HUT55803A - Process for producing vip-analogues ii - Google Patents
Process for producing vip-analogues ii Download PDFInfo
- Publication number
- HUT55803A HUT55803A HU904033A HU403390A HUT55803A HU T55803 A HUT55803 A HU T55803A HU 904033 A HU904033 A HU 904033A HU 403390 A HU403390 A HU 403390A HU T55803 A HUT55803 A HU T55803A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- boc
- ala
- mmol
- lys
- thr
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 47
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 126
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 430
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 430
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 311
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 196
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 153
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 26
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 20
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 7
- 206010006482 Bronchospasm Diseases 0.000 claims description 6
- 230000007885 bronchoconstriction Effects 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 claims description 3
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 2
- 125000006367 bivalent amino carbonyl group Chemical group [H]N([*:1])C([*:2])=O 0.000 claims description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 108010003205 Vasoactive Intestinal Peptide Proteins 0.000 abstract description 57
- 102400000015 Vasoactive intestinal peptide Human genes 0.000 abstract description 57
- VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N invicorp Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-RIWXPGAOSA-N 0.000 abstract 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 abstract 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 276
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 275
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 245
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 192
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 175
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 175
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 description 142
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 131
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 129
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 124
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 122
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 120
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 119
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 107
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 107
- CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N (2s,3r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 CTXPLTPDOISPTE-YPMHNXCESA-N 0.000 description 92
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 87
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-Diisopropylethylamine (DIPEA) Chemical compound CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 82
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 78
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 78
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 78
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 73
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 71
- VBUWHHLIZKOSMS-KDPLEQQTSA-N dnc009566 Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 VBUWHHLIZKOSMS-KDPLEQQTSA-N 0.000 description 69
- CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 CNBUSIJNWNXLQQ-NSHDSACASA-N 0.000 description 56
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 53
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 52
- DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N (2r)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 DMBKPDOAQVGTST-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 51
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 49
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 48
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 45
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 44
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 38
- -1 p-chlorobenzyloxycarbonyl Chemical group 0.000 description 36
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 29
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-[1-(4-methylphenyl)sulfonylimidazol-4-yl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N1C=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)N=C1 DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 26
- 230000008859 change Effects 0.000 description 26
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 26
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 24
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 21
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 21
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 21
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 20
- ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]hexanoic acid Chemical compound CCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C ZIOCIQJXEKFHJO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 18
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 17
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 17
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 16
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 14
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 14
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 13
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N divinylbenzene Substances C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 11
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 11
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 11
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 11
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 2H-benzotriazol-4-ol Chemical compound OC1=CC=CC2=C1N=NN2 JMTMSDXUXJISAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 1,3-diisopropylcarbodiimide Chemical compound CC(C)N=C=NC(C)C BDNKZNFMNDZQMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N diisopropylcarbodiimide Natural products CC(C)NC(=O)NC(C)C BGRWYRAHAFMIBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N (2s)-5-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 6
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 6
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- URKWHOVNPHQQTM-HNNXBMFYSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-naphthalen-2-ylpropanoic acid Chemical compound C1=CC=CC2=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C21 URKWHOVNPHQQTM-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 5
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 5
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 5
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N tert-butoxycarbonyl anhydride Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)OC(=O)OC(C)(C)C DYHSDKLCOJIUFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 4
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002249 anxiolytic agent Substances 0.000 description 4
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 4
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 4
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N phenoxyacetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CC=CC=C1 LCPDWSOZIOUXRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 4
- SLWWWZWJISHVOU-LBPRGKRZSA-N (2s)-3-(4-methoxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound COC1=CC=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 SLWWWZWJISHVOU-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 3
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 3
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 3
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N Val-Thr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVRKWABULJAONN-VQVTYTSYSA-N 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 3
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical compound NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007883 bronchodilation Effects 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 3
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 3
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N (2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-5-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 AYMLQYFMYHISQO-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- CAOMCZAIALVUPA-UHFFFAOYSA-N 3-(methylthio)propionic acid Chemical compound CSCCC(O)=O CAOMCZAIALVUPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VIIAUOZUUGXERI-UHFFFAOYSA-N 3-fluorotyrosine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C(F)=C1 VIIAUOZUUGXERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000000415 L-cysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])S[H] 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- GEYBMYRBIABFTA-VIFPVBQESA-N O-methyl-L-tyrosine Chemical group COC1=CC=C(C[C@H](N)C(O)=O)C=C1 GEYBMYRBIABFTA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000001871 Tachycardia Diseases 0.000 description 2
- 102000012088 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010075974 Vasoactive Intestinal Peptide Receptors Proteins 0.000 description 2
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 239000004044 bronchoconstricting agent Substances 0.000 description 2
- 230000003435 bronchoconstrictive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000005928 isopropyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(OC(*)=O)C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000006794 tachycardia Effects 0.000 description 2
- RUPAXCPQAAOIPB-UHFFFAOYSA-N tert-butyl formate Chemical group CC(C)(C)OC=O RUPAXCPQAAOIPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 2
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 2
- 229940124549 vasodilator Drugs 0.000 description 2
- 239000003071 vasodilator agent Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- DRLDAGKWYRHQAE-RLUUKXCJSA-N (2S)-N-[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-6-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-4-amino-1-[[(2S)-1-[[(2S,3S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1,4-diamino-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-1,4-dioxobutan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-1-oxohexan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]pentanediamide Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 DRLDAGKWYRHQAE-RLUUKXCJSA-N 0.000 description 1
- ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- DSLBDPPHINVUID-REOHCLBHSA-N (2s)-2-aminobutanediamide Chemical compound NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DSLBDPPHINVUID-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- RCXSXRAUMLKRRL-NSHDSACASA-N (2s)-3-(4-fluorophenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(F)C=C1 RCXSXRAUMLKRRL-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N HSQIYOPBCOPMSS-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N (E,Z)-(1R,2R,3R,5S)-7-(3,5-Dihydroxy-2-((3S)-(3-hydroxy-1-octenyl))cyclopentyl)-5-heptenoic acid Chemical compound CCCCC[C@H](O)C=C[C@H]1[C@H](O)C[C@H](O)[C@@H]1CC=CCCCC(O)=O PXGPLTODNUVGFL-BRIYLRKRSA-N 0.000 description 1
- VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 1,2-ethanedithiol Chemical compound SCCS VYMPLPIFKRHAAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001917 2,4-dinitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C(=C1*)[N+]([O-])=O)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 2-O-acetyl-1-O-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC(C)=O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 0.000 description 1
- ZFAKOLOKEBTELV-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;sodium;hydrate Chemical compound O.[Na].[Na].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O ZFAKOLOKEBTELV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JDTUPLBMGDDPJS-UHFFFAOYSA-N 2-methoxy-2-phenylethanol Chemical compound COC(CO)C1=CC=CC=C1 JDTUPLBMGDDPJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PIDYYTCMUSVKTJ-UHFFFAOYSA-N 3-(3-fluoro-4-hydroxyphenyl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C(F)=C1 PIDYYTCMUSVKTJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-1,2,3-benzotriazin-4-one Chemical compound C1=CC=C2C(=O)N(O)N=NC2=C1 HJBLUNHMOKFZQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 4-amino-L-phenylalanine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N)C=C1 CMUHFUGDYMFHEI-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- XWHHYOYVRVGJJY-UHFFFAOYSA-N 4-fluorophenylalanine Chemical group OC(=O)C(N)CC1=CC=C(F)C=C1 XWHHYOYVRVGJJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 101100460389 Arabidopsis thaliana NHX5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101500027956 Homo sapiens Vasoactive intestinal peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KAFHLONDOVSENM-HNNXBMFYSA-N O-Benzyl-L-tyrosine Chemical compound C1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC=C1OCC1=CC=CC=C1 KAFHLONDOVSENM-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108010003541 Platelet Activating Factor Proteins 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 102000003946 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- QFQYGJMNIDGZSG-UHFFFAOYSA-N S-acetamidomethylcysteine Chemical compound CC(=O)NCSCC(N)C(O)=O QFQYGJMNIDGZSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- XXFXTBNFFMQVKJ-UHFFFAOYSA-N [diphenyl(trityloxy)methyl]benzene Chemical class C=1C=CC=CC=1C(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)OC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 XXFXTBNFFMQVKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000005076 adamantyloxycarbonyl group Chemical group C12(CC3CC(CC(C1)C3)C2)OC(=O)* 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001370 alpha-amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008206 alpha-amino acids Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 125000000613 asparagine group Chemical group N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N benzyl bromide Chemical compound BrCC1=CC=CC=C1 AGEZXYOZHKGVCM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Chemical compound [O-2].[Ca+2] BRPQOXSCLDDYGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000292 calcium oxide Substances 0.000 description 1
- ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N calcium oxide Inorganic materials [Ca]=O ODINCKMPIJJUCX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000001627 cerebral artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000582 cycloheptyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- RAABOESOVLLHRU-UHFFFAOYSA-N diazene Chemical compound N=N RAABOESOVLLHRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000071 diazene Inorganic materials 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical class C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N dicarbonic acid Chemical compound OC(=O)OC(O)=O ZFTFAPZRGNKQPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N dihydroxy(oxo)silane Chemical compound O[Si](O)=O IJKVHSBPTUYDLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000003629 gastrointestinal hormone Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004116 glycogenolysis Effects 0.000 description 1
- 125000002795 guanidino group Chemical group C(N)(=N)N* 0.000 description 1
- 150000008282 halocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940071870 hydroiodic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000036543 hypotension Effects 0.000 description 1
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 238000005462 in vivo assay Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000003914 insulin secretion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004731 jugular vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002617 leukotrienes Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000013014 purified material Substances 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004648 relaxation of smooth muscle Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960001423 tetracosactide Drugs 0.000 description 1
- 125000001412 tetrahydropyranyl group Chemical group 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 210000005062 tracheal ring Anatomy 0.000 description 1
- 210000005090 tracheal smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 1
- 239000002548 vasoactive intestinal polypeptide antagonist Substances 0.000 description 1
- 230000000304 vasodilatating effect Effects 0.000 description 1
- FBYWUGLFWCEKAN-KQQCXCAZSA-N vip antagonist Chemical group C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CCCCN)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 FBYWUGLFWCEKAN-KQQCXCAZSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/57563—Vasoactive intestinal peptide [VIP]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/08—Bronchodilators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/17—Vasoactive intestinal peptides; related peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A vasoaktív intestinális peptidet (VIP) elsőként sertésbél bői fedezték fel, izolálták és tisztították (3 879 371 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás). A peptid 28 aminosavat tartalmaz és a szekretinnel és glukagonnal nagy mértékben homológ [Carlquist és mtsai: Horm. Métából.Rés. 14, 28-29 (1982)]. A VIP aminosav-szekvenciája a következő:
His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Asn-Tyr-Thr-ArgLeu-Arg-Lys-Gln-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-AsnSer-Ile-Leu-Asn-NH2
Ismeretes, hogy a VIP igen széleskörű biológiai aktivitást fejt ki, a gyomor-bél-rendszertől a keringési rendszeren kérész tül. A gyomor-bél-rendszer hormonjaihoz való hasonlóság alapján a VIP a hasnyálmirigy és az epe kiválasztását, a hepatikus glikogenolízist, a glukagon és inzulin kiválasztását serkenti és a pankreatikus bikarbónát felszabadulást aktiválja [Kerrins, C. és Said, S.I., Proc. Soc. Exp. Bioi. Med., 142. 1014-1017 (1972); Domschke, S. és mtsai., Gastroenterology, 73. 478-480 (1977) ] .
VIP-tartalmú neuronokat az endrokin és exokrin rendszerek, bél- és simaizmok sejtjeinek immunoassayje segítségével lokalizáltak [Polák J.M. és mtsai.: Gut 15, 720-724 (1974)]. Azt találták, hogy a VIP számos hormon felszabadulását okozó neuroeffektor; e hormonok közé tartozik a prolaktin [Frawley
L.S. és tsai: Neuroendocrinology 33. 79-83 (1981)], a tiroxin [Ahren B. és tsai: Natúré 287, 343-345 (1980)], az inzulin és a glukagon [Schebalin M. és tsai: Am. J. Physiology E. 232, 197200, (1977)]. Azt találták továbbá, hogy a VIP in vivő és in vitro vizsgálatok szerint serkenti a renin felszabadulását a veséből [Porter J.P. és tsai: Neuroendocrinology 36, 404-408 (1983)]. VIP-et találtak továbbá számos állatfaj és az ember légútjainak idegeiben és idegvégződéseiben [Dey, R.D., és Said, S.I., Fed. Proc., 39, 1062, (1980); Said, S.I. és tsai., Ann. N.Y. Acad. Sciences, 221, 103-114 (1974)]. A VIP kardiovaszkuláris és bronchopulmonáris hatásai jelentősek, minthogy a VIP a perifériás, tüdő és koronária érrendszerre ható igen aktív értágító [Said S.I. és mtsai: Clin. Rés. 20, 29 (1972)]. A VIP az agyi véredényekre értágító hatást fejt ki [Lee T.J. és Berszin I.: Science 224, 898-900 (1984)]. In vitro vizsgálatok igazolták, hogy a vasoaktív intestinális peptid az agyi artériákba exogén módon bejuttatva értágítást idéz elő és ez arra utal, hogy a VIP az agyi értágítás lehetséges közvetítője [Lee T. és Saito A.: Science 224, 898-901 (1984)]. A VIP a szemben is hatékony értágítónak bizonyult [Nilsson, S.F.e. és Bili A.: Acty Physiol. Scand. 121, 385-392 (1984)].
Egyes publikációk szerint a VIP az immun rendszert szabályozza. O'Dorisio és mtsai kimutatták, hogy a VIP a limfociták burjánzását és vándorlását szabályozza [J. Immun. 135, 792S-796S (1985)].
Abból kiindulva, hogy a VIP a simmaizmokat elernyeszti és általában a légúti szövetekben van jelen, feltételezték, hogy a VIP a hörguti simaizom elernyedés endogén közvetítője lehet [Dex R.D. és Said S.I.: Fed. Proc. 39, 1062 (1980)]. In vitro és in vivő vizsgálatok szerint a VIP a légúti (tracheális) simaizmot elernyeszti és hörgösszehúzó szerek (például hiszta4 min és prosztaglandin F2a) ellen védelmet nyújt [Wasserman,
M. A. és mtsai., Vasoactive Intestinal Peptide, S.I. Said, ed.
Raven Press, N.Y., (1982), 177-184. oldal, S.I. és mtsai., Ann.
N. Y. Acad. Sci., 221, 103-114 (1974)]. A VIP továbbá intravénás adagolás esetén hörgösszehúzó szerek (például hisztamin, prosztaglandin, F2a, leukotriének), vérlemezke aktiváló faktor és antigének által előidézett hörgösszehúzódással szemben megvéd [Said S.I. és tsai.: supra (1982)]. A VP továbbá in vitro az emberi légúti szövetekben a nyálka kiválasztást gátolja [Coles S.J. és tsai.: Am. Rév. Respir, Dis. 124, 531-536 (1981)].
A VIP az embernek intravénás infúzió formájában beadva a csúcs kilégzési áramlást fokozza és hisztamin által előidézett hörgtágulattal szemben megvéd [Móricé, A.H. és Sever, P.S., Peptides, 7, 279-280 (1986); Móricé, A. és tsai., The Láncét, II, 1225-1227 (1983)]. A VIP intravénás infúzió formájában történő beadásakor megfigyelt, a tüdőre kifejtett hatásokat azonban kardiovaszkuláris mellékhatások kísérik, elsősorban hipotenzió és tachycardia, valamint az arc kipirulása. Kardiovaszkuláris hatásokat nem okozó inravénás dózisokban beadagolva a VIP nem változtatja meg a légutak specifikus vezetőképességét [Palmer és tsai: Thorax 41, 663-666 (1986)]. Az aktivitás hiányát a beadagolt alacsony dózissal és a vegyület gyors lebomlásával magyarázták.
Natív VIP embernek aeroszol formájában beadagolva a hisztammin által előidézett hörgösszehúzódással szemben csupán marginális védőhatást fejt ki [Altieri és tsai: Pharmmacologist
25. 123 (1983)]. A VIP az alapvető légúti paraméterekre szignifikáns hatást nem fejt ki,, ugyanakkor azonban emberrel belélegeztetve hisztamin által előidézett hörgösszehúzódással szemben védőhatást mutat [Barnes P.J. és Dixon C.M.S.: Am. Rév. Respir. Dis. 130. 162-166 (1984)]. Aeroszol formájában beadagolva a VIP hörgtágulattal összefüggésben nem idéz elő tachycardiát és nem fejt ki hipotenzív hatást [Said és tsai: Vasoactive Intestinal Peptide, S.I. Saud, kiadó: Raven Press, N.Y. 185-191. Oldal (1982)].
A VIP érdekes és klinikailag potenciálisan hasznos biológiai aktivitásai révén számos szintetikus program cél-vegyülete lett; e programok célja a molekula egy vagy több tulajdonságának javítása. Takeyama és tsai egy VIP analógról számoltak be, amely a 8-helyzetben aszparaginsav helyett glutaminsavat tartalmaz. Ez a vegyület a natív VIP-nél kevésbé hatékony [Chem. Pharm. Bull. 28, 2265-2269 (1980)]. Wendlberger és tsai a 17helyzetben metionin helyett norleucint tartalmazó VIP analóg előállítását írták le [Peptide, Proc. 16. Eur. Peptid Szimpózium 290-295 (1980)]. A peptid natív VIP-el ekvipotens és radioaktív jóddal jelzett VIP-et má.j membránkész ítmény ékből kiszorítani képes. Turner és tsai szerint a VIP (10-28) fragmens a VIP antagonistaja [Peptides 7, 849-854 (1986)]. A (4-ClD-Phe6,Leu17)-VIP képletü helyettesített analóg a VlP-receptorhoz kötődik és a VIP aktivitását antagnizálja [Pandol S. és tsai: Gastointes. Liver Physiol 13, G553-G557 (1986)]. Robberecht P. és tsai számos VIP analógról számoltak be, amelyek a természetes VIP N-végcsoportjában D-maradék helyet tesítőket tartalmaznak [Peptides 9, 339-345 (1988)]. Valamennyi fentemlített analóg a VIP-receptorhoz kevésbé szorosan kapcsolódik és a c-AMP aktiválásában a natív VIP-nél kevésbé hatékony. Tachibana S. és Ito 0. a prekurzor molekula számos VIP analógjáról számolt be [Peptide Chem., Shiba T. és Sakakibara S. kiadó, Prot. Rés. Foundation, 481-486. oldal (1988)]. Ezek a vegyületek a VIP-nél 1-3-szor erősebb hörgtágító hatást és 1-2-szer nagyobb hipotenzív aktivitást fejtenek ki. Musso és tsai a 6-7, 9-13, 15-17 és 19-28 helyzetben helyettesített számos VIP analógot írtak le [Biochemistry 27, 8174-8181 (1988); 88271141 számú európai közrebocsátási irat]. Ezek a vegyületek a VIP-receptorhoz való kötődés és biológiai reagálás tekintetében a natív VlP-el azonos vagy gyengébb hatást mutatnak. A 4 605 641 és 4 734 400 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban további VIP analógokat ismertettek.
Találmányunk az alábbi általános képletnek megfelelő új vegyületekre és gyógyászatilag alkalmas savakkal vagy bázisokkal képezett addíciós sóikra vonatkozik.
X-R1-R2-R3-Ala-R5-R6-R7-R8-R9-R10-R11-R12“ R13_R14-R15~R16-R17-Ala-R19-R20-R21“R22“ -R23“R24-R25“R26~R27_R28-Y
A fenti képletben
Rl His, Alá, N-CH3-Ala, D-Ala, Gly, piro-Glu, B-Ala vagy törölve van;
R2 Ser vagy Alá; R3 Asp vagy Alá;
«
| R5 | Val, | Leu vagy Alá; |
| r6 | Trp, ahol | Alá vagy (I) általános képletü csoport; |
| Q | jelentése (II), (III) vagy (IV) általános képletü csoport, ahol n értéke 1, 2, Xlf és X2 egymástól függetlenül H, OH, OCH3, F, Cl |
J, CH3, CF3z N02, NH2, N(CH3)2, NHCOCH3,
| *3 | NHCOC6H5 vagy C(CH3)3; jelentése H vagy F; | |
| R7 | Thr vagy | Alá, |
| r8 | Asp, Glu | vagy Alá; |
| r9 | Asn vagy | Alá; |
| R10 | Tyr, vagy R6; | |
| R11 | Thr vagy | Alá; |
| r12 | Arg, Lys, | , Orn vagy Alá; |
| r13 | Leu vagy | Alá; |
| R14 | Arg, Lys | vagy Alá; |
| r15 | Lys vagy | Alá; |
| r16 | Gin vagy | Alá;. |
| r17 | Met, Nle | vagy Alá; |
| r19 | Val vagy | Alá; |
| r2 0 | Lys vagy | Alá; |
| r21 | Lys vagy | Alá; |
| r22 | Tyr vagy | r6' |
| r2 3 | Leu vagy | Alá; |
| r24 | Asn vagy | Alá; |
| R25 | Ser, | Thr vagy Alá; |
| r26 | He, | Val, Leu vagy Alá; |
| r27 | Leu, | Lys vagy Alá; |
| r28 | Asn, | Thr, Lys vagy Alá; |
X jelentése hidrogénatom, (V) vagy (VI) általános képletü csoport; ahol
X4 jelentése 1-3 szénatomos alkil- vagy halogén-(1-3 szénatomos alkil)-csoport, CH3SO2-, CH3NHCO-, CH3OCO- vagy CH3S(0)n(CH2)2C0-, ahol n = 0-2/
Y jelentése -0X5, -NHX5 vagy R29R30”R31”z/ ahol
X5 jelentése H vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport;
R29 Gly vagy Alá;
R3q Gly, Lys vagy Alá;
R31 Gly, Alá, Met, Cys, Cys(Acm), Thr, Ser, Phe vagy NHX5;
Z jelentése -OX5 vagy -NHX5;
mimellett a természetben előforduló VIP és az alábbi képletü vegyület:
X-His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-Rg-Tyr-Thr-R12-LeuR14-Lys-Gln-Nle-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-R25-R26~
Leu-R28-Y, aholis
X = H, -C0-(l-3 szénatomos alkil)-, -CO-fenil-csoport,
| Rg | = Alá, | Asn, |
| r12 | = Arg, | Lys, |
| r14 | = Arg, | Lys, |
| r2 5 | = Ser, | Thr, |
- 9 R26 = Ile, Val,
R28 = Asn, Thr,
Y = -OX5, -NHX5
X5 = H, 1-3 szénatomos alkil-csoport, ki van zárva.
