HU230334B1 - Vírus közreműködésével történő, a citoszolba irányuló molekulabevitelre szolgáló fotokémiai internalizáció és eljárás - Google Patents

Vírus közreműködésével történő, a citoszolba irányuló molekulabevitelre szolgáló fotokémiai internalizáció és eljárás Download PDF

Info

Publication number
HU230334B1
HU230334B1 HU0402626A HUP0402626A HU230334B1 HU 230334 B1 HU230334 B1 HU 230334B1 HU 0402626 A HU0402626 A HU 0402626A HU P0402626 A HUP0402626 A HU P0402626A HU 230334 B1 HU230334 B1 HU 230334B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
cells
agent
carrier
molecule
cell
Prior art date
Application number
HU0402626A
Other languages
English (en)
Inventor
Anders Hogset
Kristian Berg
Gunnhild Mari Maelandsmo
Birgit Ovstebo Engesaeter
Lina Prasmickaite
Original Assignee
Pci Biotech As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB0029142A external-priority patent/GB0029142D0/en
Priority claimed from GB0029405A external-priority patent/GB0029405D0/en
Priority claimed from GB0114696A external-priority patent/GB0114696D0/en
Application filed by Pci Biotech As filed Critical Pci Biotech As
Publication of HUP0402626A2 publication Critical patent/HUP0402626A2/hu
Publication of HUP0402626A3 publication Critical patent/HUP0402626A3/hu
Publication of HU230334B1 publication Critical patent/HU230334B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0057—Photodynamic therapy with a photosensitizer, i.e. agent able to produce reactive oxygen species upon exposure to light or radiation, e.g. UV or visible light; photocleavage of nucleic acids with an agent
    • A61K41/0071—PDT with porphyrins having exactly 20 ring atoms, i.e. based on the non-expanded tetrapyrrolic ring system, e.g. bacteriochlorin, chlorin-e6, or phthalocyanines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/10011—Adenoviridae
    • C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
    • C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárán blzönyos mokkolák, imoszsrmlilzálö tess alkateazásávul,. sejtekbe történd bevitelére, amely «Ijárásban sejteket sugárzunk be a ibioszenznizátö ágenst mrték;mysn aktiváló hralsmbesszü·· ságtl ténnyel, és ahol a bevinni kivárt molekulát, vírus eredete. hordozóhoz, előnyösen adenovirös^eredettl hmbozöhoz, ssszomahok. A találmány tárgya továbbá ezen eljárás alkalmazása génterápiában.
Á génterápiát, azaz egy adott páéténs sejbeinek genetikai módosítását betegségek elleni küzrietem céljából, különlele betegségek ·- például rák. íériözö betegségek, Ideértve a virsbs és bakteriális Ifedözéseket, örökletes betegségeket, példásé elszökne Llmlzls. bnsnonrendszéri elváltozások - és más állapotok kezelésének egyik jelentős lehetőségként van számomartva, Azonban, a génterápia klinikát kliejlesztésében váitozsáktmti tetőkéi számos, eddig még rneg nem oldott probléma, atrselyek közül az egyik legfontosabb az, öogy oiyaa eljárásokat találjunk, arttelyeke lehelévé teszik: a terápiás génék hatékony és spevülkus ót vívó bevitelét a oélbávótt sejtekbe t Vernie és Eosnkg Natúré edE, zsb-gan 11997); Andemon, Natúré Ö92, 25Ά0 (199k)],
A géstosáptábae többlete ·ηον!·:ηζο!ήόν lehetséges, amelyek során klónozott emberi getsek vsígy géstszegtöessek, kettősszáld véthet) gének vagy góöszegmensek, snás genomokből vagy szervezetekből száron··· zó gének, öllgöimkleotlöok és khlöolele mesterséges gének, vagy- azok rhtgíosntomsionk · pólóéul! antlszensz gének tmnszlbre ídrléálk.
A jelenlegi eljárásokban, a génterápiában szükséges génmmszler eléréséhez számos, különféle hordozd vagy vektor alkalmazása javasok, Példaként embsbetoéok pollkationos vegyűleteket, ktaltmos llpldeket és vlrnstendszereket, azonban, az br vöm génterápia rőtig mindig kevéssé sikeres. A jelenleg! eljárások tőid? ismert akadálya közé tartozik a vektor alacsony stabilitása a szertanban, s génbevitel korlálozott speotökussása, a génbevitel alacsony hatékonysága, Ab, A vlrnseredein hordozok alkaltnazása különös óvatosság®! Igényel, mert vrmstdsmek egy adott gazdába történd be vitelének káros hatása - példánk gyulladás · is leltet, amelyet azonban tsem ellensúlyoz a más eljárásokhoz képest tokozott transzfer.
A. légibb!? molekoia. uem képes kdnnyen áthatolni a sejhuembnmokon, Egyes rnoieknlákuak a címszóiba történő bevitelére szolgáló eljárások a technikában már ismertek és özeket biológiai ndyaroalok snonip-dásására és tannlmányozására alkabnas eszközökként taPják számon. A leginkább elterjedt eljárások a mikrotmeksálás, “krsérteí' t.eörösvéríesi éged blood ved. ghosi'b által közvetíteti Iható és öposzőtnaSnzlő, plnoszomák -ozmotikus tízbe, ksreolasos hevítet, elekiroporáciő, kafelmnibszíáb· és vírus által közvetített tmosztekeio. ezen eljárások bár alkalmasak: tenyésztőd sejtek manlptaálásárz, de sok esetben nem praktikusak. időigényesek, nem hatékonyak vagy jelerilős mérték·! seiiposztulást okoznak. így ezen eljárások alkalmazása a biológia! vagy orvosi kotalásbao nesn tekinthető optimálisnak, és a terápiában - ahol gyakran aem elegendően hatékonyak nem tolerálható mértékben toxlkns hatásnak iehemek vagy módszertant okokböl nem alkabtrazhamk.
.Jel Ismeri, hogy a porilttnek és számos más ioioszettzkizálö vényüktől: sejtekben és szövetekben eüotoxiktis hatásokat indokálhainak. Ezen hatások azon alapulnak, hogy lény hatására a tetoszeozoizsló vegyi! letek írná kossá válhatnak vagy toxikus anyásokat - példán! szlngufett oxigént vagy más oxidáló ágenseket ·· szahsátihahrsk lel, amelyek a sejt anyagát vagy biomöleknlákat - így sejirnembrármkai és sejistruktúrákns károst· Iák, és Ilyen sej t'· vagy membránkátnsodás végső tokost a sejtet elpusztítja, E hatásokat már alkalmaztak kátönlele abnormalitások vagy elváltozások. Így különösen a neoplaszbkus betegségek, kezelésében. L
PIMOEbző fe;x;dfoamlkns terápia (Pí)'i') néven ismeri kezelésben foioszeozitizáió (fdte»keo3iOteráp?ásj ágenst aduok be a test megtámadott terőfefetó. majd szí s fotoszintetikus ágens akílválása és ehotovikas társsává alakítása céljától, fotoafctívátö fonystek tesszők ki, ennek köveihezióben a megtámadott sejteket. elpnsztefeak vsgy prohteratlv potenciáitok mérséklődik. Λ fotoszertzkizálö ágensekről Ismert, begy eiösyőses és szelektíven fokaílzálédnak a kíván! céfoeíves, példáéi iamoron vagy más lézlón.
A lőtoszeazk szálé ágensek kő fos síibe -csoportjái Ismertek, pehláni a psos-aiének, a tmrlirinek, a klórvegyaietek és a íteifoelani;;. Az övén tfosgpk fesry hatásán:; távikossá válnak.
A pmiirin iíptsxó tótoszeoztbzáiők, josikas e\Igénfélék képzősével kozvetlennl hatnak, és PD7 céljától küldnőísír; előnyős jelöltként vaonok számoniartva. A porfirinek a bem szintézisében elöfordídő természetes prekorzerok. Konkréten, bem akitár termelődik, na pmioporthrn IX-be (Pp!X), a forrokelaíáz enzim működése következtében w. jlfo'fe épül be. Mtg a Ppl.X, kblbnösen batekmry iótosxe:axitiz.álö, a tóawtek nines fo;os.zenzldzálö hatása. A teemrikában kőlönisle, az bedateinban is leim, porfe'irmn alapolö vagy poritrlersal kspeselatos foteszienzitIzálók Ismertek,
A öiteíkísikas hatás lóként az szingtsleti oxigén képzésén át valósat meg, 9 reaktív Intermedier élet Ideje a sebbe;; igen rövid (<0,04 ess. így. a Pt>'s elsődleges etíoíozikns hatásé; a lény expozíció során és az feó képződésének helyein váltja/ki, Az Os tehésjéltkei (hisziidln, irlptofett, metlonin, fosztein lirozkr;, OkiA-set (gnansró, tellteden zsírsavakkal és kofexzíerol reagál és oxidálja azokat, A PDT egyik előnye az, hogy lénynél; nests hitest szöveteibe feltehetőé;; nincs hatással, azaz szelektív PDrdsatást érhető el. feagyntenoyiaéglt siolmmeniáete tbglalkezlb a Pl)!' alkalmazásával nem kívánt sejlpopnláeiok - példám neoektszilktss sebes ~ maesolásábats. A szabadalom hümíkozásokbao szántás tátödinamikas; vegyhlétet ·· önmagában, vagy eélba irányhó ágensekkel egyen (példáét, neoplasztikos sejtek réeeplórdétersiduánsal átfesti immnagleimliostk a komplex, seltspeeitlkasságái: javítják) - leírására kérőit sor. Bizonyos fotokémiai vegyaietek, példán! hemasoporlirio-szásznazéhok,: vefeíárő képessége, hogy öaganaósejfokhao lökaítxálöölaoak, Ilyen eljárásokat és vegyületekéi ittak le a. 173317 az. oorvéglai szahsdsísni iratban éssbilö'Bl s.z., I7ŐŐ45 sz., I?ök47sz., (3(1745 sz.. I7Ö73Ő sz., 591991 az,, 7100499 sz., és 391491 sz. norvégte! szabadomé bejelentesekben, Az ilyen 9197' eljárások, a vmeornkiáraknak a sejt gsszloiesáS esedményezö ronesolásától foggenek.
Máslefol, a WO 90.114492 sz, és a föggőheb leve W€>· 99/54495 sz. nemzetközi közzétételi irat olyan, eljárásokkal foglalkozik, amelyekben a fotosiinamlkós hatást, a máskülönben a membránon áthaladni nem képes, moiek alaknak a. sejt éltoszöbáha történő bevitelére alkalmazzák, mégpedig oly módom hogy a bevitel ne eredményezzen szükífezszeróeo széleskörű sej teot;eso lést vagy sejthalált, őzen eljárásokban, az foternaüzátes kívánt moieknlát és valamilyen fotoszenzlllzálb vegyüieles szsmnkán vagy egymás otán a sejtet; alkalmazzák, melynek köve;kezíébeo a foloszenzlílzáló vegyidet és a moisknls endoelfezissat vagy valamilyen ;ná\ ötön az eodoszomákba. lizoszdmáköa vagy más, iniraeelfeláris membránnal körülvett komgartmeotamokba tffeiszlpkáfodlk.;; y : : : .. 1 :: . ..·....
A sejten együtt vagy egymást követően aikshnazost (előnyösen kttlön-köiön és egymást kővetően}, Sratiszlnkálm kívánt mőiékfeár ős a bgoszenzttlzálő vegyőieiet a volt egyllíí, ngyanabba az intmeellniárls kompaArnesitemha veszi tel (száz ko-irsnszfekáelő löriémk), A sejten belől iniernahzálni kívánt molekula a sebben ögy szabadni let, hogy megfelelő baliámhosszdságö tényőesagárzás tintására aktiválódó a fotesxembtizáiö vagyaiét az mzmceiimáris kötnparbosnbao membrán jajnak xoaesolását eredményezi, ét ezt követően, a foteszesmllizálö vegylrietseí azonos komparrmenintnlvm lokalizálódon, híternálizálrt; kívánt melokaW5>2Í5/SC?
la lélszahaásl a. eiteszolba,: Ezen eljárási „Idíokémlai ínte?psdzáa:iónsk” vagy ECi-nek nevezik, Így, ezen éljá-sisok áspisé lépésében g sejteket teayhiiiésitak tesszük ki, ittelynek aredtnényeként & kérdéses mplekala felszabadni abból & kosispasőaeotamhöi, asaelybeo a feSoszeoziSizáió vegyülő! is egyidejilleg jeleit volt, és kikérni a ehoszoiba.
Cgy gondoltok. begy ezen e párás bárókon nyá tere lém lényeges, kegy a besngárzás kivitelezésekor & lotoszoitzlrlzálő vegyüld és a citoszolba felszabadítani kívánt molekula agyanabbaa az Inhsoelinlátls konipsrtinentunihsa legyen lesen. Azorsban, azóta égy tatallak, begy bár a roolekníák hasonló PCll eljárásokkal ügyre; bevihetők a sejtek inttsszoijéha, de a hamvé; történő besugárzás nem féttétleaijl a végső lépés és az eljárások nem függenek adók begy s féoy expozíció idején a transzferáló; kívánt motetóa és fstoszeszitizálő égess tsgymiabbso az fstraeehidárts komparbsedazsfeaz; legyen jeles. Ilyen eljárásokban, a Ibsoszaazlitzálö ágenst étlütkeztesketjök a sejtekkel és akrlválbatjnk roég: az imesnadzálni kívánt molekulának az -érlntkezseten sejt elinszoijnba történő bevitele elés így annak edetnae, begy az Inteínsüzáhb kívánt molekulának és a sbroszenzítizáló ágensüek sest feltéttanal kell jelen lennie agyaztazott iottaeelhsláris kosépartmentombe» s tésyhesügézzés Idején, a osolekula belép a sejtbe és a eksszsüss száshtödik, Ezeo eredmények részletesen le vannak írva az atábbl, ölggöbsn lévő oemzetküzl bejelentésben léből. -aovensber 29, The Norwegian Endrém 1 bsseéal Research fktsndatíon, „Cilosztdbs iráüytiiö moiaköia-bevedre szolgáló lőmkésblai imerüaiizáciő és eb járás vasé bejelentéseI.
Meglepetésünkre az· találtak, begy a PCI Stjásésok és vitstsveklorok kombinációjának alkalntazása jelentős tnérsekáon javítja a vtrnsok átlói közvetíteti, egy adob: sejtbe irányaid génbevitel;. kővel íhbskénőai reagenseket már alkaünzzaak a gyógyászaiban jDoaglterty és: nslsai,, J. Hal, Caneer iáét. 90, kkP-Óőí 1 I99b)j, és ezek ékalébas nagyot; spoelítkasak és esők néhány meliékbalásük vaa, a kiét teehsoldgia. sgyértnÍtnő. lehetőségéé biztosit az is vivő: génletéosa hasékonyságáesk és spediikasssgáoak javítására,
Így, a találmány eljárást Isomrles egy adott molskaía sejtbe történd bevitelére, amely eljárásban a sejtet a bevinni kívánt, vlraseredeíts. boolozőval: asszociiW molekitiávai érintkezieljak, és a sejtes a íbsoszeozltizáló ágens; hatékonyait aktiváld brafáathosszóságü lénnyel sagérozzok be,
E lépéseket végrehajthatjuk barna b en olyas alkalmas sorrendben, amely biztosítja:, hogy a végeredmény a vtraaeredeto hordozd felvétele és így egyben a sejtbe feovisni kívánt molekula lőlvétele, és a kérdéses nőiesek; ínletnailzáeidja lesz. Λ találmány kivitelozéséaoz a vlrnsoredetn hordozón és a. hévben kivám rno lehelén kivin más molskalák sem szükségesek,
A. leírás szerinti értelemben, a „sej;” kifejezés magában fogialjé. az összes enkariöta sejtét. Ideértve a rovarsoiteket és gomhzésedesü sejteket, és ideértve a szootatikes és ésiraseiteket is. Reprezentatív „sejrekttek” tekintjük az aléhhiskab az összes eonöserededt és sest endöseredefü állati sete sövény! sejtek, roverseitek, götnbasejtek, protozoának és grotoplaszíok, és: Hőnyiben emlőseredetá sejtek, például emberi, egér, patkány, maoska, eb,; oh, ló, teltéit vagy keeskesejtek.
A leírás szerinti értelműben, az „Imsroailzáaső” kifejezés: a sejtekbe hevmoi kívánt molekulának la teirásbitü néha „nmtszicrsmhekolák' néven enoíljökk vlroseredeső hordozóhoz kapóséit vagy anélküli, a e konzolba szél látását jelenti, A jelen esetberr az ,. η n ere a lizán m ki leje zésbe tarirszlk a be yhml kívánt: „ adott: eveibe· virosetedets. hordozóval vagy aanak részével kapóséit - moleknia relszabadhása az béraeelho iártsönetitbrán köteti kotitpisrtoteitiarrmkbéi a eitoszoiha és sántáit esetleg annak hassztbre a sejistagba, lla egyszer a taolektila rsár imsraalizélődeh, a ialéitoány szériád eljárással összhangban, a snoiekalát a sejtbe bkPae-ClHSti ihidtlzőzd „hevlítnek” íbkhpjttk.
Az intyaeetioiárls iátemkránra korlátozódó komparirmmhms lehet' károbiyeo, sejtben jeienlévó koínpaAntentont. hiiksyös, ha a keánparirnsnáttm tnentbráitvezíkoipm, khföpbse»· bst ondoszArna vagy iizoszóota, Azoobits, iotraoethdáris koPípastmeníütn lehet a Ooigi-készöiék vagy az endopiazmatikos ^eífafem.
