HUT63858A - Process for producing new insulin complexes - Google Patents
Process for producing new insulin complexes Download PDFInfo
- Publication number
- HUT63858A HUT63858A HU922721Q HU272191Q HUT63858A HU T63858 A HUT63858 A HU T63858A HU 922721 Q HU922721 Q HU 922721Q HU 272191 Q HU272191 Q HU 272191Q HU T63858 A HUT63858 A HU T63858A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- insulin
- iii
- cobalt
- mixture
- water
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/28—Insulins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/52—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an inorganic compound, e.g. an inorganic ion that is complexed with the active ingredient
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Chairs For Special Purposes, Such As Reclining Chairs (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás fiziológiás pH jelenlétében oldható, nyújtott hatású inzulin készítményekben alkalmazható inzulin-komplexek előállítására, melyek az inzulin Co(III)-al alkotott komplexei.
Ezen inzulin komplexek diabetes mellitus kezelésére alkalmas gyógyszerészeti készítmények előállítására szolgálnak .
Sok diabetikus beteget kezelnek napi többszöri inzulin beadásával a következő módszerrel: napi egy vagy két adag nyújtott hatású inzulin az alapszükséglet kielégítésére, melyet az étkezéshez kapcsolódó fokozott igény fedezésére rövid hatású inzulin bólusokkal egészítenek ki.
A nyújtott hatású inzulin készítmények a szakmai körökben jól ismertek. A legtöbb nyújtott hatású inzulin készítmény az inzulin kristályok, vagy amorf inzulin injektálható vizes oldatából áll. Ezekben a készítményekben az alkalmazott inzulin komponens jellemző módon protamin• · · « A······ • · ··«* ··« · ·
-3inzulin, cink-inzulin, vagy protamin-cink-inzulin.
Az inzulin készítmények alkalmazásának hátrányai is vannak. így például a pontos adagolás céljából az inzulin részecskéket, mielőtt a meghatározott mennyiséget kivennénk az üvegből, vagy eltávolítanánk a patronból, enyhe rázással homogénre kell szuszpendálni. Az inzulin szuszpenziók tárolása során a csomók képződése, és a koaguláció elkerülése céljából a hőmérséklet értékét szűkebb határok között kell tartani, mint az inzulin oldatokat.
Míg korábban az volt az elterjedt nézet, hogy a protaminok nem immunogének, napjainkra kiderült, hogy a protaminok az emberre nézve immunogének lehetnek, és gyógyászati célra történő felhasználásuk antitestek képződéséhez vezethet [Sámuel, T. és társai, Studies on the immunogenicity of protamines in humans and experimental animals by means of a micro-complement fixation test. Clin. Exp. Immunoi. 33 (19788) 252-260].
Azt is megállapították, hogy maga a protamin-inzulin komplex is immunogén [Kurtz, Ab B. és társai, Circulating IgG antibody to protamine in patients treated with protamine-insulins. Diabetologica 25 (1983) 322-324], így egyes betegeknél a protaminokat tartalmazó nyújtott hatású inzulin alkalmazása elkerülendő.
A nyújtott hatású inzulin másik típusát azok az oldatok « «
-4alkotják, melyek pH értéke a fiziológiás pH érték alatt van, melyekből az inzulin az oldat injektálása során bekövetkező pH növekedés következtében kicsapódik.
Az ilyen oldatok hátránya az, hogy a szövetekben az injektálás hatására képződő csapadék méreteloszlása, és így a gyógykezelés időzítése előre meg nem határozható módon az injektálás helyének véráramától, és egyéb paraméterektől függ.
További hátrány az, hogy a szilárd inzulin részecskék helyi ingerlő anyagként (local irritant) jelentkezhetnek, melyek az injektálás helyén a szövetekben inflammációt okoznak.
Az inzulin készítményekkel viszonylag nagy dózisban történő elsődleges kezelés hátrányos körülmények között hipoglikémiához vezethet, így például amikor az injekció helyén az abszorpció a vártnál sokkal gyorsabb. A hipoglikémia hirtelen következik be, a hipoglikémiás betegek azonnali kezelésre szorulnak, és amennyiben a kezelést nem kapják meg azonnal, ez végzetes lehet.
Ennek megfelelően komoly igény van az elnyújtott hatású injektálható inzulin készítmények iránt, melyek oldat formájában alkalmazhatók, az injektálás után is oldatban maradnak, minimális izgató hatással (inflammatory) és immunogenicitással rendelkeznek, valamint a hipoglikémiát okozó hajlamuk mértéke is csökkent.
