HU230679B1 - Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions - Google Patents

Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions Download PDF

Info

Publication number
HU230679B1
HU230679B1 HU0301102A HUP0301102A HU230679B1 HU 230679 B1 HU230679 B1 HU 230679B1 HU 0301102 A HU0301102 A HU 0301102A HU P0301102 A HUP0301102 A HU P0301102A HU 230679 B1 HU230679 B1 HU 230679B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
gin
ser
pro
mice
len
Prior art date
Application number
HU0301102A
Other languages
English (en)
Inventor
Birgit Oppmann
Waal Malefyt Rene De
Donna M Rennick
Robert A Kastelein
Maria T Wiekowski
Sergio A Lira
Satwant K Narula
Original Assignee
Merck Sharp & Dohme
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26860707&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU230679(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Merck Sharp & Dohme filed Critical Merck Sharp & Dohme
Publication of HUP0301102A2 publication Critical patent/HUP0301102A2/hu
Publication of HUP0301102A3 publication Critical patent/HUP0301102A3/hu
Publication of HU230679B1 publication Critical patent/HU230679B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5434—IL-12
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence

Description

(57) Kivonat
A találmány valamely emlősből eredő citokint kódoló tisztított génekkel, az ezekhez kapcsolódó reagensekkel, ide értve a tisztított fehérjéket is, fajlagos antitestekkel és ezt a molekulát kódoló nukleinsavakkal foglalkozik. A találmány foglalkozik továbbá az említett reagenseket és diagnosztikai készleteket alkalmazó eljárásokkal is.
SZTNH~WŰ3335 rwiilötilSIílJI
0/ .. , d
/.,, d: 'j:*U, nic/d
Emlős cHoklnok; kapcsolódó tosgaossk ős eljárások
A. találmérty ed.yen: fetiér jékkez kapcsolódó írenpozíciókoa og ód iátáOóAltg óóoopkoóikó: amelyek emlős sejkek, példád egy anrir immun remis zer ao jt gd ódqidd és fÍzlel égiá iának s zabái yo-lásában tevékenykedned d a találmány szoigáitgt 'kélóeéóop tlee·· tltobt génekről., lekérjókét, ad A.éestekcé, kapcsolódé reagenseket és d járásokat, amelyek, használ hetét péloád. kdénboxó se j tél pocok, Ide értve hómátrápPiótiAep·· sedekev., aktiválásának, fejlódém esnek, dl dót?em:dl.Adásának és kel ködéé ének. szabályozásához,
A rekombináns odó OehhAologiar áltálában olyan tcche; kére ufa.1, amelyben genetikai rdormádé integrálódik egy donor fgd rácból yektoxókbá egy est Abyété r ddcigo záshoz, példáéi opy gazdaszervezetbe való bevezetéshez, amely által az áévltt gene-tikéi, információ át oá tolódik éelvágh expresszálődik az áj kori' nyéketóén. A gebe tikéi in tormádé általában komplementer DÓS kabkd) formájában létezik, amely édy kívánt fehérje terméket kp dóié ki. rdyó IzWosóhbefj Add “bel ImAhSá származék. A hordozó gyákián valamely plazmid, amely Aopep ódádé beépíted. a képápbi, dpgjzihlyÉihps Kyeioéiy:; rgBidáézoyyphóthár, léé bioopypd· rgpoiyypegy kápoe tpeyiógphéP epabaiydái a dobd expressziéi át, és ezaltd >. kódolt, tetmét 101001.100 szratóxA.sét á gazdaszervezetben.
Mar bizpoyoe: Ida jó lóMoth, hogy ae emlős immun válasz egy got keiyldA oólóelázd:,® :kóihodhéórf.ésO;n alapéi, amelyek ,,izsmpohálótoh~ Aá'kr* lilkizsMíyéh hdtPbkklfrr :ΑΟβοόόΡζ mezei lkepppp-iy>tbOA: IpéAÖmtA ny óz fe été Apói szokk&hyyói dodaménfai imrmandogy d. ki átlásd Aaven idkóhp, APA AhOló ifidé Af, fc széóhpl, tlddk. 1 Alttól Apái rád: 10010--s· < · < > x ·>
tintást syoj tanok swö hálózat belső móködésére. Miközben világon marad, hogy a válaszok közéi valóban sok a tiofoorták, nakrofágok, granslpoitát és más sejtek bálózatszérá kblnaönhatösál körál kering, az Ijpunbniógdaök bőét áltálában: azon a véleményen tanáék, hogy az öidhatö fehérjék, amelyek li.mf ok.fnekfcánt:í or tohi.nekként vagy monokinekkánf ismeretesek, kritikus szereper. játszanak ezen teliéláris kei osonhatások szabályozásában, Így jelentet erdők fűződik a sejt Oédöéiko faktorok izeiá iáelhoz, jeli nézéséhez és tévé kény sápi meenani Somához, amelynek megértése jelentős fejlődéshez vezethet számos orvosi rendellenesség, példáni immnnrendszer rendellenesség digguézléában és terápiájábán. Ezen faktorok közül több bematopozeti kas növekedési faktor, példáid granuioeita telepet léniáid faktor Igrannlddyte eoiony stÍmeitat ina tantor (G~CdF)J , Ezzel. kapa sólet bari int ormáé lók szerezhetek be az alábbi. szakkönyvskbÖl; fhoeeon (szerkesztő): The Cytekrne Hanőbeok Fi, kiadás), beadóméc Press, San Dl ego hívéé); Giro-öiaia és ihorpe (szerkesztők)z Cytoklnes, Aoodemie Éress, bán örege (1991); Metcaif és breela; Ide baeétepoiefle Soiony Stioniatrnn Fadtörá, Cambridge öniversity Press (1.999); na ággá reál és Gat termen: Hamar· Gy fok inas. Biankóéii Pub (1991) , A öltökén expresszié .au ipssurr zenés re r sejtjei révén fontos sze·· ment játszik az immunválasz szabályozáséban, A ing több o.irtok in pleitrépos és többféle hlniógrai aktivitása van., ide értve az antigén-bemutatast; akta válást; CGI a? sejt elkésni elek tarján zásét és dlfféréseiáiőaásál; antitest választ B-sejtek révén; és a krporerrékonyséa mennyi lvánni.ásáv , Ezen kívül a ortekmef aikairázhatok sokféle olyan dsgsneratrv és rendellenes áilapot dzagnoié,taézét ztsában és terápiájában, amelyek közvetlenül vagy közvetve étin tettek az iavminrendszerben. ós/vagy a hemst.epeletikas sejtekben.
A. Hete kinek nyibvaöválöse sokféle öten közvetítik a eeiiniáris akt 1vizásokat, Ezekről kimütatták, hagy téeöpátjök á tárj intést, növekedést, esi vagy a többhatáaü iplnripotenclálisi 'bémalöpoistikns őssejtek őri te;enoiáibdását nagy ssáeú utóddá (oregoni torrá;, amelyek különböző· eeiiniáris leszármazási ágakat tsftáipaznakf kialakítva egy komplex immonrendszert. Megfeleld és kiegyensúlyozott köicsöahafások szükségesek a se11 piáéis alkotórészek között az egészséges immenválaszhoz. é különböző cella táris leszármazása ágak gyakran különböző módon válaszolnék, amrköt iimfoki nekét vezetnek be más szerekkel együtt, é sejt le szárma rési ágak, amelyek különösen fontosak az imvonva 1 ászhoz, iimfoe.it ék két osztályát foglalják magokban; Bsejtek, amelyek immunglobulinokat (fehérjék az idegen anyag felismerésének és megkötésének képességével, hegy kivitelezzek ennek eltávolítását) termelhetnek és választhatnak ki, éa a Tzejtex különböző eikéazletel, amelyek iimfelmeket választanok ki, és indokai jók vagy visszaszorít jók a B~sej fokot és különböző más sejteket fide értve más P-séjtekét is), kialakítva az nzana· hálózatöt x Ezek a Iimfoci iák kői osonta fásba lépnek: több más sej 11apóssal is ,
Az előzőekből nyilvánvaló, hogy új limfokinek (pélbáal Ρ-ΡίΕtei és/vagy 1 ;..···6-tai főkön limfokiuokú felfedezése és kifej 1 osztásé hozvájáhalkatné sexféle dögónératáv vagy rendellenes állapot, amely közvetlenül vagy közvetve érintett az immnnrosdszorbeh: ős/vagy a bémálopoetlkns sejtekbe;:, új terápiáihoz, külöúöoanssvsv
sen óiyes irmfekinek felfedezése és ki feg 1 osztásé lenne nagyon előnyös, amelyek fokoznák vagy mégetésilenék ismert li.mioki.nek kedveké akzivizásaiz. Ivedet.Heg az Π..··Β30 áj gént azenogi zozkék, mlék lehetséges eltekint megjósolt; szerkezekére alapozva, ús élt égy öezkélyezrák, dint hosszú láncú eltekint, hasonlóan az iL-k-hoz és a G-CkF-nél (BCT/d39k/ls4i3 számú PC'T bejelentés, amely méglelel a bO 99/01210 számú kel közzétételi iratnak}. Az it-h-nak és rokon zd ZoRinekoek, mint az bnfösftatln b-nek, IonKémia inhibitor ffáffxnáX [leukémia inhibitőry kantor Π,ΙΖΟ;, ősi Írón nooroz kél lakiéinak tel Hat y neeret ropóle tantor fCbWj j és karélótrofin-1-nek hlológ iái aktivitásaik vannak a ;zemak epeié kid re, tlébbopöietlsre, az eket rázza válasz Indnkslé· iára, őSZteoklaait képződésre, neuron óitléréneiáládáéra és túl· élésre, valamint a szív tipor tóráiéra., Az iL-Báé 1ranszgeni kas exprese elé i a egerekben hasonló íenotlpnst iadPiál, mint amely 11,-i zúiexpresszáiásnái figyelhető meg egerekben, ide értve a oseoevészesedért, szisztémás gyulladást, te mákét len séges és pusztai ást, Az IL-Bdö-rél úgy tűnik, hegy egy áj dltokin, amely ·? s. i n z o z z a. g g a I 1 z őa s Oa · .
Az aláóöiak.ban ősszelogiaijuk a zaláimányz.
A tél élmény részben az lbB3é, amelyre helyenként Is -B30 főtériéként ntalonk, fiziológia.;, szerepének felfedezésen alapél, és szerepen ez immunválasztan, Az Π,··00 szerepe kúiánosen azokon az pzakeh vet megvilágítva, amelyek érintették a gyeiládasokban, férz e zö beteg regekben, kamatepe1e11 kn s f é j. 1 éné eben e s v1rnsfér* főzésekben. A találmány elsősorban olyan tempósig1ékre irányul, amelyek lL~iz plO alegység kompinéöleit tartalmazzák interleuvr,sue/sr kin-Ble-cal bt-210), és irányul ezek biológiai aktivitásaira. A találmány magaban foglal nakleinsavakat, amelyek kódolják mindkét polipeptidet vagy a fát sós fehérjókét, és; «agában togiai eljárásokat erők termeléáérp és el ka'óta kására.. A találmány a sérinti eskleisavakat részben tomoiogiájak jellemzi az iái leírt komplementer DBS IrBbd) szekvenciákhoz, és/vagy jellemzik ezeket reakciósa 1is vizsgalatok is>. A. találmány biztosit polipeptide kot, antitestekot és eijárásokat is esek alkalmazásara, rde ezt·ve aikaimévá soka t. nnkleinsav ezpresszlős eljárásokhoz. A találmeny eljárásokat szolgáltat mádasitáára vagy közbeavatkozásra egy szőve kodás 1 faktor- függő fiziológia vagy egy immunválasz sásba i y o z á s ab an·»
A találmány részben azon: a felfedezésen alap:.:!, hogy ez iá-12 péö alegysége az 1L-25B cstoksnnel természetes formában is tárcol, ahogyan est már korábban ráírták az USőh 00/900,905 is 00/122,441 számú szabadalmi iratokban. így a két polipeptis együtt~expreaszalása fan reionéiis receptor kötést és jelző rendszert eredményez..
A találmány kompozíció·; is szolgáltat, amely az alábbiakat tartalmazza: á> mind: egy lényegében tiszta, IL-db p/e-ből való legalább 2 össze függő amínosavas elkülönült szegmensek sokaságát tartalmazó polipértidet, és egy lényegében: tiszta, b,bob -bel való legalább 7 összefüggő aminosevae elkülönült szegmensek sokaságát tartalmazó poiipoptidet; bj minő:: egy lényegépen t.tsz te, lém-12 péö-hol való legalább 11 összefüggő azonosa vas poiipepfeidet, és egy lényegében tiszta, IL-BzO-rói való legalább 11 összefüggő amirbsayss polipeptidetp o) égy lényegében tiszta ti.Sibak pöiiPeptidétemély' bá r fa ima z fa mind; 11,-12 pdú legalább 7 ősz- szefüggő asainősayáá őikuiönnit szegmenseinek sokaságát, és kb23 0 legalább 7 összefüggő aminpeaysa ni kel ön tüt eóégmebaéibök sokaságát; vege dl egy lényegében tiszta poü.peptidet, amely tartalmazza minő ib-12 plü egy legalább 11 dsatefüggő vznouon szegmensét, és 12--032 egy legalább 11 összefüggő aminosavás szegmensét, A külöebözö kiviteli formák magokban foglalják azokat a kompozinfokats a) ahol a legalább 7 beszelaggá aminosavas elkülönült szegmensek említett sokasága tartalmaz agy legalább 7 összefüggő ámiaoáásaa szegmensé; fej ahol a lege Iákká 7 összefüggő aminooavae éiküiönült szegmensek említett sokaságának mindegyike legalább 3 bsszel aggó aminosavas; tg ahol az lb-12 páö legalább 11 össze függő aminosavas említett szegmense legalább 15 össze······ függő aminoaavasy rb ahol az Π,-ΒΊΟ legalább ü összefüggő aminősabak említett szegmense legalább 15 összefüggő aminozavas; é| amelyek továbbá tartalmaznak valamely hordozót valamely vizes jellegű anyagból, ide értve a vizet, fiziológiás ko.oyöasóoldstot és/vagy puffért; I; amelyek orális, raktál is, nazális, helyi zagy paronterális beadáshoz vannak kiszerelve; vagy g; amelyek steril, kompozíciók, A töváfefei kibiteii formák magokban foglaljál azokat: aj ahol az említett poi Abepfei.de k legalább egyike ij kimdfátbatőan jelölt; ül rekombináns úton ei.baiil.tort; iiij bem giikozzlezett; le) bénátéráit; v) szilárd noröozóra rögzített; vagy vi) más kémiai részhez konjógáit; b? amelyek tartalmaznak mind egy lényegében tiszta 1L-Í2 péü ppiipeptidet, mind égy lényegében tiszta 11,-330 ool Ipepfidet; ej azmü.yek tartalmaznak egy lényegében 'fa po •x Sípfidet .-12 'ét tartalmaz 11,·
X * < + * ¢.
Őzö-böz fuzionálva; vágy d· amelyek kombinálva vannak IL···· 1. s-cal, 11-17-vei, besugár zással vagy kemoterápiával, valamely immun aöjuvánssasi, vagy varaséi lenes szerrel. A készlet kiviteli formák magokban foglalják azokat a ke szia fékét, amelyek 'tartalmazzák ez említett kompoz leiét, továbbá: aj egy rekeszt., amely az említett polipeptidet tartalmozza? vagy b) útmutatókat az említett készletben szereplő reagensek alkalmazásához vagy yiegeemmisitéáébez„
A találmány szerinti nukleinsav kompozíciók magukban ing iái nak például valamely lyoláit vagy rekombanáns nukieinsavat, amely az alábbiakat köbölje: a) minő: egy lényegében tiszta, 1L-12 péötői való legalább 1 összefüggő aminosavas elkülönült szegmensek sokaságát tartalmazó poilpeptrhef, ás egy lényegében tiszta, Xit-átöbői váló legalább 1 esszexhggő aminosavas elkülönült, szegmensek sokaságát tartalmazó polipeptröst; b) mihal egy lényégében tisz ta, ln-lt pao-bél velő legalább II összefüggő aminosavas pelipepflóét, és agy lenyagébep tisztei, IL-ésü-bói való legalább II összefüggő aminosavas poilpeptlóét; c; egy lényegében élezte rój. ipepfi.de t, amely tartalmazza minő: Ik~ Íz. p4 0 ion a látó ? összeinggé asm. nőse vas elkülönült szegmenseinek sokaságát., és ι1,-»30 legalább 7 összefüggő aminosavas elkülönült szegmensei sok sokaságát; vagy ö) egy lényegében tiszta pol.f pap tódét, amely tartalmazza mind: IL-lz piü egy legalább 11 összes hegé aminosavas szegmensét, és 11,-téO egy legalább 11 Összefüggő aminosavas szegmensét, é különböző kiviteli formák magúkban fog le inak olyan kömpozleiökaf koholó bakreinsavat, a) ahol a iegálább 7 ősezofüg itat óné.
omlnösavés eikülgfiülf szegmensek említett sokasága egy légalább 7 összefüggő aminosavas szegmense? b) ék faltaiétól a <<
legalább ? összefüggd a td.no savas elkülönült szegmensek említett áokaaágáosk miodégyiks legalább 1 összefüggd amfnösavas; p) ahol az lh-~12 piü legalább 11 összefüggő aminosavas említett szegmense legalább la összefüggő aminosavas; d) ahol az 1Ö-33Ö legalább 11 osszafüggő aminősevas említett szegmense legalább 15 összefüggő aminosavas; a) ahol a említett 11-1.2 pld valamely fgöblősből származik; f; ahol az említett IL-ölö valamely főemlősből szármázik; g; amely nnkleinsav valamely expressziős vektor; fő amely tartalmaz továbbá valamely regi akácfos origót; iá amely tartalmaz valamely kimüfafbafö jelölést; j) amely tartalmaz szánt etikas nokleetlá szekvenciát; ki amely kisebb, mirt 6 ka, előnyösen kisebb, mint 1 kb méretű; vagy I) amely főemlősből származik, á találmány szolgáltat olyan sejtet is, amely tartalmazza az említett rekombinána nakisinsavat; az említett sejt lehet prokariéta-, eukariöta-, baktőr itat·, élesztő-, róván-, emlős-, egér-, 1 berniős eredete sejt, vagy bőmre sejt, á készlet kivihold. formák magokban foglalják azokat a készleteket, amelyek tartalmaznak egy említett noklelnsavot és a· egy rekeszt, amely az ·? m i · t < 11 rak 1 a in savat far bal ma z z a; b} egy re ke s z f, emel y 1 n ·· fa ima z még egy főemlős IL-1.2 piö poizpapt főét; el égy rekeszt, amely tartalmaz még egy főemlős iL~B3ö polipeptzdef; vagy a) ntmotatáéökafc az említett készletben szereplő reagensek alkalmazótoboz vagy megsemmis 1 főséhez,
Egy máöik tormájában a találmány olyan aaklelnsavaf biztosít, amely nibrrdi zsl: eá 30 perces, 50öÖ hőmérsékletén vég zott mosási körülmények körött kezesebb, mint 1 möl/liter sökonoenfféciöbáI á fbbmlőö Ilvlk páö törmásoetbá érett kódoló részéhez; ás bj. 3b látásé®· sorozom Sóiét homárnékiezen végzett sossooos köruimónyek között sssvoaobb, mint 1 mól/11 tér a ókor-cent rács. ónál ö főemlős lb--öiO természetes érett tődé ló részéhez, A. különböző kiviteli forrnak magú kban foglaljók az olyan említett cokiéinsavakát, ahol a) az említett mosási. kdrüimönyek 1L-12 ptk-net ózŐC és kevesebb, mint óöö nwbl/Xiéer sókoncenf racié; b) az említett mosási közti •tények ΙΑ-·ο3 0-hoz AC.öC ős .kevesebb, mint A 00 mmöi/ liter sókoncontráció; cl az említett cokiéit sav azonosságot, mutat egy legalább 5/ nukleotittas ki tarjenessel a főemlős TL-lz p4Ö~ét kódoló szervenciábany és/vagy dl ez említett nokieinsav azonosságot mutat egy logoé, óbb 10 neki ag ti dós ki tor jegessel. a főemlős 11,-- 03 h- a t ködeié szekvenciában, Az előnyős kavitelt formák olyan nuklei.nsa vat foglalnék magukban, ahol a) ez említett mosást körülmények 11:-12 póö-hev isoC és kevesebb, mint. 150 m.mői/iiter: sőkonoeetráeio; ól 82 említett mosási körülmények IL-ö/O-hoz őb°G út kevesebb,: mint ISO óméi/11 fér sókoncunk rácod; dj az említett nukies.nsav azonosságot matat egy legalább vé nukleotidos kitérjeöésse.i a főemlős iL-12 pAő-et kódold szekvenciában; és/vagy dj az említett uuklda insav azonosságot mutat egy legalább SÖ nnkieofidős kiterjedésseI a idemiős ib-öin-at kódoló szekvenczában·» t találmány az 11-12 piQ/1'L-Bgö kompozíciók ontagóniákéit a zol gé.1 és t ja, kombinálva púi dóul valamely Térő antagonistává 1, 11,-12 antagonistévai, lb-10-zel, vagy szteroiőokka1,
A találmány kötő anyagokat is biztosit, például olyanokat, amelyek tártaImuznak valamely antigén kötő helyet valamely sutitestből, amely antitest fajlagosan kötődik egy 11,-12 piO/it-Bré tompot1eiöhoz, ahogyan leltjük, és a) fartasmaz mind ecy lényeV O t5 * ·*»
V > *
X * Λ V
XX * * ·♦ . * .<· ψ X gében tiébta bt·· 12 ρ40 poii.pept Idet, mind egy lényeg óbe;·· tiszta IL-330 palipepiidei tartalmazó iányenében tiszta poi ipepf idet, vagy zb tattalmaz egy 11,-12 pie-zn. iL-330-hoz fuzionálva tartalmazó lényegében tiszta po11 pepiidet; de nem kötődik sem lh-lz piO, sem IL-B30 polipepfléhez, További kötő anyagok Kötött táléi,hat db azok, ebei a} az érd, i tett kötö anyag valamely tartály··· tan van; id az említett kötő anyag valamely kv, bab vagy Fabs rregmenivm; tg az említett kötő anyag egy másik kémiai tésbhoz van kenj agáivá; vagy d) éz említett antitest; lg In-12 plO/Inkáé kompozlei6 ellen ven megalkotva; ii? 1 nana n- al apón van szeIdhháiva; 1111 poliklonóiis antitest; Ív) legalább 30 mmöi/Iiser hd-t mutat antigénre·; v· bbilérd hordozóra van rögzítve, ide értve a gyöngyöket vagy möanyég membránokat; vdg steril tömpéidéi öten van; vagy vili kimetathatöan jelölve orr a jel öl de ok kőid értve a radioahély vagy f iaox.es zoens jeledet. Bizonyos előnyön fonmak között találhatok ét olyan kompozíciók, amelyek tartó ima znak; 1 valamely steril kötő vegyületet, ahogyan leírjuk; vagy b? tar le imaszák az érni1tett kötő vágyólelet és valamely hötdéCöiSí ahol ez említett hordóid I? valamely vizes anyag, ide értve a vizet, fiziológiás bonyhaáöoidafept és/vagy pufiért; dáivégy 11? orális, rektáiis, nazális, helyi. vagy parenteriális beadásban Vén kisbéréivé, ó találmány továbbá készlet kiviteli lörmát is biztosit, amely tartalmazza az amiilett kötő vegyálgtet dó abegy rekeszt, amely far táj. mázzá az említett kötö anyagot; vágy tó öt műtaiásokat az esdi lett keezlótben Igvd reagensek a .1 ka. ima zó oá rdi vagy meg semmis 11 ázó re I,
Szén kivdl a találmány eljárásokat gyújt antigén:antitest <· >
komplex előáll lé ásóra, amely élj áras ok <e e.r int érintkezésbe hézunk megfelelő körülmények kozott egy főemlős IL-Ίζ plO/JL-330 kompozíciót egy emlrtett kötő anyaggal, énéi fal lehetővé válik, bpgy az amink! komplex kelet kozzak, Á különböző eljár ások manókban tégla 1 jak azokat, ahol aj az említett komplex más oltok!nőktől meg Van tisztítva; fel az említett komplex más antitestektől meg ven tisztítva; oj az említe tt éniné kezesbe nozáa xc iáméig cifőkiné tartalmazó mintával történik; 0? az említett érint közősbe hozás lehetővé feszi az említett antigén mennyiségi meghatározását; éj az említett éríntkazésbe hozás olyan mintával történik, amely farralmázzá az említett antitestet; vagy fi az említett érintkezésbe hozás lehetővé teszi az emilfetf antitest mennyiségi meghatározása?; a taláimőny el járásokat; la nyújt valamely sejt vagy szövet fiziológiájának vagy lej 1 édesének médosifására, amely el járás abból áll; hogy az említői, t sejtet érintkezésbe hozzak egy lb-12 na b/í η··· »10 kompozícióval, vagy éntágénzabájával, őz egyik előnyős eljárás egy sejt fizlolőgiájának vagy fejlődésének moőoslfására abbéi, áll, hegy az említeti, sejtet érintkezésbe hozzak, egy IL-12 pjö/lb-Bőh kompozícióval, és ez az emlitefr érintkezésbe hozás növekedést eredményez az IOiy termelésében·. áa említett bejt tipikusan valamely gazdaszervezetben fa léibe tó, és az említeti. organizmnz fokozott Thl választ mutat, például az aiáb~ Ólak va iame 1 yikév.: tűmére1 lenes hátas; amjovéna hatás; virezeilenes hátas; vagy untagonizált alkergén tatás, bt érintkezésbe hozás gyakran van kombinálva az alábbiakkal: IL-ik; lb-12; besugárzás ez; terápia vagy kemoterápia; valamely immun áéjuváne; vagy *:v. ioezez;
valamely vírusellenes terápiás szer.
égy másik kiviteli forziábari az említett ántsgonista valamely antitest 1L-2 receptor βΐ alegység ellen, így a találmány koráiéi el egy olyan eljárást, ahogyan Leírjuk, ahol ez említett érintkezésbe sose a vsla?aely antagonis tavai történik, ég az említett orr eh körösbe hozás réLgtiv csökkenést idéz elő az IFOy ter se lésében.. így a találmány eljárásokat nyújt egy sejt űzi elégiájának vagy hej lécesének módosításéra valamely gazda organzzmosfeasg amely eljárás abbéi áll, hogy az említett antagonistát bevezet jak az említett organizmusba, ahol az ágiit ott érintkezésbe hozás az alábbiak javulásét eredményezi: autoimmun állagot., vagy króni kos gyulladásos állapét,
A két alegység társulásának azonosékása eljárásokat nyújt az alábbiak kivéiasztáeónak növelésére: aj föemiöe 11,-330, ahol az az eljárás az említett peiipeptid erpresszálasábol áll Ih-iz páO-nel; vagy b) téeeioa 13-12 p4Ö, ahol ez ez eljárás az említs tt 13-12 póo expresszárásból áll iü-B3ö~oal, előnyösen aj az srd.itett növekedés legalább háromszoros: vagy b) az említett expresszálaa egy, az IL-B.is-a t és az Π,-li ράθ-at kódoló re kombi h á n s bú kiéi nedv e epres szálasa,
A találmány átvizsgálás! eljárásokat is biztosit olyan reenpzorokra, aéai.yek kötődnék az említett 11,-1 z p4e/li-B3h kompoz:;.·· eiéhbzy ez példáéi abbéi áll, begy az említett kötelezet érintkezésbe hozzak agy, az említett receptort expresszalé snittel olyan körülmények között, amelyek lehetővé teszik, hagy: az omiitett komplex törődjék az említett receptorhoz, amely által kimutat haté köieeönhatág alakul ki. Is említett kölovöbhátés előnyé·· 'lé,átkotá e· *
een fiziológiai választ: eredményez az emlifett sejtben,
A találmány eljárásokat nyújt leukooiták forgalmának vágy aktivitásának módosítására is valamely állatban, amely eljárások abban állnak, hogy monoolt a/Ttakrof ág: leszármazás;! ág sej léket vs lanti y állatban érintkédéshe hoznak emlőd TA-H30 fehérje
ageniotéjd inuk; vagy emlős Í.L-B30 letérje valamely a a tsgonis-
tájának tn zrápiés ment yiségóvei. Az előnyős 1 •ti ve. feli mód b) . $ ő O K f-
ahol: az a emlős IL~ikn 1 fehérje főemlős teherj v? <V , i p : zz aóta-
gonista el .yen anhrt.es r , amely kötődik az emb te Ih-ü3ő-ho z, öizo-
nyes kiviteli módok tanéinak azok, ahol & monoto. t a/ma k.tof ag leszármazási ág sajtok magukban foglalnak mik.togl iáira sejteket vagy dendrites sajtokat, vagy ahol az állat gyulladásos, lankatroliferativ, neurodegeneratrv vagy poszttraumas állapotok jelölt vágy ionokéit mutatja. Az előnyös kiviteli módok között találhatók azok, ahol a jel vagy tünet tudósaevetben; ma jszövetben; idegszövetben; Hatoló szövetben; zm.eie.fd szövetben; hasúvá l?aizigyöen; gyomor- es bélrendszer szövetében.; pap ram!rágy szövetben; isomsrbvetben; vagy bor™ vagy kollegán szövetben található.
További el. járások között találhatók azok, ahol g mödositás a leokbölfá sejtek működebének gátiáss; esivagy ahol az agonlsta bevezetess történik. Az agozmsta előnyösen az emlős If-Blé, öltönyös kiviteli. módok azok, ahol az állatnál az a lé obi betégsegek jelei vagy tünetei tapasztalhatók; autoimmunitás; válasz iy gyűliadusós állapot:; szövet tag leges autoimziunitás; áegeneratlv autsdmmnni. tár; izületi csáz; osont- es izületi gyulladás; aferozzklerozj s; sz He tézis multiplex; vaszkuilf láz; késiéi teheti tűié r zó ken y tág; hőt áru it éhes; t r a o s zg! untáéi ó; gerinc:ai;olZVbá serülés; szélütés; idegdegonarécié; valamely fertőző betegség; sex kérni a; rák; tv.morok; tőbbézöfés éleléma; Castlemnn-féle befog ség; klimax ntani csontr1tkolás; vagy IL-n-tai terseit betegségek, A bevezetés tórténbot az alábbiakkal kombinálva: gyulladás-ellenes eltsklg agonicta vagy antagonisf.á; valamely fajba1 amcsi!lapító; valamely gyeiiacásellenea aser; vagy valamely ' ' ν'. a .
é találmány különbőzé más eljárásosat is szolgáltatf sást a módosítás a iegkooita sejt működésének fokozása és/vagy ax astagos ista bevezetése, Az anfagcnista előnyösen; valamely antitest, amely ex emlős in-bzO-hoz kötődik; vagy az emlős Ib~b3ö valamely mnteÍ.nje., emeiy verseng ax emlős 11,-Βΐΰ··eal. ez 1.L-B30 receptorhoz való kbfcöésért; de lényegében sem ed jelet. Xőiönhőző kiviteli módokban az eljárást akkor alkalmaxzukj amikor az álla toknál sebevégveiás vagy vérrög kialakulóé jelei tapasztelhetők. A beadás gyakran ax alábbiakkal kombiné Iható; valamely angináén .faktor; valamely növekedési faktot; ide értve az kék-et vagy éDGk-et; valamely ant.ih.iet 1 kém:; vagy valamely alvadóéi faktor, végéi a találmány eljárást nyújt a memória ?™sejtek burjánzásának Inda Rá Iáiéra ik-oo-nak. vagy agonistá jának beadásával.
áz alábbiakban részletesen leírjuk az előnyös kiviteli formákat ég mohokat.
Minden irt Idézett referencia referenciaként épéi be a jelen öejelentésbe olyan mértéklg? mintha minden egyedi közleményééi vagy szabadalmi bejelentásnál speciálisan és egyedileg jelezték volnaf hogy refarenoiákén 1 épül he.
vi:da8nm
X >
Λ * . * *
0·« x ·* : w
A «*
I, Általános rész
11, Tisztított It-lz pló/Hz-öJO komplök:
A, fizikai t. óla;} kon vágok ' , t x x ' -x. ~ ,O -V7
111< Ti z i ka1 var 1 á naok
A. ο z o k v a a o 1 a v a r i á n s o k1 r a g ο a a fe cos k
8s transzláció utáni vaaliasok
1. gliközi latos z.. agyébak
TVl Tunkciooális variánsok
A, analógok, fraosneotooek
1, ágonisták
2, a r · f a gο n1áták
S, óimat ikttaok {'utánzók}
1, téhátíó z, kaTiSÍ anyagok
T .: la 11 a va a 1 á n s o k ti Antitáskák
á. páll ki or:a I inak
3. η o ; 5 o klón á l 1 s a k ti. iragnaoziomok, kötő kompoz1ciák
VI:... B o ki a 1 Pa á vak
A teroíészetás 1. zoütnooko ellátások
B . s zin tat .1 kua géné k C. izoiáiási eljárások
VII, ploZl i-Boi koitplox kássitésey almot ikonok Px/lPóti ❖ *··* ❖ S * > * * * '
C χ·χ ·>'*
A, ζ< kombinkon eljáráegk g, a ζIntοti k n s eljárá·ok
β. természetes: tisztítás
VIII» é.i k a i;ta sá sok
A, dlagnoszt1 kai g, terápiás
IX . Készletek
1. neki eznsav reagensek
B, ize her j e reageneek
C, antitest reagensek
X. Receptorok izolálása páO/fh-Báh komplexekhez
X, Ált»lá.a»« rést A. találmány emlős fehérjék Oaszepárosi.tá sávéi nyújt leírást és ki tani fást valamely oldható citokm előállításéra; példázd olyan. kiválasztott mel.ekeia előáLlitására, amely közvetítem képes egy jelet az immansejfok vagy más sejtek kőzett; ezzel. napozol atban tájékoztafást nyújt rázd. szakkönyve; Fnndamantai fon sose fogy (i , kiadási , karén Bross... New York ó é VB ) , Bizonyos Oldható fák torok izet erőd íme r poiipeptiéekböi., példáéi IL-B'didl és Ii,-s 2-bel vonnak felépítve; A elmer sornak, smolyok va.i.ószinzd.es a fiziológiai formák, ás a fragmentumok vagy antágoAÍsták hasznosak példázd agy receptort. erpresszéle sejtek fizi elégiái mádonitárában. Valószíne,. hogy a piá/Xk-dhiO komplexet torta z.ma zó ΙηηχοϊοΑύΙόο cztokinnet stimsiálo vagy gátié hatosai vannak a tnmetopoiefihga sejtekre, erek keze értve például a limfoid sejteket, mint a T-sejféket, k-sejtokét, természetes gyilkos ;na torai kzlier gdp sejteket, makrót égoxaf., dendrites pej teJt.áatzté két, hematopoietikas otddokat | progen .itozokat) ..· és kgv tovább, A teher jók éü.kal;tbbsk antigenekként is, például immanogánekként antikebtokét aIákéivá ki a fehérjén levő apitopák ellen, tvlra lineáris, mzod koniormácros api tápok esetében.
Az IL-12 piű alegységet már leírták, például az alábbi helyeken : Serier es annkatársait & 147 832 latstromszámn amerikai egyeséit államokbeli szabaoaiom; Soett es Trinchiőri: 5 571 SIS lajatromszámu amerikai egyeseit államokbeli szabadalom; tfotely és munkatársaiϊ 5 550 492 lejstromszámé amerikai, egyeséit államokbeli szabadé lom; idősebbe és Mniiigarm 5 hál 500 lajstroméra·· mű amerikai egyeséit államokbeli szabadalom; deres és su:n laté .ρ> esi: 5 744 in lajstromazárná amerikai egyesült államokbeli ssápodé lom; és az alábbi hozzáférési atárnok ismoretesoke gbÁ85S7Í, gbAf'133191, gbdiáé'M, gbü«1184, embY0775z, embY1129,1, gbM65272, gbAÍ907570, gbO19941, gbUH515f gbU577fzf gbAF0öáö24, gb049100, ebéi00 3 4 és embX97019, Az 11,-' 177-at kódold seekvenoíét egy barnán gonomikus azefcvenoiáből azonosították, A molekulát balL-Föö-nak nevezzük, beírtak már rágósaid a sok vese rét is példáéi egérből, ezzel kapcsolatban az 05SH 08/900,903 és 09/122,443 számé szabadalmi itatot tanai mányozhatok, A találmány magában foglatja ezen két poligepbfd, példáéi pld és bt-715 kombinéttiói t tartalmasé kompozioidkáfc, továbbá mzndkét szekvenciát kódold nokieiaoav konstrukciókét. A találmány szolgáltat antitesteket is, amelyek fe li smeri. k a kombinációkat, és ei járásokat a két üzenet vagy p g 1 1 p o p a i de k e 1. d ál. 11 tán ár a póló á a 1 n gyű tt m n kedés bér;, á Somán 11,-030 géb ágy kis oldhátd, citokin-szeré lest értét kódol mintegy 193 ami nosavval. A pdvid, megjósolt szignál azekít:,Sátbm: > « * > * χχ· χ χ. «κ* ·<'*·*« *..»· * .