A leírás szerinti érteleriiberi, a „ííep általi mivétel” vagy ,,traossdokáeió'· kiáéjezés a:.·?, m-ersrdszáeió egyik lépését jelenti, sntsiy során á sajítttembrábhoz képest ktilsbrmk tekinthető mofetolák vagy eráltások a sejtika bekerülnek oly módos, hogy azak, példán! endoeitözissal vagy más megtolelk felvevő iáieehztrztsnsSsd ípóldótd, intraeelieiáris meftfeíánnt korlátozódd kootetetmestitrmho - példsoi endopkzztssaáikes redkahztn, Golgteiesiek, iizoszóínák, enáoszöhiák, stb, - vagy azzal assizoémlí éilapoi jvának) a rejtnemsbm-^ khlsd rétegéhez képest belső helyzetbe ksrhmek,
A leints szerint· értelemben, a sebbe bevinni kivert megleieiö „mófekulák lehetnek bármilyen, vioiseredelü bordozdval, vteesvektosral vagy virnsrészeeskévoi ~ másnéven dstaaszfermofekniákkar ósezekapssoibatö meletóa. Az ilyen motekntek általába?? nakieinsav-motekalák., és bseíakaszkatiák a sejtbe deviáns kívánt teljes bosszáságó gént y&gy annak itsnkd<;náiis iragmentamát, vagy tehet példáéi a gén telies kódoló szekvenciáját vagy a:mak Imrkeionátis izagmeoínmát Wataó cDblS-raotekola. Esetleg, a riokiéineaV'· tnoteküiák krkiolteatmtk aniisseasz kted· noüekteaka·. rihoGíneket, aptenterekét, oiigonnkieorídbkát vagy1 iriglex kiakskitáaára képes öbgasukleeíiáokat vagy traaszkrgxhós rektori „csapdába ejtik' BNS-s és így tovább. Ei&nyös, ha a nokieinsívv-anotokttiák 10 és áOtiöö bázis kdzdtíi iiosszáságissk, példáéit 2 b-1 bőül) bázis hosszasé a iiak,
A tetess szerinti értefernben, az „összekapcsold* kiiejszés a viroseredetö hordozóba, v;r nevek tor ha vagy vlrasrészeeskébe épisett vagy azzal vakba ilyen mórion kapesrsteiteth álló - példáoi virosmoíekáiíi gemmájába beépített vagy a genomtól elktbemive, de a virnsrészeeskéimn azáiliteb - moiekttiára vonatkozik, Általában o sejtbe bevinni kívánt rnoleksttákat beosotmtgoijisk vagy beépítjük a virttsrészecskébe, azaz & vtrna köpenyébe· vagy kapszidjába kspszüiázzwk. vagy építjük be Előnyős, ha a tcanszporíáim kívánt motetels poSfePkfeoisd és előnyös. ka a ntetebatei bizonyos, a konsteokelónak a virnseredeiir bortiozóba történd beépítéséhez szükséges vteosanxtető elemeket tartaiasazd, vitális koostrnkclöka építjük ke. A traaszeoriáhb kívánt moleknltti, példánk a viresezetiehi hordozóban lévé klónozó helyre klónozhatlak. Esetleg, e trdsjbonságok biztosításában kőzmoitkodö két vagy több, különálló motekoiát is aiksimazhstonk az alábbiakban leírlak szerint. Ilyen vSzosrbszséskékCi k ivóin stehaiüok aszerint, hogy önsnagekbao képesek tebetcek-e vagy sem Sórsöshi a sejtet, atnennythen dataaankban képesek a sejtet fertőzze, kiválasAharjttk. a virnstószeeskéket aszerint, hogy sejten belhii internálizálás esetéit, replikádé és a sejtből szekretáiödo, áj vtrnszészeeskék összeszerelése céljából kaszeositják-e vagy sem az attnogée sejiszsrvezetez Azonban, génterápiás vagy más te vivő alkalmazás esetén, ábateitan biztonsági okokból a vhosvektoíokat ügy változtatják meg, hogy kát képesek, a gazdasejtet ntegtetrözat, azonban nent sódnak repilkáíóíhzi, tg vtrionokai összeszerelni, és Ad sejteket tetsözni, azaz a repiikáeiöi irtkompefenssé teszik, ilyen változtatást bármilyen alkalmas módon. el lehet végezni, de kényelmesen ágy történik, hogy a. viras replikáé tójához szükséges gének némelyikét törüljük és · adod esetben · beílkszijak a megadott: helyre iranszfetábti. kívánt, terápiás génekéi. Azostkán a leirásban magadott teehrtolögia aikáisnazhatö regnkáetdra kompetens vagy repbkácjóra korlátozódé vtrnsokta. ínba példáéi az ONVX-tS inteni és mtsai, bísánse Med, b, á?kAik5 (dkOö)j, vagy a ámpev .stespfev vtrns dmidioklnázáf ködolé:, repiikáejóra korlátozódó abeaevimsok [Wildner és mtsai., (lene Ther. 6, ó'Xbd tikkk); WSidoer és másai·, Gaocer ites, db, 4ΚΜΊ3 kkkSóA ttegö tedöAsdb (1999)1, vagy például repitkálódó sferövktzsok (Kteman, Előadás és kivonat, az Eytópal (iéstseráplás 1 arsaság 8x telálkozőjts, btoekholns, 2000. október ?- I@|,
A sejtbe bovrtsni kívánt teljes tttoteköláris erfeteet, azaz δ bevinni ki vasi tivslekólát stísrgáhsióíögteió vtraseredető hordozót vagy a bevinni kívánt, víraseredeln hordozóba kapszsstezste toötekalát s leírás azerfmí értelemben „transzfer partikéferítrsalr' tsevezzák,
Általában:, a s;rl:ák?tá??y szerinti eliásóssal a sejtbe bevinni kívánt nokíessssav egy ;;so?t vlras ateste kostsírokeié ~ péklátsh bizonyos, a ksssisteokohtesk a v?r??se?vdetá bísrótszóba / vtebupszidbít Z vimvekíorba törtette esotnagíjkteáltoz: szükséges, vís-nseredetü demeit taslaltssszó ·· vírtsserestelű piaztsid részét képezi, íteeheg azonban, a bevinni kivitel oyktetes&v leket egyetlen ístokknia része ~ pestetek egy adod plazottd és egy siskát ntáso?lik otolekola, antely tartalmsza az első tnofeknW l;tttaiínaz?i virnsasesiete bortksző fejlődéséhez szükséges szekvenciákat. Ezeotékib ka a ’takkditsav sejtest beteli ntnködése tkgg az áltekt ködök fehérje exptessziőláídl vagy az abból eiőáiiifeti RNS-idí, a tístkleiosavas kér?yskoese?t övezhettek toegleleló sxabiiiyóző szekvenciákkal (például pssttnőterekkel) ssreok biztosítására, hogy a teteéi eélsekbes? stsagas szltstö expressziét érjók eí évest szabáiyezó eiestsek származhatnak virosokitei (péklássk a ostötnegaiovlrasbói: származó CblV oovaose:; vagy bármely más utegtelelö szervezetitek és a nakieiasav áltel kódok: fehérje jó exgressziőjál ieltelővé tevő, stsegfelek? vhrtskoststrsikteők tervezése a szakember szántára ismert. Pékiáte, szövetspeeliiktss vagy szabályozható prosnófesvbet askatetazhateste szóvetspee 11 siess, betegségre speesiiksts vagy szafeáiyozbsstó expresszié eléréséhez. kéksaok szövetspeelriktss groitsóterkéssi asfethtraziíateik a tsteiatsostíárs speeíbksss ikezteázgrosrséíesv Szsfeályuzhatő prcesteterek, retet pékktei tesraesktírotes szabsiiyezhatő promófersk, tel isisseriek, A ktiálntástybast aíkateiazhasó spetedktss vagy szabályozható protnöterekre példákat tsráteatssrsk az ssxteatetribasx literi, kestttti. Orossí. 23, íSá-íék (siteög Mdfer és W'beiao, :1itass, (teste Thesssey (199?g hSeíteibeek és .Moher, Trenos:(leste;. ló, 124-1 ál (zltÓÖSt Snear, Antieaneer Rés. jő, 3223-32331 (1995); és a sz-egadel?: hivatkozásokban],
A trarsszterstsolektskivzl asszociál) „vtrtsseredeíü Istaxtsízé” lehet hámóiyeo olyan vírtssrerteszes· antesy tehetővé teszt, hogy e reraiszer vírasesvileit; hordozója asszoeiálódjots, beépítse vagy ksnszniázz?? a sejtekbe bevárod kívánt molekulákat. így átetíábaa, a virasrészeeskébe vagy víroskagszfeb;? escstsagoh irastszSvs'iSKSíektííáb. és a ..vtesrsrészeeskék”, „vlroskopszid” és „vlmsvektor” ksikjezések a leírás szerinti érteiessxbeti „vsroaereoete hordozó)” jelentessek, A leírás szerteti értetesttbeo, e kifejezésekbe nesn tartozóak virstsalaprs plazntkfek vagy DBS, bár Ilyet? gksxtete esetleg sí:k;ds;xazh;rte vistssetetlete hordozó esés tiltására.
A taiábsiársybast alkalmazhatő tnegieleio vlrtssret-dazerek közé az alábbiakat sorsi lak: adetsovsrasok, adesstr-asszeeisiit vittssok, retrovírusok, lettíivtetsok, Berpes vírusok. b&ktetlotegok, irtllaestza vimx., betétes teres. Vseelros vitess és Baktilovlrns, előnyösek tsz alábbiak: sdenovítassfe, adotto-asszocláít vírstsok, reloiviressik letitivirnsok és bakiésioíagsxk, A talál?xs?tey szerltste eljáiésbíat ekteyós, ha. adenovlros-reratezeti alkalmazónk, A telábssatsy szúrni? aikalasazásban, a virsss természetes kdsAk?te;tyek közölt eiöibtxhítefetstsáját a kívánt tulajdonságók bezxáadósávsfe és a lehetséges paiogenitás vagy más tsets? kiváró tsseitekhasós otbtistializáiása céljából mödoshjnk. így, e vtenredetti bortkszök: a. génterápiában rotistszerdest alkshaíszoÍt és a szakesssbef szástiára jós Is-eseti vírstsok olyast változatának tekitsllsetók, tsstselyek tssegsarháh a lórsóskéttt alkssotsazoti vktg esszesseiátis és azossoslibato kootgosteósed.
A tesrás szeteiül érteietrsisest, a Jóteszeazkizáki ágens” klleiezés olyat? iótoszenzitiv ágetsst jelet?!, a;;ttey - feioakiiválé báty aik&lstiazáístkor - eiloioteksts ferttsává kostvetteiődlk vagy eilolordkos esoptalok képződését
93935-2 í 5,91(1 H14Ö2Ó26 idézi ein. A találmány szedőt. alkahaszésttokerülő feroszaozltizáló ágens i tunety oikáhmtllt, és előnyösen ebér a fesnazfer’rsolekfeátöl} kényelmesen lehet bárntilyen oly&o ágens, amely iníráeetiotérts konapartmenmosokbs, előnyösen endtmómákba vagy hzoszőrnákba lokalfeákxllk. A teelmikúbtm küiöntsfe Ilyet! tbioszeíizttizéíé ágensek isotőrtek, és ezek az irmlelonfean le vannak írva l'peldáoi, WOÜ6A;?doz se, nemzetközi kőzzésétgii tratk Ebben a vonatkozásban a dl·· ős lesraszabboált atamífeam-'Tsaioclsnm (példánk, ArlfeS;s}:, saoífenálr feüslealtporrirlnek {TPFS(ig nifeskék, els klnrszármazékok, uroportlrta k filfoerstdn, bennaoportírtn, ás metiléokák ágenseket emlüeuéok, amelyekről kimutatták,· hogy tenyésztett sebek endoszomálbar· és tizoszőtnálbso. lokallzálödnsk. E lokahzáető a legtöbb esetben endoctfeiükns aktivitás etedméuye. így, a loíosze?nobzálő ágén» előnyösen olyan ágens, amelynek felvétek; a üzoszömák vagy endoszőmák belső kotnpartmemn.mábs történik. Azonban, egyéb, más tetrucellaláds komparteomamokbe·, például endoplazmsütkas retlknbtmha vagy Golgs-késsüiékbe, lokalizálódé fotoszenzitizálő ágensek is alkalmazhatók.· Az is elképzelhető, hogy a mecbaöiatnas akkor la tnökődik, na a tbiokémlai kezelés hatásai a sah más komponenseit bassz, a ntembfánrá korlátozódó kösnparbtsemmmtkiől eltérő komponensek} érik. így például, az egyik lehetőség lábat az is, hogy adöfekétmnt kezelés intrscelksláds transzport vagy vezIkiüsaoéAziő szempontiénéi fentos molekulákat pusztít cl. ilyen moiek Ah nem feltétlenül a membránra kodátozödö kootpartmentarnokhan helyezkednek el.
Alkalmas tox-szenzltizáló ágensek osztályai közé az alábbiak tartoznak: ixartrlrsek, psozeléook, tsattoeferunok, pttiporlooks klötvegyületek, bcnzeporlblnek, naüaloeiaoxlok. katlonos festékek, letsztelkllnek ás lizomotróf gyenge bázisok vagy ezek száttttnzékat vagy prekurzorar ÍEerg ős misei,, 1. Ehetoshem. Fixánktól, 65. <103-469 (196?)}. Más; alkahnas fetoszsmzifeáló ágensek· köze tartoznak Sexarfelnck, teoferbldok, podkének, bakferioktöskfek, ketöklötídofe hematöpomrimszármuzék és ónnak szúmtazefcsi, endogén tbtoszeozltfeálbtei ladnkálhofenk Samihofevplinsavvat ás sorsak szfetnazékalvai, Ibsoszsozsözálö ágensek dinserei vagy lotoszenzitfeáló ágensek közötti egyéb konlngátomek.
Előnyös, na a ünorzcnzu izeid zzsbad fcr-natxm azaz bármely más tnakrotnolekuláboz..nem kornugáüan van. Klbőnöscn előnyös, ne a ibteszexzÁizálő ágens a vlmseredetű hordozótól oiknlőíddl, azaz diszkről etkaé;;. Azonban, a ioioszeozldzátő esetleg lehet .ssszecíáiva, kapcsolva, vagy konjngálva hordozóhoz vagy más molekulához az alábbiakban leírtak szerint, például eélőabátaső aolltestbez vagy hordozóhoz, például poültztnhez, kapcsolva. Esetleg, bizonyos körülmények között, a tbioszenztdzátö ágenst kapcsolhatlak, asszociáiiatbagak vagy kotfegaklstbakiak a vtroseredefe hordozóhoz vagy annak egy feszéhez (például, t; roirovh'nst az övező lipidmem-btánhozj közvetlenül is.
Előnyös Ká<;szenziilzálö ágensek i;oze tartozik a ΓΡΕΕ.<, l'bbS,.,, Allkrfe,. és más amllfil tbtoszcazitlzálök..
A találmány előnyös meg valósítási .mód|si;han, a találmány tárgyai olyan eljárások képezik, amelyekben a fetöszenzliizálő ágensek az ő-átfenufevuíinsav vagy ő -ammolevuimsavnk észterei vagy annak győgyászathag elfogadható sál.
Az Ilyen észterekben az ő-atnlnocsoport lehet szubsztüuált vagy nem szabsz! tfeáil, az utóbbi esetben ÁEA észtetekről beszélünk,
Elonyössbben, a találmány szerint; alkglmazésban, az A LA észterek az s-atoinofevnknsavas észterei, amelyek adok esetben, fekaoplokkol szsfesztfekutak, azaz nlknészferek vagy szubszlzinálé alkllészmrek,
Kényelmesén alkalmazható AEA észter az 1, képlet szerinti vegyület
RAik-a-lA-'Ök:rtrC!bCO-OÍk' <1) tanéi, R' sebei olyan sékiiesoport, amelyet - adott esetbe» · hírfroxé~, aikozn, acifosi-, síikexikarbonlfoxh, amfoo-, arti-, <mo- vagy hwöcsöpmíokfcsi szabsztítnábunk, és - atkát esethet; ~ tnegszsÍkifodunk oxigén, nitrogén, kén vagy foszforanenokkai: es Ry anssiiy R.!-ei azeuos vagy átlő! eltűrő lehel, leshet bldmgénafom vagy k1 esoportá ti:; atmak sóst.
A szobszdtuáh lő aikéíesopör; sebei egyszeresen vagy többszörösen szabszíbsiáli, Így, az alkalmas R* csoportok közé tariozik például betű Sznhsztitnáit sdkib, mkoxinikib;; hkiroxísikosáslkit-·, polihldroxlalkil-, hídi'oxipöllaiktlénoxis:ikih és hasonló csoport. A leírás szerinti érislemberg az „ac1Γ kííbiezés magábstíí foglal karbozilái- és karbonálcsoporiokaí, így az ssiloxi-szobsziduák slküesöportök közé u:r;oz;k példán! slktikarbnotfoxi-slkíi csoport is, ilyen csoportok esetén, bármely alfcíléncsoport széRatomtetáima. előnyöseit megegyezik az síid ksopormk esetében az alábbiakban meghsáátoaoliskkai, Előnyös.articsoportok bűzé tartozik fonti- és monoelkénsos, 5-7 tagú heíeronrontás-esoporSok, különöseit a ícmlesoport,. és az ilyen csoportúk adott esetben lelteinek szubsziliuáltak.
Repmzernxáív szubsziforaii IV sikiiesoportok közé tartozik aikoefoteirk alkotóéul és aikoxlpropn·' esogort, vagy aeboomeni-·, afolofoeíii-, és scbexipropíhesopörtök, példám pivnloiioximcui.
A találmány szerinti fotoszenzitizáld ágensként slkaimaxhaiP. előnyös Λ1.Λ észterek keze tartoznak azok, s:uei vekben az R' csoport nem szubxxt íróéit foki leseperi és/vagy az R'; csupor: lodregéísaíosn,
A leirés szerinti érieleotberi, az. ,,niki!';> kiíksezés jeleni bátrfoiyen hosszú vagy rövid léned, egyersesióncú vagy elágazó áldás telheti vagy telítetlen szénitiámgéít-csoportpL A :elítetien alkllesppert lobéi egyszeresen vagy töbészdrdsen ielitSíien és magában fogialia az síken;!-, és aikioiiesopormkai egyaránt. Az ilyet; csoportok tartalmazhatnak akár Ab szénatomot is. Azonban, előnyösek az; olyan aikilesoportok, amelyek maximum 10, kötőlbe!fo k, eiönyösehnen maximum e, és különösen előnyöset· maximum 4 szémnomöt tarts! tnazrmk.
tvölönös ügyeimet érdéinél az ALA-metilészier, ÁhA-eriiészter, ALA-ptopiiészier, ALA-beplilészter és A i .A-ok tbészter, és ezek sói - amelyeket a taiáimány szerinti alkalmazásban előnyös íoioszenzitizáló ágenseknek lektnfonk,
A találmány szer toli eljárás alkaimazbaid ín vöm vagy ín vívó, akár szisrtesfokus akér pedig helyi, út sfog vagy ex vivő keretesre. amiket is a kezelést kővetően a kezeit sebeket a testbe adlak be
A találmány szerűid eljárás kivitelezését illetőleg, a. sejt tblosaenzfozálö ágenssel és ettől elválasztva a virnseredetú liordozóv-ri történő ,,érfotkez;eiése:í bármilyen kényelmes vagy kívánt módon elvégezhető. így, ha az érluikezteíésl ízí vfox? végezzük, a. sejteket vizes tápoidaiban min; példát:! g sfotek tenyésztésére alkalmas tápnlPsTöan - kényelmesen íenntsríhstpis, és a megielelö időpontban a totoszen zilizé léi ágenst vagy vírnseredeta kérdezői, a szükséges: kőrhimények biztosítása ntelieíl (példánk raegiéíeio koasenlráeiób&o, és megicieió hosszúságú időtartamig), egyszerien hozzáadjuk a tápoldatlmz;
A fofosxxmziéizáló ágenst megfoielő koneeniréelóhan, és megielelö bosszúságé időtartamig történő érfotkeztctiük a sejtekkel; Az alkalmazóit konkrét tbioszenziuzálö ágens és a sejt:ipa;; Ismeretében, s szakember mién eljárásokkal képes könnyedét: meghatározni szükséges konosnirúelö; és az időtartasnot. A íeteszeuziílzsid ágens koneeniráeimái ágy keié megválasztani, hogy ha egyszer bejutott a sejtbe (példánk a sejten belliire; vagy asszoe iá iádon a sejttel, vagy annak egy vagy iőbb kompínámenínmával) és besugárzással aköváittsk, akkor egy vagy töltő sepaikotút elpusztítson, példáéi egy vagy több iniraeellnláris kö-rtpartmentam tízisét vagy pusztulását okozza, i'éldáui, a példákban leírt tbiosaenxlSízáiö ágenseket például id-dd pgAul boneeaíráoíöpae vlfoSé-215ÍSÖ aikslmazhatjok, /» Vítsr? aMmazáshoa o korioebítóclötaKoméoy áitslában szélesebb, például ŐfÖs-5tkí ggho:i. berberek ;.« vöm kezelésem a mteszenzmzzlő ágens konoepnáclőja szrszfötmkns beadás esetén 0,ö5~2ö rt?gAesttöo?og kilogramm, top'ikáhsan alkalmazva pedig a ioplkálls leivitélre szolgáié okldszerbe?t 0,1-20%. Kisebb altatókban a kopcéoiráeiötassoas;tny az: előzőektől eltérhet, wnb® a fentiek szerint beállítható.