A jelen találmány alapja az a meglepő tény, hogy - a Stock nomenklatúra szerint - a +3 oxidált állapotú kobalt, melyet Co(III)-ként jelölünk, egyes inzulin komplexei in vivő elnyújtott inzulin hatással rendelkeznek. A komplexek fiziológiás pH mellett oldhatóak. így az említett oldatok injektálása nem eredményezi a szövetekben az injektálás helyén izgató hatású anyagok keletkezését. Amennyiben a találmány szerinti komplex olyan dózisával, mely normális körülmények között hipoglikémiához vezetett volna, nyulakat kezeltünk, nem tapasztaltuk a hipoglikémia jelét.
A találmány összefüggéseiben az inzulin kifejezés többes száma, vagy általános értelme mind a természetben előforduló inzulinokat, mind az inzulin analógokat felöleli, a borjú és sertés inzulin kivételével.
A találmány szerint előállított inzulin-származékok az (I) általános képletű inzulin komplexek (Ins)6(Co/III/)2(L)m(M)n (I) ahol
Ins a sertés- és borjúinzulintól eltérő természetes inzulin vagy humán szempontból aktív inzulin-analóg,
L nitrogéntartalmú ligandum, mely a Co(lll)-iont nitrogénatomon keresztül köti meg,
M nitrogénatom-mentes ligandum, előnyösen vízmolekula, vagy anion, mely a Co(III)-iont megköti, azzal a feltétellel, hogy ha n értéke 2 vagy annál nagyobb, az M csoportok egymástól eltérőek is lehetnek, n értéke 0 vagy 1 és 6 közötti szám, és m értéke 6-n, ha L egy koordinációs helyet tartalmaz, vagy (6-n)/2, ha L két koordinációs helyet tartalmaz.
A találmány szerinti (I) általános képletű inzulin komplexek előnyben részesített csoportjánál az m értéke 0. Egy másik, előnyben részesített csoportnál az M vizmolekula.
A találmány szerinti (I) általános képletű inzulin komplexekben Ins előnyösen humán inzulin.
A találmány szerinti (I) általános képletnek megfelelő inzulin komplexeket tartalmazó készítményekben azok koncentrációja előnyösen 10-2000 IU között van, előnyösebb esetben 40-200 IU/ml.
A ligandumok változó affinitással koordinálódnak a
Co(III)-hoz, és ezt a változékonyságot átalakított kibocsátási profilú készítmények előállítására alkalmazhatjuk.
Az (I) általános képletben L például ammónia, TRIS, metil-amin, etil-amin, propil-amin, etilén-diamin, 1,2-diamino-propán, 1,3-diamino-propán, imidazol vagy hisztidin lehet.
Az (I) általános képletben M például vizmolekula, OH--, Cl--, Br--, I--, so42--, HSO4--, PO43--, HPO42-- vagy H2PO42--, előnyös esetben H20, OH-- vagy Cl-- csoport.
A találmány szerinti készítmények a diabetes mellitus kezelésére alkalmasak.
A találmány szerinti komplexeket úgy állítjuk elő, hogy
a) valamely fémmentes inzulint vagy inzulin-analógot vizes oldószerben oldunk,
b) az oldathoz feleslegben levő vízoldható kobalt(II)-sót adunk,
c) kívánt esetben az elegyhez az inzulin-kobalt(III)-kötést koordináló ligandumot adunk, iv) a kobalt(II)-ionokat kobalt(III)-ionná oxidáljuk,
v) az oxidálószer-felesleget eltávolítjuk, vi) kívánt esetben, vagy ha a c) lépést nem végeztük el, az elegyhez az inzulin-kobalt(III)-kötést koordináló ligandumot adunk, és vii) a terméket ismert módon tisztítjuk.
*«*· · ·«» ·« ·· • >r * 4 · · * « · « ♦ ···« • « · ♦ < · * · | .A Tai.&T.MiNV Pfi-SZLETES ISMERTETÉSE, ÉS A KIVITELEZED LEOJOBB--MÓDSZERE—|
A jobb tulajdonságokkal rendelkező inzulinra, és inzulin készítményekre való törekvés az inzulin felfedezése óta cél, és a hatásos új inzulinok ellenőrzését in vivő modelleken ellenőrizzük.
Egyértelmű követelménynek tűnik, hogy a drognak aktivitása kifejtéséhez receptorához kell kötődnie. így egy alapvető ellenőrzési modell szerint a hatásos új inzulinoknak az inzulin receptorhoz kötődését in vitro tanulmányozzuk. Eddig úgy találtuk, hogy a kutyáknál, tengerimalacoknál, és humán esetekben jó inzulin aktivitással rendelkező hatásos új inzulinok még in vitro körülmények között is jó receptor kötést mutatnak.