ί ;Μί ’ *$·* χ , > $ »$ vénen., a vaiődzlnöleg inintegy 17 gyökből ált, és n Mdt-tol. mintegy ez Alá.--lg terjedhet? ezzel kapnsola kdön az 1 , táblázok ée a lód 10 köri és WC ÍN NG:S szekvenciák adnak tájékoztatást. Az ILéb olyat szerkezeti ooklvaoekat butát, amelyek a hosszdlánoá öltökének tagjaira jellemzők. Ezzel kaposoiatban érdemes összehasonlítani az IL-drN, d-OSE és It-é szekvenciákat, amelyek a donnánk-nál allnak rendel kezes re, továbbá tanulmányozni az ÖSH 08/700,700 és k/122,442 s zama s z abagó bál 1ra v0 kat,
1, táblázat;: égy főemlősből, példáéi emberből szármázd 1LBŐO-at kódoló oeklelasav ískQ 10 NO: 1}, á éranszlatalt asm sósav szekvencia a 2EQ 1D NO;2.
CTG kot ölő tee -28: my AGG Ser AGA Vrg ÖÖT als GTA Vrl -.15 Aid Néz ötö tee CTG Oeö 11G Oee CTG tea —r 8 CTG ::.c; ŐŐŐ: W töö ép AGA tár ők
tok ŐŐd WC AGA bőt GW GGT- Vöd: GGb AÖt AGG: CCT GCC TÖö acr nád éé
Alá ,-t: öle öiy Káté Alt Vsl A ar o oly :d:l:y: á«z 5 Ser fázz· •Sle- Vrp tán lé •zz
vad Ok.- tőt -ölt: TÖA k.'.AG ő'«.A'd cin Add aga CTG GÓC TW AŐT vsa CA1 a. 4 4
Vys bte ölt kaO tv Ser bízz W aee Wv 28 Tát tag Alg TzV 8ér k S áls
VICA ŐVA dÜA CAG Alő ott :Ö1A: AGA ÖáA -GAÖ: CGA báb CAA AÖt : :·ν ,'> '·>
ere Cbá :Vái 38 ;őlf Cl ;> •ön. Asg Orz 38 Ara Gre n n.: Gly Arc 3 8 dia: Gin -tár:
tna< bál tat cin deő GAT ŐlO: OO tői GÖk Aát CSC TGl ÖOG CCS ÖAA
tár Cs a :ŐáŐ vb. 8 re il ::111ŐŐ: W VAS: oly Asg elv 58 Gye Avp Vro: öle
itta. atö lödé -Ők.· lAO: -AÖt :8áö<: :VtC VdÖ Ildi ΟΟΛ Aiö- ŐáG: Sáfl: \>\> í VSA
k> k y' 60 ösp Assz Ser 65 G.kXi:: V ke tg:®: tea GO, ÖŐ árg ele kis dl: A Gly 5?ő6
zz .összes:
22\> 1.1:1) ;AH 11 a GAG Fka TAT Ays- ÓAÓ ól A 10 Akit ?Lys CTG 1.-5:0 Óik Agg AFA ciy Töö: íl-sr 1?> GAT kí?p kló AGg Tló 1?GG AÖk óh?: CGG Aly óó óAó Aló 336
CCT GAA ÓTÓ ÓTÓ: CCT Ili' kóC Föl ÖTÖ dód? ÓAÓ ÓIT ÓÓA AóA Aló ÓTA
®Gs> a%o: Lsa Los Agg Agg Agg Asg Va.1 A.: á öl A .:.-5:5: ói» A:ö La?? Agg
IGA •01
Óló :;όόό: ÓTC AGG ÓAA Öld FTC AAA AGA ÖkÓ óóA faó ökö AÓÓ ÓAÓ ÓFA 4.32
ApAO AAG Agg AGG •A IÁ AGA: Lak ÓAA 'Aki ólG óly Fis Fis Táp ÓIG Áfa:
A® AGG; Üó
ÓAÓ k’ÁG AGA ·,. Ók AGA: CTö íG,' ' AGA kÓC ÓAÓ ICA Tpá Ö-AÓ- iói AAC ÓAA 4 33
Ólo ölő 1 Iá: AGG Agg Agg ÁG G Á5ÍS Áa?: óin Hí? Trp öl Áa:á ÓGG AAd
IGA GAG Aló
Flói AGG' AGG AGA AAA AGG Oóó ÁFF AGA FAÓ óóA ITT ÓAÓ AÓA óik AÓÓ
Ló A A® llsö Lys TTl Adu AGA ÓAG tGíG: FIA kko Fal óla Pál Alá
!Aó ?. -11 11« 1AS
000; 11ÓÓ: AGG·· »1 AGG ÖkT GOG ÓLA ÓÓA AÓÓ FTC Aa A ÖLTI lAk « V j
A1 a: Aí:s Aki. Fhá Ál a Mis AGy Áls .Als Ah?: Agg óg;: Ara
110 10F
MLGSPAVMLLLLLPWTAQGRAVPGGSSPAWTQCQQLSQKLCTLAWSAHPLVGHNDLFSEGDEK TTLDVPHIQCGDGCDPQGLÖDNSQFCLQAIHOÖLIFxkFLóÓAól FTÓAFSLLFDS FVAQkHÓ FF1ALFQAGAPEGHHWFTQQIPki,FPAQPWARLAi:EEKlLESGÓiAFVAVAARAFAHAA.AALSF kódoló Adekvenöla;
ATGCTGGGGA GCAGAGCAGT AATGCTGCTG 1TGGTGGTGG CCTGGACAGC
TGA.GGGGAGA GGTGTGCCTG GGGGFAGCAG GGG1GGCTGG AGTCAGAGCC
AGGAGCTTTG AGAGAAGGGG TGCACACTGG GC1GGAGTGG ACATCGACTA
GTGSGACAGA TÖGAlGFAAG AGÓAGAGGGA GATGAAGÁGA CT.ACAAATGA
TGFTGGCCA1 ATCCAGTGTG GAGATGGCTG TGACCGCCAA GGACTCAGGG
AGAACAGTGA GTTCTGCTTS CA.AAGGATCC ACCAGGGTGT GATT!ITTA!
GAGAAGCTGC TAGGATCGGA TATTTTCACA GGGGAGCCTT CTC1GCTCCC
11ATAGCCCT GTGGCGCAGC TTCATGCGTC GGTACTGGGC GICAGCGAAG
TGGEGCAGGG TGAGGGTCAG CACTGGGAGA CTCAGCAGAT TCCAAGCCTC
AG1GGGAGCG A.GGGATGGCA GGGTG1GCTT CTCCGCTTCA AAATCCTTCG
CACCCTCCAG GGGTTTG'FGG CTGTAGCCGC CCGGGTCTTT GCCGATGGAG
GAGÖAAGGGT GAGTCGGCBA ϊ
rágcsáló. példáéi egér Π,···Β30 $SEQ 1D GO: s ‘ ér 4 : 5
CGGGTAGAAG GCLGAGGAGA GAGGTAGACT CAGAAGGAAA GGAGGGGGAG AGóGGGGCCA SS
•CAGGCGGGGÍ 1 ICAGATGACA GAGGOAGCCA GATGGGAGAA GGAGGGAAGA AG AGG G?
Gél:
51
•agg· tAe reg· AGA GGA GGA AGA. AGA VGA GGG: GGG· gGGsreg GGG GGG ·>>···· :G · : «·
Les A se Gye Aeo ais Gei éle Get. Lés Gitt Lés Lés Alö Gr A Vél ;Sf
-GO -LG -15
C.-Cg CC-C ΐCi'C •AGG AGG· ·Ο5Α: :ÁG0· •AGG; AGG; AGG GGG GAG GGG •GGtíGAG· r PC c >. X
AAe ·ΑΙ·ν ·Α® A is Vei Vss A::· GéL Ses Gél Léé Áss Grp Álé ele Gye
•L 5 13
GAG GAG GGG GGG GGG AAG CSC •GGGLAGG GGA GGG GGG AAG GGA GAG GGA 250
AGA llIlsssLéA: Ser Agg Asn Les Gvs Get Lés Álé Txp Áss Álé Lés Alá
15 SS 55
CG A GGG GGA GAG AGG AAG GGA GGA: AGA. GÁL GAA GAG GAG CrCX CaC AGG 507
Les Ais Giy 0lé GÁL .·-.· Les Les Ars Gls Gitt G.Ó.: Áss Gis sr.i Ghé
•30 · 85 5 0
AAA AA? AAG GGG GGG AGG AGG GAG GGG GAA GAG GGG GGG GAG GGA GAA 355
Les Áss AAS ÁS Vél Ele Áss L•lé Gls Gye xl ÁS p P X p ' Ayi: Aep Lés Gitt éS
GGA AGG AAG AAG· AAGGÁGG· GÁA •GGG: GGG: GGG GAA AGG AGG GGG GAA
•G!y· :Lss;<Lys· Ase Áss Les· Gls Lhe Gys Lés Ali· Aty lle Ls e Gs. s vív
•í 5. 5 A AA
•AGA AGG· Agg GAG AAG GAG GGG AGG SAS: GGG GAG AGG GGG AAA GGG GAG 581
Les Ale VLe •Gye Ágit ALLs; Les Les Lse sí·:: Asp Gye GLé •LyO; GGy ••GAG·
•LG 85 35
•GGG GGG GGA, : 'GGS· GGG: dAGsAGG :Gee::':AG:G· GAG; GAA·;®'!: GAí! •AGG: GGG: GGA ISA
Geo· AGg G®· pPpi Pr<> Λιρ Ser •ΑΙΑ: AGG· Cili ülí:· xp •GAé Gse Léé·
P5 .'\p\ 1 SS
GTE lan GGA Gly 1X1 GTG Eau EGG Esi ·: GAA Alt ÉG; A GTG lön ©:: \.-Av© Gin AlE, G;-', G.Ai© ©Isi GAT M GXG ©M HP xöö; X.;:« GG© Ara ©M ©EEs AGÖ MA ©λ ’· ©•Μ ·'
GXE ©a© AT© ©Öl ÖT ÖT© AGT «X EST GAG veAG TGG ©A© GGG GGG GTE
P:Í1: Gin EH ©lEí ©AA Erna Ser ©sít S-:-.1 GM Ilii: TAG GM AA© XAö XsEs
vsa XXX: ΠΧ !«
CTÖ ι©τ TCG A-db ATG CTT ŐSE AGG GTG CÁU ©GG ITT TTG M, ATE ©GX í>4 73
HP All Sva XlX 111 XXX ATE ©K G: Gin AM in® Geo EX a ΤΙ® Ál il·
χχχ i M SAS
Pö:ö öli Ml TT©' ilÖÖ:: XBX ©©A GCA ©GE ÁGI l!E: AGG : i©A:<j GGG ETA - b d \J . $91
Ma M: Ml HP x = xi V «Μ Ma AlS XXXi 'M>. Ive TIT Gin •Gr-e EX© Emi 7©X:
GCA 'ΑΧΕ GGT TEÁS eset: SÖÖS S SA® TTGSS SE M ®X2 XíCAI S GETAAGEGTA
•e Tnr A la 121:
ATÖTATGEGG CGEGAOETCT xggAgtXxex TAXGGGETTA GÖEGTTGTGC TGTTGTTGTT ΕΜ
®?TXTÖT'TX:: 'lom gA's>EáG'© göaaggAösö GATTETTAEE ©AGAAEEGAA AOASACOÖSX AXP
s sAs <' XT.X ' S Se, /ÖTööÖTAöSö, AAXGÖEGGTö <:)ííE>.A.Ax:·· ATAAEGTGTC ÖEGCGGTTö©
CGTTAÖEEGG ©öGGAÁGGA© GTGGGTGGGO T Mii MM ίAAsx GGGÖGGGTGÖ GATGGAGAEE EXE
GTGTGEGEEA XGGCGGGGCA ':':-..·Α·'-.:·.ΐ:·.?\ί\:'\.:\;., .’. \3 í\· .p'-Jx,. '\ , .A'Oli· GTTTGGCGET TATCTGTAEG XPX©
AAAXECAEG». XAAXGG©s®lXX ATTATEPcTT TGAGÖGEAAX GTÖÖAGETGG IMS
AGXgTAGvGG: SEöEöAGGEXö: TOTGTEööTS ®CTG7 CCCTGAGTTG TEA©!':!!-;'© TTX©
TSSTöAGTAG: GASGTXSGA© GEGTACCAAT ECGESGTGAC AEE EGöi
1ETXH1VPP i ÖCEDÓclrgbLKÜnhCh'CLQRIPQGlAFYkHLLDlDTrKlEFALLlllPHEó IMlEliALSQbLQPEbHFEEFgQHPSLSáSOQőgEPlőBSMEEESigAELATMBlfAŐiáA
TXTÖPXVPTA
Az 11:-230 szotkezefi hooolópiá ja a rokon oitokinekkei ezen molekula rokon funkcióját apgalijh, Az Π,··Ι2 p/0 polipeptiP l'ú330 poiipeptiddel való asszociációjának falismárée® lehetővé teszi az aktív pkO/IL-h/ö dinerek biológiai vizsgálatai, Az IL-13 n40/iL-B3ú kompozíciók elképzlbbétök vagy kóldn poiipeptIdeiből, amélyok az egyedi polipepfidék mindegyikét képviselik, vagy az :L-12 pád fáz ión konstrukcióiból IL-B3ú-oai.... A mentigyelések azt jelzik, hogy a dióét képes interferon-g ΠΕΒγ} tóiméiest indokéi ni különböző bejttipaagky például PBHó révén, olyan biológiai főnksiókat o agai ive, amelyekhez a Pb. mer alkalmazható, Ezen kívül a kísérletek azt jelzik, hogy az It-iz receptor ÍU alegység a pé 0/11,-330 dimerbez szolgáié receptor egyik alkotó része.
Az lény aktiválja a mákrefágokat, etimalálva a tumorlolé és oikrobicid akt 1 vi tásokat:, Ez módosítja az 1. és 11, osztályú MöC molekula expressziét is, ide értve a II. osztályú molekulák felulszabályozáaát moiioeifákon/mskiof ágokon és dendrites sejteken, és expressziek indukál opiteiiális, endoteliáiis és más sejteken, képessé téve ezeket antigén megjeleni lécére. A oitokin miamely Ebi-széfé eitokin, amely elősegíti a Ebi-szóvá Intem sajtok kifej iodéséf, de gátolja á Thz-sze.rö T-sojtek. kifejlődését.. Ez erőteljes és viszonylag fajlagos inhibitora az IL-4 által inad kaik XgE ám ige.; szintézisnek fi limfocifák lévén, Pár nagyobb icnoentrációknál ez sem-fajlaposan gátéija az ősszea antitest izgtipus termei.eset. Az ii'úy elfő toxikus: immunválaszt alakit ki int ragéi lob,ária organizmusok ás tumorok ellen, amelyet az EX sejtak ép Ctf-ok közvetítenek. Az It-iz-hoz hasonlóan az EEby-ggk ez a tülajágnsága, hogy előpegifl, a sejt-kozvet 1 tett ofbgtoklkW választ, miközben gátéig a az allergiás gyei Indáét és igB szintézist „ Ezzel kapcsolatban eraemea tanúimányozni az alábbi könyveket és közleményeket.: Kateplab (szerkesztő; í Gamma interisron in
Antivá.rai Deionse, kiadó; Ghapman és kall (1.S97) ? estre {szerkesztő}: ént 1-· Istent ive Applications el I nteríeron-Ganma, kiadd;
festőéi. Dokkor (1992} ÍIBBfe 5324786332) ; Butferwala és munkatérsáli 01. be a koca Bioi, 65, 543-551 (1329); Bili lan és munkatársai: len feli Aead, Bei , fedid 22-22 (1993) ; és Gessani és munkatársai: Cytoki ne Grovta kantor Boy, 9, 117-123: (199:3)1
Az 11,-Baa agopisták nagy antagonisták tevékeny kenhetnek égy is, mint innkeionális vagy receptor antagonisták, például olyanok, amelyek blokkolják az Ib-S vagy ib-12 kötést megfelező receptoraikhoz, vagy közvetítik az ellenkező tevékenységeket. így például az 1L-B50 vágy ábkágöhlstéi hasznosak lehetnek rendellenes orvosi állapotok kezelésében, a rendellenes állapotok közé értve az am.mun rendellenességeket, például a T-seát. Immuné lányokat, ktémlkga gyulladást, szövet visszautas!zást vagy szív- és érrendszeri vagy neurőt1 zoológiái állapotokat, Az agéni szák va.....
lesz ind ing a s;e j z ·· közvei (.tel; t immun;kas fokozásának terápiás assza függéseiben ai ka ima zhatók, például tumoréi ionos, ad. j uráné os virazel lenes zzát eleiéiben, vagy az allergiás Vélaszok aotagon izé lé sara. Az antagonisták valószínűleg az ilyen fokozott imáiupiváS: blokké.{.ásóval esszét aggé eben kapbatnák szerepet né ideái ceiiuaaris bözzálérurasokban az autoimmun betegségekhez vagy krőhikus gyulladásos állapotokhoz,
A termeszotes antigének lépesek koz veti tóul különböző biokéri az válaszokat, amelyek biológiai vagy ib.zoiőy.tai válaszokhoz ((Ζ,ρζΐΐνζ:
vezetnek a cél sej keiben. Az előnyős kivitelt termák lehoznék o·bérbőlz de más főemlősből vagy más faj társból is, amely lécezik a termés séf ben, ToydÖbl. fehérje szekvenciáknak más e?liósfa j t aktéi, méltán 1 főemlősökbe!,· kutya fél ékből, mocskaiélekből és rágbeérőkből szintén rendel kötésre keli állniuk, először is ez in-12 pép alegység társulását igazol rák IL-nléÖ©.1, Az In-lé pIQ és az ib~urO molekuláknak együtt kellett kifej leöntök. Ha a kettő reakciónálisan társul, ezek működhetnek .együtt eb iá-Íz mintájára. ízzel kepeselatbún bannlményözbatők zz alábbi irodalmi helyek; ír intóléri; Ab. Immunoi,: 7 b, k 1-2 41 t isun A Öateiy es munkatársai: Ann. Kev, Immunoi. ló, ááb-A2l
11737; ; ©e Ttrnchierr; Int, Rév, tmmonoi. ló, ábt-aun (iséis ,
Komplexként azonban ettél a komplextől elvárható, hegy kőicsönhatásba lépjen a hét hosszé jelző receptorral .a oltokln receptor családban. Ezz Igazolták az IL-12 receptor βΐ alegység esetében, Más zekén receptorok vizsgálhatók kozés re az oldható komplexhez, Sejtek, példáéi uAó/3, sorőseZeit a i kották meg, amelyek stabilan expressz él jak ezeknek a szögeséi transzdukoióra kgpes hossza receptoroknak a sokféleségét,
Minő az lb-d.2 páé, mind az IL-Hah (vagy egy egyedi kombinációs Konstrukció) transzfekéánsainak feléi észói.f azonos sajtben a lkaimázzuk ©zen különbözz; sejtek vizsgálatára, hogy lássuk, vajon vana itt búrjánsósos vagy vés jeladó válasz, ilyenként a citokrnek tiziöiPyiai ha zásairak legtöbbje a fehérjék komplexének zuiajöcsi éhüké, Ilyenként, a éövábhlakban található leírások sokasága szótini a cifökinbői arcúé biológia ténylegesen lehet fizloiógiaiiag hefölyásöit az alegységek kombinációjat tartalmazó komplex réven.
oa,is£ösz:
A továbbiakban faIá iható leÍrások alkalma aha tők az iL- 12 niö/Ib-báo komplexhez is. Az b,i<: pád a 1 egység zúz lés termékét az Il.-baO-oai. mér mega lkot tát, mint például g hiper-lL-é-of, Ezzel kapcsolatban tábnlmányözhatók az alábbi irodalmi, helyek: kischer és munkatársai: Eature bi.of echnology iji, 142-14a Πνά7}; Aakémenn ás munkatáraái: ü: Bioi. Chem. kié, 1257··-lkáé Uébo és vetess ég munkatársai: A immunoi, léi, 357 5-lön 1 ébböö>
ezek az irodalmi helyek referenciaként épülnek be a jelen beje' leütésbe. Ezen kiéül a értőkén komplex összeillesztése égy, az 1L-12 récéptör pl alegységet tartalmazó receptorral lehetővé feszi antitestek azonosítását ehhez az alegységhez, mint a citokin komplex receptor antagonrztá ját,
11. T is a t i toPb p Ο/ XX<-.830 kompiex
A humán rL-8'iv aminosav ezekveseiát az egyik kivitéli tórámként matat jak be g aoQ IP hÖ:2*n borul. Máé természetben le eΙοί orduIá nökleinsavak, amelyek a fehérjét kódolják, Izolálnátok standard munkameuelekkel a gzoieéltafebt szekvencia alka.Imazó sóval, például poy technilókkal vagy hibridizálááésí- Ezek az aminosav szekvenciák, kiterjesztve az aminocsoporkiéi a karboxlesöpör fi g, fontosak szekvencra 1ni ormáéiö szolga Itat ágéban a oitökih a1egységhez. Így lehetőve téve A fehérje antigén megküld·usbztétéséf más fehérjéktől, és példákat nyújtva számos különböze variánshoz. Ezen kívül g. peptid szekvenciák lehetőséget biztosítanak peptidek elöal látásához gntíföötek kialaki fására, szegmensek felismerésénoz, és a nuklsoéig szekvenciák lehetővé feszit oligonakleorrd próbák elkészítésétg ezek mindkét1ejé stratégiákat .biztosit Az II ven szekvenciákat kódoló gének kimé tatásához vagy él.áutlfé χο 1 á 1 á s é hoz, p e 1 d á u 1 ki ónoz. á s á ho z ,
Ahogyan itt használjuk, a „humán öldhaté ib™B3fb'' kifejezés, amiket fehérje ésdzefuggésoen baésnaljnk, olyan fehérjét foglel ragabor, amelynek éminosav szekvenciája megfő lel egy SkQ 1D höcz-öől való oldható polipeptidnek, énnek jelönibe fragmentumai gyakrah őriznek meg hasonló funkciókat, például sutigeninxtást, áx előnyös kiviteli förmák tathalmazfák meghatározótt hosszúságú, elkülöníteti, például nem. átfedő szegmensek sokaságát. A sokaság tipikusan legalább kettő,, gyakfabbáb legalább bárom, és előnyösen S, 7 vagy még több, Miközben idézhetjük g hosszúság minimumát,, nagyobb hóástéáégok különböző mér ötökben alkalmasak lehetnek, például egy szegmens '7 hosszúságú, és kettő fi hosszáságó. Hasonló vöháspk alkalmazhatók az ih-12 p4B poiipeptidőkre, és vagy az egyik zagy mindkét polxnukleotiőra,
A kóló alkotórészek, például antitestek tipikusan egy 1A-12 páO/IL-HóO komplexhez kőtödnek nagy affinitással, általahan jobban, mint mintegy iúá nmői/later, általában jobban, mint mintegy 3Ö omál/i ifer, élögyoseh jobban, mint mintegy 10 nmől/ixtez és még előnyösebben jobban, mint mintegy á nmöi/lxter, Partner fehérje komplexek találhatok az embertói eltépő fajokban, például más főesd Ősökben, pata sokban vagy rágcsálókban, dem-emibs fejők szintén rendelkezhetnek szerkezetileg vagy funkcionál fsán tokon génekkel és fehérjékkel, például a madarak vagy hüllők,
A „poiipeptiő° kifejezés, ahogyan itt használjuk, magában fog iák egy jelentor frayménrumot vágy szegmonst és körülölel egy legalább mintegy 0 amznesavas, tföikbssh legalább mintegy 12 ami toravas, élta lábán legalább mintegy lé ami nosavas, előnyösen xr.xiéZae «ί * > > -<·- ·· X « > > ·< * * « * »' » ·* ** *· Λ * > ν' ¢. S * > > X iogaláhh mintegy 2S aminosavas, és a különösen előnyös kiviteli, tormákban legalább mintegy 30 vagy több aminosavas, pálcául iö, áQ, 45, S5, és Így tovább, aminosavaa szakaszt, Az ilyet tregment nmek olyan végekkel nirhainak, amelyek kotdőlnek és/vagy végződnek gyakoristilag bármely helyzetnél, például kezdve az lg 3; 3; és Így tovább, gyököknél és végezve péidáü.1 a 175? 174? 173; ás Így tovább, gyököknél minden gyakorlati kombiháciobáh akár az 15-330, akár az: 11,-12 p4ö alegységhez. A különösen érdekes papiIdőknek olyan helyen vannak végződése.;, k, amelyek szerkezet.;. dómé?; határosnak felelnek meg, például az 15-B30 A, 3, C és/vagy Ö béli nőinek vagy az 11,·· ik p4 0 lg dómén jelnek {lásd a későbbiékbmni,
A „kötő kompoz tol όΛ' ki fa ja zés olyan mo le kg iáknak telei meg, amelyek fajlagosan kötődnek az 11-11 pá0/15-330 komplexhez, példán! valamely unt!test-antigén kölcsönhatásban, de nem kötődnek az egyedi a 1 kot őrás rákhoz önmagukhoz, A fajlagoséig lehet többékevésbé behat:órólk, példáéi fajlagos egy adott kiviteli formához, vágy rokon kiviteli formák, például főemlős, rágcsáló, csoport. j elhoz, és Így tovább, A kiizerités vagy abszorpciók bzolgáit öthat pák kivársz azelőtt ív;zásokat, például hogy kimerüljenek azok az antitestek, amelyek kötődnek valamelyik poiipeptid alkotórészhez önmagához, A találmány szolgálhat olyan anyagokat és,, például lekérj éket, amelyek tajiagosan társulnak az 15-11 pv 5/ir-ölö komplexhez, Ide értve egy társ;.: lést egy természetes, f ízlel ögiailag releváns fehér jo-t ehér ja köiosö?;hat ásbáh, legyen ez akár kovalens, akár nem-kovalens, A molekula lehet polimer, vagy kémiai reagens. Egy funkoionális analóg lőhet valamely fe: vyygyUí v
X <
dó
hérje szerkezeti módos i.t ások kod , vagy lehet valamely olyan molekula, amelynek olyan molekuláris alakja van, amely köz oson hatás ····· ba lep a: megfelelő kötő determinánsokkal, Az anyagok szolgálhatnak agy receptor köteti kölosönhatás agóniától ként vagy anzago··· nistáiként is; ezzel kapcsolatban érdemes tanulmányozni Goodman és munkatársad Cszer kasztok) könyvét: Goodman a Giimarbs: The éharmaoologéoéi Öaaet of Thnrapóntion (legutóbbi kiadás), kiadó;
F-orgemoo Press,.
é „lényegébe?) fiattá^ kifejezés a fehérjével bészef üggésben tigihúsán akt jelenti, hogy a fehérje menten más szennyező fehérjéktől, naklernoavaktói vágy más biológiai anyagoktól, amelyek az eredőti forrne organizmusokból czármaznak« á tisztaság atsndacd eldárátokká1 vizsgálható, elsősorban tömeg szerint, és ezek szokásosan. legalább mintegy 4öő-bán tiszták, alfái óban legalább mintegy hOá-oan tiszták, gyakran. legalább mintegy óöi-bun , v Ύ. \t u ' n. 4\ ' , u, o ' -t' . ' * )- , » s \ legalább mintegy éök-ban ciszták, és a iegelőoyózeob kiviteli, formákban legalább mintogy sbl-ban tiszták» syakran adunk roobjuk hordozókat vagy adalékanyagokat iái Egy lényegében tiszta lb-lz pib-ei és 1L-Elo-at tartalmazó kompozíció nem tartóimézhat nagy mennyi, ségd idegen poiipeptidőt, amely nőm. természet esen társulnak a két poiipeptid óampiexéhez.
A poiipeptid vagy fragmentum oldhatósága függ s kózvsyezectel és a polipoptlótól, lobé paraméter hat. a poiipeptid éldbatoáagáza, ide értve a hőscérsékief ei, az elektrolit környezetet, a poiipeptid méretét és /soinkuláris jelis;szöif, és áz oldószer telhiés tótét» Az a hőmérséklet, amelynél a goi igent biot alkalmaz·· grráááysb
-í > X x * * > * <· < * <
X -X x v <· > < < * <· «<«« x * < < * * < » '' *
X· «V *>' < *·>· üik, o mintegy 4 ;':C és mié tégy el í;G közti tartományban van, A hömőroőkiot az el ka irtásáéhoz általában nagyobb, mmt mint agy IS dl, Dlagppsztifcái gél okra a hőmérséklet szokásosan mintegy szobahőmérséklet vagy melágább, de oindenkeppen kevesebb, mint ez alkotórészek danaterái.ődásl hőmérséklete a vizsgálatban< Terápiás sásokra a hőméraőklet általában a test önmérséklets tipikusan mintegy 3? Ά embereknél ás egereknél, bár bizonyös szifuáoiókban a hőmérséklet növelhető vágy esőklentneto in estu vagy in vi fro.
A pedrpept l.dek méretének és szar kezekének általában lényegében stabil állapotban keli lennie, és általában nem denaturált állapotban, A pőlipoptid társulva lőhet más polzpeptioekkei egy négyéé leges szerkezetben, példáéi óléi· a tőség br zt ősi fására, vagy hépánivá lehet lipiöekkeX Vagy öntetgeosekkel, Áltelábén előnyős égy komplex, ámély a kőt pol.ipeptid társulásából alakéi ki, vsat fűz1ée kompoz1elé.
Az oldószer és az elektrolitok általában biológiailag Összeférhető paffosek olyan típusból, amely biológiai aktivitások megőrzésem alkalmas, ős általában kezel áll agy fiziolégiós vizes oldószerhez, Az oldószernek általában semleges ph-ja van, pipi kusen h és lé érték közölt, előnyösen mintegy 7,1 értéknél, bizonyos el ka imákkor ágy vagy több detergens iá adható hozzá, tipikusan ágy enyhe, nem denaturáló deférgens, például Chl (foleszteri i-heföl atokoimét1 vagy 7HAPS (3~· ( {l-koiamido-proeiX) érmetr 1-aföironáel-1-propán-szuiionát) , vagy a detergens olyan kis kon cent rété. őt keli alkalmazni, hogy el terelhető legyen o fehérje szerkezeti és fiziológiái telaÁkos ága mák jelentés elpusztítása. has esetekben egy erőteljes detergens aikalmazhaté, hogy v á .1t a οn ki : j e i e n t é s de na t n rá lőő a s t, egy IL-hoö pclipopfző, amely fajlagosén kötődök egy antitesthez, vagy amely fajlagosan immnnreakt 1 v egy antitesttol, például egy pellklonáiis antitesttel, ehöl ez az entitást égy meghatározott iomnnogén ellen lett kialakítva, példás! olyan immunogén ellen, amely SEQ 10 00; 2 eíeinoaav-sfékvehoiádáfeől vagy ennek f ragTreotumaiből. áll, vagy olyan polipeptid ellen, amely a SEQ 10 HOni nekieinsavbői lett kialakítva, tipikuson ímmungassáyvai határos haté meg, A. találmány keretein belül vonnak az Itt leért azon nuklelneav szekvenciák,: ide értve a funkcionális variánsokat Is, amelyek olyan poiipaptidőket kódolnak, ebei ezek szelektíven kgtődnők az esi 11,-B10 peilpeptldek ellen kialakított polikXgnális antitestekhez, ahogyan ezek itt Széfkezetilég és fan kei gnái i sas meg vannak határozva. Az isranneasssy tipikusan egy peiikienális apiiszérusát Sas znál, amely például egy, a ifi iő ŐO:2 feherjét tartalmazd komplex ellen van kialakítva. Ez az unt isserum ágy van kiválasztva vagy kimerítve, hogy kis kereszt reaktivitása legyen mégha leié más, szorosan rokon családtagok, előnyösen azonos fajfceliek ellen, és bármely ilyen kereszt roakt iy itást el lehessen té/vgiifapi immghdabszerpciévai vagy kimeri fossal az immunoéssayfcen történő felnásznál ás előtt. Elsősorban azok az antzzestek, amelyek egymagában levő 11,-if pH vagy IL-Blé poiigentibekhez kő tődnek, célpontjai az immun kimer i fősnek, Megfelelő szelektív szérum készitmények szol álhatők és j a 11 eme z h etek., ebből· a eélbéi, hegy antiszőrümokat álfitsunk elő egy Hvzonoa ess eben veid helbaczna1eshet, a fehérjét, például a SEg
ZZ, iiiíis »· X < * ·>
Xb no;2-t tartalmazó fehérjét taotocvczc komplexet azélói jak úgy, ahogyan itt leírjak. így példáéi rekombináns fehérjét termelhettek valamely emlős sejtvonalban, Egy megfelelő gozthíszervetetek, például egerek bei tenyésztett törzséből, mint a Baib/C· bél, való egereket immun!záionk léé ró dóik fehérjét: tart alma tő kompibanzel valamely standard adjovánet, például Freund-fő le adjavénet, ős stándard egér immun Izéié munkamenetet (példán 1 earioo és Lene? alkalmazva. Egy másik megoldás szerint egy lényegében teljes hosszúságú szintetikus pépeid kenetrekeiét, amely az itt ismertetett szekvenciákból származók, alkalmazhatunk Irmrunogénkénf. Pol z k ioné 11 s sző rumokat gyújtunk Össze és zn. tráinnk az Izsmunogén fehérje el ion egy immunoassayben, például, szilárd fázisé immnnoassayoen agy szilárd hordozón immobilizéit Immunogénnei, megfelelő kimeritéeekkel én szelektálásokkal együtt, ICT vagy nagyobb liter ö pori klónál is aot z szérumokat választunk ki és vizsgálunk ét kor ez zt r eat évi fésű kra. máé eroteean rokon családtagok, például L1F, E7-1, CHTF ellen, vagy ik-o család mpe taggal ellen, versengő kot ősi immunoazsayt alkalmazva, például ciyarm., amely Hoz bon és tané előzőekben ismertetett kéz™ loménvében sz olu-oks. oldalakon le van Írva. Előnyösen legalább két egyedi iL-ő/IL-1.2 családtagot alkalmazunk ebben a meghatározásban a célponttal együtt, Ezeket a hosszUlánoá ctéokin czsiúotagekat rekombináns fehére ékként lehet előállítani és izolálni s t áh d arc: még. e kelé f b i ni égi a i és f ehér j e kémia i t e o h η 1 rák kád., a h o yyan itt leirjnk, Így megfeieié szelektivitással vagy fajlagosaággai bitó anrztesf készítményeket azonosi.fha kunk vagy állirhatónk élé az Xh-12 páD/Xh-Bgö családtagok a 1 kész latéihoz. Egy méve gs sose
X
X X Φ -» *
Λ «-ί XX * » » sík megoldás szerint olyarí antitesteket állíthatónk első amelyek rőtednek az 1L-I2 páe-et és If-BHO-at tat teimazó kompion réz.;,és z o 1 x ρ ép t. i ö 1 o rm á i hoz,
A.z immorroassnyk a versengd kötési formátumbán alkalmazhatok a keresztreáhtivilász meghatározásokban, így példáéi a fúzión letérje immobilizalhétő valamely Szilárd hordozón, A vizsgálathoz adott fehérjék versengenek a szelektív ént 1 szérűinek kötésével az immobil lóéit ant igén hoz. A fenti fehérjéknek ezt a képességét:, hogy versengenek a szelektív antiszérumok kötésével az lomobi1 izeit fehérjéhez, összehasonlíthat jtík a ráziős fehérjével. A lenti fehérjék százalékos keres z k reakt iv.i sását kiszámít jak standard kaikeiáciőkat alkalmazva, ét okai az a szí szár nmeket., amelyet kevesebb, mint lök keresztreaktivitást mókáknak az előzőnkben felsorolt .fehérjék mindegyt kévéi, kiválasztjuk és ossz egye j t jók, A keresitreagáló szelektív antitesteket azután eitávolitjük az ésszegyéjtötr antiszérumokból ismnunabszorpc.iővai az előzőekben főiedrőlh fehérjékkel,
Az immennbszerbeált és Összegynjfött antiszérumokat azután versengő kötési mmsanoassayhsn használjuk, ahogyan az. előzőekben lei fkuk, hogy ös szoba doni I fsunk egy második fehérjét az immu· uogén fúziós fehérjével.. Abbéi a nőiből, hogy ezt az összehasonlítási elvégezzük,:: g rét fehérjét egyenként megvizsgáljuk keneeotráoiók szeles tartományában, és meghatározzuk az egyes fehérjék azon mennyiségét, amely szükséges a szelektív antiozérumekaak az immobilizéis fúziós lekérjehez való törődése fOl-ának gát .fására. He a második fehérje igényeit mennyisége kevesebb, mint kétszerese é szükséges fúziós fehérje mennyiségének, akkor ZíÍ':.:::I:ÍSV'ím a orrodzk fehérjéről elmondható, hegy fajlagosan kötődik az hmmmogőn által kialakított szelektív antitesthez,
IIX, Fizikai, variánsok
A találmány körülölel olyat komplexeket is, amelyek az TL-1Ő p4h/it-B3ö antigén ammosav szekvenciáival jelentős amisósav szekvencia azenentággal bité fehérjéket vagy pepi ide két tartalmaznak, A variánsok között faiáihatók faj ···, polimorf- vagy alléi variánsok.
Az amioosav szék vénéig homológ iát, vagy szekvencia azonosságot a gyök illeszkedések öptlmaiidálásával határozzuk szókaég esetén hézagok bevezetésével, Ezzel, kapcsolatban az alábbi irodalmi helyek említhetők: beedleham és munkatársai; áh Áel, Bioi. 48, 44Ö-4t3 ·117ο}; tankéff és munkatársai: cfrmr Warps, étring Edité, and Aaoromoieouiesf' óimé szakkönyv 1, fejezetei The Theory and Practioe of Sequenoe Compsrlson, kiadó; AddisosWesley, Peaőing, bassaohussefs (IWöi t továbbá az alábbi szoftver csomagok: Intel 1 iGenetlos, bounfain Vice, Ka 11 f orni.a ; és Pniverseny of Klseonsin Genetios Computer érően, Mao.· són, Wiseousinx A szekvencia azonosság változik, amikor fegyelembe vesszük a konzervatív helyett esité se két, mint 1 Húszfőseket, A koazervákiv helyett esi kések köz bet faj. álhatók a tipikus helyettesi fősek az alábbi csoportok között: gÍróin, atanin; valm, izoioucio, ionéin; ssznarag.fnsav, gluteminoav; aazparagrn, ginfa mm; szerin, t retem; lizln, grginin; és fenil-aianm, tiroziö- A konzervatív megérzés alkalmazható biológiai vonásokhoz, fon kommá! is vonásokhoz és szerkezeti vonásokhoz, A homológ amlncesv szekvenciák szándékaink szer Íré: magukfan foglaljak égy xtygásisz χ·<
fehérje szekvencia természetes polimorf-·· vagy el léi™ és fejek közti variációit. A tipikus homológ fehérjék vagy poptopok 3 5iOOi azonosságtól (ha hézagokat lehet bevezetsz) 50-ióhk azonosságig terjednek (ha konzervatív helyet tea!fesskot fogia Inak ónunkban) az 1L-B3Ö aminoaav szekvenciajóra vonatkoztatva, Az azonosság mértéke legalább mintegy Bőé, általában i.egai.ábh mintegy iü%, gyakran legalább mint egy 5 0%, tini kasa·; legalább mm tégy tul; szokásosan iégáláhb mintegy ?ui, előnyösen legalább mintegy 30%, és még előnyösebben legalább mintegy 90%h
Az izolált Ih-il pád vagy 1L-B30 PhB könnyen módosithatő nokleot id helyettesi lésekkel {sznbszr itűoié.; , nnkleotid kiiktatásokkal (deléeiőJv nukiestid beiktatásokkal (Inzer Iáiáé), továbbá fovld nekieotid szakaszok feleseréiéséveX (inverziá), Ezek á módosítások áj D'HB szekvenciákat efedméayesnek, amelyek kódolják ezeket az antigéneket, származékaikat, vagy kódolnak hasonló fiziológiai, Imhnnbgén, antigén Vágy más tunkoionáiie aktivitású fehérleket. Ezeket o módosított szekvenciákat alkalmazni lehet ipatáns antigének aióéiiztósárs vagy ez expresszié fokozására. A fokozott ezpresszálás érintheti a gén empli.fikái.aet, megnövokeOeff transzkripciót, megböVekadetf trarssziáciőt, de más mebnánrzmasokat is., A „mutáns Ib-BBü ki. feje zés körülölel olyan pof1geofidekét is, amelyek egyébként belől ősnek az 11-330 szekvencia azoncosági defin!elő jön, ahogyan az előzőekben ismertet fők, dé a természetben normálisan tála bt 1L-B3Ö amieosav-szekvon diájától eltérő ami ra:;$av-szekvenciával bírnak, történjék ez akár kiiktatácsai, helyettesitésse1 vagy beiktatással. Ez általában olyan fehérjéket foglal magában, amelyeknek jeiehbős azoην,ζΖΜΡΡ sósságuk van a ÓCQ ib NO: a szekvenciával bitó fehérjéhez, és oszt óznak ezen szekvenciák különböze biológiái aktivitásaival, például antigén vagy immnnogén aktivitásáéval, és előnyös kiviteli formákban tartalmazzak az ismertetett természetes, teljes écsszú.ságu szekvenciák iegbagyöbb részét, fi faiéban a teljes hosszúságú szekvenciák az előnyösek, bár á csonkított változatek szintén hasznosak; hasonlóképpen a természetes forrásokból való gének vagy fehérjék tipikusan a leginkább kívánatosak, Hasonló Koncepciók a1kaipazhatok a különböze In-S30 fehérjékre, különösen azokra, amelyek különböze melegvérű ál. latokban, például emlősök·· ben és madarakban találhatók.. Ezek a leírások szándékunk szar int általában kőrölöielnok sokféle lL-fö30 fehérjét, és nem korláto-zédnek. az Itt speciálisan tárgyait főemlős kiviteli formákra.
