkoxi-, alkanoil-oxi-, karboxi-, nitro-, amino- vagy alkil-amino-csoport, R5 hidrogén- vagy halogénatom, illetve alkilcsoport, és Ró hidrogénatom vagy alkilcsoport,

R1 hidrogénatom, illetve alkil- vagy alkanoilcsoport,

R2 hidrogén- vagy halogénatom, illetve alkil-, ciano-, karboxi-, nitro-, amino- vagy alkil-amino-csoport,

R3 hidrogénatom, illetve alkil- vagy alkanoilcsoport, és n értéke 0, 1 vagy 2 és azok sóit úgy állítják elő, hogy egy (II) és egy (III) általános képletű vegyületet kondenzálnak, majd adott esetben a kapott (I) általános képletű ve-

gyületet egy másik (I) általános képletű vegyületté és/vagy sóvá alakítják, és/vagy sójából felszabadítják, és/vagy izomerekre választják szét.

\ · ' ·· ς?.

Telefon: 1· <?· K. .

Λ.; fi · *flv Ö Z 1 üh'íi Iroda

- Dalszínház u. 10.

^w,^¹⁵³-³⁶⁶⁴

KÖZZÉTÉTELI PÉLDÁNY

57.064/BE

Metilén-oxindol-származékok fc eljárás előállításukra _;

FARMITALIA CARLO ERBA S.R.L., Milánó, Olaszország

Feltalálók: BUZZETTI Franco, Monza,

LONGO Antonio, Milánó,

COLOMBO Maristella, Cesano Boscone,

Olaszország

A bejelentés napja: 1992. 07. 10.

Elsőbbsége: 1991. 07. 12. (9115160.5) Nagy-Britannia

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP92/01569

A nemzetközi közzététel száma: WO 93/01182

A találmány tárgya eljárás új 3-metilén-oxindol-származékok és gyógyszerészetileg elfogadható sóik, valamint e vegyületeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására, továbbá a hatóanyagok, illetve a gyógyszerkészítmények alkalmazására a gyógyításban.

Az új 3-metilén-oxindol-származékok az (I) általános képlettel jellemezhetők, amely képletben

R jelentése egy (a) általános képletű csoport, ahol

R4 jelenthet hidrogénatomot, valamint hidroxi-, 1-6 szénatomos alkoxi-, 2-6 szénatomos alkanoil-oxi-, karboxi- vagy nitrocso portot, illetve R7-NH- általános képletű csoportot, amely általános képletben viszont R7 jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport,

R5 jelenthet hidrogén- vagy halogénatomot, illetve 1-6 szénatomos alkilcsoportot, és

R6 jelenthet hidrogénatomot vagy 1 -6 szénatomos alkilcsoportot,

R] jelentése hidrogénatom, illetve 1-6 szénatomos alkil- vagy 2-6 szénatomos alkanoilcsoport,

R2 jelentése hidrogén- vagy halogénatom, 1-6 szénatomos alkil-, ciano-, karboxi- vagy nitrocsoport, illetve R7-NH- általános képletű csoport, ahol R7 jelentése a fenti,

R3 jelentése hidrogénatom, illetve 1-6 szénatomos alkil- vagy 2-6 szénatomos alkanoilcsoport, és n értéke 0, 1 vagy 2, azzal a megszorítással, hogy ha R2 hidrogén- vagy halogénatomot, illetve 1-6 szénatomos alkilcsoportot vagy cianocsoportot, és egy-idejűleg R3 hidrogénatomot jelent, továbbá R1 jelentése és n értéke a fent megadottak bármelyike, akkor az R4, R5 és Ró szimbólumok leg-alább egyike csak hidrogénatomtól különböző jelentésű lehet.

Az (I) általános képletben az R, Rl-O- és R2 szimbólumokkal jelölt szubsztituensek egymástól függetlenül az indolváz kondenzált benzolgyűrűjéhez vagy pirrolgyűrűjéhez egyaránt kapcsolódhatnak.

A találmány oltalmi körébe az (1) általános képletű vegyületek összes leheséges izomerjei - elsősorban a sztereoizomerekre, de kivált-képpen a Zés E-izomerekre, valamint azok keverékeire gondolunk -, azonfelül a metabolitok és metabolikus prekurzorok vagy bioprekurzorok, amelyeknek az • ·

- 3 angol nyelvű szakirodalomból átvett és a szakirodalomban elterjedt neve prodrug, egyaránt beletartoznak.

Előnyös, ha az (I) általános képletben az R szimbólumnak megfelelő szubsztituens az indolgyűrűhöz 2-es vagy 3-as helyzetben, de különösen előnyös, ha 3-as helyzetben kapcsolódik.

Ha n értéke 2, akkor az Rl-O- általános képletű csoportok lehetnek azonosak vagy különbözőek. Az Rl-O- általános képletű csoport előnyös kapcsolódási helyei a 4-, 5-, 6- vagy 7-es helyzet, de különösen az 5-ös vagy 6-os helyzet.

Az R2 szimbólumnak megfelelő szubsztituens előnyös esetben a benzol gyűrűhöz kapcsolódik, éspedig az a legkedvezőbb, ha 5-helyzetben. Természetesen tekintetbe kell venni azt is, hogy R, Rl-O- és R2 szimbólumoknak megfelelő szubsztituensek közül csak egy kapcsolódhat az indolgyűrű ugyanazon helyéhez.

Ami a másik gyűrűrendszert illeti, ott R4 előnyös kapcsolódási helye a

4-es vagy 5-ös helyzet, de kiváltképpen az 5-ös helyzet.

Ha R4 jelentése karboxi- vagy nitrocsoport, illetve R7-NH- általános képletű csoport, ahol R7 az előzőekben megadott jelentésű, akkor az az előnyös, ha R2 jelentése ezektől különbözik, és ez fordítva is igaz, vagyis ha R2 jelent karboxi- vagy nitrocsoportot, illetve egy R7-NH- általános képletű csoportot, ahol R7 jelentése a fenti, akkor azokat a vegyületeket preferáljuk, amelyek képletében R4 karboxi- vagy nitrocsoporttól, illetve R7-NH- általános képletű csoporttól eltérő jelentésű.