Az inzulin aktivitás ellenőrzésére alkalmas másik in vitro modell a széles körben alkalmazott szabad zsírsejt bioassay (free fát bioassay) [Moody, A. J. és társai, A Simple Free Fát Bioassay fór Insulin. Horm. Metab. Rés. 6 (1974) 12-16]. Ebben a mérési eljárásban az inzulin aktivitás mérés alapjául a vizsgálandó vegyületek azon képességét vesszük, mellyel a glükóz inkorporációt közvetítik az izolált patkány zsírsejtek lipidjeihez.
··«· 4 ·« ·>« ·· • · · · 9 f · · « * · t » ···
9f9 9 9t99 ·* ···· .»«· «« ··
-9Ezzel a modell kísérlettel azt mutathatjuk be, hogy a kutyáknál, tengerimalacoknál, és humán esetekben jó inzulin aktivitást csak azoktól a vegyületektől várhatunk, melyek a vizsgálat során jól szerepelnek, azaz a glükóz lipidbe történő inkorporációjának hatásos közvetítői.
A szarvasmarha inzulin Co(III) komplexének - mely a (II) általános képlettel rendelkezik - az előállítását, (Ins)6(Co(III)2 (ii) ahol Ins egy szarvasmarha inzulin, már ismertették [Storm,
M.C. és társai, The Glu(B13) Carboxylates of the Insulin o _i_ 2 +
Hexamer Form a Cage fór Cd and Ca Ions. Biochemistry 24 (1985) 1749-1756]. A komplex előállítása során először fémmentes szarvasmarha inzulinnal Co(II) komplexet hoztak létre, majd a képződött terméket hidrogén-peroxiddal oxidálták. A végtermék vízoldható, rózsaszínű elegy volt. A komplex inzulin aktivitásáról eddig még nem számoltak be.
A receptor kötési modellben vizsgálva úgy találtuk, hogy a (II) általános képlettel rendelkező komplex nem kapcsolódott az inzulin receptorhoz.
Hasonlóképpen, a szabad zsírsejt bioassay (free fát bioassay) során vizsgálva kiderült, hogy a (II) általános képlettel rendelkező komplex nem tartalmaz mérhető inzulin aktivitást.
·*
-10Ugyanakkor meglepő módon az derült ki, hogy amennyiben a (II) általános képlettel rendelkező komplex készítményét tengerimalacokba vagy nyulakba injekciózva in vivő vizsgáljuk, az 50-100 százalékos inzulin aktivitást fejt ki, nyújtott inzulin profillal.
Az állat kísérletek azt mutatják, hogy az
Ιηβθ(Co(III))2 magas dózis szintjei - összehasonlítva az általános inzulin készítményekkel - nem mutattak életveszélyes hlpoglikémiát. így a találmány szerinti készítmények alkalmazásával a diabetes sokkal biztonságosabb kezelése vált lehetővé. A találmány szerinti készítmények oldatai jóval reprodukálhatóbb abszorpciót mutattak, mint az inzulin kristályokat, vagy amorf inzulint tartalmazó készítmények.
A találmány szerinti injektálható inzulin készítményeket a gyógyszeripar hagyományos eljárásai szerint állíthatjuk elő, úgy, hogy a hatóanyagot megfelelő módon feloldjuk, és a kívánt végtermék eléréséig elegyítjük.
így az egyik eljárásnak megfelelően az (I) általános képletű inzulin komplexet az előállítandó készítmény végső térfogatánál valamivel kisebb mennyiségű vízben feloldjuk. Ezután izotóniás anyagot, tartósítószert, és esetleg egy puffért, egy savat, vagy egy bázist adunk az elegyhez, és a térfogatot vízzel a hatóanyag kívánt koncentrációjára
-11« · 9 *· ··· • * · · 9 · ♦· ·· ···· 9999 *999 állítjuk be.
A tartósítószer például fenol, krezol, metll-p-hidroxi-benzoát, vagy benzll-alkohol lehet.
Megfelelő puffer a nátrium-acetát, és a nátriumfoszfát .
Előnyös esetben a kiegészítő anyagok egyike sem erős redukálószer.
A találmány szerinti inzulin készítményeket a diabetes kezelésére alkalmazhatjuk. Javasolt a találmány szerinti inzulin készítmények dózisát az orvosnak az ismert inzulin készítményekéhez hasonlóan meghatározni.