11:··· 12 pác vagy ln-B3e mufa.genezis végtehaátható Olyan módon is, hogy zab.sósav berke a tápokat vagy ki iktat ásókat haj tank végre, Helyettesítések, kiiktatások, beiktatások, vagy ezek bármiféle kombinációi alakíthatók ki, hogy elvessünk egy végső könefruko lehoz, ,1 beiktatások magukban foglalnak ami no·· vagy karboxitermináirs fúziókat, Véletienszeru (ráncom} mutegenezis haj fkai6 végre egy cél-kedonnái, és ez expressziif mutánsok átvizsgáihatok a kívánt aki zvilásr a< é helyettesítéses mutációk létrehozásához szol.gázé eljárások egy Ismert szekvenciáié ONE elére megc határozott helyeinél jól ismertek a szakterületen, 11 vessek pólóén.; az élé primer mntagenezia vagy pollmeráz láncroakcios (ECkj technikák,. Ezzel kapósélatos 'Irodalmi helyek például az h léből-sk; ósmhrook ás munkaiérsai cinén ; .Ausnbel és munkatársai
UáOj , Ót az ehhez tartozó sz rop lement nmek; és Kunkéi és munka;p,aaö,mf társai; Mefnods lm Ehzymoi, 154 , 357-382 Π 987),, Az előnyös kivi toli formák magukban fog!aljak az Ágyazeres, kétszeres, háromszoros, ötszörös, hétszeres, és Így tovább, előnyöset; konzervatív helyetvesztéseket nokleofid- vagy aminosav szinteken, A helye ttesirések előnyösen el. ke ralik a megőrzött oiazfeineket, és gyakran vannak azokban a területekben, amelyek távol vannak a hélix szerkezeti tartomdnyoktó1, Az ilyen változatok hasznosak lehet rest fajlagos antitestek előállításához, és gyakran osztoznak sok. Vágy akár minden biológiai tolásOonságban, A bitbkih szerkezet felismerése fontos betekintést nyújt azon gyökök szerkezetébe ás helyzeteibe, amelyek módosíthatok, hogy a hatást gyakoroljanak a kívánt vei hoz ásókra a receptor kölcsönhatásba;;,. Az IL-I2 páö kdlosonhatása ez .IL~ö38 fehérjével igényel kompié·· mentor szerkeze·;;, vonó sokad is a kölcsönható feléim; fen. A szerkezeti elemzés lehetővé teezi továbbá azoknak a felületi gyököknek e megjóslásét, eeeiyek kritikusak minő a komplex kiaiakifásóban, mind a komplex-receptor kölcsönhatásban..
A találmány rekombinába fehérjéket le biztosit, példáéi he te re lég fúziós fehérjéket, szegmenseket a lka ima zve ezekből, a fehérjékből, boy hetarelög fúzióé fehérje olyan fehérjék vágy szegmensek fúziós terméke, amelyek a természetben haöbniö módon nem fuzionálnak. Hasonló koncepció al,ka3.:pazhhtá hefeerpióg nokleinsav szekveηoiákra is,
Esőt; ki vili új ronstraseték készíthetők ha són 16 funkciós gomébek kombinálágéból más fehérjékből. így péIdáéi bél-kőtó vagy más szégméhsek ,,öa<eréhéről;ietdk köiöobbzo új fúziós göiipapt idők vagy t ragment rmok között . Ezzel, kapcsolatban bnnnl,li .szíván
X ?aáoyöáhetök az alábbi itödai?a.i helyek? Cuaeinghzm és munkatársai; Science 243, 1333-1335 (152 91? ás o Arcúd ée munkatársai: 3,
3io1, ;2he ?a, 255, 13355-iá 322 1195 8}, k ISeálidáge ée Gatruthers által in irt feazf oramidi tea eljárás (létra, hetes, 22, 1353-1322 (1993)] megfelelő szintetikus uhu f rsgmenfujzokaf szolgálta·:.. Egy tettes szálú fragmentum gyakran meg kenhet 6 vagy egy kompi eme?; tér szál szinte tizével és a szál ősszelorraaáfásával magi;:? leié kor (érné nyék kozott, vagy egy kompInmösrker szál hozzáadásával, PhS polonsráz a lka ipa zúzával , megfelelő primer szekvencIával, például kCh technikák segítségével,
Szerkezeti elemzés alkalmazhaté ehhez a génhez, összehasonlításban a oitokinek lb-5 családjavai, A család magéban foglalja például az alábbiakat; il-ö, 15-11, 15-12, G-Ü3F, 51F, ÖSA, Ch!F es Oh, A humán és egér 15-pgg szekvenciák sorházi 11 zása az 15-é család rés tágjaival lenekévé teszi a szerkezeti vonások meghatározását, hlsdaefban á: β-iemez és u-béiix gyökökéi, lehet meghá:: árazni, például A 555205 grogra??· alkalmazásávalezzel kapcsolatban k áhUlitáéydzháfek az alábbi cikkek és szakkönyvek: haza?;
éá svunkatátsal : hatars 379, 531 (1535;? bodi és munkatársai;
lelence 251, 1122-1225 (1253)? Savié és Milner-bhitP: T1B5 25,
374-335 (1993); őrbhehbéfé és munkatársa?.: érőiéin hugineering
3, 253-255 {33513? ét Wiikins és munkatársai (szerkesztők);
rioteome Pesoo.roh: hév Frontiéra in Functional Genomlos, kiadó;
bor inger Voriag, hév York (195'?} . A helyettesi tésoknoz előnyös gyökök, magokban foglalják a zöldieken kitett gyököket, amélyékrői megjósolható, hogy zöiosönhatásbo lépnek a receptorral, Más gyökök, amelyeknek bankóiét kell megőrizniük, lehetnek konzerraz; .eztzzs ily hely őt te el. tép ok tárgyál, különösen olyan helyeknél, amelyek távol vannak a felületen kitett gyököktől,
XV, Funkcionáltaa variánsok
A fizikai válasz blokkolása IÜ-12 p-ié/lL-ulO komplexekre létre lóhát a izgandum köt éne versengő gáti lséből raját receptorához, A receptor egy alegységének azonosítana lehetővé tezz! a további jellemzést, ahogyan itt leírjuk, és antitestek aikaimezé alt őt tő az alegységre, hogy biokkelve legyen a kötés éa/vagy jőladas a k omp1exszel,
A falaimány szerinti in vif ro vizsgálatok gyakran alkalmaznak 1zolált komplexet, fehérjét, oldható rragmentumoket, amelyek ezen fehérjék receptor kötő szegmenseit tartalmazzák, vágy fragmentumokat szilárd fázisú hordozókra rögzítve, Ezek a vizsga latok lehetővé tétZik a kötő szegmens mutációk és módosítások hátasainak, vagy a oitokin mutációk és módosítások hatásainak diagnoszf lkai meghatározását is, például az 11,-12 plú/IL-BiO koitpfax analógoknál,
A tőiáidány szándékolt ©híjái között van. a versengő gyógyszer átvizsgálást módszerek a lka ima zása, például olyanoké, ahol semLegesrfjuh a oltokin komplexhez tartozó antitesteket, vagy ahol a receptor kefe fragmontamok versengenek valamely vfzsgáiuti anyaggal.
Az 11,-12 p41/1 L-BiO antigének „származékai magukban fog!állók az aminosav-szekveuoia mutánsokat természet Per: őiőf öfduió formákból, gIikezilezósi variánsokból, és kovalens- vagy aggregé tpm kodjogátúrnőkből más kémiai részekké!. A kovalens származékos cl készíthet ók funkciós csoportok kapcsolásával bizonyos cső:: 3 b portokhoz, amelyek az zt-12 ρ!0/Π,-Ρ3ύ komplex áminosav oldal· láncaiban. vagy d- vagy Ο-terminálisa znál isi. ál ha tök, példán! stanbard eszközöket alkalmazva/ ezzel kapóséiatban részletes információkat nyáj kanak az alábbi szskköayvek: Lpnöblád és boyez· éhem!esi Reagense löt Protein Hódi Cicát ion, !-2, kötet, kindb:
CPC Press Inc,, hoc a Katón, Florida ti182)/ dog11 (szerkesztő;: Technzqnee in Protein Chomistry, kiadó: ácademic Press, tan Dzego. Kait törnie fiád 93/ és dong: Cbemzstry öl Protein Coningat ion and bross Linking, kiadó: CRC Press, Poca Keton,
Fidridá Uáel},
Kim. ön Oson érdekesek. a giikozilezöa! módosítások, amelyek példáéi égy koszainak, hogy módos!tjnk egy poizpeptzö gzi koziiezési. mintáját szintézise és feldolgozása közbe::, vagy a további kelne! go zás 1 lépések során, érzel, kapcsolatét Elbáin közleménye: and, Rév, Biochem, Bú, 427-:5:34 (1207) „ Isinkén ebbe a körbe tartoznak szók a pepiid változatok azonos primer szekvenciával, amelyek további kisebb módoszkasokka! bírnak, ide értve a lösz kor Hozott smi.oosev gyököket, példágl a lesz kot Iroz int , feszié széf int, Vagy t oe ölöt reoaint .·.
m találmány fázlés polipért idekét is nyújt az IL-l 2 piú és az f.h-23ú között. Több cl tokin receptor vagy máz telülotz fehérje mél kimer, példán! .homödimtr egységei, képez, és agy Ismétléses:
kenetrokozónak killöböez© előnye! lehetnek, ide érivé a ősökként: fogékonyságot a proteoizfikns hasításra, ó tipikus: példák egy riporter polipéptzö, pélöaal Ineiiotáz fúzióm termékei agy fehérre valamely szegmensével vagy neménjövel, példádl égy roooptor-köfö szegmenssel úgy, hogy a fúziós Ugandám jelenléte vagy mm m -sr s 1he!yez kedése könnyen meghalérezhető legyen, Ezzel kapcsolatos például Dali ás munkatársai 4,339,801 száma amerikai egyesült áLiamokPeii szabadalma. A további géb fúzióé parthetök között zenpnellehetők a bakteriális β-galaktozidáz, frpb, A. fehérje, βiaktamáz, alfa amiláz, alkohol dehidrogenáz, élesztő alfa párosodási lektor, továbbá kimutatási vagy tisztítási toldatok, pél™ dáu! a Hisb szekvencia ELA.G szekvenciájaEzzel kapcsolatban megemlíthető dodevski és munkatársai közleménye; Scieoee 241, 812-216 (1188} , A talá leány szolgáltat fúziós konstrukciókat iá más terápiás egységekkel, például olyanokkal, amelyeket egy (itt lehet bevinn1, de oroz colit r tusán el lehet hasitani.
búzlés fehérjéket általában tökodbínahs nakle insavas eljárásokkal vagy szintet!kas poiipoptid eljárásokkal lehet készíteni > A nu kié insav manipulációkhoz ás expressz lóhoz a lka irtás technikák általánosan le vannak Írva az alábbi azakkönyvekdon1 uambrook. ás munkatársa!: Molecuiar Cloning; A Laboratery Manna! (2, kiadás}, i-3, kéket. Kiadó; dőlő ápring Ha ráér Laborafoty (1288· ; és
Anenhel és munka társai (szerkesztők}; ünrrent Pro tomp Íz IP holeeuiar Blology, kiadó; öreene és dlley, bee York ·1PPól, A pelipeptidek szintézisére szolgáló technikák például ez alábbi cikkekben ás szakkönyvekben vannak ismertetve; Me.tr 1 f leld: a.
Ame r > Cheso Som, 85, 2141-2126 (1983}; herri fiald; Ód ionos 222,
3áÍvS27 (dAkó}; Athertpn es munkatársai; lolid Éhese kopt ide lynthesis: A krrozzsal ápproach, kiadói ikh Press, Oxford (1288}; ás átsüti Pyhfhetiö Pont 1des; A osers^s önide, kiadó; t, }t, Ércemen, hon York (1222} . Az újra hajtogatási, eljárások siti I ma: z ha tok. 1 ehetnek a z i n t e tó kg a fa he r j é khe z , óizösagm
X « φ * Φ * X * * Λ X ν * Φ φ ♦ X < V X X <
A találmány megcélozza 11, iz pH vagy IL-B30 fehérjók olyan származékainak alkalmazását is, amelyek másolg minr változatok ék aminozav szekvenciában vagy glfkpriiezésben, Az ilyen származékok érinthetek a kovalens eagy aggreuáoióe társulást kémiai részekkel vagy fehérje hordozókkal, A. kovalens vágy aggxeoáczős származékok hasznosa): lehetnek Immanogánekként, reagéháékképt armunoassey vizsgálatokban, vagy trsztitásl eljárásokban, például kOtó partnerek, mint más antigének affznifásos tisztításához.
Az Ih-12 pH vagy if-k33 immobillaálható kovalens kotásvei egy szilárd. hördoxáhex, például eianogén-bromlddal aktíváit SEPhAkOSE-hoz, olyan eljárásokkal, amelyek -a szakterületen jól ismertek, vagy adszorbeálva. poiioiefin felületekre glatáraiőehzd reteszt kötéssel vagy a nélkül , ont i- Π,-12 pH vagy 1L-S3é anti testek vagy alternatív kötő kompozíció vizsgálatóban vagy Visatitánéban való felhasználáshoz. Az IL-lz pH, 1L-B30, vagy a téziős fehérjék jelölhetők is valamely kimutatható csoporttal példán1 dlagnosztikai vizsgálátokban történd alkalmazáshoz. Az lt-lz páé/lh-Ezé komplex tisztítására végrehajtható egy inmobi). izéit antitesttel poiipept lére, szekvencia alkotórészre, vagy komplementer kofó partnerre, példán! agy receptor közó részére.
Egy találmány szerinti oldott lk-li pH/IL-b3ö polipeptid vagy fragmentum felhasználható immnnoaénként a kötésre fajlagos snt/szérumok vagy antitestek előállításása, A tiszti tett antigén
H. halmozható monoklonáiis antitestek vagy antigén-kotÓ fragmentumok átvizsgálására, amely fragmentumok körülölelik a tornászérés antitestek antigón-köto fragmenfnmait, például a bab, fakó,
F tatár, és igy tovább, f ragmenf.umokat, A. tisztított ib-12 pH/11--Irt 0 ;zt,azynm él
A .<· -í· > <· antigének. felhasználhatók reágeaekénk is olyan antitestek kimptatáséra, amelyek a citokin komplex emelt szintiéinek jelenlétére adott válásé kánt alakulnak ki, és ez a kimutatás rendel 1 eszes vagy epööiáiis .textológiai vagy betegsége állapotok diagnosztizálására szolgáihat. Ez a taiálmány délgl téri fel a SEQ Ib bőd evekvenöiában bemutatott nuklornsav szekvencia által kódolt aminösSV ezek vend ék ellen felélőkéit antitesteket vagy ex ezeket tar talon ró fehérjék f reg.ment-.sasait, Ez a találmány elsősorban olyan antitesteket oéioz meg, emeiyefenek kötési affinitása Vén speciális bőménekesz, vagy amelyek speciális bőmének ellen alakultak ki, a speciális bőszének közé értve példád. az ib-Blö A, B, C vagy D héilxdf, vagy az 1L-I2 plO le-dóménjelt
A találmány megcélozza további közeli rokon variánsok izolálását, A Southern* és Northern folt elemzés képes megái lap!tahi, hogy hasonló genetikai egységek léteznek más emlősökben. Való' szánó az, hogy az 1L-B10 széles körben elterjedt faj változatokban, amrlyenek például a rágcsálók, nyál. félék, húsevő ragadozók, párosul isink, páratlan ujjsiak és főemlősök,
A találmány továbbá eszközöket biztosit rokon antigének esoportjansk izolálására, ámöly mind eltéréseket, emud Sasod.óságokét mutat szerkezetben, oxpresszálás.ban és működésben, A molekulák sok dz iologiar Ita tásának magyarázata nagy mértékben meggyőzed. továbbá eltérő fajuk és polimorf variánsaik. i zoiélásávd. ás jellemzésével. A találmány elsősorban alkalmas próbákat d.ztosif további homöiág göpot1 kai egységek azonosításéra kd.oobözó löj:pAfeéit<<
Az izolált gének lehetővé teszik Ih-Bzö expressziéját sálkőröeö s sejtet fransziormálását, péidáni. fai típusok vagy sejtek transzformálását, estje· nélkülözik a megfelelő fehér iákat áa negatív háttér aktivitást nranmk. Ennek lehotovo kell tennie az Ih-BlO funkciójának elemzését, Összehasonlítva. a nem transzformált kontroll sejtekkel,
A z é ka a k: a kritikus ?szerkezeli elemeknek, amelyek aÍvágaik ao ezen árit igének által közvetített különböző fiziológiai funkcióiét, szó t szabdal ázz latiét séges a modern molekuláris bioi ág is standé ró technikáinak ai kaimé zéséva1, elsősorban összehasonlíeve a rokon osztályok taglalt, Kezel keposolatban érdemes megemlitani például a homo lóg -letapogatáson métagonéz is technikát, amelyet Conningnám és munkatársai Írtak len Soienoe 243, 1333-1256
Π.933} ; és szokat a megkezslitereket, amelyeket O?Dood és mgokat áráéi, t öl Bioi, ebem, 2 tg, 15999-15992 (ItÖE), és te oh lei tor és munkatársai: -94:30 ö, 9, 4 331-4.390 (1990} ,: alkalmaztak.
Az intraoellulária fünkolöt velöszinüieg érintettek a receptor jeladásban. Fehérje internai1zálógás azonban bizonyos körülményét között végbemehet, és kőiosonhatés moher végbe intlaoeiiuiária alkotórészek és ni közinek között . Az Ih-Baü kőiosöhhatásónak speciális szegmensei kölcsönható aj. kotórészekkei afönstAithátók mutogeaezissel vagy közvetlen biokémiai eszközökké 1, például keresztkötéséé vagy affinitásba eijárásokkal, hite Íme zható szerkezeti eiemzés kriaztállógrá fi ás vagy más fizikai eljárásokkal is, A jelátvitel mechanizmusának további vizsgálatai magukban fog lei jak társult alkotórészek tanulmányozását, ámélyok izeiéinétök affinitáaos mécs terekkel vagy genetikai eszközökkel., például mutánsok, kcmplameutáciös elemzésével.
m . s-n
Az IL-B3Ö ezprosszáiásának és szabályozásának további tánUimányozását is elvégezzük. Az áutidánnkboi társult szabályozó siemok?-ek különböző fiziológiai, fejlődési, szövet fa j la gór vagy más exprnssziös mintázatokat kell mutatniuk, Különösen érdekeset a fölfelé (upstream? vágy lelő lé (dounstreevd levő genetikai feAnietek, például. szabályozó elemet..
ép 1L-B30 antigének szerkezeti tanulmányai uj antigének térvésésében vezetnek, elsősorban a molekulán molekuláris agonista vagy antagenléfa tuiazdonságokat matatái analógokhoz... dzeket kwPináink lehet ez előzőekben leírt átvizsgálás! eljárásokkal, hegy olyan antigéneket izoláljunk, amelyek az aktivitások kívánt spe fc1rumét, mdöu t j ák <
V. Au t i be a tok
Antitesteket lehet kialakítani a pi0/IL-B30 fehérjék különböző epitopjaira, ide értve a faj-, polimorf·· vágy alléi variánsokat és fragmentumaikát mind természetesen eiöfozdtüé formáikban, mind rekomhináns formáikban- Ezen kívül antitestek alaki zhatok ti XL-bló-akra mind aktív formáikban, mind inaktív termáikban, ide értve a natív vagy denafuzáik változatokat, ide tartoznak anti-idiotipusos antitestek is.
Antitestek, ide értve a különböző kötö f.teamen tárnokát és az agyiónod vált szarokat, az antigének elérő meghatározott fragmentumai ellen kralt kitté tok ál. latok immun! zálása révén f r o gment. obök kon joga túrna i v ni immunoján fehérjékkel» bonok ixajáiie antitestek alakit natök ki a kíván- antitestet kiválasztó sej bekből» ézdkob nz antitesteket át lehet vizsgálni kötésre normái vagy hiányos bó-Ble-aknoz, vagy át lehet vizsgál ni például egy reoopseásázkő * <· fór által közvetít alt agohlstá: vagy antagonista aktivitásra, Az antitestek lehetnek agonista vagy antagonista hatásúak, például térbe Illeg blokkelve a kötést valamely receptorhoz. Izek a monoklonál). s antitestek él tálában legalább mintegy 1 mmoi/i kg ériekkel kötődnek, inkább legalább mintegy 300 ymél/i. értekkel, tipikusan legalább mintegy üli psaói/l értékkel, mén tipikus abban legalább mintegy 30 ymal/i értékkel, eionyenen legalább mintépp 10 űrnél/1 értékkel, és bég előnyösebben legalább mintegy 3 yméi/i vagy bég jobb éitikkel>
A találmány antitesttel hasznosak lehetnek diagnosztikai alkalmazásokban is, blht befogó vágy nem-semleges1 te antitesteket ezekek át lehet vizsgálni azon képességekre, hogy kötődnek az antigénekhez a nélkül, begy gátolnák a kenést valamely receptőzhez, Mint semlegesítő abtltéstek ezek alkalmasak lehetnek verzengő kötési vizsgálatokban, izek hasznosak továbbá 1L-B33 fehéréé vagy receptora). kimetalánéhoz vagy mennyiségi értékeléséhez is. Ezzel kapósé latban intormáé lék találhatok az alábbi a tankönyvekben: Chan (szerkesztő) j laytagoloyyt A áraotioai
We, kiadöz Aeademie átess, Oriando, Florida -).987}y érien és hevman (szerkesztők); ár iocipl.es a nő áractice of immnnoassay, kiadón Itcckten eresz, bed York 113911; os bee (szerkesztő); hon lsét opzc Imr-z.n-oa.ssay, kiadó; Plennm Press, bee York (1733; ., Keresztabzzorpelök vagy máz vizsgálatok azonosítanak Olyan antitestekét, eme1y ek fajlagosrágok küldóbbzo épdk trama 11 mat atják, példáéi egyed), vagy kezez fali fáj legez Ságokat,
Ezen kivel a találmány szerinti antitestek, közéjük értve az antigén kötő: fragmentumokat is:, ishoihsk hatásos antagonisták zz.südm
X ·>.> ψ ν
£.> > < ί'ν «. * * *« > * « χ * * X χ \'·>Χ * * -X « «X <·» <* m, smelyez ez ont igenhez kötődnek ás ttot ketonéi is kötőst gátolnak nőidéül egy receptorhoz, amely valamely biológiai választ ve lehat ki. Ezek alkalmasak lehetnek nem-semlegesítő artrtestekként Is, és összetaposóihat ők toxinokkai vagy radion-klidokká 1 is úgy, hogy amiket az antitest kötődik az antigénhez, egy sejt, amely ezt exprosszálja például felszínén, elpusztul. Ezek az antitestek tevékké kopj ágálhatok gyógyszerehhez vagy más gyógyászati szerekhez, közvetlenéi vágy Közvetve valamely kapcsoló tévén, és végrehajthatjók a gyógyszer Pocáiozását.
Az antigén fragmentumok Ósszékapdáöibátök más anyagokkal, főleg poiipeptidekkel, példád, fuzionálva vagy kovalensen kapcsolva olyan polipeptlöekheZf amelyek immunogénekkénf alkalma zhatok, égy antigén vagy fragmentumai énkignálhátők vagy kovalensen köthetők sokféle immnnogénhez, például kulcslyuk kagyló (koyhoic iímpetl h em.ee taninhoz, .ezarvesmazha szérum albominhoz, tetanusz toxoidhez, ős így tovább. ?Ezzel kapcsolatban tnfofmáélékat nyújtanak az; alábbi szakhőnyvehi Mlcrobi.o rogy, Hoebet Medinai kivi sión, kledé; karper and hoc ( 1.9691 ; Landsteiner: Spéciidéi iy Sít te re lóg Ica. 1 teactions, kiadó; Dover küblicatlőcs, Ndé York □ éti}; kdiii.ams és munkatársad Hot;; oda In immuno fogy a nő Immuncebemistry, d kőtől:, kiadói Academic Erese, kan York diád; és karion és kané: énti.bodtes: A náboratpry kannal, kiadó; CSH Press, hon York dvhkd ezekben elsősorban leírások találhatok pol 1 klónál is antiszérnmok előállításához, szolgáié eljárásokra.
Stkpoyeá esetekben kívánatos nonoklonáiis antitesteket előáilléagy· ikélénöőzb emlős pppdáökssygyéhekből., Miiéiül dgérőhöől ,<:
X > * *.
X * > * * > · ¢. <«.»: X > Ψ ** $ X* rágósa1ókból., íóembMdköői, emberekből, és Így tovább. Az Ilyen monoklónália antitestek elölIlitá.s.i t cehe Máinak leírása megtalál he tó például az alábbi szakktinyvekbea és közleményekben: Stltes és munkatársai (szerkesztők:r Bagig and Ciinlöal ' ' \. ί n.v' , . ,,o '. . ' a< M > , \á ' \b . m' x ·.
Alkon, Katibornia? az alább mar idézett nzakkönyvékbenj kari au és Laza: ántibodies; A .fabora tor y bánnál, kiadói CHS Press fiába: r Goding: Msnocionni .Ántibodies: rrinoiples and Praetide |z, kiadás), kiadói áoadesrdo Press, Ókw York (láBkj 1 ég elsősorban Kobier és kb.isseim natúré 256, 475-447 (1975) , nmein eljárást tárgyal monskionálIs antitestek kialakítására.
További alkalmas technikák érintik a iimfocrták in vrt.ro tzfovósót az antigén poiipepfideknek, vagy egy másik mégdldáe szerint antitestek könyvtárainak átválogatását iágokban. vagy hasonló vektorokban.. Eszei kapcsolatosak az alábbi közlemények: Pnso ás munka tát sáli „donor as ion of a Barg© Combi.no tor lel lábra ry ot thé immenog.l oönl 1 n Popért óira in. l'hage Lertbda (Az znmeny iobu 1.1n készlet négy komhinatörIkps könyvtárának kialakítása 1-fágban), dg 1 e η o e 2 4 5, 1.2 7 6 ~ 1291 (19 2 91 ; és be r d é s m u n ka társ alt M g t ura 311, 544-546 (1999) , A, találmány szerinti polipeptidek és antitestek alkalmaztatok módosítással vágy a nélkül, ide ertve a 7z™ béré vagy humanizált antitesteket. g polipeptidek és ontrtestek gyákran vannak Pag jelölve hozzácsatolva kovalens vagy nem kovalens módon valamely olyan anyaghoz, amely valamely k.imutáthaió jelet szolgáltat.. Jelölési és kor joga.lás i teobnlkák széles választéka .ismeretes, és ezekről sokszor beszámoltak már mi.nd a tadományoo, mind a szabadalmi 1rodalomban, A megfélsió jelölések vy.jpa?Te «·» ·* Α ψ ❖ > K ❖ XX * lehetnek r adiorek}..ióok, enzimek, sznbsztrátörnek, kgfaKtbrek, léhibibozok, fluoreszcens részek, kezb.inmineszoens részek, mágneses részecskék és haoodlőkt Azok között a SzabáséImák között, amelyek kitár!fást adnak az ilyen jelölésekről, taré Ihatok a
3,817,837; 3,850,752; 3,835, 350; 3, 008,345; 4,277,07; 4,275,10 és 4,368,281 lejsiromszá.mú amerikai egyesült államokbeli szabadalmak» Aiéiékithetök rekombiréns immnngiobe1 inok is, ezzel kap·osciatban információk találhatok az alábbi szabadalmakban és közleményekben; Cabiily; 4,816,507 iájátrbmszámó amerikai egyesült államokbeli szabadalom; doorv óé monkatársai: 4,642,334 la int rom számé amerikai egyesült á .11 amokbei 1 szabadalom? és Qaeen és munkatársai: Oroo. háti» Acaő. Sri, USA 5.6, 10020-10033
Π 38 9} , á találmány szerinti antitestek alkalmazhatok affinitás krómé togr ár fához is a fehérje izolálásában. Olyan oszlopok készíthetők el, ahol az antitestek szilárd hordozóhoz varnak kapóséivá., bzzel kapcsolatos pólósai Wiiphek és munkatársai kdziemenye; hétfő Enzyrno} 104, 8-55 51334}, A fehérje viszont alkalmazható kimeritéthez vagy keresztabszorpciókhoz, hegy szelektíven fajlagos kötő kompozíciókat készítsünk.
Az egyes !L-30-ak ellep kialakított antitestek hasznosak lehetnék énti-idiotipysds arti.testek kialakításához. Ezek alkalmasak iehafnek a mégfelélő antigének aapresszi.cjáta vonatkozó különböző immunológiai állapotok bemutatására vagy diagéoaztizáiására.
¥1. Nukleinsavak
Az emlifett peptió szekvenciák és rokon reagensek alkalmasak ca.ézíőse .«ÍS-VA <· olyan PMÍ klón kimutatásárat Izolálására vagy azonosítására, amely kódol ja, mind az IL-12 p4ö-et, mind az ll-Blü-at, például valamely tórméáiefeed forrásból, Sz tipikusan alkalmas gégék izolálására emiőóokböi., .és hasonló munkawaetek alkalmazhátök gébek izoláláséra más fajokból, például melegvérű allétokból, mint madarakból vagy emlősökből» A kereazthibridizálás lehetővé teszi IL-12 páö vagy fb~o3é izolálását azonos faiból, például polimorf variánsokból, vagy más fajokból, ágy sor kim. dobozó mag köze Ír lón áll rendel kezésre, hogy sikeresen izoláljunk egy álkaÍrnáa nnkloinsav kidob, Az ilyen gének lehetővé teszik együtt nxoresszáló kenet fakó lók vagy fúziós könsttuköiők megalkotását,
A tiszt ltot! fehérjak vagy potipegi, idek alkalmasak antitestek kialakítására standard eljárásokkal, amelyeket az előzőekben leírtunk, Bzintetikos pepbidok vagy tisztított fehérjék szolgáltathatok agy itárunréndazarhéz, hogy oonoklonálls vagy :peiiklov naXis antitesteket alakitsvuk ki< Ezzel kapcsolatosak például az alábbi ezakkönyver: Coligan; durrant örotocole in lomunoiogy, kiadó: ki ley/éresse (lééi): és bar Ιον és tané: ántibodles: A. habőfáfőry Manna!, kiadós Cola Spring Marbor éress (léké) ,
Így például egy fajlagos kötő kompozioiö al.kalmazhatő egy •••lyen expresszien könyvtár átvizsgálásához, amely egy mind IL-12 plv-ot, mind IL-AéO-at ezpresszálé sejtvonalból van elkészítve. Az intcaco bioiét is éapréssziő átvizsgálását különböző festési vagy .momunf 1 uoreszcenczás munkamenetek segítségévei hájfhátjak végre. Kötő kompozíciók alkalma zhatok egy felületi fúziós fehérjét expxesszálö sejtek affinitáses tisztitásához vagy kivaiaszkásóhoz <
cz,ozszsz * γ** < Φ *
XX Φ Υ Φ Φ ΥΦΦΦ Φ
X φ φ φ X ·Φ Φ.
A pept id czegmenaok alkalmazhat ék meglelő lő óiigpúúkiébtidó:k szelektál ásóra egy könyvtár átvizsgálásához. A genetikai. kódot lőhet használni a megfeleld eligennkieetidck szelektálására, amelyek: alk almos ak próbaként az átveregáléshoz > Ezzel, kepe tol atban atalnnk a Genkank-ta éa a 1EQ ID NO:l-re, A nőimméráz 1.aroma köles (EGRI technikákkal kombinálva a szintetikus oi.igonnkieéhiddk alkalmasak korrekt klánok kiválásziáaára valamely könyvtárból, Komplementer szekvenciák szintes alkalmazhatók erő' \ , ; ' < ' ' t m η K ' ° „ a - - * . x - ' ’ e' ' idmok lehetnek elsősorban hánzhosak, péidátm. összekapcsolva léten zl. te ti vektorral, vagy poll-A komplementer sC2 teohnlkakkal vagy más pepiidet komplementer hón-evef.
A találmány coliái kötött tán izolált Dbn-ez vagy fragmentumok alkalmazásé a megfelelő IL-lz pán és IL-&20 polipeptid biolég iái Ing aktív kompi erének köde iá sár a, különöset olyan hót -ok amely az említett amazve rt nianyzr.K az a rest szekvenciák nem~f rándziaf ált részeit kódolja. Ezen kívül a találmány magában foglal izolált vagy rekrrmhináns ubs-eket, amalyek agy hiolPgi.ai.lag aktív fúziós fehérjét vagy poiipepticet kódolnak, és amelyek köpések hi.br zol zárni, megfelelő kor óimén vak között át itt leírt ÖN 3 szekvenciákhoz. Az oml.itott biológiailag aktív feltétje vagy pulipepiié lehet ép antigén vagy fragmentum, ás randelkezhet például a SGO ID óé:2-ben lemérfőzett amznosav szekvenciával, és ez elsősorban érett, kiválasztozz pélipepttő, Ezen kikul á z al.álmény megában foglal ja az izolál t vagy rákoméi uáns ió® vagy fragmentumai alkalmazását, amelyek egy kiválasztott 11,-12 pii/lL-eiu kompkezhez nagy azonosságot mutató feherΖο,ΟΟΟΖχΖ ¥ S $ * * » * Φ X XJf« x x v * A *ss$* x * V ...:» *«.S* * a « «>· *·> ít x<· sókét kódolnak, Az izolált DhS rendelkezhet a megfelelő szabályozó szekvenoi ákkai az :i ős V szegélye ken, amelyek lehetnek példáéi pfőmőtefek, fokozók, poli-A további szignálók és máé egyebek. Egy másik megoldás szerint az expresszié kivitelezhető egy kódoló szegmens működőképes hozzá kapcsolásával valamely he terolón premöterhez, példáéi egy promótor beiktatásával fölfelé {nost team) egy endogén géntől. Ezzel kapcsolatosak példáéi az alábbi irodalmi helyek: Trsoo és munkatársai: PO áó/lááll számé kCT közzétételt itat, és bő SE ök/4Oá,O3ö számé szabadalmi irat.
Egy „izeiéit nekis insav olyan nukleínsav, például kök, öhS vagy kevert polimer, amely lényegében el van különítve máz znévén alkotórészektől, amelyek termeszétesen kisérnek egy natív szekvenciát, ilyenek például a riboszómák, poiimerázok és/vagy szegélyező genomikas szekvenciák az eredő: fajokból. Ez a kifejezés olyan nukloiPÓAV szekvenciái öléi kőiül, amely el van téve™ fiivá természetben előforduló környezetéből, és magában foglal re kombi nana vágy klónozott EES iéo Iá turné kai és kémiai utón szántefizáit analógokat, vagy olyan analőgökat, amelyek biológiai ötön. yennek szintetzárva heterolőg rendszerek revén. Egy lényegébe··; tiszta molekula magában foglalja a molekula izolált formáit, például el törököt: egy ize iáit kr oroszométól. Általában a hu kid insav lehet valamely vektorba;·! vagy lehet valaméiy fragmentum, amely kisebb, mint mintegy áö kE, általában kisebb, mint mintegy 30 kE, tipikusan kisebb, mint mintegy lé ka, és előnyösön kisebb, mi hf marit egy á kü.
Egy izolált nnkiemsov általában molekulák homogén kompozícióit, de bizónyoa kiviteli formákban foltalmazhat kisebb heterorm ··<.·· ·* ·' * ·; * ·'·<··· * * #*í:, .v >·..<· *.>· <><«; x >· « < X '*«·*♦ * >
·> «· ·.·<· genitést. Ez a heterogenitás tipikusan a polimer végeken vagy olyan réz zokon fa iálka tó, amelyok nem kr.it i kozok a kívánt biológiai faukció vagy okéivitás atampontiából.
Egy ,, r e kopp i o á n zhűk lein Sav vagy elöl 111 f á s 1 el j ár á s óvói, Vagy szór kőzetével határozható meg. Előállítási eljárására utalva őz: például égy olyan termék, amely valamely eljárással vau elkészítve, ahol ez az eljárás rekombl.náns nukleinsav techno iákat alkalmaz, pólóéul felhasználva emberi beavat kozást a nnkloinsav szekvenciába:·;,, tipikusan szelekciót vagy termelést , Egy másik megoldás szerint ez lehet olyan, nukleinsav, amely a két fragmentum fázrés terítékét tartalmazó szekvencia kislak!kásával van elkészítve, amely fragmentumuk a. természetben nép határosak egyoéaeal, de ez azt jelenti, hegy ki vannak zárva a természet termékei, például a természetben előforduló mutánsok, Így például ide tartoznak azok á termékek, amelyek sejtek trnnozzormélásávai készültek veiaPály nem természutpen eiofordulé vektorral, mint amilyenek például azok a nukieinsavak, amelyek bármely szintetikus oliqonukieotzd eljárás alkalmazásából származó szekvenciát tar t a ima zttak. Gyakran végezhetjük el egy kodon helyet tz,ό rését valamely reőunóáus kohonnai, amely ugyanazon ami nosavat vagy egy konzőtvsiiv amincsavat kódol, miközben általában bevezetünk vagy eltávolítnnk egy szekvencia felismerő helyet.