Az alkilcsoportok, illetve az alkanoilcsoportok egyaránt lehetnek egyenes vagy elágazó láncúak. Az 1-6 szénatomos alkilcsoportként megnevezett csoportok előnyösen legfeljebb 4 szénatomosak, mint például a metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, szek-butil- vagy terc-butil-csoport, β ·

- 4 de ezek közül is a metil- vagy etilcsoportot részesítjük megkülönböztetett figyelemben. Hasonlóképpen a 2-6 szénatomos alkanoilcsoportok közül a

2-4 szénatomosakat, de kiváltképpen az acetil-, propionil és butirilcsoportot tekintjük előnyösnek. A halogénatomok közül előnyösek a klór-, bróm- és jódatom, de mindenekelőtt a brómatom.

A találmány szerinti vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sói lehetnek savaddiciós sók, így szervetlen savakkal, például salétromsavval, sósavval, hidrogén-bromiddal, kénsavval, perklórsavval és foszforsavval, glikolsavval, tejsavval, oxálsavval, malonsavval, almasavval, maleinsavval, borkősavval, citromsavval, fahéjsavval, mandu-lasavval vagy szalicilsavval képzett sók, továbbá szervetlen fémsók, például alkálifém-, mindenekelőtt nátrium- vagy káliumsók, illetve alkáliföldfém-, elsősorban kalcium- vagy magnéziumsók, valamint szerves bázisokkal, például alkil-aminokkal képzett sók, amelyek közül különösen előnyösek a trietil-amin sói.

Amint már mondottuk az imént, a találmány oltalmi körébe beletartoznak az (I) általános képletű vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható bioprekurzorai, vagy más néven prodrug-jai is. Ez alatt azt értjük, hogy bár ezen vegyületeknek a szerkezete különbözik az (I) általános képlettel felírhatótól, embernek beadva, az élő szervezetben, azaz in vivő körülmények között, közvetlenül vagy közvetve átalakulnak egy (I) általános képletű vegyületté.

Kiemelkedő jelentőségűek azok az (I) általános képletű vegyületek a gyógyszerészetileg elfogadható sókat is beleértve - amelyek képletében R egy (a) általános képletű csoportot jelent, ahol R4 jelentése hidroxi-, amino-, nitro- vagy karboxicsoport, R5 és Ró jelentése pedig egyaránt hidrogénatom,

Rl jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatmos alkilcsoport, • · ··« ·· · • ······ · ···· ·· ·· · · ···

- 5 R2 jelentése hidrogénatom, illetve karboxi-, amino- vagy nitrocsoport, R3 jelentése hidrogénatom, és n értéke 0 vagy 1.

Különösen kiemelkedő jelentőségűek azok az (I) általános képletű vegyületek - beleértve a gyógyszerészetileg elfogadható sókat is -, amelyek képletében

R jelentése az (a) általános képletű csoport, ahol R4 hidroxi-, aminovagy karboxicsoportot, R5 és Rö pedig hidrogénatomot jelent,

R1 jelentése hidrogénatom,

R2 jelentése hidrogénatom, illetve amino- vagy karboxicsoport, és n értéke 0 vagy 1.

A találmány szerinti vegyületek köréből, a legjelentősebbek közül néhányat név szerint is felsorolunk az alábbiakban. Ezekkel kapcsolatban szükségesnek tartjuk megjegyezni, hogy a nevek egyaránt vonatkozhatnak ahol ilyen izoméria fennáll - a Z- és E-diasztereomerekre, valamint a Z-E izomerek elegyeire.

A legjelentősebb vegyületek tehát a következők:

5-hidroxi-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol;

3-[(5-karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(5-amino-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(3-indolil)-metilén]-5-karboxi-oxindol;

5-amino-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol;

5-hidroxi-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 5-hidroxi-3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

3-[(5,7-dihidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 5-amino-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(5-amino-indol-3-il)-metilén]-5-hidroxi-oxindol;

3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-5-karboxi-oxindol;

5-hidroxi-3-[(5-karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

5-amino-3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-5-karboxi-oxindol;

valamint - ha ilyen létezik - mindezek gyógyszerészetileg elfogadható sói.

A találmány szerint az (I) általános képletű vegyületeket és azok gyógyszerészetileg elfogadható sóit úgy állítjuk eló', hogy egy (II) általános képletű aldehidet, amelynek képletében Rl, R2 és R3 jelentése, valamint n értéke az előzőekben, az (I) általános képlettel kapcsolatban megadottakkal azonos, egy (III) általános képletű vegyülettel - a képletben R4, R5 és Ró a bevzetőben meghatározott jelentésűek - reagáltatunk, és kívánt esetben az így kapott (I) általános képletű vegyületet átalakítjuk egy másik (I) általános képletű vegyületté, és/vagy kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületet valamilyen gyógyszerészetileg elfogadható sóvá alakítjuk, és/vagy kívánt esetben az (I) általános képletű vegyületet a sójából felszabadítjuk, és/vagy kívánt esetben az izomerek keverékeként kapott (I) általános képletű vegyületet tiszta izomerekre választjuk szét. Megjegyezzük, hogy akárcsak az (I) általános képletű vegyületeknél, a (II) általános képletű vegyületek esetében is, az R2 szimbólumnak megfelelő, valamint az Rl-O- általános képletű csoportok, továbbá a formilcsoport egyaránt kapcsolódhatnak az indolgyűrű benzolgyűrűjéhez és pirrolgyűrűjéhez.

A (II) és (III) általános képletű vegyületek között végbemenő reakció önmagában ismert, tehát magát a reagáltatást ez esetben is a hasonló reakciók kivitelezése során szokásos körülmények között, például előnyösen valamilyen bázis, így piridin, piperidin, dietil-amin vagy alkalmas alkálifém-hidroxidok, illetve -alkoholátok jelenlétében végezhetjük.

····· t · · • ······ · ···· · · ·· ·· ···

- 7 Egy (II) és egy (III) általános képletű vegyület reagáltatása során eljárhatunk például oly módon, mint a Knoevenagel-reakció esetében, ahogy azt például G. Jones leírta [Organic Reactions 15, 204 (1967)], amikor is szerves bázisokat, például piridint, piperazint vagy dietil-amint használnak katalizátorként.

Célszerű a reagáltatást valamilyen inért, szerves oldószerben, például piridinban, etanolban, metanolban, benzolban, vagy dioxánban, mintegy 0 és 100°C közötti hőmérsékleten végezni.

Az eljárás egyik előnyös kiviteli módjának megfelelően például végezhetjük a reagáltatást melegen, etanolban, katalizátorként piperidint alkalmazva.