A sejtek ibioszaözitizáló ágenssel lörténö loköbsiásdnak időtartama (ázást az „énnlkeztetésí Idő'' sebány pesetái több óráig, például akár -lk óráig vagy tovább, tarthat. Áa inkubációs időt eiyat· hosszára válasszak, begy s tetesseiszsilzáht ágensta nregfölotő sejtek tét tudják venne
Miután a sejteket a fotoszonzitizőió ágenssel Inkubáltisk, adott esetire;? ez mliubálást tovább iblytatkáiíök, de náosxenzmzáiö ágens stélkfíll tápolőatóaa, majd ezt kővetően sugározzuk be g sejteket iétsnyel vagy adjak a sőjtókbez a ir;msz:iér;noiekuiáí.
A. tómsztfemtoiekola lehet bármilyen, a föntiekben tárgyait nukteiosav-snolekizbk amelyet megfölelő ideig a megfelelő konceüPucléijúóiéxssü viztsseredeSő brurlozövso asszeeiájsüu éflntkezSetüok a sejtekkel. A ylrasesudető hordozd meg ihlető kozicenirácsöjót a kérdéses hordozónak a sejtbe történő iéivételének lukákeuyságs és & sejtekben elérni kívánt végkonceniráciö függvértyében határozhatjuk meg, A PCI, vMtsererletti hordozókkal kapcsolatos egyik meglepő előnye az, hogy a vh'oszészecskékei aí&esóoyabb kramesmáelőban (például, akár lutszad annyi vMssrésxecak.e) alkalmazhatjuk a Irasntxlékesöveí iucgegyczö hatékonyság elérésére, A vauseredeti? hordozok Ínegíctelö dózisa függ az aiksíroasandő vírus l:!pos;itől, és ~ in vivő beadások esetés - a beadás indájától, a közelid kívánt betegségtől, tiltok hegy eeíhajaitsiö ligandumokat alkalmazunk-e vagy sem (lásd alábbi, stb. Daganatba történő injektálás esetén, nett? repbkáiödő adenovkos-erdeíá vektorból jellemzően lö’-dö'” ieiepformáló egységet (piö, fertőző részecskék)-adhatunk be jpjekeiöiikétii. Ez a mennyiség általában otegféiel körölbvlöl llm-lö” Itzlkat vírosrészueskésmk, mivel egy „átlagos'· vlrnskészííméstybetf a fizikai vkosrészeeskéknek esek köridőétől 1% okoz fertőzést. Replikáé ló-kompetens vírusok esoíéheu, meg a lentieknél is alacsonyabb dózisok Is hsáékoayak lehetnek, példáéi akár IÖ : részecske, példáét EK- ygp to:!' vagy 10'’ részecske alkalmazható, Másfelől, ott szlaztesnikna beadást uikslusaziuik szükség ki?et a dózis növelésére.
További megfigyelt előny ne, hogy a tnwztópeiő hatékonyságában nagymértékű javulást érhettünk el, ekér a kísérletben alkalmazott sejtek lö0%-s Is tiVioszfekütlődik, Az Ismert: eljárások aikohnezásávol, korábbat? ilyen: szinteket ee-n lehetett elérni vagy pedig szörnyen magas virusdozisokm volt szükség. így, .& találmány szabót? eljárásokkal az összes sejt több mint 5Ö%ot, különösen előnyöset? több eddi 75, Ön vagy ö52%--a «setében érhető el tó; tiszté ke lő.
így, a. leírás szerinti érieíeinbas, a vírussredeíü hordozókkal kttpcsoiafban, a „irtmsxiékctös Idő’' vagy a „sejt álfák fél vétel tdöüuisooit - azaz a hordozónak a sejttel történő érintkezésének ideje tehet néhány perc vagy akár néhány őrt?, példám, a iraosziékefös idő lehet lő pere és lb~2d óra közötti időtartam, példáéi 1 $ perc es KI óra közötti időtartam vagy példán! is--2Ö perc és 2, 2, -k vagy ő óta közötti Időtartam, A uteguövekeded traoszfékelös Idő eredményezheti a kérdéses hordozó otegoö vekedeb tél vételét.
A vouseredeiü hordozókat alkalmazhatjuk a besugárzás előtt, mát? vsgy azzal egyidoben, I ts a vlruscredeió hotdozökot & besugárzás után alkalmazzuk. tsz: aíkabnazás iötéésthet a besugárzás titán, példáié Ö--4 vagy ö-é-4 órával, például tőid? nánt 1,2, 2. á, lö vagy okár 12 hsával. Adott esetben, a víraseredetö hordozóval történi érioíkezieiés tbán a sejtet hordozótól mesáes tápoldatőt? trtsnszférálhóönb: példát?:! több, néni 5 percre, mütt péídátif 15 pere és 2 ónt; közötti ideig, például 2ö perese. Ke. a vgussredstü hordozókat a besogtlrzá» előd alkalmazzak, sz. alkalmazás töitésvhei a besógárzás előtt, péid&oi 12 óiávat, pólósat I? perc és 2 őrs közötti
Íöiö55-2I5iSG kIMbPözö idővel, adóit esőiben úgy, hogy ·& sejteket egy ideig a hordozótól mentes fépoláatbuu tartjuk.
Egyértelmű, hogy a vlmseredehi böráöző és a sejt énnfkezödésévtd, a tránsziékelöra biztosáéit Időt, ár mvo beadás esetén hunyniuk szabályozni, .Azonbnu,. ez. ériaíkezietési időt szahályozhatjük megfelelő ériiákezretésseh és ex ovo,ár e;o-o vagy bizonyos típusé helyi beadás esetén végzett mosási lépéssel.
A Ibtoszsnziíizáió ágens és a bevwü kivám ózoiekidával asszociált viruseredetó· hordó-áé»· hozzáadható a sebhez kölöo-khleo vagy együtt a lénykezelósbhesegárzásl inagetőzöen j'iásd WOWö'7432 sz. nemzetközi közzétéieh Irat és .a WOöŐ/5i4ü02 az. nemzetközi közzétételi kai és a vetők egyéb függő bejeimkéseket; The. Noroegias hadimé Hosphai Eesrami· homtdatioo, ..(keszoéyegkpy;;.iéjgglekgkgbeyőeks szplgalojéiőkémial hite?ydi®igk>.és .eljárás ehtrő, 2h01. novembeí 29-én benyújtott beieiőntésel, vagy a iómsaeozitizálö ágenst adják a sejthez először, saaiö besugározzuk és hozzáadjak., a vlruseredeiő hortkssöt .a ragzobeo lévő, és uzzsl pszhestrnmsats függő bejelentésbe» leírtak szerint. Az: utóbbi eljárásba», a besugárzást előnyösen s ááoszlérnioleknis. (ki, virusefcócill horáöző) suli általi felvételét mcgalőzőe;j végezzük. Különösen előnyős, ha a traoszfermőlekulát a sejtek a besugárzás után - például, a besugárzás órán d-d őmval - érinikéztfejuk, Esetleg, a .sejtet a teanszfertnofekalával lépyegéfeeti a besugárzással egyiöőben éxmtkezleijük.
Más szavakkal, a hesozárzóst végezhellők s vü-nsoredefe hordozónak a sejt 'bármely hMaeedoláris koinyartmentínnába vek· .felvételt megelőzően, vagy ilyen sejtes fel vétek kővakié a, biztosítva, hogy a toloszen zltizálő ágens· a besugárzást megelőzően bejusson az irüraeeltsházis kónspértejéntutnekba. fia á loioszeozitizáló ágéíss és a vlrúseredeíü hordozó, a fedsyol való kezelés ideiére máz bejutóit a sejt. imracelhdaris kompaórnentemaiba, akkor a lémmel végzek kezelés idéporüjéhon a virnseredető hordozó és a fetaszenzltlzálö ágens feltehelőeo Eígysoabhsii vagy más Inimeel'inláHs kotüparimonumtokban lokahzálósiok, A kötőnléte k-osrgxwtmzk vegekhez való hozzáadásának Időzítését a Α09ρ ő?á >2 tz. és WOOíkóékOz sz. nemzetközi közzétételt iratok vagy a velük együtt -.tüggőbeg: tévő bejelentések részletesen ismertetik.
Bármely esetben, a virzseredetü hordozónak a sejttel történő dttntkezfeléséoek, a sejt általi télvétetnek, és a seg iámé áiterovnzavámnk idötar-aom kalönlele fekíorokíóh példám a sejt típusától, a kérdéses kontót hordozóiék az alkalmazón konkrét toioszenziUzálö ágenstől, és a fénnyel való kezelés Idötarl&omtól, Ihgghel, Adott körülmények esetén, ezen időtartam meghatározása a szakember szánjára nem jelent .problémát.
A vh-nseredető hordozó beadásának ídőpraUju változhat annak: függvényében, hogy az: eljárást váró vagy ó? vívó végezzük. Az in vdzo eljárásokban, a ylraseredetü hordozókat általában egyidőöen érlntkezEsjük az összes eálseiíiel. azaz alkahnazás időpontja egybeesik az érhakezüőés időpontjával, például ha a sejteket ín vltro tenyészetben szaporítjuk., viszonylag könnyű a hordozót ériolkezéshe hozol a sejtekkel egy adtat iőópoizdmn. Azonban, in vivő eljárásoknál, a célsejtek és a viruseredető hordozók egymással történő érhükezietése egyértelműen siókkal bonyoiokahb és üteg a. beadás módjától, a víruseredetü hordozó hpesálöl és a célsejtek elhelyezkedéséíSh -Például, ha a vlrnseredeth hordozókra közvetlenül a célsejtekbe teájuk juttat»!, például htjekeiőval, a vkuserededl hordozók viszonylag gyorsan érintkezésbe hozhatók a célsejtekkel (vagy legalábbis azok egy részévei;, példást a beadás alán percekkel vagy néhány órával.
Másfelől, ha a vhasesedeio hordozókéi Intravénás: injekcióként valamilyen távoli cehe alkalmazzék, e hordozóknak tovább tart elérői azt a helyei, ahol ériálkezéske léphetnek a, aélssjtekheh Például, s beadás után 2d'9ó éra is eltelhet, amig elérik a eéisejseket. Ezen „utazási inét” Is számításba kell venni akkor, aozikor döntőnk abban, ángy- a zötoszénzldzáló ágens headáaénak és a besugárzás idopoohához lépes· mikor adjuk he a vlrnseredetá hordozókat. Természetesen, hasonlóképpen figyelembe keit venni azt is, hogy mikor adjak he a óhhéóó; lómét
ÍW12Ö2Ő fötoszeozitizáló ágenst Azonban, & b-g-nszfermöfeteteal ellentétbe;?, fonton az, i?ogy sz ágenst a besugárzás előtt megfelelően megválasztod időpontban adjak be nhisöz, hogy n besugárzás már az mérácelhdátis kőnypébtmemtíntokba felvett ágenst érje, így. kőttnyco kíföientheipik, hegy ;;.z ágenst a besugárzás eleit 1-72 drávai, például 4-72 órával, somi pádéul 4-4h vagy 4-24 órával, sdjnk be. Ismét, a vhnseredétő nor-mzík (és Így s Srsoszförosolekulákji -sejtekkel való é??nikezietésé:nél föntiekben tárgyaltak szerint, a lőtoszenzkizáki ágens beadásának, a besugárzás időpontjához viszonyított időpontja függ adói, hogy a föieszenzíiizáíő ágens mennyi idő ságit ári el a eölsejteket, ás hegy a célsejteknek mennyi Időbe telik fölvenni ;s>- ágenst, Ez az időtartam változhat annak toggvényébeit, hogy tsz: átjárás ő? sóm vagy g? «ász? eijárás-e, ás hogy a beadás közve: lenül a •eátszdvetbe vagy alsói távolabbi helyre történik. Minden esetben fontos, hogy a íbtoszenzitlzáió ágenseket a •sejtek toár a besugárzás időpont iái megelőzően fölvegyék. Az ágenst a seltekksl érírUkeziéíve tarthatjuk egészen a besugárzásig, példán: I vágy 4 vagy 72 árva át, előnyösen 4-24 érát· át, példát·; 12-21? órán út, ? agy a sejteket euavnbtha-.ok az énnikeztetésből közvetlenül a besugárzást megelőzően, példán 1 több mini 5 petceei, például I b perctől § áráig terjedő Időtartammal például 11 vagy 4 vagy 6 árával, ágy. hogy a sejteket az ágenstől mentes tápoldniba ésfvagy a tomszfermefekáfát isrtakoaző tápoldstha visszük gi.
Így, bár a helyzet .az ő? vlw alkalmazás esetén sokkal bonyolultabb, mmt is v/nm, s ialáltoány kiemelt koaoepelója még tusodig ugyan az suarad. azaz a beadás ideiéi úgy kell megválasztani hogy nfög a besugárzás előtt a lómszenziíizáiö ágens megföteio mennyisége érintkezzen a célsejtekkel és az ágenst a célsejtek felvegyék es vggy ¢.1) a besugárzást megelőzően vagy az alatt a irsnazförutoiekulál (és aoaak vkussredeiü hordozóját; a veit usár fölvegye, vggy a eékéliföt létesített elégséges ér? étkeztetés után vegye léi a sep. s fötoszenzbizálő ágenst turüförtazö vagy azt nem tartalmazó ítslrtieelhüáfís kempsrtmetltombn, vagy (hi besugárzás után a b'sosztérmoielíúia és az azzal asszoolálódoit viroseredeiú hordozó érintkezzen a sejtekkel a sejtekbe toriéoo fölvételhez elégséges Időtartamig.
Adott esetben, á fbíőszenziüzáloágens hozzákapcsolható, asszneiéliathalő vagy kopjugáilathntő egy vagy löhh hozdezőotofökulához, eéibajuiiatb tnofökulákoz vagy eélbalnhalő vektorhoz, amelyek elősegíthetik vagy főkozhadák a Ibhíszenxíiízáiő ágens fölvételét, vagy céibalráoyitbaiják vagy elszálhthatiák ezen entitásokat egy adott sejttípushoz, szövethez vagy fötraeeiloláris kosopartnteutuosböz: Itordosérendszerek például az alábbiak lehelnek: polhizln (példánk poh-L-lizio vagy poli-fö-bzins, pohedlénlmiu vagy dendrhwek (például, kailonos denfösmezek, mini: például föoperFeeték) vagy más gefikstlonok, dekitánszoliáh különféle kaflnaos llpldek, például 1X7TAF vagy lipoléketó, vagy „besper Hpídbel” föomtdázött kaiionos llplduk, mist például DOF.E, upöszótnák:. rekoosőtnsh: tÍX.'pazfikoliuonk, sztérlknsnn stabilizált llposxémák vagy vlrusrendszerekhöl — például ítdenovirus, förttlvlmsok és más retrovlrnsok, adsno-asszoeíáh vírusok, bakteriofágok, stb. --- származó külöaföle partlkeínmok. h nordozőrenöszerek őitaláhíu? képesek javítani a íhrmskoklrteílkáí es fokozni tudják a fölnszenzliízáíő ágens fölvételét a sejtekbe, és a Ibtoszenxlilzálő ágért sí azon inirsceikdárls kömpítronehiomba Irányíthatják, ahol az ágens aj fotokémiai iuternalizáoiö szempontjábd; kniősklsen előnyős, de e rendszeretek: álfaiébun ruucs m.«g ez u képességük, hogy a fönoszenzítlzále ágenst speeltlkas sejtekbe (példáai rákos sejtekbe; vagy szövetekbe irányítsak.
A víraseredutü hordozók szmién kgpesotkoiők vagy koníagáliathatőií egy vagy több Ilyen szálitfö omtekidávsk eélhsjnltatö otolekuiávai vagy eéihaíntíoté vektorral. Esetleg, a vlroszészeeske felszínén végzett bizonyos módosítás előnyős lehet a találmány szerinti aikaimazásbat;. Az ilyen hordozok aíkalmuzásábői ásfvagy a föisztrd mőtioskásnkbői eredő potenciális előnyök az alábbiak Isiseinek: (ft a virnsvektor bföföfökíföSél fernxtikoklneiikájanak és biológiai elterjedésének - rendszeriül: a keringés) Idő fokozásával történő - javítása; (is) á -vírus természetes receptorához való kötődés; képességének álcázása, amellyel lehetővé válik az hegy, a vírust más receptorokra (ás ezáltal sí vírus által normális esetben avas fertőződő szövetekbe) hányásuk, (Ili) pozitív felszíni töltés kialakítása a vírus vektoron, így az többféle sejthez fog kötődni és szakai fertőzni, ntítU: a természetes fertőzési wech&nízrmss sorár?:; (ív) ..elrejti” a vírust az Ímruunrendszereíöl.