Egy másik megoldás szerint kívánt funkorópl nukléibógv szegízen sut egyesi tuséi hajtjuk végre egymással, hogy égy egyedi géné tikár egységet aiakzisnnk ki, ahol ez olyan funkciók kívánt lombináéi6jét tartalmazza, amely az általában rendelkezésre álló természetes formákban nőm található meg, A reeizikciós enzim
0'
Jí $>· « Se Λ* * * *««· * V V *V * s * *-.m«.·»· * * vx *.
faj.tervre helyek gyakran célpontjai az 1 Íven mesterséges marrpoláoióbnek, de tervezés segítségével mán hoiyspocif i.kus célpont··· •e; példáéi promóterek, 11 tépi1káörós helyeke szabályozz? ezekveppiákf ellenőrzi ozekvnncj.ák vagy pád hasznos vénátok le beleithétok. Hatonló koncepció alkalmazható rekorsbi.náns, példábl fúziós, poii.peptidőkhez., Különösen ide értendők azok a. szintet 1t.;s nokiezcsávák, amelyek a genetikai kőd reds.ndanoőa révért olyan pollpepi izioket kódolnak, ahol etek hasonlótarak ezeknek az antigéneknek a fragmóüfhmaihóz.. és különböző fajtákból vagy polimorf variánsokból való szekvenciák fúzión termékeit.
Egy jelentés „őezzano® a nukieinaavak ősszel ügyesében egy öaozofüggő .fregm.eptom legalább mintegy 17 nnkleot iddal, általában legalább mintegy zk nnkisoiiddal? gyakran legalább mintegy 37 noki.oof időéi, igen gyakran legalább pietegy 65 nnkleofideái, tipikesen legalább mintegy 41 nükleetlddaiáltalában legalább mi elegy 47 nuklootiddai, előnyösön legalább mintegy kV coki soriddai, és különösen előnyös kiviteli, formákban legalább mintegy 60 vagy több nakleotiddai, pélgáni 67; 73; ki; 34; 9V, és Így tovább nnkleofiddal, vagy akár ngkigotidok százaival ász vagy azrelve1.
Egy öbk, amely egy li-löo fehérjét kódol, különösen alkalmas olyan yenek, miül és cöhő fajtat azonosizásáras amelyek rokon vagy caaonlö ishérjókét kóöoinak, valamint olyan DdS-ek azonosítására, amelyek homológ fakót jókét kódolnak különböző fájókból. Ezek lőhetnék homológok pép fa jókba ti, ide értve a főemlősöket, régedsiókat; kutya fő· léket, mocskaieleket ee madarakat, Különböző fk-Böü fehérjék lőhethek homológok és Így idé tartoznak, heg •mzzZöise niynn fehérjék is azonban, amelyeknek csak (yen távoli avoltéi óe kapóséin, te ven ez antigénhez, könnyön izeia Ihatők megfő le lé kerti··· menyek között ezeket a ste?kvenei.ákat alkalmazva, ha erek kellően hoaioiőgeh, nuiönozen érdekevek a főemlős: 1L-B28 fehérjék. Hason lő a helyzet az lt~12 péű-nol is, amely fehérjék elsőrendű délpontok a fúziós kon orra koz ókhoz, vagy kombi náció?:: konstrukciókhoz.
Genooikoo szokvanőinkből, például intronokat tarta imanőkből, származó rekombinőne kiének alkalmasak lehetnek transzgonikns ts~ nuimanyokhoz, ide értve példán! a transzgenikus sejteket és organizmusokat, és génterápiához, Brre vonatkoznak pálcául a kövétkeze zzakkonyvek és közlemények: Goodnoa: ,,7.b ansgsnic Animáló, a ke itt áltál szerkesztett szakkönyvben: knoytd.opedf a of immbnoiogy, kiadó: heabemic arcos, San. hiegö, 1907--7904, oldal •1092;; Ttáv is: Sóianno 7 7 4, 1292-1924 (1992) 1 Kuké és mankátársai : őoienoo tóé, 7 07··'/10 :1991)? Capecchi.: ét.n.ence 24 4, 1282 {1929;? köbért són (szerkesztő; : feratosa roi nemes and bmbfyöhie ltom telis: A kosét Icai Apor esek, kiadó: 2 RÍ, áress, óz férc {1997b? és aeoenbterg: d, Öiinieal, tncoiogy lé, 290-199 {192.2),
A lényegi homod.égis, pálcául azonosság, a nukleinsav szekve??··· oia összehasonlítás össze!zggézében azt jelenti, hogy a szegmensok, vagy kompiemar tér szálaik, amikor összehasonlítyuk, azonosak, amikor gptissálisan vannak sorbaállítva, megfeleld nukleotid beiktatáeekkai vagy kiiktatásokkal, legalább a nukleotidok mintegy 521-óban, általában legalább mintegy SAA-ábab, szokásosan legalább mintegy éol-ában, gyakran legalább mintegy lll-ábááj tipikusan legalább mintegy 7 71-árén, rendszerint legalább áiibtegy 777-euen; előnyöse?'; legalább mintegy 99-98 vagy több ö-ában, yy,.:ÖáZ8b·
χ.ί χ2 φ φ Α«φ A X φ ><
> χ- φ φ φ χχ χ φ χ χ Φ χ >
Φ φ χ φ φ χ φ Φ és különösen előnyős kiviteli formákban akár mertégy 99 vagy több 3-óban, agy másik megoIdáé szer int lényeges homológra akkor áll lenn, amikor a szegmensek szelektív hibaiái tglééi körülmények. között híbrlétráinak egy szálhoz vagy komplementeréhez, tisíkoson TL-12 p40 és/vagy 10-1130 valamely szekvenciaját, például a Séd 10 börl-ét alkalmazva, Szelektív hibridizáiás tipikusan akkor jön létre, amikor itt legalább mintegy 55% azonongág van égy legalább mintegy lé ookleotidos szakaszon, előnyösen legalább mintegy 75% azonosság van egy mintegy 25 nekieotlnos szakaszon, és legelőnyösebben legalább mintegy söl-oe azonosság van agy mintegy 25 nokiébtidös: szakaszon. Ezzel foglalkozik példázd Kaoeniáá közleménye; duói. Aoids Rés. 12, 203-213 (1984), Az azonossági összehasonlítás hosszúsága, amint lei. ránk, hosszabb ázakaozokrg le kiterjedhet, ős bizonyos kiviteli formákban ez lehet egy legalább mintegy 17 nnkieotioos, szokásosan legalább mintegy 28 nnkeotiéos, tinikosán legalább mintegy 40 nokieotides, és előnyöse··; legalább mintegy 73-100 vagy több nokisotIdős szakasz, .A szigorú kör örmények, a homo légi ára utalva a h ibri dl ráció esi ősszéfóggéeben, a sótartalom, hőmérséklet, szerves oldószerek és más paraméterek szigorú, köáibináif kdtüimóhyoi,· és ezeket szabályozni keli a hibridizációs reakciókban, A szigoré hőmérsékleti körélmények általában magokban foglalják a mintegy 3 5 ”3 fölötti, szckásbsah mintegy 37Ő2 fölötti, tipikusan mintegy 55¾ fölötti, fipirosabban méhtégy 5003 vágy té;C fölötti, és előnyösen mintegy 'döf fölötti hőmérsékletektt ,· A. szigort· sótartalom körülmények jeienténak kevssebb, mint mintegy 1000 mmől/i, általában kese·· m .ezerre \\ <· >· ν » * ;Μ< >· χ» *χ·«: * ♦ *
Α-νψψ 6 V > 6 **>* ·» < φ>· Χ< * zebn, .mint mintegy ϋ mmölZi, tipikusan kevesebb? mist mintegy 2 50 mmól/1, előnyösen kevesebb, dint mintegy 150 mn.ó}./i sokoncentrációt, ide értve a mintegy 105, 50 vagy akar 50 mm.éi/1 sOkoncenf tác.ibkst is, A pákádétetek kombinációja azonbán sokkal fontosabb, mint bármely egyedi perádéter mértéke. Ékkel fog iáikon ik például betdUk és tavioson közleménye; 2i dói. Bioi. 31, 343-370 ilkóOg, A bíbridizáléspak szigorú körülmények között legalább két szoros hétfőket kell biztosítania a szokásos Páterrel szemben, előnyösen legalább 3-5-ssöröst vagy többet,
A szekvencia deetehasonlitéshoz áltaiaoan egy szekvencia szolga 1 referencia szekvenciaként, amelyhez ο, vizsgálandó szekvenciákat össcehasoniltjuk. Amikor gzekyeoeiá összeháeOUiitb algoritmust alkalmazunk, a vizsga lenné és referencia szekvenciákat betápláljuh egy számítógépbe, siszekvenola koordinátakát nevezünk meg, ha szükséges, és megnevezzük a szekvencia algoritmus program paramétereket, A szekvencia öeeeehasötiikd a Inc ritmus azután kiszámítja a százalékos szekvencia azonosságot a vizsgálandó szekvono.ié í k) hoz a referencia szekvenciához viszony.·fva( a megnevezett program paraméterekre oieposve.
Végrehajthatjuk a szekvenciák optikai serbaáiiitésáf. at őstszehascnlitáehoz: például Smith és Waterman lokális homológra alga r.rt murával : Adv< Appl < Math. 5, 432 (1731}; beedlomon és
Vunach homológén soroséi!!to algoritmusával: a, bel, bioi. 4 3, 443 (1575}, rontson oa idomán baeenlceági eljárásénak vizagálátávsi;. éroe, nat. 1 . Aoad. bei. éÖA 35, 2444 (1753}; ezen algoritmusok számítógépes vécretagfosavei ífláP, BhSTFli, káSTA és TFAtiá a diecöhárb Genéfios 3oftgarg kócsagé csomagban, Genetics ivOétlsk
XS ? Φ Φ V * * < φ » X < φ φ X φ >
φ ν φ φ Φ Φ Λ Φ φ > X Φ <
X Φ > X X φ V \· tompátex Gfpöp, 575 Science őrivé. Hadisón, Wiédoásib}, vagy vizuális á'ttpkiptédspi -ezt ismer téti általánoson .Auaubél és munka, f érzői eldzöpkbéb idézett szakkönyve} ,
Az alkalmas algcri tmezőkre égy példa a 7'OOEOfo A 711,5;) k egy többszörös szekvencia szrrbeá 1.1 irtást alakit ki rőten szekvenciák csoportjához, progresszív párszerinf1 sorbaáli.ztást alkalmazva, tégy bemutassa a rokonságom és a százalékos szekvencia azonosságot . Ez te),térképez egy fát vagy dendegramot is, bemutatva a zcröaáilifás létrejöttéhez a lkai mázott fórtöo kapcsolatokét, A k! LEIJE Eeng es öcoliftie progresszív oorbsá Ili. Sasi módszerének Iá, Hol. tvol . 13, 351-355 (1957)1 egyzzerüzitését alkalmazza.
Az alkalmazott elzárás hasénló a üicgins és Sharp által leift eljáráshoz; dABiOE 5, 151-133 (1955), A program képen sorba Ilitnni akár 300 szekvenciát lé, mindegyiket 5000 nőkléckid vagy ami sósav maximé 11 a bosszúsággá 1., A sokszoros serbaál1i tasi munkamenet a két leginkább hasonló szekvencia persze mint i. sorénál lírásával kezded?.!, két sorbaállít ott szekvencia fürtjét alakítva ki. Ez a tart ezután sorba lesz állítva a sorbaállítort szekvenciák kbyéékggo leginkább rokon szekvenciájával vagy űrtjével, Szekvenciák két fürtje lesz sorbaállítva két egyedi szekvencia párezer int 1. sorbaállításónak egyszerű kitér1 osztáséval, A végső sorbaéi11tás progresszív, párszor infi szerbnéllátások sorozatával erhetö si, A program égy fűt,, tégy megnevezzék a speciális szekvenciákat és sminosav- vagy nakleetid koordinátái kat a szekvencia összokáson)).sás területeihez, és megnevezzük a program párámét ebeket Így például egy referencia saekvéhoia esszehasphl i t hé tó más vizsgálati szekvenciákká)., hogy meghatározzuk a rnözsoKe százalékos szekvencia azonosság ösezefzjggást a Következő paramétereket alkalmazva: hiány hézag tömeg (dézsáit gap ienghtú (ő <1)0} y hiány hézag hossz tömeg (de fsait gap lenget se zent;
(0,10} és súlyozott vág hézagok (meighted eno gaps; ,
Az algoritmusokra, amelyek alkalmasak százalékos szekvencia azonosság és szekvencia haasnlőság meghatározására, egy másik példa lehet a BLAB'f a 1 gór 1 tmus, amelyet Alfsohui és munkatársai Írnak le: 10 dói. Bioi. 21Ö, 400-410 (100.01 . A BLA2T elemzések kiértelezésére szolgáié szoftver a köz rendelkezésére ári a
National Center fór Bioteohnology Inföfmafior-nái (http://ouu. pepi, nlmn ni.b,gov/}, Bz az aigorifreos magában foglalja először hagy pontszámú szekvenciapárok íhigh scoring soguenca pairs (ΗΡΒΠ azonosítását, azonosítva d hosszúság rövid szavart a kérdéses szekvenciában, amely vagy illeszkedik bizonyos T pozitívnak becsOlf küszöb ponfszámhoz, vagy kielégíti art, amikor sornts van állítva valamely azonos hosszúságú szóval egy adatbázis szekvenciában, A T-re égy utalunk, mint a szomszédos sző yphészám küszöbre (Aifash.nl és munkatársai, előzőekben .idézett munka} , Özek a kiindulási szeme zés sző találatok úgy tsvekenykednek, mint betnőitók a bevezető kutatásokhoz, hogy megtalálhatok legyenek az ezeket tarts imazo hosszabb üBS-ek, A sző találatok azután ki lesznek térj észt ve mindkét .irányban az egyen szekvenciák merőén, ómig a halmozott soroséi Htási pontszám növekedhet. A azé találatok kiterjesztése minden i.rányban megáld., amikorú a halmezott sorboái 1 itusi pontszám X mennyiséggel. lezuhan dazimáiiaán éléit érfékeiéi; a halmozott pontszám záréra vagy még búé alá mégy, égy vágy több negatív pontszámú gyök. sorba··· océ-mvse
allitáe felgyűlöm),énének következtében; vagy az egyik szekvencza elérte a végét, A K, 7' éa X AAAAA algoritmus paraméterét magbatávozzék a eerbaáilltée érzékenységét éa sebességét:. A 3LAAT grogram hiányoz ként 11 azonos azat (W; a .lkai mez, a lkaim zva a.
PnöAbduz pontérték mátrix (Menikoff és Aenikoff: Aroe. háti. Agaik Api, ÖAA 89, 5 A Air (1989)] 58 sorbaáii1tását (B) , a 18 várható értéket (Pl , Ami, A-A értékekét, és se.nőkét szál t;osze)iapptzl5|t;á:giih',
A s záza 1ékőé szekvé no1a a zenosság ki szam i tásónak é ebe kében ezen kivöl g BLA8T algoritmus végrehajtja a hasonlóság statioztikár elemzését re két szekvencia kőzett, ahogyan azt például Katiin és Aztaehnl leírják; Proo, kari, Agad, Bei, USA 80, S77.35787, A BLABT a igeritmus által szolgáltatott ha són 1 óság egyik mércezárna a legkisebb összeg valószínűség (P (B} )amely a va részi nősen .ind! kaszáját szolgáltat ja, amellyel egy 11 lesz kedés két nnkleotid vegy sminoeav szekvencia között véletlenszerűen előtörőül hat , így péicáel egy nuklei nsavat. hasonlónak toki rmunk egy referencia szekvenciához, ha a legkisebb összeg vaiészinüseg a vizsgálati nnkieinsav összehasonlításakor a reférénoié nukieinsavval kevesebb, mint rsistegy 0,r, előnyösen kevesebb, mint mintegy ö,öi, és legelőnyösebben kevesebb, mint mintegy 8,007.
Egy további 1 ndzkáozöja annak, hogy polipért.!önt két nnkieigsav szekvenciája lényégében azonos, az, hogy az első nőkleinsav által kódolt polipoptrő rmmunsdógrai lag kozeezkreaktzv azzal a pollpeptrdde) , amelyet, a második nnkieinsav kódol, amint ezt a tovább.;, okba a leírjuk, így ggy poireepziö tipikusan lényegében azőnop egy második poi r pop trade 1. például ahol a kát pepiid osák
7a,ZAvóz •Χ· Á konzervutzv helyéttesrtéaekkel különbözik, Egy másik indikációja annak, hogy két nukieinasv lényegében azonos, ez, hogy ezek hibrid inéinak egymásáéi szigorú körülmények között, ahogyan ezt a késöbbd.ekban leírjuk.
Az 15-B2B máé emlőt tej okból klónozható és izolálható közeli rokon rajok faj közötti kérészthibrléihálásával» Á homológia lehet viszonylag klesiny a távoli rokon fajok között, és így ajánlatos a viszonylag közé11 rokon fajok hibridizelázaégy másik megoldás szorinr egy olyan antitest készititehyamely kisebb tat fajiagosságot mutat, elkészítése hasznos lehet expressziös klonozás1 megköze1i teáé kee n»
VXX, p4Ü/XX,~B3Ö kos&binációk készítése; misztikumok .Az a bbö, amely az iL~12 páO-et vágy IL-BBO-at vágy fragmentumai kát kódol ja, mégkapbatö kémiai szintézissel, cDMS könyvtárak átvizsgálásával, vagy sokra.: e sejt vonal bői vagy alövetmintából kés zi. tett genomikus könyvtárák át vizsgáié sávéi., Ezzel kapcsolatosak az alábbi közlemények és szakkönyv: Okaysme és Berg;
bed. Coli» Bioi, 2, iá 1-17 0 {1922; i Gubier és Böffmab; Gebe 25,
202-2 69 (1992); és diósét :szerkesztő): Béé Gionlog: A Braczseni Approeoh, kiadó; TÁL Press, özford (1984) » Egy másik megoldóé szerint az itt nyújtott szekvenciák hasábos ÁGA prímeteket szolgáltathék vagy lehetővé teszik ti,-12 oáö-ot vagy iL3-3á-at kódoló megfelelő gébek szintetikus vágy más elzászi késet; ide értve a természetben előforduló kiviteli fözmákaf is«.
Ez a BÚG gazdasejtok szeles választékában eapresazálhatö teljes hosszúságú 25-12 p'ie es ft-BlO Vágy fragmentumaik az intéz 1söhez, ameiyék viszobt felhasználhatok példáhl por1 klónálle vagv ?<s, zo;
Φ· ίί· mono ki ónál is antitestek kialakítására ?: kot kai tanulmányokhoz; módosított molekulát mega lkot ásóhoz éá oxprosszá.iásáhozés áj 20 r ko z o f / f un ke.;. 0 t a no 1menyükhöz K
A toktorok, ahogyan itt használjuk, magukban foglalják a piazmi dókat, vírusokat, baktor iof ágoka t, integrálható obi f rag··· montumorát és más olyan hordozókat, amelyek képesek bhS fragmentumok lót ugrálására a. gazdaszervezet genomgábs. Ezzel a témakörrel foglalkoznak az alábbi szakkönyvek:: áouuoia és munkatárséi; Cioning Vert őrs; A Laboratory Hanna!, kiadó: olsevier, bee fo.tk, és ennek szopbiemehtomái (iáéh} a és Rodriguez és munkatársai (szerkesztek} í Vecfcrs; A Survey of Molecolar Cioning Voctors and
Éheit (boy kiadó; Sotterswor fh, Boston, Msssachusetts tett:„
A taiáirsány gél jelre a dós szekvenciák működőképesen vannak Összekapcsolva, amikor ezek funkcionálzsan rokonságban vannak egymással.. Egy péiöaul egy oleszokvenciéhez vágy kiválasztási vezetőhöz {socretory leaöer} szolgáló DOS műkődóképesén van hozzákapcsolva egy nőiipeptlőhet, ha az elófehér léként van exprosszáiva, vagy részt vesz a polipept i.d irányitéeábao a sejtmámoráéhoz, vágy a pelipéptid krválaszfásában, egy oromé tor műfcOcőképesan van hozzá kapcsolva egy kódoló: szzdzvencrához, ha sz szabályozza á póiipeptld transzkripcióját; egy ribeszöms: kötőhely működőképesen van hozzákapcsolva egy kódold szekvenciához, ha az égy helyezkedik el, hegy lehetővé váljak a ttéhszláole, Aitaiáhan a mzókódöképssen összekapcsolva kifejezés folyamatosat és leolvasó keretben levőt jelent, bizonyos gén-ablkai sienek, pálcául represszoj' gének azonban nem folyamatosan összekapcsoltak, de mégis kórdónak más operátor szekvenciáknoz, amelyek
-X
vislőni szabályozzák az expressziét.. izzói kapcsa Ht csak az alábbi kövlabéhyék éá szakkönyvok: EobrigbeZ és munkatársai: 10. fejezet, 280--2 28. oldal; Balban ea Bolivár:: Eothods in
Enzymoiogy ggb,, 19-87 (1998); és önzőbe! és munkatársai: Cárront
Brctocele in Hoieouiar Biolcgy, kiadó; öveeaa és bi.Iey, Ne© ¥ptk :1993) , A két kódold szekvenon.a egyért -axpresszálása kulOnóson érdekes itt.
A mag faiélé expresszics vektorokra ragracentettv példák ,).ehatnak a pCbNAi; pCD (lásd Okayama és mnokekársai: bei. Coll kiél , 0, liaé-1142: (1395)]; pHClneo Poiy-A (lásd lhomas: és munkatársai:; deli 01, 002-512 {1097)) és a Baculevirns vektorok, mint például a pAC372 vagy pACálG (lásd. például Pillér: Ann, Pev, Mer ©bioi, 22, 177-130 (1889)), nyak,rab kívánatos expresszéin! egy zt-zl p4 8 és/vagy 1L-B30 pölidegkidét olyan .rendszerbén, amely táj lapos vagy megbatározott allkozrlezéoi arukéval bér. Bitéi kapcsolatosak az alábbi köziemények; Luekow és Suomers; Bio/Techno légy 0, 47-0 0 (1388) ;
és Kanf.man: bein, hnzymol. /182, 4 87-OH (1330).
Az IL-12 p48 és/vagy TL-hjö vagy fragmentumaik mogaikotbatók úgy, hogy föszfatidil inozitallal (BT) kdtöffek legyenek egy sejt membránhoz, de eltávoz Írhatók legyenek a membránokról egy tosdfatidil Hozitoi iásltb enzimmel, példádl föszfatidil znozztoi fosztο 1 .rpáz-C-ve 1 történd kozeHosel, Ez kHoccátja az. antigéhf bio légié il.sg aktív forróban, ét tisztítást tesz lehetővé a fehérjekérnia standard munkamenetéivel. Ezzel képcső latosak az: alábbi közlemények, bőm: Blochim, Biophys, Atka 388, 923-459 (188 9) y lse és munkatársai i letérőn Óid, 1883--1083 (1935); és
Zé.gZVAÖ •s. - φ φφ· ·>·>·<φ * ν\· νΦ «· ί- Φ * \ * '> * >.*··.;< φ Φ ·>νχ· φ φ φ a.j, :;<ΦΦχ Φ φ λ χ φ·χχφ χ·
Φ X Α· Φ Φ Λ Φ Φ krunner és munkatársai ; ·1< Gall Bioi, 114, 1.275-122 3 (1991) ,
Most, hogy ex 1Γ-12 p40 és az 11,-330 mar jellemezve vannak, éra ama a túrna .lkat. vagy származékai kát el lehat készíteni a oeptiőek a sánta sáséra ezt.igái. 6 hagyományos mán kame na tokká .1, Ezek a munkameoeéek olyanok, amelyek aa arákéi ssakkönyvekbeo vannak ismertetve; dtenari. és Vonna: Sói lé aha se kopt lile 3 vet he sásklánéi Piarro éhemital Ce, Rock törd, Illinois (1964); Bodanszky és Bodanoxkya éhe hraotioe of éeptide Vynthesis, kiadó: Springer veriag, boa Sark (1984 p; Hodanszky: Éhe érint: i.plea of PapiIda Synt.hesis, kiadó; Springer Veriag, eea York (19341; év Villaffano a 'szerkesztő): 1eohniguaa 1n árot ara Ckomis t r y 11., k z a d 6: Academzo Press, San liiago, Kalifornia (1991) ·,
A találmány reagenseket szolgáltat, amelyek alkalmazást találnák diágnOázti kai. eijaráaokbán, ahogyan óbban a be jelen rézben másutt leírjuk, példáéi, l't-12 plO/ib-S/O komplex által közvetített. állapotókban, vágy a továbbiakban a diagnózishoz szolgáló részletek leírásában, A gén alkalmas lehet a fejlődési tanulmányokban, pél-dávi a rágcsáló megkülönböztet évére ax embertől, vagy markor ként különböző sejtek megkülönböztetésére, amely rejtek különböző expresszibe vagy módosítási mintázatot matatnak, A szolgáltatott kompózioiék hasznos rsgensek példán! in vitro vizsgálatokban, tudományos kutatásban és nakieinsavak, potipeptidek vagy antitestek szinté zásában vagy gyártásában.,
A találmány tengőnsekét is nyújt jelentős kereskedelmi és/vagy terápiás la hot ősegek kei < Az ΙΓ-12 o4 0/11,-330 Kompi ez; (természetben előforduló vagy rahomörnans), fragmentumai, hozzápvom ¥ ' 5* -ή' Α > * * <· * * Α ’ύ * » *·>* ν * * ** *❖** * < «· * **<·$ * * Λ χ« Φ> « »·χ· •juk kialakított antitestek olyan anyagokkal együtt, amelyekről atoooeitottlfk, hogy kötő affinitásuk van a komplexhez vagy egyedi a1kotoréssexhez, hasznosék lehetnek reagensekként a molekula ri.s biológia, immunológia vagy fiziológia tanítási technikáihoz. Megfelelő készleteket lehet készíteni a: reagensekkel» például gya kor 1at i laboratórrumi munkakénetekben fehérjók, antitestek, klónozó eljárások, szövettan, stb, kiaiakltásában vagy felhasz.hálásában,
A reagensek alkalmasak rendellenes fiziológiával vagy fejlődéssel társült állapotok terelésében is, Ide értve: a gyulladásos á 11 a p o 1 o k a t i s , t z e k a 1 k a 1 ma s e k I e h e t n e k 1 η v 11. r o v 1 z s g á .1 a t o k b a n '' u „ xt ν' 'hu* '' ' ee > \ao' , ·,<ν -seo, amely vizsgálat társulhat különösen sikeres kezelési stratégiákkal. Elsősorban különböző, például heoatopoietiküs vagy limfoid sejtek fiziológiájának módosítása érhető ei megfelelő kezelési eljárásokkal, az itt szolgáltatott kompozrolókat alkalmazva. Ezzel a témával foglalkoznak például az alábbi szakkönyvek: Thomson ;szer kész?ő): The Cytokino Haadboofc (zi kiadás) , kiadó; Academio ProsS:, San Pd.ego (IPPf); Métoalf és Mlcola: The homatopoietio Tolony Stimuiafing Paciéra, kiadó; Cambridge Üniversity Press Clrürd í ős Aggatnál és Guttermarm humán Cytofcines, kiadó:
hiaokwéli Pub 011.1),
Azok a megfigyelések, hogy a oltokin Komplex indukálhat ΙΓΜγ szinteket, hasznos betekintést nyújtanak a terápiás lehetőségekbe. Az IFhy termelés különösen fokozott, sejtközvetitetr immunitssz eredményez. Ezzel foglalkoznak például az alábbi szakkönyvek:: Paul; Eundamental .msmohoioyy üi,: kiadás), kiadó: savon ví OM X XX·
X « ·> . <·
X X· V Φ X -XX
X· * <· XXX « * 3x
Press, Eee York
Press, Bee York (iiSB)y es be Íves es Boits ; sser késztók) ; ancyciopedia or isssseej. agy, kiadós Beadom.) c Press ÖYBPb u.l zzztváYő · (irUS) , Így a ceiialáris válaszok fokozása hasuurus olyan esszoldggésbes, hogy növeli a tumoréilenes akii.vitást,· óévé 11. a ve ke ina vei a szilát (átlód a humoraira, mind a cél in zárt a lámtuoiláol} , növeli a vi reze! lenes hatásokat, es an tagéul rá i. aizárolás válás sokai a fejlődés bizonyos ablakaiban. Ezzel a Y hátával (mg 1 a 1 kozzak az: alábbi szak keuyve k.; Rose ez Maekay sszorkosz tök) e The Aotorsrsnne uiseoses (!, kiadás ; , kiadó: Acedenu. c
Press, lan Elege hiává); ás Ray {szerkesztő): Aiicrgy arai Ailergic özseases, kiadó; Biackue.li ócieoce, Maidon, Maestílusét te (lavl), házrészt az antagoniziák alkalmazhatók az Ilyen IPiv növekedés Oiokkoiesára vagy megelőzésére, gzáitái csökkentve a col in j.ár is iblgzás ere jói vagy intenzitását. Az ilyenek alkalmasak leneknek például <uu.c immun szó.tnációkban (például szklerőArs tagitiplőzben vagy pszorrázisban) vagy kpőoikhü gyeiladásós állapotokban (péidázri ronpatoid art réti seben vagy gyulladásos s-elbutsgségöun; , >zzei: a témával foglalkozik például a következő sze kkönyv: oamt e r és munkatáras.; (sze r kos ztok) z iismuneiogr oa i fő s gaz ez , 1:, ás 2, kötet, kiadó: hifiién Broun and ba, A kezdet;.
eredmödyék azi sugall jók, hogy a pák/!!,·· 330 szerepe inkább kAlti kus a krónikus gyűl ladásós körülmények fenntart ásóban< Így o bibAkbiid bökpkggv ishpg v körplmőny baiigid, iiiggtipöppp: ηί|Ρ·,
Ad ilyen terápiás; célokhoz az egonisták vagy antagcnisták komul no ihálpk iéreid gyógyszerekkel, példáéi gyulladás más .módost tői esi. Így al ággniálái gyakran kiitbinglisfők például 1.),-11cet., )11--11: --00:-1., begógáiióage vagy kápptirőpóió ioleiöóeA'kel, :'bu iíádik < ❖ X
».♦* ·» * <· s\ X vákoihá aOjt-vénnek kai ás/vagy víruséi lenes gybgysserekkel, Egy másik megoldás gggti.nf az untágonisrák kombinálhatok hsa shtegonisfákkal, ϊ.η···Ι2 anzagontétákkal, IL-tö-zel. ás/vagy szserordokke1 , A el tökének vinn homológjai goinkén a 1 ka ima zna tok .
így például egy IL-i 2 plk/lL-h/Q névén rendel lenes ezereszszí óval vagy rendellenes jelébeagái társéit betegség vagy rendel. lenesséd lehet valósa ind len célpontja valamely agóniatanak vagy antagonístanek, Az éj eitokin szgrepet játszhat hematoool.etikos sejtek, például timföld sejtek, szabályozásában vagy fejIPdesébeP, amely hatással van ae immuno lógtál, válaszokra, oeidául gyulladásokra ás/vagy autoimmun rendellenességekre, agy másik megoldás éőeriht ez hálással lehet az érrendszert riztoidgl.ára vagy fejlődésre, vagy a neuronáiia jelenségekre, Főshos tehet a gyógyszer beadásénak időrendje az állapot be 1 aortásához vagy fenntartághoz viszonyítva, A eizokln komplex elsősorban kérvetik bizonyos összefüggésekben a sejtek áttolt oibebin szintez tőben, burjánzásban és Így tovább, Az liml2 p40 /r.k~B3e antagoAietái, mént példáéi egy természetben előforduld forma vagy blokkoló antitestek mű t eln variánsét, szelektív ez eróteijer utat szolgáltatnak immunválaszok blokkolására, például, olyan soitnáolékben, mint a gyulladásos vagy autoromon válaszok. Ezzel kapcsolatos például az alábbi azokkönyv; Eamter ás munkatársai fszerkos ztok; : immunoiogtoa 1 Eiaeases, 1, és 2, kötet, kiadd;
fittte, broun and Go,
Az oisbdlgges oéipontok λ gyógyászati ο I ka 1 mázasokhoz magokba n regi alják például a tóus állapotait, manó az asztmát, mind a fibrózlst, bét zennel lekben Isméi vek a I. kaimét: modellek lehetnek ::ZZ:,gSfp/t szkl -Got multiplexhez } , a cukorba;t es a bei gyűl oldásokat . .Elekkel az állapotokkal foglalkoznak az aláhói szakirodalmi hivatkozások; Baross éz munkatá rsai : hol. bed, Today 4, 451-458 (1958; ; Ráuwéis ás munkatársul ; Glm, Ezp, All.ergy, Aug 28, , 3.
szupplápeopuáo 1-5, oidál (199:8} < Eurham: lile. Exp. Ailergy, OPh. 23., 2. s zupolementun, 11-16. oldal (1988 5; Aetntg: zebrát r.
Bee, 42,559-568 (19971; Írétől ser es munkatárséi; Bee, immunoi,
3, 5 3-38 (1993}? Lamknlened és munka társai; Pun. B.p, bead,
801, 796, 203-208 (1996}, rrb es munkatársai: Immunul, deli, űréi. 74·, 205-208 (1990}; és Andersen ás munkatárséi; Trónus
Eherrsácclx Sói, I 5, 224-232 (19943 asztmához:; Go kér és mun ka táras.:.: Eur, Beepir. 03 11, 1218-1281 (19983; ás Bienkoeskl ás munkatársai: Eroo. Sor. Exp, Bioi, bed, 209, 113-140 (1995} tudorinroxishoz; rearsorr és boüevitt; Curr, Top, kb.croro.ol,
bonni. (228, 79-1 148, 753-789 (39987 22 (1999} ; ; Gz3 Tomin é Miller s Karon; és Oh Rés oveeh; Be a . 1nmeno i, x immunoi, 149, 790-
794 (tárgyaIás sa 1 a 846-847 ép 4 55 8 6 0, eldeiakön;:1998)3
Bogai: Bes . rmom 1, 54 9, 8Π -820 (t árnyul .ássál a 850-881, és
9 8 5-860, oida lakot: } (1996}; ni.bi.au ÓZ P un kaié r a a.:.: Ipmu hol.
Today 18, 899-604 (1.5977 ? C .old és púnk atársai: Grlt, Rév.
i mmunői. 17, 507-81 0 3(997); E; esők: Gr It . Rí ro Immunoi. 37, 829-
536 (1997}; és Bee nerc és out: ketárzar 4 655 r. Bev, Imám no1, 17,
59:(8-(5::82 (3,:983:): ál BAR módéi Isiiét: iszklt r ó z 1. s pu 111 p 1 e x h ez) ;
Alitepl és műnké társ dl o :.7 x(: 1.- λ .x Pi ., Endoor inéi x Get ab, 39, 1497-1:652
i 1(59(9:1; 5ap5:ggy;i(i:i: ás műnké tár selt Bicehem. 5h a r ma col., 85, 113 9 -
149 (1298}; és Rabi növitx: piapetes beton, Beim 3.4, 129-351 (1988; ou korba j hoz; és (Beaeh és munkatársai:: Toxicol. hat női , ΐο,ροζχζ
V *
W. Λ
x. ·« Φ
Φ •ό 123-123 {1959}; Braun és munkétársai; du.tr. Opir. Rhenmatol,
11, 54--7 4 ; 13121; Buykvert és munka kassai;: Páströénteroiogy éli,,
93-1532 {1995}, -trober és: munkatársai: Immár.ml.,. Töday lg:, élűt {13951; és Ford és munkatársai: Sémin. Fedi áss, Sarq, g, 155159 {13951 a bél/emésztőrendszer gyulladásos állapotaihoz,
A memória-akt3yá11 sejtek piO/15-335 sLima tálasa feoofipasos változásokat eredményez, amelyek adhéziós molekulákat érintenek, A CDP9L nagy mértekben expresszélődik a ptö/r5-335-oai történő st.i műié lést. követőét, és a ötöd drámai módon csökken, özek a sért;'· zások az Adhéziós molekulák expressz 10 ládán lene töve tehetik a merne;;a sejtek módosítását, hogy belépjenek a primer és sze kender nyi rekosömők. 1/DC sej tóén gazdag területébe például nagy eadoielláiis vonniuk {vékony erek}(hígé endotheliai venuies dirid a révén. A. memóriáséjtek azért is be vannak indítva, hogy érzékenyé váljanak az 15-12 stimujárásra. így e gyere és nagy llh termel.és gyorsan követ 1 az 11-11 indukciót antigénnel, így a piá/lL~53ő felgyorsíthat ogy memória sejtek revén keletkező immunválaszt, növelve, a válasz sebességet, növelve a memória sejtek szamát, vagy mindkettőt, A páó/IL-B?O különböző hatásokkal bit hat, amelyek iajiagesak á memóriáséi tekre, de kisebb zatdn vén vágy nincs hatásuk a termeszeket {haivl sejtekre. Több krónikás gyeiInná sós állapotban; például reumatóid artrizisiben, gyulladásos; bel betegségben, pszoriázisbán, éo Így tovább, vi™ vzant az aktív károsodások 1 ágon ok a 5 Ed dórt- memória sejtektől. így az antagoniaták ha·'ékosynn blokkolhat jak egy ilyen gyulladásos állapot krónikus fázisát.
dnlőnbözö rendelienés állapótokról ismert, és egyes eeittipnΌ iOSOZSZ
sokban horthern folt oiamzéepoi ki is matatták, hogy termődnek IL-12 páO és/vagy IL-nkö mBUZ-t. ást ismertetik például az stábot szákkönyvék; Berfcou ; zzerkoszté) ; The Marok Ma.nual. of oiagnosl.s and Thurepy, kiadó; Merck&Co., Báhuay, Mt Jersey; Téern és munkatársaik Hat ti són és ErincipláS: of Internül. Öedicine, kiadó; MoGrau-ktii, hee York; és heathara.il és munkatér esi. (szerkesztők; ; Gzford Textnook pf Maolezna, kiadó; Oxford