Valamely (I) általános képletű vegyület átalaítását egy másik (I) általános képletű vegyületté ugyancsak önmagában ismert eljárásokkal végezhetjük. Ha például egy olyan (I) általános képletű vegyületünk van, amelynek képletében egy vagy több, az Rl szimbólum jelentésének megfelelő 1-6 szénatomos alkilcsoport található, akkor ezt a vegyűletet a szintetikus szerves kémia eszköztárához tartozó, ismert éterhasítási eljárásokkal átalakíthatjuk egy olyan (I) általános képletű vegyületté, amelynek képletében egy vagy több Rl szimbólum helyén hidrogénatom áll. A fenilmetil-éterhasítása történhet például J.F.N. McOmie szerint [Tetrahedron, 24, 2289 (1986)], bór-tribromiddal. Célszerű a reagáltatás során minden egyes éterkötésre hozzávetőlegesen 1 mól bór-tribromidot, továbbá minden olyan csoportra, amelyben potenciálisan bázikus nitrogénatom vagy oxigénatom található, külön 1-1 mól bór-tribromidot számítani. Rendszerint valamilyen inért, szerves oldószerben, például metilén-dikloridban, pentánban vagy benzolban, inért atmoszférában, például nitrogéngáz alatt, a -78°C és • «· · · 4 • ······ · • 444 4 · 4 4 · 4 · · ·

- 8 szobahőmérséklet közötti hőmérséklet-tartományban hajtjuk végre a reakciót.

Az (I) általános képletű vegyületeket, amelyek képletében egy vagy több Rl-O- általános képletű csoport és/vagy R4 hidroxicsoportot jelent, acilezhetjük, aminek eredményeképpen olyan (I) általános képletű vegyietekhez juthatunk, amelyek képletében egy vagy több Rl-O- általános képletű csoportot és/vagy R4 2-6 szénatomos alkanoil-oxi—csoportot jelent. Az acilezést célszerű a megfelelő karbonsav valamilyen reaktív származékával, például savanhidriddel vagy savhalogeniddel, valamilyen bázis jelenlétében, 0 és 50°C közötti hőmérsékleten végezni. Különösen előnyösen acilezhetünk a megfelelő savanhidriddel szerves bázis, például piridin jelenlétében.

Ugyancsak általánosan ismert eljárásokat alkalmazva képezhetünk adott esetben valamely (I) általános képletű vegyületbol sót, vagy szabadíthatunk fel sójából egy (I) általános képletű vegyületet, illetve választhatjuk szét az izomer keverékeket tiszta izomerekre.

A geometriai izomereket, illetve pontosabban meghatározva a cisz- és transz-izomereket például megfelelő oldószert alkalmazva, frakcionált kristályosítással, valamint kromatográfiás eljárásokkal, például oszlopkromatográfiás vagy nagynyomású-folyadékkromatográfiás eljárással választhatjuk el.

A (II) általános képletű vegyületeket ismert eljárásokkal állíthatjuk elő egy (IV) általános képletű vegyületbol. Például, ha a megfelelő (IV) általános képletű vegyületet az ismert Vilsmeyer-Haack-eljárás szerint [lásd W.G. Jackson és munkatársai összefoglaló jellegű publikációját: J. Am. Chem. Soc. 103, 533 (1981)], N-metil-formaniliddel és foszfor-triklorid-oxiddal formilezzük, egy (II) általános képletű 3-formil-indol-származékot kapunk.

«*·

- 9 Ugyanilyen módon eljárva, a megfelelő 2-formil-indol-származékot kapjuk, ha a 3-helyzet már foglalt.

A (III) és (IV) általános képletű vegyületek vagy ismertek a szakirodalomból, azaz korábban már leírták azokat, vagy könnyen előállíthatok ismert kiindulási vegyületekből ismert eljárásokkal.

A találmány szerinti vegyületek specifikus tirozin kináz inhibitor hatást mutatnak, ennél fogva emlősöknél - az embert is beleértve - a rák, illetve más patológiás proliferativ folyamatok kezelésére, többek között az atheromás plakkok kialakulásának megakadályozására alkalmas gyógyszerkészítmények hatóanyagaiként hasznosíthatók.

Tipikus indikációs területnek tekinthetjük az előbb elmondottak értelmében a szívkoszorúereket érintő érsebészeti beavatkozások után az újraelzáródás megelőzését, illetve általánosságban a szív koszorú-erekkel kapcsolatba hozható betegségeket.

A legújabb molekuláris biológiai kutatások a szövetek daganatos burjánzását okozó sejttranszformációt a gének egy csoportjának, az úgynevezett onkogéneknek tulajdonítják, amelyek rendellenes expressziója a tumor létrejöttének az oka. Például az RNS-tumorvírusokban található egy olyan onkogén szekvencia, amelynek expressziója révén a fertőzött sejtek tumoros sejtekké alakulnak át. Az onkogének által kódolt fehérjék némelyike, például a pp60v-srs, _p70gag-yes, pl30gag-fps és _p70gag-fgr fehérjetirozin kináz aktivitást mutat, azaz katalizálja valamely fehérje szubsztrátban az adenozin-trifoszfát (ATP) gamma-foszfátjának az átvitelét a tirozinra. Normális sejtekben bizonyos növekedési faktor receptorok, például a PDGF, EGF, alfa-TGF és inzulin receptorok (a rövidítésekben GF az angol nyelvű szakirodalomból szái>mazó growth factor, azaz növekedési faktor megfelelője, az előtte álló betű vagy betűk pedig a funkciójára nézve adnak eliga··<·· • «

- 10 zítást, például PD jelentése piatelet derived, azaz vérlemezke eredetű, E jelentése epidermal, vagyis EGF jelentése epidermisz növekedési faktor) szintén mutatnak kináz aktivitást. A receptorokhoz való kötődéssel a növekedési faktor aktiválja a receptor tirozin kinázt, így egyrészt autofoszforilációs folyamat megy végbe, másrészt az enzim foszforilezi a közvetlen környezetében található fehérjemolekulák tirozinjait. Mindebből arra következtethetünk, hogy ezeknek a tirozin kináz aktivitással bíró receptoroknak, illetve azok foszforilezésének fontos szerep jut a jelátvitelben azaz a celluláris jel-transzdukcióban, továbbá, hogy a normális sejtekben a tirozin kináz aktivitás alapvető funkciója a sejtnövekedés szabályozása. Amikor az onkogén eredetű tirozin kináz túltermelés és/vagy megváltozott szubsztrátspecifikusság révén zavart okoz ebben a működésben, ez okozhatja egyben a növekedés szabályozásának a megzavarását és/vagy a sejtek tumoros transzformációját. Az itt elmondottak értelmében tehát a tirozin kináz specifikus inhibitorai hasznosak lehetnek a rák keletkezésének, a sejtburjánzásnak és a sejtdifferenciálódásnak a tanulmányozásában, azonfelül alkalmasak lehetnek a rák, valamint más, patológiás propliferativ folyamatok megelőzésére és kemoterápiás kezelésére.