Előnyösek azok a vegyületek, amelyekben X jelentése (V) általános képletü csoport, ahol
X4 1-3 szénatomos alkilcsoport, CH3SO2- vagy CH3S(0)n(CH2)2CO-, és n = 1; Rí His, Alá, N-CH3-Ala, Gly; R2 Ser vagy Alá; R3 Asp vagy Alá; R5 Val, Leu vagy Alá; Rg Phe, p-F-Phe, Alá, 1-Nal; R7 Thr vagy Alá; R8 Asp, Glu vagy Alá; Rg Asn, Alá; R^q Tyr, p-NH2-Phe, 2-Nal, Alá, 0-CH3~Tyr; R^ Thr, Alá; R12 Arg, Lys, Orn vagy Alá; R13 Leu, Alá; R14 Arg, Lys, Alá; R^s Lys, Alá;
R16 Gin, Alá; R17 Met, Nle vagy Alá; R^g Val, Alá; R2q Lys, ala; R2i Lys, Alá; R22 Tyr, Alá, m-F-Tyr; R23 Leu, Alá; R24
Asn, Ala; R25 Ser, Thr vagy Ala; R2g Ile, Val, Leu vagy Ala;
R27 Leu, Ala, Lys; R28 Asn, Thr, Ala, Lys és Y OH, NH2 vagy R29R30-r31~z· aholis Z OX5 vagy NHX5, ahol X5 jelentése H és R2g Gly, Ala; R30 Gly, Lys, Ala; és r31 jelentése cys(Acm), Met, Ala.
A fenti vegyületek közül előnyösek azok a származékok, amelyekben X jelentése (V) általános képletü csoport, ahol X4 jelentése CH3; R^ His, N-CHj-Ala; R2 Ser; R3 Asp; R5 Val, Leu; Rg Phe, p-F-Phe; R7 Thr; R8 Asp, Glu; Rg Asn; R3q Tyr, pNH2-Phe, 2-Nal; R^ Thr; R12 Arg, Lys, Orn; Rj^ Leu; R14 Arg, Lys; Rj5 Lys; R^g Gin; R17 Met, Nle, Ala; R3g Val, Ala; R2g Lys; R2i Lys; R22 Tyr; R23 Leu; R24 Asn; R25 ser, Thr; R26 Ile>
Val; R27 Leu; R28 Asn, Thr és Y OH, NH2 vagy R29”R30~R31z/ aholis R29 Gly; R3q Gly, Lys; R3j Cys(Acm), Met, Alá; és Z jelentése -OH vagy -NH2.
A fenti vegyületek vegyületek közül előnyösek azok a származékok, amelyekben Rio jelentése Tyr, p-NH2-Phe; Ri2 jelentése Lys, Orn; R14 jelentése Arg; R17 jelentése Nle, Alá; R25 jelentése Ser; R2g jelentése Val; R2g jelentése Thr és Y jelentése OH, NH2; továbbá amelyekben Ri2 jelentése Lys és/vagy R17 jelentése Nle vagy még előnyösebbek, amelyekben Y jelentése R29-R30-R31-Z, ahol r29 jelentése Gly; R3q jelentése Gly, Lys; és R31 jelentése Cys(Acm), Met, Alá; és Z jelentése -OH vagy NH2; előnyösek továbbá azok a származékok, amelyekben R3i jelentése Cys(Acm) és/vagy R^2 jelentése Lys és/vagy R17 jelentése Nle és/vagy R3q jelentése Gly vagy amelyekben R3 jelentése Leu és/vagy R12 jelentése Orn vagy amelyekben R3i jelentése Met és/vagy R3q jelentése Gly és/vagy Rj2 jelentése Lys és R17 jelentése Nle.
Előnyösek továbbá azok, a 6-9. oldalon leírt vegyületek, amelyekben X (CH3)CO-; Rí His vagy N-CH3-Ala; R2 Alá vagy Ser; R3 Asp; R5 Val vagy Leu; Rg Phe vagy p-F-Phe; R7 Thr, Rg Asp vagy Glu; R9 Asn; Rio Tyr, 2-Nal vagy p-NH2-Phe; Rn Thr; Rl2 Lys vagy Orn; Ri3 Leu; R14 Arg; R15 Lys; R15 Gin; R17 Nle vagy Alá; Rig Alá vagy Val; R2q Lys; R2i Lys; R22 Tyr; R23 Leu; R24 Asn; R25 Alá, Thr vagy Ser; R2g Leu vagy Val; R27 Lys vagy Leu; R28 Lys vagy Thr; és Y NH2 vagy R29-R30-R31_z» R29 Alá vagy Gly; R3q Alá, Gly vagy Lys; R3i Alá, Met, Thr, Cys(Acm) vagy nincs jelen; és Z jelentése NH2; mimellett különösen elő• V ·
- 11 nyösek azok a vegyületek, amelyekben = His és/vagy ahol R5 = Val; R6 Phe; R10 2-Nal vagy Tyr; R12 Lys; R17 Nle; R25 Alá vagy Ser; és Y jelentése R29~R30-R31z' R30 Ala va9Y Gly; és R31 Alá, Met vagy Thr.
A leírásban használt 1-3 szénatomos alkilcsoport kifejezésen a metil-, etil-, propil- és izopropilcsoport értendő.
A leírásban a peptidek megjelölésére használt nomenklatúra a szakirodalomban általánosan alkalmazottnak felel meg, aholis az N-végcsoport aminocsoportját a baloldalon, míg a C-végcsoport karboxilcsoportját a joboldalon tüntetjük fel. A természetes aminosavak kifejezésen a fehérjékben a természetben előforduló aminosavak értendők, azaz Gly, Alá, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Lys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Cys, Met, Phe, Tyr, Pro, Trp és His. Nle jelentése norleucin; Orn jelentése ornitin; Ac jelentése acetilcsoport (CH3CO-). Amennyiben egy aminősav izomer formákban fordulhat elő, mindenkor az aminősav L-formáját tüntetjük fel, feltéve, hogy mást nem közlünk.
A VIP-analógokat oly módon jelöljük, hogy a helyettesített aminosavat a VIP szó előtt zárójelben tüntetjük fel. Az Nvégcsoport aminocsoportján képezett származékokat (például X fent) a zárójelében lévő helyettesítésektől balra jelöljük. A VIP szótól jobbra zárójelben feltüntetett szekvencia számok a természetes szekvencia számozásához viszonyított aminősav törléseket és addíciókat jelölik. így például az Ac-(Lys12,Nle17,Gly29)-viP(2—29) kifejezés a natív humán VIP-nek megfelelő aminosav-szekvenciát tartalmazó olyan polipeptidet jelöl, amelyben • · · · * » 9 » · · * · · » * · · « · · * • * · « 4» ««·· ·· »»· r·
- 12 az N-végcsoporton a hidrogénatomot acetilcsoport helyettesíti, a 12-helyzetben az arginin helyén lizin szerepel és a 17-helyzetben a metionin helyén norleucin van jelen. Ezenkívül az 1-helyzetben lévő hisztidin törölve van és a 28-helyzetű aszparagin karboxil-oldalláncához glicin kapcsolódik, a 29-helyzetben végződve. A VIP szó után lévő -0H és -NH2 toldalékok a polipeptid szabad sav illetve amid formáira vonatkoznak. Ha nem használunk toldalékot, úgy a kifejezés mindkét formát magában foglalja.
Az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk:
N-CHg-Ala jelentése N-metil-alanin;
p-F-Phe jelentése p-fluor-fenil-alanin;
1- Nal jelentése 3-(l’-naftil)-alanin;
2- Nal jelentése 3-(2'-naftil)-alanin;
p-NH2-Phe jelentése p-amino-fenil-alanin;
O-CH3~Tyr jelentése O-metil-tirozin;
Cys(Acm) jelentése S-acetamidometil-cisztein; m-F-Tyr jelentése m-fluor-tirozin;
β-Ala jelentése beta-alanin.
A találmányunk szerinti eljárással előállítható vegyületek reprezentatív képviselői az alábbi aminosav-szekvenciákat tartalmazó polipeptidek:
Ac-[Lys12,Nle17,Val2 6,Alá28]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val2 6,Alá27,Thr28]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá26,Thr28]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá25,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Nle17,Alá24,Val26,Thr28]-VIP ··*
- 13 Ac-[Lys12,Nle17,Alá23,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Nle17,Alá22,Val26,Thr28] -VIP Ac-[Lys12,Nle17Ala21,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Nle17,Alá20,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Alá17,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[Lys12,Alá16,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Alá15,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Alá14,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Lys12,Alá13,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá12,Nle17, Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá11,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá9,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá7,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá6,Lys12,Nle17,Val26,Thr28] -VIP Ac-[Alá5,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá3,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá2,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Alá1,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Gly1,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Leu5,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[l-Nal6,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP • ··· · »· • 9 9·· ···· ·9 99· ··
Ac-[2-Nal10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[O-CH3-Tyr10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,m-F-Tyr22,Val26,Thr2 8]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Cys(Acm) 31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Thr31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Alá29·30,Met31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28,Alá29-31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28,Gly29,Lys30]-VIP
Ac-[Lys12/14,Nle17,Alá19,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[2-Nal10,Lys12,Alá17,Val2 6,Thr28]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28,Alá29 >3 0,Met31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29>30,Phe31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/ 30, Cys(Acm)3í]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
Ac-[Lys12,Alá17,Val26,Thr28,Gly29ι30,Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[Gly8,Lys12*14,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Alá1?,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,
Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Alá17/19,Val26,Thr28,Gly29>30,Met31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29* 30,Alá31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/30,
Cys(Acm)31]-VIP *· ·* · ·· • · Λ · ·· · • ··· ··· • · «· Λ ···· ·· ·«··«
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29·80,Sea31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[Glu8,Orn12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27'28,Gly29·30,Thr31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Alá29-31]-VIP
Ac-[Lys12,Alá17/19,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28,Gly29,Lys3 0]-VIP
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29,30,
Cys(Acm31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29·30,Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP
CH3S(CH2)2CO-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP(2-28)
CH3SO(CH2)2C0-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP(2-28)
Ac-[N-CH3-Alá1,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8]-VIP
Ac-[Leu5,Orn12,Alá17,19,Thr25,Val26,Thr28,Gly29 >30,
Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,2-Nal10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,
Met31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,14,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29 >3 0, Cys(Acm)31]-VIP.
A találmányunk szerinti eljárással előállítható vegyületek különösen előnyös képviselői az alábbi származékok:
Ac-[p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/3 0,
Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[Leu5,Orn12,Alá17119,Thr25,Val26,Thr28,Gly29 30,
Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr2 8,Gly2 9 >3 0,
Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[N-CH3-Alá1,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/3°,Met31]-VIP.
Előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek továbbá az alábbi származékok:
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Alá29-31!“VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29,Lys30]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Alá25,Leu26,Lys27/28]-VIP
Ac-[Leu5,p-F-Phe6,Glu8,Orn12,Alá17·19,Thr2 5,Val26,Thr2 8, Gly29/30,Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Thr31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr28,Gly29/30,Thr31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá2 5,Leu2 6,Lys27/28,Gly2 9 >30,Thr31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27/28,Gly29/30, Thr31]-VIP
Ac-[2-Nal10,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP
Ac-[Alá2,Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Alá29-31]-VIP
Ac-[Alá2,Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27/28,Gly29/30,Thr31]-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Alá25,Leu26,Lys27/28,Alá29-31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Alá25,Leu26,Lys27'28,Alá29-31]-VIP Z*end
A fenti reprezentatív vegyületeket aminosavak között peptidkötések kialakítására szolgáló bármely ismert módszerrel előállíthatjuk. A fenti ismert és szokásos eljárások például az alábbi módszereket foglalják magukban: bármely oldatfázisú eljárás, amelynek során védett karboxilcsoportot vagy más reakcióképes csoportokat tartalmazó aminosav vagy maradéka szabad alfa-aminocsoportját védett aminocsoportot vagy más reakcióképes csoportot tartalmazó másik aminosav vagy maradéka szabad primer karboxilcsoportjával kondenzáljuk.
A reprezentatív vegyületek szintézisét oly módon végezhetjük el, hogy az egyes aminosavakat a kívánt szekvenciában egymásután egyenként egy másik aminosavhoz vagy maradékához adjuk vagy előbb a kívánt aminosav-szekvenciával rendelkező peptid-fragmenst szokásos módon szintetizáljuk, majd kondenzációval kialakítjuk a kívánt peptidet.
Az új peptidek előállítására irányuló szokásos eljárások például bármely szilárdfázisú peptid szintézis módszert magukban foglalnak. Az új vegyületek fenti szintézisét oly , módon végezhetjük el, hogy a kívánt aminosav-maradékokat egyesével szekvenciálisán a szilárdfázisú szintézismódszerek általános elvei szerint a növekvő peptidláncba építjük be [Merrifield R. B.: J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149-2154 (1963); Bárány és tsai: The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology, Vol. 2, Gross E. és Meienhofer J.: kiadó: Academic Press, 1-284 (1980)].
A peptidek kémiai szintézisének közös ismérve, hogy a különböző aminosav-részek reakcióképes oldallánc-csoportjait az adott helyen esetleg fellépő kémiai reakciókat megakadályozó megfelelő védőcsoportokkal megvédjük, majd a védőcsoportot a kívánt reakció lejátszódása után eltávolítjuk. Szokásos közös ismérv továbbá, hogy a molekula karboxilcsoportjának reakciója alatt az aminosavon vagy fragmensen lévő a-aminocsoportot megvédjük, majd a kívánt reakció után az α-aminocsoporton lévő védőcsoportot eltávolítjuk. Bár a szilárdfázisú szintézis módszerek vonatkozásában specifikus védőcsoportokat ismertettünk, minden aminosav a folyadékfázisú szintézisek kapcsán leírt és használatos megfelelő védőcsoportokkal is megvédhető.
Az α-aminocsoportok például az alábbi megfelelő védőcsoportok segítségével védhetők meg: aromás uretán-típusú védőcsoportok, például benziloxikarbonil-csoport (Z) és helyettesített benziloxikarbonil-csoportok, mint például p-klór-benziloxikarbonil-, ρ-nitro-o-benziloxikarbonil-, p-bróm-benziloxikarbonil-, p-bifenil-izopropoxikarbonil-, 9-fluorenil-metoxikarbonil- (Fmoc) és p-metoxi-benziloxikarbonil-csoport (Moz); alifás uretán-típusú védőcsoportok, például tercier butoxikarbonil(Boc), diizopropil-metoxikarbonil-, izopropoxikarbonil- és alliloxi-karbonil-csoport. Az α-aminocsoportok megvédésére legelőnyösebben a Boc-csoport alkalmazható.
A karboxilesöpörtök előnyösen az alábbi védőcsoportok segítségével védhetők meg: aromás észterek, például benzilészterek (OBzl), vagy kis szénatomszámú alkil-, halogén-, nitro-, tio- vagy helyettesített tio-helyettesítőt (például 1-7 szénatomos alkil-tio-csoportot) hordozó benzil-észterek; alifás észterek, például kis szénatomszámú alkil-, teercier butil(Ot-Bu), ciklopentil-, ciklohexil- (OcHx), cikloheptil és 9fluorenil-metil-észterek (OFm). Glutaminsav (Glu) megvédésére legalkalmasabbnak az OBzl bizonyult. Aszparaginsav (Asp) megvédésére legkedvezőbben az OcHx és Obzl alkalmazható.
A hidroxilcsoportok előnyösen az alábbi csoportokkal védhetők meg: éterek, például benzil-éterek (Bzl) vagy is szénatomszámú alkil-, halogén- [például 2,6-diklór-benzil- (DCB)], nitro- vagy metoxi-helyettesítőt hordozó benzil-éterek; tercier butil- (t-Bu), tetrahidropiranil- és trifenil-metil-éterek (tritil).
A szerin (Ser) és treonin (Thr) legelőnyösebben a Bzl segítségével védhető meg. A tirozin (Tyr) megvédésére legelőnyösebben a Bzl és DCB alkalmazható.
Az oldalláncban lévő aminocsoportok megvédésére előnyösen az alábbi védőcsoportok alkalmazhatók: aromás uretán-típusú védőcsoportok, például benziloxikarbonil-csoport (Z) és helyettesített benziloxikarbonil-csoportok [például p-klór-benziloxikarbonil-, 2-klór-benziloxikarbonil- (2-C1-Z), p-nitro-benziloxikarbonil-, ρ-bróm-benziloxikarbonil-, p-bifenil-izopropoxikarbonil-, 9-fluorenil-metoxikarbonil- (Fmoc) és p-metoxi-benziloxikarbonil-csoport (Moz)]; alifás uretán-típusú védőcsoportok (például tercier butoxikarbonil-csoport (Boc), diizopropil-metoxikarbonil-, izopropoxikarbonil- és alliloxikarbonilcsoport. Ornitin (Orn) megvédésére legelőnyösebben a Z csoport alkalmazható. A lizin (Lys) legelőnyösebben a 2-C1-Z csoport segítségével védhető meg.
A guanidinocsoportok például nitro-, p-toluolszulfonil(Tos), Z, adamantiloxikarbonil- és Boc-csoport segítségével védhetők meg. Arginin (Arg) megvédésére legelőnyösebben a Toscsoport alkalmazható.
Az oldalláncban lévő aminocsoportok xantilcsoporttal (Xan) védhetők meg. Az aszparagin (Asn) és glutamin (Gin) megvédésére nincs különösen előnyös védőcsoport.
Az imidazolcsoportok előnyösen p-toluolszulfonil- (Tos), 9-fluorenil-metoxikarbonil- (Fmoc), trifenil-metil- (tritil), 2,4-dinitro-fenil- (Dnp), Boc- és benziloxi-metil-csoporttal (Bőm) védhetők meg. Hisztidin (His) megvédésére legelőnyösebb a Tos csoport.
Valamennyi oldószert, izopropanolt (iPrOH), metilén-kloridot (CH2C12) és dimetil-formamidot (DMF) a Fisher vagy Burdick et Jackson cégtől szereztük be és további desztilláció nélkül alkalmaztuk. A trifluor-ecetsavat a Halocarbon cégtől vásároltuk és továbbbi tisztítás nélkül használtuk fel. A diizopropiletil-amint (DIPEA) a Pfaltz és Bauer cégtől szereztük be és felhasználás előtt kalcium-oxidről és ninhidrinről desztilláltuk. A diciklohexilkarbodiimidet (DCC) és a diizopropilkarbodiimidét (DIC) a Fluka cégtől vásároltuk és további tisztítás nélkül használtuk fel. A hidroxi-benzotriazolt (HOBT) és 1,2etánditiolt (EDT) a Sigma Chemical Co. cégtől szereztük be és további tisztítás nélkül használtuk fel. A védett aminosavak általában L-konfigurációjúak és ezeket a Chemical Dynamics Corp. vagy Bachem cégtől szereztük be. A fenti reagensek tisz taságát vékonyrétegkromatográfia, NMR vagy olvadáspont segítségével, felhasználás előtt ellenőriztük. A benzhidrilamin gyanta (BHA) sztirol-1 % divinilbenzol kopolimer (100-200 vagy 200-400 mesh; Biomega, Bachem, Omni vagy Advanced Chemtechn cég terméke) . A fenti gyanták össznitrogéntartalma általában 0,3 - 0,7 milliekvivalens/g.
A vékonyrétegkromatográfálást (TLC) üveglemezre felvitt előre bevont szilikagél 60 F254 (Merek) lemezeken, a megfelelő oldószer-rendszerek felhasználásával végezzzük el. A vegyületeket UV fluoreszcencia elnyomással (254 nm abszorpció), jódos megfestéssel vagy ninhidrines befecskendezéssel (primer vagy szekunder aminok esetében) mutatjuk ki.
Az aminosav összetétel analízishez a peptideket 1 - 4 mg fenolt tartalmazó 6 n sósavval 115 °C-on 22 - 24 órán át zárt, vákuum alá helyezett hidrolízis csöveken hidrolizáljuk. Az analíziseket Beckman 121M aminosav analizátorban vagy Waters HPLCalapú aminosav analízis rendszerben, Waters Cat Enantiomer gyanta vagy Pierce AA511 oszlop és ninhidrines kimutatás felhasználásával végezzük el.
A nagy teljesítüképességű folyadék kromatografálást (HPLC) Constametric I és III szivattyúkból, Gradient Master oldószer programozóból és keverőbői, valamint Spectromonitor III változtatható hullámhosszú UV detektorból álló LDC készüléken hajtjuk végre. Az analitikai HPLC-t fordított fázisú módszerrel, Waters MBondapak C^g oszlopok (0,4 x 30 cm) felhasználásával végezzük el. A preparatív HPLC szétválasztásokat Waters Guard-Pak C^g előoszloppal felszerelt Whatman Magnum 20 partisii 10 ODS-3 oszlopokon (2x25 cm vagy 2x50 cm) futtatjuk.
A peptideket előnyösen Merrifield által általánosan leírt [J. Amer. Chem. Soc. 85, 2149 (1963)] szilárdfázisú szintézis módszerekkel állítjuk elő, azonban - mint arra korábban utaltunk - az irodalomban leírt más ekvivalens kémiai szintézisek is alkalmazhatók. A szilárdfázisú szintézist a szintetizálandó peptid C-végcsoportjától kezdjük el és a védett α-aminosavat a megfelelő gyantához kapcsoljuk. Ezeket a kiindulási anyagokat oly módon állíthatjuk elő, hogy valamely α-amino-védett aminosavat észterkötéssel valamely klór-metilezett gyantához vagy hidroxi-metil-gyantához kapcsolunk vagy amidkötéssel valamely benzhidrilamin (BHA) vagy p-metil-benzhidrilamin gyantához (MBHA) rögzítünk. A hidroxi-metil-gyanták készítése az irodalomból jól ismert. A klór-metilezett gyanták kereskedelmi forgalomban lévő termékek és előállításuk az irodalomból ugyancsak jól ismert. A BHA és MBHA gyanták kereskedelmi forgalomban lévő termékek és általában olyan esetekben kerülnek felhasználásra, ha a kívánt szintetizálandó peptid a C-végcsoporton helyettesítetlen amidot tartalmaz. A gyanta anyagával kapcsolatban az ASTM mesh kifejezés a szemcsenagyságra utal. A szemcsenagyság szilárd részecskék nagyságának mérésére szolgál. A mesh a részecskéket visszatartó legnagyobb szita mérete. Az ASTM kifejezés térhálósított gyanták részecskenagyságának mérésére szolgáló szabványosított szitaméretet jelöl.