Il d i Ve r s i t y Press, Oxford, Több más orvosi, ál. lapot a a be tag són érinti az aktiválást makrofáeok és monoctták revén, és több más állapot én bar sasig válászképez az itt szolgái tatölt agorö szákkal. vagy antagonistákkal végzett kezelésre. Ezekkel togiakoznat például az alábbi szakkönyvek; Szitás ép Tere (szerkesztők; : Basic and Clzröcai Immunology, mioon; Appiaion és lángé., Eoroalk, Connecticut d. 9 91); és Samzcr és munkatársai (ezer kosz tök) : Immuno top Icai El teaser, kiadó;, kittié, Broun and Co. . Ezek a problémák fogékonyabbak lehetnek a .megelőzésre vágy kezelés re az itt szolgáihaioth kompozíciókét alkalmazva.
Az Ih-12 póó/lL-Bdó eiéokin komplex, antagonisták, antitestek, én Így tovább, tisxtIthatók, majd beadhatók betegeknek, mind altatóknak, mind embereknek. Ezek a reagensek gyógyászati felhasználáshoz kömbináiháfók további aktív vagy inért alkotórészekkel, például hagyományos, gyógyáa tat 1.1 tg elfogadható hordozókkal. vagy nlg.-tokkal, például iztaunogén ed I u vá n sok ka 1, ttziologiailag hatástalan szabi 11zále szerekkel, hordozókkal vágy tartós.:, tó szereikéi egyöbt, Ezek a kombinációk lehetnek siefilfé szerve és dógisfurpákbán alrendé zve, például 1.tori lökéssel ampulla adagokban, vagy startI izéit vizes készttmónyékben tárolva.
'm.ssbíZZ
Φφ X na ’*r
Α találmány céljai Réz óit szerepel az antitestek vagy Rété tragmsntumark elkaimazása, ide ártva az olyan termákat is, amelyet nem komplemen t- to t-f.
éyógyzzer átvizsgálást IL-lz páu/io-Hds-f, fúziós fehérjét vény fragmentumait alkalmazva lehet véghezvinni, hegy azonosítson azokat ay: anyagokat, amelyeknek kőté aktivitása van vágy más ide vekéikozó biológiai hatásai vannak ez 11-12 plö/fl-BAs funkció kra, ide értve a; házáéit alkutér eszek izolálásét is- Az ezt követé biológiai vizsgálatokat lehet azután hasznosítani annak meghat árazáséra, vajon egy telélt ként szereplő anyagnak van-e belső stimuláló aktivitású és ennek megfelelően oiokkcio vagy antagontsta-o annyiban, hogy felokkelja a citokin komplex aktivrtusát, hasonlóképpen egy vegyélet, amely belső siróniáié sktzvitáesal brr, aktiválhatja a jeladó a tat és Így sgonista annyiban, hogy stimulálja a ez tor in komplex aktivitását, A találmány tevábhá megcélozza az 11-12 pán, 13-BdO, vágy a komplex elleni elekkelo an ti testek terápiás alkalmazása:: sntagonzc faként, és a stiáihiáió antitestek terápiás alkalmazásai agónia tekénk, Az a. megközelítés köléhosee alkalmas lehet más 11,-12 oft vagy AL-Adö iájta váziáháOkkal<
A hatékony terápiához szükséges reagens mennyiségek sokféle kniénhozó fényezőtől fagynék, ide értve a beadás módját, a célhelyéi,, a beteg fiziológiai állapotát, és mán beaeott gyógyszere uet. így a kezelést zcaqokat be kelti t Uralni, hogy optimális legyen a biz torra tg és hatékonyság. Az is vitro a fka ima zott adagolások hászhee vezérfonalat nyújthatóak ahhoz a mennyiséghez, amely meg felelő ezen reagensek in sít a bevezetéséhez. A hetakony sárrSAvse
Oázisok állatokon sOrtőnO vizsgálata at adott rendellenessege k kezeléséhez további mag jós ciha tó Inai káéi óját szolgáltót ja a komán adagolásnak. KelOnóózó meqfontolásokut ismertetnek ezzel kapcsolatban az alábbi azekkönyvek: Síimen és munkatársai íszozkosztok; í Goodman and Grízünké: The hhazmecoiogioar Bases óf Ghozopentina, B, kiadás, kiadó: kérgemén Bross ílvvú}; és kom ing ronts á'ha fmeoddt inai koionoec, 17, kiadás, kiadó: Ma ok tablishidg Co., kanton, Pennsylvania ilksk), A beadas módszereiről tárgyalónk itt ág á: továbbiakban is, példán! az orális, intravénás, inklaoszi tonnaΠs sagy mtiamaszkuiázis beadásról, transzőozmáiis diffúziótól és ágyékokról. A gyógyászat 11 cg elfogadható hordozók között találkozók a viz, fizzoiőqzás konyhaaőoldat, portorok óz más anyagok, amelyek ie vannak Írva példátI az alábbi szakkonyvekben: Mezok Inhoz, kiadó: MerokSúo,, takony, heg őezsey. A dözistaftöményföl rendszerint olyárba tó, hogy mennyiségben kisebb Idgyeh, mint 1 mmél ti kononntráció, tipikusan kisebb legyen, mint mintegy ló gmós/i koncentráció, általában kisebb legyen, mint mintegy 100 nmői/i koncentráció, dlőnyö” sen kisebb ingyen, mint mintegy 10 pikomöl. lpmö'l)/i koncentráció, ás legelőnyösebben kisebb legyen, mint 1 femtomól fából)/1 kenőn ni. ráclő, megfelelő hordozóval, A lesse kibocsátású kiszerelések, vagy lassú kihonsáfásó apparátúsbk gyaktan hasznosítást nyernek a folyamatos vagy lassú r.dejú beadáshoz, Ezzel kapcsolatos péIdani bangat kdzelményói hezacce ki U, 1522-laki {1920).
Az 11,-12 tdO, In-öbb ói tok in komplex, fúziós fehérjék, ezek fragmentnmai., továbbá ezek vagy fragmonturnái k elleni nniztestek, agoniátők és ahtegonieták hozvet lenül bevezetnetők a kezelendő z maimba φ- ** ΦΧΧ Φ Λ * Φ * $ φ χ ΦΧΧ φ Φ Φ
ΦΦφΦ Φ XX φ φΧ*
Φ ΦΦ ** >
gazdaszervezetbe, vagy az anyagok: merőt étéi függően ezt kivárássá lehet könjágálni hordozó fehér; ékhez, gél dán1 ovalbuminhoz vágy szérum album!okoz beadásuk előtt, a gyógyászat.·. kistereittok heveseóbor Ók sok hagyományos adagolási kiszerelésben, sár ioáetséges a.z aktív alkotórészi: önmagában is bevezetői, előnyős ezt gyógyászati kiszerelésként megjeleníteni, A kiszerelések tipikusan magukban foglalnak legalább egy aktív alkotórészt, ahogyan az előzőekben meghatároztuk, egy vagy több el fogadnató horoozóva i együtt, Adudén hordozónak gyógyszerészet i lég és fiziológiailag egyaránt elfogadhatónak kell lennie olyan értelemben, hogy osszéférhelóknak kell lenniük, más alkotórészekkel és nem lehetnek; károsak a betegre, A kiszerelések magukban foglaljak az óráidé, toAtéiisj· nazális, helyi vagy na materéi ,id {ezen bélül szubkután, inzr-maszkulér is, intravénás és int yadérmáiis) beadáshoz aika Imas kiszereléseket. A ki szere lések kényéÍmehon szolgáltathatók egységdózis formájában, és elkészirhetdk számos, a gyógyszereszet szakterületén ismert elgAtássai, Ebekkel foglalkoznak például az alábbi szak könyvek: Öi imán és munkatársai {szer koszt oki f Goodman and öilmatés: The Pha rraaeoiog lesi üases of Thezaoenti. cs, g, kiadás, kiadó: Pergamen prést (IPdöf?
Remi nq törés pharmaoeutsoai Óoienoes, 17, kiadás, klódéi Bóck Pdbiiáning CAn , büAhöAf kennsyieania (1.990: ; Akié és munkatársai ;szerkesztők) I Pharmuceut. tea I éosage Poros: karonterel
Áédáöatiens, kiadót bakkét, heo Péfk (1993)t Lióbormán és munkatér sai /fazötlkéAiztÖL;;:;;:: Ipbaymópédf ;|dáö iboagga; Lét Agg; AábÓóhöa kiadd; dokkét, bee York (ISgólg óz rieüetmsn és munkatársai (szerkeezté'k) : Phnrmaceuaigei Dóságé Porra: Óisgerse Systems, kiddé:
741 Abó/S.?;
❖ 'ϊ* < V » Λ « χ> ..«'*.**
Dokkor, hoz lork }199Dj . A találmány szerinti terápia kombinálható vagy társzava alkalmazható máé azérók kai, például más él.tokinakkal, iőe értve ax IL-é-ot vagy h-cök-et, vagy magiéleié a n tag ο n 1 s tál, kai,
A találmány ázelzrátl IL-héO-nak mind a termés; ze tőén előforduló, mind rokombináns formál különösen hasznosuk kész latokban és
Vízé g á la ki. élj á f á s o k b a n, az; c 1 y e k ; képese k á fai z s g á In 1 a n y a g o k u t kötő akti vitásra a fehérjékhez, Számos eljárást fejlesztettek ki az ddZomálizéit Via nyála tokhoz, az elmúlt években égy, hogy 1 etetővé vált anyagok: tízezreitok átvizsgálása rövid időszakon helei, őzzel képcsőiülhat megemlítjük öodor és munkatársai közleményét:; hcienob zel, 707-779 11991} , amely asz közöket rr le kötő aktivifáa vizsgálatára szilárd hordozón szintetizált, megbatározott polimerek sokaságával, A megfelelő 'vizsgálatok kitej reszté··· sét jelentősen meg könnyi thetr az , hogy nagy mennyiségben rendgikezesre áll a tisztított, oldható ih-ii páo/li,-a30 citokin kompién:, ahogyan ez a találmány szolgáltatja,
Továnpr eljárások alkalmazhatok a kritikus gyökök mégha zárózására lé-12 psv/ié-u3ö komplex-receptor kölcsönhatásokban, Öutácu.os elemzés hajtható végre például Somoza és munkatársai gijáráséval: iL Expnl. Ved, 179, Sá9-áSS (1993: azoknak, a speciálsa gyököknek a meghatározására, amelyek kritikusak a kölcsönhatásban es/vagy a jeladásban, A PHD (hőst és Sándor: Proteins 19, 1:9-12 (1993): és u psc (Plng és Dfernberg: krétáin Sor, 3, 2 2 992319 (1990}j szolgált ahhat. jak az a-aeirv (Hőh-szái (Ej vagy tekaróé (Lj mhecdlagog szekunder szerhgzofe előjelzéseit, Az A és D hévizek általában a legfcntcsabbak a receptor köieséntefásban,
4. & ÜM s «♦•♦K «.*.«. » · » *4 »· ahol a D teliz a fontosabb tor ölei, így példásl antagonlsták általában akkor találhatók meg, amikor az artigán őa/vagy a receptor szerkezetileg mag van határokra például te re tor szerkezeti adatokkal, A lehetséges söicsőnhatő analógok átviragáiása most lehetséges nagy mértékben áultpma-t iz ált vizsgálati eljárások kifeji esetéséről, tiszti fost 11,-12 pia zlt·--»30 kompi eret alkalmazva. Elsősorban áj ageoisták és sntagooisták fedezhetők fel az Itt leírt átvizsgálás.;, teohnlkák alka árazáséról, KölOaóseo fontosak azok a vegyülitek, amelyeknél észlelhető, hogy kombinált kötő hatásuk van 11-12 p9 9/Ik-B3é molekulák spektruméhoz, például olyan rogyklefek? amelyek anfegonistaként szolgaihatnak a cirokin kompiez faj-váltómmá i. hoz,.
A gyógyszer átvizsgálás egyik eljárásé eukarlőts vagy prokariota gazdasejtsket hasznosít, amelyek stabilan transzformálva vannak Ik-12 pák/it-Bló-at szorosa tálé rekombinéns 313 melektv Iákkal, Olyan sejtek izoláihekők, amelyek .10---12 pli;/n,k3k-af ezpresszéInak, áfoiáira más molekuláktól. Az ilyen sejtek, élé vagy rögzikdkf lormaban, alkalmazhatók stanöare kötő partner kötési vizsgalatokhoz, őzekhez, kapcsolhatók az alábbi kozIeméhyék; karcai és munkatárséit Sgienoe 333, 243--217 (1089} ; és öniokl és munkát élteái 3 troc. háti. Acad. ŐmI. US.A 87, 7 007-4 011 (11900), amelyek érzékeny eljárásokat Írnak le ceiiulárls ráiaszox kimutatására,.
Egy másik: technika s gyógyszerek átvizsgálására egy olyan meg köz elit esi érint, amely nagy átmenő átvizsgálás.;, kapáéi: fást felzsesit 13-1/ p40/I3-k33-hoz megfelelő kötő afilnlfással. őzzé snyagokhőka ezt részletesen leitja levson a 84/93364 ezámé eófő~ v3,S3S/Sá * $ ρ, ρ., Φ » '!' $ < * ί >\ * * **< * * ·* . .·.·*·*., k ν' χ»>β·* ·> * < ξί· $#£>,' * rw $<· Λ *«ί por sssoadálml be jelentésben, amelyet Ináé. szeptember Is-án tettek közzé, Először nagyssámd különböző kis pepiid vizsgálati anyagot szintet italunk valamely szilárd hordozón., például műanyag tűkön vagy bizonyos más megfelelő felületen, amint ez bodor es munkatársai már idézett. közleményében la van írva (iáéi) ,
Ezután áz összes ónt reagáltak jak s zol utó.. 1 izéit, t .rszfitatiar; vagy szoiobiiizálf, tisztított pfO/ln-Esu-cui, majd mossuk, A következő lépés a körött pát/lL-ülO kimutat ásásai foglalkozik.
A racionális dyogysaéctékvékéá aiépulhát a plö/IE-hiO és más ettebkotok vagy analógok molekulátiá alakjának szerkezeti. tanulmányain is, Áz el rektorok olyan más teher j ék lehetnek, amelyek más f unkezökat. közvetítenek egy kötésre adott válaszban, vagy rés fehérjék lehetnek, amelyek normálisan kölosönhatásban vannak ni0/Ih-Eáö-oal, például valamely receptor, további eszközök lehetnek azon helyek meghatározására, amelyek, kölcsönhatásba lépnek mán speciális fehérjékkel, a fizikai szerkezeti megbetározáe sok, például a rbetgen ke isztallógtafla, vagy kát dimenzzöe NER technikák, Ezek vezér rónaiét nyújtanak arra .nézve, hegy mely aminosav gyökök képeznek molekuláris érintkezést tér öleteket, ahogyan ez modellezhető, például más cltekin-receptor modellek ellen.·, A fehérje szerkezet.;, meghatárocáshoz részié tea leírás tatéi ható például az alábbi szakkönyvben .3 öiundeii ás dohoson: Ecetein f?ryotailography, kiadó; Academio éress. Mos York Π.v?6j .
IP.. Készletek
A találmány oáljai köze tartozik a p4u/ll,-Buö fehérjéknek, iroemeniumaikug.k, pcpricokaok es ezek fúziós termékeinek alkalmazása sokféle di aunoszti ka i. készletben ös eljárásban tcváoör v;iér φ
φ φ a * φ Φ φ >: >· φ φ ν * > * * ν φ> χ X A Φ * ♦ *»< X ·>
φ Χφ Φ> Φ ·< * plO/in-ulO vágy kötő partner jelenlétének kimutatáséra, n készlek tipr kuéán rendel kézik egy re kese tel, teteit tégy meghatározott páO, pfö/lh-sáu vagy Xt-BBö pepiidet tartalmaz, vagy gén szegmenst vagy egy reagenst, amely felismeri egyiket vagy éheiket, például páBlib-BlQ fáéi és £ ragment nmeket vagy anti. resteket.
Egy készlet égy vizsgálatí anyag kétévi, atbinitásáiiák meghárirozáears lk-la pá0/1 t-nlé-hoz tipikusan tartalmaz egy vizsgálati anyagot; egy jelelt anyagos, például agy kérd partnert vagy ánfáisöphob,, Pmai/yhok· á,áAéff:: koké' /aAtttátásá van (öéByáA-AuO:-öözg p40/li,~Bld valamely forrását (természetben, eiőfordoióf vagy rokombi.nánst; z éa valamely eszközt a köteti. anyag el választ, a sansz a szabad jelölt anyádtól, mint példán! egy szilárd fázist s molekula immobil i. válásához. Amikor anyagoké f vizsgálunk át, azok, amelyek megfeleld kötő affinitással bírnak az antigénhez, megfelelő: biológiai vizsgálatokkal értekerhetÓk, ahogyan ezek jói ismertek a szaktoralétén, annak meghatározáséra, vajon ezek agonl.st eként vagy ar 1. ágon ista ként f evékeny lednek a pkO/lL-BzO j eladási ftsa. Az a kény, hogy rekombinéns ib-i.á páő/iL-BdO fúziós fehérjék rendelkezésre állnak, jól definiált standardokat is nyújt az ilyen vizsgalatok kalibrálására.
Egy előnybe készlet például a p40/th-B3e knnoenöráoiójának möghafározánára valamely mintában tipikusan tartalmaz egy jelölt vegye1 oroz, például kötő partnert vagy antitestet, amelynek Ismert kótb affinitása van az antigénhez; egy elfokán forrást ftesméátetbeo eidforoui.ot vagy r.e kombi na n st ?, ás valamely esz keot a kötött: anyag eivói osztfsához a szabad jelölt vegy hl ettél, mint púidé ni. egy szid ázz: fázist a p4v/lf-B30 lomobi 11 zdlázas;oz . vbpytsé botmállaán Ο késélethői tartoznak a reagenseket tartálmátö re kettők, továbbá a megfelelő útmutatások.
Az antikestek, ide értve át antigén kefe fzagmeutumokat is, eme ivek fejzagosak e pa0/ ék-390-ra vagy rrogmenturnazkra, álkálmaeek ö/iagnos zfzkai. f elhasználáshoz pád,· 13,-330, pse/i'é-P30 észvagy f ragment unai.k ebeik szintjei jelend étének. kimé taté sár a, A z i 1 yen öl. a g ne s z t 1 ke 1 vizsgál átok e lkaimé zna znak 11 tát eme kát .· elő sejteket, rögzített sejteket, immun t zeo reszoenezzát, sejtbenyészeteket, testfolyadékokat, továbbá áfintnofelk á sséremben levő ahtigénhez fokon antigének kimutatását, és más hesordókát, ő eiagnosztzke 1 v isséé látok lehetnek homogének {el kaidé.:, fesz lépés nőikül é szabad reagens és ás anfigén-törd partner komplex közötti, vagy heterogének (egy elkülonítész lépéssel), Küiönhöző, kereskedelmi. hátterű vizsgálatok léteznek, például a radioimmunaasey {kié;, enzimmel kötött if®űhszofpeps vizsgálat iőblöA) , enz zm immunas sav (Elé) enzimmel sokszorozo t f immunassay tesőnlka (EMIT), szuszztrétem-jel ölt fluorétzesns l.mmensssay íöLEIA), és hOOpnlökl Ezzel fogl.ü. koznak nőidéül áz al s bő 1 szak könyvek; Vén Vn n aki s és m unka társ a 1; ; be f is, Enz y möl, 3(1,. 1-333 (iöSfÖ; Házion ős kané: Antzbodzes: A Lator át orv donnái., kzaöő: Csü Press, fez York iiönű); és Öoligan és munkatárssá •szerkesztők; : döftpbt: Profoooi s in Immunoi ogy, kiadó; öreene és özi.ey, ded York (1993) ,
Az ánti'>'i.dá..ötipnoo.s azt {.testek nasonlö ai koieazást nyerhetnek ahtlbösöö-k jaioniáföhek diagnoáztözáláántá psO/zö-ölö állóié «ői különböze rendel lenes állépőtök diagnosztika iához vezethet. így például a piö/zö-Alu túl termeié se köiönböző immunológiai, roakezη,ζζνζζζ ők kialakulátát eredményezhet I, amely rendellenes fiziológiai álfapeték tm.eonoszri kajé hoz eisősorba?': bürjáttb sejtes
a.fiapot:ökfeat,: például tatban vagy rangéi tapos aktiválásban vagy dlfta ranaia1ódáéban,
A dlagnosztrkai v 1 sseál.átokhoz szolgáin reagenseket gyakran szolgái tat jak készletekben agy, hogy optimalizálva legye?'; a ykgsgálat érzékenysége. :A jele?·; találmány ess tőben a vizsgálat természetétől, a vizsgálati munkamenettől ép a jeltől függően jelölt vagy j élőiéi i.uu aataAeg:tet: vagy késő partnert, vagy jeleit paö/!l-3:A?-at szolgáltatónk, Bz álsalában egyes reve van pás adalékanyagokkal, például púit epe Bizet, ateko.iizálő anyagokkal, a jel kia la ki. tanához szükséges anyagokkal, péidégl enzimekhez velő saubsztrátörnekka 1, és hasonlókkal. A készlet előnyösen tartalmaz még útmutatókat is a. megtelő! ó alkalmazáshoz, és a tartalom még· Semmisít és éhez alkalmazás után, A készlet tipikusán rekeszekkel ttártélyekknií bz.z az egyes áikaimázando reagensekhez. A reagenseket s készlet oélszetuon száraz, Izoiilezett porként szolgáltatja, ahol á reagensek: yálámély vizéé közeggel állíthatók hel.yre, Így szsdgáitatva a reagensek megfelelő koncentrácrólt a viz egálat végruhajt ágar a,
A gyoeyszer átvizsgálás bő a öreg nősz ti kos vizsga latok előző· ekbpn említett a 1 kot őr őszei kézül sokat a I ka irta zhat unt módos it ás r-éikhi, vagy módos i thai j uk sokfele úton. így példád!, jelölést hajthatunk végié valamely rész kovalens vagy nem. kovalens ösazekupiztőláéáváiv amely rést közvetlenül vágy közvetve valamely kimutathátő leiét szolgáltát, őzen vizsgalatok közül soknál a kötő parthér, vrzsgálati vegyhiet, náé/iá-BÜO, vágy az etekhez szolgélé art.·.testek jelölhetők közvotlenül vagy közvetve, A lehetőségek a közvetlen jelölésre ki kerülhetnek az alábbi csepe.:'tökből : rabló jelölések, például Α^:'1; enzimek, például peroxzdáz vagy alkálikon foszfatáz; es 1 iaoraazccnz· jelölések (amilyonok találtatok például a 5,355,475 iajstropezárná amerikai egyesült áiiamoköoii szabeda is-mban}, amelyek képesek követni a változást a fluoreszcencia 1nteuzifásában, a hullámhossz aiosészáaf vagy a
1iuoreszeenola polarizálódást> A kézvételt jelölésre szolgáló lehetősegek között tálálhatók egy alkotórész bi.ot.ini le zése, amelyet kapoaoiéo kcrot agy korábban említett jelölő csoport hoz tő g z 1 tett évi di n h e z.
Szeres eljárás létázik a kötött péu/n,-ü35 alkui töltésére a szsbed oáő/Tt-Bze-tol, vagy agy másik megoldás szerint a kötött vizoqáisti anyag eikaionizésére a szabad vizsgálat.! anyagtól, A pá 0/11,-na 5 Immobil .1 zálható különböző mátrixokon, amelyet mosás követ, A megfelelő mátrixok közöst kuigihatek möatyag mázza.sok, például Ba.iS.é lemezek, stgrok és gyöngyok. Ezzel foglalkozik például a következő szakkönyv: Óollgan és munka társai. (szer későtök ). í Cntrönt Erötöööls in Immuno légy, 1< kötet, 2, fejezet, kisded Gröoöő és Uiiey, Nea kötk 11353) , Pás alkalmas elit· len lé esi technikák kőzeté. találhatók, a korlátozás szándéka néikUl, a riuoreszoein sntd.tegt mágnesezhető részecske eljárás, amelyet káét le és munkatársai imák le; óim, ebem, 35, 1157-iáéi (1534), és a kettős antitest mánueses részeoake elkülönítés, amely a i,<53 , b73 isjafroim zárná amerikai egyezőit áiiaiukbéii a z a o ad a 1 ö m 0 an van lg 4. r v a ».
éljáségöktői tőhöz j,ék vagy frsomontmaik kapcsolásához kuiönor.smzké·:
·: χ bözö j dőlésekhez részletesen beszámolnak á ezakiiocdcmhan, és itt nem igényelnek részletes tárgyalást. Ezek késül a technikák közéi sok érinti aktívéit karbonélesöpörtök felhasználásér kar··bodiImié vagy aktív estterek alkalmazása réven, hogy peptidkölések alakot Innak ki, tioekerek kialakítását merkaptoosoportok reakciójával malimé iy: aktivált halogénnel, például kié r-ccet Iliéi, vagy aktivált delit, példád Oá leid d alkalma zását á kapAidáéhoz, és hasonlókat, kézi és leheljék szintén nyerbethek telhasználást ezekben az alkalmazásokban,
A találmány egy másik diagnosztikai szempontja szerint a pd/11:-710 szék vendé lábéi nyert eiagonnki.eot id- vagy po 1 inokleo™ tld szekvenciák alkalmazását érinti, Ezek a szekvenciák árlht próbák alkalmazhatóak pb vagy Π,-ΰΙΟ üzenetek szint jelnek kimutatására olyan betegekből vett mintákban, akikről tdteteiezhetc, hogy rendellenes állapotaik vannak, például gyulladásos vagy autoimmun állapinak, kivel a citokin lehet mar kér vagy ko z véts. t ő az aktive iáéhoz, ez alkalmas lehet az akiívéit sejtek számának neuhotái.ozásara, és annak meghatározására, vajon további terápiát igditba:t?tnk-:e be például. megelőző módón, mielőtt a hatások jelentőssé, válnak es előrehaladnak, Akár az P.ds, akár a bős npkigotib szekvenciák el Oá 11). tó se, a szekvenciák jelölése, és a szekvenciák előnyös mérete terjeöernes idrásokban ős tárgyalásokban szerepeinek a szakirodaiómban. Ezzel fcapoooiatoaak például a kővetkező közleményeks hangér-Sater és munkatársai;· Érce, de ti, bead, dől, Al, d Ϊ dllő -ΙΑ;?;; t'aakay: ddenge kit, ktkId'l ilidd és bilokek és munkatársai: Ansi, Eioohcm, 171, Idő
7Í;ddŐ7v:, ze,zie.gz
X φ
A. találmány céljai közt szerepeinek olyan késztetek ke amelyek más moiekei.ék minőségi és mennyiségi expressziéját vizsgáljak, A diagnózis vagy prognózis iégghet a tőbeszoros indikációk kombinációjótól, amelyek mar kerekként aizalmezhatok. így a készletek vizsgálhatók mazkerek kombinációihoz, Eszel kapcsolatos például ki ellet és munkatársai közleménye; krogress in örooth ráckor le, 1, 89-97 (1999), fováPéi készletek alkalmazhatok más
.....
sej t a 1 kés z1et e k értételesére,
X. ρ40/ΧΙνΒ30 receptor izolálássá diétán ize iáitok egy fajlagos Ugandám-receptor lei osonhatés ízgoodanát, élj ázások léteznek a receptor izeIá lésére. Ezzel kapcaoiat.es például fíearing es mun ka társéi közleménye; Ette) 3. 9, léé?-3€79 (1959)< Így példán! meg lehet határozni eszközöket 'Π,-Ε3ϋ citokin jelölésére közrehatás nélkül a kötésre receptorához, tgy például egy affinitás jelölés fuzionálható a iiganoum amino- vagy karhoz rí termináliséhoz, Az ilyen jelölés lehet egy FEAG api top toldat, vagy példázd. lg vagy Fc dómén, Fgy expressz.ios könyvtár átvizsgál he ke titokár faj leges kötésére, például sejkosztáiyozaásol vagy más át vizsga lássa! olyan a 1 populációs Kimutatására, amelyek axpresssáina.k egy ilyen kötő komponensf,. Ezzel foglalkoznak példáéi az aiáobz közlemények: 9ö és munkatársai; Ernő, Fari., .Aced, Eoi, FSA ki), 11207-1).279 (fáiul .·· ás: kin és munkafa fsai: d, immunoi, 152, 192).-29 (ládái , Egy maszk eljárás szerint nsztafásös (nannzng) eljárás alkalmazható. Ezzel foglalkozzk pandául Aeed és Aruffö közleménye: Eres, Hat 1, Atad. ize ÖSA pl> 71952359 (1997) .
A fehérje köreöttkotaai teöhnikák jeioiéssel alkalmazhaték a Vk.aityaé
pH / 11:-330 c 1 tokin kompién kof.6 partneremé k 1relélásáiá < 3a lebot ovo teszi olyan iehérjék izolálását, amelyek, tagiagos kőlo z ónba t asoan bánnák a citbklhhál, például 1igandam-reeeptorszerb módban,
Slőkisérleteket haj tünk végre annak meghatározására, vajon az ismert iL-n vagy C-C5k receptor alkotórészek érintoffok-e a válasz (okjban pé0/lL-B10-ra, hegyőr, valószínű, hogy ezek a fűnkéiorális receptor komplexek osztozhatnak több vagy akár minden alkotórésszé.! egy psO/TL-Elu receptor kompiőznél, vágy egy fajlagos receptor alegységnél, vagy egy hozzáférési receptor alegységnél ,
A találmány több módosítása és változata készíthető el a nélkül, hogy túllépnénk a találmány azőilemét és oltalmi korét, amint ez nyilvánvaló azok számáré, akik a szaktarüiőtéh járatosak. Az itt leirt epeoiális kiviteli termákat és módokat csak példaként nyújt jak, és a találmány cl talmi kórét kizárólag a. Ιον lobiakban balálható igénypontok határozzák meg az ekvivalensek körevei ogyhtt, amelyekre: azok az igénypontok fel jogosítanak,
KXVXTKLX FJSWÁX
X. Általános <3.1 járások
A standard eljárások kózúl főbbet leírunk s későbbiekben, vagy utalónk rajuk a kővetkező szakkönyvokro alapozva: dán lat is ék munkatársai: Mo irónia:: Cioning, A Laboratory bánnál, kiadó:
Cold boring aarbor Laboratory, told apring Aarbor éress, bee York (isse); áambrook ne munkatársai: dolscatar Cioning; A Laboratory béréi 12, kiadási, 1-3. kötet, kiadó: CHC éress, éee York ·iáéul; Aueubol. és munkatársa;.; Bielegy, kradó: Creene iy.bssesá
Publiehiug Associates, Guookiyn, Nem York; Ausehol. s munkahás:ser; Corrent. Protccols le Horeeí.íiar Biology (és sεηρρ!emeata~ tok) , kiadás diiep/Greene^ Nem York (1387) ; Ipáié és munkatársai •szerkesztek; s PCR Pmm9n; A Guide to Hethods and épei inat lene, kiadás kendere, c ürese, Aee York (1880) ; Bonifaci.no ée munkatársai: tarteát krsicce is in Goi! Biology, kiadó: Wiiey, hon York; és áoyle es rsmakatársai: Gall and Ti esne Gni taros tudorator? Protccols, kiadó:: hiley, Nett York, A fehérje tiszti' zásra szolgáló eljár árok közéit találhatok ez olyan elzárások, mint az ammönium-szuitáros kicsapna, őszi opkromai.ográf ia, eLaki rotorézis, cent rifugáién, kristályos! zás és más eljátastéo ÓtYSi kapcsolatban lei orscáeidkat nyújtanak az alábbi zzakkonyvek: kdddbai ós munka társai: korábban idéző ét könyv és ide közi stoppá emene urnák (1887); Beüt seben: „ovidé Zo Protein Parifioutiotö, Hetheds: in fezymoloay:, 187. kötet, és ennek a sorozatna);. további kötetei 11838); Col igán és munkatársai s Cvrrenr Prgtocöit iu Protesn acr ez.ee, ki.adó: John Wiley and kons, 'tor Yorki Óét Yötk {1830, én szopplementűrnek) ; Hatsudaira (szerkesztő; : A uránt.).sál Goráé zo Protein und pepiibe Porit iont Ion tor Hiérödegenöizzg, kiadd: Aosdemio Press, Sah örege, kaiitornia (1333); ás a gyárt ok közleménye.: a fehérje tisztifisz termetek atka Imazásaro)., i1 yen gyártók például a Pzsrmuoia, Piacazaeay. Geo Jersey; vagy a Bio-Ped, Bicnmond, kai if óznia. A komé irt lát rekoítornans teöböikákkel lehetővé teszi a tagiét megfelelő unó mepsebt:, (apitop toldatok), például egy PLAG szekvenciához vagy egy .ékviteiéööfzéY, emöayét fuzionálni lehet például egy preteázssl eitávoiitöatö sztkveacia zévén. őzzel kapcsolatosak például
YYrziiíée ,*·* s' φ
Φ·>
X * az alábbi a zskkóny vek: boákuli; w Barit lentien of Eecombinant kroeoi.ro; sión Gonál Bhelsze ébsorbenk (Eekomoináns fehérjék lantliása fém; kólák abozorbensaeH Sablon (szerkesztés szakkön y vében: Genezis Bágineer 1 ng, Sri nőre le and Hetbeds 12, 27--99, kiadd; Bionom Press, Bee koré (1990jg és Oromé és munkatársai: ólénxpréss: Ebe öiqh Levei Erpression i Protein Bari fioab ion System, kiadd: GOIAsEk, Ιηο, bhntoeortn, Kalifornia (1.992), szömrtógépes aaekeenei«elemzést hajtőnk végre poidaui rendelkezésre éllé számitógépes programok aI kaira zásával, ide ertve a éisooeein bgyetem Senor Ica komputer Group (GCG; , Gadison, Wisoonsin, a MIK keretén bőiéi mökddo hCBI, és a GonBank hGBl ég tGEö programiaib, es a romáéi kezesre álló szeKvenoiák pás forráséit. További elemzési források például a RádkOé program, amelyet az alábbi közlemények ismertetnek; Bazon es mankatérsai: hab a re 37 9, 7 71 (19 9 d 2 ;; boái és ma n k a t é r s a i : nőieset' 2 O,: 1722-1722 21994H Savle és Milner-brb.te; TI BE 20, 27 4-37 2 (1 995:; és
Gronenbetg ás munkatársai: Protein angl.neerl.ng 4, 777-7 77 (19917, és a DBG program., amelyet ez alábbi közlemény ismertet: Kiég dg Stornbern: Protein Del, .5, 2295-2219 (19927, Ezzel a téma kátééi énglaikeznak az alábbi, szakkényvek far ni ikrns ég :nmkatár sál faretkestták}r Proterme keeearoh: bee Ptonbietö in f’gnotional benoml.es, kiadó; 5oringer-Per lég, boa York (1997)7 Salzburg ás munkatársai (szerkosztdk;: bompotntisnal Géfhöba; in Molsöeiée Báolody, kiadó: Blseyier, Yen York (199977 és Elmen és munkatársai (azérkosötök) : bonomé énalysie;: K táboratory Mannái., klaoó: Gáld Pering serkor Press, beid Soring Per búr, be a
Ifiké 2Ι1Ι74;,:
7t.;myyst :* φ Φ φ· > X X Φ X ·' *
X V * V *
X ν Φ X X > * X * *
standard immunológiaΐ technikákat i® uk le például a követke···
zó szak ki Inyv ok: Hartranóezg én munkőtára a! ló z erkesztok; : de 1. z? s
nandbaok oz Seper iméntel Imnunoisgy, 1-2:,. kötetetek. kiadó;
El no boci! .1 1 les erűre Π905·; Col. igán; partunk Erotozn zls in
immun odor Ó; kiadó: dziey/Err ess, bee hoz k (121 ki és kován bi nap'
r a kosz k: . égé szitásuk); és he ehsas in Snz /morog /, 70? 55; 74; 34;
52; áll; I 05 :·/ 12; 1.21; 102? 120? 112; és 1,53 . kéketek, A tó tokin
:.n. z ege i a; ·; o k k a .1 f oo 1 a 1 k a z na 1 ... példázz! ? ;z a 1 áh óz szaki .ön y vek:
Thamson lé-óé rumié; The Cyt.oka.ue kandi •ook (2, kiadás;}. kiadó.:
.kendémre kr ess, han Elege (1202} ; b utca ti és Nioci a: The
Hematops. .. et i a Obiboy Siló. .matznq óact .ο m, kiadó: C a m br1dge
há l Per eli • y Éress (12951 ; és Aggatsz.'. és Eutkerman: Humán
Ey tokiéin E- k iádé; Eiackseil bob ti 021! ,
x Ή · jól lem ~ A: S: e. a űzte Sé <>· A ·'>· A A λ’ A V lu-'o.; e. a< x k a szaéeerai öten, ezek Hamagú k Ά Ά:>-$\X ΧηΜ v x.. aau foglal ' X$ SX X: EH jék az
angiogón én ang rcsztat ?.kua aktiéitásoka f óuim trszovetaznsn vagy
mán szbv a bet .ben, ilyen akti vázas példázó , az a ztor iáiis t ' .«· \XaÍ >
búr óószlé; .?: 2 ioysma és munka f a -; E: 1 . 5 '2 is 100-1055 m 325;, a
morze cl. Pa a uh ez ló a vaszka iá; .d.s api. téliem bős? E cEvcy és mi u? ka tar-
na?.: 1. Ezp ,. bed, 105, 2 02 0 “2007 (1527 A és ágy tovább , kazal
kapcsosa· i-Póé k például a két atkazó közié menyek : ÁPÓ (és®5: (hakiité
Óh2, 201 -20 2 (12051; Eekkte? és Eozócn: Am, J, hát hol. .12 9 f 052··
295 (122 Sió hhybszg és műnk átáznál: Atb áronéi áros is .20, 905-200
1(22.201/( Viza·. SS 0 jé Is urnái ne ro Csll 30 te kot Írnák la r 525--357 (15 neazáiiz sej lóh) , toluló giel aktit? A ásókra
dóiddal a következő SZÓ zkényvek; n zuéerE apó (szeri rnóhAol;;
Eearosoi tüze Arotoooie, 1(1 . modulok. útadó: Ej.aevzez (1935};
Vexdsíuss
Α·Χ·
Hotbobs in Haurosc1ences, kiadó; Académic Ere na.; ás Maurométbods, kiadd; Humana Press;, intons, Nem unrsey. A fejlődési rends kérek mód s zártanával rogial. koznak például az alábbi szakkdny'Wfei Meisami (szarkaszté) ; hanébook of komán Growth and heve). opmenta i Pisi agy, kiadó: CHC Press, és Ghnspeeis (szerkoszté) ; «oi.acuiar Teehnignes and Approachos in De veiopmental. 3 1 cd p a y, k i adó; Int srácon c a .