Ezeknek a vegyületeknek a tirozin-specifikus fehérje kináz aktivitását az alábbi in vitro vizsgálatokkal igazoltuk.

A vizsgálathoz használt enzim az Abelson tirozin kináz p95^v_a^, amelynek előállítását és izolálását a következőképpen végezzük:

Egy liter ampicillinnel adalékolt Luria-Bertani tápoldatban HB-130 sejttenyészetet 30°C-on fermentálunk Wang és munkatársai [J. Bioi. Chem. 260, 64 (1985)], eljárását követve, majd a v-abl fehérje expressziója végett a hőmérsékletet 42°C-ig emeljük és itt tartjuk 3-4 óra hosszáig. A baktériumtenyészetet ezután jégre ráöntjük, majd centrifugálás után a sejteket cseppfolyós nitrogénnel lefagyasztjuk. Az így kapott sejt9. 99 ·9 999 « · · · 9 · · ··· • «<>···· · ·*·· ·· 99 ··Μ«·

- 11 masszát Fergusson és munkatársai szerint [J. Bioi. Chem. 260, 3652 (1985)] lizáljuk, majd a baktérium fehérjéktől lépésenként nátrium-dezoxikoláttal, nátrium-kloriddal és béta-oktil-glükopiranoziddal végzett részleges szolubilizálással megszabadulunk. Az oldható v-abl fehérjét 2 M kálium-rodanidoldattal szolubilizáljuk és százszoros térfogatú A pufferoldattal - az A pufferoldat összetétele: 50 mM 2-amino-2-(hidroxi-metil)-l,3-propándiol-hidroklorid (trisz.HCl, pH= 7,5), 1 mM etilén-diamin-tetraecetsav (EDTA), és 0,1 mM ditiotreit - szemben dializáljuk. Az oldott fehérjéket gyári készítésű Mono-Q anioncserélő oszlopon kromatográfiás eljárással választjuk szét, lineáris kálium-klorid koncentrációgrádiens mellett (0-1 M) A pufferoldattal végezve az eluálást. A v-abl aktivitást mutató frakciókat egyesítjük, glicerinnel 50 %-osra hígítjuk és kis részekre osztva -20°C-on tároljuk. Bázikus mielinfehérje foszforilezésén alapuló vizsgálati módszer

A bázikus mielinfehérje [a preparátum a kereskedelemben Myelin Basic Protein (MBP) néven kapható] szubsztráton végzett in vitro vizsgálat menete a következő:

jul, úgynevezett kináz pufferidatban - a kináz pufferoldat összetétele: 25 mM Tris-HCl, pH= 8,0, 10 mM magnézium-klorid, és 0,1 M ditiotreit - 40 ng tisztított v-abl kinázt, 1,5 uCi [^-32P] adenozin-trifoszfátot (ATP), 10 μΜ hideg ATP-t és 56/iM bázikus mielinfehérjét 22°C-on inkubálunk, aminek eredményeképpen a fehérje foszforileződik. A reakciót azonos térfogatú, kétszeres töménységű Laemmli-féle elektroforézis pufferoldat [U.K. Laemmli: Natúré (London) 230, 680 (1970)] állítjuk le. A mintákat ezután 3 percig forraljuk, majd SDS-PAGE [nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid-gélelektroforézis, 15% akrilamid] módszerrel a frakciókat szétválasztjuk. A gélt megszáritjuk, azután -70°C-on, 15-30 percen expozíciós idővel autoradiográfiás filmre radiogramot készítünk. A sávokat az autoradiogram alapján bejelöljük, a megfelelő részeket a gélből kikaparjuk, és folyadék-szcin-tillációs számlálóban meghatározzuk az egyes frakciók radioaktivitását.

Autofoszforilációs vizsgálati módszer

Az autofoszforilációs vizsgálathoz v-abl kinázból és anti-foszfotirozin antitestekből immunoprecipitációval immunkomplexet készítünk, majd ezt 50 jul kináz pufferoldatban ΙΟ/ιΜ ATP és 10/iCi [^-32pj, ATP jelenlétében szobahőmérsékleten inkubáljuk. A reakciót 15 perc elteltével forró Laemmli-féle pufferoldat hozáadásával leállítjuk, a mintákat újabb 3 percig forraljuk, majd a rakciókat SDS-PAGE (8% akrilamid) módszerrel szétválasztjuk. Szárítás után a gélről -70°C-on, 3 óráig terjedő expozíciós idővel autoradiográfiás filmre radiogramot készítünk, ennek alapján bejelöljük a sávokat, majd azokat lekaparva, a fent elmondottaknak megfelelően megmérjük az egyes frakciók radioaktivitását.

Az 1. és 2. táblázatban összehasonlító adatokat közlünk a találmány szerinti vegyületek egyik kiválasztott reprezentánsáról, valamint az azonos szerkezetű, de hidroxicsoportot nem tartalmazó analógról, amely vegyűletet a WO91/13055 számú nemzetközi szabadalmi bejelentés az ott közölt általános képlet szerint magában foglalja. Az összehasonlító adatok világosan mutatják, hogy a hidroxicsoport bevitele a molekulába szinte alig befolyásolja a hatékonyságot a belső szubsztráttal szemben, de jelentősen fokozza az inhibitor hatást az autofoszforilációs folyamat tekintetében.