A fenti ismertető, és az alábbi példák és igénypontok jellemvonásai mind külön-külön, mind ezek bármely kombinációjában a találmány különböző formái megvalósítását teszik lehetővé.
Az alábbi példák nem korlátozzák, csupán szemléltetik a jelen találmány kivitelezési módjait.
«·*« • · · · · ·«· ······«» ·» ···· ··«· ·· ··
1. példa
Vízzel koordinált (Inh)(Co(III))2 előállítása ml fémmentes humán inzulinhoz (Inh) (100 mg/ml) 3 ml 0.01 M kobalt-kloridot adtunk. A pH értékét 0.1 N nátriumhidroxiddal 7.5-re állítottuk be, és az elegyet 10 percig állni hagytuk. A színtelen elegyhez 30 % hidrogén-peroxidot (70 μΐ) adtunk, mely így rózsaszínné vált. Az elegyet egy órán keresztül kevertük, mialatt a nem reagált inzulint p
Sephadex G 100 alkalmazásával méret szerinti kromatográfiával (size chromatography) eltávolítottuk.
Puffer: 0.02 M Tris + 0.001 M EDTA. A (Inh)θ(Co(III))2~t tartalmazó frakciókat pooloztuk, dializáltuk, és ultraszűréssel betöményítettük. Végül az ultraszűrt terméket liofileztük.
2, példa
Vízzel koordinált (Inh)θ(Co (III))2 előállítása mg fémmentes humán inzulin (9.5 z/mol) 5 ml vízzel készített elegyéhez 60 μΐ 0.053 M kobalt-perklorátot és 50 • ·« ·« ·· • · · · ·4· • * · · ·· ···· ·· ··
-13μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk. A pH értékét 0.1 N nátrium-hidroxiddal 8.0-ra állítottuk be, és az elegyet 25°C-on 3 órát állni hagytuk. A reakciót gélszűréssel, p
Sephadex G-25 alkalmazásával (eluens: víz) állítottuk le, mialatt a nem reagált inzulint ioncserélő kromatográfiával, p
Q-Sepharose Fást Flow alkalmazásával eltávolítottuk.
Gradiens elúciós rendszert alkalmaztunk (A puffer: 20 mM HEPES, pH 8.0, és B puffer: 20 mM HEPES, pH 8.0 + 1 M nátrium-perklorát). A nem reagált inzulint körülbelül 15 % B pufferrel eluáltuk, míg a terméket körülbelül 30 % B pufferrel eluáltuk. Az (Inh)θ(Co(III))2~t tartalmazó p
frakciókat pooloztuk, Sephadex G-25 alkalmazásával (eluens: víz) sómentesítettük, és ultraszűréssel betöményítettük.
3. példa
Ammóniával koordinált (Inh)θ(Co(III))2 előállítása mg fémmentes humán inzulint 5 ml 2.5 %-os ammóniában feloldottunk (a pH értéket perklórsavval 8.0-ra állítottuk be), majd 60 μΐ 0.053 M kobalt-perklorátot és 50 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk hozzá. Az elegyet 25°C-on 16 órát p állni hagytuk. A reakciót gélszüréssel, Sephadex G-25 alkalmazásával (eluens: víz) állítottuk le, és a nem reagált inzulint a 2. példa eljárása szerint távolítottuk el.
4, példa
TRIS-szel koordinált (Inh) g (Co (III)) 2 előállítása mg fémmentes humán inzulint 5 ml 50 mM-os TRIS-ben feloldottunk (a pH értéket perklórsavval 8.0-ra állítottuk be), majd 60 μΐ 0.053 M kobalt-perklorátot és 50 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk hozzá. Az eljárás további lépéseit a 3. példa eljárása szerint hajtottuk végre.
5, Példa
Imidazollal koordinált (Inh)θ(Co (III))2 előállítása mg fémmentes humán inzulint 5 ml vízben feloldottunk, majd 60 μΐ 0.053 M kobalt-perklorátot, 14 mg (0.2 mmol) imidazolt, és 50 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk hozzá. Az eljárás további lépéseit a 3. példa eljárása szerint hajtottuk végre.