A BHA gyantához kapcsolódó első aminosavat általában szimmetrikus Boc-aminosav anhidrid formájában adjuk hozzá, éspedig 1 gyanta nitrogén egyenértékre vonatkoztatva 2-10 ekvi valens aminosavat alkalmazunk. A gyantát kapcsolás után mossuk és vákuumban szárítjuk. A gyantára felvitt aminosav mennyiségét a Boc-aminosav gyanta aliquot résszének aminosavanalízisével határozzuk meg. A felvitt aminosav mennyisége általában 0,2-0,4 millimól/g gyanta. A reagálatlan aminocsoportokat oly módon foghatjuk be, hogy a gyantát a metilén-kloridban ecetsavanhidriddel és diizopropil-etil-aminnal reagálhatjuk.
A Boc-aminosav hozzáadása után a gyantán az aminosavak szekvenciális beépítése céljából számos ismétlődő kapcsolási ciklust végzünk el. Az α-amino-Boc-védőcsoportot savas körülmények között távolítjuk el. E célból metilén-kloridban trifluor-ecetsavat (TFA), dioxánban sósavat vagy hangyasav/ecetsav elegyet alkalmazunk. Előnyösen 50 % trifluor-ecetsavat tartalmazó metilén-kloridot alkalmazhatunk (térfogat/térfogat rész). Ez a tercier butil-karbonium-ionok scavengereként 1-5 térfogat% EDT-t vagy dimetil-szulfidőt is tartalmazhat. Az irodalomból ismert más standard lehasító szereket is alkalmazhatunk.
Az α-amino-védőcsoport eltávolítása után a soronkövetkező védett aminosavakat a kívánt sorrendben lépésenként kapcsoljuk és közbenső termékként védett peptidgyantához jutunk. Az aminosavak szilárdfázisú peptid szintézis kapcsán történő kapcsolására felhasználható aktiváló szerek az irodalomból jól ismertek. így például a fenti szintéziseknél előnyösen alkalmazhatjuk a következő aktiváló szereket: benzotriazol-1-il-oxi-tri-(dimetil-amino)-foszfonium-hexafluorofoszfát (BOP), diciklohexilkarbodiimid (DCC), és diizopropil-karbodiimid (DIC). Előnyösen DCC és DIC alkalmazható. Ezenkívül Bárány és Merrifield által leírt [The Peptides, Vol. 2., kiadó: J.
Meienhoferm Academic Press, 1-284. oldal (1979)] más aktiváló szerek is alkalmazhatók. A kapcsolási elegyekhez a szintézis ciklus optimalizálása céljából különböző reagensek adhatók, mint például 1-hidroxi-benzotriazol (HOBT), N-hidroxi-szukcinimid (HOSu) és 3,4-dihidro-3-hidroxi-4-oxo-l,2,3-benzotiazin (HOOBT). Előnyösen HOBT alkalmazható.
A találmányunk szerinti tipikus szintetikus ciklus jegyzőkönyvét az 1. táblázatban ismertetjük.
1. Táblázat
| Lépés | Reaqens | Idő |
| 1. | ch2ci2 | 2 x 30 mp |
| 2. | 50 % TFA/CH2C12 | 1 perc |
| 3. | 50 % TFA/CH2C12 | 15 perc |
| 4. | ch2ci2 | 2 x 30 mp |
| 5. | iPrOH | 2 x 30 mp |
| 6. | ch2ci2 | 4 x 30 mp |
| 7. | 6 % DIPEA/CH2C12 | 3x2 perc |
| 8. | ch2ci2 | 3 x 30 mp |
| 9. | kapcsolás | 1-18 óra |
| 10. | ch2ci2 | 2 x 30 mp |
| 11. | iPrOH | 1 x 10 mp |
| 12. | ch2ci2 | 1 x 30 mp |
13. DMF 2 X 30 mp ._______CHoClo________________________________ 3 x 30 mp
Minden mosási és kapcsolási lépésnél az oldószereket 10-40 ml/g gyanta térfogatban alkalmazzuk. A kapcsolásokat a Bocaminosav előre kialakított szimmetrikus anhidridekkel vagy az O-acil-izokarbamid-származékokkal végezzük el. Általában 1 ekvivalens amingyantára vonatkoztatva 2-10 ekvivalens aktivált Boc-aminosavat alkalmazunk; oldószerként metilén-kloridot használunk. A Boc-Arg(Tos)-t, Boc-Gln-t, Boc-Asn-t és Boc-His(Tos)-t 20-25 % dimetil-formamid/metilén-klorid elegyben kapcsoljuk. A Boc-Asn és Boc-Gln kapcsolásához az ismert mellékreakciók visszaszorítása céljából az aktív HOBT észtereket alkalmazzuk.
A kapcsolási reakciókat az átalakulás teljessé válásának meghatározása céljából Kaiser ninhidrid teszttel követjük nyomon [Kaiser és tsai: Anal. Biochem. 34., 595-598 (1970) ] . A Boc-Asn és Boc-Gln esetében lassú reakciókinetikát tapasztaltunk. Tökéletlen kapcsolási reakciók esetében frissen elkészített aktivált aminosavval újrákapcsolást végzünk vagy a peptidgyantát a fentiekben leírt módon ecetsavanhidriddel kezelve befogást hajtunk végre. A teljesen kialakított peptidgyantákat vákuumban több órán át szárítjuk.
Minden vegyület esetében a blokkoló csoportok eltávolítását és a peptidnek a gyantáról történő lehasítását a szilárdfázisú peptid szintézisek irodalmából ismert megfelelő deblokkoló és hasító reagensek segítségével végezhetjük el (lásd például The peptides 2. vagy 5. kötet, fent). A védőcsoport eltávolítását és a peptidnek a szilárd hordozóról történő lehasítását például erős savval [mint például folyékony hidrogénfluoriddal (HF) vagy trifluor-metánszulfonsavval (TFMSA)] történő kezeléssel végezhetjük el, kívánt esetben adalékanyagok (például etánditiol vagy tioanizol mint kation scavenger) jelenlétében. Részletesebben oly módon járhatnk el, hogy a peptidgyantát például 25 - 100 μΐ etánditiollal, 1 ml anizollal és 9 ml folyékony hidrogén-fluoriddal -lg gyantára vonatkoztatva - 0 °C-on 45-60 percen át, Teflon HF berendezésben (Peninsula) kezeljük. Alternatív módon a módosított kétlépéses lehasítási eljárást [Tam és tsai: Tetrahedron Letters, 23, 2939-2941 (1982)] alkalmazhatjuk, amelynek során a peptidgyantát 3 ml dimetil-szulfiddal és 1 ml hidrogén-fluoriddal 2 órán át 0 °Con kezeljük, majd 90 %-os hidrogén-fluoriddal végzett kezelés előtt bepároljuk. Az illékony reagenseket vákuumban jégfürdőhőmérsékleten távolíthatjuk el. A maradékot kétszer vagy háromszor 30 ml dietil-éterrel és etil-acetáttal mossuk, majd szűrjük. A peptideket a gyantáról 4x20 ml 10 %-os ecetsavval extrahálhatjuk, majd szűrjük. Az egyesített vizes szűrleteket liofilizálva a végső nyersterméket kapjuk.
A tisztítási műveleteket közvetlenül a nyers peptidekkel preparatív HPLC segítségével végezhetjük el. A peptideket minimális térfogatú 1 % ecetsavban vagy 0,1 % trifluor-ecetsavban visszük fel az oszlopokra. A gradiens eluálást 10 % Bpufferrel kezdjük, majd 10-25 % B-pufferrrel 10 percen át és 25-35 % B-pufferrel 3 órán keresztül végezzük [A-puffer = 0,1 % TFA/H2O; B-puffer = 0,1 % TFA/CH3CN], 8,0 ml/perc áthaladási sebesség mellett. Az UV kimutatást 220 nm mellett végezzük el.
A frakciókat 1,5-2,5 perces időközökben gyűjtjük össze és analitikai HPLC segítségével ellenőrizzük. A nagy tisztaságúnak ítélt frakciókat összegyűjtjük és liofilizáljuk.
A végtermék tisztaságát analitikai HPLC úton,, a fentiekben leírtak szerint, fordított fázisú oszlopon ellenőrizzük. Általában gradiens eluálást alkalmazunk, 20-40 % B-puffer [Apuffer = 0,022 % TFA/H2O, B-puffer = 0,022 % TFA/CH3CN] 15 percenként, 2,0 ml/perc áthaladási sebesség mellett. Az UV kimutatást 210 nm mellett végezzük el. Az összes termék tisztasága kb. 97-99 %. Az egyes peptidek aminosav-analízisét elvégezzük és a kapott értékek az elfogadhatósági határokon belül vannak. Általában az összes végterméket gyors atom bombázásos tömegspektrometriának (FAB-MS) is alávetjük. Valamennyi termék a várt M+H ionokat eredményezi, az elfogadhatósági határokon belül.
A találmányunk szerinti eljárással előállítható új vegyületek értékes farmakológiai tulajdonságokkal rendelkeznek. E vegyületek hatékony hörgtágítók, ugyanakkor kardiovaszkuláris mellékhatásokat nem mutatnak. A vegyületek magas aktivitású hörgtágítók és hörgösszehúzódással járó rendellenességek (például asztma) kezelésére alkalmazhatók.
Az (I) általános képletü új vegyületeket szokásos gyógyászati hordozóanyagokkal összekeverve hörgösszehúzódásokkal járó rendellenességek (például asztma) kezelésére szolgáló gyógyászati készítményekké alakíthatjuk. A hatóanyag dózisa több tényezőtől (például az adott hatóanyag aktivitásé tói, az alkalmazott készítmény formájától stb.) függ. A hatékony dózis meghatározása a szakember kötelező tudásához tartozik és a hatékony koncentrációból (EC5Q) állapítható meg.
Az (I) általános képletú új vegyületek számos szervetlen vagy szerves savval gyógyászatilag alkalmas savaddíciós sókat képeznek. A sóképzéshez például kénsav, foszforsav, sósav, hidrogén-bromid, hidrogén-jodid, salétromsav, szulfaminsav, citromsav, tejsav, piroszőlősav, oxálsav, maleinsav, borostyánkősav, borkősav, fahéjsav, ecetsav, trifluor-ecetsav, benzoesav, szalicilsav, glükonsav, aszkorbinsav vagy más hasonló savak alkalmazhatók.
Az (I) általános képletú hatóanyagokat tartalmazó gyógyászati készítmények parenteráisan (például intravénásán, szubkután úton, intramuszkulárisan), orálisan vagy intranazálisan adagolhatok. A parenterális adagolási módok közül előnyös az aeroszol, amely továbbá orálisan vagy intranazálisan is alkalmazható.
Eljárásunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük anélkül, hogy találmányunkat a példákra korlátoznánk.
. 1. Példa
Boc-Ala-BHA gyanta
3,0 g (2,1 milliekvivalens) benzhidrilamin kopolisztirol-1 % divinilbenzol térhálósított gyantát (100-200 ASTM mesh, Omni Biochem) 30 ml metilén-kloridban duzzasztunk, szűrjük és az 1. táblázatban megadott jegyzőkönyv 7-8. lépésének felhasználásával mossuk. A gyantát 30 ml metilén-kloridban újraszuszpendáljuk, majd 568 mg (3,0 millimól) Boc-Ala-t és 310 mg (1,5 milli• ·»
- 29 mól) diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 15 órán át rázatjuk, szűrjük, majd az 1. táblázatban megadott jegyzőkönyv 10-14. lépését hajtjuk végre. A Kaiser ninhidrin-analízis negatív. A reagálatlan amino-csoportokat oly módon fogjuk be, hogy a gyantát 1 ml ecetsavanhidrid és 30 ml metilén-klorid elegyével 30 percen át kezeljük, szárítjuk és vákuumban egy éjjelen át szárítjuk. 3,1 g Boc-Ala-BHA gyantát kapunk. E gyanta egy részét aminosav-analízisnek vetjük alá. Az eredmény 0,20 millimól Ala/g.
2. Példa
Boc-Thr(Bzl)-BHA gyanta
10,0 g (7,0 milliekvivalens) benzhidrilamin gyantát (100200 ASTM mesh, Omni) az 1. példában leírtak szerint kezelünk azzal a változtatással, hogy a gyantát 3,1 g (10,0 millimól) Boc-Thr(Bzl)-el és 1,0 g (5,0 millimól) diciklohexilkarbodiimiddel kezeljük. A gyantát vákuumban szárítjuk. 10,9 g Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát kapunk. Az aminosav-analízis eredménye 0,2 millimól Thr/g.
3. Példa
Boc-Ser(Bzl)-BHA gyanta
0,75 g (0,53 milliekvivalens) benzhidrilamin gyantát (100200 ASTM mesh, Omni) az 1. példában leírtak szerint kezelünk azzzal a változtatással, hogy a gyantát 222 mg (0,75 millimól) Boc-Ser(Bzl)-el és 77 mg (0,375 millimól) diciklohexilkarbodiimiddel kapcsoljuk. A gyantát vákuumban szárítjuk. 0,80 g Boc-Ser(Bzl)-BHA gyantát kapunk. Az aminosav-analízis eredménye 0,16 millimól Ser/g.
4. Példa
Boc-Met-BHA gyanta
0,75 g (0,53 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Omni) az 1. példában leírtak szerint kezelünk azzal a változtatással, hogy a gyantát 187 mg (0,75 millimól) BocMet-el és 77 mg (0,375 millimól) diciklohexilkarbodiimiddel kapcsoljuk. A gyantát vákuumban szárítjuk. 0,81 g Boc-Met-BHA gyantát kapunk. Az aminosav-analízis eredménye 0,19 millimól Met/g.
5. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Val2 6,Alá2 8]-VIP
0,253 g (0,05 millimól) az 1. példa szerint előállított
Boc-Ala-BHA gyantát a fenti jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást moláris ekvivalens Boc-aminosav és diiozopropilkarbodiimid felhasználásával végezzük el. A Boc-aszparagint és Boc-glutamint a megfelelő aktív észter formájában építjük be, a kapcsolási elegyhez 0,5 moláris fölöslegű HOBT hozzáadásával. A kapcsolási lépések reakcióideje általában 2-18 óra. 27 kapcsolási ciklust hajtunk végre, az egyes ciklusokban az alábbi komponenseket felhasználva: Boc-Leu (124 mg, 0,5 millimól), Boc-Val (109 mg, 0,5 millimól), Boc-Ser(Bzl) (147 mg, 0,5 millimól), Boc-Asn (116 mg, 0,5 millimól), Boc-Leu (124 mg, 0,5 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (220 mg, 0,5 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (207 mg, 0,5 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (207 mg, 0,5 millimól), Boc-Val (109 mg, 0,5 millimól), Boc-Ala (95 mg, 0,5 millimól), Boc-Nle (116 mg, 0,5 millimól), Boc-Gln (123 mg, 0,5 • · · · « ··«· *· ·« * ·» • * ?
• »1
-31millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (207 mg, 0,5 millimól), Boc-Arg(Tos) (214 mg, 0,5 millimól), Boc-Leu (124 mg, 0,5 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (207 mg, 0,5 millimól), Boc-Thr(Bzl) (154 mg, 0,5 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (220 mg, 0,5 millimól), Boc-Asn (116 mg, 0,5 millimól), Boc-Asp(OcHx) (158 mg, 0,5 millimól), Boc-Thr(Bzl) (154 mg, 0,5 millimól), Boc-Phe (133 mg, 0,5 millimól), Boc-Val (108 mg, 0,5 millimól), Boc-Ala (95 mg, 0,5 millimól), Boc-Asp(OcHx) (158 mg, 0,5 millimól), Boc-Ser(Bzl) (148 mg, 0,5 millimól) és Boc-His(Tos) (204 mg, 0,5 millimól).
A peptid-gyantát a jegyzőkönyv 1-8. lépésének vetjük alá és 0,5 ml ecetsavanhidriddel és 167 ml DIPEA-val 10 ml metilén-kloridban 50 percen át kétszer reagáltatjuk. A gyantát a 1014. lépés felhasználásával mossuk és vákuumban szárítjuk. Kitermelés 407 mg.
A peptidgyantáról a blokkoló csoportot eltávolítjuk és hasítjuk oly módon, hogy 1 ml anizolt tartalmazó 10 ml folyékony hidrogén-fluoriddal és 100 ml etánditiollal egy órán át 0 °C-on kezeljük. A reakcióelegyet vákuumban szárítjuk, 2x30 ml dietil-éterrel mossuk és 3x30 ml 10 %-os ecetsavval extraháljuk. A vizes szűrletet liofilizáljuk. 135 mg fehér port kapunk.
A nyers peptidet preparatív HPLC segítségével tisztítjuk.
A nyers peptidet Whatman-Mmagnum 20 ODS-3 oszlopra (2x50 cm) visszük fel és 25-35 % B lineáris gradiens szerint [A-puffer: 0,1 % TFA/H2O; B-puffer: 0,1 % TFA/CH3CN] 3 órán át 8,0 ml/perc áthaladási sebességgel eluáljuk. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és :
·»♦ liofilizáljuk. 26,6 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint hommogén és a kívánt aminosav-analízist adja. FAB-MS: MH számított 3265,8; talált 3266,5.
6. Példa
Ac-[Lys12,Nle17/Val26,Ala17/Thr28]-vlP
0,25 g (0,05 millimól) a 2. példa szerint előállított BocThr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában leírt szilárd fázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy az első ciklusban Boc-Leu helyett 995 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptid-gyantáról (399 mg) peptidet lahasítva 117 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás jután 32,4 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3253,7; talált: 3253,4.
7. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Ala26,Thr28]-VIP
0,254 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában leírt szilárd fázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a második ciklusban Boc-Val helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptid-gyantáról (399 mg) peptidet eltávolítva 100 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás jután 29,4 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3267,8; talált: 3267,5.
• 9 <* ··· « · · · ·· ·
W 999 ♦·· • · « * *
4»f · 9 ♦« * 4
8. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá25,Val26,Thr28]-VIP
0,25 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában leírt szilárd fázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a harmadik ciklusban Boc-Ser(Bzl) helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptid-gyantáról (394 mg) peptidet eltávolítva 125 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás jután 31,9 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3278,8; talált: 3279,8.
9. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá24,Val26,Thr28]-VIP
0,25 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában leírt szilárd fázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a negyedik ciklusban Boc-Asn helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptid-gyantáról (373 mg) a peptidet eltávolítva
83,5 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás jután 28,7 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3252,8; talált: 3252,1.
10. Példa
Boc-Thr(Bzl)-BHA gyanta
5,0 g (2,6 milliekvivalens) benzhidrilamin kopolisztirol
1% divinil-benzol térhálósított gyantát (200-400 ASTM mesh,
Vega Biochem) 50 ml metilén-kloridban duzzasztunk, szűrjük és ···
- 34 az 1. táblázat szerinti jegyzőkönyv 7-8. lépésének felhasználásával mossuk. A gyantát 60 ml metilén-kloridban újraszuszpendáljuk, majd 2,32 g (7,5 millimól) Boc-Thr(Bzl)-t és 774 mg (3,75 millimól) diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet 4 órán át szobahőmérsékleten rázatjuk, szűrjük és az 1. táblázat szerinti jegyzőkönyv 10-14. lépését hatjuk végre. A Kaiser ninhidrid analízis negatív. A reagálatlan aminocsoportokat oly módon fogjuk be, hogy a gyantát 5 ml ecetsavanhidrid és 5 ml DIPEA 50 ml metilén-kloriddal képezett oldatával 60 percen át kezeljük, majd szűrjük és a jegyzőkönyv 13-14. lépése szerint mossuk. A gyantát vákuumban egy éjjelen át szárítjuk.
5,8 g Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát kapunk. A gyanta egy részét aminosav-analízisnek vetjük alá, amelynek eredménye 0,276 millimól Thr/g.
11. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá23,Val26,Thr28]-VIP
1,0 g (0,27 millimól), a 10. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát Applied Biosystems 430 A modell peptid-szintetizátoron szilárdfázisú peptid-szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást Boc-aminosavból és diciklohexilkarbo-. diimidből előállított szimmetrikus anhidridek felhasználásával végezzük el. A Boc-aszparagint, Boc-glutamint és Boc-arginin -(tozil)-t a megfelelő aktív HOBT észterek formájában rutinszerűen kétszeresen kapcsoljuk. 27 kapcsolási ciklust hajtunk végre, az egyes ciklusokban az alábbi komponenseket alkalmazzuk: Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 ·* ·· · ·« « · · · ·· * • 999 9 99
9 9 9 9
9999 99 »99 ·· mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0
| millimól), Boc-Lys | (2-C1-Z) | (830 | mg, | 2,0 | millimól), | Boc-Val (435 | |
| mg, | 2,0 millimól), | Boc-Ala | (378 | mg, | 2,0 | millimól), | Boc-Nle (462 |
| mg, | 2,0 millimól), | Boc-Gln | (492 | mg, | 2,0 | millimól), | Boc-Lys(2- |
-Cl-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg,
2,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), BocTyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), Boc-Phe (530 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól) és Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 millimól). A peptidgyantát a szintetizátorról eltávolítjuk, a jegyzőkönyyv 1-8.
lépését végezzük el és 1,0 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 % DIPEA/metilén-kloriddal képezett oldatával 30 percen át reagáltatjuk. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk, ily módon 2,25 g peptidgyantát kapunk.
l,5.g (0,18 millimól) fenti gyantát 6 ml dimetil-szulfiddal és 2 ml folyékony hidrogén-fluoriddal 0 °C-on 2 órán át kezelünk. A reakcióelegyet bepároljuk és a maradékot 1 ml anizollal és 9 ml folyékony hidrogén-fluoriddal 0 °C-on 45 percen át kezeljük. A reakcióelegyet bepároljuk és a maradékot 2x30 ml dietil-éterrel és 4x30 ml etil-acetáttal mossuk. A gyantát 3x15 ml 10 %-os ecetsavval és 2x20 ml vízzel extraháljuk. Az egyesített vizes szűrleteket liofilizáljuk. 800 mg fehér szilárd ·* ·· · ·<
······· • *·· 4 ·· • · · · · ···· 4· ··· ··
- 36 anyagot kapunk.