1. táblázat

Bázikus mielinfehérje foszforilezésén alapuló módszer:

IC50 (uM)

5-Hidroxi-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol

3-[(3-Indolil)-metilén]-oxindol

0,4

0,6

2. táblázat

Autofoszforilációs módszer:

IC50 QiM) 5-Hidroxi-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol 0,4

3-[(3-Indolil)-metilén]-oxindol 10,0

A találmány szerinti vegyületek jelentős biológiai aktivitásuk és alacsony toxicitásuk folytán biztonságosan hasznosíthatók gyógyszerkészítmények hatóanyagaiként. Például az egéren végzett, tájékoztató akut toxicitás (LD50) meghatározása során, amely úgy történik, hogy egyszeri, növekvő dózisban adjuk az állatoknak a hatóanyagot, és a 7. napon elvégezzük a kiértékelést, a találmány szerinti vegyületek toxicitását elhanyagolhatónak találtuk.

A találmány szerinti vegyületeket különböző gyógyszerkészítmények formájában, például orálisan, tabletta, kapszula, valamint cukor- vagy filmbevonatos drazsé, azonfelül a folyékony gyógyszerformák közül például oldat vagy szuszpenzió formájában, rektálisan végbélkúpként, parenterálisan például izomba fecskendezve vagy intravénás injekció, illetve infúzió formájában, továbbá helyileg alkalmazhatjuk.

A hatónyagok dózisa függ a páciens korától, testtömegétől és általános állapotától is, továbbá az alkalmazás módjától is. Felnőtt személy részére például az orális dózis napi 1-5 alkalommal hozzávetőlegesen 10 és 150-200 mg között lehet, de természetesen az adaglást mindig úgy választjuk meg, hogy optimális terápiás eredményt érjünk el.

A találmány oltalmi körébe beletartoznak azok a gyógyszerkészítmények, amelyek hatóanyagként az (I) általános képletű vegyületek valamelyikét vagy annak valamely gyógyszerészetileg • ·

- 14 elfogadható sóját tartalmazzák gyógyszerészetileg elfogadható vivő-, higitóés egyéb segédanyagokkal együtt.

A találmány tárgyát képezi továbbá a beveztőben adott meghatározás szerinti (I) általános képletű vegyületek - beleértve a gyógyszerkészteileg elfogadható sókat is - felhasználása tirozin kináz inhibitor hatású, elsősorban rákellenes és antiproliferatív gyógyszerkészítmények gyártásához. A találmány szerinti vegyűleteket tartalmazó gyógyszerkészítményeket rendszerint önmagában ismert eljárásokkal, az alkalmazásnak leginkább megfelelő gyógyszerformában állítjuk elő.

A szilárd, orális alkalmlazásra szánt gyógyszerforma a hatóanyagon kívül tartalmazhat például hígítóanyagokat, így laktózt, dextrózt, szacharózt, cellulózt, kukoricakeményítőt vagy burgonyakeményítőt, sikosítóanyagokat, így szilicium-dioxidot, talkumot, sztearinsavat, valamint magnézium- vagy kalcium-sztearátot és/vagy polietilénglikolokat, kötőanyagokat, így keményítőféléket, gumiarábikumot, zselatint, metil-cellulózt, (karboxi-metil)-cellulózt vagy poli(vinil-pirrolidon)-t, a szétesést elősegítő szereket, így alginsavat, alginátokat vagy nátrium-keményítő-glikolátot, peztsgő adalékokat, színezőanyagokat, édesítőszereket, nedvesítőszerket, így lecitint, poliszorbátokat, lauril-szulfátokat, valamint általánosságban más, nem toxikus, gyógyászatilag inaktív, a gyógyszerkészítésben általánosan használt segédanyagokat. A gyógyszerkészítmény gyártása ismert technológiai műveletekből - ilyen például az alapanyagok összekeverése, a granulálás, a tablettázás, továbbá a cukor- vagy filmbevonat készítése - álló eljárásokkal történhet

A folyékony, diszperziós, orális alkalmazásra szánt gyógyszerformák közül elsősorban a szirupot, az emulziót és a szuszpenziót említhetjük.

A szirup vivőanyagént például szacharózt, illetve szacharózt és glicerint és/vagy mannitot és/vagy szorbitot tartalmazhat.

A szuszpenziók és emulziók jellemző vivőanyagai között megtaláljuk például a természetes eredetű mézgákat, az agart, a nátrium-alginátot, a pektint, a metil-cellulózt, a (karboxi-metil)-cellulózt vagy a polivinil-alkoholt.

Az izomba fecskendezhető, injekciós oldatok vagy szuszpenziók összetevői a hatóanyagon kívül különböző gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagok lehetnek, például steril víz, olívaolaj, etil-oleát, glikolok, így propilénglikol, továbbá kívánt esetben megfelelő mennyiségű lidokain-hidroklorid.

Az injekció vagy infúzió formájában, intravénás beadásra szánt oldat lehet például steril, vizes oldat, de előnyösen a vivőanyag steril, vizes, izotóniás nátrium-klorid-oldat.

A végbélkúp a hatóanyagon kívül ugyancsak különböző gyógyszerészetileg elfogadható vivőanyagokat tartalmazhat, ilyenek például a kakaó vaj, a politilénglikol, a poli(oxi-etilén)-szorbitán-zsírsav-észter, amely egy felületaktív adalék, vagy a lecitin.

A helyi alkalmazásra szánt gyógyszerformák közül a krémek, borogatószerek és kenőcsök a legismertebbek, amelyek előállítása úgy történhet, hogy a hatóanyagot a szokásos zsíros alapanyaggal vagy emulgeálószerekkel összekeverjük.

A találmány még további tárgya a fentieken kívül eljárás emlős fajok egyedeinél - az embert is beleértve - a rák kombinált kezelésére, ami abból áll, hogy az ilyen kezelésre szoruló egyednek

1) az (I) általános képletű vegyületek valamelyikét vagy annak valamely gyógyszerészetileg elfogadható sóját, és • ·· ·

- 16 2) valamely más tumorellenes szer megfelelő mennyiségét adjuk olyan időintervallumon belül, hogy a két szer együttesen mefelelő terápiás hatást eredményezzen.

Ennek megfelelően a találmány lényeges elemének tekintjük azokat a gyógyszerkészítményeket is, amelyek egy (I) általános képletű vegyületet - a gyógyszerészetileg elfogadható sókat is beleértve - és egy másik, tumorellenes hatóanyagot tartalmaznak olyan kombinált formában, hogy a készítmény alkalmazásával a hatóanyagokat egyidejűleg, külön-külön vagy egymást követően juttathatjuk a páciens szervezetébe.

A tumorellens hatóanyag meghatározás itt jelenthet egyetlen hatóanyagot, valamint úgynevezett koktélt, vagyis különböző, az orvosi gyakorlatban használatos hatóanyagok keverékét.