6, példa
Hisztidinnel koordinált (Inh)(Co(III))2 előállítása mg fémmentes humán inzulint 5 ml vízben feloldottunk, majd 60 μΐ 0.053 M kobalt-perklorátot, és 50 χζΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk hozzá. A pH értékét 0.1 N nátrium-hidroxiddal 8-ra állítottuk be, és az elegyet 25°C-on 3 órát állni hagytuk. A hidrogén-peroxidot, és a kobalt-perklorát felesleget a reakcióelegyből gélszűréssel, p
Sephadex G-25 alkalmazásával (eluens: víz) távolítottuk el. Az így kapott, (Inh)θ (Co(III))2~t tartalmazó elegyhez ezután 80 mg hisztidlnt adtunk (0.52 mmol), pH értékét nátriumhidroxiddal 8.0-ra állítottuk be, és az elegyet 25°C-on 24 órát kevertük. A nem reagált inzulint, és a hisztidin felesleget ioncserélő kromatográfiával, a 2. példa eljárása szerint távolítottuk el.
7, példa
Etilén-diaminnal koordinált (Inh) (Co (III) ) 2 előállítása mg fémmentes humán inzulint 5 ml vízben feloldottunk, majd 60 μ! 0.053 M kobalt-perklorátot, és 50 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk hozzá. A pH értékét 0.1 N nátrium-hidroxiddal 8.0-ra állítottuk be, és az elegyet 25°C-on 3 órát állni hagytuk. A hidrogén-peroxidot, és a kobalt-perklorát felesleget a reakcióelegyből gélszüréssel,
-16ρ
Sephadex G-25 alkalmazásával (eluens: víz) távolítottuk el. Az így kapott, (Inh)θ(Co(III))2 -t tartalmazó elegyhez ezután 40 μ! etilén-diamint adtunk, pH értékét perklórsavval 8.0-ra állítottuk be, és az elegyet 25°C-on 24 órát állni hagytuk.
A nem reagált inzulint, és a etilén-diamin felesleget ioncserélő kromatográfiával, a 2. példa eljárása szerint távolítottuk el.
8. példa
Klorid-ionokkal koordinált (Inh)(Co (III))2 előállítása mg fémmentes humán inzulint 5 ml 1 M nátriumkloridban feloldottunk, A pH értékét 0.1 N nátriumhidroxiddal 8.0-ra állítottuk be, majd 60 μΐ 0.053 M kobalt-perklorátot és 50 μΐ 30 %-os hidrogén-peroxidot adtunk hozzá. Az eljárás további lépéseit a 3. példa eljárása szerint hajtottuk végre.
9. példa
Injektálható oldat előállítása
Az (I) általános képletű anyag 10.000 IU-nak megfelelő
-17mennyiségét 80 ml steril desztillált vízben feloldottuk. 0.9 ml nátrium-kloridot, és tetszés szerinti tartósítószert adtunk hozzá, és a pH értékét 7.4-re állítottuk. Végül 100 ml végső térfogat eléréséhez szükséges mennylséglű steril desztillált vizet adtunk hozzá. A kapott elegy 100 IU/ml inzulint tartalmazott.
A termékek jellemzése
A 2.-8. példában kapott termékeket UV és CD spektrumuk, valamint nagy teljesítményű méret szerinti kizárásos kromatográfiás rendszerben (high performance size exclusion chromatographic system, HPSEC) mutatott retenciós viselkedésük alapján jellemezhetjük.
Az eredményeket az alábbi táblázatokban foglaltuk össze.
1. táblázat
A 2.-8. példában kapott termékek HPSEC retenciós ideje (Oszlop: Protein Pák (125 250 x 10 mm). Eluens: 2.5 M ecetsav, 4 mM L-arginin, 4 % acetonitril. Folyadékráta: 1.0 ml/perc. Detektálási UV abszorpció 254 nm).
Vegyület
Retenciós idő (perc)
Humán inzulin (monomer)9.26
Co(II) inzulin9.25
Humán inzulin (kovalens dimer)8.31
2. példa7.37
3. példa7.60
4. példa7.49
5. példa7.38
6. példa7.41
7. példa7.39
8. példa7.43
2, táblázat
A 2.-8. példában kapott termékek megfelelőnek becsült moláris extinkciós koeffincienssel (E) rendelkező UV abszorpciós maximumai, és a megfelelőnek becsült delta epszilon (dE) értékkel rendelkező CD abszorpciós sávok. Az E, és dE értékek a kobalt koncentrációra vonatkoznak (a kalkuláció feltétele 2.0 Co(III) per hexamer inzulin), az —1 — 1 értékeket M cm -ben adtuk meg.