Előnyös, ha vlruseredetü hordozói kapcsoljuk, asszociáljak vagy boni-rgáljuk. vahnoüyen hordozó snoiekolsvííí, előnyösen poi lkat sértők at tartalmazó hordozóval (például poltlizitr vagy fesperlfecluvs vagy kationná 1 igidekke 1.
Ebben a vonatkozásban alkalmazható- hordozók· például a pohkaiioook llstmttl és ssnaat., ömre Tlser, 6, iébd-lélD (1999); Areasoy és rutsal., bíene Tber, 4, )2-2a (1997); tkalds ás szítsak, í. Nenr-oebe;?:;, 72, 2i9§2122 (1999)) és a kadooos sióidéi: (Clark és misák, Csavar Ceno Pher, ö, 927-440 (1999)), Ebben a vonsiItozáxhasr, a íhlszfeí módos Ihksokra alkalmazható anyagok például a {xtlietilőn.’glíkol (Croyfe és Írássá., Bum, Gene Ther, CL 1712-9722 (20:)} és s pob-áB-tk-hidí-oGproplh-nsetakEiomid} 7ss·; psáimerek (Eeynmnr ás rnissr., .!, Geue Med. Suppi 2- 22 íYöOis}},
A. vimseredctii hordozók tnoíekuiáinak (és így a transzfer molekniáknak) és/vagy a íbteszeazitlzáío ágens, aseglsslőrozolí seiiiipasokha vagy szövetekbe történő specifikus W szelektív eélbajőtíatásóhoz, ezen esni sasokat asszoc kihathatják vagy korrlngábathafíuk olyas? speGokm. célbaju-tstő msdekrdákkal, amelyek elősegítik a transzfer mofekttln speelfekns celbslárls felvételét a kívánt sejtekbe vagy szövetekbe. Így, célbajiiónfe rnafektnákkal « transzfer molekulát és/vagy a feíoszesrzliizálői olyan iniracelltrláris koniparunontontokba Irány tthatltsk, amely a fotokémiai íniemaífeáelö vélj ára kbklnösen előnyös.
Olönléfe eetbaíartatő molekulákat stoknaztebnik [sása példánk Cnr-eí. Aun. ken- York Aeud; Seb kkb, )52--121 (1999;; Bilbao és rntsak, Geue Therapy cd Cuneer, szetk.: Wafdea és totsah, lilád.; Efenum Erem, New York; Pe;?g és Russek Cttrr. Cola. Bfetcebnsd. jő, 954-427 (1999): Wlekharn, Geue The?. 7, !íő~G4 Τί3·Οΐίί7>μΗΠΝ:ΝΗ(ΗΗΗΗΗΠΗ(ΠΠΠΠΗΗΗ:ΗΗΗΗ(((ΗΗΗ:(((:(Ν(Ν((ΗΗ7(ΪΗΗ((ΗΗΗΗΗ(ΗΗ(ΗΗ:(((Η(Η(Η0ΗΗμ(((Η;ΗΗ((((Η()((((((;ΗΗΗ(Α(((Η:2;Γ
Ezenfelül, Emlős megjegyeznünk. hogy a. íofosgenglrtAnd ágenseket nem feltétlenül kell specifikus hordozókhoz kötni, isivel a íeehnlkásan lantért, hogy bizonyos, s teláinsfey saeboti eljárásban slkalmazbáfe íbsoszénglíizálc; ágensek elbszeretéíiel lokabzálősíüak egyes szövetekben. Példánk bizonyos iotoszenziüzálö ágensekről, nsfet példáéi .s bematonorflrln szássnüzékalröl, Ismeri, begy előszeretettel vagy szelek!ive;? lokaiizálddnak dagmvrtsxövm&kben vagy légiókban. Számos más- példa is ismeri ez h'odaloínban ipáiddal, Boyle ás Döipbim Pkoiochem, Photobíol. ód, db9-4:§2 (199b)j, Ilyen kcds-ezsnénycmp fekallzóGó; nllodnumbaíntsk a übáhnsay szerinti eljárásokban.
A, eélbajaPatö molekulát asszoclálbsfeíáíok, kagcisbhagnk vagy kenjugáiiaihaijuk a vátoemdetü hordozóval, a tbtoszenzhízálö ágenssel vagy neodkeitőveh ás alkabnazbatrink azonos vagy eltérő hordozol: vagy oélhalüstulb molekulákat.
Ilyen eélbajutpáó rn«.-lek ulákai vagy Eortfezéktá alkalmazhatunk a. fentiekben leírtak szerint a víruseredetó hordozó vagy a fetoszehastlzáiő ágens, konkrét, a PCI alkalmazása szempontjából különösen előnyős ítsíracellníárss kontpartmetstnstíökba - példán! litmszfenákba vagy éüdószbmákha - történő irányítására.
A transzfer umiekniáról ügy gondollak, hogy kezdetben a víruseredefts hordozóval ssszoeidlina snarad a sejtek eltoszngáhan, és a hesagárzás eredményeként a transzfer molekula az rülvaeslluláds km«|mrtmem»thöl kiszabadul, fia ágyszer már a:transzfer partlhnlnntöh a sejtek nittmzöljába lufernállzálódtak, az itt bttkövetkezö
9R92 5--215010
P0402b2ö esentény a választott vtrnsoredefe hordozótól lügg. Például, adenovírus esetést, ts (transzfer molekulával asszoeiáfedoii) adertovlfeta részecskéi általában a sferu'sagba vándorolnak, tnajd ezután ;t vírus tahiS-e (és ezáital a nukicmsavui transzferáló xnoleknia; belép a se·· sgibnagiába, Bármely olyan esetben, ahol: & íniktelnsavas íraoszfetálő molekula vlrnsparükalómba vagy vírus-ieredetö hordozóba van beépítve, a ősiokárufet internál izáclo és az aat feltehetően kővető esentértyek a vtrnsoredotő hotboZotől hlggetiek, a nizktetnsav'mofekelássak korrekt íniraeettfeáris helyes kosi jelest lennie ahhoz, hogy a. bevitt tumszier molekula kívánt hatásának kiváltására, a· megfelelő iamaéellatárts folyamat tnegtörfenjea. Páiőáoh hst a transzfer molekula agy kérdéses fehérjéi konok szükség van o fehérje expresszífeához vezető lépésre. Ha. a transzfer molekula egy adod antlszessz RNS’ tímiekolát kódoló PNö-mofekula, a febfe-böl lókS^-tv tötáénb transzkripcióját oredntényezó lépésnek kall ntcglöríánsle, síit,
A. ietoszénzmzálb ágens aktiválást eredofenyeaö fenyhesugárzás a technikában jói ismert eljárásokkal és fetyamstokkal feriésthok Például, a tény hfelámhosszzt és infenzöázál az alkalmazóit íótoszcozlbzálö ágens szérűd választjus meg, és az:tshenzhás előnyösen lobot 4iö30b .l/otst5, például i 00 jfemy g hullámhossz pedig előnyösön leket dtXl-tfeh rost, például 5Öb?-ÖŐ.nm, Az alkalmas fönylórráaök a technikában jól Ismertek. Az isid, ami aiasi a tőiteket a ténynek -kitesszük és a találmány szerinti eljárásban alkabnazeh fenydázisnk változhatnak.. Ahatáöao, a fotoszexizitizálút tariahnazö rntraeelkdárís kimspartinentutn azéironcsolásához és a transzfer részecskék felvételéhez éskagy eiíoszolba tbr-énő felszabadításához szükséges megfelelő besugárzás! Időket és dózisokat a azakember ki teája választani. A transzfer részecskék clfeszolba történő mfernabzáclójádak hatékonysága égy fenik, hogy a fenyéspozíció növelésével fekozóclík, A besugárzás előnyős iáötsrlatua Ülgg a feiuszenzhízáíöiöh a célsejtben vagy szövetben összegyűlt lótnszenzíózálő nmnnytségéibi és a feioszeuziiizáió abszorpciós spektruma ős s fertyferrás cmimzms spekíntpta közötti át fedéstől, A besugárzás Időtartama általában a pere nagyságrendiét néhány őrá nagyságrendig terjedhet, például előnyösen akár ők percig, például b,5 vagy 1 perétől só petéig, például tiki5 porcig, például 0,5--5 porcig vagy akid nemig én előnyösen körük belttl ? , tómig, például tl-A percig, Λ mentételd lény dózist a szakember ki tudja választani és ez Ismét a hdoszcrtzislzálötó! és a íóiöszenzmzálő, oélsmiékbeu vagy szövetekben összegyűlt mennyiségétől függ, Például, rákos megbetegedések lotofrlnnul és a prfeöporfeás pmkurzor 5~sminoievuiéusavs;ai történő ákodlnamikas kezelésére jellemzően aik&koazntt lénydözlsok az SŐ-15Ö .kend tartományba esnek, ha a hlpoóersnla elkerülésére 200 mW/ ctfe-nél alacsonyabb ftmrokzcenoiuwtentáxtyi alkalmazunk, A. fenydősásek ákalahat; alacsonyabbak, na olyan ibioszenzitízálöi alkabuazank, amelynek az ssbnkcsös knefetciense nagyobb a látható spektrum vörös tartományában. Azonban, kevésenb fetoszenzblzátöi felhalmozó, nett· rákos szövetek kezelésére a szükséges összes tény mennyisége, a ráksss szövetek kezeléséte alkalntazoStsoás lényegesen nagyobb sebei,
A találmány szerinti eljárások során elkerülhetetlen, begy néhány sóit elpusztuljon tbtolfemla! behatás, azaz a ihioszenziíizálo ágens hatása kővetkezőiben. Azonban, e aejtpnsztnlás nem számit és számos alkalmazás esetében, példán! rákos szövetek kezeléséhen, még előnyős is lehet és emellett bizonyos esetekben a helyi immunválasz scrXefecsévet tókozza a terápia hatását. Azonosít, a találmány szerinti eljárási módosíthatják ügy is, hogy a sejtek felelő feakciöját vagy feszél, a Ibfeszanzibzálö ágens koncentrációjának feggvényáheu kfeáluszbfe: fertydőzsssal szabályozzuk, ilyen eljáfestfe a tvehaikűbák szűkéit ismerlek, Tisztát'! a ib-okc-mal kezelés álla! indukált sej titulál vonatkozásában, tbntos, hogy a lény dózisát ágy szabályozzuk, hogy az egyed! sejtek közűi néhány, amelyben u PCI hatás megnyilvánult, ne pusztuljon el tisztán a fotokémiai kezelés köveikézfeba;v (bár ezek felfehötoen éiposzinlnak a. PCI hatás következtében?
fefeóő-z 1 feSfe
Néhány aikaisstazásism előnyös lőhet, ha a PCI kezelést követően msgyszáará életképes sejt marad iénít, kéldánl, bizmtyes génterápiás eljárásokban & transzferált ouktemsav-motekufe etptessziőjéi: kíhetővé tévé, élelkéites sejtek lóatesttk, Ilyen alksimazásokhat; előnyős, ha a sejtek pupaláciojá vagy sokasága, lényegében tsz összes sejt. vagy a sejtek jófesöős többsége (példánk legalább őtrfe-a, előnyösebben legalább 60, kik 00, vagy kObka) nem pasatat el, Ez persze nem mindig kívánatos, küiöítöseo, ha kCIn alkalmazunk cltotnxlkus transzfer molekulák bevitelébe ét ez esetben a további snílpnsztités aeta etönytefen, Clfetosákos hatást azonban ágy is elérhetünk, ha például olyan génterápiái alkahnaznnk, auteiybeo a terápiás gént a találmány szerbe! eljárással daganatsebekbe iaternaiizáhuk, Így példáé! e sejtek olyan, iinmnnolögktdag aktív szubsztanciákat tagnak termelni, amelyek a fentutunodt rákos sejtek helyi: immnaolőgia! pusztításét Indakákják vagy a öagatatísejtek ellen szlszfemikns: Immítuváluszl váltanak ki. Ilyen esetekben, egyértelmű, hogy a ECt kezelés után szükség van: életképes sejtekre.
A vlroserodctn hordozókkal asszociált transzfer molekulák: internálIzáélojára szolgáié PCI- eljárásokkal; társult előnyök az alábbiak; (!) a sejtbe bevinni kívánt molekula méretét csak az szabja meg, hogy be lehet-e: építeni egy adott virnserederő hordozóba, és hogy e hordozót a célsejt tel tndm-e venni: (2) ez: eljárások helyspeelbknsak: abban a tekintetben, hogy a hatás csak a ténynek kitelt: fészekét érinti; (3) a viruseredetn hordozók Ihletnaitzéeidja bslökonyabb a standard vimslfetözésnők ázott spjtok arányai tekintve, amelyekbe a transzfer molekulákat sikerüli bevinni ésivagy a transzfer molekula exgresszlős szintjének: viszonylatában; ti) az ikteroaiizáeió iőkozolt hatékonysága folytán, snaesonyabb dózisé és tltélái vitásokra van szükség; tg) az eljárás netu rákkeltő.
A találmány azon megvalósítási módjainak, amelyekben a transzfer molekulát lés annak: vfeussredétü hordozóját) a íénykezeiés ntétt adjak a sejtekhez, további előnyei vannak;
{aj transztér molekuláé és sónak vtraseredeté hordozóját erő totokémiai károsodás lecsökken;
(ni belső lézlők sebészi beavatkozással kombinált PC! kezelése leegyszerűsödik, sütve! a (biokémiai kezelési a lázié sebészi: kezelését kővetően, például a vkusemdeöi hordozónak (és azzal asszonlalodoh transzfer molekulának) íamnfea történő Irgektáiásával vagy más hely! bevitellel végezhetjük;
(dl az eljárások kevésbé Ihggestek az időzítéstől, azaz a sejt által felvételre kerülő molekula hozzáadásának Időpontja a megvilágítás Időpontjához képest. Ez azi jelent, hogy a kezelésre nagyobb „Időtartam'’ áll rendelkezésre, Ez lényeges, mert a terápiás molekula tel vétele a külön léte klinikai helyzeteknek megfelelően lényeges mértékben változhat és «melletk egy mloh: klinikai helyzetben egyedi lézlők tekintetében a felvételt nehezen lehet meghatározni, ezért a nagyobb Időtartam readktvid előnyős:, (d) a transzfer molekota gyors traoszlokáeloja a ckoszoiba, ezért lényegesen lecsökken a transzfer molekula iizeszőmális degradáolojáoak esélye.
A találmány szeriül! eljárás, a technikában korábban már ismeri, a téntiekben tárgyalt hposzóma fúziós, kaicloodöszfePttl történő iranszfekelo, stb. eljátésok ídternalívájpkénl alkalmazható.
A találmány előnyös megvalósítási módjában, a molekulákat génterápiás: oétokböl visszük be sejtekbe.
A génterápiát végezhetünk számos stratégiát követve, melyek közéi a leginkább alkalmasat a szakember ki tusija választani az adott betegség konkrét gatogeitezfeétői itiggőett.
Az egyik megközelítésben specifikus sejteket célzottan pusztítónk eb E, rákferépiábao népszerű megközelítéslsen, célsejtekre géneke; irányítónk és azokat úgy enpresszáijuk, hogy a sejt pusztulását okozzák. Ilyen sejípesztlíés történhet közvetlen mechanizmus diján - példán!, ha a bevitt gát; lété 1 is loxlnt, vagy a sejtet, feöfeCCiófefe a kősóbblekhen beadásra kcritlé drogra; erzékshttyé savó prezlrogoi köböl, A scjtpnsztitás történhet esetleg korvc-en mtkfeo példánk oly ae tmmtmstímoláciös géneket viszünk he, amelyek a célsejttel szembeni emmm·' válasz! kjváiiják vagy fekozkáh, vagy olyan géneket alkalmaznak, tnoelyek úgy okoznak séjtholák, hogy egy adott es.over: mölekoláva! kölcsönhatásba légnek (példán!, egy adott psWrogot -~ példáéi IkSV'A akbváió enzimei - példán! íjÜV-Ί: ~ ködőié gént), Alkalmas- Öngyilkos gének, pro-drogcs ködeid gének és üon'smsti'· mtdációs gének jói ismertek és a technikában megfelelően dokumentálva varrnak.
További megközelítés tartalmazza a génespresszló hányüott gátlását. A szakember különféle eljárásokat Ismer a génexpressztó DNS, ANSI vagy fehérje szinten történő specifikus blokkolására, és ezek bármelyike blokkolására szolgáld megjeleld mofektdáris eszközök, sejtekbe történő bevitelére. így, a találmány előnyős szempontja szerint, a bevinni kívánt molekula olyan hmkcionáiís terméket tarlarmaAi, vagy azt átírni vagy expresszáln! képes láNb· szék verte la, amely termék a célzott sebben a génexpreaszidt agy bizonyos módéi; lg gáíoini Ibgjá, példán! amiszensz omiekrsfákaf, ribezimekei vagy Intraéelbnáris antitestekéi imtahnax, expresszái vagy átír.
Agy másik megközelítés génsokszerozási terápiái foglal magában, ha egy adóit beiegséel állapotot egy adod gési Ihnkcipiának elvesztése vált ki, és a betegség gyógyítható a. normális gén extra kópiáinak hejattasásával a páciens megjelöld sejtjeibe. így, a inláhndny további előnyös megvaldstlásl módjában, a beverni kiyám mofsknla egy olyan gén vagy annak egy része, amely egy sorát páciensben a kérdéses hiány! kompenzáld, fankcionáils termek expresszálására képes.
Még további megközoltiés egy adott mniáeio célzott meglevltására Irányok almi a naklelnsav bevitele a páciens megjelelő sejtíelbe, o páciens láfeS-éhen található, betegséget okozó maiadé közvetlen korrekciójához vezet dm eljárás jel isméit és megiéielóen dokementáit a technikában),
A találmány szerinti eljárással kapcsolatos, sejtekbe Iránytnö nokfenssavígénirnnszjezt köveiben, a béíilesztétt génekdmkís Inra vak Integrálódhatnak a gazdasejt kromoszómáiba, vagy exirakosmoszöitsális einmkéot is fenomereáhaó-sk t azaz epíszömmlssk ivarodnak), Magié leid vektorok ki választhatok és lefvezhelok a létéi ié'nelóségck valgtnelylkének mdekálásra..