400 mg (0,09 millimól) fenti terméket az 5. példában leírt HP1C tisztításnak vetünk alá, azzal a változtatással, hogy az eluálást 10-40 % lineáris gradiens szerint 3 órán át végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 47,0 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
12. Példa
Ac-[Lys12,Nle1?,Alá2 2,Val2 6,Thr2 8]-VIP
0,75 g (0,2 millimól) a 10. példa szerint előállított BocThr(Bzl)-BHA gyantát a Applied Biosystems 430 A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást a 11. példában leírt módon végezzzük el azzal a változtatással, hogy az 5. és 6. ciklusban Boc-Ala és Boc-Tyr(2,6-DCB) helyett 499 mg (2,0 millimól) Boc-Leu-t illetve 378 mg (2,0 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A nyers peptidet a szintetizátorról eltávolítjuk, a jegyzőkönyv 1-8. lépése szerint hasítjuk és a 11. példában leírtak szerint ecetsavanhidriddel kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,6 g peptidgyantát kapunk.
0,8 g (0,1 millimól) fenti gyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezelünk. Liofilizálás után 400 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC segítségével tisztítjuk azzal a változtatással, hogy az eluálást 25-35 % lineáris gradiens sze37 rint végezzük el. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 17,3 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: számított: 3203,7; talált: 3203,8.
13. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá21,Val26,Thr28]-VIP
0,7 g (0,19 millimól) a 10. példa szerint előállított BocThr(Bzl)-BHA gyantát Applied Biosystems 430A modell peptidszintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szntézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást a 11. példában leírt módon végezzzük el azzal a változtatással, hogy az 5. és 7. ciklusban Boc-Ala és Boc-Lys(2-C1-2) helyett 499 mg (2,0 millimól) Boc-Leu-t illetve 378 mg (2,0 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantát a szintetizátorról eltávolítjuk, a jegyzőkönyv 1-8. lépése szerint a 11. példában leírtak szerint hasítjuk és szobahőmérsékleten 15 percen át 15 % ecetsav/metilén-klorid eleggyel kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,4 g peptidgyantát kapunk.
A kapott peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 750 mg fehér szilárd anyagot kapunk. Az ily módon nyert peptid 250 mg-os részletét a 12. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá. A fő csúcsot az összeegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 20 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
14. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Ala28,Val26,Thr28]-VIP
0,7 g (0,19 millimól), a 10. példa szerint előállított
Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát Appplied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást a 11. példában leírtak szerint végezzük el azzzal a változtatással, hogy az 5. és 8. ciklusban Boc-Ala és Boc-Lys(2-C1-Z) helyett 499 mg (2,0 millimól) Boc-Leu-t illetve 378 mg (2,0 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantát a szintetizátorról eltávolítjuk, a jegyzőkönyv 1-8. lépése szerint hasítjuk és a gyantát a 11. példában leírt módon ecetsavanhidriddel kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk,
1,2 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 270 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 12. példában leírtak szerint preparatív HPLC segítségével tisztítjuk. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 12,4 mg fehér port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: számított: 3238,7; talált: 3238,2.
15. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28]-VIP
17,7 g (2,6 milliekvivalens) benzhidrilamin kopolisztirol1 % divinilbenzol térhálósított gyantát (200-400 ASTM mesh,
Vega Biochem.) 160 ml metilén-kloridban duzzasztunk, szűrjük és az 1. táblázatban közölt jegyzőkönyv 7-8. lépésének felhasználásával mossuk. A gyantát 160 ml metilén-kloridban újraszuszpendáljuk és 6,25 g (20,2 millimól) Boc-Thr(Bzl)-t és 2,10 g (10,1 millimól) diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 8 órán át rázzuk, szűrjük, majd az 1. táblázat szerinti jegyzőkönyv 10-14. lépését végezzük el. A Kaiser ninhidrin analízis negatív. A reagálatlan aminocsoportokat oly módon fogjuk be, hogy a gyantát 5 ml ecetsavanhidrid és 5 ml DIPEA 150 ml metilén-kloriddal képezett oldatával 60 percen át kezeljük, szűrjük és a 13-14. lépés szerint mossuk. A gyantát egy éjjelen át vákuumban szárítjuk. 18,0 g Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát kapunk. Ennnek egy részletét aminosav-analízisnek vetjük alá, amelynek eredménye 0,17 millimól Thr/g.
18,0 g (3,06 millimól) Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát a fenti jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást Boc-aminosavból és diciklohexilkarbodiimidből készített szimmetrikus anhidridek felhasználásával végezzük el. A Boc-aszparagint és Boc-glutamint a megfelelő HOBT aktív észterek formájában kapcsoljuk. Öt kapcsolási ciklust hajtunk végre. Az egyes ciklusokban az alábbi komponenseket alkalmazzuk: Boc-Leu (6,1 g, 24,5 millimól), Boc-Val (5,32 g, 24,5 millimól), Boc-Ser(Bzl) (7,23 mg, 24,5 millimól), Boc-Asn (3,13 g, 13,5 millimól) és Boc-Leu (6,1 g, 24,5 millimól). A gyantát vákuumban szárítva 22,9 g Boc-hexapeptid gyantát kapunk.
0,768 g (0,1 millimól) fenti gyantán 22 kapcsolási ciklust hajtunk végre, az egyes ciklusokban az alábbi komponenseket alkalmazzuk: Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (332 mg, 0,8 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (332 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Nle (185 mg, 0,8 millimól), Boc-Gln (108 mg, 0,44 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (332 mg, 0,8 millimól), Boc-Arg(Tos) (342 mg, 0,8 millimól), Boc-Leu (199 mg, 0,8 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (332 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) 9247 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilénklorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés felhasználásával mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,12 g gyantát kapunk.
0,275 g (0,065 millimól) fenti gyantát a 11. példában leírt módon 3 ml dimetil-szulfiddal és 1 ml folyékony hidrogénfluor iddal 2 órán át 0 °C-on kezelünk. A reakcióelegyet bepároljuk és a maradékot 0,6 ml anizollal és 4,5 ml folyékony hidrogén-fluoriddal 0 °C-on 45 percen át kezeljük. A reakcióelegyet bepároljuk és a maradékot 1x15 ml dietil-éterrel és 3,15 ml etil-acetáttal mossuk. A gyantát 3x20 ml 10 %-os ecetsawal extraháljuk. Az egyesített vizes szőrieteket liofilizálva 367 mg fehér szilárd anyagot kapunk.
A fenti nyersterméket az 5. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetünk alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 10-40 % lineáris gradiens szerint 4 órán át végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 23 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
16. Példa
Ac-[Lys12,Alá17,Val26,Thr28]-VIP
3,5 g ((0,96 millimól), a 10. példa szerint előállított
Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolát Boc-aminosavból és diciklohexilkarbodiimidből készített szimmetrikus anhidridekkel végezzük el. A Boc-aszparagint és Boc-glutamint a megfelelő aktív HOBT észterek formájában kapcsoljuk. Két kapcsolási ciklust végzünk: az egyes ciklusokban 1,78 g (7,7 millimól) Boc-Leu-t és 1,68 g (7,7 millimól) Boc-Val-t alkalmazunk. 3,72 g Boc-tripeptid gyantát kapunk.
3,41 g (0,88 millimól) fenti gyantát egy ciklusban 2,28 g (7,7 millimól) Boc-Ser(Bzl)-el kapcsolunk. 3,52 g Boc-tetrapeptid gyantát kapunk.
3,2 g (0,80 millimól) fenti gyantát két ciklusban 822 mg (3,54 millimól) Boc-Asn-el és 1,6 g (6,4 millimól) Boc-Leu-al kapcsolunk. 3,2 g Boc-hexapeptid gyantát kapunk.
2,56 g (0,64 millimól) fenti gyantát három ciklusban 2,26 • * «
- 42 g (5,1 millimól) Boc-Tyr((2,6-DCB)-el, 2,13 g (5,1 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-el és 2,13 g (5,1 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-el kapcsolunk. 3,2 g Boc-nonapeptid gyantát kapunk.
2,8 g (0,56 millimól) fenti gyantát két ciklusban 978 mg (4,5 millimól) Boc-Val-al és 851 mg (4,5 millimól) Boc-Ala-val kapcsolunk. 2,8 g Boc-undekapeptid gyantát kapunk.
0,39 g (0,078 millimól) gyantát 17 kapcsolás ciklusnak vetünk alá. Az egyes ciklusoknál az alábbi komponenseket alkalmazzuk: Boc-Ala (118 mg, 0,62 millimól), Boc-Gln (85 mg, 0,34 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (260 mg, 0,62 millimól), Boc-Arg (Tos (269 mg, 0,62 millimól), Boc-Leu (156 mg, 0,62 millimól), Boc-Lys(2-cl-Z) (260 mg, 0,62 millimól), Boc-Thr(Bzl) (194 mg, 0,62 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (276 mg, 0,62 millimól), Boc-Asn (80 mg, 0,34 millimól), Boc-Asp(OcHx) (198 mg, 0,62 millimól), Boc-Thr(Bzl) (194 mg, 0,62 millimól), Boc-Phe (166 mg, 0,62 millimól), Boc-Val (136 mg, 0,62 millimól), Boc-Ala (119 mg, 0,62 millimól), Boc-Asp(OcHx) (198 mg, 0,62 millimól), Boc-Ser(Bzl) (185 mg, 0,62 millimól) és Boc-His(Tos) (257 mg, 0,62 millimól). A peptidgyantát vákuumban szárítjuk. 0,55 g oktakozapeptid gyantát kapunk. 0,275 g (0,039 g millimól) fenti gyantát 0,5 ml ecetsavanhidrid 10 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezelünk. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,2 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 15. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 139 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers pepiidet a 15. példában leírt módon preparatív HPLC segítségével tisztítjuk. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 6,6 mg amorf fehér port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
17. Példa
Ac-[Lys12,Alá16,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
9/5 g (3,61 millimól) benzhidrilamin gyantát (200-400 ASTM mesh, Bachem) a 10. példában leírt módon kezelünk azzal a változtatással, hogy a gyantát 3,35 g (10,8 millimól) BocThr(Bzl)-el, és 1,12 g (5,42 millimól) diciklohexilkarbodiimiddel 18 órán át kapcsoljuk. A gyantát vákuumban egy éjjelen át szárítjuk. 9,9 g Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát kapunk, amelynek aminosav-anallízise az alábi eredményt adja: 0,17 millimól Thr/g.
9,8 g (1,7 millimól) Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát a fenti jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Az összes kapcsolást Boc-aminosavből és diciklohexilkarbodiimidből készített szimmetrikus anhidridekkel végezzük el. A Boc-aszpara.gint és Boc-glutamint a megfelelő aktív HOBT észterek formájában kapcsoljuk. Öt kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbbi komponenseket alkalmazva: Boc-Leu (1,5 g, 6,0 millimól), Boc-Val (1,3 g, 6,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (1,8 g, 6,0 millimól), Boc-Asn (773 mg, 3,3 millimól) és Boc-Leu (1,5 g, 6,0 millimól). A gyantát vákuumban szárítjuk. 12,2 g Boc-hexapeptid gyantákat kapunk.
8,2 g (1,13 millimól) fenti gyantát hat kapcsolási ciklus* · * · · · · • · * · · · · • · · · · · · • · · · · ···· ·· ··· »· nak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Tyr(2,6-DCB) (1,77 g, 4,0 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (1,67 g, 4,0 millimól) és Boc-Lys(2-C1-Z) (1,67 g, 4,0 millimól), Boc-Val (876 mg, 4,0 millimól), Boc-Ala (762 mg, 4,0 millimól) és Boc-Nle (932 mg, 4,0 millimól). 10,2 g Boc-dekapeptid gyantát kapunk.
0,9 g (0,1 millimól) fenti gyantát Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 16 kapcsolási ciklust hajtunk végre, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg,
2,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól),
Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), Boc-Phe (530 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól) és Boc-His(Tos) (819 mg, 2,0 millimól). A peptidgyantát a szintetizátorról eltávolítjuk, a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést végezzük el és 0,6 ml ecetsavanhidrid 12 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 20 percen át reagáltatjuk. A gyantát a 1014. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,3 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 155 mg fehér szilárd • ·
- 45 anyagot kapunk. A nyers peptidet az 5. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 20-40 % lineáris gradiens szerint végezzük el. A fő csúcsot az Összegyűjtött reakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 35,2 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
18. Példa
Ac-[Lys12,Alá15,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
0,25 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában ismertetett módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a 13. ciklusban Boc-Lys(2-C1-Z) helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet eltávolítjuk. 128 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás után 35,8 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3238,7; talált: 3237,9.
19. Példa
Ac-[Lys12,Alá14,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
0,25 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában ismertetett módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a 14. ciklusban Boc-Arg(Tos) helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (368 mg) a peptidet eltávolítjuk. 112 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás után 24,7 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint ♦ *« «
- 46 • · «V • · homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3210,7; talált: 3210,8.
20. Példa
Ac-[hys12,Alá13,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
0,255 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában ismertetett módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a 15. ciklusban Boc-Leu helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (416 mg) a peptidet eltávolítjuk. 125 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás után 24,2 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3253,7; talált: 3253,6.
21. Példa
Ac-[Alá12,Nle17,Val28,Thr28]-VIP
0,254 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában ismertetett módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy az első ciklusban Boc-Lys(2-C1-Z) helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet eltávolítva 128 mg nyers peptidet kapunk. HPLC tisztítás után 27,0 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3238,7; talált: 3238,1.
··*
22. Példa
Ac-[Alá11,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
25,0 g (17,5 milliekvivalens) benzhidrilamin kopolisztirol-1% divinilbenzol térhálósított gyantát (200-400 ASTM mesh, Bachem) 160 ml metilén-kloridban duzzasztunk, szűrjük és az 1. táblázat szerinti jegyzőkönyv 7-8. lépésének felhasználásával mossuk. A gyantát 160 ml metilén-kloridban újraszuszpendáljuk, majd 16,2 g (52,5 millimól) Boc-Thr(Bzl)-t és 5,4 g (26,2 millimól) diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. Az elegyet szobahőmérsékleten 6 órán át rázatjuk, szűrjük és az 1. táblázat szerinti jegyzőkönyv 10-14. lépését végezzük el. A Kaiser ninhidrin analízis negatív. A reagálatlan amin-csoportokat oly módon fogjuk be, hogy a gyantát 5 ml ecetsavanhidrid és 5 ml DIPEA 150 ml metilén-kloriddal képezett oldatával kezeljük és a jegyzőkönyv 13-14. lépése szerint mossuk. A gyantát vákuumban szárítjuk. 29,6 g Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát kapunk. A gyanta egy részét aminosav-analízisnek vetjük alá; ennek eredménye 0,21 millimól Thr/g.
14,0 g (2,94 millimól) fenti gyantát a 15. példa szerinti jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfá^isú szintézisnek vetjük alá. 11 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Leu (5,9 g, 23,5 millimól), Boc-Val (5,1 g, 23,5 millimól), Boc-Ser(Bzl) (6,9 g, 23,5 millimól), Boc-Asn (3,0 g, 13,0 millimól), Boc-Leu (5,9 g, 23,5 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (10,3 g, 23,5 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (9,8 g, 23,5 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (9,8 g, 23,5 millimól), Boc-Val (5,1 g, 23,5 millimól), Boc-Ala (4,4 g, 23,5 ··* · ♦ · • « · *·· «4 ·
- 48 ~ millimól) és Boc-Nle (5,4 g, 23,5 millimól). 26 g Boc-dekapeptid gyantát kapunk.
17,3 g (1,96 millimól) fenti gyantán 4 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gln (2,12 g, 8,6 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (6,5 g, 15,7 millimól), Boc-Arg(Tos) (6,7 g, 15,7 millimól) és Boc-Leu (3,9 g, 15,7 millimól). A gyantát vákuumban szárítjuk. 19,7 g Boc-hexapeptid gyantát kapunk.
1,0 g (0,1 millimól) fenti gyantán 12 kapcsolási ciklust végzünk, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-Cl-Z) (332 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (173 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantával a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést végezzük el, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át- kezeljük. A gyantát a
10-14. lépés felhasználásával mossuk és vákuumban szárítjuk.
1,2 g peptidgyantát kapunk.
A kapott peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 600 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptid 400 mg-os részletét a 11. példában leírt preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá. A fő csúcsot az összegyűjtött frakció analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 63 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
23. Példa
Ac-[Ala10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
1,0 g (0,1 millimól), a 22. példa szerint előállított Boc-hexadekapeptid gyantán 12 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-C1-Z), (332 ng, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) 247 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (2477 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (173 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantát a jegyzőkönyv 1-8. lépésének vetjük alá, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,1 g peptidgyantát kapunk.
A kapott peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-f luoriddal kezeljük. Liofilizálás után 700 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptid 290 mg-os részletét a 11. példában leírt preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 20-40 % lineáris gradiens szerint végezzük el. A fő csúcsot az összegyűjtött frakció analitikai HPLC analízisével összegyűjtjük és liofilizáljuk. 35,7 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
24. Példa
Ac-[Alá9,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
0,68 g (0,075 millimól), a 17. példa szerint előállított Boc-dekapeptidgyantát a 15. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 16 kapcsolási ciklust végzünk, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gln (102 mg, 0,41 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (314 mg, 0,75 millimól), Boc-Arg(Tos) (324 mg, 0,75 millimól), Boc-Leu (188 mg, 0,75 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (314 mg, 0,75 millimól), Boc-Thr(Bzl) (234 mg, 0,75 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (333 mg, 0,75 millimól), Boc-Ala (143 mg, 0,75 millimól), Boc-Asp(OcHx) (238 mg, 0,75 millimól), Boc-Thr(Bzl) (234 mg, 0,75 millimól), Boc-Phe (200 mg, 0,75 millimól), Boc-Val (164 mg, 0,75 millimól), Boc-Ala (143 mg, 0,75 millimól), Boc-Asp(OcHx) (238 mg, 0,75 millimól), Boc-Ser(Bzl)) (233 mg, 0,75 millimól) és BocHis(Tos) (310 mg, 0,75 millimól). A peptidgyantát a jegyzőkönyv 1-8. lépése szerint kezeljük, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képzett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,9 g peptidgyantát kapunk.
A peptidgyantát a 11. példa szerinti módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 336 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 10-40 % lineáris gradiens szeerint 2 órán át 4,0 ml/perc áthaladási sebességgel végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 11,8 g fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
25. Példa
Ac-[Alá8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
2,0 g (0,2 millimól), a 22. példa szerint előállított Boc-hexapeptidgyantát négy kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-Cl— Z) (664 mg, 1,6 millimól), Boc-Thr(Bzl) (495 mg, 1,6 millimól), Boc-Tyr (2,6-DCB) (705 mg, 1,6 millimól) és Boc-Asn (204 mg,
0,88 millimól). 2,2 g Boc-eikozapeptidet kapunk.
1,1 g (0,1 mól) fenti peptidgyantát 8 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, lépésenként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (248 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és BocHis(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantát a jegyzőkönyv 1-8. lépésének vetjük alá, majd 0,5 ml ecetsav -15 ml DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk.
1,1 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 573 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 10-40 % lineáris gradiens szerint végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 69,0 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
26. Példa
Ac-[Ala7,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
1,1 g (0,1 millimól), a 25. példa szerint előállított Boc-eikozapeptidet 8 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, cikluson-
| ként az alábbi | komponenseket alkalmazva: Boc-Asp(OcHx) | (252 | mg, | ||||||
| 0,8 | millimól), | Boc-Ala | (151 | mg, | 0,8 | millimól), | Boc-Phe | (212 | mg, |
| 0,8 | millimól), | Boc-Val | (174 | mg, | 0,8 | millimól), | Boc-Ala | (151 | mg, |
0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,1 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példa szerint hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 700 mg fehér szilárd anyagot kapunk. 400 mg nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetünk alá azzal a változtatássall,, hogy az eluálást 10-45 % lineáris gradiens szerint végezzük el. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 29 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a • ♦ ·
- 53 kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
27. Példa
Ac-[Alá6,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
1,0 g (0,1 millimól), a 22. példa szerint előállított Boc-hexapeptidet 12 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-C1-Z) (332 mg,
0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (173 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el, majd 0,5 ml ecetsav 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 11-14. lépés szerint mossuk, és vákuumban szárítjuk. 1,3 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példában leírt módon hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 531,4 mg fehér szilárd anyagot kapunk. .A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparativ HPLC tisztításnak vetjük alá. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 200 mg féligtisztított anyagot kapunk. A vegyületet 10 %-os ecetsavban Sephadex G-25-ön végzett gélszűréssel tovább tisztítjuk. 104,5 mg fehér port kapunk, amelynek HPLC úton végzett űjratisztítása után 20 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a
- 54 kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
28. Példa
Ac-[Alá5,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
3,0 g (0,3 millimól), a 22. példa szerint előállított Boc-hexapeptidet 7 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-C1-Z) (996 mg,
2,4 mmól), Boc-Thr(Bzl) (742 mg, 2,4 millimól), Boc-Tyr((2,6DCB) (1,05 g, 2,4 millimól), Boc-Asn (302 mg, 1,3 millimól), Boc-Asp(OcHx) (757 mg, 2,4 millimól), Boc-Thr(Bzl) (742 mg, 2,4 millimól), és Boc-Phe (637 mg, 2,4 millimól). 3,6 g Boc-trikozapeptidet kapunk.