| Vegyület | UV max | CDmin | CDmaxl | CD , maxi |
| nm dE | nm dE | nm dE | nm dE |
| 2. | példa | 522 | 155 | 442 | 0.0465 | 529 | 0.575 | sh581 | 0.43 |
| 3. | példa | 508 | 260 | 447 | 0.0401 | 530 | 0.528 | 583 | 0.43 |
| 4 . | példa | 507 | 244 | 443 | 0.0315 | 529 | 0.534 | Sh581 | 0.40 |
| 5. | példa | 523 | 165 | 485 | -0.0295 | 551 | 0.418 | nincs | |
| 6. | példa | 525 | 182 | 447 | 0.0560 | 529 | 0.638 | Sh585 | 0.38 |
| 7 . | példa | 511 | 306 | 444 | 0.0545 | 527 | 0.667 | Sh585 | 0.38 |
| 8. | példa | 520 | 181 | 448 | 0.0756 | 531 | 0.504 | 584 | 0.43 |
Az sh a CD spektrum vállaira (shoulder) vonatkozik.
-20A Co(III)-INZULIN IN VIVŐ VIZSGÁLATA
Az 1. példa eljárása szerint előállított Co(III)inzulint szubkután úton, 100 IU/ml készítmény formájában, különböző dózisokban nyulakba injekcióztuk. Az injekciózás után 7 órás intervallumokban ellenőriztük a vércukor szintet, és a kapott eredményeket olyan nyulaknál kapott n értékekkel hasonlítottuk össze, melyeket Actrapid humán inzulinnal kezelt nyulaknál kasptunk. Minden dózis színt esetén 6 nyulat vizsgáltunk. Az eredményeket a 3. táblázatban foglaltuk össze.
3. táblázat
Az 1. példa eljárása szerint előállított Co(III)inzulin hatása a vércukor szintre, különböző dózis szintek szubkután (s.c.) úton nyulakba történő injekciózása után. Az adatok a 6 nyúl esetén kapott eredmények átlagai.
| Vércukor színt | (%-OS 1 | színt a 0 | órában) | |||
| Idő (óra) | 1 | 2 | 4 | 6 | 7 | |
| Készítmény | Dózis | |||||
| ActrapidR | 2 IU | 53.0 | 52.9 | 90.9 | 94.6 | 98.9 |
| Co(III)-inzulin | 4 IU | 68.7 | 57.5 | 63.8 | 76.1 | 81.2 |
| Co(III)-inzulin | 6 IU | 60.7 | 57.8 | 58.1 | 57.6 | 68.6 |
| Co (III)-inzulin | 8 IU | 63.6 | 53.0 | 52.5 | 53.5 | 64.3 |
| Co (III)-inzulin | 10 IU | 62.5 | 53.6 | 51.7 | 48.9 | 55.6 |
A kísérletet minden nyúl túlélte, és a találmány szerinti készítménynek még a legnagyobb dózisai sem mutatták a p
hipoglikémia jelét. 100 IU Actrapid minden bizonnyal hipoglikémiát okozott volna a nyulakban, és a 8 IU, illetve a 6 IU dózis is hasonló hatást mutatott volna.
Claims (2)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás (Ins)6(Co/III/)2(L)m(M)n (I) általános képletű inzulin-komplexek előállítására, aholIns a sertés- és borjúinzulintól eltérő természetes inzulin vagy humán szempontból aktív inzulin-analóg,L nitrogéntartalmú ligandum, mely a Co(III)-iont nitrogénatomon keresztül köti meg,M nitrogénatom-mentes ligandum, előnyösen vízmolekula, vagy anion, mely a Co(III)-iont megköti, azzal a feltétellel, hogy ha n értéke 2 vagy annál nagyobb, az M csoportok egymástól eltérőek is lehetnek, n értéke 0 vagy 1 és 6 közötti szám, és m értéke 6-n, ha L egy koordinációs helyet tartalmaz, vagy (6-n)/2, ha L két koordinációs helyet tartalmaz, azzal jellemezve, hogya) valamely fémmentes inzulint vagy inzulin-analógot vizes oldószerben oldunk,b) az oldathoz feleslegben levő vízoldható kobalt(II)-sót adunk,c) kívánt esetben az elegyhez az inzulin-kobalt(III)-kötést koordináló ligandumot adunk, iv) a kobalt(II)-ionokat kobalt(III)-ionná oxidáljuk,v) az oxidálószer-felesleget eltávolítjuk, vi) kívánt esetben, vagy ha a c) lépést nem végeztük el, az elegyhez az inzulin-kobalt(III)-kötést koordináló ligandumot adunk, és vii) a terméket ismert módon tisztítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy az i) lépésben inzulinként humán inzulint alkalmazunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK045590A DK45590D0 (hu) | 1990-02-21 | 1990-02-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9202721D0 HU9202721D0 (en) | 1992-12-28 |
| HUT63858A true HUT63858A (en) | 1993-10-28 |