A tumorellens hatóanyagokat a találmány szerinti vegyületekkel együtt kombinált készítménnyé alakíthatjuk, de eljárhatunk úgy is, hogy a külön-külön kiszerelt hatóanyagokkal kombinált kezelést végzünk. Az ilyen kombinált kezelésre alkalmas tumorellenes hatóanyagok például a következők: doxorubicin, daunomicin, epirubicin, idarubicin, etopozid, flukrouracil, mefalán, ciklofoszfamid, bleomicin, vinblasztin és mitomicin, valamint ezek két vagy több komponensből álló keveréke.

A találmány szerinti vegyületeket, amint az a fentiekből kiderül, a rákos betegek állapotának javítását szolgáló kezelésre alkalmazhatjuk. Ez alatt mindenekelőtt olyan betegeket értünk, akik tumorellenes szerekkel, például antraciklin-glikozidokkal, így doxorubicinnel, daunomicinnel, epirubicinnel vagy idarubicinnel, valamint antiproliferatív hatóanyagokkal kezelhető betegségben szenvednek. Eszerint a találmány szerinti vegyületeket tumorellenes szerekkel, például antraciklin-glikozidokkal együtt, javulás reményében adhatjuk leukémiás betegeknek, például myeloblastos leukémia, lymphoma, szarkóma, neuroblastoma és Wilms-tumor esetében, továbbá

- 17 olyan betegeknek, akiknél a hólyag, a mell, a tüdő vagy a pajzsmirigy rosszindulatú daganatait diagnosztizálták.

Az alábbiakban a találmány lényegét példákon mutatjuk be, amelyek azonban semmilyen módon nem korlátozhatják a találmány oltalmi körét.

1. példa

5-Hidroxi-3-f(3-indolil)-metilén]-oxindoI (I) általános képletű vegyület, ahol R = (a), n = 0, R2 = 1<3 = R5 = Ró = H, R4 = 5-OH.

Bemérünk 145 mg (1 mmol) 3-indolkarbaldehidet, 149 mg (1 mmol) 5-hidroxi-oxindolt, 60 mg (0,7 mmol) piperidint és 10 ml vízmentes etanolt.A reakcióelegyet nitrogéngáz alatt felmelegítjük 60°C-ra, 3 óra hosszáig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd lehűtjük és vákuumban szárazra pároljuk. A párlási maradékot kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, 4 % etanolt tartalmazó metilén-dikloriddal eluálva az oszlopot, aminek eredméneképpen 166 mg tiszta, a címben megnevezett vegyületet kapunk, a kitermelés 60 %. Az így kapott termék 293°C-on bomlás közben olvad.

A termék kinyerését végezhetjük azonban úgy is, hogy a reakcióelegyet vákuumban betöményítjük, majd lehűtjük 0-5°C-ra, és a kivált csapadékot szűrőre visszük, jéghideg etanollal mossuk, végül vákuumban megszárítjuk. Az anyag további tisztítását etanolból történő átkristályosítással végezhetjük.

Tömegspektrum m/z : 276. Infravörös színkép (KBr, cm^_l), 3600-2500 (NH, OH), 1650 (CO), 1600, 1580, 1530, 1480 (C=C).

Ugyanilyen módon eljárva állítjuk elő a következő vegyületeket: 3-[(3-Indolil)-metilén]-5-karboxi-oxindol, 5-Amino-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol, • ♦ ····

- 18 5-Hidroxi-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol.

A vegyület tömegspektruma m/z: 282.

Infravörös színkép (KBr, cm^_l): 3600-2600 (NH, OH), 1655 (C=O), 1605, 1585, 1535 (C=C).

5-Hidroxi-3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

3-[(5,7-Dihidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

5-Amino-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

3-[(5-Amino-indol-3-il)-metilén]-5-hidroxi-oxindol,

3-[(5-Hidroxi-indol-3-il)-metilén]-5-karboxi-oxindol,

5-Hidroxi-3-[(5-karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

5-Amino-3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

3-[(7-Hidroxi-indol-3-il)-metilén]-5-karboxi-oxindol,

5-Metoxi-3-[(5-metoxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

5-Acetoxi-3-[(5-acetoxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol, 3-[(5-Karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol.

A vegyület 300°C felett bomlás közben olvad, tömegspektruma m/z: 304. Infravörös színkép (KBr, cm^_l): 3600-3000 (NH), 3000-2100 (OH), 1710 (C=O), 1640, 1620, 1600, 1550 (aromás).

3-[(5-Amino-indol-3-il)-metilén]-oxindol,

A vegyület 250°C-on bomlás közben olvad, tömegspektruma m/z: 275. Infravörös színkép (KBr, cm^_l): 3300, 2380 (NH), 1670 (C=O), 1600, 1510 (C=C).

3-[(5-Nitro-indol-3-il)-metilén]-oxindol.

A vegyület 350°C-on bomlás közben olvad, tömegspektruma m/z: 305.

Infravörös színkép (KBr, cm^_l): 3350, 3230 (NH), 1680 (C=O), 1620, 1605, 1580 (C=C), 1530, 1340 (NO2).

• · ·· • '· · · · · • · · · · · ·· ·· ··

- 19 3-[(l-Metil-indol-3-il)-metilén]-oxindol.

A vegyület 230°C-on bomlás közben olvad, tömegspektruma m/z: 274. Infravörös színkép (KBr, cm-1): 3300-2000 (NH), 1680 (C=O), 1610, 1600, 1570, 1500 (C=C).

3-[(3-Indolil)-metilén]-l-metil-oxindol.

A vegyület olvadáspontja: 274°C, tömegspektruma m/z: 274. Infravörös színkép (KBr, cm-1): 3220 (NH), 1675(C=O), 1605, 1500, 1490 (C=C).

2, példa

5-Hidroxi-3-F(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén|-oxindol (I) általános képletű vegyület, ahol

R = (a), η = 1, Rl = R2 = R3 = R5 = R6 = H, R4 = 5-OH.

Ebben a példában az éterhasítást írjuk le, a kiindulási vegyület az 5-metoxi-3-[(5-metoxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol, amelyet az 1. példában megadottak szerint állítunk elő.