A bevitt gén kromoszómába történd integrálódásának előnye az, hogy a kromoszóma repbkáctójs mán; sejtosztódás során a gén öidklöölR, Mivel az atodsejivk is tartalmazzák a bevitt géneket, a bevitt gén hosszá idöim’iamá. stabil éspresszloja érhető el, hőnek eredményekéin, e megközelítés szerinti génterápia bizonyos elváltozások gyógyításának lehetőségéi biztosíthatja. Példánk aktívan osztódó sejtekbe; álló szövetek esetében megcélozhatok az őssejtek (ocm álÓcrcociálödoti grekse'zor sejtek; kis popnláelőja, melyekből a szövet éreti, dltterenoiálödoft sejtjei kislakainak). Λ kromoszómába történd integrációnak azonban hátránya) is vannak, amelyek egyébként megfelelőképpen le vannak írva, példáid rák ksleilödésének veszélye, példánk agy átfest endogén aktiválásához vezető, vóleílessszerá Integrációs eseménynek köszönheioen.
Az e.v re..·? génterápia - amelyben a célsejteket egy adott páciensből eltávolitink, és vm-o mampniáönk. majd a páciensbe vlsszavlsszök felkínálja azt a lehetőséget, hogy olyan sepekeí válasszonk, amelyekben az integráció sikeres volt. Példát;!, sejteket in váró felszaporltank, majd neopiaszbktis mmszibrmámőt egyAíelmáen bizonyító feaefjpesokát keresünk, azt megelőzően, hogy- a sejteket vlssziranszferálnánk e páciensbe. Amennyiben kromoszómába, történd integráció a kívánatos, az ez vívó terápia előnyt·:;.
hseilcg, hevheim szánt génimoklemssvsi tartaisrtazö vekiortendszeri tervezhetünk abból a eálbóf, hegy
RMifeífeb génekeí vigyünk ne sejtekbe, ahol a gének ezfesktoomszómáíís eferstkéstt maradnak ss$g ;A magas szinteken expresszálisatök. Ha a sejtek aktívan osztódmts. a bevitt gén nem feltétlenül egyenlő mértékben szegregálódik a feltnysgtfekbe, így a hosszá Idötatfemá expresszié esetleg problémás lehet. Ennek eredményeként, gén transzfert ts magéban lőeiatö, megismételt kezelésekre sebet sxítkség egy adod genetikai elváltozás gyógyításának imiolyásolására, Ebhsa a vonatkozásban, anosdí yalöszbtüsége, légy a kezeléseket meg. tadlttb ismételni, megnő, ka a transzfert^ a találmány szerinti ECfen alapuló- transzfer eljárást alkalmazzak, stnely a gének nagyabb hatékonyságú, irány hété transzferét feszt lehelévé hlásd alábbi, üzentél ál, bizonyos esetekben nem felléífeaid vas·! szükség kt?sszá Időtartamú expressziéin. 'Földiád, zákerededt gének teráplájábttn gyakran ítssszfetálook és expmsszáhtnl: géneket rákos sejtekbe, a sebek elpusztításéra. Az Ilyen eljárásokban, mim áo a rosszindulaté daganatéi eltnünőhak, a terápiás génre felfebetőeo nincs szükség a továbbiakban.
Ahogy tknílekben -emlltóték, a t:aláimányban alkalmazható, megfelelő virs-stendszerek közé az alábbiak tartoznak: zdetsovltasok, adénomsszoetáb vírusok, relrovlrnsok, fedflvlrbsok, Hetpes sarasok, Semlal vitás, bakteriofágok, Vaoeinin vírus és rtakíbovfrtss,
A relativitások egyik elduyös tulajdonsága, hogy képesek a kromozzőmális Hbib-be integrálódni, de csak aktívan osztódé sejteket leüőzúek. Az Integrált lóHS slablisn szaporítható, biztosítva ezzel agy adott betegség állandó kúrálásdi, Az a tulajdonságok, hogy csak aktívan oszlódé sejteket fertőzőéit, bár előnyfefet; számos betegség kezelése szempontjából, azenban előnyös olyan szövetek daganatos megbetegedése Inét: génterápiájában, amelyek normális esetben sem nsziddő sejteket tartalmaznak, így az aktívan osztódó rákos sejtek szelektíven fertőzhetek és puszíbbatök anélkül. hogy a normális szövet: nem osztódó sejtjeit komolyan veszélyeztetnénk.
Az adeno-assznelali vírusok az eiédvirmaok termelődését ereönfertyezó produktív fertőzéshez valamilyen nelper vírussal. például adatsor irus vagy HSV - végzett: együttes fertőzést Igényelnek. Azonban, bemer viríts hiányában Is megtörténhet a DNS mscgrácsőja <’ kromoszómába. így, a kérdéses atkahnaz&siöl íilggóett a megfelelő odenootaszoeiáít ylrasvektor klválaazsnaítt.
Másfelől, az sbeagvlrnspk eem oszlődő: sejteket Is fertőznek, A vírusok a sejtekbe, receptor által közvertteh endoeitőzissal jnttrak. be, de annak ellenére, hogy a beilleszlett nnklelnsav a sejtmagba vándorol, nem agy iliaik, hogy integrálódna és így a beillesztett gén expressziőla esek rövid ideig tartható fenn. Aöene vírus-eredetű vektorok magas tiíerakhea állíthatók ellő,, és jellemzőett legalább ?»8 kb tnéortíl inzertet tógádnak be, de az aöeoovlrus tnetodolögiáhau törtére újabb IbjÁsztéseb tehetővé teszik, hogy speciálisan tervezett vektorokba akárkörülbelül sökb meredi inzertet tttdjnak beilleszteni tKoebsuek:, rtt.no. feene 'lber. itt, 3451-3459tifertő j Mivel az mlenovhusok sókfele sej ti Ipart képesek fertőzni, e vírusokat széleskörűen alkalmazzák, és az in vöm génterápiás stratégiában népszerű vektorokként tartják ezeket számon. A találmány szerinti ebárásbas· tsz adenovlrnsokat vitat seredetö bcmlozökként előnyösen alkalmazzak.
Azottban, bár az adenovírusok az ó; vivő génbevitel egyik leghatásosabb vektorai, ezek alkalmazását számos súlyos probléma -· példáéi, a vírus elleni immunológiai reakciók, ttxsnzlens géttexasesszlő, és a celszövelekben álaesetay tzaoszdakcíós hatékonysághoz vezető rossz szöveti eloszlás - teszi bonyolulttá, Etpelfeíi, bonyolult az adenovfrus álfák bevitt terápiás gén expresszié jár a célsejtekre korlátozni, ami viszont Igen femtos lehet, ka a --például (példánk rákos sejtek elpusztítása végett alkalmazott) toxikus eántermeknek a test normális sejtjeiben ígeídátsb léíioetosságá szervek, mint a triói sejtjeiben) történő expressziólából adddö - ntetiéknaiásokai el akarjak kerülni. Más vlrnsemdettl hmdozök génterápiás alkalmazása hasordó hálrsuyokkai jár.
A találmánnyal: kapcsolatos miéként Iái Internailzáciő alkalmazásával e szövetek közül sokban őgŐár-gfe/St;
: ο áthidalható a teníi problémák némelyike. Először, a ötíí alkalmazása· lényeges méftékbgn növel.» s tsoeszgé»» exgtessziöjának sztorié» és ssfcSí-íékét. & eélsZövctekben. (azaz, azt eredményezheti, hogy nagyobb szájúd g«jt, magasabb szintekbe»» expresmija á teíiuszgónty EsnntelüS, a PCErdi kiinatabak, hogy fokozza a vírnsíéttőxes hatékonyságát, ágy a vírusból lényegesen alacsonyabb dózisra vas szükség az ;tzonos ;ne»u»ylségü, de báb biáayábao: íspitszíelbató géntraaszdukeiöhoz képest, A. ECtevel tokozott, giaestjuyabb Ibriőzósi rntdíipbcitási értékek (MOi-k) nrelletb vütisiérsözés olyan szöveti helyeken is leltelővé teszi a vírus transzánkdöjál, ahol a vírus pe$»eirácíój;». alacsony mértékű, ezáltal lehetővé válik a traoszdükeié azokba;» a régiókba»», a-raivekhe a hatékony íi'ai»szdiikcíöboz & hagyományos sbrtilxéssei iái kevés vírus jutót», .Míves vuiöszhtihjek tárónk, hogy helyi beadás eseten a szövésekben a viríts koneeotióesőja, a beadási ponttál távolodva gyorsan: leesik, ezérs a vitösíeisbzéses technológiában a taráit ·»ηην szer ind eljárás igen ílmíos előrelépést jelesti.
A vírusfertőzés kCbvel íssdukáit Ibkozott hatékonyságának további előnye, hogy a trassszöokeiös hatéköoyság tenuíartásábcz aiaesouy virusdóztsí alkalmazhatunk, igy az attenovírus és más vírus által közvetítési génterápiával kapcsolatos imtotatöiőgia; problémák lecsökkennek, Végül, a íölokéniiaí kezelést alkaknazísatink a célsejtekre irányaid öntözés specifikusságának növelésére. A specifikusság mkozodáss elsősorban atmak sniaidoniéható, hogy esek a besugárzást területeket veónk alá a ECi kezeléstsek, és másodsorban pedig annak, hogy bizonyos tbtoszeszibzáíók előnyösen aklsasnüiálbbnak a beteg ierulcieken. Az a lehetőség, begy a terápiás gén akt!vitása», a betegség belyéi'e cgyszciálet» csak ténnyel Irányítsuk, a íalákstáay igen előnyős szempontig» képezi. Ezzel rendkívüli ménekbe»» válik lehetővé az, hogy elkerültök a. terápiás génnek a ;est „rossz helyein történd evpresszidiáboí adódó, nem kívánt meiiékh-stáseskai. A mellékbaidaok csökkentésébe»» az is közsejátszik, hogy a FCi eljárás lehetővé teszi, hogy a génterápiás ágestsbői alacsonyabb dózisokat aikaluiazzsmk. Az elérhető speeliiaitásből adódót»»» az adasovlms- és irtás vizoseredetil hoiVezök sziszíemikm; beadása megvalósítható. Továbbá, a rendekben leirtnk szeri»»», a .Kilát kousbináíhariük irányított vesiotcskai, a»r»e!yekkel tovább fokozható a génbevitel speeiíleilása,
Ahogyan az előzd k-CI elkalsaazásokbaií leirtnk, ágy gondoljuk, begy a PCI, plazttskkpsílillziss komplexekre kitépett, traasztakeíót és soás molekulák, például fehérjék, bevitelét tóköz»» hatása az emloehoilkus vezákntexok tény által tndnkáh iek»znkltásá»»ak köszönhető, és - a»»éjkök hogy rsgaszkoiéhánk báss;»ilye?t emséiéihez - valószínűleg tűnik, hogy ngyaneze»» ineehaniziírosaak keli működnie az adenovtrus által közvetített géndanszönkcióhats is. Azonban, a plaKíuibépohiízh» kostsplezekkel ás usás iuoíekulákknl, példáéi ibhérlékkel. ellentétben az asienoviros kiszabadulást» az estdöszslmákböi hatékony íblyanmüsek thnik, amely során a sejthez kőiéit vírusoknak több mint 4-IM-n - a leközöltek szerlnr - eléri a sejtmagot (Gmber és ottsak, Cet; 7á, 477-486 ( jpogv toöpnld és tntsns., kkstn, fletse Ϊbér. b. Őő7-j7g (idűh)j. így, nz nObeíotuban seismk szerint el várhattok, hogy ha a Ibid képes indokéin! o. sejtekhez kötött összes parííkahio» sejísnagh»» iráoyolö iraoszperiját, nkkor a PCI legtöbbször kél és leiszeresére !n»fj;t tdk»zz»3s ;tz adenovhass géniranszdukéiö». Ezért iVisdkival meglepő volt, begy a géntuorszdokcidban g PCI által indukált növekedés több s»űot hásszoszjs volt, és jelenleg nincs suegleleio magyarázóiunk e vámtsranl nagy hatásra. Az egyik lehetőség az, hogy »» PCbnes kiteli vintisröszecskéknek magasabb Jnherens tmnszdőkelós láilákonyságté' vsa, imát a uorumhs virnslestozés esetén, például áz endoszómékhós történő lé!szabadnia» más meebaulzmussui törté»»ík). Az is lehetséges, hegy az adonovirtts endoszősnákbol történő léiszabadtrlása smrinálls hníőzes esetén kevésbé baiékn»»y az alacsonyabb Möí és'iékekstél (fertőzés! innlhpílcitás}, ahol a ECI ímáatja a legjobb hatást. Az Is tehetséges, hogy a íőíokömlsi kezelés hatással vnn más tbivimsalokr;», példán! a vírus téi vételére, sejtmagba: irányuló írs;»sepertjá»»»
MöAsCikAG ,SW2«M vagy & izarsszgé» Irsaszkrlpelöiára.
A találmány -ovabln sze·rsix.-rssfo szedni, a találmány febárása során Ipnertetnpk vlrnseredetíi Itordozótötl ásszoeküt transzfer moleköiát és idteszenziílzálo ágenst tartalmtiző, előnyösen terápiára alkaltnazkatd gyógyászat· készítmények képezik. Adóz esetben, a győgyáiszat:i készbntényben lévő íbtoszenzltizáló avests is asszociálva lehet vlrnseiededl axn'dozö ntoleknláival vagy más, nem vlrnsböl szársnazö hotdoző tnoleknlával (lásd feni). Ehiojős, na a ferüseredstd hmdozö önmagában vsa; hozzákapcsolva, asszociálva, vagy könjngálva egy vagy több hordozó moiekfeához (előnyösen pöllkationokboz vagy kationos lipidekhez), célbajfetatö molekolához vagy célhahckatő vektorhoz, Adod esetben, a virnseredeth hordozó és a fetoszenzilizátó ágens kozni valamelyikei vagy nzmdkeitöí asszocíáltaihatn.!k ngyanazon vagy snás célbalfetaíó tnoleknlával (fesd fent), biönyds, ha a készítményt génterápiában alkalmazzak, Génterápiás alkalmazás esstén előnyös όο.; sered el 11 hordozó az sdenovfeos vagy abból származó virüseretfeiő hordozó. A génterápiára különösééalkalmas állapotok, betegségek és fertőzések közé az alábbiak tartoznak: rákos daganatok - példáid hazába sejt rákos megbetegedései dlszplázla vagy más: kinövések. izületi est·,·', íO'ineróvoiéfOsfe, vltpsos- és nfes fertőzések, professfe szolárla elszarasodáe, sebgyögyolás, törés győgynlasá, szemölcsök. és örökletes elváltozások - példáid cisztlktts ílbrózis, Goründele betegség: odovo refemfec vöm -, és meiaboihlkos elváltozások.
blönyós, a géniefeplábasr rmnszfer rnolekoláként alkalmazható gének a pro-drogokm akiiváió enzimeket - példáéi, zferpea ihnldsnktstázát vagy cliözte-deamreázt ·, fehér jeioxiaokst - példán! slldérlatozln vagy gelOnln ·, apoptözist indokát» fehésjékel példán! pllö-al: vagy apopesplint hnmnnstinn.nálo fektetőkéi ·· \ , \ · , ' ' ' ' ' ' ','s \ ' , , speélPfets antigéneket - példád. irodáit ras fehérjéket vagy felárts-fei itnfenntgynlladssgátlókat - példám, ImerfeaklmiO-ei. 11..--1 receptor aniagonisiált vagy oldható Tfejfereeepiort zogiegenézist gátlókat - példán!, etafesíalioi erek kialakolását tndokálö fehérjéket - példáéi vaszkelárls emfefel lemből származó növekedési festőd -, koagulációi gállő fehérjéket - példáéi szövet! fektéd irsracdirt!árts antitesteket, rekontblnáns
Inntrnnmxőiokai, tíbozlnsekei vagy antlszensz KNSvnolekolákat, stb. kódoló gének, ismertetjük továbbá viresercdeiil hordozóval és totoszertzllfeálö ágenssel asszociált transzfer cehek ólának a leírtak szerinti alkahnazását is terápiában, előnyösen génterápiában, alkalmazható gyógyszer előállhásáfa. A Ikrái alkalmazásokra, a feioszeozlilzáló ágenst és a vitással asszociált transzfer molekulát együtt sergy külOmkülöo, megfelelő alkalmazási idők biztosításává!, egy adod páciens sejilelvei vagy szöveteivel érlmkezietiink és a sejteket a fentiekben leírtak szerint, a feioszenziiizáló ágenst hatékonyan aktiváló onliántoosszúságá lénnyel hesagárezzok, ismertetünk továbbá a találmány szerinti ellárást tartalmazó kezelési és előnyösen génterápiás eljárásokat is. így, a találmány tárgya betegség, elváltozás vagy fertőzés: kezelésére vagy megelőzésére szolgáló, génterápiás eljárás, amely során * a fenilekisen leírtak szerint - transzfer mofektbái viszünk be egy vagy több sejtbe in i-Pro, fe vöm vagy cr t-rro, és ahol szükséges (azaz, ha a transzfekelot in vitte vagy in vivő végezzék) a sebeket a páciensnek beadjak.
A leírás szerinti értelemben, tt „kezelés” kifejezés a kezelni kivárd betegség, elváltozás vagy fertőzés egy: vagy több szanptóakéaoak csökkentéséi, enyhítéséi vagy megszüntetését jelenti, a kezelés előtti szimptönrákhoz kitörésének késleltetését vagy ntegelozését jelenti, <H 5’SG i fedüdéim
Előnyösen serápsM, különösen génterápiás célra, a találmány szénről készítmények tartalmazhatnak otyan setteí vagy sepgopedácioi, amely a találmány szerint! -eljárással hevld transzfer mefeknhb tartahnaznak.
l.gy, a toiálmássy őség további szempontja keretéiben ismerfetffek a sejtbe bevét transzfer moiekülát laüabnazö sajtót vagy sejtpogniátobt, ahol a sejtet a találmány szérián eljárássá: állbbatink elő,
A találmány sagg további szempontja keretében IssneAetjök továbbá ilyen sejt vagy seiipopniáclö aikalraazásáí terápiában, előnyösért génterápiában alkaimazbatö készítmény eiöáilitssárs.
ismertetőnk továbbá egy ástok páciens kezelésére szolgáld eljárást, atssely eljárás során a páciensnek .sejteket vagy a találmány szerinti készlbnényekeí: adjak be. Az eljárásokat ekmyősen génteráplebasj aláaknázzák, azaz az eljátoebsn egy ástok: mnlekolát viszünk be sejtbe s fénóekbest leírlak szériái, és az így prepátok sejtet & páciensnek adjak be,
A? vivő, a vtrnseredefb hezdozék, toteszeozhizáiö ágensek, transzfer sntoaktoákat tartalmazó sejtek, készítmények, slb. beadására bármely, a ieebaikábaa ismert vagy standard eljárás aikabnazbato, példán; inivsooiszkofárls, szükktbáts, inlrápérltoüeábs, daganatba történő vagy intravénás inleketo, tniüzló, inbaláesn vagy fopikális bevitel a ivet belső és külső felszínesre, ste. A; vöm alkalmazás esetén, & találmány alkalmazható bármilyen szöveltei kapcsokéba, amelynek sejtjeibe a totoszenzbizáió ágenst és a virasesedein imrde;zé lokakzáiódlk, Ideértve a testtoiyadék iokailzáeidí és a sziláid szöveteket. Bármilyen szövet megeéiozhsto, ha a célzott szövet sebjel a fóíeszeazblzálöt felveszik, és a megvilágítás megfelelőképpen bizsoshbatő, A lény bizíasbásái Illetően, egyéneimben nem jelent problémát az emberi vagy állati test külső felszínét tekintve, Belső felszínek esetében példák! optika; szálakéi alkalmazhatnak számos belső felszín hstáknny megvilágítására. Ezenfelül, a kezelés végezhető á sebész! beavatkozással kőmahtolvá, azaz a kezelni kívánt felületek felszabadításává.!.