1,2 g (0,1 millimól) fenti gyantát 5 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól), és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantával a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA-metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,13 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példa szerint hidrogénfluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 600 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 1-40 % lineáris gradiens szerint végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC .··. .··. .: .·· • · * t · «· ···« · · ♦ · ··
- 55 analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 64 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
29. Példa
Ac-[Alá3,Lys12,Nle17,Val26,Thr28] -VIP
1,2 g (0,1 millimól), a 18. példa szerint előállított Boc-trikozapeptidet 5 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1,2 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példa szerint hidrogénfluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 700 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 10-45 % lineáris gradiens szerint végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 9,6 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg.
30. Példa
Ac-[Alá2,Lys12,Nle17,Val26,Thr28] -VIP
0,25 g (0,05 millimól), a 2. példa szerint előállított
-56Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát az 5. példában leírt szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a 26. ciklusban Boc-Ser(Bzl) helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (381 mg) a peptidet eltávolítva 112 mg nyers peptidet kapunk, majd HPLC tisztítás után 41,2 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3278,8; talált: 3279,5.
31. Példa
Ac-[Ala1,Lys12,Nle17,Val26 zThr28]-VIP
1,2 g (0,1 millimól), a 28. példa szerint előállított Boc-trikozapeptidet 5 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantát a jegyzőkönyv 1-8. lépése szerint kezeljük, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 1 g peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példa szerint hidrogénfluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 640 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 20-50 % és 25-40 % lineáris gradiens szerint végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 45 mg * »9 · 1 · « ♦ · · • · « A · ·
- 57 fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: számított: 3229,7; talált: 3228,8.
32. Példa
Ac-[Gly1,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8]-VIP
4,0 g (0,4 millimól), a 22. példa szerint előállított Boc-hexadekapeptid gyantát 10 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-C1-Z) (1,33 g, 3,2 millimól), Boc-Thr(Bzl) (990 mg, 3,2 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (1,41 g, 3,2 millimól), Boc-Asn (409 mg,
1,76 millimól), Boc-Asp(OcHx) (1,02 g, 3,2 millimól), Boc-Thr(Bzl) (990 mg, 3,2 millimól), Boc-Phe (849 mg, 3,2 millimól), Boc-Val (695 mg, 3,2 millimól), Boc-Ala (606 mg, 3,2 millimól) és Boc-Asp(OcHx) (1,02 mg, 3,2 millimól). 6,0 g Boc-hexakozapeptid gyantát kapunk.
0,629 g (0,08 millimól) fenti gyantán két kapcsolási ciklust hajtunk végre, ciklusonként 118 mg (0,4 millimól) Boc-Ser(Bzl)-t és 70 mg (0,4 millimól) Boc-Gly-t alkalmazva. A peptidgyantán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést hajtjuk végre, majd 0,5 ml ecetsavanhidrijd 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 546 mg peptid gyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példa szerint hidrogénfluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 210 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet az 5. példában leírt módon preparatív HPLC úton tisztítjuk. A fő csúcsot az összegyűjtött
- 58 frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 24 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: számított: 3215,7; talált: 3215,4.
33. Példa
Ac-[Leu5,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
1,0 g (0,1 millimól), a 22. példa szerint előállított Boc-hexadekapeptid gyantát 12 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Lys(2-C1-Z) (332 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Leu (199 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala ((152 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést hajtjuk végre, majd 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,8 mg peptidgyantát kapunk.
A fenti peptidgyantát a 11. példa szerint hidrogén-fluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 238 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet a 11. példában leírt módon preparatív HPLC segítségével kétszer tisztítjuk. A fő csúcsokat az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 17,4 mg fehér amorf port s · «» • · · * • ··· • · » · · · · kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg.
34. Példa
Boc-3-(1'-naftil)-alanin (Boc-l-Nal)
1,0 g (4,6 millimól) 3-(l'-naftil)-alanint és 512 mg (4,8 millimól) nátrium-karbonátot 20 ml vízben és 20 ml dioxánban oldunk. Az oldathoz lassan 1,26 g (5,77 millimól) di-tercier butil-dikarbonát 5 ml dioxánnal képezett oldatát adjuk. Az elegyet egy éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A dioxán nagy részét vákuumban eltávolítjuk, és a maradékot 35 ml vízben felvesszük. Az oldatot 3x25 ml dietil-éterrel mossuk, 10 %-os vizes citromsav-oldattal pH 2 értékre savanyítjuk és 4x50 ml metilén-kloriddal extraháljuk. Az egyesített metilén-kloridos fázisokat magnézium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és vákuumban bepároljuk. Az olajos hab alakjában visszamaradó anyagot -20 °C-on etil-acetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. Fehér kristályok alakjában 1,35 g cím szerinti vegyületet kapunk, kitermelés: 93 %; op.: 144-146 °C; [α]^ -47,8° (c = 1, etanol). Az íh-NMR a szerkezetet igazolja.
35. Példa
Ac-[l-Nal6,Lys12,Nle17,val26,Thr28]-VIP g (21,4 milliekvivalens) benzhidrilamin kopolisztirol-1 % divinilbenzol térhálósított gyantát (200-400 ASTM mesh Bachem) a 22. példában leírt módon kezelünk azzal a változtatással, hogy 19,9 g (64,3 millimól) Boc-Thr(Bzl)-t és 6,6 g (32,1 millimól) diciklohexilkarbodiimidet alkalmazunk. Az elegyet szobahőmérsékleten 18 órán át rázatjuk, szűrjük és az
*4
4 · ·♦» ··»
- 60 1. táblázat szerinti jegyzőkönyv 10-14. lépését alkalmazzuk. A Kaiser ninhidrid analízis negatív. A reagálatlan aminocsoportokat oly módon fogjuk be, hogy a gyantát 8 ml ecetsavanhidrid és 8 ml DIPEA 200 ml metilén-kloriddal képezett oldatával 60 percen át kezeljük, szűrjük, és a jegyzőkönyv 13-14. lépése szerint mossuk. A gyantát vákuumban szárítjuk, 34,2 g BocThr (Bzl)-BHA gyantát kapunk. A gyanta egy részletét aminosavanalízisnek vetjük alá. Ennek eredménye 0,47 millimól Thr/g.
0,75 g (0,35 millimól) Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 21 kapcsolásos ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg,
2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Nle (462 mg, 2,0 millimól), Boc-Gln (492 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (856 mg,
2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (630 mg, 2,0 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól). 2,59 g Boc-dokozapeptid gyantát kapunk.
0,74 g (0,1 millimól) fenti gyantát a 15. példában leírt, hat kapcsolási ciklusból álló szilárdfázisú szintézisnek vetjük alá. Ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazzuk: Boc-1-Nal (126 mg, 0,4 millimól), Boc-Val (87 mg, 0,4 millimól), Boc-Ala (76 mg, 0,4 millimól), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 millimól), Boc-Ser(Bzl) (118 mg, 0,4 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával kétszer 60 percen át reagáltatjuk. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,8 g peptidgyantát kapunk, amelyből a peptidet az 5. példában leírt módon eltávolítjuk. 366 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC segítségével tisztítjuk azzal a változtatással, hogy az eluálást 27 - 37 % lineáris gradiens szerint végezzük el. 49,6 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3345,9; talált: 3345,5.
36. Példa
Boc-p-fluor-fenil-alanin (Boc-p-F-Phe)
988 mg (4,91 millimól) p-fluor-fenil-alanin-hidrátot és
525 mg (44,95 millimól) nátrium-karbonátot 30 ml 50 %-os vizes dioxánban oldunk. Az oldathoz lassan 1,3 g (5,95 millimól) ditercier butil-dikarbonát és 3 ml dioxán oldatát adunk. Az elegyet szobahőmérsékleten egy éjjelen át keverjük, majd bepároljuk. A maradékot 20 ml vízben oldjuk, 3x20 ml dietil-éterrel mossuk, 0,1 n sósavval pH 2 értékre savanyítjuk és 3x30 ml etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített etil-acetátos extraktumokat magnézium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. A maradékot etil-acetát és hexán elegyéből kristályosítjuk. Finom fehér tűk alakjában 1,14 g cím szerinti vegyületet kapunk, kitermelés: 82 %, op.: 52-54 °C, [α]ο “23,13° (c 1, etil-acetát). Az iH-NMR a kívánt szerkezetnek felel meg.
Analízis a C H FNO képlet alapján:
18 4 számított: C % = 59,39, H % = 6,40, N % = 4,94; talált: C % = 59,51, H % = 6,60, N % = 4,95.
37. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
0,68 g (0,1 millimól), a 35. példa szerint előállított Boc-dokozapeptid gyantát a 15. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Hat ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-p-F-Phe (113 mg, 0,4 millimól), Boc-Val (87 mg, 0,4 millimól), Boc-Ala (76 mg, 0,4 millimól), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 millimól), Boc-Ser(Bzl) (118 mg, 0,4 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést hajtjuk végre, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával kétszer 60 percen át reagáltatjuk. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,7 g peptidgyantát kapunk, amelyről a peptidet az 5. példa szerint eltávolítjuk. 270 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC segítségével tisztítjuk. 84,1 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3313,8; talált: 3313,0.
38. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
7,48 g (1,0 millimól), a 15. példa szerint előállított Boc-hexapeptid gyantát 10 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Tyr(2,6-DCB) (1,76 g, 4,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (1,66 g, 4,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (1,66 g, 4,0 millimól), Boc-Val (869 mg, 4,0 millimól), Boc-Ala (1,5 g, 8,0 millimól), Boc-Nle (925 mg, 4,0 millimól), Boc-Gln (1,08 g, 4,4 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (1,66 g, 4,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (1,71 g, 4,0 millimól) és Boc-Leu (998 mg, 4,0 millimól). A peptidgyantát vákuumban szárítjuk; 9,6 g Boc-hexadekapeptid gyantát kapunk.
7,68 g (0,8 millimól) fenti gyantán 1,5 g (3,2 millimól) Boc-Lys(Fmoc)-al egy kapcsolási ciklust hajtunk végre. 8,32 g Boc-heptadekapeptid gyantát kapunk.
6,24 g (0,26 millimól) fenti gyantán 742 mg (2,4 millimól) Boc-Thr(Bzl)-el és 1,06 g (2,4 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-el két kapcsolási ciklust végzünk el. 6,28 g Boc-nonadekapeptid gyantát kapunk.
2,09 g (0,2 millimól) fenti gyantán 9 kapcsolási ciklust hajtunk végre, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Asn (204 mg, 0,88 millimól), Boc-Glu(OFm) (340 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (248 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (258 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól)és Boc-His(Bom) (330 mg, 0,88 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést végezzük el, majd 0,25 ml ecetsavanhidrid és 70 ml DIPEA 20 ml metilén-kloriddal képezett oldatával 20 percen át kezeljük. A gyantát 20 % piperidin/dimetil-formamid eleggyel 20 percen át kezeljük, a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 2,28 g peptidgyantát kapunk.
0,57 g (0,05 millimól) fenti gyantát a 11. példában leírt módon 6 ml dimetil-szulfiddal és 2 1 folyékony hidrogén-fluoriddal 2 órán át 0 °C-on kezelünk. A reakcióelegyet bepároljuk és a maradékot 1,0 ml anizollal és 9 ml folyékony hidrogén-fluoriddal 0 °C-on 45 percen át kezeljük. A reakcióelegyet bepároljuk, és a maradékot 1x15 ml dietil-éterrel és 3x15 ml etil-acetáttal mossuk. A gyantát 3x15 ml 10 %-os ecetsavval extraháljuk. Az egyesített vizes szűrleteket liofilizálva 250 mg fehér szilárd anyagot kapunk.
A nyersterméket az 5. példában leírt módon preparatív HPLC tisztításnak vetjük alá azzal a változtatással, hogy az eluálást 10-40 % lineáris gradiens szerint 4 órán át végezzük. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és liofilizáljuk. 40 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg.
39. Példa
Boc-3-(2·-naftil)-alanin (Boc-2-Nal)
1,05 g (4,83 millimól) 3-(2'-naftil)-alanint és 510 mg (4,83 millimól) nátrium-karbonátot 1,26 g (5,77 millimól) di-tercier butil-dikarbonáttal a 34. példában leírt módon kezelünk. A reakcióelegy feldolgozása után a metilén-kloridos fázisokat bepároljuk és a visszamaradó átlátszó olajat etil-acetát és petroléter elegyéből kristályosítjuk. Fehér tűk alakjában 1,25 g cím szerinti vegyületet kapunk, kiteremelés: 82 %, op.: 92-94 °C, [oJd = +43,15° (c=l, etanol). Az 1H-NMR a kívánt szerkezetnek felel meg.
Analízis a C H NO képlet alapján:
21 4
| számított: | C % = 68,56, H % = 6,71, N % = 4,44; |
| talált: | C % = 68,66, H % = 7,02, N % = 4,31. |
40. Példa
Ac-[2-Nal10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
0,85 g (0,4 millimól), a 35. példa szerint előállított
Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 17 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Nle (462 mg, 2,0 millimól), Boc-Gln (492 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól) és -Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól). 2,8 g boc-oktadekapeptid gyantát kapunk.
°/7 9 (0/1 millimól) fenti gyantán 10 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-2-Nal (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, (0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést hajtjuk végre, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,9 g peptidgyantát kapunk, amelyről a peptidet eltávolítjuk. 210 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC segítségével tisztítjuk. 46,8 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3329,8; talált: 3328,8.
41. Példa
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP
0,7 g (0,1 millimól), a 40. példa szerint előállított Bocoktapeptid-gyantát 10 kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-p-NH(Z)-Phe (331 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól), Boc-Asp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyan67 tán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést hajtjuk végre, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,9 g peptidgyantát kapunk, amelyről a peptidet az 5. példában leírt módon eltávolítjuk. 247 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC segítségével tisztítjuk. 32,7 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3294,8; talált: 3294,1.
42. Példa
Boc-O-metil-tirozin(Boc-O-Me-Tyr)
1,0 g (5/1 millimól) O-metil-tirozint és 1,08 g (10,2 millimól) nátrium-karbonátot a 34. példában leírt módon 1,7 g (77,7 millimól) di-tercier-butil-dikarbonáttal kezelünk azzal a változtatással, hogy 25 ml vizet és 12 ml dioxánt alkalmazunk. A reakcióelegy feldolgozása után a metilén-klorid rétegeket bepároljuk. A visszamaradó átlátszó olajat dietiléter és petroléter elegyéből kristályosítjuk. Fehér szilárd anyag alakjában 1,1 g cím szerinti.vegyületet kapunk, kitermelés: 73 %, op.: 94-96 °C.
43. Példa
Ac-[O-Me-Tyr10,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8]-VIP
0,85 g (0,4 millimól), a 35. példa szerint előállított Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát (Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példában ismertetett eljárással analóg módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 13 kap68 csolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu 499 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg,
2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Nle (462 mg, 2,0 millimól), Boc-Gln (492 mg, 2,0 millimól) és Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 millimól). 1,9 g Boc-tetradekapeptid gyantát kapunk.
A kapott gyantán a 15. példában ismertetett eljárással analóg módon négy kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Arg(Tos) (685 mg, 1,6 millimól), Boc-Leu (399 mg, 1,6 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (664 mg, 1,6 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (495 mg, 1,6 millimól). 2,1 g Boc-oktadekapeptid gyantát kapunk.
0,5 g (0,1 millimól) fenti gyantán a 15. példában leírt módon egy kapcsolási ciklust végzünk el, 118 mg (0,4 millimól) Boc-O-Me-Tyr felhasználásával. 0,5 g Boc-nonadekapeptid gyantát kapunk.
A kapott gyantát az 5. példában ismertetett eljárással analóg módon 9 kapcsolási ciklusnak vetjük alá, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Asn (232 mg, 1,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (315 mg, 1,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 millimól), Boc-Phe (265 mg, 1,0 millimól), Boc-Val (217 mg, 1,0 millimól), Boc-Ala (189 mg, 1,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (315 mg, 1,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (295 mg, 1,0 millimól) és Boc-His(Tos) (409 mg, 1,0 millimól). A kapott peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. A peptidet a gyantáról az 5. példában leírt módon leválasztjuk. 154 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC tisztításnak vetjük alá. 36,4 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3309,8; talált: 3309,2.
44. Példa
Boc-m-fluor-DL-tirozin(benzil) [Boc-m-F-DL-Tyr(Bzl)]
1,94 g (9,74 millimól) m-fluor-DL-tirozint 10,1 ml 2 n nátrium-hidroxid-oldatban oldunk, ezután 1,22 g (4,87 millimól) réz(II)szulfát-pentahidrátot adunk hozzá. Az elegyet 10 percen át 50-60 ’C-on melegítjük, majd jéggel lehűtjük. Erős keverés közben 42 ml metanolt adunk hozzá. Ezután jégfürdőn való keverés közben 2,25 g (13,1 millimól) benzil-bromidot csepegtetünk hozzá. Az elegyet 30 perc múlva szobahőmérsékletre melegítjük, és egy éjjelen át keverjük. Az acélkék színű csapadékot leszűrjük és 20-20 ml 20 %-os vizes metanollal, metanollal és acetonnal mossuk, végül vákuumban szárítjuk. 3,14 g terméket kapunk, amelyet 100 ml 50 %-os vizes etanolban szuszpendálunk és visszafolyató hűtő alkalmazása mellettt forralunk. Az elegyhez 3,62 g (9,7 millimól) dinátrium-etilén-diamin-tetraecetsav-hidrátot adunk és az oldatot 150 ml, 50 %-os vizes etanollal hígítjuk. Az oldatot forrón szűrjük, és a szűrletet órán át hűtjük. A csaknem fehér csapadékot leszűrjük és szárítjuk. 3,57 g terméket kapunk.
3,42 g (9,7 millimól) fenti szilárd anyagot és 2,05 g (19,3 millimól) nátrium-karbonátot 75 ml vízben és 25 ml dioxánban szuszpendálunk. A szuszpenzióhoz 3,2 g (14,6 millimól) di-tercier butil-dikarbonát 3 ml dioxánnal képezett oldatát adjuk és egy éjjelen át szobahőmérsékleten keverjük. A dioxán nagy részét vákuumban eltávolítjuk és a maradékot 75 ml vízben felvesszük. Az oldatot 3x25 ml dietil-éterrel mossuk, 10 %-os citromsav-oldattal pH 2 értékre savanyítjuk és 3x40 ml metilén-kloriddal extraháljuk. Az egyesített metilén-kloridos extraktumokat magnézium-szulfát felett szárítjuk, szűrjük és bepároljuk. Az olajos habszerű maradékot dietil-éterrel és petroléter elegyéből kristályosítjuk. Fehér por alakjában 1,8 g cím szerinti vegyületet kapunk, kitermelés: 47 %. Op.: 122-
122,5 °C; az XH-NMR a kívánt szerkezetnek felel meg.
45. Példa
Ac-[Ly s12,Nle17,m-F-Tyr2 2,Val2 6,Thr2 8]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 28 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 millimól) Boc-Leu (249 mg, 1,0 millimól), Boc-Val (217 mg, 1,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (295 mg, 1,0 millimól), Boc-Asn (232 mg, 1,0 millimól), Boc-Leu (249 mg, 1,0 millimól), Boc-m-F-Tyr(Bzl) (195 mg, 0,5 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (415 mg, 1,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg,
1,0 millimól), Boc-Val (217 mg, 1,0 millimól), Boc-Ala (189 mg, 1,0 millimól), Boc-Nle (231 mg, 1,0 millimól), Boc-Gln (246 mg, 1,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg, 1,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (428 mg, 1,0 millimól), Boc-Leu (249 mg, 1,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (415 mg, 1,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (440 mg, 1,0 millimól), Boc-Asn (232 mg, 1,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (315 mg, 1,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 millimól), Boc-Phe (265 mg, 1,0 millimól), Boc-Val (217 mg, 1,0 millimól), Boc-Ala (189 mg, 1,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (315 mg, 1,0 millimól), BocSer(Bzl) (295 mg, 1,0 millimól) és Boc-His(Tos) (409 mg, 1,0 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzök el és 0,5 ml ecetsavanhidrid 10 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 60 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 444 mg terméket kapunk.
A peptidet a gyantáról az 5. példában leírt módon leválasztva 177 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerint elvégzett HPLC tisztítás után 23,5 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3541,1; talált: 3540,1.
47. Példa
Ac- [Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8,Gly2 9/3 0,Cas(Acm)31]-VIP
10,0 g (7,0 milliekvivalens) benzhidrilamin kopolisztirol1% divinil-benzol gyantát (200-400 ASTM mesh, Bachem) a 10. példában leírt módon kezelünk azzal a változtatással, hogy 3,4 g (11,6 millimól) Boc-Cys(Acm)-t, 2,1 g (15,8 millimól) HOBT-t és 2,2 mg (10,5 millimól) diciklohexilkarbodiimidet alkalmazunk. Az elegyet 8 órán át szobahőmérsékleten rázatjuk. A Kaiser ninhidrin analízis negatív. A gyantát vákuumban egy éjjelen át szárítva 12 g Boc-Cys(Acm)-BHA gyantát kapunk. A gyanta egy részletét aminosav-analízisnek alávetve az alábbi eredményt kapjuk: 0,44 millimól Cys/g.
1,0 g (0,44 millimól) fenti gyantát Biosearch model 9500 peptid szintetizátoron szilárdfázisú szintézisnek vetjük alá.