iACP elemzéseket írnak, le a. kovát koma zzak könyvek: MaIsméd és .munkatársul.: Pice óytemetry and Porting, kiadd: diioy-Liss, Inc, dód york, bee York tldéö) .; ékaplrc: trati.es.). Fioo Gyromot.ry, kim adó; ki se, Hon York, boa York (IPái); és Hobinaon és munkatársai: .Handbeefc df Pice uylonarry Aezhcds, klódé; Wlley-éklaa, Non
York, Horn York ti Pb 3 j ,
II, Humán p4G és/vagy 1L-A30 klónozása
Az 11:-1 z pác szak vese lak randa), ke zésre a rínak különböze szekvencia adatbázisokból, amint azt az eidzdekbon lei irtuk. Az röpte ? gén szekvenciáját az i. Táblázat szolgáltatja.. A szekvencia egy genomikus humán a re kvarc iából. származik.
bkek a szekvenciák ). etetővé: teszik kCP primerek vagy próbák oldal Irtását, hogy mégha ta.ro ztok a gének oelluláris eloszláséi. A szokyenolák lététévé bőseik olyan genomikns DGS izolálását, amely az üzenek eket; kódolja,
A próbát vagy a Pák primo tokot alksi.mazva kaionhozd a tövetekét vagy sejssipusotak vizsgálunk át, hegy meghatározzuk a ceiiuiar.ia élcsziásb, A kök termékeket például egy TA klónozé káozlét (Inait regen) sikelnesásával klóhbtTuk, A letrgjévé cPdÖ pl az mi ép kot s zok vond aoie-nzé ónak vetjük alá. mindkét vb gr dl egy arcai Ads
átffomate szekvenclaeiemző berendezésben lApplied Bo.osyst ems;,
ΪΣΙ. p<0 és XL-B38 oellu.lá.r.is3 .Bixésziégdk a vonat totó géneket kébetó ebbe-re fajlagos mogf eleid próbát vagy prímeteket. A prepa általában ;j ejti ve vad pél páni vél télien szeré beindítással {priming.? ,· Mindkét alegység kpordiháit expressziéja a legfontosabb, ahol s pád/IL-Blá komplex a z érdekes.,
XV. A p4Ö/XXs~B3Ö tePerje tisztítása dgk át. fér sózott sej tvonalat vizsgálnak olyanra, amely a ölte klet vágy a komplexei magas szinten exprésszál ja a föbpi sejthez yláxohyifvé, Bgy másik megoldás szesznt keszíthelónk komim.néni ős re kombi né ns kensz rakni és., Kolosbözö se g ttanalakat vizsgálónk át és szelektálunk kedvezd tniagddnságairá á kezelásoen . A megfeleld alegységek és kombi taxád egyedi .izolálása ezáráé Plzonyon dvmér formákat eredménvéznát, A természetes 11,-Buö iz.dlálhntp természetes fér rá se kdei, vagy expressz lévai valamely transzformált sejtből megfeleld expressz lés vektort alkalmazva. Adenovirns konst sokai Ok is etika ima ztatok e fetmeiásbez/expreszazá léshez ·.,
Az expresszált rdegységek vagy komplex tisztítása Standard munkaménéiokkal, .érhető el. Vágy kombinálható megtervezett ePáxöZOkkel á hatékony tisztításhoz nagy hatékőnysággai Sejt iizstomokbdi megy telni ászokbólA pád fúziója lű-BBö-höé, megfelelő kapcsolóval vagy a jrérkai, eredményezhet nagy hs f á konya ágé el. járásokat a lei dolga zás bot vagy fisz ti réshez, kLAG tégy Pisi. szegmensek akaimazbatók az ilyet tiszt Írási mogeldásokhoz, Egy másik megoldás szerint affinitás xromatográfál el kaimé zhatunk faj lase.asíusv
JP
ΧνίΨ « í«
xv rumi Leptek kei. , amint a későbbiekben leírjuk,
A fehérje sióéi..Tiihat© E, otdi sejtekben, rovnrsejfezben, vagy emlős, expressz rés rendszörpkfoen, ahogyan szükséges,
V, p40/lLB30“ra fajlagos antitestek előállítása
Színset ...kés pepfidek vagy Lasztitokt pepfidek adhatók egy immun rendszerhez, hogy monokiená1 is vagy poiiklónál in antitestek alakuljanak ki. Ezzel, kapcsolatban tájékoztatást adnak a ki;vetkező szakkönyvek: Col igán: Currehf rrotocois in Immunoiogy, kiadó: Piley/Gresne 11991)? és Marion és Lene: Antibődles: A babona tory Manüal, kiadó; Coló: boring bar bot trens (iák 2} > Imműbe tele kólóé vagy kimét itesen el. járások ai ka imádba tok araiak biztosítására., hogy a létrejövő antítestök fajlagosak legyének a poltpepfidek komplexe által nyújtott antigén determinánsokra, és különbözzenek azoktól, amelyeket magukkal az egyedi alkotórészekkel nyújtanak, KúszitneLÓk poiiklenái.in szérumok vágy ni.br idomúk. Megfelelő szituációkban a kötő reagens vagy jelölve van, ahogyan az eidxőekoen leírtuk, például fiuorsozoeuozávai vagy másképpen, vagy immobiiizéiva van valamely szusztrátómra úszfstásos eljárásokhoz. immunszelekciös, immuhkimeritésen és rokon technikák áimak rendöikézesré szelektív reagensek öléálHiénára, ahogyan szükséges, például a komplexhez a kát alegység kdééff<
VI. IA-12 pH es IL-B3Ü kö&ős csapadekok égét Ah-12 plO-fg: fúziós konstrukciót készítünk égy exprennzios vektorban. Az lg dómén kötődik az A fehérjéhez, és kieéspbatja ezt a poiipeptidef, Egy IL-nlö E-teidat tepítop egy ALAP motívummal toldat hat. az d-f ormi náiisnái) köbét rukciot kémmé:
φ. S. φ < sV * X szitunk el, amely polipeptid immun-ki csapda tó az G2 antitesttel. Az expresszrős konstrukciókat átfprtőskUk x§ó T sejtekbe, át Ibis pie-in könetrukbiévai önmag kPa a, az iő-BŐh E-tpIdat kenetruktóéval önmagéban, vagy mindkettővel együtt, A sejteket ''ót met loninne j. jelöljék, Az in-12 pfh kenetre ke lóval önmagában oldható fehérje nem mutéthaté ki a feiéiUszébun az A fehérjét alkar itatva. hasosiékoppén a hLAG-lL-biC kantttokéióval nem mntatka tó ki elő Iraté fenére: a a aejt fai hlúszóban az M2 antitest atka imatásóvai > A két expressz lse konstrukció egyUtt-a t fertőzésével azonban & sejt felni úszó termel egy oldható komorexet, amely kicsapható vagy az A lekötje reagenssor, vagy az Mz antitesttel, A komplex vAGh-eiamzáee feltárja, hogy át A teherje által kicsapott komplex a két vént polipeptlének megféleié po'i ipept időknél készhit, vagyis lh-12 páO-ig fúziós poiipepzléből és a FLAG-lL-biv polrpepzrdpöl„ Bnnek megró leiben az M2 antitesttel. kicsapott komplex a hhAG-lh-biö po'i ipept idbor és óz lh-12 p40 lg ráérős fehéréókból van kialakítva, hasonló kísérhetek agy humán ii-12 pác eprese trés konstrukcióval és vny komán FnAG-IL-káO kons 1. r ukor.öva 1 á várt eredményeket nyójojak., Az : t a hhAG-lh-Bac konsk aukcióval nem eramenyoz jelentős oldható fehér jéi, Manókét expresszi és vektor együtt-átfertőzése főemlős sejtekbe egy komplex hatékony szekréciót él eredményezi, amely tmman-kinsapháéó az M2 antitesttel. A iéfre'iövő komplex FáGU-eiertzése igazolja, hogy a kompién a hi,AGrB'-nőö pol r.pept. töbtó es az IL-12 pás por. ipept időói épül fél, 'VlXx Áeeisptnr aaonositAa
Ax 11,-12 rocaptet az 11,-12 receptor βΐ ceosöctr és )i2 alegységekből enni fel., Egy plú ϊϊ,-330 (ót ide konstrukció ki;fedik a βΐ receptor scl a g y a é g e t e kp r e s h z é 1 c a ég t e k n ez·.
Az IL-12 plú elegységek homedimerje képes blokkolni az 11-12 kétesét az egér βΐ. alegységhez, de nem képes blokkolni. az 13-12 kötését a βζ alegységhez, A p4Ö alegység a pke/I3-A3Q koPplek egy aikertrésze, Így ezt Vizsgáljuk, zajon az 11-12 receptor βΐ alegység lehet -e alkotórésze a receptornak a pléz 11-3lő illái és köhálfökPichóz, Az antitestek sz 13-12 receptor 01 alegységre blokkolják a (trióé konstrukció kötését ázokbOz a sejtekhez, amelyek a receptor βΐ alegységet oxprosszáiiák> A páli/grö kompi.es elleni antitestek, amelyek főleg a pác alegységet ismerik fel, képesek, blokkolni a p40/Ik-bizO kempoti.eió hatását, ás ez azt segall ja, hogy a piő alkotórész fontos a receptor kölesónbatásóan., özek a, megfigyelések azt sugallják, hogy a |ll receptor alegység kötött; k a ptŐ/ll-Brő fúziós konstrukcióhoz·, Hasonló kísérletek, amelyek a közös gplÓS alegység érintettségét, vizsgálják a zokon receptorok között elosztva, az sugallják, hogy a gpi.oé nem relevéna alegysége a p4ö/ii-BAó-hoz szolgáló receptornak,
Mrután azonosítottak a receptor egyik alegységét, az exprcseszi ős klónozás! erőfesz!teret holnénihátiak. Az ezt az agy alegységet e.xpresszáló, óc kötést nem mutató: sejteket alkalmazzak egy tövéből alegység expressziós kiónozásahoz, Más βζ receptor alegység homológokat is átvizsgálunk. Egy másik megoldás szerint megtol, ele sej bekből veié könyvtárakat alkalmazhatunk standard expressziős klónozó eljárásokban,
Vili . Biológiai funkciók szélességének eri.ékalézo psO/il,'B3é komplex biológiai aktivitásait vizsgáljuk például ::yt.:pa,'St ’ϊί a azomv-eeii- és szerkezeti nomolégiire alapozva iL-Blu ás ÍE~é és d-CAP kézótf, Elészöm székár g vizsga iá töket nézzék át, nmeivé k ih-é vagy kőtök kiciógiái okéivitézeket mutattak, vizsga la~ teker bájtunk vénre vény n oekersbiááés komplexen, vagy a féziöe kenőtrokokón, A fúziós konstrukció egy konstrukc1ókéi áll egy Π,- 12 pfó ez ionéi szekvenciával egy M- terminális FhAG epitophoz kötve,, ez az érett ih-Iz piu stekvanoiáf-oz fuzionálva, ez egy megfele ló hosszúságú ser/giy kapcsoló ílinkéig szekvenciához fuzionáiva, és ez az rn-Bzú érett szekvencia iához forróséivá. Ez a konstrukció, amely mindkettét gól expresszi.;, ja, ktvilasckédik, és ab epi.top tcidat lehetővé teszi mind h tisztítást, mind a inkái izéi Art, th.nd az egér, mind a humán szokvenoin formákat kialakítjuk, Giné az eikulonieett pciipeptidek, mind a fúziós farérjék adcsevú.rus expresszién kenetrukeiéit az lőtér: rendel késésre bocsát jak.
h célsejt típusok magukban foglalják a 1 tetőid, mieioid, árboc, ore-B, pre-T és ibbrohlászt-snóoteiiáiis sejttípusokat, Így például mekrofag/monooita sejteket értékelhetünk sejtfelniétg markor változásokra, polcául HEG 11, osztály, B'h CDié és tokon családok esetében; citökin és kamekin ferméiéera; és antigén ben ;mftkeéBár tkápAbikáergu· (bhée|-sej tehet;·,. «ind; óéi bhéöhg- xy|éykat5í. mind memória GiGzEP;i''K t-sejtehet, vizsgálhatunk például növekedési és ahé ivóié merkerekre és ebf ektét funkciókra, púidiói citokin áe kemekin termelésre. Ilibe toxikus CE4;·, ebéé és ka sojteker értékeltetünk hatásaikra a kialakulásra és működésre, vizsgáihetjak s. hatásokat az antitest termelésre, példáéi lépés hó,:·; §-sejteken,· A dénár éhen sej tokét értékelhet jűk a kiAidhuga,ssorss ·<
Iáéra? érettségre és működésre? ide értve a faktor termelést o. époplozis vizsgálatok szírién fejlesztés szeri altnak.
Bosszú Idegi saodtvelö tenyészeteket vizsgálunk ét s halasokra strórta sejtek módosítására és őssejt képződésre és differenoi.élódásra (Dezter tenyészetek) , a stroméi is sejtek és B-sejt proysnibor kialakulás és dlfiezencxáiodás módos Írására (Whitlepk'-éille tenyészetek}? és a primitív ele leid és 8 izet ózó populációk szabályozása petenoisijósak értékelésére.
A. Bahasok & sspépA fenpjéj&aámáma k pofásokat kölgnbdzö sejttípusok burjánzására olt okid különbőzé koncértrárióivá 1 értékeljük. Dózis-vélasz elemzést, hajtunk végié kptidldéiva rokon eilpklnpkkaly például. IL-k-fal., G-CSF-fei ás Így tovább, Egy sejtérzékeid (eltoszenzor) berendezést alkalmazhatunk? amely kimutat ja a se j tmetaboii zrtusf és növekedést jdbiepnlar betizes, Sunnyveie, Ka irtom iái*
A humán páíoiE-Stv fúziós fehérje fokozza az anti-Cbl-mai stimulált? vagy mind anf1--.11-mai? mind anfi-GPsu-tal stimulált humán Búé biasztok burjánzását, Az: anti-CD3 stimulálós eeseenölálisnaz tűnik, á humán páh/kh-Blü fúziós fehérje szintén fokozza ad: aki Ívéit Thi és Thz sejt ki óné k: burjánzását? ne a nyugvó Tok vagy lék sejt kionok burjánzásét nem.
Eger vagy humán fóriga fehérje egyeráüt működik egér télsejteken. k fúziós fehérje támogatja CDi Hlbá áBsbcwCDó2 io7'ÍD<bC: sejtek imemórla/aktivélt Tusejtek; burjánzását? amikor anf 1-CDo-mai stimulálj ok, A szimulálás túr rés fehérje tévén nem fokozódik az áUti-dDzB-enl történé. együkt-stimula lássai, Ez nagy mértékrefügg ez It-z jeleni éhétől? Ez azt sugall ja, hogy a pjÖ/lL-k/O ákiáZdü:
A <· < X > ti fontok tényező lehet nej tét peptilelőjének kitérj osztáséhoz memória fenotipussai, és/vegy immunológiai memória kiélek jtánaban. és fenntartásában, ez a eltokrn, égy tűnik, «zeiék.Pivon támogatja a Thi fonbtipusá aktíváit memória nej tékát, például. az olyan sejteket, amelyek IFhy ·····£ termeinek, de nem termelnek IL-4-er vagy ió-s- bt..
B, Betások az dss T sejtek <itéfezumrba0.odéaára
Humán köldökzsinór tej keket gyűjtünk én bel CDHT nej te két izolélgnkx Ezeket tenyésztjük púiéul 2 héten át anti-CDÓ ék 1L-.2 j elenlétében és Cu32-f, CDSB-at én Cböö-af expresszi ló besugárzott :f fór obiakét okkal, ezáltal aktiválva, én búr játsoz tatra a 1sejtetet. h T-sojf tenyészetét értékeljut különböze olt elánok hatásai szerint a bűz jár; iáéra vagy ds£ferenciálátásra> Egyedi sejteket értékelünk gitokin termelésre MáCe elemzőn segítségévéi, A páO/iL-d:>3C fúziós fehérjé elősegíti ez Tfdy termeik én fim 3-et nem terméig T-sejfet burjánzását és dif fereneieiódásef, és ez agy olyan estelin expresszién profil, amely a Thi sejtekre jellemző,
C. Bétasok a sej tfél nlati
Monoéivá tat tisstitnak negatív szólekoréval normális, egészséges donorók perifériális vét mononukieár r s sej tóéiból.. eOviden ismer tetve 3,1Cd fiséii-kótbtt mononukleóna sejtet inkufeáinnk jégen mononnklearis snbiweték Koktéljával {óecton-Of nkdason, Motettáin viee, Kalifornia; , amely például a kóvekezoket. tarral mázra: 200 pl «002(Len-bA}, Tóul oCD3(Len-3}, 100 pl «0.06(Lenbaj , 10Ú pl «CDiSó Lsu-12), Ifié pl «0020 iLeu-lóf, lob pl mODbé -Leu-lg; , 3.00 «£ «oOóidléM ó?; bmsnpoteoh, Bestbzook, sy. altom
Maisé), és égy sutz--gixkotorin antztont (iOE'?ME, AGGÉ, kookviiia. Marylandi Az antitest tél kötött sajtokat mossuk, ödjö inkubátjuk mágnesen gyöngyökkel önnzekapcsoit juh unti~eger luG-vei {oynai, Oslo, hétvégid) zu; 1 gyöngy; sajt aránnyal. Az antitesthez kötött setfekof elkülönítgök a monooitákföi egy mágneses mégo a 1ksImazásával , Ezt követően humán ppnööitákát -enyésztünk Issei-félé tápközege?'; jöemini Bieprodootn, Gaisbanan, Kelz™ forma;, amely testalmaz 11 höéán AB szőrűmet, li-üzö, llmo, G~ CSE vagy kompiaáelölk jelenletÓban vagy távoliéteben.
A sej tieid lezz molekulák expresszlójának elomzését végrohajthatjuk köáeetléh immnrd luoreszoonoiávai, így például 2.zíh tisztított búmén monooztát zekebálunk 20 percen át jégen foszfáttal out férőit fiziológiás konyhasöolöet bán (EBE) , amely 11 homár; széru?tof in far te ima z, A sajtokat üledékbe: visszük zOöxg-vel. A sejteket újra szuszpeAdá! juk 2ö ml PB-ben vagy EITo-· jelölt monokIrmáiis esti testekben. További 20 perces, jégen végzett inkánál ás után a sej tetet 11 humán somrumot la fertolmaáö Esőben mossuk, ezt kővaki kát mosás vsak EBS-bon. A sej; teke?; 11 vers formaldehidet tarts! mázé EBE-be?) rögzítjük, és elemezzük
BAGBoan áramiáses mfoméfezsn (Becton-Dzeki oson, Imolán) View,
Esi z forsza} , kémiaként megemlít jak az alábbi alkalmazható zsono ki őrséi is antitesteket: CB! 1b : suti-maci ) , Col le ja gozaO/ká) , CDiá fLéu-mO) , CBáá jheu 34) , CC3ö jahtl EBI/El), BEA-ÖR (L243 a
Beoton-báckinssnrái) , én GBak (EGE 1; Pharmingon), Cöt1(32,2; Ma derek;, G D 4 0 lmAb S 2; ööh a r 1 un- El o ug h >· f' f ah o ín ok A zúg) ,
B. Hkskésők a« emberi selőek általi exfcokin termelésre humán monoeifakat isuláiudk, ahogyan itt léirjnk, és Essélzcosezzn •X φ fáié ráokOzegen dlemini nieprodnet: s, Mihnzas, Kalifornia; tenyészt luk, amely 11 hamar AB™t is tartalmaz, lt-320 (Bugalééit oedzín enpresszáit anyag 1/102 arányi; ihigitáag} távolléteken vagy jelenlétében, Ezen krvúl monoéit a kai. ez emulálunk EtS-noi te,moll. 0227;Bt, Dl. ion) 7L-3u tévő 2 lé céhen vagy jelenlétében, ér a uihokiook (IB-lip, ih-é, EKEo, BE-CBE és Ib-löj kontárt rétié fát a se j tton. y ászét le lel úszóban EL12s-val meghatározzuk, á eitoklnok iniraeizopiszmás feszeséhez monrmn.tékat tenyésztbnk O milllé/mii issei-fele táptezenben 1B-B10 és LES (E<otlz 0127 ;BH oifoo;, továbbá 20 mg/mi Brefeldin g ;Ep.ioenzre Isohnologies, Hasison, Bisconain} távol1étében vagy jelenlétében 12 érán át, A sejteket EB2-ben mossuk és In kubai, juk 22 formaidé™ hid/PBB oldatban 20 percen ah szobahdmérsékieter, Kap advatóén a sej tokot mossuk, Íjra szeszpenéáljók permeafoi1 reálé pof tőrben (0,02 soaponln Migma) EBé/BSA (0, a im/orréban ( 2 mmdi /1 'j j majd 20 pezóig Infcubáiank sz.ebahémersékieten, A sejteket (2,111 gent™ rifugá.1 juk és újra az vszpundá 2 juk 22 mi közvetlenéi kenjugait unt ikokir monokiónál 1z ant itestokenu, amelyek lg 12 aranyban hígítva tonnák permeabiltzálo pnfferben, 22 pergőn át szórend™ mérsékleten, A követkézé antitesteket alkalmazhat jel:; IL-lo-EE dA-APil; IL-B-EB (MQz-liAn:; IhEn-EE (MAblljg Gij-CBE-kú Ígyb2-2XC2.1}:, és in™ 12 EB didi, 1,14? rharm.:m:gen, Ben llrogo, Be™ Ifforriei » Azt követéon a sejteket kekszet mossak porosáéi 12zaib pufteroen, ét: egyszer mgasspk EBn/2SA/áz.iddaí, majd elemezzük ®βρύο;: ,ΙαααΙlébe: : ej. fPmépéty pl 1 Agebppmpteblggy g,, Agy r tgl: zz 'llgy ,<
(helyA o r pop- / ,
A humán. EBA blatzfpk iBdu~t termeiPék arra válaszként, hogy
VtzkA/sg ér intkezésbe kerülnek a hűmén pá0/15-330 fűziés kon.s t r okoz óva i , A határok szinergefikossk il,-2-vei, A fáz!és termékek fokozzák az IFbf terme lést aktivált, de nem nyugvó 3-sejtekkel, nyögve Tél eegt klánokkal, vt:'. :yagvó The sejt klánokkal.
.B. HatAeoA a hta»» vé,e mosson trkleá ed, s eejtek /FáélCJ fctwján*&«áxa
Télyes PödC-t izolálónk normális, egészséges donorok „boffy ebét*-jóból cent ti fogé lássa! Fi cbll-hipákon ; Fioöll-hypagob) at, amint ezt Porom és munkatársai korábbon leírták., éábO-f tenyésztünk 2öö gi issei-iére tóokézegben ÍGemrni Bioprodoczs, Calábesas, kai i formaamely 1% hómé·; AB szérómét is tartalmaz, ét öreges· lemezeken (Falóén, Beoten-özekinson, dm Jersey; IL330 távollétében vagy jelenlétében, A sejteket a tógközegben
egyedül ve gy 33 30 ég ys ég/ mi. 1 .h-2-vei. (bsb oyst eba 3 komb:tá1va mdij adunk hozzá a te-
nyeaztgoy iza erén at,, an-1 rmrorat pl, z te-
nyésvtéo a fölei > é é rája sori a, ea meghatá rozsok a 3H-timidin be-
épéi ősét f oiyadékszcanz i. I iáoióa szám 1 á 1ássa 1,
A natív, tokométnáns és fúziós fehérjódét megvizsgáljók ágon ista és antagonmza aktivitásra több biológiai vizsgáló rendszerben, példáéi i-sejféked, B-séjteken, NK-n, makróiágokon, dendrites sej teken, tématopóiétitus progenrtorekon es Így tovább, Az 15-6 és a G-BSP szerkezeti kapóséinta miatt az ezekte az aktivitásokra vonatkozó vizsgálat okát elemezni kell ,
A páO/IL·· A3é-at érteké ij ük sgöoiséé és antágonista aktivitásra Olyan átfertozott sajtokon, amelyek ah-ó vagy G-G3F reoepterf és kőéttollókét expresszi inak. érzel ksbdáOlstoeák például a kosár koré közlemények:: Ho és munkatársai: érne, ható., Aoed, éri, :Ía,SSkZBS
83Α 99, 112 59---11291 (19:92); no és hőnkábázsel: Hd . kell, bibi, lé, 3043-5913 {8,995}; ás 15.9 és mos ka Adud: é, Immunoi , 1.5.2,
1821-1924 (1994}
s. p48/Ib-928-oz értékeljük hatására a makrode/deodrltea sejt ákd válásban: és aad sás PemufetásI vl z; agarat okban és a T-sejt eitbklo termelésben és oaodooo válaszként az antigén- vagy
e i I cg e a a a x mól na re * <>· <·' At 1. s.y témakörrel zogiaikoznax pddánl. a
kévé t koz 5 ΙΟΑίΟΟΟΑ mák; do ásni baleíyt ás munkatáresi; 7. Exp,
ken. 174 , 1289-122 8 5:21:1119 de Waai kőioryt és Iminké tár séd.? J,
Exp, bor a 194, 91 :5-8:24: Ili; 11}, Fi ez ónéi η o ás sin a ka z á z s á 1; A
ivtannoi., 1,49, 5511 (-:25:22 319:· 91} ; dorontl.no ás munkatársai j ék
időinél a 145, 2449- -34:51 tiggr ?) t és Grnnx és munkatársad ék 5xp<
Főé»: 134 , 19-29 (19 «:} , - cS γ- r ίά V aő a t ; : 13 >'<;>.? AY'kbnk dA'4 p? W bú d ;:a ά Q
is, á. v) 1 zsgálátok például a AAd. >··> -·>>··$?' : Ά ·»: ·: \·'>Ά *' ·>.·.·.···'·. χ>·>'·$ ·:·.·: S.-S: ·.·<:·:'-φ. >··' ·» ·..·. következe közleményeken alapulhat-
baki hét t és menzát .ázzál: AA 1 urnát. Immunoi. 4, 583-559 (19924 ;
és 9 oboa zz és hőn kg .társai ; 3, kuvdA.o 15, 35-181 :(19911,
5 E- béllé éld vak' eéési ás t Aderendáióoád hatásokét elemezd.
léket pé Idául ét .·; alábbi közt Lemenvekoon leírt eljárási rend sxe-
éénél bé francé és ; tunha társai .·; ét nap. bed, LA;, AdA (1:992} ;
lsebet és munkásé rsál Erdő, buti, Acad. Sd. 85A 8 9, 1898-1893
3)1:9:921 V: Ida ér kenőt 5k az igén és lgA2 kaposcdásr lakkor vízsgáia-
,y •Λ'φίλ- Λ Genetikai la ag megváltó zott állatok létrehozása és elesaxésa
Αν: szgenikos e -serekei sl ékítünk ki a csudád el járásokkal, Az
ilyen állatok hasznosak a gének kOI-ezprésszálásn ka kása inak meghatátázására SpOoiáiis ssóvátokbaa vagy teljesen végig az ιζ,ιι-νζζ .χ ν V XX X X 4
Λ ♦ « X > *
X Χ· \·*ύ XXX %' X χ ·χ χ .«· χ· ,·χ ♦ *· *.·χ.·χ· * * . *
X XX XX X *·χ egész ozganizsvtson. Ezek érdekes betekinthet nyújthatnak az di' lat vagy adott szövetek fejlődésébe különböző stádiumokban, Ezen ki ebi értékelhető a hatás különböző válaszokra a biológia stresszre. Ezzel kapcsolatos példa?.;! m következő szakkőnyv:
topán és munkatársaid dánipa!a fing tbc Mogse bited A
Laboratory Manóéi iié kiadásié kiadó; Colé Sor mg Hámor La bora tory Emse -1355) <
Adenovírus technikák ellnek renőe1 kelés te gének expreszsz lódéhoz különböze» sejtekben ég azét vekben. Ezé okkal kaposolatceak a következő irodáim! helyek: Hitt és Munkatársai: Ady, kharmaeol , 4 0, 1.17-135 tlSSThí es a énen tűm Htot ecbnoicg rés-tol
HJen kreál, Kanada) származó irodalom. Az állatok arkaimaeak lehetnek a gének halasainak meghatározásra különböző fejlődési vagy fiteológiai fubkticnáiig éllat-rendszereken, egy 0,3 kb-s, lL-B30-st kddoió döÉB-t kiőriozenk E, coli fragmentumként egy expresszibe vektoron, amely tártalmazza a CMV fékező β-aktin promékart és a nyél β-glebin coli adun Idézési szignált, amint AOt hfea és mnnkatarsai előzőleg már leírták) Oene 105, )53-200(1341), A transzgen elválasztását a vektor szekvenciától szacharóz gradiens zóna oentmt agáiásmi hajtjuk végre, ahogyán ezt benn es munkatársai isi r fák: „Eactor fniiuenemg rtöddöiiöd kreqaoncy cf Transgenic Mree (Transzgenikus egerek formálást gyakorisagát oefolyásole vektor; ,· Mothods in
Enzymo).ogy 223, ?7i-701 01543) , A rmnszgáet tartalmazó frakoiő(kát összegyűjtjak, mikrooontrifegáligk Micmcon-iöö szatéAön át, ég ötször mossuk mikre), njekoies out tarban (5 mmb)./1 trisz Hói.
tőé 0,4} , 5 móló Maci, 0,1 mmöl/i ΚΟΤΑ), eladásod.
ΦΦτ
A trenazgént ára szuszpendáζjok mikfbinjekcros pufferben [ö mmél A. triszAÜl. A A A, 5 mmél./i Háti,. 9,1. mméi/l. FPT.h( , 1.-9 sg/ml. végső kéncént rációrami Rfc zug oktél jak peresejlekbe HCoköt/éP r A-,lnc The Jackson Lo.ooratoryA amelyeket azután át viszünk TCH. {Hpragne-Eaoiey) dajka anyák petevezetékébe, azt á közeit élj a rés t kötetve, amely Hegen és mars tatárául szak könyvébe;·; szerepei: banipuiérioh bt the douse Embrye, kiadó: Colé kpting Karbor zabératory kiess, Fieznvieo, Heo Ibik A 39 A, Az élét lö, napján a létrajövő állatökből égy fa rakna reokát lecsípünk 2H S eiemzésnez, A traruz zgen r kus adományozók azonosítását polimeréi láncreakció (FÜR) elemzéssel. hajijuk végre, amint azt korábban Líra és munkatársai ráírták: kroo, Háti. Acsd, Isi, g$g éli 7215-7219 (1930:, Az 11-E39 ttanszyenrkus egerek azonosításét az egér farok 9H3 ampAfikáiasával. hajijuk végre. Az amplilikáoAén reakció belső kontroli jaként primőröket alkalmazunk az endogén. Ibi, génhez, A primerek aapiizikaiják égy 299 bp-s szegmenset az 1AA30 irarszgánnsk és egy 397 bp-s szegmensét az Azt génnek. A 2CR körülmények a következők: 99 'A , A méeeopero; 93 AA 29 máaodpero; 72 A;, 99 másodperc, ás mindezt 30 cikluson át. é franczgeoikos éileiokai pategönmentes kérnimenyek kőzett tartánA
RES-t extrásé AnA szövet skbéí s.Re. STAT-AO-at el. ka ima zve, a gyártó cég (TEL-TEST, Inc,, Eriendsuood, Texas) éimátaiásnii követve, Teljes DHS-i (29 mg; dánatótárunk és átitatjuk hlokrana membránra A2E Ricmeoicals, Costa Mess, Kalifornia.) , A tfahsegén expressziét le 1 becsűi, j ok elsír i dl zár ászod vérét kensz ez non jelölt 1-30 ctHF-bez At. ráz ágens, lé Jel. la. Ha Ili erei a; , Az akut fázis
77::9:77710 máj gén expressziét feibeosaijsk a teljes REG hibridisólasaval a rá gesz: lé aemopexin gén, a résénél p alra-l-saa g)5 köprotál a és a rágc-élö haptogiobin gén vé let lepééerúeg jeléit PC.R szegmenseihez,
ELIsA éeexigteket szerzünk be kereskedelmi tetzésokbói és ézékkei deigekunk a gyérkés ütmetalése! éterlék, A rágcsáló 11z-höz 'érzékenység t 3 pg/mlj, regeséit 11-rb-hez (érzékenység < 3 pg/mlj , rágcsálo ibá-gammához (érzékenység < 2 gg/mlm és rágcsáló Tdb-al. r óhoz (ér zátonység < /, 1 pg/mld szolgáló Aid3A készleteket az R. S 13 eve team tél (Minneapoils, Mionéööka) szerezzár be. A rágcsáld XA-3 £11SA készleteket (érzékenység 1 fe pg/mlj a Izosoorce lofeérüáiiena 1 tél (kamat 11 le-, Kalifornia: szerezzék be, é rágcsáló i !,··!« Eli la készleteket (érzékenység < 6 pgymlj az gndognpkml (Cambridge, dsssaohogsots) szerezzük fos.
Az sitiké rízsgélat .okék a száram immangioboiIn sz: .etekhez an-
titest párokkal íétfea tjok le, amelyoké ?t a KáarMing en-töi (tan
Plege, kall tor rmod azt csonk be, a leköttatáchál kever :va a g vérző
cég étmokaéáaart» Anti .-egér lg A -ez (51./·· 51 klón) , éli fel k-égáa IgA-t
(E3-14 Ö ki én3 ,· gok i- ér •ár IgG)-e t (Aüá-3 bál , agké-k rgé.z lyGza-t
rMzl-ÍÍ< blézz/ Ast gpk,x -eger Igái fö-k (2.3- ül kién/ alAs •Ima zent be-
fog ó a ;t k i. teste k ként . miséclkéé k egér Jgb-et (Cl53 -323 klón),
Igá-t (Mit-314 kiérő, IgGS-et (50?,3 kimé) ,· igCka- Az lilii-dvA
kiből és lgG2b-t (/3,2 kiérd alkalmazónk standard görbék kialakítására, oloklh doki-egér lgb-et (ko-tO.z:, biot la anta-egét
IgA-t (ES-liÓ kiérd, bio kié: ant)-ö gél 5'géi-er (ék 3-5 Albbá,,,
ÖAmkAi 1 esdi-egér lgoza-t (If 19-l.d { feló®) és b feófein ard .z -egér
5gdzb -t, (2b. 2-3 kién) a lkait tazot zk krmtn '..aró áoklfeés' rétként,
Az lob-). szintjeit egér szérumban kereskece Imi forgalomból ess sorozható, hámén ISK- 1-hez ezt:igáié rnofonémái nessay alkalmak.ass/se
Zairével bat&rőZzük meg..· amely felismeri a rágcsáló IGF-i-ei la, adatár: a mérte mintákat savas-efanoloe exi.rahálóénak vetettük aM a gyértő cég (ki ebe is rest 1tara, San dnaé Gépiét rene, f.aiőforniag aifal szolgáitázott ütmet áfások azer'inf,
A leölés otán a szöveteket vagy pii lanaf fagyasztásnak, lefatyasstjok valamely fagya-eté közeggel fagyasztva metszésnes (krioszekcióboz), vagy rögzít jak ifi -os, foszfáttal pníferoit fokmaiik oldaton merítéssel. A formaiInnal rögzített szöveteket tat ina sernon ó no···re dolgozzak fel, és megfestjük némátOXiiinnal és ecztanéi tbéSit Az. ionost esteshez a ez. Ilonát .fagyasztót t metsző keket acetonnái részit mik ée lovagén száritjak,
Véwmnzákat gyűjtőnk a azemnreg alatti homioknregbol steril, vékaómmal szívatott csövekbe, amelyekhez EJTA van nozzaadvs iVasobaibor Syátems, nectoo-Gickinson, Aotherforo, üee Jersey), A hematológiai értékeset. autómatizéit rendszerrel határozzak meg •Abbét Gátit-föyn, IJOo, Abbét Sark, iiiinoi.s; . A vér lesre zke számlálást manuálisan hajtják végre, amikor a készülék bem. fc.épés szolgáltatni pontos vetaemézkb szamokat á túlzott ősszecsomóso-aés Blatt vagy a tű Izet tan nagy vér lemezkék miatt, A vér kenő tetet módosított kright-diemaa festékkel [Hbdified Srlgbf Giemsa stazn; koma-lek otarn faok, Bayer Gorp,, El kitart, Indiánál festjük automatizált festő berendezést íSayor koma-Tok jöáö, bikhart, ind zóna; ál ka Ima zva, és mannái laáh vn. zsgáijuk az a betlen sejtekre és verisamezkékre, véres versejfakre, ás a fehér vér a ej tok mo r tő1ggiáj ára.
Csőntvedlő átvf tel
A combésóntor os a síposontok megtiszfifjak az izomtői és ősohtvéiöt kávés szűk a S én htot FEJ-se), átbblitvs, A csontvelő
-0.,03005½ sejteket egyszer átmossuk és intravénásán befogadó egerekbe injoktáijuk, amelyeket előzőleg halálos besogárzásnak (1000 néő) vetétténk alá,
Ma fé-WŐ eferekiftoil^MEa őz 11.-B30 biológiai funkciójának elemzése érdekében a gént a é«? fokoző/aktín oromé tér szabályozása alatt szeress sál j ok ttanargen1kos egerekben, ahogyan ezt dlue és munkatársai leitgát; Gene léé.,· 193-209 (1391 } . őz a fokoző/promőter kazetta transzgén expresszié magas szintjeit irányítja eisbtésgesen vázizomnál és hasnyálmirigynél, de a transzgén axpreaszálhaté gyekor let slag minden szervben és sejtben. Erről szói a kővetkező közlemény: Imre ős munkatársai; Proe. de ti, ősad, Eol, öőő 37,
115-7319 (1990),
IL-Bőö tranazgenikus egerek oaőkevényeeedéeék vizegáijok ászszobáson üt se a kontroli alom tagjaival. á testtömeg gyarapodás sebessége az Π.-tst transrgen ikon egerekben széles tartományban válböxé, oe határozottá·; kisebb, mint amely b konttell xüm Ságja inán tál. a iható, éz Ti,-959 tsanszgéni kos egerek és a kontroll alom tagyái izmáhői vagy bőréből extrahált és 1L-B39 etdő-nez bibrléi.zaif Bőn dortnern tort elemzése feltárja, begy IL-bsu médS kimétathaté az összes 1Ü959 transzgenikes agár mind izmában, mind: bérében, min 11,-950 mkbS nem métatbatő ki a Kontroli alom tagjaiban. Ez azt demonstrál ja,, nogy a seinyá nőveKedés mindlg társói az it-950 expressz ioj áva 1
A kapott TüB/O tranazgenftus egerekből 2 39 éli meg a felnőttlrozt, ős ezekre hátászai van az 1L-B30 expresszsója, amely megmutatkozik a osékktnt növekedésben, megdozzedt bősben, felia.,i:orzs •Φ X ΦΦ>* ·>· * X ·*>·
ΦΦΧΧ· χ < Φ Φ Φ**Φ X X
X «φ XX φ V* bérzoit szerzetben, térmékétlenségben és nirtaleu haléiban, így az iu-alé franszgen!kos a.xprersziója olyan fenozipant. idéz ele, amely mögakedéi yozka az 11-aiC transzgenikus utódok kialakalé' alt. Az rzt bemntatott eredmények az lk~330 tranatgentkos alapé egerük erőre kos elemzéséből származnak.
.XM® bbasbbbgbbxlse efwek ggwhééahx eiMbft
Az 11,-310 transzgenikus egerekből összeggég(tért szövetek mikroszkópos vizsgálata mrnamáiis-mérsékelt gyulladást tár lel több kel vén,· Ide értve a tudni, bért, nyaldos övét, vékonybelet, éá májat ;epeverété tét, vas regbe tat és haanyaim!rigyet. A gyuiiaPásos beszurbdések neutrefilékbéi, 1Imivel fákba! éa/vagy makrótégőkből ál Inak. A gyulladások a bélben néhány egérnél társainak akar;tozlesz; 1 és/vsgy lek.eiyesedésser . A tödében a