Family
ID=8093754
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU922721Q HUT63858A (en) | 1990-02-21 | 1991-02-21 | Process for producing new insulin complexes |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0516704B1 (hu) |
| JP (1) | JPH05503940A (hu) |
| AU (1) | AU641991B2 (hu) |
| CA (1) | CA2075982A1 (hu) |
| DE (1) | DE69100626D1 (hu) |
| DK (1) | DK45590D0 (hu) |
| HU (1) | HUT63858A (hu) |
| IE (1) | IE910579A1 (hu) |
| NZ (1) | NZ237176A (hu) |
| PT (1) | PT96841A (hu) |
| WO (1) | WO1991012817A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA911279B (hu) |
Families Citing this family (23)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9316895D0 (en) * | 1993-08-13 | 1993-09-29 | Guy S And St Thomas Hospitals | Hepatoselective insulin analogues |
| US6342225B1 (en) | 1993-08-13 | 2002-01-29 | Deutshces Wollforschungsinstitut | Pharmaceutical active conjugates |
| US6869930B1 (en) | 1993-09-17 | 2005-03-22 | Novo Nordisk A/S | Acylated insulin |
| US6011007A (en) * | 1993-09-17 | 2000-01-04 | Novo Nordisk A/S | Acylated insulin |
| US6251856B1 (en) | 1995-03-17 | 2001-06-26 | Novo Nordisk A/S | Insulin derivatives |
| US6451762B1 (en) | 1997-10-24 | 2002-09-17 | Novo Nordisk A/S | Aggregates of human insulin derivatives |
| EP2264065B1 (en) | 2003-08-05 | 2017-03-08 | Novo Nordisk A/S | Novel insulin derivatives |
| DK2275439T3 (da) | 2003-08-05 | 2014-05-12 | Novo Nordisk As | Hidtil ukendte insulinderivater |
| US8067362B2 (en) | 2005-02-02 | 2011-11-29 | Novo Nordisk As | Insulin derivatives |
| CN101389650B (zh) | 2005-12-28 | 2012-10-10 | 诺沃-诺迪斯克有限公司 | 包含酰化胰岛素和锌的组合物以及制备所述组合物的方法 |
| ES2542146T3 (es) | 2006-07-31 | 2015-07-31 | Novo Nordisk A/S | Insulinas extendidas PEGiladas. |
| WO2008034881A1 (en) | 2006-09-22 | 2008-03-27 | Novo Nordisk A/S | Protease resistant insulin analogues |
| US9387176B2 (en) | 2007-04-30 | 2016-07-12 | Novo Nordisk A/S | Method for drying a protein composition, a dried protein composition and a pharmaceutical composition comprising the dried protein |
| WO2008152106A1 (en) | 2007-06-13 | 2008-12-18 | Novo Nordisk A/S | Pharmaceutical formulation comprising an insulin derivative |
| WO2009112583A2 (en) | 2008-03-14 | 2009-09-17 | Novo Nordisk A/S | Protease-stabilized insulin analogues |
| JP5749155B2 (ja) | 2008-03-18 | 2015-07-15 | ノボ・ノルデイスク・エー／エス | プロテアーゼ安定化アシル化インスリンアナログ |
| ES2607003T3 (es) | 2008-10-30 | 2017-03-28 | Novo Nordisk A/S | Tratamiento de diabetes mellitus utilizando inyecciones de insulina con una frecuencia de inyección inferior a la diaria |
| BR112013010345A2 (pt) | 2010-10-27 | 2017-07-25 | Novo Nordisk As | tratamento de diabetes melitus usando as injeções de insulina administradas com intervalos de variação da injeção |
| MX2014012096A (es) | 2012-04-11 | 2014-11-21 | Novo Nordisk As | Formulaciones de insulina. |
| EP2991672A1 (en) | 2013-04-30 | 2016-03-09 | Novo Nordisk A/S | Novel administration regime |
| US9896496B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-02-20 | Novo Nordisk A/S | Derivative of an insulin analogue |
| ES2886837T3 (es) | 2016-12-16 | 2021-12-21 | Novo Nordisk As | Composiciones farmacéuticas que contienen insulina |
| US10335464B1 (en) | 2018-06-26 | 2019-07-02 | Novo Nordisk A/S | Device for titrating basal insulin |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE971500C (de) * | 1950-11-22 | 1959-02-05 | Organon Nv | Verfahren zur Herstellung von Insulin-Suspensionen mit verlaengerter Wirkung |
| DE1107374B (de) * | 1958-01-31 | 1961-05-25 | Organon Nv | Verfahren zur Herstellung eines Insulin-Praeparates |