Az összes kapcsolásnál ötszörös feleslegben ekvimoláris mennyiségű Boc-aminosavat és diciklohexilkarbodiimidet alkalmazunk. A Boc-aszparagint és Boc-glutamint a megfelelő aktív HOBT észterek formájában kapcsoljuk. 30 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gly (465 mg, 2,6 millimól), Boc-Gly (465 mg, 2,6 millimól), Boc-Thr(Bzl) (757 mg, 2,5 millimól), Boc-Leu (633 mg, 2,5 millimól), Boc-Val (532 mg, 2,5 millimól), Boc-Ser(Bzl) (780 mg, 2,6 millimól), Boc-Asn (580 mg, 2,5 millimól), Boc-Leu (633 mg, 2,5 millimól), Boc-Tyr(Bzl) (947 mg, 2,5 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (1,02 g,
2,5 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (1,02 g, 2,5 millimól), Boc-Val (532 mg, 2,5 millimól), Boc-Ala (500 mg, 2,6 millimól), Boc-Nle (680 mg, 2,9 millimól), Boc-Gln (650 mg, 2,6 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (1,02 g, 2,5 millimól), Boc-Arg(Tos) (1,13 g, 2,6 millimól), Boc-Leu (633 mg, 2,5 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (1,02 g, 2,5 millimól), Boc-Thr(Bzl) (757 mg, 2,5 millimól), Boc-Tyr(Bzl) (947 mg, 2,5 millimól), Boc-Asn (580 mg, 2,5 millimól), Boc-Asp(OcHx) (835 mg, 2,6 millimól), Boc-Thr(Bzl) (757 mg, 2,5 millimól), Boc-Phe (780 mg, 2,9 millimól), Boc-Val • « *» · * *
- 73 (532 mg, 2,5 millimól), Boc-Ala (500 mg, 2,6 millimól), Boc-Asp(OcHx) (835 mg, 2,6 millimól), Boc-Ser(Bzl) (780 mg, 2,6 millimól) és Boc-His(Tos) (1,08 g, 2,6 millimól). A peptidgyantáról a védőcsoportot eltávolítjuk és ecetsavanhidriddel 30 percen át kezeljük. A gyantát vákuumban szárítva 3,2 g peptidgyantát kapunk.
1,5 g peptidgyantát a 11. példában leírt módon kezelve a peptidet a gyantáról leválasztjuk. 525 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 47 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízísnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3583,1; talált: 3583,6.
48. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr2 8,Gly2 9/30,Thr31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 mlo), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában leírt módon 28 kapcsolási lépést hajtunk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t alkalmazunk. A peptidgyantát (700 mg) az 5. példában leírt módon kezelve a peptidet a gyantáról leválasztjuk és 200 mg nyers peptidet nyerünk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 63,8 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek
I • · · · · • *·* »· * · · ··
- 74 ~ felel meg. FAB-MS: MH számított: 3511,0; talált: 3510,1.
49. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8,Alá2 9>30,Met31]-VIP
0,188 g (0,075 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Advanced ChemTech) a 46. példában leírtak szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy a 2. és 3. ciklusban Boc-Gly helyett 142 mg (0,75 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (447 mg) a peptidet az 5. példában leírrt módon lehasítjuk. 192 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 10,8 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3569,1; talált: 3568,9.
50. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Alá29-31]-VIP
0,25 g (0,05 millimól), az 1. példa szerinti Boc-Ala-BHA gyantát az 5. példában leírt szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy az 5. példa szerinti 27 ciklus előtt három ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Ala (95 mg, 0,5 millimól), Boc-Ala (95 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). A peptidgyantáról (431 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 117 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 28,8 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3509,0; talált: 3508,2.
• * * * • · 9 * • · • « · » · ♦ ·· * ··
51. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29,Lys30]-vip
0/4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh,, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Két kapcsolási ciklust végzünk, ciklusonként 415 mg (1,0 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-t és 175 mg (1,0 millimól) Boc-Gly-t alkalmazva. A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust hajtunk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (873 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 272 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 59,0 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított 3481,0; talált: 3481,3.
52. Példa
Ac-[Lys12/14,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr28]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust végezzük el azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 15. ciklusban Boc-Arg(Tos) helyett 415 mg (1,0 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (778 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 158 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztiJ • 4 0« • · « • ·«» * ·« • · # · ♦ • *·« ·· ·«« ··
- 76 tás után 31,7 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3239,7; talált: 3239,9.
53. Példa
Ac-[2-Nal18,Lys12,Alá17,Val2 6,Thr28] -VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust végezzük el azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr((2,6-DCB)-t, a 12. ciklusban Boc-Nle helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 19. ciklusban Boc-Tyr(2,6-DCB) helyett 315 mg (1,0 millimól) Boc-2-Nal-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (600 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 210 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 26,5 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3287,8; talált: 3287,5.
54. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Alá29»30,Met31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként 249 mg (1,0 millimól) Boc-Met-t, 175 mg (1,0 millimól) Boc-Gly-t és 175 mg (1,0 millimól) Boc-Gly-t alkalmazva. A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F- 77 Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t és a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (651 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 185 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 22 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3583,2; talált: 3582,5.
55. Példa
Ac-[Glu8zLys12,Nle17,Val26,Thr28zGly29r30zPhe31]-VIP
0,188 g (0,075 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Advanced ChemTech) a 46. példában leírt szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá azzal a változtatással, hogy az 1. ciklusban Boc-Met helyett 199 mg (0,75 millimól) Boc-Phe-t és a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 253 mg (0,75 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 78 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 8,0 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3571,0; talált: 3569,8.
56. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8 zGly2 9/3 0
Cys(Acm31)]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantán (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példa szerinti jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézist végzünk el. Három kapcsolási ciklust ·· ·· » ·· « · « · · * · * ··· *·* « 4 · »* ··««» >7« ·<«··
- 78 végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Cys(Acm) (292 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példa szerinti 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t, a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t és a 213. ciklusban Boc-Phe helyett 142 mg (0,5 millimól) Boc-p-F-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (699 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 270 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 36,5 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3588,1. talált: 3587,7.
57. Példa
Ac-[p-F-Phe6,p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8]-VIP
0,85 g (0,4 millimól), a 35. példa szerinti Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 40. példa szerinti 17 kapcsolási ciklust elvégezve 2,28 g Boc-oktadekapeptid gyantát kapunk.
0,57 g (0,1 millimól) fenti gyantát a 15. példában leírt szilárdfázisú szintézisnek vetjük alá és 10 ciklust hajtunk végre, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-p-NH(Z)-Phe (166 mg, 0,4 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 millimól), Boc-Thr(Bzl) 124
- 79 mg, 0,4 millimól), Boc-p-F-Phe (113 mg, 0,4 millimól), Boc-Val (87 mg, 0,4 millimól), Boc-Ala (76 mg, 0,4 millimól), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 millimól), Boc-Ser(Bzl) (118 mg, 0,4 millimól) és Boc-His(Tos) (164 mg, 0,4 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv szerinti 1-8. lépést végezzük el és 0,5 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. A peptidgyantáról (603 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 252 g nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 40,4 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3312,8; talált: 3312,6.
58. Példa
Ac-[Lys12,Alal7,Val2 Thr28,Gly29/3 Cas(Acm)3 i]-VIP
1,0 g (0,44 millimól), a 47. példa szerinti Boc-Cys(Acm)-BHA gyantát Biosearch 9500 modell” peptid szintetizátoron szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 47. példában leírt 30 kapcsolási ciklust végezzük el azzal a változtatással, hogy a 14. ciklusban Boc-Nle helyett 500 mg (2,6 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a védőcsoportot lehasítjuk és ecetsavanhidriddel 30 percen át kezeljük. A gyantát vákuumban szárítjuk. 2,4 g peptidgyantát kapunk.
1,2 g fenti peptidgyantáról a peptidet a 11.példában leírt módon lehasítva 370 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 70 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3542,0; talált: 3541,7.
59. Példa
Ac- [Glu®, Lys12,14, Nle17, Val26, Thr28, Gly29/30, Met31] -VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Met (249 g, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 15. ciklusban Boc-Arg(Tos) helyett 415 mg (1,0 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-t és a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (814 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 200 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 20,6 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kivált aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3527,1; talált: 3526,7.
60. Példa
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr28]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 19. ciklusban Boc-Tyr(2,6-DCB) helyett 208 mg (0,5 millimól) Boc-p-NH(Z)-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 138 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 23,1 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH 3266,7; talált: 3266,6.
61. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Glu®,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29·30,Cys(Acm)31]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Cys(Acm) (292 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 21. ciklusban Boc—Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t és a 23. ciklusban Boc-Phe helyett 142 mg (0,5 millimól) Boc-p-F-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (900 mg) a peptidet az 5. példa szerint lehasítva 255 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 20,3 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3616,1; talált:
3515.6.
62. Példa Ac-[Glu8,Lys12,Ala17,19,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-vlP 0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200
ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Met (249 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t, a 12. ciklusban Boc-Nle helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (736 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 240 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 38,8 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3485,0; találtf
3484.6.
63. Példa Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29'30,Ala31]-v:iP 0,25 g (0,05 millimól), az 1. példa szerinti Boc-Ala gyantát az 5. példában ismertetett jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva:
Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól), Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). Az 5. példában ismertetett 27 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 20. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 167 mg (0,5 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (380 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 115 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 31,6 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3495,0; talált: 3495,1.
64. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,
Gly29»30,Met31]-VIP
0,4 9 (ö,l millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában ismertetett jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Met (249 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (800 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 200 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 20,8 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3527,1; talált: 3527,1.
65. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28,Gly29/30,Cys(Acm)31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában ismertetett jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Cys(Acm) (292 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól), és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 23. ciklusban BocPhe helyett 142 mg (0,5 millimól) Boc-p-F-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (708 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 263 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 48,8 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3574,1; talált: 3573,9.
66. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/39,
Ser31]-VIP
0,313 g (0,05 millimól), a 3. példa szerinti Boc-Ser(Bzl) gyantát az 5. példában ismertetett jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól), Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). Az 5. példában ismertetett 27 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 20. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 167 mg (0,5 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (511 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 148 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 56,7 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3511,0; talált: 3510,3.
67. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr2 8]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában ismertetett jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t, a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t és a 23. ciklusban Boc-Phe helyett 142 mg (0,5 millimól) Boc-p-F-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (700 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 230 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 52,5 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav86 analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3299,8; talált:
3299,6.
68. Példa
Ac-[Glu8,Orn12,Nle*7,Val2 6,Thr2 8]-VIP
5,5 g (0,6 millimól), a 22. példa szerinti Boc-dodekapeptid gyantán 4 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gln (655 mg, 2,66 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (2,01 g, 4,84 millimól), Boc-Arg(Tos) (2,07 g, 4,84 millimól) és Boc-Leu (1,21 g, 4,84 millimól). A gyantát vákuumban szárítjuk. 6,12 g Boc-hexadekapeptid gyantát kapunk.
2,0 g (0,2 millimól) fenti gyantán 12 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Orn(Fmoc) (182 mg, 0,4 millimól), Boc-Thr(Bzl) (250 mg, 0,8 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (102 mg, 0,44 millimól), Boc-Glu(OFm) (340 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (248 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (152 mg, 0,8 millimól), BocAsp(OcHx) (252 mg, 0,8 millimól), Boc-Ser(Bzl) (236 mg, 0,8 millimól) és Boc-His(Bom) (150 mg, 0,4 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 0,5 ml ecetsavanhidrid és 38,4 ml DIPEA 30 ml metilén-kloriddal képezett oldatával 90 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 2,4 g peptidgyantát kapunk.
1,2 g (0,1 millimól) fenti gyantát 20 % piperidin/dimetil-formamid eleggyel kétszer - 1 percen és 20 percen át 87 kezelünk és a 10-14. lépés szerint mossuk. A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 420 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 63,1 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3295,8; talált: 3295,6.
69. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá2 5,Leu2 6,Lys2 7·2 8, Gly2 9 >3 0, Thr31]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM, Bachem) az 5. példa szerinti jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünnk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Thr(Bzl) (309 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy az 1. és 2. ciklusban Boc-Thr(Bzl) és Boc-Leu helyett 2x415 mg (1,0 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-t, a 3. ciklusban Boc-Val helyett 249 mg (1,0 millimól) Boc-Leu-t, a 4. ciklusban Boc-Ser(Bzl) helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t és a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (700 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 140 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 31,0 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3551,1; talált: 3550,8
70. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Alá29-31]-VIP
0,251 g (0,05 millimól), az 1. példa szerinti Boc-Ala gyantát az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Ala (95 mg, 0,5 millimól), Boc-Ala (95 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). Az 5. példában ismertetett 27 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 20. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 167 mg (0,5 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (300 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 63,1 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 19,0 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3523,0; talált: 3522,5.
71. Példa
Ac-[Lys12,Alá17*19,Val26,Thr28]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példa szerinti 28 kapcsolási ciklust végzünk el azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t és a 10. ciklusban Boc-Val helyett és a 12. ciklusban Boc-Nle helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 200 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 52,4 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3225,7; talált: 3226,0.
72. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly2 9,Lys3 0]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Két kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként 415 mg (1,0 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-t és 175 mg (1,0 millimól) Boc-Gly-t alkalmazva. A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t és a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (870 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 206 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 65,7 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3495,0; talált:
3494,6.
73. Példa
Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30, Cys(Acm)31]-VIP
0,25 g (0,05 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Négy kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi kompo nenseket alkalmazva: Boc-Cys(Acm) (146 mg, 0,5 millimól), Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól), Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). Az 5. példában ismertetett 27 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 18. ciklusban Boc-Tyr(2,6-DCB) helyett 207 mg (0,5 millimól) Boc-p-NH(Z)-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 294 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 20,1 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3583,1; talált: 3582,8.
74. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28,Gly2 9·3 0 f
Cys(Acm)31]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Cys(Acm) (292 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t és a 21. ciklusban BocAsp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 450 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 108 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyü91 let HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3598,2; talált: 3598,0.
75. Példa
Ac-[Glu8 1Lys12,Nle17,Val2 6,Thr2 8,Gly2 9 >3 0,Met31]-VIP
0,269 g (0,05 millimól), a 4. példa szerinti Boc-Met gyantát az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól), Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). Az 5. példában ismertetett 27 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 20. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 167 mg (0,5 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (906 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 128 mg nyers peptidet kapunk. A HPLC tisztítás után 24,2 mg fehér amorf port nyerünk. A kapott termék 21,2 mg-os részletét 0,9 ml B-merkapt-etanollal 2,1 ml vízben 37 °C-on 48 órán át kezeljük. A terméket az 5. példában leírt HPLC tisztításnak alávetve 13,1 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg., FAB-MS: MH számított: 3550,1; talált: 3550,0.
76. Példa
CH3S(CH2)2CO-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP(2-28)
0,85 g (0,4 millimól), a 35. példa szerinti Boc-Thr(Bzl)-BHA gyantát Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 26 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az • · »
- 92 alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (590 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (464 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Nle (462 mg, 2,0 millimól), Boc-Gln (492 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Arg(Tos) (856 mg, 2,0 millimól), Boc-Leu (499 mg, 2,0 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (830 mg, 2,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (880 mg, 2,0 millimól), Boc-Asn (232 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (631 mg, 2,0 millimól), Boc-Thr(Bzl) (618 mg, 2,0 millimól), Boc-Phe (531 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (435 mg, 2,0 millimól), Boc-Ala (378 mg, 2,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (631 mg, 2,0 millimól) és Boc-Ser(Bzl) (591 mg, 2,0 millimól). 2,8 g Boc-heptakozapeptid gyantát kapunk.
0,7 g (0,1 millimól) fenti gyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 128 mg (1,06 millimól) 3-(metil-tio)-propionsav és 110 mg (0,53 millimól) diciklohexilkarbodiimid 20 ml metilén-kloriddal képezett oldatával 2 órán át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. A peptidgyantáról (588 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 245 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC szerint tisztítva 28,8 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3218,8;
• ··« 4 ** « · · · · ···· ·♦ *·· ·· talált: 3218,5.
77. Példa
CHjSO(CH2)2CO[Lys12,Nle17,Val2 6,Thr28]-VIP(2-28)
20,0 mg (6,2 millimól), a 76. példa szerint előállított CH3S(CH2)2^0-[Lys12,Nle17,Val26,Thr28]-VIP(2-28)-t 2,0 ml 1 %os ecetsavban oldunk. Az oldathoz 30 %-os hidrogénperoxid vízzel 1:100 arányban hígított oldatát (764 μΐ) adjuk. A reakcióoldatot szobahőmérsékleten 5 órán át keverjük, majd liofilizáljuk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC tisztításnak vetjük alá. 14,6 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3234,8; talált: 3234,6.
78. Példa
Ac-[N-CH3-Ala1,Lys12,Nle17,val2 6,Thr2 8]-VIP
2,0 g (0,16 millimól), a 32. példa szerinti Boc-hexakozapeptidgyantát két kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként 378 mg (1,28 millimól) Boc-Ser(Bzl)-t és 260 mg (1,28 millimól) Boc-N-CH3-Ala-t alkalmazva. Az ily módon kapott peptid felén (0,08 millimól) a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 3,5 órán át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk.
A kapott peptidet a 11. példában leírt módon hidrogénfluoriddal kezeljük. Liofilizálás után 484 mg fehér szilárd anyagot kapunk. A nyers peptidet az 5. példában leírt módon HPLC tisztításnak vetjük alá. A fő csúcsot az összegyűjtött frakciók analitikai HPLC analízisével vágjuk, összegyűjtjük és
- 94 liofilizáljuk. Ily módon 22,5 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: számított: 3243,8; talált: 3243,1.
79. Példa
Boc-Cys(Acm)-BHA gyanta
5,0 g (3,5 milliekvivalens) benzhidrilamin gyantát (100200 ASTM mesh, Omni) az 1. példában leírt módon kezelünk azzal a változtatással, hogy a gyantát 1,46 g (5,0 millimól) Boc-Cys(Acm)-el és 516 mg (2,5 millimól) diciklohexilkarbodiimiddel kapcsoljuk. A gyantát vákuumban szárítva 5,8 g Boc-Cys(Acm)-BHA gyantát kapunk. Az aminosav-analízis eredménye 0,19 millimól Cys/g.
80. Példa
Ac-[Leu5,Orn12,Alá17/19,Thr2 5,Val2 6,Thr 2 8,Gly29 '3 0, cys(Acm)31]-vip
0,263 g (0,05 millimól, a 79. példa szerint előállított Boc-Cys(Acm)-BHA gyantát az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Gly (87 mg, 0.,5 millimól), Boc-Gly (87 mg, 0,5 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (155 mg, 0,5 millimól). Az 5. példában ismertetett 27 kapcsolási ciklust hajtjuk végre azzal a változtatással, hogy a 3. ciklusban Boc-Ser(Bzl) helyett 154 mg (0,5 millimól) Boc-Thr-(Bzl)-t, a 9. ciklusban Boc-Val helyett és a 11. ciklusban Boc-Nle helyett 95 mg (0,5 millimól) Boc-Ala-t, a 16. ciklusban Boc-Lys(2-C1-Z) helyett 183 mg 0,5 millimól) Boc-Orn(Z)-t, és a 23. ciklusban Boc-Val helyett 124 • ♦ * ·
- 95 mg (0,5 millimól) Boc-Leu-t alkalmazunk. A peptidgyantáről (489 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 126 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példában leírt módon HPLC úton tisztítva 6,7 mg amorf fehér port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3528,0; talált: 3527,4.
81. Példa Ac-[p-F-Phe6,2-Nal10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29*30, Met31]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Met (249 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtunk végre azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 19. ciklusban Boc-Tyr(2,6-DCB) helyett 157 mg (0,5 millimól) Boc-2-Nal-t és a 23. ciklusban Boc-Phe helyett 283 mg (1,0 millimól) Boc-p-F-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáről (756 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 280 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 32,2 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3593,1; talált: 3593,1.
** *
82. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,14,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr28,
Gly29·3 0,Cys(Acm)31]-VIP
0,4 mg (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. Három kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Cys(Acm) (292 mg, 1,0 millimól), Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól) és Boc-Gly (175 mg, 1,0 millimól). A 45. példában ismertetett 28 kapcsolási ciklust hajtjuk végre, azzal a változtatással, hogy a 7. ciklusban Boc-m-F-Tyr(Bzl) helyett 440 mg (1,0 millimól) Boc-Tyr(2,6-DCB)-t, a 10. ciklusban Boc-Val helyett 189 mg (1,0 millimól) Boc-Ala-t, a 15. ciklusban Boc-Arg(Tos) helyett 415 mg (1,0 millimól) Boc-Lys(2-C1-Z)-t, a 21. ciklusban Boc-Asp(OcHx) helyett 337 mg (1,0 millimól) Boc-Glu(Bzl)-t és a 23. ciklusban Boc-Phe helyett 142 mg (0,5 millimól) Boc-p-F-Phe-t alkalmazunk. A peptidgyantáról (800 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 100 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 33,1 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3560,1; talált: 3559,8.
83. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Alá29 31]-VIP
1,1 g (0,3 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) Applied Biosystems 430A modell·· peptid szintetizátoron a 11. példa szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk «(*« ·♦·
- 97 alá. 21 kapcsolási ciklus elvégzése után 1,8 g Boc-heneikozapeptid gyantát kapunk.
1,2 g (0,2 millimól) fenti gyantán négy fenti kapcsolási ciklust elvégezve 1,32 g Boc-pentakozapeptid gyantát kapunk.
0,65 g (0,1 millimól) fenti gyantán az 5. példában leírt módon hat kapcsolási ciklust hajtunk végre, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Phe (530 mg, 2,0 millimól), Boc-Val (652 mg, 3,0 millimól), Boc-Ala (568 mg, 3,0 millimól), Boc-Asp(OcHx) (946 mg, 3,0 millimól), Boc-Ser(Bzl) (886 mg, 3,0 millimól) és Boc-His(Tos) (1,23 g, 3,0 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 1,0 ml ecetsavanhidrid 30 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 25 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk.
A peptidgyantáról a védőcsoportot az 5. példa szerint lehasítva 180 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példa szerinti HPLC tisztításnak alávetve 46,9 mg fehér amorf prot nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított 3481,0; talált: 3480,8.
84. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr2 8,Gly2 9,Lys3 0]-VIP
0,7 g (0,13 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) '‘Applied Biosystems 430A modell peptid szintetizátoron a 11. példa szerint szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 24 kapcsolási ciklus elvégzése után 1,8 g Boc-tetrakozapeptid gyantát kapunk.
- 98 0,6 g (0,1 millimól) fenti gyantán az 5. példában leírt módon hat kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi * komponenseket alkalmazva: Boc-Phe (106 mg, 0,4 millimól), Boc-Val (87 mg, 0,4 millimól), Boc-Ala (76 mg, 0,4 millimól), Boc-Asp(OcHx) (126 mg, 0,4 millimól), Boc-Ser(Bzl) (118 mg, 0,4 millimól) és Boc-His(Tos) (328 mg, 0,8 millimól). A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 0,5 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk.