Claims (2)

bét ibroneb iái is nononskleár iá sejt eeszárodések néha fel. tündék, es az aiveoláris ralak lénknéltát megnövekedőit számát matatják, továbbá az eprteIlommal beleit légetek hlperplaszt ikosak, Mint máris por sportélte monenokleár1e sejt beszarédeseb is általánosak zi májban. A nyírekósernek kerge néha gyéren esi 1 elér re és hiányzik a teázás tejiéüés. Ezt rámádéi iá r 1 s néma v epei e z1s (extrémedül! a r y bemar opo á es 1 s íEbdjg fi gyeiket é meg a májban, légben és nyirokcsomókban. Az adó elsősorban a lépne·: jelentkezik., három t ranszgero. kas egéród! és egy kdntroii egérnél a lépőket megvizsgáljuk 1mmunh1szteIdgiei festés után E-sejtekre (anti-hbé j, E-sej tokra (a.nii-bz/e; és makrefégekra lanti-E4/88} , A transzgenikas egerekben a CD3-, Ez30- és Es/só-pozitív sejtek normális elhelyezkedésekben vonnak jelen. A fehér kés azonban az Edó révén el kél bakó. a vörös hne:zt,ase.me * ·> « \ V ♦ <? bán, ás a pozitívan fastddd vájtok a. verés búson kelni tarkítva vannak bemátepalafikos zajtekkei, amelyek kzscbh intanritéssui fastébnak, vagy nem festődnek pozitiven, a kölönbözé ans Ítészekkel, Ezek a meg?nyelések azt bemoss teái ják, hogy az 1L-B30 trunszgenstus expressziéin. szisztémás gyulladást. indokai, amely B H H v v a 1 t á re gl.. énnél a oélbal, nagy elemezzük az 10---330 hatásét a lenkocssáén véri.emezke számokra a perifériás vérben, teldaa vérelomzést hajtunk végre. A ooeiosvs száma az st-bkO ttana igen1 tea egerek váréban 3-11-szeresére no a legnagyobb neurrer11 számra, venarkoz- tátva a kgattoll ai.om tagjaiban, A növekedések a perifériás vél neoltokI 1 ekoen tipikusak a, gyulladásra ás összefngg'ésbeu vannak a nautrgfilak besznrédésével, amely mag?igya!balé kulanbOzé szövete kéen.. Következésképpen a mi elold (granuleoitás)/eritroid arány meg n övék sz1k a esdhtvalobén, Ezen ki vél. a get Inga vér lemez kék számé akár háromszorosára is magnóvá közit az 11,-330 h.tanszgeno. kés egerekben a kontrol, i alom tagjaihoz viszdnyitva« á vér lemeznek megnövekedőt? száma eredhet vagy a megakor leviták megnővekebelt számából, vagy a növekedésből a vér lemez kék termelésénen a mega ka rloöi ták révén,. Hogy megvizsgáljak mindegyik tehetőséget, a perifériás vért, a osontveiét ás a lápét It-B3ö tránszgerrikus egereknél mikroszképesen eleme izük, n. perifériás vérben gyakran ki mutathat ék bizarr merte légi áj-.· vár lemez ték, ide értve a magnyúlt ás örgéaiakű vér lemez keket.. néhány egér osdntveiejében ás sápéban a megakarioeiták megnagyobbodnak a oikopiazna megnőve kadét t mennyisegének következtében, Ezzel ell.entetnen a megakoriotiták száma a csontvelőνν.ρηοΐζ φ ¥·.* Φ Φ Φ S Φ Φ φ ,φ φ ·χ χ > Φ X Φ •r χχ és a 1 épben nes; növekszik, Ez asz sugallja, hegy az IL-biO novekecest indukál a vérienezkék azéméban, meggyorsítva Vermeié™ sokét a megakoriociták révén. Minden megvizsgált 11.-580 tranvccenikns egér szenved enyhemérsékelt mikrooités, hipnkrdm vérszegénységben is si.s ztooizá kkal és kóiénbozé mértékben nyilvánvaló rensneráiodéssa1, A nemoookral értékek kisebbek, mint a kant tel 1 atinga lé-701-kai. A mikrocxsás, hipekróm vérszegénység jelenléte bibét sogai.i á (remeglétein terme1évben, XA-B.3Ö egere* exfco*X« prmxűLlga Abbéi g céldél, hegy megvizsgál jak, vajén az Ji-BiO sranszgenikas egerekben láthabe szisztémás gyoliacás összefog' gézben ven-e a pro-gyulladásos elvekinek megvélrezest evpresűtiéjával; maghalérgrzak as li-te ThFoe Ih-E és XFdy koncentrációit a perifériás vérben. Az beszar megvizsgált tronszgeníkue egérben a Tire. és lEhy szintjei megnőveködnek Ezen ki vél x iE-i szintje növekszik a megvizsgált I.te-BBa traoszgeoikos egerek zsl-aban. Az 1E-B80 trsnszgenkus egereimen tatáit 11-1 és TEFm koncentrációk éierik ezeket e szintekei, nmei vek egy a kot gyűl lemézes válasz itedbkoiöjóhoz társéinak LPá révén. Meglepd meóon la-f sem mutathat 0 ki in™Odó tfánszgéni kas egetek perit óriás véreben, még akkor sem, tea az ik-E expressz lója nogy mértékben inonkait gyulladásos kdralmenyek totóst (eermecker év munkatársai:: Cl.ig, lap, i'mmenoiogy 94, 174-181 doákx ás atevene és munkatársai : óig. Fis, Sbi,: 17, 219-82f (19921 1, és kéz veid énéi Indáké lliald Tékává i, Il.-i-gyei ás XbFy-vgl (beire és munkatársai: Wtv él dmmsmoib,, fi,. judT-isi fiilllj, á^erziVAik Akist fázza gének ib-BSO transageaiko ssgoxuk májában A tőét a gyulladásra akut fázisa válasszál reagál, amelyet magsatárazott plazma fehérjék expresszléta ja 1lemez a májban. Mivel az 1L-B30 izauszgeuikus egerek szisztémás gyulladásra jellemzi tee-et leess mutatnák, megver egáljuk az akut fázis gének expressziekét az lin-kza transzgenikas egerek és a kontroli sióm tágjai majában. Az a feni fázta máj gének, mint ak a'ifa-d-sav gldfeopgotain,· hsyiogXofeig és hemonaxin, nagy mértefe.ően oxpreszszálúdnak az összes megvizsgált It-Bnn tzenezganikos egérben, miközben ezeknek a génőfehők az expresszte j a pánt mutatható ki a kontrol. 1 alom tagjaiban. Ek azt demonstrál ja, hogy az akut fázis máj genek kenetrtuziven exprasszáiédnak ez Íh-B10 transzgenikos állatokban. Agy immunválasz során bizonyos elnökinek s-eojt dif fgroúéiáIódást és ezt felvető immangiobalín szintézist indukálnak, Abból a cél. Ibi, nogy megvizsgál fáig vajon ez immuno lobul! n szintézis megváltozife-o az iu-Buv transzgenikos egerekben, az immunglobulin zzotapusok koncentzeniéit meghatározzuk a perifériás vérből. ? i'f-BtO transzgenikus égé rabi kot kában az IgA koncentráció ja á3 szőrösre növekszik, osszohasoniatva a kontroll alom tagjaival, Ekeit kivöi. az leli, igöza és IgGib konoantráolói 2,5-ö-szorosra abvekeinok mihdől vizsgáit 11-áll trnnszgemkas egérben, osszénáson izzva a kontroli alom tagjozval, Ezzel ellentétben viszont ham. mutatbetó ki szaga:tikans növekedés az igM vagy Iga ti tor okber:. a vizsláit Ii-öiO transzgonikus egerek egy i hóban som. falójában a 3 XL-öíl trznszgeníkas egérből 4 az IgM szintézis ai.ésshak **·''* X í <·.♦· * '· > $ < 5 t **** S haza rőtet ő:? csökkentett szintjalf mutat js, összefoglalva ; .íhA3o t tmnszgerö. kas egerek egy si. kés ti.ete ο-9-szeres növekedést SiUkát az IgA ée IgG immangXdedlm izotóposok koccant rációban, mikdzbab. bem. mókát ható Ai szignifikáns: növekedés az JgM és Igh imiáánglooa lin itat1pasöt koncé n f. rá a i öl ben,, üéézbm XgFM éssbteM XA-B3Ö tkaöeógööOöEá éÜeáéAüad A krónika® gyűli adáson állapotok (Kirsohner és öntkon: sastroanferoiogy 91, 990-996 (1906)? taurson és munkáiétsál; árok, ölő, Chile. 73, 494-997 ; a. 9 9 b) j Vagy a cl. ti; kinek tölákpresstálása a ttánstcénikas álhatókban [De Bsnéöeéti ás munkatársat: 71 Chtn. invastx él, 2114-211 9 (1999)1 pkothátaák növekedés gyebgöiest, amely az mzalm-tzer ü növekedési faktor-1 (IGF-i) csökkenésévei társul. Abból a célból, hogy megvizsgáljak, zajon az t1-930 trónozgen1 kas egerek satnya növekedése visasavezet betö-a az 1GF-1 cackkeatetf szint jelhez, traaSzsenikas egerek szérűé mintáit vizsgáljuk meg IGk-l-to. Minden .megvizsgált: trauazseni kas egérben az IGF-1 mennyisége a szérumban 12-14%-s a korban volt· kontroli alom tagjaiban falaIható szinteknek, bz azt sugallja, hegy az IF-BMi t ranszgenikus expresszié ja, valamint ez ezt követően Átalakult gyulladásos válasz az IGt'-i csókkenését eredményezi ez 19-330 krontzgentkas egerekben, követ kezesképpen oka lábét a satnya növekedésnek es a terméketienségnek (Gay és munkatársai; Fodor tinoiogy 137 (7), 2037-2947' (1997)j, Biológusitag aktív IL-B30 expressziöja hmaatopmietlkas sejtekben A oztokinck olyan kiválasztott fehérjék, amelyek helyileg szerélyozzáK az immunrendszert, vagy bosszú távú hatásokat kötve ti. torié k, Abbéi a célból, hogy: megvizsgál jak, vajon az 11-310 oa:,zyzta ti. toki n ként műkódik-e és indukál ha f-e tévő11, több e tervre kitérj edd gyeiládáét és akut fázis máj választ, átviszünk ll~B3ú t.rontzgenikút csontvelői. darálósat besugárzott ved típusú befogadó egetekbe, Ősömévéló bsfogadó egereket követünk betebként akut fázis válasz .; ndukcro j ára , Az BAA akut fázis fehérje megnövekedőtt konventráelei mutathatok ki Ti-BÚB csontvelő befogadókban ingkvrákba··; db nappal az átvitel titán, ez ez BAB szintjei az idővel megnövekednek, Az BAA növtkvo koncén t tavié val párhuzamosan a perifériás vétkén az ik-B3u osoekvelé befogadók egészsége romlik, amint ez megíréltető a felborzolt szőrzet és a gyulladásos kör megjelenésével a pofa és a torok körül, őszei ellentétben a ved típusé csontvelő befogadok nem. rendelkeznek az BAA emelt szintje t ve.s a vérben, és nem tűnnek betegnek sem. Az áriatokat akkor dijuk le, amikor súlyos betegnek tűnnek. Az 1Ί-Β.30 expressz rója kimutatható az zl-B.so t r anszgonr kos csontvelő befogadóinak osontvelejében és lépőben, de nem mutatható ki a vad típusú: csontvelő befogadók szer ve Ince. Akárcsak az AÜ-B3Ú rranszgenlkus donorokban, a bér, tűdé, máj és a gyomores beit taktus begyül iád az iü-Blü franszgenlkus osontvelö nciokádéiban, de ez nem történik meg a vad fipnsu csontvelő befogadókban. At akut fázis máj: gépek (hemopexin, AGs-lj itt is nagy mértékben exprosszálódnak az la-Bzö transzgénikns capnfveio befogadókban, de IL-t nem ont a festő ki s vér száraikban. izek az eredmények azt sugallják, begy az IL-Büu valódi eltekre hosszú távé fulaj óonságokka1, Az Ib-Búú franszgenrkns expzesz z.töja pusztuló fenotipnst indu- kai, ez kbyte. a tranozgonikas állatok eisatnyuiúr, szisztémás uysifonása, zermáksifensége és pusztulása jel lemez. Az 2-130 transzáén?, kas állatoknak szisztémás gyulladása ven, a gyulladásom sejtek neezurédéséve1 a tudóba, májba,, bárba ás az emésztótraktusba, áz 11,-1110 t a 1 expresszi lat. a in elve g csökkentett növekedés és nyúl iádén fenőtipasát idézz, áld - ez ezerosan hasonló az 11® fra nszseni kos expressz® számos modelljének íenot ipán ónoz, Az !té transzgenikas akpresszlójáhákj hatásshoz hasonlóan, vagy rekombi.nann lé® fcenuás elán egerekbe, neutrofii benzárodás ás vét szegénység transzgani.ken tr anszgenikas figyelésié meg ez állatokban, mint. ez lá-nlé expressziül Inak eredménye, Akárcsak az Xl-á állótokban, az IL-Elu transzgenikus befogadók csökken tett. nPvekeéese össze kapcsol ódik az iőb-i csökkentett szintjeivel, amely kapcsolatban lehet az ezekben az állatokben Pb ötigvei t sziazt émén gyelIadással. Az 11,®® frenszgenlkun állatoknak ezt a lenotlpesát a fei.álszabáiyozotf lb-® expresszié okozhatja vagy mint az I?,®® télexpresszáiáo közvetlen hátása, vagy mint az 11,-1 ás Télé expresszié IL-Bsé-eai közvetített feiéiszabályozésa. Az .11®. és i®A az Π,® ismérv brióst órai. és a léid ás 11,-1 megnövekedett, koncéul rámád találhatok meg az kh-h® transzgenikus egerek per1térién verőben, Az lé® azonban bem matathalé ki az lé® 30 transzgenikus egerek néniben, azt sugariva, hogy az fb-®u állatok fenotipnza kezest ionéi kapcsol atban van ezen ág ettek in Lnlexprezsoálámává 1, ás hogy, amint erre a áZskyeágia honoiogiáíkkai. már céloztunk, az lé-byé-pák az 11-á-hpz ha sorié biológiai aktivitása;. vannak. Az lé-é egy g.f cint rop ni tokiu, amely kun kei ok széléé válaszzzrlikisz téka kökéi ipdekál trombocitézist, akut f ék la fehérje szintézist éa b-ee jó dl f f er epeiálódáéó;, Az it-B3ö tranezgánikns fiiatok konstitutívat expreeszaInak akut fázis máj géhéket, mint AéF-d-ef, haptoglobint, hemopexint és szerűm amileid A fehérjét. Hasonié főnétipest mutatfok máz ki egerekben, mint ib-v franszgerm kon túlexpresszálánának hatáeáf , vagy tokoméi néns ik-é beadása után. Ezen kivel az Ít-S3ö tpadékgéhikua exprésszé láza trombocitézist eredményez, amely S töket lan annyiban, hogy a vét lemet kék lse tőbe gének bizarr morfológiája van (megnyúlt megjelenés, nagy mézet, és/nagy oraé-sze.fii alakok) , Arra gyanakszunk, hegy ak In-bú és/vagy más festiszabályozót 1 fdtokinek tatással bírnak :a bpfmáiiS vériemezke termo lés re. Ez ismét azt sugall ja, fogy ak 11-330 osztozik in- a ···· kai és rokon anyagaival valamely biológiai akt 1yitáspae. Az ik-o-ot azonoaif juk B -aejt di f ferddoiálo faktorként is, Az lé-é franszgenikus t slexpresszáiasa ele zömei fórét idéz old, és az II.....a hiányos egerek csökkentett Igé választ mutatnak, mikötőén növekedépt látunk az Igd éa IgA termelésben bizonyos if-3i0 tranezgormkos egerekben, ez a megfigyelek nem vág egybe különböző befogadók között, így további elemzés szükséges az li,-E3ú további jel 1 töméséhez lehetséges 3-Sajt áif főrend sió faktbrkánt. Az 11,-330 transzgenikts egerekben a neve kedés á kor logo mzotrofllekben egybevág a különbőzé szövetekben nyilvánváló gyulladaaekiá a vál,rozssok azonban a vörös vérsejt paraméterekbén dóm megyarázbatók könnyen, Az 11.-1, TEF-ai.fe és lEh-gamma égy olyad saiddróma közvetítői, amelyek általában krödi.kús betege ég vé.rezegébységénéfc (ahód1a of ebr οa1o d1eóase 1AG Ai j d 1 vóé,áák,me nők, és amely általában mint normocitás no rmok romi kés > nsmregenerálnom Svagy miniméi inán regeneráléne? verozegényoégkenr jelenő kérik és krónikus gyulladásos betegségek sokféleségében látható. Au Aid jelen lehet mikrooltós, hioekromikne betegségkéne bizonyos emberi betegekben. A szindróma a megváltózott vas meraholizmusnak tűi a j doni t ha t é, ás a csökkentett válasznak eret zopoiee énre. Az Ib--h3o egerekben megfigyelt mikrocitás, hipokrónikus vérszegénység at ACD-nek tuiajdorm ihaté, amint ezt a növekedések sugallják a perriériés eitgkin koncontrés 1 ókban. A mikrocitás, hipokvomikos vérszegénység lege 1 talénoaabb oka a zenbe·; a vashiányé amely inkább egybevág a részleges csontvelő válasszal {regenerál ódéul es tmnrbocit óriásul, amely á.b ib-üJO egerekben léineSoh További vszugé latoka t, Ida értve a szérum forrifin, vas, ás teljes vaskohó kupac 1 tus mérések, amelyek lene tévé tehetnék nz Aid megkuiönbozéetusét n vashiányos vérszegénységtől, nem végzünk a megfelelő vér megszórzésében talál netó nehézségek miatt az érintett egere kb él, AZ TL-1 és Tár-alfa ismert Indokfötai at ib--o szeress siónak,, ás az li-ó e,sorosa zió vitaiéban fel ál s zaba ive zott egy gyűl iádé-sós válasz során. ffárf magi épé, hogy az iL-o nem mutatható ki az ib-énu aranszgenlkos állatok perifériás verében, óz azt sugallja, begy az ih-bjO-nsk negatív hatás- van az 111--5 expressziem egy még ηοη; azonosított mechanizmus révén, lét, ez ik-h távolé été az it-illh tznnszgunikos állatokban megmagyarázhatja az IL-l ás Tbi-aifa ezen állatokban megfigyelt magos sziutyéit, mivel az Aó-n-nak negatív hatása van a keringd 11,----1 és IW-aifa koncentráoioiia egerekben. A keringő TkF-Alfa 1A-Bdö νζ,νονΑζ V traukrgen:ihas egerekhen megfigyelt nagy keneentz ágiéi az 1 Γόη szítra megnő ve kenet t koncent régióinak eredményei is lehetnek, Az 1 FA -gommá t X 9 - 2 ™ a k t Ívé 11 T - a ej te k v a e y 11,- 4 - égig, vált 8 - a ejt eb terme .Fik, és ez inba kát ja a ThF-aike ezotesszlóját monooitákban és makróiagokbon, Továbbra la meghatorozandó maiad, vajén az 1 Oh-· gamma expressz lóját közvetlent! az 18-839 közvetíti, vagy Pás, 88-839 -oal indtkált citokl.ro k közvetítik, összefoglalva etedmdnyehnk azt sugallják, hogy az 11-820 biológiai aktivitások aráién tartomlnyákan osztozik az io-ö-faí., Továbbra rs megmagyn··· rázekián má?rsfb vajon ezeket a biológiai. aktíva tanokat egy közbe reeeptor, egy jel transzonkelés elem. vagy egy transzkripciós rákkor közvetíti az Ik-n-tai osztozva. Esek a kérdések remélhetően tisztázódnak a tovább: kísér letekben genetikai és biokémiai meg köze11tesekét a 1kaimazva< Minden itt idézett rererenoia ebbe a bejelentésbe olyan melységben énei be, mintha minden egyes egyedi közleménynél vagy érabehalmi bejelentésnél spécié fisán eo egyedi lóg jele znánk, hogy teljés: egészeden referens: la ként Opel be a jelen héjé lent éh- kié: i bármely ^góibél ,<: é találmány sokféle módosítása ás változása elvégezhető g nélkhlí hogy eltérnénk a találmány széllémétől és oltalmi kórétoli amint os nyilvánvaló azok számára, akik a szakterületen járatosak. Az itt leírt speciális k:ivrteli módokat és formákat vsak póidékáht nynjtjnk, ás a találmányt csak a mellékeit igánypönrok kifejezései és meghatarözásaá korlátozzák az ekvivalensek teljéé körevei egyStf, amelyekre az ilyen igénypontok leljogos1 kanak. tfviishm ·> X HILHHÓIAK OFeHSOF) SF00HC3 LiSHOG < 110 > 3eher1n g Corpera. t1 οn <120 > óasrsalran l.nierleukin-12 páö and TnxerleHin 330, Coisbinaiiena treree.il Ariibsdi.esf Oaea in FharmacnuPical CxrsposiP.ions <1302 0201042X POF H4 0> FCT/OS 00/24080 bi li 2· io oiA>bb-<oB <1002 00/333,090 <1512 1000-09-09 < 13 0 > h 0 / .1 5 4 .< 010 <111:2 13 Íb-'il -dl <1002 0 <1702 Patent2a Per, 2.1 <2102 1 <2112 07 0 <2122 0PA <2132 Unhnown Ö.nganlem <2202 <2232 Donori pilon pl önkpgon Qtgépigp: súrol séd Homo sapiens <2202 <221> OOP <222> (d.) , , 1837} <2202 <2212 mát. poptide <2222 Η4Π - 0007 ) <4312 j, 999 H.y aga Ser aga Ara got Ha. gta Val -la atg bet ctg Len ctg 1:0 a ctg Leu cég Len -10 ctg Len oco Pro <90 Trp aoa Thr atg Mát «9 len -20 got oap: ggo aga get gta POP 903 000 Pop agc eci goe tgg api Pag: w Old: óid Ara He lei Lrd Hl Oly Ser Ser Írd Ha Trp Thr Sin 5 :H 1 d: 10 W oag oag Pót PPa oag aag oeo ige aga «9 <00 sgt gea Pár i 1 .,'.2 *$ Op: Gin óin Lee Ser Óin Ha H;''1 öye Thr Len Ha Trp «·<··«<- Ma Ha 0.1 20· PAdSAPP esa óta gtg gga eae atg gat ota aga ma qag gga gat gaa gag aot Pro len Va I Giy Pia Hat. Aap H Arg GIn Gin Giy Asp Gin Gin Thx 35 40 áea Thr aak APA ga gak Aap gtt Val eee Pro cat Pia ate Ha 00 ctg Gin tgt Gya ogá oly gat Aap ngc m.y G5i tgt Gya gat Aap épp Pro .•g*· ·;χ X.GA ·ζ>·> Gin gga Lee H geo esc agt Pag tto Age; tkg eaa app ate CSC eag ggt 200 Oly Le:,; Arg Aap Aan Ser Gin Pha Gye boa Gin Arg IlG Hsa Gin Giy öO Λ 70 75 Gkg art Ifi tsk gag gag ctg ess aga tag gat Att st.o 'A ·*χ 330 gag 330 Lee He epe. Tyr Gin Lyp Len Lee Giy Ser Aag Ha Pha Thr Giy Gin 80 85 90 POP sor ctg GkO; OCt 305 age cos gog Gtg tag Gtt Pát GPG Lee pH Pre ex ,..s m. Len. Len Pro Aap Ser Pro Vai Alá Gin. Len Hág Ara Ser Lee <V·' LÓG' 105 gpg gqe eke age eaa eke etg tag \I-xex- 303 G3á ege paa kgg gag aot S •‘x·’·-; Lén Giy Hígti Ser x.>J,> i sS Gin Pro xG.k Π BLy Pia Alá Trp Gin Tar 110 113 120 eag mg akt coa age eke agt Ax^x-.·» x---x<x·.·· age CSC tea agg eag Haj L· cte olt Gin Gin. He VÍG Ser Hm! Ser ara Sár San Pro Tre Gin Arg Len Lan 125 138 isi StP égé kte aaa akt Ott ege ago éke eag geo ktt gtg gék ara goe 520 Los Axg Phe Ida He km Arg Ser 5en Gin Alá rhe Vai Alá Hl Alá 140 Ha 150 155 gom Ggy SpG Akt <zo<,' Aht aga get gpá see ctg agt eee tea 520 Alá Arg Vai Phe Kis Giy Alá Alá Thr Lan Ser Pro 100 105 Gm 2 <Ü> így <2H> 2PT <213v Gnkngng StgAGlapl <2233 Veretigv.ion af: anknoen örganlsm: aermieeG Homo sapiens Bak Lm Giy Ser Arg -•Z Vak 1 a ; Laa Lee Len Len Len -10 Pro Trp T főre Alá I Ser Thr sesaaAA Φ X Λ ν. Gye Pro 10)1} Gin de: Gok 45 Gin Vei »: Aap Len 0.5 Gly Gál Ser Gin Hl a. Goi )2)10-- ilO) Lyo au Gya GAr Len ::l0: Arp Gin Gin A.le Grp HOZ 11: Aid G1U 2ro Olb Thz Gin Lop 30 Len. 3 3 -GlA- d y Gly SG Abp 40 Gye Gin Abp Gye Gly Aep Oly led A.rg lep Aan Ser: Gin 20 e Gye len Gin: Azg LlG: Hl a Gld: Gly 1:0 55 70 3:5: 300: llv 20 e Tyr Gon eve len 22 <·1 Gly eer Gap Gld- One Wb Gly Gin 05 8 5 38:: 2:20: 5 ez <><: Len ;.-:;n Aap Geo 2rn Pa.:. /-·..:. a Gin Lén- Hír All GÁL; i.dU 05 100 3:»: Lgd ο?, y Len 502 Gin Len Xgií u Old: ZZO Gin Gly H la Pia Tzp Gld Old Ι» 115 100 Gin Gin 123 lie 2 ze Ser Lee. Len 0.30 Pre Lez Gin Pro lap 135 Gin Azg .Len Len Le u: Org Phe Óva lle Len ÁZZ Hoz Len Gin Alá 20 e Vei Alá Vei Alá 14 0: 145 150 :1:3:0 Oi a Gr< ypl: 20 e inn. <A .x S Gly Alá Alá TO.r Aon Ser Pzn
1:50 153 <21Ο.> 3 <211> 1203 <21,2.3 3!Α <213 3 Ο η k η e η η Ο r g η η 1 a m </.<: de <2:233 DesgcΙρΟϊοη ol unfenenn Giguninrn auzztiaod Áus ne.
<22.1> CDS
022::2:3- -(óllil.y, (0::0:0))2 <2203 <220,3 1352 pepil.de <22:2:3: Livii:.' (3)53)1 <4003 3 egcliogonp unggeotuee gagltagan. caganucnnn ggeggcguat aguggnteca 50 rydlsdp φ «ί ceggactggk gcsgefesca gégett geoa gatatgagas gcagggaaaa ag a kg ctg rt.O kot. fin
222: .kap tge ·’ j\?éí aga gaa gta aka atg kai. He két -15 Cfi-<i Len fis irp ctg ktg Len Len -10 eae Pro ktg gkc Trp Vai aat Thr -5 aag Gin lka Arg fia 992 ctg get. qfi aga agg aat ege fik act gat Lfi get cag ege cég fi .14 öly fin fia kar Ere Arg Per Ser Ser Pro fin Trp Alá Gin Gye Gin, fi: I :§ 1:9: cag ata fit agg art oka tgo fig etn góc tgg aaa gca cak gca. sca 222 222 fia Per fig:: Acn fitt fin Mez fin Alá Trp Aas Ara; fim Alá. Pro 15 29: 55 fia gfi aat a kg aat óta fia aga uae gaa gag gak gaa gag act sas 910 fia: Oly fia Mez :Aen Itta Len Art Gin 01a fiú Aap Gin 01a. Thr Lys 30 33 40 45 ast aat ctg fit cet akt: aag fik gaa fit ggt tgt gaa caa caa gca fi «· hí 0->3fi fin fin Val Pro fig Ifi fia Gye cin Lep Oly lya Aae Pre Gin Oly 12 25 20 fin Ság gac aaa aga tag tA tea ktg caa agg ata ege caa kkt ctg 402 fififi fis Ase art; 22 Per Gin Mae Cya kan 22 Óig Arc He Arg Gin 35 fit Lat; ura.. ztz. tat aag cet atg ezt geo fit get ata eke •v·»» — íj· ,ir· ÍJ onts kV fii act. fia Phe Tyr fia: Hit fia fin Aon Sár Aen Ifi P5a fia Oly Gin Pro 50 55; 90 get cka ©fi: cet gat sec cos atg gag caa akt cec ece tcc ele ata fi fii.él Lan : Ififii Pro nap Ser Pro Pék Olt; fin Len fia Túr Ser Len Let; 95 190 102 aga eke aga caa fia akt aag CCfi 3fi gat tat: tea agg gag ata caa 550 :Sly fin Ser Gin fia fin Gie Pro Ifi Aep Pia Pro Arg Gin. Thr Gin Ifi 211 ifi :.1:2:5:: aag afi cnc cg a atg unt kct. sgt fifiü cag tgg cag ege cec akt ez c 553 2 i ;·. Mas Pro ser fia Ser Ser Sor fin Sin Trp 01c Arc Pro Lee Len 120 fit Ifi 2g:k tea aag ake ett aga ágé Al aag gcc kkt tag gcc ata get gca 646 .Atg Ser fis He Len Ara Ser len .fia Phe Len Alá Ha Alá Alá :.r 150 122 ©32 igng fit geo fia ggu gca ;ggs gát ctg aát gag ecc tea gtg Cfifi fi 4 4 Arg :fil aha /agg.; fia G.ly Alá Alá fit Len Thr Gin Pro Len Vei Pro
tnesafie íi® 113 1® aca. get taeggatgöc eggglícoca eggel accat. gataagapta atetatoage Tor Alá
Bl
oeagaeatea aeeagttaal taaóeaatta agacLtgtac tgtoettgkt Lcgtktgktk Slö tgegtgaggg gcaaggaoao eattettaaa gagaaaagaa aeaaaqeeca gagcagacag 610 etggefagag agsggagotg gaga.ags aga ataaagtete gagcocttgg cettggaaga 910 gggoaageag gtgcgtgg©© teaggggaag qgggeggr.gg oaz;:ga.gaaa etgt.gagaaa 290 aoeoagagea tcagaaaaug tgageoeegg otrtggeeat tet.er.gr.aag eaeaaeaaga 10« aaaggggaae. aatataent cetgagzgac reagaqaaat gtgeagatge aoagtaetoe Illő fizacagcago tcfgtacatg cczqfi.ctgl oePkeagtte Oaaeagaatg tsgfieaetaa ti·® qase r. aa cao gactaecaak fi Λ \ \ V aaa 1203
fiit.® »1 fia12> 196 fia 12 > a RÍ <2z.k> Onknewn Organlse
<223 fi firma . pfi ,s < .fi; of Onknoes Qrganissn saram séd Mas ®P- <4 00 fi 4 fiofi Lat Aap Cys Arg Alá fial 11® Get kap Tro Lee iPfi •Pro IIP Val -20 -la fis Tor οla ®.zy Aga Alá Vaj. Pro Arg 3®r Per Ser Pro Asp le jAlg Gin -® -1 1 5 10 CMs Gin Gl,n ken Ser Ara Asa Lap Gys Gát lep Alá Irp Aan film. .Hl s ii j20 11 Pt© Alá 11 ÍGlf ifis Ser. Ásn Lan kon Arg Gin GIp Ifi Gla 40 Asp Síp (SOfi 1® l.ys Asn kan Val Rro Ara 11® Gin Cys fiiü Asn Oly Gy s Sáp IIP 4fi ® 55 Gin Oly Ica lya Ásp Asn Ser Gin fisé Gys kas Gin Azé 1 le Arg Gin rlk 65 70 2 5 o® lep. Alá: li<g Tyr kys Ars kas kas. Asp Ser. Asp 11 ' :::65 zzo ifi® i.fiS « fi; fiifi ifid : Alg lifip kgp Pro Agp Sor Pro Mát Gin Gin ka a a Is lAl Ifit
ti. ta-fiss
* r' v Λ ,2 %' * A * :<» * x ·> ·> x * > « > A V * V « A «> * A .<·. ·> A A A X » <· * « « X A Lee iboii ág Ady: (AGA (Ili SAP Gazt bén bee 118 158 Gin Pro Gia Aap Has 128 185 η' Ϊ.Ό :.Ary( Gin Air Gin 125 Gin bet. Pro Ser bee (1(11( Ser Gél: Sor Gin Gin 135 Íze Gin Ara AGG boti Boa (AbO te: Lys bt boa Pro Ser ben Gin. Alá Pho ben Alá lile ü 14(5 155 155 Alt: Alá Arg b:( PAe 165 re. a BT s Giy Aló Alá 185 (®A bon Ifc Gia Aro: IGA· bee kai: (Bié: ihb bab
Ö(Ö> (5 A5S1A ·»Α
<212> ŐST <213a Gnbnoen 0.· iganj om GAASA <:2G 3> Dz te or 1 • p 5 0. \ >n oi Pnenoen Orz ? AGií· zerra.eee. One Apa < 4 885 5 Ser Gye 1 bee Gin Arg :5( 1le Pia Gin Giy bon (1(0: Vei Pho iyr Gin hyo 15 ben .UGt Λ1 ioa,y Ser Aeo «: He Pho ih.r gí- y Gia re Pro bor bon 511 Pro 38 Aep Giy Geo Vei. Giy 1:8· Gin boa Bea Alá Se r 40 bee Lee Giy boa Arg 45 Gin ben bon Gin Pro 5:0 lin:: Gin Ház lila láp 55 Gia bar íp1 V Gin Ghr 68 Ara, Pro Ser 2re Ser 85 Gizii Pro He Gin 7 8 Arg Len bon bon. Arg boa 75 bya élé bee (Agg: Sö Ser bon :G:i:n: Alá Ang: 15 Aal Alá. Vai .Alá Alá 80 Arg Vei Pho Alá Bio 15: G zy A(i A AlAl Alin (bén 180 Ser Gin
I , kompozíció, amely ? azta imaiza íj egy lényegében tIonba, érett barnán fé-lz pád peli.pept i.d; ág íij egy SE© 1D BSíS szekvenciátu, lényegében tiszta, érett pol ίο ept i c komplexéé ·„·
2. be ti. test vagy ennek köré f ragcenteme, amely fajlagosan
Íj egy lényegében tiszte, érett barnán lé-1.2 páö polineptád; és iij egy SE© IP hé: z s ze kvenc ;.á z ö, lényegében biaptp, érévé pali' pepiié komplexéhez, de nem böbebbé egymagában levő érett román Xlo-lá p-;0 noIIpepiiéhez vagy SEQ IS 20:2 szekvenciája átobé polipon? i.dhez é libái ij lényegében r.iszéa, é-pefeb humán 11, -12 páO polipén ti ti; ez gáj báb Ilii 11 Illái; éééhéengáé jbi, blpyepábép; ééáplbv Imeéé; ippli© bopbieji komplézébéb álkslmáxésá: egy gyei i sóé eee válasz módos Iránéra ézplgélé gyógya zet előállításában.
A mégha te bt a Z o ?. él
©..ásséEi
HU0301102A 1999-09-09 2000-09-08 Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions HU230679B1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US39309099A 1999-09-09 1999-09-09
US16461699P 1999-11-10 1999-11-10
PCT/US2000/024686 WO2001018051A2 (en) 1999-09-09 2000-09-08 Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0301102A2 HUP0301102A2 (hu) 2003-07-28
HUP0301102A3 HUP0301102A3 (en) 2005-11-28
HU230679B1 true HU230679B1 (en) 2017-08-28