310 mg (1 mmol) 5-metoxi-3-[(5-metoxi-indol-3-il)-metilén]-oxindolt feloldunk 10 ml vízmentes metilén-dikloridban, az oldatot nitrogéngáz atmoszférában lehűtjük -78°C-ra, majd keverés közben, mintegy 10 perc alatt beadagolunk 3 ml (3 mmol) 1,0 M metilén-dikloridos bór-tribromid-oldatot. A reakcióelegyet az adagolás végeztével további 1 óra hosszat -78°C-on keverjük, azután hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni, újabb 1,5 órán át 20-25°C-on keverjük, majd lehűtjük -10°C-ra, és cseppenként, mintegy 10 perc alatt 10 ml vizet adva hozzá, megbontjuk. Ezt követően etil-acetátot adunk az elegyhez, összerázzuk, majd elválasztjuk a szerves fázist és vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, végül vákuumban szárazra pároljuk. A párlási maradékot etanolból kristályosítva 198 mg, tiszta, a címben megnevezett vegyületet kapunk, a kitermelés 70%.

- 20 A termék tömegspektruma m/z: 282.

A megfelelő metil-éterből kiindulva és a fent leírtak szerint eljárva állítjuk elő az 1. példában felsorolt hidroxivegyületeket.

3. példa

5-Acetoxi-3-I(5-acetoxi-indol-3-il)-metilénl-oxindol (I) általános képletű vegyület, ahol R = (a), n = 1, Rl = acetilcsoport, R4 = 5-acetilcsoport, R2 = R3 = R5 = R6 = H.

Ebben a példában az acetilezést írjuk le, a kiindulási vegyület az 5-hidroxi-3-[(5-hidroxi-indoI-3-il)-metilén]-oxindol, amelyet az 1. és 2. példában bemutatott eljárással állíthatunk elő.

282 mg (1 mmol) 5-hidroxi-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol 0,5 ml vízmentes piridinnel készült és jéggel hűtött oldatához 306 mg (3 mmol) ecetsavanhidridet adunk, és a reakcióelegyet éjszakán át 0 és 5°C közötti hőmérsékleten tartjuk. Másnap vákuumban bepároljuk az elegyet, a párlási maradékot feloldjuk metilén-dikloridban, vízzel mossuk, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk. A visszamaradó nyersterméket kloroform és metanol elegyéből átkristályosítva, 301 mg tiszta, a címben megnevezett vegyűletet kapunk, a kitermelés 80 %.

A termék tömespektruma m/z: 376.

Infravörös színkép (KBr, cm-1): 3600-3200 (NH), 1750 (CH3COO), 1650 (CONH), 1600, 1580, 1530 (C=C).

Az itt közölt eljárást követve az 1. és 2. példában leírtak szerint előállított hidroxivegyületeket átalakíthatjuk a megfelelő 2-6 szénatomos alkanoil-oxi-származékká.

4. példa

5-Nitro-3-indolkarbaldehid (II) általános képletű vegyület, ahol n = 0, R2 = 5-NO2, R3 = H.

176 mg (1,3 mmol) N-metil-formanilid és 199 mg (1,3 mmol) foszfor-triklorid-oxid elegyét 20-25°C-on, nitrogéngáz alatt keverjük 15 percig. Ezt követően 162 mg (1 mmol) 5-nitro-indol 5 ml etilén-dikloriddal készített oldatát adjuk az elegyhez, majd visszafolyató hűtő alatt forraljuk 3 óra hosszáig. Lehűlés után jeges vízre öntjük az elegyet, a levált csapadékot kiszűrjük, és vízzel mossuk, majd kromatográfiás eljárással szilikagélen tisztítjuk, benzol és etil-acetát elegyével eluálva az oszlopot. Az így kapott tiszta, cím szerinti vegyület tömege 152 mg, a kitermelés 80 %.

A termék tömegspektruma m/z: 190.

Infravörös színkép (KBr, cm'l): 3140, 3090 (NH), 1650 (C=O), 1511, 1345 (NO2).

Ez a nitroszármazék kiindulási vegyülete azoknak az (I) általános képletű vegyületeknek, amelyek képletében R2 jelentése nitrocsoport, továbbá kiindulási vegyülete azoknak is, amelyek képletében R2 aminocsoportot jelent, ezek a származékok ugyanis az előzőek redukciójával állíthatók elő.

Azonos módon eljárva állíthatunk elő bizonyos védett köztitermékeket, így 3-(metoxi-karbonil)-3-indolkarbaldehidet és 3-metoxi-3-indolkarb-aldehidet, amelyeket a szintézis megfelelő fázisában a védőcsoporttól megszabadítva, olyan (I) általános képletű végtermékeket állíthatunk elő, amelyek képletében R2 jelentése karboxicsoport, illetve hidroxicsoport.

5. példa

0,150 g tömegű, 25 mg hatóanyagot tartalmazó tabletta előállítása

000 db tabletta elkészítéséhez az alábbi összetevők szükségesek: 5-Hidroxi-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindoI 250 g

Laktóz	800 g
Kukoricakeményítő	415 g
Talkumpor	30 g
Magnézium-sztearát	5g

Az 5-hidroxi-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindolt, a laktózt és a kukoricakeményítő felét alaposan összekeverjük, majd a keveréket áttörjük egy 0,5 mm lyukméretű szitán.

g kukoricakeményítőt 90 ml meleg vízben szuszpendálunk, és az így kapott pép segítségével a megszitált porból granulátumot készítünk. A granulátumot megszárítjuk, szétmorzsoljuk és átengedjük egy 1,4 mm lyukméretű szitán, majd hozzákeverjük a kukoricakeményítő maradékát, a talkumot és a magnézium-sztearátot, azután gondos keverés után a kapott masszát tablettákká préseljük.

6. példa

0,200 g tömegű, 20 mg hatóanyagot tartalmazó kapszula előállítása

500 darab kapszula elkészítéséhez az alábbi összetevők szükségesek:

3-[(5-Amino-indol-3-il)-metilén]-oxindol 10g

Laktóz 80g

Kukoricakeményítő 5g

Magnézium-sztearát 5g

A fenti keverékből 0,200 g-ot töltünk minden egyes kétrészes, keményzselatinból készült kapszulába.