A peptidgyantáról (0,61 g) a peptidet az 5. példa szerint lehasítva 174 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példa szerinti HPLC tisztításnak alávetve 43,6 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított 3453,0; talált: 3452,8
85. Példa
Ac-[N-Me-Ala1,Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28]-VIP
0,375 g (0,3 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) Applied Biosynthesis 430A modell”peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 26 kapcsolási ciklust elvégezve 1,8 g Bochexakozapeptid gyantát kapunk.
0,6 g (0,1 millimól) fenti gyantán az 5. példában leírt módon két kapcsolási ciklust hajtunk végre, ciklusonként 118 mg (0,4 millimól) Boc-Ser(Bzl)-t és 81 mg (0,4 millimól) Boc-N-Me-Ala-t alkalmazva. A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését ·«··
millimól)
- 99 végezzük el és 442 mg (1,0 millimól) BOP, 57 μΐ (1,0 ecetsav és 523 /11 (3,0 millimól) DIPEA 20 ml dimetil formamiddal képezett oldatával 6 órán át, majd 1,0 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel alkotott oldatával 30 percen át kezeljük. A gyantát az 1-4. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. 0,54 g peptidgyantát kapunk.
A peptidgyantáról a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 220 mg nyers peptidet kapunk. A peptidet az 5. példa szerinti HPLC tisztításnak alávetve 27,0 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosavanalízisnek fele meg. FAB-MS: MH számított: 3215,7; talált: 3215,6.
86. Példa
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Alá25,Leu26,Lys27*28]-VIP
10,0 g p-metil-benzhidrilamin gyantát (200-400 ASTM mesh, Biomega) 6,72 ml (43 millimól) DIC-el, 4,0 g (29 millimól) HOBT-el és 10,36 g (19,2 millimól) p-(RS-α-Ι-(9H-fluoren-9-il)-metoxiformamido-2,4-dimetoxi-benzil)-fenoxi-ecetsawal (NovaBiochem) kezelünk. A gyantát metilén-kloriddal, metanollal és metilén-kloriddal mossuk, majd vákuumban szárítjuk. 15,1 g Fmoc-Tm-MBHA gyantát kapunk.
0,34 g (0,22 millimól) fenti Fmoc-Tm-MBHA gyantát Applied iosystems 413A modell” peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá, azzal a változtatással, hogy Fmoc kémiai jegyzőkönyvet alkalmazunk [lásd Bárány és tsai: The Peptides, Analysis, Synthesis and Biology,
100
Vol. 2, Gross, E. és Meienhofer, J., Academic Press kiadó, 1-284 (1980)]. 20 kapcsolási ciklust végzünk el és 1,06 g Fmoceikozapeptid gyantát kapunk.
0,53 g (0,11 millimól) fenti gyantán 8 kapcsolási ciklust hajtunk végre. 0,58 g oktazopeptid gyantát kapunk, amelyet 0,5 ml ecetsavanhidrid 20 millimól 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 60 percen át kezelünk, majd vákuumban szárítjuk. 489 mg peptidgyantát kapunk.
A peptidgyantát 5 ml, 50 μΐ 1,2-etánditiolt tartalmazó TFA-al, 50 μΐ dimetil-szulfiddal és 150 μΐ anizollal szobahőmérsékleten 2 órán át kezeljük. A gyantát szűrjük és 2x1 ml TFA-val mossuk. Az egyesített szűrleteket 200 ml dietil-éterbe öntjük és 4 órán át -20 °C-ra hűtjük. A kiváló csapadékot szűrjük, 2x20 ml dietil-éterrel mossuk, 2x20 ml 10 %-os ecetsavval extraháljuk és liofilizáljuk. A peptidet az 5. példában leírt HPLC tisztításnak vetjük alá. 35,7 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3307,9; talált: 3308,1.
87. Példa
AC-[Leu5,p-F-Phe6,Glu8,Orn12, Alá17 *19,Thr2 5,Val2 6,Thr28, Gly29/30,Cys(ACm)31j-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-20 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt módon 31 kapcsolási ciklust végzünk el. A peptidgyantáról (936 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon eltávolítva 300 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után
101
300 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 37,2 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított 3560,0; talált: 3560,2.
88. Példa
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29*30,
Thr31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-20 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt módon 31 kapcsolási ciklust végzünk el. A peptidgyantáról (940 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 320 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 70,8 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított 3543,0; talált: 3543,1.
89. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val2 6,Thr28,Gly2 9·3 0,Thr31]-vip
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-20 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt módon 31 kapcsolási ciklust végzünk el. A peptidgyantáról (1,0 g) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 335 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példában leírt HPLC tisztítás után 83,0 g fehér amorf port kapunk. A vegyület homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított 3497,1; talált: 3496,7.
102
90. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá2 5,Leu2 6,Lys2 7 '2 8,Gly2 9 /3 0,Thr31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt módon 31 kapcsolási ciklust végzünk el. A peptidgyantáról (1,0 g) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 313 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 66,4 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav analízisnek felel meg.
FAB-MS: MH számított: 3565,0; talált: 3564,6.
91. Példa
Ac-[p-F-Phe®,Glu8,Lys12 1Nle*7,Alá2 5,Leu2 6,Lys2 7·28,
Gly29/30,Thr31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt módon 31 kapcsolási ciklust végzünk el. A peptidgyantáról (940 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 324 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 65,6 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3583,1; talált: 3583,2.
103
92. Példa
Ac-[2-Nal10,Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28,Gly29*30,
Met31]-VIP
0,4 g (0,1 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) az 5. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. A 45. példában leírt módon 31 kapcsolási ciklust végzünk el. A peptidgyantáról (960 mg) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 390 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 45,1 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3547,1; talált: 3546,9.
93. Példa
Ac-[Ala2,Glu8,Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28,
Alá29 31]-VIP
0,3 g (0,2 millimól) benzhidrilamin gyantát (100-200 ASTM mesh, Bachem) Applied Biosystems 431A modell peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisne vetünk alá azzal a változtatással, hogy az Fmoc kémiai jegyzőkönyvet (lásd 86. példa) alkalmazzzuk. A gyantát az első ciklusban p-[RS-a-1-(9H-fluoren-9-il) -metoxi-formamido-2,4-dimetoxi)-benzil]-fenoxi-ecetsavval (NovaBiochem) kapcsoljuk, majd 29 kapcsolási ciklust hajtunk végre. 1,73 gg Fmocnonakozapeptid gyantát kapunk.
0,8 g (0,1 millimól) fenti gyantát két kapcsolási ciklusnak vetünk alá és 0,9 g hentriakontapeptid gyantát kapunk. A fenti peptidgyantát 0,5 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 %
104
DPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 60 percen át kezeljük és vákuumban szárítjuk. 0,75 g peptidgyantát kapunk, amelyről a peptidet a 86. példában leírt módon lehasítjuk. A kapott nyers peptidet (280 mg) az 5. példában leírt HPLC tisztításnak vetjük alá. 12,4 mg fehér port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3479,0; talált: 3478,7.
94. Példa
Ac-[Alá2,Lys12,Nle17,Alá2 5,Leu2 6,Lys27,2 8,Gly2 9,3 0, Thr31]-VIP
666 mg (0,3 millimól) benzhidrilamin gyantát (200-400
ASTM mesh, Biomega) a 15. példában leírt jegyzőkönyv felhasználásával szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 21 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Thr(Bzl) (371 mg, 1,23 millimól), Boc-Gly (210 mg, 1,2 millimól), Boc-Gly (210 mg, 1,2 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (498 mg, 1,2 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) (498 mg, 1,2 millimól), Boc-Leu (299 mg, 1,2 millimól), Boc-Ala (227 mg, 1,2 millimól), Boc-Asn (307 mg, 1,32 millimól), Boc-Leu (299 mg, 1,2 millimól), Boc-Tyr(2,6-DCB) (528 mg, 1,2 millimól), Boc-Lys(2-C1-Z)
| (498 mg, | 1,2 | millimól), Boc-Lys(2-C1-Z) | (498 | mg, | i,2 | millimól), | ||
| Boc-Val | (261 | mg, | 1,2 millimól), | Boc-Ala | (227 | mg, | i,2 | millimól), |
| Boc-Nle | (278 | mg, | 1,2 millimól) , | Boc-Gln | (325 | mg, | 1,32 | 1 milli- |
mól), Boc-Lys(2-C1-Z) (498 mg, 1,2 millimól), Boc-Arg(Tos) (514 mg, 1,2 millimól), Boc-Leu (299 mg, 1,2 millimól), Boc-Lys(2-Cl-Z) (498 mg, 1,2 millimól) és Boc-Thr(Bzl) (371 mg, 1,2 millimól). 1,8 g Boc-heneikozapeptid gyantát kapunk.
105
1,2 g (0,2 millimól) fenti gyantán 8 kapcsolási ciklust végzünk el, ciklusonként az alábbi komponenseket alkalmazva: Boc-Tyr(2,6-DCB) (352 mg, 0,8 millimól), Boc-Asn (204 mg, 0,88 millimól), Boc-Asp(OcHx) (255 mg, 0,8 millimól), Boc-Thr(Bzl) (247 mg, 0,8 millimól), Boc-Phe (212 mg, 0,8 millimól), Boc-Val (174 mg, 0,8 millimól), Boc-Ala (151 mg, 0,8 millimól) és Boc-Asp(OcHx) (255 mg, 0,8 millimól). 1,5 g Boc-nonakozapeptid gyantát kapunk.
0,75 g (0,1 millimól) fenti gyantát két kapcsolási ciklusnak vetünk alá, ciklusonként 76 mg (0,4 millimól) Boc-Ala-t és 102 mg (0,4 millimól) Boc-His(Tos)-t alkalmazva. A peptidgyantán a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 0,5 ml ecetsavanhidrid 15 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 60 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. A kapott peptidgyantáról (0,78 g) a peptidet az 5. példában leírt módon eltávolítva 240 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 31,0 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számíttott: 3535,1; talált: 3534,6.
95. Példa
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Alá2 5,Leu2 6,Lys27'2 8, -Alá29 31]-VIP
0,88 g (0,4 millimól) benzhidrilamin gyantát Applied Biosystems 430A módii” peptid szintetizátoron a 11. példában leírt módon szilárdfázisú szintézisnek vetünk alá. 14 kapcsolási ciklust elvégezve 1,88 g Boc-tetradekapeptid gyantát
106 kapunk.
1,41 g (0,3 millimól) fenti gyantát 9 kapcsolási ciklusnak alávetve 1,71 g Boc-trikozapeptid gyantát kapunk.
0,57 g (0,1 millimól) fenti gyantát 8 kapcsolási ciklusnak alávetve Boc-hentriakontapeptid gyantát kapunk, amelyen a jegyzőkönyv 1-8. lépését elvégezzük és 0,5 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képezett oldatával 60 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. A kapott peptidgyantáról (0,62 g) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 222 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás után 20,0 mg fehér amorf port nyerünk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3535,1; talált: 3534,4.
96. Példa
Ac—[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Alá2 5,Leu2 6,Lys27 >28, -Alá29 31]-VIP
0,56 g (0,1 millimól), a 95. példa szerinti Boc-trikozapeptid gyantát Applied Biosystems 430A modell” peptidszintetizátoron szij-árdfázisú szintézisnek vetünk alá. Nyolc kapcsolási ciklus után 0,95 g Boc-hentriakontapeptid gyantát kapunk, amelyen a jegyzőkönyv 1-8. lépését végezzük el és 0,5 ml ecetsavanhidrid 20 ml 6 % DIPEA/metilén-klorid eleggyel képzett oldatával 60 percen át kezeljük. A gyantát a 10-14. lépés szerint mossuk és vákuumban szárítjuk. A peptidgyantáról (0,58 g) a peptidet az 5. példában leírt módon lehasítva 233 mg nyers peptidet kapunk. Az 5. példa szerinti HPLC tisztítás
107 után 42,1 mg fehér amorf port kapunk. A vegyület HPLC szerint homogén és a kívánt aminosav-analízisnek felel meg. FAB-MS: MH számított: 3521,1; talált: 3521,1.
97. Példa
VIP analógok légcsövi elernyesztő aktivitása
A VIP analógok relaxáns aktivitását tengerimalac légcsövet alkalmazó modellen vzsgáljuk [Wasserman, M.A. és tsai: Vasoactive intestinal Peptide·', S.I. Said, kiadó: Raven Press, N.Y. (1982) 177-184. oldal]. Az összes szövetet 400-600 g testtömegű, uretánnal (2 g/kg i.p.) érzéstelenített hím albínó tengeerimalacból vesszük. Kivéreztetés után a légcsövet eltávolítjuk és négy gyűrűszegmensre osztjuk (3 mm hosszúság). Minden gyűrűt 10 ml-es köpenyes szövetfürdőben elhelyezett 30 gauge rozsdamentes acélhuzalra felfüggesztünk és 4-0 selyemszálon keresztül a tenzió izometriás regisztrálása céljából F Grass erőátvitel transzducerhez (FT03C modell, Grass Instruments Co., Quincy, Ma) kapcsoljuk. A simaizmot az alábbi összetételű módosított Krebs-oldatba helyezzük: NaCl 120 mM; KC1 4,7 nM, CoH2 2,5 nM, MgSO4’7H2O 1,2 nM; NaHC03 25 nM; egyszeresen bázikus K2HPO4 1,2 mM; és dextróz 10 mM. A szövetfürdőket 37 °C-on tartjuk és állandóan 95 % O2 és 5 % CO2 összetételű gázelegyet buborékoItatunk át. A reagánsokat egy 8 csatornás és egy 4 csatornás Hewlett-Packard (7702B illetve 7754A modell) regisztráló berendezésen (Hewlett-Packard, Paramus NJ) jegyezzük fel. A légcsőgyűrűket 1,5 g nyugalmi tenzió alá helyezzük; az előzetes kísérletek szerint az optimális 0 vagy ahhoz közeli érték. A soronkövetkező 60 perces stabilizációs időszak alatt a
108 tenziót gyakran újra be kellett állítani. A szöveteket 15 percenként öblítjük.
Az egyes szövetmintákra a kumulatív koncentráció reagálás görbéket oly módon kapjuk meg, hogy VanRossum módszerével [Arch. Int. Pharmacodyn. 143, 299-330 (1963)] meghatározzuk a fürdőben a VIP vagy VIP-analógok egymásután következő μΐ növekedését. Egyetlen szöveten csak egy kumulatív dózis reagálás görbét kapunk. A szövetek közötti változások minimumra csökkentése céljából a relaxáns reagálásokat a kapott maximális reagálásnak az egyes koncentráció reagálási kísérletek végén hozzáadott VIP-értékhez viszonyított százalékában fejezzük ki (ΙΟ-6 M = 100 %). Legalább három szövetből kapott reagálásokat összegyűjtünk és az EC5Q értékeket lineáris regresszióval határozzuk meg.
A kapott eredményeket az I. táblázatban foglaljuk össze. A táblázatban a VIP-analógok tracheális relaxáns aktivitását a természetes VIP hatásával hasonlítjuk össze. Az I. táblázat eredményeiből kitűnik, hogy a VIP-analógok aktivitása egyenlő vagy nagyobb, mint a VIP-é.
109
I. táblázat viP-analógok tengeri malac légcsövének simaizmára relaxáns aktivitása
Vegyület
VIP
| ,N1e | ,Ala ,Val | ,Thr | ,Ala J-VIP |
| , 17 | , 19 26 | 28 | 29 30, |
| ,Nle | ,A1a ,Val | ,Thr | ,Gly ,Lys J-VIP |
| 1 | 12 . 17 | 19 | .26 _ 28, |
12 17 26 28
Ac-[N-Me-Ala ,Lys ,Nle ,Val ,Thr J-VIP
Ac-[Leu5,0rn* 12,Ala17 *’19 * * * * *,Thr25,Val26 *>Thr28/Gly29’30,Cys(Acm)31]-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Ala,9,Val26,Thr28,Gly29’3°,Cys(Acm)31]-VIP r 6 10 12 17 26 28,
Ac-[p-F-Phe ,ρ-NH -Phe ,Lys ,N1e ,Val ,Thr J-VIP . 8 , 12 „/17 „ ,26 TU 28 29,30 „ .. ,31,
Ac-[Glu ,Lys ,Nle ,Val ,Thr ,Gly ,Cys(Acm) J—VIP
Ac-[p-NH?-Phe10,Lys12,Nle17,Val26,Thr28J-VlP
Ac-[Glu ,Lys ,Nle ,Val ,Thr ,Gly ,Met J—VIP
Γ. 12
Ac-LLys r 12
Ac-[Lys
Ac-[N-Me-Ala ,Lys ~,Nle ,Alá’,ValThr-'J-VIP r 12 , 17 ,19 , 25 26 27,28,
Ac-[Lys ,Nle ,Ala ,Ala ,leu ,Lys J-VIP
r. 5 * r „u 6 „ 8 a 12 * ,7·19 vu 25 „ ,26 TL 28 n, 29·30
Ac-[Leu ,p-F-Phe ,Glu ,0rn ,Ala ,Thr ,Val ,Thr ,Gly ,
Cys(Acm) J-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29,30,Thr31J-VIP Ac-[Glu8,Lys'2,Nle17,Alá’9,Val26,Thr28,Gly29’30,Thr31J-VIP Ac-[G1u8,Lys12,Nle’7,Alá25,Leu26,Lys27,28,Gly29,30,Thr3’J-VIP Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27,28,Gly29,30,Thr31J-VIP Ac-[2-Nal10,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29’30,Met31J-VIP
8 12 17 19 26 28 29—31
Ac-[Alá ,Glu ,Lys ,Nle ,Ala ,Val ,Thr ,Ala J-VIP
Ac-[Ala2,Lys’2,Nle’7,Alá25,Leu26,Lys27,28,Gly29,30,Thr31J-VIP r , 8 12 ,17 19 25 26 27,28 29-31,
Ac-[Glu ,Lys ,Nle ,Ala ,Ala ,Leu ,Lys ,Ala J-VIP r 12 ,1/ ,19 ,25 26 27,28 , 29-31,
Ac-[Lys ,Nle ,Ala ,Ala ,Leu ,Lys ,A1a J-VIP kifejtett
EC (nM)
10.0
7.2
2.2
1.9
1.2
0.45
0.36
0.25
0.3
0.58
2.8
1.5
0.68
0.32
0.55
0.27 .
0.33
0.24
0.23
0.44
0.1
0.24
110
98. Példa
VIP-analógok hörgtágító aktivitása
A VIP-analógok hörgtágító aktivitását tengeri malacon a légcsőbe való becseppentés útján határozzuk meg. A módszerhez 400-600 g testtömeg# hím tengeri malacokat (Hartley törzs, Charles River) alkalmazunk. Az állatokat uretánnal (2 g/kg) intraperitoneálisan érzéstelenítjük és a hatóanyag intravénás beadása céljából a juguláris vénába polietilén kanült illesztünk.
Az állatokon légcsőmetszést hajtunk végre és a légcsőbe, a tarajhoz viszonyított távolság kb. háromnegyedénél desztillált vizet vagy a teszt-vegyület desztillált vízzel képezett oldatát pipettával beadagoljuk. Az oldat koncentrációját oly módon választjuk meg, hogy 100 μΐ konstans térfogatban adagoljuk. Az állatokat egy percen át hanyatt fektetjük abból a célból, hogy a hatóanyagnak a tüdőbe jutását elősegítsük. A spontán légzést egy perc múlva szukcinil-klorid (1,2 mg/kg) i.v. hozzáadásával leállítjuk és az állatokat Harvard 680 modell kis állat lélegeztető készülék segítségével lélegeztetjük; a készüléket 40 lélegzés/perc és 4,0 cm3 lökettérfogat értékre állítjuk be. Az állatoknak maximális összehúzó dózist előidéző dózisban hisztamint adunk be (50 μ/kg i.v.) és a tracheális nyomást (víz cm) Statham-féle nyomás transzducerrel (P 32 AA) feljegyezzük.
Legaláb 3 kontroli-állaton és legalább 3 teszt-vegyülettel kezelt állaton a tracheális nyomás változásának átlagát meghatározzuk és a százalékos gátlást kiszámítjuk. A becsepegtetés
- 111 útján beadagolt teszt-vegyületek relatív hatékonyságát oly módon határozzuk meg, hogy a teszt-vegyületet különböző dózisokban beadagoljuk és kiszámítjuk a közepes gátló dózist (ID50 érték). Az ID5Q értékeket legalább három, 10-90 % gátló hatást előidéző dózis által kialakíttott lóg dózis - eredmény görbéből számítjuk ki. Minden antagonista regressziós vonalának korrelációs koefficiense mindig 0,95-nél nagyobb érték.
A különböző vegyületek gátló hatása időbeli lefolyásának meghatározása céljából a teszt-vegyület beadása és a hisztaminos reakció kiváltása között eltelt időt változtatjuk. Az aktivitás időbeli lefolyásának azt az időt tekintjük, amely alatt a gátlás 40 %-ra csökken.
A II. táblázatban a VIP-analógok in vivő hörgtágító hatását a természetes VIP aktivitással hasonlítjuk össze. Az eredményekből kitűnik, hogy a találmányunk szerinti eljárással előállítható VIP-analógok aktivitása a természetes VIP hatásával azonos vagy annál erősebb.
112
II. Táblázat
VIP-analógok hörgtágító aktivitása tengerimalacon
ED50(y9)
12 17 26 28
Ac-[N-Me-Ala ,Lys ,Nle ,Val ,Thr ]—VIP
8.5
VIP r 6 10 12 17 26 28,
Ac-[p-F-Phe ,p-NH -Phe ,Lys ,Nle ,Val ,Thr J-VIP . rn θ , 12 „,17 „ ,26 TU 28 29,30 „ ,, ,31.