A találmány szerinti kcszbofeoyekel ősszeállftbatjnk bársonyon kényelmes módon, a győgyászdti technikában ismer eljárásokkal és módszerekkel, példán! egy vagy főbb gyógyászatban: elfogadható hordozővagy kötőanyag (azaz, a készítményben tevő egyéb anyagokkal összeegyeztethető és a befogadó szeoípoottáttol győgyászatüag elfogadható anyagok) alkaiotazásávai, A készllmány természetéi és a hordozó- vagy Itotoaxivagííkai, dózisokat, sík. rnílo eljárással meg leket határozol a kiválasztok beadásnak, a kezelés eéilának, sto. megfelelőért, A. íalátefoy szerkói készítmények tamlnsazhatnák más megfelelő ágenseket is. Példánk bizonyos terápiás alkalmazások és beadási módok esetében hasznos leket, ka példán; olyan ágenseket Is atkabnazohk, amelyek fokozhatják a vtmseredeín hordozó szövetbe történő behatolását (példán! proieáaoksff (Korlyama és mtsal., (lom. (lene Tber. 11,2.2t k-züoöi,
A készítmények beadhatok toplkdifean (példán! beleit, szálon át, nyelv alatt, ínyen, szájpadom orron, lödön, hüvelyen, veghélen vagy szemen: át), orálisan vagy parenterálisam Előnyösek a lonlkábs készítmények, és ide tartoznak az akfeldab: gélek, krémek, kenőcsök, sprayob, korogs-övlzek, zenesek, róttak, szappanok, porok, tabletták, filmek, itüveiykopok, aeroszolok, cseppek, oldatok és bármilyen írsás, a teohmkában Ismert, hagyományos gyógyászati tormák.
Kenőcsök, retek és krémek, péidásri, lormtoázbatok vizes vagy olajos alapon, amelybez megfelelő sbrásifő éslvagy géiképző, ágenseket adtaik, (torogatévlzek Is tbmodázhatók vizes vagy olajos alapon, ae tartalmaznak még egy vagy több emalgeáiő, diszpetgálő, szeszpendáló, siirnsiiö és színező ágenst, borokat a megfeleld alapper segítségéve! tórnodázhafenk, Cseppek és oldatok készíthetők, vizes vagy nen- vizes alapon, ás szintért bem! mázhatnak egy vagy több dfszgergáló, oldó vagy szoszpendáiő ágenst. Aeroszol sprayokat
Üköző -21 z/SG kényelmesen kiszerekiötibik túlnyomásos ketriénezekbea, a megfelelő heitógáz alkalmazásával.
ffostieg, a készítményt előálltthaíjúk orális vagy ttarenferálts beadásra. alkalmas formában. Am-rsmív gyógyászati formák közé Így az alábbiak tartozóak; az. aktív komponenst és adott esetben agy vagy több semleges hagyományos hordozói és/vagy dllnenst - példánk knksíficaketnőnyítő, ktktöz, szaebafoz, mikrokristályos eetfolóz, magnézíamsztearát, pelivlmlplrrolidön, eitromsav, borkbsav, víz, vizfotanok vtzfolleetáa, vfofszorbtfol, νίζ/pohetíléngh'kfo, propliérigitkok sztearl Iáikéból, kadmxtmefil-ceitulóz vagy zsíros anyagok, például szilárd zsír, vagy azok alkalmas keveréke - tartalmazó, bevont vagy bevonás nélküli rfolehak, kansznlák, szuszpenzlők és okiatok
A készítmény tártálnmzbat -ovábbá sikoslfo itgeossket. nedvesítő ágenseket, emuigeáfo ágenseket, szaszpendálő ágenseket, tartósító ágenseket, édesítő ágenseket, szesifo ágenseket, adszorpciót fokozó anyagokat, példáid a felületbe behatóié ágenseket Ilásd alább), és hasonlókat, A találmány szerinti készítmértyt lehet ágy Is fotstmlázui, hogy az aktív összetevő gyors, fottrttarté vagy késleltetett folszabadidásáí legye fehetőve a paeíenssek, a technikában jól Isstterf ebátősok alkalmazásával tértért; beadás tnátt. Oldd es-'vngy stabilizáló ágenseket - példáéi, elkfodesfoaeket (CD) e, kk y, és FÍF-β élkfodexnát· - is alkatmazhatostR.
Á. dózisokat rntm eljárással határozhatjuk meg, és ezek függenek a molekula természetétől, a kezelés Sábától, a pástens kotátó), a: beadás médiától, stb. A fotósáénak szálé ágens vonatkozásában figyelembe kell venni az ágens, besugárzás ftmáaára kifejtett mettthráttrouesoló potenelájáhkeposaégét. Azonban, általában, in vitro alkalntazásköt' a fotoszerizkfoáló alkalmas koneentráelétarfottiáttya Ő,ő5-$kő gg/tttl. Cmóerek ó? vivő szlszfomíkos kezelésére a foíosznozitifoló ágenst 0,05-20 nsg/fostfomeg-kbograrmn taríosnányhsn alkainsazItatlak vagy ioptkálts bevitel esetén ö, I -Cósz-os oldat fortnájábmt.
A bevinni kívánt, vlruaeredétt) hordozóval aaszmbált molekula a virusrőszeőskék 1* 10-50, példáai Ó fotó--átfog példán! ő,ŐO:)-Aöfo, példáid 1),2-10% (tőmegszázalék) fomcertfoásiébaa lehet jelen Itt vivő alkalmazás esetén, altéi! a tőtnegszázalők a viraseradető hordozó tömegének és a bevlmri kívánt rttttlekttla tömegének áfonyát matatja, a végső készúmétsyben, Ha 1 rnl-ss tttjeketókbitn alkalmazzuk, ez. a menny n.cg körülbelül 10'-·!(fo óztkal vfrtisrészeeskéz tartalmazd dózisnak ifeie! meg. 0? vgao t-fottr vfotsrészesskéí, példán! 1 * fok; * Ifo vfotsrészeeskéí alkalatazbsitatk.
A saláltnátrys az alábbi - semmiben sem korlátozó -- példákban részletesebbet; ismertetjük.
Az alábbiakban leírjak a találmányhoz tartozó ábrátok
I ábra; Fotokémiai úton transzdukáló A -gal-bal fested Vflffo-seltek, A sebeket A!FeSfoC)--sl kezelték, 5 IfoO! AtlI'IGvIV-ktek (Adj-ve! Ibrtőztnk és az ábrást jelzettek szerint fénnyel kezelték. A sejteket két napig ktknfeálfok, begy lehetővé tegyük a irahszdstkáli jl-gslaktozldáz gén impresszióját, majd a sejteket X-gaksa! (festették es a laktak szerint mikroszkóppal analizáltuk, A. sejteket az alábbiak szerint hezelííík: A, kezeletlen, Is, esak adenovisttssai, C, Alkeffo ’’ á pere tény, lő. ASFfohfo ·; aáenovírns * g pere fény.
2, ábra; Ifomkémlailag fokozott Izaaszshskelb f!CF 1 lő („A' panelt és WtDr („B” parte!) sejtekben végzett, Ibtokéonaiiag fokozott transzdtskolő áramlsai elfosoetrláa annllzise. A sejteket AlffoSfoíybei kezeltük, 5 Aid AdHCMV-bmZ (Ad)-ve! Ifertőztök és & leírtak szerint besngározfttk, Ivet nappal később a sejteket íhmreszoelrt ői-ó-galakmpkmFtziődsl laktíbálbsk és áramlási elfomettíáva.! anallzálfok. A. 2A. ábra a liC ! Hő sejtek áramlást eitorneírlás analízisének eredményét oahatja, A foggóleges vonal jobb oldalán lévő sajtokét ifoeaovfeus-éranszdnkeiőra nézve pozitívnak. tokád jak, mivel e feröleten sem a kezeseden sejtek (felső panel), sem pedig a esak ÁllfoSfoSfoét és féttnyfei kezelt sejtek (alsó: panel) esetében lényegében ttom taláitmk sejfol, A ófoCŐ-CláfoC
F0402Ó2Ó különböző kezetesekct jeteztök az egyes paneteken, A 2d, ábra WiDr sejtek esetében bemmaba a bauszoukeió hatékonyságát & fenyoözis íággvényében, Osztályoztuk a 2A. ábra szerint oreghatározoh, ö-galakirtzidázra nézve pozitív sejtek százalékát ((□) S-, Ádfe (A) § te, Ad-; (#) fer, Áds) és a Pnösvszeonela átlagos intenzitását (tö) S;, Ad r), Λ hibazászlők a közepéitek. 2te kísérteiben tnegábaokon standard hibáját teteted ? aldázohák.
é. ábra: teteit sejtek PCI-vei ibkozeb bzsnszötíkeiőia kát hitte te vírus dózisok esetében. A sejt eket különbőzé MŰI értékű AdfeCbl'V-vel fertőztük és a leírt ibtokémíai kezelésnek vehettük alá. A 3A ábra a leges séjipopoíáeíö átlagos ttnoreszcertetáját mutálja. A kezelések az alábbiak voltak: üres oszlopok: csak AtkoSfe; térdén sávozob: MOtel; szürke: klOtem: vizszitstesen sávozob: Műi zb: fekete:: MOfeáö. A bibazászíök 3 kísérteiből származó EEIte értékek, A 3B, ábra azt mutatja, hogy teljes seltpopuiáelö β-galaíhozidáz akii vitása hányszorosára nőtt. A Szimbólumok megegyeznek ;r 3.A, ábrán alkalmazottakkal. A hibnzászléte 3-4 kísérlet stantlard hibájának teteinek meg.
4. ábra: Fotokémiát kezelés halasa a IHX sejtek söenovfeas transzdnkelöjára.
5. ábra: Foíotömsai kezelés itatása a p-galakiozldáz, AdííCMVdacktevei fertőződ TlkX-sejieklxin történd exgresszíöíái'a. A „lényt megelőzően stratégiában, AiPcS:ís-val előkezeli sejteket további 4 árán a- AIΡοίΑ,-ΙόΙ mentes tápeldatban Inknbáltnk, majd 3 peréig ténnyel sugároztok be. A megvilágítást kővetően, a sajtokéi: Adl teteiVbacX-vel (telted · I ; 3 b poréig. 3 AC-on festözthk. ezután ebhez 2 ml tápolöstoi adtunk és a sejteket a íb-gakskiozsőáz evprasszlőjá-tak. analízise előtt, 2 napig Inkobárlbk, A „tényt követően'' stratégiában AlPehbc-vat kezelt sejteket AlBcS^tőí mentes tápoksatbao mkubáitok 3 óráit át, majd 30 nercig AttelCfelV-laek-vel febözilfe, kantán ebhez 2 ml iágoldaíot steinnk és a sejteket, a 3 perces megvilágítási megelőzően, további 30 porcig mkubákuk, és két nappttl később ir-gaiakiozidáz espresszlőjám nézve amibzáítak.
ő. ábra; Növekvő besugárzás! idők melleit b-gsoaktozidázl kódölő aőenovk-ussaí tegzed, PCI-vel kitevőidét· tmnszdukelő emdtnéuyekent megnő s b*galaktoz;dáz termelődése. A különböző mintákkal kapcsolatos kezeléseket (3,- jelzi a kezelt és kőzeteden mintákat} és a tenydőzisokat (besugárzási idötartanta) az ábrán jeleztük, Adv: adenoviros Ad! ICMVdaoZ. fe: az AlPcísía tötoszenzitízálő.
?. ábra; A PCI hatása a W& sejtek érnoszdukeiőiára különböző fertőzést maiiipbebás! értékek esetében. í'.j - besugárzás nélkül, áá - öő másodperces besugárzással.
A, ábra; A PCI hatása áz Aydő sejtek adénovimmsr történt iranszdnkotőjára. A különböző: dttníákkai kapcsolatos kezeléseket ( te* jelzi a kezeli és kezeletlen: mintákat) és a. fenydozisokal (besagásvásl időtartama) az ábrán jeleztük. A; adermvltbs Ariid.tel v tea·::/.. 5: az; ÁlífeS3s tbtoszeuzittzziő.
Ö. ábra: A PCI hatása, a: i-ieh.a és Psnexlis sejtvoiralak adenoviztissal történi trariszdukeldlára. híres oszlopok: besugárzás nélkül. egyszínű oszlopok: 90 másodperces besugárzással.
lő. ábra: A PC! hatása a te illír sejtek, uolt-A-tlzin hordozóval asszociált actenovirossat történt ü'auszdükokhárs. Ad; adenovírus AdtiChAV-lae:/, PCI.,: poli-Eteizm, 3Pte,l/Ad azt jelents, hogy a komplex , , ... , m' i m vr ' ' te 3\' fe \'te ' i '
- 2SÖ .Pite/Ad, te * ;te? Fid,; Ad
11, ábra: A PCI hatása ember; bőrből származó tsbrob!aszi*seit vonalak adv névírássá; történt d;mszdakciójára, amely során a vírushoz hordozóként poibCdizsnt alkalmaztunk és a besugárzási Időt változtattuk. I...I - MCI. d: nem: komplexéit abetiövirus AörlCteiVteacZ, W - telOl ő/PEC; aöenovtros A.drlC.kdV* iaezi-t komplexáiinrtk vlraszészeeskenkem 25Ö moleknki PCLml.
12. ábra: A PCI, i adenovlrassa) löriént traüszdtikcibra kifejteit hatása, amely vizsgálatban oxmts
Ihteőzózó vírushordozóként különböző kortcemráalöjá baperFeetéb pöllkábönos deüdrlniert alkalmaztunk, Órás oszlopok: besugárzás tiélkük egyszínű oszlopok: Üd roásobperees besugárzással le, ábra: A különböző Időpontokban végzett: megvilágitások és a különböző időpontokban alkalmazott adenovtrus hatása. Az Y tengely bal oldalán jelzőn időpontokban a besugárzás elöá. a jobb oldalon: jelzőn időpontokban pedig a besugárzás thán alkalmaztuk a vhöst, B -1 perces besugárzás, D - írem volt besngárzás.
14. ábra: znegats rhnpön: vlrnsbol száopazó Iboldlokínáz; ködölö adenovtrtts-vekior génterápiás hatásának FCt-vei történt fokozása, különböző besugárzási idők esetében. flSV-ts-r köbolö aöenovfwsvekbnntl végzett, FCi-vel indukált géníráüszöokelöi követően a sejtptssztltást .ganoidfovir-rttl befotyásöhak. Al; .AlFelg,, AöV-TK: llSVdko köbölé sdenövlrns, GCV: gnookttevk, * - csak Al, 1...1 - AltAöV-á'lg Z). - Aí tö
GCV (B) vagy IÖ(< pg/ml GÜV (Cg
B példa
Kiindulási kísérletekben eatberl A'dih adenüksreínőma sebeket kezeltünk uz AfFeS3s Ibiöszenzdszáiövai (ak;mmiüm''bafoelanin, mnelyrtek szomszédos gyűrűiben 2 szuiíbnáíesoport találhasd), a sejteket p-galaktozsdáz ripörietgéns tzriahnnzö AöiíCMV-lsokl-vel adonovfrussal fertőztük és a kísérletes leírás szedőt fénnyel kezeltük. A sejteket j)-galakíoz:ldáz aktivitására nézve festettük, és a rolkroszköpes kép azt motetta, begy sntg a fésmyei kezeit sejtek ieiernös hányada expresszálta. a transzgéni: (II). ábra), a nem megvilágított:, adenovirnssai fértőzött sejtek közül csak néhány bizonyult pozitívnak GB, ábra). Hem találtunk pozitív sejtet a kezeletlen mintákban (1 A. ábra), és a csak Alkob^-al és besugárzással, de sdenovírassai néni kezelt tntnfákbas (IC, ábra), így a fl-galaktözldáz espresszlójáhan tapasztalt, tény által Indukált növekedés az adeoosíros áltat bevitt tmoszgénfő; és nem valamilyen ő--gsíaktoz:ibázi ködök) endogén génből szsrtmtzöft,
1. pékte
Mennyiségi analízisre használt áramlási cltomeíriás eljárásban, a b-gataktöziddA expresszálö sejteket ítonreszkálövá tevő ftuoreszeein·' dl-jl-D'-galaktopiranoztdot alkalmaztak. Ahogyan a 2A. ábrán látszik, a fotokémiai kezelés jelentés mértékben növelte a p-galaktozibáz aktivitást az adenovirnssai ieftozöh biCT 1 lő sejtekben. Így, a j)~ga|wkiozlbézrs pozitív sejtek százalékos aránya a kontrol tér-őzön sejtekben (Ad A A, 0 perc lényt mért bpátörkik-boz (staödárd eltérés, o~3) képest az optimálisan kezelt sgltekbeo (Ad A SA, b pere lény) kb,át:17%-ra övG · nőtt. Masontöképpen, ugyanezen somtákhas a Slopreszeeoeia átlagos fatenzhása 52ál léá-rot (o::b) ÖMat öj>%-ra (rvM) (relatív rfeosaszeeoelsugység, RFFf) nőit. A sem fertőzőit sejtekben, a fotokémiai kezelés Is enyhén, b RFlbrót 12 FFlAsa fokozta az átlagos huoreszuenelát (2.A, ábra, felső és alsó panelek ·. Azonban, az ígért alacsony flaoreszeenelaérlékek és a pozitív sejtek miatt (d.á'A az „Ad-, b ·, 8 -pere fény” minták esetében), ez nem jeletned problémát a vírussal fertőzött sejtekkel kapott eredmények értelmezésében.