-
1990
- 1990-02-21 DK DK045590A patent/DK45590D0/da not_active Application Discontinuation
-
1991
- 1991-02-20 IE IE057991A patent/IE910579A1/en unknown
- 1991-02-20 NZ NZ237176A patent/NZ237176A/en unknown
- 1991-02-21 DE DE91904980T patent/DE69100626D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-02-21 JP JP3504590A patent/JPH05503940A/ja active Pending
- 1991-02-21 PT PT96841A patent/PT96841A/pt not_active Application Discontinuation
- 1991-02-21 WO PCT/DK1991/000052 patent/WO1991012817A1/en active IP Right Grant
- 1991-02-21 CA CA002075982A patent/CA2075982A1/en not_active Abandoned
- 1991-02-21 EP EP91904980A patent/EP0516704B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-02-21 AU AU73378/91A patent/AU641991B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-02-21 ZA ZA911279A patent/ZA911279B/xx unknown
- 1991-02-21 HU HU922721Q patent/HUT63858A/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO1991012817A1 (en) | 1991-09-05 |
| NZ237176A (en) | 1991-12-23 |
| AU641991B2 (en) | 1993-10-07 |
| DK45590D0 (hu) | 1990-02-21 |
| JPH05503940A (ja) | 1993-06-24 |
| DE69100626D1 (de) | 1993-12-16 |
| PT96841A (pt) | 1991-11-29 |
| CA2075982A1 (en) | 1991-08-22 |
| ZA911279B (en) | 1991-10-30 |
| HU9202721D0 (en) | 1992-12-28 |
| EP0516704B1 (en) | 1993-11-10 |
| IE910579A1 (en) | 1991-08-28 |
| EP0516704A1 (en) | 1992-12-09 |
| AU7337891A (en) | 1991-09-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT63858A (en) | Process for producing new insulin complexes | |
| US4877778A (en) | Method of enhancing lipophile transport using cyclodextrin derivatives | |
| DE69429169T2 (de) | Pharmazeutisches präparat, das heparin, heparinfragmente oder -derivate in kombination mit glycerinestern enthält | |
| DE3880346T2 (de) | Insulinderivate. | |
| RU2152399C2 (ru) | Комплекс, содержащий аналог человеческого инсулина, и фармацевтическая композиция на его основе | |
| DE69815877T2 (de) | Aggregate von menschlichen insulinderivaten | |
| KR890004687B1 (ko) | 생물학적 활성 서방출성 조성물 | |
| EP1274459A2 (en) | Sustained release formulations comprising growth hormone | |
| HUT67853A (en) | Insulin formulation | |
| AU2001259111A1 (en) | Sustained release formulations comprising growth hormone | |
| EP3821905A1 (en) | Insulin containing pharmaceutical compositions | |
| CA1335924C (en) | Mixed crystals of insulin and insulin derivatives, a process for the preparation of these mixed crystals, pharmaceutical agents containing these mixed crystals, and the use thereof for the treatment of diabetes mellitus | |
| CS114290A3 (en) | Specifically glycosylated insulin derivatives | |
| Pedersen et al. | Protein synthesis in liver following infusion of the catabolic hormones corticosterone, epinephrine, and glucagon in rats | |
| EP1620072B1 (en) | Zinc-containing sustained-release composition, its preparation, and method for producing the same | |
| JP2716497B2 (ja) | ヘモグロビン コンプレツクス | |
| KR102022338B1 (ko) | 당과 아미노산을 함유하는 안정한 수액제 조성물 | |
| EP3630166B1 (en) | Rapid-acting insulin compositions | |
| JPH09124512A (ja) | 肝臓ターゲティングのための水溶性の薬物−プルラン結合体製剤 | |
| Casadio et al. | Relation between Physico-Chemical and Biochemical Properties of the Hydroxocobalamin-Glycine Complex | |
| CN118203658A (zh) | 一种重组抗Claudin18.2全人源单克隆抗体注射液制剂及制备方法 | |
| WO2021009027A1 (en) | High concentration insulin formulation | |
| JPS61251627A (ja) | 非経口的投与のための水分散性および水溶性のポリマ−組成物 | |
| HRP930063A2 (en) | Novel compositions containing hyaluronic acid associates and a process for preparing the same |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC9 | Refusal of application |