Family

ID=26860707

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0301102A HU230679B1 (en) 1999-09-09 2000-09-08 Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions

Country Status (15)

Country Link
EP (1) EP1210434B2 (hu)
JP (6) JP4505166B2 (hu)
KR (1) KR100894359B1 (hu)
CN (1) CN100529076C (hu)
AR (1) AR035560A1 (hu)
AT (1) ATE389019T1 (hu)
AU (2) AU780163B2 (hu)
CA (1) CA2388562C (hu)
DE (1) DE60038304T3 (hu)
ES (1) ES2300276T5 (hu)
HK (1) HK1044170B (hu)
HU (1) HU230679B1 (hu)
IL (1) IL148300A0 (hu)
MX (1) MXPA02002684A (hu)
WO (1) WO2001018051A2 (hu)

Families Citing this family (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2007202362B2 (en) * 1999-09-03 2011-06-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Mammalian receptor proteins; related reagents and methods
US7422743B2 (en) * 2000-05-10 2008-09-09 Schering Corporation Mammalian receptor protein DCRS5;methods of treatment
SK287984B6 (sk) 2000-05-10 2012-08-06 Schering Corporation Substantially pure or recombinant polypeptide, nucleic acid, host cell, method for the preparation of polypeptide, binding compound, kit, composition comprising an antibody and use thereof
WO2004042009A2 (en) 2002-10-30 2004-05-21 Genentech, Inc. Inhibition of il-17 production
ES2367302T3 (es) 2002-12-23 2011-11-02 Schering Corporation Usos de la citoquina il-23 de mamífero; reactivos relacionados.
DK1601694T3 (da) * 2003-03-10 2009-12-14 Schering Corp Anvendelser af IL23-antagonister, relaterede reagenser
WO2004101750A2 (en) 2003-05-09 2004-11-25 Centocor, Inc. IL-23p40 SPECIFIC IMMUNOGLOBULIN DERIVED PROTEINS, COMPOSITIONS, METHODS AND USES
EP1522858A1 (en) * 2003-10-10 2005-04-13 Jean-Christophe Roegel Methods for selecting compounds using antibodies with activity as agonist, antagonist or allosteric modulators
WO2005108425A1 (en) * 2004-05-10 2005-11-17 Cytos Biotechnology Ag Il-23 p19 antigen array and uses thereof
AR051444A1 (es) 2004-09-24 2007-01-17 Centocor Inc Proteinas derivadas de inmunoglobulina especifica de il-23p40, composiciones, epitopos, metodos y usos
EP1853707A2 (en) * 2004-12-20 2007-11-14 Schering Corporation Uses of il-23 antagonists in the treatment of diabetes mellitus
TR201902033T4 (tr) 2005-06-30 2019-03-21 Janssen Biotech Inc Anti-IL-23 antikorları, bileşimleri, yöntemleri ve kullanımları.
EA013506B1 (ru) * 2005-08-25 2010-06-30 Эли Лилли Энд Компани Антитело к il-23 и его применение
US7807160B2 (en) 2005-08-31 2010-10-05 Schering Corporation Engineered anti-IL-23 antibodies
MX2008008621A (es) 2005-12-29 2008-11-27 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-23 humanos, composiciones, metodos y usos.
ATE555125T1 (de) * 2005-12-30 2012-05-15 Merck Patent Gmbh Interleukin-12p40-varianten mit verbesserter stabilität
US7910703B2 (en) 2006-03-10 2011-03-22 Zymogenetics, Inc. Antagonists to IL-17A, IL-17F, and IL-23P19 and methods of use
US7790862B2 (en) 2006-06-13 2010-09-07 Zymogenetics, Inc. IL-17 and IL-23 antagonists and methods of using the same
TWI426918B (zh) 2007-02-12 2014-02-21 Merck Sharp & Dohme Ｉｌ-２３拮抗劑於治療感染之用途
EP2064242A1 (en) 2007-02-23 2009-06-03 Schering Corporation Engineered anti-il-23p19 antibodies
HUE042172T2 (hu) 2007-02-23 2019-06-28 Merck Sharp & Dohme Genetikailag elõállított anti-il-23P19 antitestek
AU2008219684B2 (en) 2007-02-28 2014-04-17 Merck Sharp & Dohme Corp. Engineered anti-IL-23R antibodies
NZ579297A (en) 2007-02-28 2012-03-30 Schering Corp Combination therapy comprising an il-23 antagonist and a cytokine antagonist for treatment of immune disorders
WO2009068630A1 (en) 2007-11-27 2009-06-04 Ablynx N.V. Immunoglobulin constructs
EP2305304A4 (en) * 2008-04-28 2011-08-10 Nat University Corp Hamamatsu University School Of Medicine IMMUNOSTIMULATOR WITH EP1 AGONIST
JO3244B1 (ar) 2009-10-26 2018-03-08 Amgen Inc بروتينات ربط مستضادات il – 23 البشرية
CA3017116A1 (en) 2010-11-04 2012-05-10 Boehringer Ingelheim International Gmbh Anti-il-23 antibodies
CN102462837B (zh) * 2010-11-19 2016-08-03 生物林格斯Ip有限公司 抗炎组合物
ES2908474T3 (es) 2012-05-03 2022-04-29 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-IL-23p19
ES2729603T3 (es) 2012-06-27 2019-11-05 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos IL-23 antihumanos cristalinos
UA117466C2 (uk) 2012-12-13 2018-08-10 Мерк Шарп Енд Доме Корп. СТАБІЛЬНИЙ СКЛАД У ВИГЛЯДІ РОЗЧИНУ АНТИТІЛА ДО IL-23p19
KR101625112B1 (ko) 2013-04-16 2016-05-27 가톨릭대학교 산학협력단 아이케이 인자 및 아이케이 인자를 코딩하는 핵산의 약학적 용도
WO2014171721A1 (ko) * 2013-04-16 2014-10-23 가톨릭대학교 산학협력단 아이케이 인자 및 아이케이 인자를 코딩하는 핵산의 약학적 용도
CA2925417C (en) 2013-09-24 2023-10-24 Fahar Merchant Interleukin-4 receptor-binding fusion proteins and uses thereof
EP3708679A1 (en) 2014-07-24 2020-09-16 Boehringer Ingelheim International GmbH Biomarkers useful in the treatment of il-23a related diseases
TWI711629B (zh) 2014-09-03 2020-12-01 德商包林格因蓋爾漢國際股份有限公司 靶向IL-23A與TNF-α之化合物及其用途
JP6219875B2 (ja) * 2015-04-10 2017-10-25 株式会社スクウェア・エニックス ネットワークゲームシステム、ゲーム装置及びプログラム
US11845798B2 (en) 2017-05-02 2023-12-19 Merck Sharp & Dohme Llc Formulations of anti-LAG3 antibodies and co-formulations of anti-LAG3 antibodies and anti-PD-1 antibodies
JOP20190260A1 (ar) 2017-05-02 2019-10-31 Merck Sharp & Dohme صيغ ثابتة لأجسام مضادة لمستقبل الموت المبرمج 1 (pd-1) وطرق استخدامها
MA55149A (fr) 2018-11-20 2021-09-29 Janssen Biotech Inc Procédé sûr et efficace de traitement du psoriasis avec un anticorps spécifique anti-il-23
US11780911B2 (en) 2019-05-23 2023-10-10 Janssen Biotech, Inc. Method of treating inflammatory bowel disease with a combination therapy of antibodies to IL-23 and TNF alpha
CN114317430A (zh) * 2021-12-28 2022-04-12 河北银丰鼎诚生物技术有限公司 一种适用于脐血来源免疫细胞扩增的培养液

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0790309B1 (en) * 1989-12-22 2007-07-25 F. Hoffmann-La Roche Ag Cytotoxic lymphocyte maturation factor 40kD subunit and monoclonal antibodies directed thereto
DE4315127A1 (de) * 1993-05-07 1994-11-10 Behringwerke Ag Arzneimittel enthaltend die Untereinheit p40 von Interleukin-12
US5851523A (en) * 1994-03-24 1998-12-22 Ludwig Institute For Cancer Research. Isolated, peptides derived from MAGE tumor rejection antigen precursors which complex with HLA-A2 molecules and uses thereof
US5853721A (en) 1995-01-31 1998-12-29 Hoffmann-La Roche Inc. Antibody to interleukin-12 receptor
JP2001503257A (ja) * 1996-10-18 2001-03-13 バレンティス・インコーポレーテッド Ｉｌ―１２遺伝子発現および送達系および使用
PE20000183A1 (es) * 1997-07-25 2000-03-11 Schering Corp Citoquinas de mamiferos y reactivos relacionados
WO1999040195A1 (en) * 1998-02-06 1999-08-12 Schering Corporation Mammalian receptor proteins; related reagents and methods

Also Published As

Publication number Publication date
KR100894359B1 (ko) 2009-04-22
HUP0301102A2 (hu) 2003-07-28
AU2008240348A1 (en) 2008-11-27
JP2007045830A (ja) 2007-02-22
AU780163B2 (en) 2005-03-03
JP2009268467A (ja) 2009-11-19
EP1210434A2 (en) 2002-06-05
ES2300276T5 (es) 2017-06-02
JP4505166B2 (ja) 2010-07-21
JP2013128489A (ja) 2013-07-04
CN1387571A (zh) 2002-12-25
AU7360800A (en) 2001-04-10
WO2001018051A3 (en) 2001-09-20
DE60038304D1 (de) 2008-04-24
IL148300A0 (en) 2002-09-12
AR035560A1 (es) 2004-06-16
JP2015051005A (ja) 2015-03-19
HUP0301102A3 (en) 2005-11-28
JP2003510038A (ja) 2003-03-18
CN100529076C (zh) 2009-08-19
HK1044170B (zh) 2008-08-01
EP1210434B2 (en) 2016-12-14
CA2388562A1 (en) 2001-03-15
ES2300276T3 (es) 2008-06-16
KR20020034185A (ko) 2002-05-08
ATE389019T1 (de) 2008-03-15
JP6140122B2 (ja) 2017-05-31
AU2008240348B2 (en) 2012-07-12
DE60038304T2 (de) 2009-03-19
MXPA02002684A (es) 2002-07-30
HK1044170A1 (en) 2002-10-11
WO2001018051A2 (en) 2001-03-15
EP1210434B1 (en) 2008-03-12
CA2388562C (en) 2014-07-22
JP2010233571A (ja) 2010-10-21
DE60038304T3 (de) 2017-04-06
JP4969610B2 (ja) 2012-07-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230679B1 (en) Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions
Radwanska et al. Salivarian trypanosomosis: a review of parasites involved, their global distribution and their interaction with the innate and adaptive mammalian host immune system
Wolfe The viral storm: the dawn of a new pandemic age
UA126549C2 (uk) Композиція і спосіб для з&#39;єднання позаклітинних доменів типу і та типу іі як гетерологічного химерного білка
UA121093C2 (uk) Конструкція, яка містить токсиген, що кодує пестицидний білок, і спосіб її застосування для знищення напівтвердокрилих шкідників
HUE026089T2 (hu) NGF elleni antitestek és eljárás alkalmazásukra
Heffelfinger Deer of the Southwest: a complete guide to the natural history, biology, and management of southwestern mule deer and white-tailed deer
AU2016244333A1 (en) DLL3 modulators and methods of use
DeVita Jr et al. The death of cancer: after fifty years on the front lines of medicine, a pioneering oncologist reveals why the war on cancer is winnable--and how we can get there
UA124293C2 (uk) Рослина, яка має біологічну активність гаплоїдного індуктора, і спосіб її застосування
HU230334B1 (hu) Vírus közreműködésével történő, a citoszolba irányuló molekulabevitelre szolgáló fotokémiai internalizáció és eljárás
Mueller et al. The evolution and fossil history of sensory perception in amniote vertebrates
Donin et al. Taxonomical study of Trichomycterus (Siluriformes: Trichomycteridae) from the Ribeira de Iguape River basin reveals a new species recorded in the early 20th century
Kozlov Evolution by tumor neofunctionalization: the role of tumors in the origin of new cell types, tissues and organs
Panno Cancer: The role of genes, lifestyle, and environment
Wapner The Philadelphia chromosome: a genetic mystery, a lethal cancer, and the improbable invention of a lifesaving treatment
O'Brien Tears of the cheetah: and other tales from the genetic frontier
Berti et al. Subterranean fishes of Africa
Cohen Almost chimpanzee: redrawing the lines that separate us from them
Ash et al. The emergence of humans: an exploration of the evolutionary timeline
Hesketh Betrayed by nature: the war on cancer
Huxley Cancer biology: Viral and epigenetic
UA126971C2 (uk) Інсектицидний поліпептид з поліпшеним спектром активності і його застосування
Lipkin et al. The age of genomes: Tales from the front lines of genetic medicine
Arney Rebel cell: cancer, evolution and the science of life

Legal Events

Date Code Title Description
FH91 Appointment of a representative

Free format text: FORMER REPRESENTATIVE(S): BELICZAY LASZLO, S.B.G. & K. SZABADALMI UEGYVIVOEI IRODA, HU

Representative=s name: RATHONYI ZOLTAN, S.B.G. & K. SZABADALMI UEGYVI, HU

FH92 Termination of representative

Representative=s name: BELICZAY LASZLO, S.B.G. & K. SZABADALMI UEGYVI, HU

HC9A Change of name, address

Owner name: MERCK SHARP & DOHME CORP., US

Free format text: FORMER OWNER(S): SCHERING CORP., US