Ac-[Glu ,Lys ,Nle ,Val ,Thr ,Gly ,Cys(Acm) J-VIP
12 17 26 28
Ac-[p-NH -Phe ,Lys ,N1e ,Val ,Thr J-VIP
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26, Thr28,Gly29,30,Met31J-VIP
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28,Gly29,30,Cys(Acm)31J-VIP
Ac-[Leu5,Orn12,Alá17,19,Thr25,Val26,Thr28,Gly29,30,Cys(Acm)31J-VIP Ac-[p-F-Phe6,p-NH -Phe19,Lys12,Nle17,Val26,Thr28J-VIP , ri 12 17 / 19 „ .,26 Tk 28 , 29-31, „,n
Ac-[Lys ,Nle ,Ala ,Val ,Thr ,Ala J-VIP r 12 17 , 19 26 28 29 30,
Ac-[Lys ,Nle ,Ala ,Val ,Thr ,Gly ,Lys J-VIP
12 17 19 26 28
Ac-[N-Me-Ala ,Lys ,Nle ,Ala ,Val ,Thr J-VIP r 12 , 17 , 19 25 26 27,28,
Ac-[Lys ,Nle ,Ala ,Ala ,Leu ,Lys J-VIP „ r. 5 r .u 6 8 12 , 17,19 25 26 „ 28 , 29,30
Ac-[Leu ,p-F-Phe ,Glu ,0rn ,Ala ,Thr ,Val ,Thr ,Gly ,
Cys(Acm) J-VIP
8
Ac-[p-F-Phe ,Glu ,Lys r 8 12 17
Ac-[Glu .,Lys ,N1e ,Ala r 8 12 17 ;
Ac-[Glu ,Lys ,Nle ,Ala
8
Ac-[p-F-Phe ,Glu , .10 12
Ac-[2-Nal ,Lys ,
8 1
Ac-[Ala ,Glu ,Lys λ r»i 2 , 12 .π 17 Λ, 25 . 26 , 27,28
Ac-[Ala ,Lys ,Nle ,Ala ,Leu ,Lys ft 12 17 IQ pc 26
Ac-[Glu ,Lys ,Nle ,Ala ,Ala ,Leu ,Lys . r. Ι* 1 2 . I7 .. 19 . 25 26 27,28
Ac-LLys ,Nle ,Ala ,Ala ,Leu ,Lys ,Ala , 17 26 L 28 , 29,30 L 31, ,Nle ,Val ,Thr ,Gly ,Thr J-VIP
26 L 28 , 29,30 31, ι ,Val ,Thr ,Gly ,Thr J-VIP
26 27,28 29,30 31, . ,Leu , Lys ,Gly ,Thr J-VIP i 27,28 , 29,30 L 31, ,Lys ,Gly ,Thr J-VIP ,Gly^9’3 * * 6°,Met3^J-VIP 28,Alá29’31J-VIP ,Gly29,30,Thr31J-VIP 27’28,Alá29’3’J-VIP 29-31J-vip
| 12 | 17 | 25 | 26 |
| Lys | ,Nle | ,Ala | , Leu |
| 17 | 19 | 26 | 28 |
| Nle ,Ala | ,Val | ,Thr | |
| 2 17 | 19 | 26 : | |
| ,Nle ,Ala | ,Va1 | ,Thr |
7.3
3.0
2.0
2.0
1.7
0.30
0.28
0.17
0.82
0.58
1.5
0.014
0.09
0.1
0.064
0.043
0.12
0.35
0.47
0.05
0.03
0.046
- 113 -
Claims (30)
1. Eljárás
X-R1-R2-R3-Ala-R5-R6-R7-Rg-Rg“R10-Rl1-R12 R13”R14R15R16~R17“Ala_R19“R20-R21“R22- -r2 3-r2 4-r2 5_r26-r2 7 _R28 ~ Y általános képletü vegyületek - mely képletben
Q jelentése (II), (III) vagy (IV) általános képletü csoport, ahol n értéke 1, 2,
Xx, és X2 egymástól függetlenül H, OH, OCH3, F, Cl,
J, ch3, cf3, no2, nh2, N(CH3)2, nhcoch3, NHCOC6H5 vagy C(CH3)3;
X3 jelentése H vagy F;
I
- 114 R13 Leu va9Y Alá;
R14 Arg, Lys vagy Alá;
R15 Lys vagy Alá;
R16 Gin vagy Alá;
R17 Met, Nle vagy Alá;
R]_g Val vagy Alá;
R2o Lys vagy Alá;
R2i Lys vagy Alá;
R22 Tyr vagy R6;
R23 Leu vagy Alá;
R24 Asn vagy Alá;
R25 Ser, Thr vagy Alá;
R26 Ile, Val, Leu vagy Alá;
R27 Leu, Lys vagy Alá;
R28 Asn, Thr, Lys vagy Alá;
X jelentése hidrogénatom, (V) vagy (VI) általános képletü csoport; ahol
X4 jelentése 1-3 szénatomos alkil- vagy halogén-(1-3 szénatomos alkil)-csoport, CH3SO2-, CH3NHCO-, CH3OCO- vagy CH3S(0)n(CH2)2C0~, ahol n = 0-2;
Y jelentése -OX5, -NHX5 vagy R29-R30“R31“Z' ahol
X5 jelentése H vagy 1-3 szénatomos alkilcsoport;
R2g Gly vagy Alá;
R30 Gly, Lys vagy Alá;
R31 Gly, Alá, Met, Cys, Cys(Acm), Thr, Ser, Phe vagy
-NHX5;
Z jelentése -OX5 vagy -NHX5;
I
- 115 mimellett a természetben előforduló VIP és az
X-His-Ser-Asp-Ala-Val-Phe-Thr-Asp-R9-Tyr-Thr-R12-LeuR14-Lys-Gln-Nle-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-R25-R26
Leu-R28-Y, általános képletü vegyületek ki vannak zárva, ahol
és gyógyászatilag alkalmas sóik előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, megfelelő aminosav-szekvenciával rendelkező védett és gyantához kötött polipeptidről a védőcsoportot eltávolítjuk és a polipeptidet a gyantáról lehasítjuk a védőcsoport eltávolítására és a lehasításra alkalmas szerrel történő kezeléssel, kívánt esetben további megfelelő adalékanyagok - mint például kation scavenger - jelenlétében, és a kapott terméket kívánt esetben gyógyászatilag alkalmas sóvá alakítjuk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás X helyén (V) általános képletü csoportot tartalmazó vegyületek előállítására - mely képletben
X4 1-3 szénatomos alkilcsoport, CH3SO2- vagy CH3S(0)n(CH2)2C0-,
- 116 - és η = 1; Rx His, Alá, N-CH3-Ala, Gly; R2 Ser vagy Alá; R3 Asp vagy Alá; R5 Val, Leu vagy Alá; Rg Phe, p-F-Phe, Alá, 1-Nal; R7 Thr vagy Alá; Rq Asp, Glu vagy Alá; Rg Asn, Alá; Riq Tyr, p-NH2-Phe, 2-Nal, Alá, O-CH3-Tyr; R^ Thr, Alá; R12 Arg, Lys, Orn vagy Alá; Ri3 Leu, Alá; R14 Arg, Lys, Alá; R15 Lys, Alá; R-Lq Gin, Alá; R17 Met, Nle vagy Alá; Rjg Val, Alá; R2q Lys, -Alá; R21 Lys, Alá; R22 Tyr, Alá, m-F-Tyr; R23 Leu, Alá; R24
Gly, Alá; R30 Gly, Lys, Alá; és R31 jelentése Cys(Acm), Met, Alá azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
3. A 2. igénypont szerinti eljárás X helyén (V) általános képletü csoportot tartalmazó vegyületek előállítására - mely képletben
X4 jelentése CH3; Rj His, N-CH3-Ala; R2 Ser; R3 Asp; R5 Val, Leu; Rg Phe, p-F-Phe; R7 Thr; R3 Asp, Glu; Rg Asn; Riq Tyr, pNH2-Phe, 2-Nal; Rn Thr; Ri2 Arg, Lys, Orn; Ri3 Leu; R14 Arg,
aholis R2g Gly; R30 Gly, Lys; R31 Cys(Acm), Met, Alá; és Z jelentése -OH vagy -NH2 azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
- 117 * · » *4 I * * ·*· ··» • · · * · «««« »· «-4·»
4. A 3. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R^q Tyr, p-NH2-Phe; Ri2 Lys, Orn; R14 Arg; R17 Nle, Alá; R2s Ser; R26 Val; R28 Thr és Y OH, NH2, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
5. A 4. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R12 jelentése Lys, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
6. A 4. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R17 jelentése Nle, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben jelentése N-CHg-Ala és amely vegyület Ac-[N-CH3-Ala1,Lys12,
Nle17,Val2 6,Thr2 8]-VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
8. A 6. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R^q jelentése p-NH2-Phe és mely vegyület Ac-[p-NH2-Phe10,Lys12,Nle17,
Val26,Thr28]-VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
9. A 6. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben Rg jelentése p-F-Phe és R^q jelentése pNH2-Phe és mely vegyület
Ac-[p-F-Phe6, p-NH2-Phe10,Lys12 ,Nle17,Val26,Thr28]-VIP
118 « ««« «*»
Λ · ♦ *♦ ·*·· ♦ * ····* azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
10. A 4. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben Y jelentése R29“R30”R31_Z' ahol R29 Gly; R3q Gly, Lys; és R31 Cys(Acm), Met, Alá; és Z -OH vagy NH2, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
11. A 10. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R3^ jelentése Cys(Acm) azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
12. A 11. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben Rj2 jelentése Lys, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
13. A 12. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R17 jelentése Nle, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
14. A 13. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R3q jelentése Gly, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
15. A 14. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben Rg jelentése p-F-Phe és Rj,g jelentése Alá és amely vegyület Ac-[p-F-Phe6,Lys12,Nle17,Ala19,Val26,Thr28,Gly29t30,Cys(Acm)31]-VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
16. A 14. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R6 jelentése p-F-Phe, Rg Jelentése Glu és R19 jelentése Alá és amely vegyület Ac-[p-F-Phe6,Glu8,··*
- 119 -
Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/3°,Cys(Acm)3-VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
17. A 14. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben Rg jelentése Glu és amely vegyület
Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28, Gly29·30,Cys(Acm)31 ]-VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
18. A 11. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R5 jelentése Leu, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
19. A 18. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben Ri2 jelentése Orn, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
20. A 19. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R17 jelentése Alá, R19 jelentése Alá és R25 jelentése Thr és R30 jelentése Gly és mely vegyület Ac- [Leu5,Orn12,Alá17 >19,Thr25,Val26,Thr28,Gly29 >30,Cys(Acm)31 ] -VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
21. A 10. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R3j jelentése Met, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
22. A 21. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R3q jelentése Gly, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
23. A 22. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R^2 jelentése Lys és R17 jelentése Nle, • · · · *·
V ··· · <» • · * · * #··< «F ·9· ··
- 120 azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
»
24. A 23. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R8 jelentése Glu és mely vegyület Ac[Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29>30,Met31]-VIP, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
25. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek elő- állítására, amelyekben X jelentése (CH3)C0-; R]_ jelentése His vagy N-CH3~Ala; R2 jelentése Alá vagy Ser; R3 jelentése Asp; R5 jelentése Val vagy Leu; Rg jelentése Phe vagy p-F-Phe; R7 jelentése Thr, Rg jelentése Asp vagy Glu; Rg jelentése Asn; R^q jelentése Tyr, 2-Nal vagy p-NH2-Phe; Rji jelentése Thr; R12 jelentése Lys vagys Orn; R13 jelentése Leu; R14 jelentése Arg; R15 jelentése Lys; Rjg jelentése Gin; R]^ jelentése Nle vagy
Alá; Rig jelentése Alá vagy Val; R2q jelentése Lys; R2i jelentése Lys; R22 jelentése Tyr; R23 jelentése Leu; R24 jelentése Asn; R25 jelentése Alá, Thr vagy Ser; R2g jelentése Leu vagy
Val; R27 jelentése Lys vagy Leu; R28 jelentése Lys vagy Thr; és
Y jelentése NH2 vagy R29-R30R31“z» R2g jelentése Alá vagy Gly; R30 jelentése Alá, Gly vagy Lys; R3]_ jelentése Alá, Met, Thr, Cys(Acm) vagy nincs jelen; és Z jelentése NH2, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
26. A 25. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R^ jelentése His, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
27. A 26. igénypont szerinti eljárás olyan vegyületek előállítására, amelyekben R5 jelentése Val; Rg jelentése Phe; R^q
121 « ··· * ·· • · · · · ···· ·· ♦·· ·· jelentése 2-Nal vagy Tyr; Ri2 jelentése Lys, R17 jelentése Nle; R25 jelentése Alá vagy Ser; és Y jelentése R29-R30-R31”z/ R30 jelentése Alá vagy Gly; és R31 jelentése Alá, Met vagy Thr, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
28. A 26. igénypont szerinti eljárás
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Alá29-31]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29,Lys30]-VIP
Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Alá26,Leu26,Lys27128]-VIP
Ac-[Leu5,p-F-Phe6,Glu8,Orn12,Alá17 >19,Thr2 5,Val2 6,Thr28, Gly29,30zCys(Acm)31]_vip
Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Val26,Thr28,Gly29/30,Thr3 x]-VIP Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/3°,Thr31]-VIP Ac-[Glu8,Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27/28,Gly29/3 0,Thr31]-VIP Ac-[p-F-Phe6,Glu8,Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27/28,Gly29·30Thr31]-VIP
Ac-[2-Nal10,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Gly29/30,Met31]-VIP Ac-[Alá2,Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Val26,Thr28,Alá29-31]-VIP Ac-[Alá2,Lys12,Nle17,Alá25,Leu26,Lys27 >28,Gly29/30,Thr31]-VIP Acr[Glu8,Lys12,Nle17,Alá19,Alá25,Leu26,Lys27/28,Alá29-31]-VIP Ac-[Lys12,Nle17,Alá19,Alá25,Leu26,Lys27/28,Alá29”31]-VIP előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
29. Eljárás gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerinti eljárással előállított és az 1-28. igénypontok bármelyikében meghatározott vegyületet és kívánt esetben egy vagy több gyógyászatilag
122 aktív további anyagot inért gyógyászati hordozóanyagokkal összekeverünk és galenikus formára hozunk.
30. Az 1-28. igénypontok bármelyikében meghatározott vegyületek felhasználása hörgösszehúzódással kapcsolatos rendellenességek kezelésére alkalmas gyógyászati készítmények előállítására.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/374,503 US5141924A (en) | 1989-06-30 | 1989-06-30 | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU904033D0 HU904033D0 (en) | 1990-12-28 |
| HUT55803A true HUT55803A (en) | 1991-06-28 |
Family
ID=23477126
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU904033A HUT55803A (en) | 1989-06-30 | 1990-06-29 | Process for producing vip-analogues ii |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5141924A (hu) |
| EP (1) | EP0405242A3 (hu) |
| JP (1) | JPH0338600A (hu) |
| KR (1) | KR910000794A (hu) |
| AU (1) | AU5808490A (hu) |
| CA (1) | CA2019970A1 (hu) |
| FI (1) | FI903296A0 (hu) |
| HU (1) | HUT55803A (hu) |
| IE (1) | IE902388A1 (hu) |
| IL (1) | IL94884A0 (hu) |
| MC (1) | MC2131A1 (hu) |
| NO (1) | NO902916L (hu) |
| NZ (1) | NZ234268A (hu) |
| PT (1) | PT94553A (hu) |
| YU (1) | YU126690A (hu) |
| ZA (1) | ZA904897B (hu) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03181499A (ja) * | 1989-12-11 | 1991-08-07 | Akira Kaji | 新規ペプチド |
| AU656230B2 (en) * | 1991-10-11 | 1995-01-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Cyclic vasoactive peptides |
| JPH06220090A (ja) * | 1993-01-22 | 1994-08-09 | Sanwa Kagaku Kenkyusho Co Ltd | ポリペプチド |
| EP1257576B1 (en) | 2000-02-18 | 2004-09-15 | Dabur Research Foundation | Vasoactive intestinal peptide analogs |
| DE60033697D1 (de) | 2000-02-18 | 2007-04-12 | Dabur Res Foundation Sahibabad | Radiomarkierte vip-analoge zur diagnose und therapie |
| US6828304B1 (en) | 2000-07-31 | 2004-12-07 | Dabur Research Foundation | Peptides for treatment of cancer |
| US20040063631A1 (en) | 2000-11-28 | 2004-04-01 | Lutz-Henning Block | Compounds with the biological activity of vasoactive intestinal peptide for the treatment of pulmonary and arteriolar hypertension |
| US6933404B2 (en) * | 2001-12-18 | 2005-08-23 | Metabolix Inc. | Methods of making intermediates from polyhydroxyalkanoates |
| US20060241028A1 (en) | 2002-06-10 | 2006-10-26 | Dorian Bevec | Use of compounds having the biological activity of vasoactive intestinal peptide for the treatment of sarcoidosis |
| KR20050067439A (ko) * | 2002-11-27 | 2005-07-01 | 이토햄 가부시키가이샤 | 펩티드 및 이를 포함하는 의약조성물 |
| IN2012DN02120A (hu) | 2009-08-14 | 2015-08-21 | Phasebio Pharmaceuticals Inc | |
| CA2788811A1 (en) | 2010-02-11 | 2011-08-18 | Metabolix, Inc. | Process for gamma-butyrolactone production |
| EP2717902B1 (en) | 2011-06-06 | 2018-01-24 | Phasebio Pharmaceuticals, Inc. | Use of modified vasoactive intestinal peptides in the treatment of hypertension |
| CA2976038A1 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Phasebio Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating muscle disease and disorders |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4605641A (en) * | 1984-10-09 | 1986-08-12 | Hoffmann-La Roche Inc. | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs |
| US4734400A (en) * | 1984-10-09 | 1988-03-29 | Hoffmann-La Roche Inc. | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs |
| GB8427651D0 (en) * | 1984-11-01 | 1984-12-05 | Beecham Group Plc | Compounds |
| JPS62246595A (ja) * | 1986-04-17 | 1987-10-27 | Eisai Co Ltd | 気菅支拡張作用・降圧作用ペプタイド |
| US4835252A (en) * | 1987-02-26 | 1989-05-30 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Vasoactive intestinal peptide analogs |
| US4939224A (en) * | 1987-02-26 | 1990-07-03 | The Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Vasoactive intestinal peptide analogs |
| SE8702520D0 (sv) * | 1987-06-16 | 1987-06-16 | Kabigen Ab | Mammal intestine hormone precursor |
| SE8705139D0 (sv) * | 1987-12-23 | 1987-12-23 | Trion Forskning & Utveckling | Forfarande for framstellning av ett stort antal peptidanaloger och nya peptidanaloger |
-
1989
- 1989-06-30 US US07/374,503 patent/US5141924A/en not_active Expired - Fee Related
-
1990
- 1990-06-15 EP EP19900111269 patent/EP0405242A3/en not_active Withdrawn
- 1990-06-22 ZA ZA904897A patent/ZA904897B/xx unknown
- 1990-06-27 IL IL94884A patent/IL94884A0/xx unknown
- 1990-06-27 NZ NZ234268A patent/NZ234268A/xx unknown
- 1990-06-27 CA CA002019970A patent/CA2019970A1/en not_active Abandoned
- 1990-06-28 MC MC902134A patent/MC2131A1/xx unknown
- 1990-06-29 AU AU58084/90A patent/AU5808490A/en not_active Abandoned
- 1990-06-29 KR KR1019900009735A patent/KR910000794A/ko not_active Application Discontinuation
- 1990-06-29 YU YU126690A patent/YU126690A/sh unknown
- 1990-06-29 PT PT94553A patent/PT94553A/pt not_active Application Discontinuation
- 1990-06-29 JP JP2170334A patent/JPH0338600A/ja active Pending
- 1990-06-29 FI FI903296A patent/FI903296A0/fi not_active IP Right Cessation
- 1990-06-29 NO NO90902916A patent/NO902916L/no unknown
- 1990-06-29 IE IE238890A patent/IE902388A1/en unknown
- 1990-06-29 HU HU904033A patent/HUT55803A/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0338600A (ja) | 1991-02-19 |
| US5141924A (en) | 1992-08-25 |
| NO902916L (no) | 1991-01-02 |
| CA2019970A1 (en) | 1990-12-31 |
| IE902388L (en) | 1990-12-30 |
| PT94553A (pt) | 1991-02-08 |
| KR910000794A (ko) | 1991-01-30 |
| AU5808490A (en) | 1991-01-03 |
| NO902916D0 (no) | 1990-06-29 |
| NZ234268A (en) | 1992-11-25 |
| IL94884A0 (en) | 1991-04-15 |
| YU126690A (sh) | 1993-05-28 |
| EP0405242A3 (en) | 1992-05-27 |
| IE902388A1 (en) | 1991-06-19 |
| ZA904897B (en) | 1991-03-27 |
| HU904033D0 (en) | 1990-12-28 |
| FI903296A0 (fi) | 1990-06-29 |
| EP0405242A2 (en) | 1991-01-02 |
| MC2131A1 (fr) | 1992-01-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2515473B2 (ja) | 血管作働性環状ペプチド | |
| CA2100743A1 (en) | Amylin antagonist peptides and uses therefor | |
| WO1988006598A1 (en) | Vasoactive intestinal peptide analogs | |
| HUT55803A (en) | Process for producing vip-analogues ii | |
| EP0768090A2 (en) | Polypeptides having c-AMP producing activity for the prevention of neuronal cell death | |
| US4734400A (en) | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs | |
| CA2351665C (en) | Antagonistic analogs of gh-rh inhibiting igf-i and -ii | |
| US5234907A (en) | Synthetic vasoactive intestinal peptide analogs | |
| AU8237187A (en) | Derivatives of atrial natriuretic peptides | |
| CA2196308C (en) | Peptide, bronchodilator and blood flow ameliorant | |
| NZ200711A (en) | Crf peptides and pharmaceutical compositions | |
| EP0307860B1 (en) | Cyclic GRF-analogs | |
| US5502164A (en) | Peptide compounds having therapeutic activity | |
| FI111647B (fi) | Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten syklisten peptidien valmistamiseksi | |
| EP4234574A1 (en) | Crf2 receptor agonists and their use in therapy | |
| JPH03505589A (ja) | 新規生理活性ペプチド類および該ペプチド類を有効成分とするカルシウム代謝調整剤 | |
| JPH08333276A (ja) | ペプチド及び気管支拡張剤 | |
| JPH04352798A (ja) | ポリペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFA9 | Temporary protection cancelled due to abandonment |