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek - a képletben

R jelentése egy (a) általános képletű csoport, ahol

R4 jelenthet hidrogénatomot, valamint hidroxi-, 1-6 szénatomos alkoxi-, 2-6 szénatomos alkanoil-oxi-, karboxi- vagy nitrocsoportot, illetve R7-NH- általános képletű csoportot, amely általános képletben viszont R7 jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport,

R5 jelenthet hidrogén- vagy halogénatomot, illetve 1-6 szénatomos alkilcsoportot, és

R6 jelenthet hidrogénatomot vagy 1-6 szénatomos alkilcsoportot, Rl jelentése hidrogénatom, illetve 1-6 szénatomos alkil- vagy 2-6 szénatomos alkanoi lesöpört,

R2 jelentése hidrogén- vagy halogénatom, 1-6 szénatomos alkil-, ciano-, karboxi- vagy nitrocsoport, illetve R7-NH- általános képletű csoport, ahol R7 jelentése a fenti,

R3 jelentése hidrogénatom, illetve 1-6 szénatomos alkil- vagy 2-6 szénatomos alkanoilcsoport, és n értéke 0, 1 vagy 2, azzal a megszorítással, hogy

i) ha R2 hidrogén- vagy halogénatomot, illetve 1-6 szénatomos alkilcsoportot vagy cianocsoportot, és egyidejűleg R3 hidrogénatomot jelent, továbbá Rl jelentése és n értéke a fent megadottak bármelyike, akkor az R4, R5 és R6 szimbólumok legalább egyike csak hidrogénatomtól különböző' jelentésű lehet, ·«·· ii) ha az R szimbólumnak megfelelő (a) általános képletű csoport az indolgyűrűhöz 3-helyzetben kapcsolódik, n értéke nulla, továbbá R3 és Ró egyaránt hidrogénatomot vagy metilcsoportot jelentenek, akkor az R2, R4 és R5 szimbólumok legalább egyike csak hidrogénatomtól különböző jelentésű lehet, iii) ha az R szimbólumnak megfelelő (a) általános képletű csoport az indolgyűrűhöz 2-helyzetben kapcsolódik, n értéke nulla, és R2, R3, R4, valamint R5 egyaránt hidrogénatomot jelentenek, akkor Ró jelentése csak metilcsoporttól különböző lehet, és iv) ha az R szimbólumban megfelelő (a) általános képletű csoport az indolgyűrűhöz 2-helyzetben kapcsolódik, n értéke nulla, R2 az indolgyűrűhöz 3-helyzetben kapcsolódó metilcsoportot, R3 metilcsoportot, valamint R4 és R5 egyaránt hidrogénatomot jelent, akkor Ró jelentése csak hidrogénatomtól, illetve metilcsoporttól különböző lehet - és gyógyszerészetileg elfogadható sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy egy (Π) általános képletű vegyületet, amelynek képletében Rl, R2 és R3 a tárgyi részben az (I) általános képlettel kapcsolatban megadott jelentésűek, valamint n értéke ugyancsak az ott megadottakkal azonos, egy (III) általános képletű vegyülettel - a képletben R4. R5 és Ró szintén a tárgyi részben, az (I) általános képlettel kapcsolatban megadottakat jelenthetik - reagáltatunk, és kívánt esetben az így kapott (I) általános képletű vegyületet egy másik (I) általános képletű vegyületté, és/vagy kívánt esetben a kapott (I) általános képletű vegyületet valamilyen gyógyszerészetileg elfogadható sóvá alakítjuk, és/vagy kívánt esetben az (I) általános képletű vegyületet a sójából felszabadítjuk, és/vagy kívánt esetben az izomerek keverékeként kapott (I) általános képletű vegyületet tiszta izomerekre választjuk szét.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek a gyógyszerészetileg elfogadható sókat is beleértve - előállítására, amelyek képletében

R egy (a) általános képletű csoportot jelent, ahol R4 jelentése hidroxi-, amino-, nitro- vagy karboxicsoport, R5 és R6 jelentése pedig egyaránt hidrogénatom,

Rl jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport,

R2 jelentése hidrogénatom, illetve karboxi-, amino- vagy nitrocsoport,

R3 jelentése hidrogénatom, és n értéke 0 vagy 1, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket reagáltatjuk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek a gyógyszerészetileg elfogadható sókat is beleértve - előállítására, amelyek képletében

R jelentése egy (a) általános képletű csoport, ahol R4 hidroxi-, aminovagy karboxicsoportot, R5 és R6 pedig hidrogénatomot jelent,

Rl jelentése hidrogénatom,

R2 jelentése hidrogénatom, illetve amino- vagy karboxicsoport, és n értéke 0 vagy 1, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket reaegáltatjuk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás 5-hidroxi-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol; 3-[(5-karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

3-[(5-amino-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(3-indolil)-metilén]-5-karboxi-oxindol;
5-amino-3-[(3-indolil)-metilén]-oxindol;

5-hidroxi-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

5-hidroxi-3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

• · · ·· ·· • »····· ·♦·· «· ·* ··

3-[(5,7-dihidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

5-amino-3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(5-amino-indol-3-il)-metilén]-5-hidroxi-oxindol;

3-[(5-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-5-karboxi-oxindol;

5-hidroxi-3-[(5-karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 5-amino-3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

3-[(7-hidroxi-indol-3-il)-metilén]-5-karboxi-oxindol; 5-metoxi-3-[(5-metoxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

5-acetoxi-3-[(5-acetoxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(5-karboxi-indol-3-il)-metilén]-oxindol;

3-[(5-amino-indol-3-il)-metilén]-oxindol; 3-[(5-nitro-indol-3-il)-metilén]-oxindol

- ha létezik, beleértve ezen vegyületek Z- és E-diasztereomerjeit, valamint ezek keverékeit, továbbá a gyógyszerészetileg elfogadható sókat is - előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási vegyületeket reagáltatjuk.

5. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az

1. igénypont szerinti (I) általános képletű vegyületek valamelyikét vagy annak valamely gyógyszerészetileg elfogadható sóját alkalmas vivő-, hígitóés/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyagokkal nem kémiai úton összedolgozzuk.
6. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy a 3-[(l-metil-indol-3-il)-metilén]-oxindol és 3-[(3-indolil)-metilén]-l-metilox-indol hatóanyagok valamelyikét - a Z- és E-diasztereomereket, valamint a Z-E izomerek keverékeit, továbbá a gyógyszerészetileg elfogadható sókat • · · ·· ·· · • ······ · ···· ·· ·· ·· ··· is beleértve - alkalmas vivő-, hígító- és/vagy egyéb gyógyszerészeti segédanyagokkal nem kémiai úton összedolgozzuk.