A vastagbéikamfnömábél származó WIDr sejtekben a geottanszdukelő fénytől való függőségében még ennél Is nagyobb nbvekeöést Inpasziuímnk (2ö. ábra), lla a rtiegvílágitott, vírussal kezeit sejteket ösázebasönlitjök a nem megvilágltohakkal, a jl-galaktozidázra pozitív sejtek százalékos arányát feküdve maxltman huszonkétszeres növekedést, az átlagos flnoreszeeneiáíntenzitásbsn pedig negyvennégyszeres növekedést találtunk. Önmagában sem a Ibtokémlai kezelés (21), ábra, Ad·', fm, At sem ped ig a megvilágítás iáit ábra. Ad···. □) nem változtatta meg jelentősért a pozitív sejtek arányát.
öküét-s I n/MD
Az áramlás; eáoprctriás eredményeket a kcmiltimittseens ö-gal. nitorfor^én-vmigáhaö. reagenskészletml í'Roche, katnlégasszásn: 1 758 241), Wifer sejtekből származó kivonatokén bitclesltedhk. Az emdméayek szerint a fotokámfeí kezelés következtében a ö-gaiakiozldáz aktivitása Idtríoineszorosám nőt; (adatok nincsenek bemtsttava).
3. példa
Ezótán taoíthnányozlak a vtrasdézismtk a foiokémlaiing fokozott transzdnkoíö hatékonyságára gyakorolt hálását, Ahogyan s 3. ábránd; klinnlk, a iömkémtaí kezelés az összes vizsgált virusdözis esetében fokozta a transzdakslöi. Azonban, a hátas sokkal inkább egyértelmű volt az alacsonyabb virasdózísokeál (1 és S Mélt blertözési tmdíipkcítás)}, ahol az átlagos Enotcszecncléban bekövetkezett növekedés tekintetében: 15- és 35szötös növekedést Egyelt link öreg, a 2ö és 50 MOi-nát tapasztalt 10- és 5-szöms növekedéshez, niegtélelben, képest (3B. áhm). Az is látható volt (3A, ábrái, hogy az optimális lényöozlsnál (7 pere) és 5 MOl-nál kapott átlagos Enoreszeeuela érteke nagyjábőt a kétszerese a tenykezelés nélkül, 50 Möhvai kapott értéknek, rlasonldképpea, az I Méd-nál, tény kezeléssel kapott szint körüibel öl megegyezett a 20 MOl-vai, de ténykezclés nélkül végzett kísérletben kapott színben Így, optimális Iblnkémiai kezelés mellett, a tötokémlal kezelés nélküli fertőzés esetében kaprát géntranszdokeiös szinthez szükséges vlrnsdbzlsnak csak a húszadéra var· szükség.
Az .50· Méü-nái kapod, b-éidaktozldázta pozitív sebek aránya ebben a kisérletben Obésvé (n----3} volt, míg & nem megvilágítod sédeknél csak 132332 <m;3). A tént bemutatott, IICT 116 sebekkel kapott eredményekkel egyed, az adatok jelzik, hogy adcmnlrns ötéi képes a telles sejtpopulációt mmszonkáku.
RiaMRlgk.tgt;entgn beitek Emgbooyims
Emberi vastagöél-kazeioörnábói származó BET I: lé (ÁTCC katalógusszáma: CC3.-247) és WlDr sültekéi (ATCC katalógusszáma: 1.32..-218) az American Type Rpldtre Ctdiecilon-tól szereztünk: be. A sebeket löké újszülött boriáeredebl szérumot, lói) ®sslnresleblnst, löd mg. ml sztmyáemieiot és 2 toki gtutmmm tfeibeo BE·,. Eaisley, UK) tartalmazó REMI iapoldstban tenyésztettük 532'ös <23, almoszlembam 3723-on.
Az ál nőkből származó, emberi cllnmegatovlrns promóterének szabályozása elad álló l..ac2t gént kódoló AdtiCM'V'-saeZ. rskoötöinábs abenöVbust homológ mkssmbiaáclévak 295-as sejtekben alkalmazód pákái? rendszerrel tAduison és tntsak, .1. élen . Visel. 78, IbSa-ióől 17997)1 átlüdönk elő, Rekombusáns vektorokat tiszt kódúk: pfekkdlszsitással, 293-as sebekben magas tdeög szaporítottak és <ECi sávözassat tisztltoíink felírt és rntsái,, Methoás Mok Génét, 7, 13-30 (1995)). A vlroseidatot 0,68 mM üaCk-t és7l,5 mM MgCR-t tartalmazó EBR-sei hígítottuk: a külötibözö kísérletekben alkateizoti MCA értésekre.
76l6ÍBéBÍAÍbezciés
Ballyrfeá lemezek tfeostaip lyukaiba nöbOÖ-bÖOőb sejtet trsasziértdomk, és .12 érán át, 33:C-ots iukubaltuk. Ezekhez 1 tál, 2ö mg/mi Albefe;, -: inrtaimnzö (Eospbyrm Erodnets, bogán, 1.15) tápoidatot adtónk, a sellcket Bt órán át 37<;(3-on ioknháltok, tápoldattál háromszor nsosiuk és további 3 órán ál inkrfeáltok 8?<:ébon. A tápoidatot ehávoutodeb és 201) pl: AdBEM:V -l:ae2-t mértünk be. Ilaooinc perces, 3?:'C-on történt inkunákts dán, 3 ml tápoidatot adtank a sejtekhez, és további 3(1 percen: át inkubáltak a vörös ténnyel {Ehtiiíps 97, 21) W/ö6, Clnemold 35 szűrön átszűrve, a seiteket ért lényloteuzltás 15,5 mW/un volt) végzett besugárzásig. A bgahfeíozldáz aktivitásának analíziséig a sejteket 37A/-on két napig mknbákuk,
5feB:k.Íbs:ém.X:gm-lal
98955-215/EG
Az X-gai (é'bfem-é'krőrG-lnífeiil-ü-G-gakiiítaplfaoozjtl) festéshez s tágeidatot klőntöttök, & sejtekhez i nrt Imáié előafe; (ihöőfe giatáraldehid PláS-ben) adtunk és szobahőmérsékleten 15 percig mkabaituk. A hsáió oidaiot kröniöitnk és á sejtekéi szobahőmérsékletet· ifekXbeti hátzuüsznr mostuk (az első ős harmadik öblítés gyom von, a második lő percig tartóéi), A sejtekhez Imi X-gal oldatot (5 mká K.feeiCNn, e mM K^FeljChífe, 1 mhl MgCh, I mg/ml X-gai) adtunk és 4-12 érán ét Inknbáituk 57:'C-on, majd MC10Ő posdkamerávai (Zeiss) felszerelt rsukr-uzkopon (löó*nagyl;ás: Asm vert b Idő mferoszkőp, Zeiss) a; vizsgáltok.
Ararnjás; .mmmekjasntmjnti::
A. sejteket trlpszmeztök, eenmitbgásüík, 25 utl tápoldaioao felsznszpeadáiénk és 5 percig ŐT^C-on iokubáhuk. A sejtekhez 25 nd éluoreszeclo dHMX'gáláktopimstókfet. (Moieetslar löobes, bogene, Ok) adfenk, és chfekért I percig lekbbéhtis, majd 450 ml jéghideg lápoldaüal fele feketítik. A mintákat 30-bŐ percig jégen tartottak, 5(1 mm lyokhoségd nyioeszőrors am/őrtak és FAGÜ-Gallbur áramlási eiíostétorben (Beetott Dickmsets) amtiizáltak. (diriden egyes mimére Ihdtlb eseményt gyűjtöttünk. bkiOéeszcetn-íiaöteszceneiát tnértnnk 510-550 ere hiteset· át, argon lézerrel (15 seW, Akii ere) végzett exeháeló· követőem Az elpuszmli sejteket az egyedbkiife életképes sejtektől előre szósss vs. Oh ibkos szőrás alapját; kölöttkcttük el. Az adatokat CkLLQnest szekverrel (Beerna Gleklason) analizáltok.
4,- példa k Cl. Adása. a (Π. IX. sejtes. .aée;.u;y|.p.psa.l yégze|;é.traiyvzdakvkgára
AlWkis
Ffeereszeeln dl-b-G-gaktklopitanozidtn Hfe'Gl (kalalögasszáma: 0-1179} a Mofecnksr brobes-fel szereztünk be. Kész utM-os ferzsoldatoi készitettürtk oly módot·, hogy a port DtvíSO és ettmel 1:1 aránya kevetékébest oldottak fel. A. keverékei fekozaíosan adtak. & megfelelő térfegatá vízhez égy, hogy k:l:t (kO/feklSOfeíznol okiam; kapj unk
Elkészítettük a rebomfemins AdGA I riacZ vírust és emberi 2h5-as scjtvonalban (Ad El-cr transzferrnák, eotbttőveséből származó sejtvonat, amelyet 1 öfe FOS-t, Ih NFittd pemcilnm (Gibco HRk), 0.1 sng/ml sztrcnfemlclnt (Gibco BRL) és 2 s»M ghsíamiet tartelmezh Miről F-l I tápoldaiban tartok fenn) szaporkotlak.
bükombjnáns vjrnskészifese
Az A. cfefeől származó, ember; chomegaiovfess gromőfetés;sk szábályozásá «iák álló LaeX gént kötkűö AdHCháV-lacX rekoutblaáas adenovlrust homológ mkömbloaefeval, ziG-as sejtekben alkalmazok ρ,ίΜi7 rendszered (Addisoo és mísau, A Geo . Virul, TŐ, tő55-46ő4 (1997}} ákáokok elő, Xckombináns vektosoktn tisztítottuk plskk-dsztltássaj, 250-as sejtekben magas siteríg szaporítottuk ős eézinmklork; sávozással liszsltormk íBIk és mtstu., Methods Mól, Genct. 7, 15-5(111995)1.
bfetjfe.étgékesrykőse j
A THX sejteket (4G(F sejt) ő em-es csészékbe transzferáltak ás iz őrén át szaporítottak. körülbelül Ő0fe-os összefeiyásnál a Sápnldstm kicseréltük 2 tol, 20 pg/fe 1 ΑΙΕοίΑ,,-νοΙ kiegészítek tápoldtára, és á csészéket tovább mktibáhek lő-1 ő étárt ab Az érzékenyköi tasáalmaző lágtddaioi ehávolkmtak, és n sejteket közönséges tépohiatbafi, a Íénykezeiés és vírussal történő fertőzés előd legalább 4 órán át tovább lokuháltek.
Sejtek fertőzése
Három csészétől 'kflpszin-EHTA-vs! levátaszkkmk a sejteket és a csészékben Büeher-kamrábart végzett számolássá; kiszámítottak az átlagos sejtszánte;. Adettovlrusböl hígításokat késziietiőnk (kök snM CaGfe és 11.5 ölgé't: tabahnü FBS-ben a fertőzésre alkalmazásra kerülő sebek számának megfelelőéi?, Altosában o sejteket 1 90955-2 lefedi
IfeétízlBö
It5 hév); (iertözési muhiplieiiásj vírussal végeztük.
kbelou a vírust a sejtekhez átkuk volna, a sajtokét vörös leanyel (FoiHips l'L 24 W09, Cinenmid 35 sxhxőü álsztlrve, u sejteket éri léoykkeoztíás Fka mW/nd volt; 3 poréig: besugároztuk. Ezután a lápoldafof ekévoHtoUof. és 2i5b pl vlrussxnsxgenzlöi (vagy ő,é8 mbf Cd.'L és ti3 FigGE isrtaimü FBS-t, vírussal mm kezek kendői) adjunk az egyes csészékhez, llarudae pemig,, 3?':'C-on végzett inkubálás után, a sejtekhez 5 ml közönséges jápokkkét sétánk és a sejteket 48 órán át szaporítottuk.
jbáAhGmzjdáz vizsgákká
A sejtekéi j:rlpszin-Efll'A-vai levéfasztohuk és 5 ml tápotdaíhan lélszusxpendáhuk. öt perces ec-rsrihjgátás (iőőő romi után, a tagolástól eliávolhotiok. a sejlüledéket 5(5 pl lápnidafba;? teiszoszpendákuk és a csöveket 5 perere ŐáGŐ-os viztttrdőbe helyeztük, Ezt követben, a sejtekhez Ső te, 37<:C-ra előmelegített, 2 mAGos FíXI-oldatot adtunk és a csöveket visszaiepnk a vízfürdőbe 1 percre. Végok a sejtekhez 90(5 ni tápokkoer adtunk és a esővehet 3ő-őő percig jégen Inkobáttnk, majd a mintákat a ienfiskben ieístak szertár, áramlási chomehtávaí anabzáktac.
frlX sejteket AtFcS^-vai (a 4, ábrás FS-sel jelölve) és adeno vírussal (a 4, ábrán ,.vkas-nak jelölve} kezeltünk, az anyagok és eljárások vitt rá részben leírtak szerint 3 vagy 4 peretg tenoyet besugároztunk, és βgaiakiozíbáz (β-'gal) aknvluora nézve áramlási cao;ndrtávai mértünk. A lehes 15-gal aktivitási mennyiségileg ágy határoztak mez, hegy a lGgai~rs pozitív sejtek és azok Ő-gal aktivitását integráltak. A β-gai-ra pozitív sejtek száma és az átlagos IGgai aktivitás a PCI kezelés eredményeként mégnőfi.
Az eredmények szenny ha a 3'rlX sejteket a. vírussal önmagában vagy a vírussal es ibinszanxiiizálö ágenssel egyúti mkabárjuk, csak minimális fertőzés jelentkezik, azonban ha fotokémiai kezelési (azaz a fdloszenzltlzálö ágenst lénnyel sugározzuk be) Is alkalmazunk, a sejtek transzdukálója jelentősen mértékben megnő (ahogyan azt a jVgal akllvllásban bekövetkezett növekedés mulatja).
3. példa
AdegöyEuyáfndmXvmheb^
Lyukanként 5*111' THX sejrel ö-oynká lemezekre irnasxíhráitank, A rákövetkező napon a sejtekhez 20 p.g/ml AfFcbj;.-l adtunk, cs a sejteket 18 órán át, a?:,C-oo iakubáhuk. Az AlFeb;.s hozzáadását követő lépéseké; tompított termáét végeztük. Az. „először lény stratégiánál, a sejtekből AlheSj^t mosással ekávolkofmk, és Al?cE;S'töl .mentes tápoídatbao 4 órán ál tökubállak, Ezután a sejteket 3 perem mcgviiághoflnk, majd 1 Mül (tbrlözési muliipbckásL mennyiségé. AöllCktV-isek adenuvirus'-vekíorrui (amelyet a 4. példában ÁdCA17laeE--nek is neveztünk) 3b percig kezeitők, L vektor tartalmazza az áramlási ettömelriával analizálható (lásd alább) d'-galakioxldáz ködöm riportergőni,
A „tudna íéoy straíégiáoiü, ő:Feb;:,-vd kezek, majd mosok sejteket először adenovlrassa! kezeliük a térd lekben megadod: Ideig és konecnfráelővai, moslak, és irtás tápoldat: hozzáadása alán ienoyei besugároztuk, A nem megvilágítod: sebeket, a megvilágítás kiveidével, azonos módon kezeliük,
A kezeli sejteket lápeidultal egyszer mososk, msgd a friss tápoldat hozzáadása után, a további analízist megelőzően }7m.'-<m inkaháltak. .3. b-g;?laklozidáz expresszi ölöt, a fenykezelés után 2 nappal, áramlás; eltomelríávtd mértünk. A vírus (amelyet vagy AdtlCMV-lacZ-nek. vagy AdCAtáíseZ-uck. neveztünk? elkészítésére szolgáló eljárást, a sejtek kezeléséi, megvilágítást és a (Egalskioztdáx expresszlöiának analíziséi részidősen leírlak a 4, példában.
(58055-2IS/SG
1454 02626
Az eredmények (S, ábra) azt matatlak, hogy a klséoe: körülményei közök az „először lény' stra-egía alkalmazásával végzett fotokémiai kezelés (az 5, ábra. jobb telén, lévő oszlopok) a il-galdktoxidázx: exprusszélö sebek számát hatszorosára - 2,>%-roi 15%-ra - növelte, Az is Iáiba?o. kegy az „először tény” ellátás hatása, esaknem azonos volt a „utána tény ebárás (az 5. ábra bal léién lévő oszlopok) hatásával.
ö, példa lkkátoMaekÍázJeoeeiéAdjei(jyáaAe(kezeay;á>eeke<lés az.;gsmpy?p:;;.áiial.kődp!i.b?galaktezakk,.})Cbre} kő zmtüeü transzdoke Ιο jének:c redméeve
A sebeket a 3. példában a kísérleti terepiek elmít részben leimé szerint szaporáotluk, inknháltnk ÁlFebzí-vei, fertőztök Adl?i<lMV-laeZ vlrstssal és sugároztok be, Á 15gulaktoz.jdáztehé?'je vxpresszidját kvmikunmszvens lógni rlpörte rgén-· vizsga Isii reagesskészlettel (Rocké, kataiögosszám: í 752 241} mértük a gyártó őtóttttatásah. követve, Röviden, a. selteke? előhűtött FRb-soi háromszor mostuk, és ez egyes lyukakhoz I~
I mi sejtlizis-reageost adtunk. Sxrmaoömérséktefen Üti percig. inkobátümk, majd a se jtkl vasiatokat Fppestdorö csövekbe temszléráltuk, 4:>C-on 2 pSFibg cemrdugáiösk (ronximál la sebességgel), és a sejtki vénáiból (félöiásző) óö pi-i egy ml ktxdlfur'lemez lyukába trariazferáltuok. Ebhez adtunk lói) pl szubsztrábomfeagensk re ahkttálfei·lernezt fóliával lefedték és szöbsbémérssklnten 15 pere és I óra közötti Időtartamig, enyhe rázatás ntviled iökoöáloöt. Az Iökubálás arán a mlktodfer-lomezt iornmométerhe (Vfetorz Wallae 142Ö Mobiléból Com-ter) helyezőik, és: a 'berendezés a lyukakba aatesmotlkssau 50 pl bdeláolös oldatot Injektált, Á t snásodperees késfelfetés után. 5 másodpercig tar-ö téuyferjztelés? összegeztünk. A b-galaktozidáz menstyfeegét, ismert mesoyiségíl β-galaktozldázt íartaimaző mlotákkal felvet; stasdard görbe alkalmazásával: száimfoduk.
Eredmények
A ö. ábra mutatja be tsz: embert vastagbél· karcinoínáböl származó Véllör sejtek., FCfevei fmlnlsáll adejmvlrns'tmttszdukölöjával elérhető b-gaiaktozidázterm elésben tapasztal; növekedést.
így, a ö. ábrából látható, tárgy a i-imsz-inkál? sujtekvt tartairoazó lyukak esetében, ú maximális fénydőztsnáí a b-gafeklozidáz termelésében körülbelül 25-szörös növekedés tapasztalható, és ez jót egyezik óz áramlási cliornetrsás arutlödsnen kaptát eredményekkel (kiad például, 2. és 2, példák).
7. példa .Eldfeásaa, WiDtmeliekbraosxdukoiöjfetk^^
WÍDf sejteket tenyésztettünk 10% FCb-sel (újszülött borjóeredetö szérummal), peaiefílineáí/sztregtómi'· vinnél és k-glmzaniomd kiegészített RFM1 löáö tápokfetban. Tompított lényben a íápehlsfot vitávolümiak és a sédekhez 1 ogiml ΙΑΤΜ,'·· Sáttalmázö tápoldasöt adtunk, A (lénytől védett) sejteket 3 R:0-»o, ik bob? át jokuháltok. A sejteket táooldottal háromszor mostuk, és további a órán át inkubáltok, A ö-lyuksi lemezről a tápoldatoí eltávolítottak, az egyes lyukúkhoz 200-200 pl arfeoovküS'öldamt adtunk és a sejteket 27A. -<.m. 3Ö perem, lény-öl védve iakübálmk. A viroxolöalo; sltávobtobok,. és a sejteket tápoklmtuf egyszer mostuk, A sejtekhez 2 m? tápoldatot adtunk, majd séfei-om .30 peréig, ténytől védve iokubáltnk. A sejtek közül néhányat Öt) másodpercig kék fénnyel mesogároztssk. fa sejteket ért fényintenzitás fi mWZIM volt). A sejteket fénytől sfedve 2 napig Int; uhuitok a (l-gaíaküszfeáz aktivitásának áramlást elfometrlás analízise előd (lásd 2. példa, „kísértetek. iveep· jel” tamil rész),
Eruöpfefíyek
A 2. ábra őzt matatja, hogy a PCI alkalmazásával lehetséges a sebek lOPTAónak trgnszxlnkebsla. meg az
Pfekfem15.0)0
Ft)dí)2ő2ö olyan esésekben ss, abtd kezelhető virnsdözisokkal végzett itagyoroányes: íéttőzéssei ex nem vek lehetséges, A 7. ábra bemutatja, begy WlDr sejteken, 10ő MO.I dózisé vírussal és EÜi-vei löósó-os, míg a hagyományos tértézéme: csak 30%-es tra-tszdukeiét értünk el Ehhez hasonlóan, 3ö MOI dózissal és PCEvel ;>99%-os teaosxőnkmo, tóig ÖCS. nélkül esak ŐOvk-nái alacsonyabb mértéké transzdokeíé érhető eh §, példn hö.nstfel Ap46.Al-ek.aöen$m;rnsrtmnszduketégára
A3á6 sejteket tenyésztettünk 10% FCS-sel tüjszejob borlúemdétü szénmmml), pen lei lifonei/sxíregfo'· nrieínneí és L-gfotamtemd klegészifob RFMJ 1646' tanoktatban. 'lőmgifoít lényben a tápoldütot ellávöbtoífok és a sejtekhez zó pg/ral AiReb;:t-l tartabnazo tápoldtácá: adtunk, A (lénytől védett) sebeket 37*C-o«, I'8 érán ét mknóéhtíL A sejteket íaperidattal háromszor tnesínk, és tovább) 3 érán át Inkabákmo. A tápoidufoí vkávtühofo-k, az egyes lyukakhoz. 206*366 pl AdHOMVAasA adenovítvta-oidsfot adtunk és a sejteket n^C-ost, 3ö percig, lénytől védve inkttbálóde, A virusoidalo: otlávoiifodck, és a sejteket tápotdada; egyszer mostuk, A sejtejúiez 2 tnl lápeldaíöí adtunk majd 37Α/·οη, 30 poréig, lénytől védve inkabálfok. A sejtek közül néhányat 60 ínásodpeteig vörös ténnyel besugároztuk (lásd k példa, ,3: bérsetek nteegljek cseni kéz), A sejtekéi ténytől védve 2 napig biknbáítnk a k-galakiozidéz akti vitásának áramlási ertosnehdás anatíxiso előd: tiásd 3. példa, „kísérletek receptjei” elme rész), kteőmétiyek
A k. ábrán bonmtatorták szerint PCt-vei lényeges mértékben fokozhatják az emberi tüdőrákból származó A549 sejtek, sőenovlrns által közvetíted: géniranszöokciéjás. így, a „norsnábs forfozéssefo (A·:·, minta, 0 pere lény) összefoisontkva, a ö : perces megvilágítással végzett PC: a tmuszánkált sejtek számát körülbelül tízenegyszeresére, azaz körülbelül 3%-ről körülbelül 33%-ra növelte.
th példa
EOjJigtáygHeLséö.hm?eznimej;yonaigk.mu5szilukejőjára j-íeí,a/sejteket az Atneriean Type Cnlbsre í.knlecüon4él azufezíünk lm, mig áz erükért méianőroáböj származó nmexllt sejtekét a őlorvtegian Rádium Ifospital-ban áliiiobnk elő, A sejtek szaporítása, mknnáiása 1 piZóni l'FFbA, foioszenzlilzáibvah iértözésa A4HCMV.--hx:Z sdeoövirosxai (MCI 3), megvilágítása és analízise & 7. példában lektak szerint forténk foRínmnyey
A. 9. ábra szerint a PCI, a Hehe és Fruzsiit sejtvonahtkban is fokozta a transzonkm<áe,
16, példa
i)k7JRfos<rl:2ÍÍ:j:::!ÍzŐhÍi<:rtfozuya(ay::Z<mtakadsaümbnss;d.történLirapszdtAel;ba
WÍDr sejteket szaporítottunk és 1 pg/ud TkFSX iótoszenzitlzáléval Inktsbálímsk a 7, példában leírtak szerltü, A pvit-b-llziut (FIX, M\V 3076(1) a bigma-iél szereztük be. A viroskésztíménybes a vlrnstészeoskék koueenSráeiőjá: A;SS“0n végzett méréssel áiiapüottuk meg (lásd, báítieredet és rntaai., ,1. Vketi, 7468-7566 (1690)).
Az alábbi adenovtros-'ELL komplexeket készítettük el:
SFhhÁAd: vtrusrészeeskéobéni $ molekula 101.-:1, éőőPEÍz.Ad: virusrészeeskénkéitt 560 tntdektdd fold,
2dőkk,il,íAd: vlrusrészecskéukéoí 230 molekula fold,
3061.,(,/Ad: virusrcszeoskénkénr30 molektna: Pld,
63953-2! CSC
Pöéfofolfo
Megtételé -módún hígított 01,1.,4 adtunk a vlmgrészecskótet tanai snnző hígításhoz. A m imákat •sségíbgaiássaí vagy pipettával végzet telsz? vásssl óvatosán Összekeverték, és 30 poréig szeh;bsőn?érsék léte;? Inksibáliok.
,9 ő-lyuká lemezről a tápok·»;??; ekávolltntttjk, az egyes lyukakhoz 200-200 ni sdeoevires-éidaie; (5 MOi) vagy FkL/Ad-oidakí· (5 MÖ1) adótok és a sebeket szAl-un, 30 gémig, lénytől védve inkttbáltok. Az sde:?ovtroxxál: nem leddzőíi lemezekhez csak 200 pl PBbu ndntdk, A, kukákból 200 pl pklatot ettávuhtu'ínrik és a regeket túnekkOlal egyszer umstttk, A sejtekhez 2 stti tápoldatei adhtbk, magi 3?!>C~en, 30 percig, lénytől veilve hrknlteltak, szótár? s 7, póklábáé lerttak szerbit, kék lénnyel besugétWük. .A p-galaktozjdáz akOvkásánáik áramlást est;snretr?ás a??allzise előtt (lásd 3. példa, „kísérletek reeepljes” cinül rész? s sebeket tésaytő? védve 2 napig rnkobákiik.
bredptények
A 10, ábra azt tntttada be, hogy a kiél ostikődsk á ροΙΙ-ΙΙ,-ΙΙζΐη (Oki,) hordozóval asszociált adetso vírus esetéőet? Is, Ahngyas? a 10. álrtútt látható, á PC? ttélklOt (azaz 0 pere léaybözls) léttözős hu??·? alacsony (<$%} bauszdttkstót eredményeztek a Pl.?, hosdozo jelettláiőhen ás hiányában is. Egyétíeltnö, hegy a sejtek toegvslágbáza & ira?tszbt?kelő: tekisáetébe?? a PCI etvdrnényeké?·?; bekövetkező, téuydőzistől tbegö növekedést indukál a 12.1, hordoz?! jeleitléíében és hiányába?·? is. kéig a 01,1, nélkül (A 10. ábrán o) eleshető legmagasabb iranvzdssclós haiékettyság 37%-es volt, a PCI és Ott ketnbhráciőjával (A? a sejtek 3732-a blz?snyuit pazstlvnak, ant? a tí'anszáakák sejtek arányában >20~szeros növekedést jelent ahhoz képest, a?t?h agyú-ilyen feltételek toelletí, de PCI tséikUl ériünk te, és száztszotos növekedési a storsttális fertőzéshez képest 1.0 pere törty, 012, nétkbly Így, a PCI lényegeset? Ibkuzza a 10,1,-2 hevem adeotsetrisssssl végzett ttmsszdukclé htstékos'syságát, és e kpothináeló &11? a borzasával sokkal magasabb p;rnszdt?kelés hatékonyság érhető el, mint a PCI ős a nem bevető adenovírus kombmáeiójáyak
1L pélslsr kkOlSM-tel^M-fe&W-áéáslOll^JáiAéÓigszt-steiygmalJtmtszíbskásáaara^^gmtelyiíetL^a^.ykusimz il<t!:vtez?;>hensux:h:j::d;zjnbajkabaazía.?j;.
'Emberi bőrbe I származó ílbroblaszt sejteket szaporítottunk és TPOSv* löíoszészúltenőval tnknbálnznk a 7. példában leírtak szedet, 01.LA és vünsí tsdahmsző ksstspiezet (vhusrészeeskéstként 250 molekula PL?.,) átillokotik eső a 10, példában: leírtak szerbe, és a sejteket: 5 MCI vitttsséi leitöztstk. azután ntégvilágitítstek és analizáltak a 10, pékfesbtie leírtak szedet, ktédméeyek
All. ábra ssnnutjtt be a 12,1, hurdüzűval kernhtnák PCI hálását az etnbets bűdtől származó ilbmblasztsejlvtusai (HP-lő5 Iranszdukesűjúa, A dbíeetsiszs-sejtekikll Istned, hogy leste rezisztestsek az: adefs?svirns írastszzlukeiőval szemben ős aiesgyat? az: a I 1, ábráé látszik, e sejtek „normális” öunszdnkssfőls (0, 0 mp lény, Oki, nélkül) igea alacsony, es Oül-vei esak k is mértékben iűkezhatő, Ha hordozóként Okk-t alkalmazunk, ie-tykezelés nélkül a transzditkekss hatékonyság kissé e·?telkedik, de látható, hogy a 122 éhben az esetben is lényegesen lehozz;? a tmnszdökdők npifntáiss körinmétsyek között a ftáttszőnkáli sejtek aránya 7,33á-rét 44,adata emelkedik, így. a botáoző sríksiteitzásáettk kosssfelnálása t? PC? teeht??5Íűgiáv;ti hatékony iranszdnkelőt biztosit, a itanszdnkstőmik egyébként Igen elsensriks sejtek, esetében is.
12, példa
90955 2 CSC
smteket szaporítottunk és 1 pg-'sn 1 ΤΡΙΤΑ,, lőloszenzltizáidvsl inieobálhmk a 7, pék-lábat* leittek teerfet bupésTéeiíP-e; a tóiagenőo; szesz;ztímk be (3 mgöztík Az ailmüZíSzött siíenovlros as Ád(97MV-sae2 volt,
Különböző kosteénírádtőjá Suporkcct^-o! lartahnaző udonovIkús/SoperFecK^ komplexeket kölónbőzö monayiségfi SnpetFeeKkHJok az adésmvhusá tattahnazó oldathoz: való hozzáadásával ntájd a keverék 39 porcig, szobahötnemek te ten végzett bíktuhllásávai ál Ikonok elő,
A ő-lyukö lemeztől a tápoidzttot eitávohtotiuk, az egyes lyukakhoz: 599-209 pl adenovkes/SuperFeclív komplexet (az adenevims dózisa a 9101 volt) adtuők, és a sejteket 3793-or:, 39 percig, lénytől védve soknbáítuk. A lyukakból 299 μ! oldatot ehávolhotntnk ás a sejteket tápoldatt&l egyszer merünk. A sejtekhez 2 tol íápotdatot ad.Sonk, majd 37:'C-sm, 39 percig, lénytől védve Isdmbásíak, azután: a. 7. példában leírtak szerint, kék lénnyel besugároztuk. A b-galaktezidáz aktivitásának áramlási eiíostteirlás analízise előtt tlásd 3. példa, „kiset'letek recoptiesi” elsssh rész) a sejteket lánytól védve 2 napig iaknihákok.
őrmiményvk
A. 12. példában bemutattuk hogy a 1971 a !sCL-sö! estető vőtssbordozőva! is hatékony. .Ahogyan a 12. ábrán látható, hu hordozóként a detsdrimer ooiteation SoperLeetCbt szerepel, a 1971 lényeges mértékben tekozza az adenbvitus állal közvetített géíthattszdstkeiőí, asttsttstyiben a hordozót oö ügüstíméí aiaesonyabb koncentrációban alkalmazzuk. Superkeetíkkel a PCI képes volt a Iranszdukált sejtek arányát, a „normális” fertőzéssel (azaz 9CI és ünporFeetA? nélkül) elérhető értek öíbszereséte (okozni, ötig a PCI - a StsperheetA·1 nőikül - maziíosürr Íz-szeres, a Sonerr ecák pedo; tstazhnstm líi-szetes emelkedést generált.
Lk példa
MeOÍlágltás.fendentíykus-tteadás kfemfetezö jdtteuhei rlC Γ 1 In sejteket szaporítottunk és I pgőoi TPPS>s iötoszenzhizálővat fekghsdionk a 7. pesdábast leírtak szerint. A sejteket AdríCőáVdscZ adestovirussal (Miöt 5) fertözshk 39 pőréig káhfebözö Időpontokban a megvilágítás elölt és «tárt (amely mindig 4 órásai a (eíoszsoziiizálő eltávolítása ntást történi). A h-gaiaksozldáz aktivitásának áramlási ehometriás analízise élőit (lásd 3. példa, „kísérleteit receptjei” einsn rész) a sejteké· ténytől védve 2 napig inknbáliok.
bmdmenyek
A 13, ábra mntatla be a íénykezelés, a vírashevheibez viszonyított időzítés hatásának az adenovlras által közvetítek géirtraoszdnkdőrs gyakorolt PCkhatásrn.. Láthatjuk 113. abrak begy a 1971 megvilágítás bosszú hlomtervahomban hatásos Inggstlenül attól, hogy a vírust a. megvilágítás elölt vagy után alkalmaztak. így, létezik egy olyan, legalább 17 sírás íööteríans ;a vőnssrak. a Ixssggátzásí soegelözö d ómtól a besugárzást kővető .13 őrsig történő beadása), asttlkor a vírus: beadhntöe mégviságítháíő, dá pozitív 197) barát még mindig teaniarthatő. Ez klinika! nézőponttól igen lényeges szempösst, mivel a klinikai orvosnak nagy (sexlbliitást biztosit a páciens kezelésének megtervezésében és más kezelésekkel például sebész! beavatkozásokkal - való kmmíimdásábám7337ooooo7ooo77j,oooo77oooo7o:::o7ooo7 77777:o:o:7o 1:7 :: ·
Üd, példa
ZAstyno .stes/?őa vaz-sból szás-teszó 7)ma|s?An:ázt,,,kó<ügó....adentg:Mm:yekt;etJtegterápiás,Jnaásángk
MőMíéLlAjAtve!
93953-2 lóikéi >0
1-lCT í 16 adeooksrcfeóítm sejteket térlóAsfek HSVók géni kódoló adeaovfrus'erederá génterápiás vektoíral (Adv-TK) és a sejteket PCI kczeléaóek vetettek alá, A fertőzés körittményei a „kisétletek receptjei'' •eted részben letetek voltak (MÖF::5).. A fertőzés után 2 nappal a sejtekhez fellónböző koncentrációkban gmctclóvnt (GC¥) adtunk, és a -sejteket további 3 napig mkubálmk, maid az MTT eliárássas telefest vizsgáknak. Bz az ekórás azon alajml, hogy a vlzfedókotiv tetrazóbam-sót. (MTI) az élő, met;tboistik;saö aktív sejtekben lévő mitokosferiáös dchldrogcnázok feíborszmís, oldhatatlan fonnszánná redukálják. Egy milliliter,. 0.25 p§ MTÍ-t tamtaaaó iápoktetot adósak a sejtekhez,, majd 4 órán át 3?öC~ons dkk-os {vív} GCt íiAooszferáöaíi tefeibákok, Az eredményül kapott .'fe?niazánkfistályólrát lyukasként 208 μι izopröpanolban iSigma,. MÖ, USA) feloldotok. Az oldatot 9§-lyükú lemezre danszferáltek és MoMisfcaö BX rmkrolemez. leolvasóban fkebsystmns, Fbmország), 570 snt-es szűrő alkalmarásávál mérést végeztöhk, íjjjjjgsjg
Ahogyan a^ 14. ábrás látható, az AíPe§& feíöszeeAtizáióval, AdV-TK'val és GCV-vd kezelt, sejtekben, a GCV 3 khióöbóző dózisa esetében a GCV toxikus hatásában fénytől íliggö növekedés voli megfigyelhető. Ezzel szemben, hyea hatás nem volt a csak feíoszeoAdzálővai, a fotoszenzhtrálóvtd és OCV-vel vagy a föteszerizinzálóvaí és ÁdV-dK-val de GCV-vel sem kezelt sejtekben. Bz azt mutatja, hogy a GCV éllel közvedtett sejtpusztnlásbaa bekövetkezett, fény állal indukált növekedés s ΊΧ gén, PCI kezeléssel fedtetek fokosod bevkelések, ós ennek kővetkeziébse a GCV pro-drog fokozod feítiválásartak eredménye. A HS V-ik gémCCV kombinációt széleskótbea alkalmazzák a rák kifeíkai génterápiájában, és Így e példa mutatja, hogy őikalimfebamok PCl-t rákos megbetegedések gétderápiájábao alkalmazod gén sejtpsszdtó hatásának fokozására, Bmiéliógva. e példa is igazolja, hogy a PCIj génbevitelt fokozó Íratása aem korlátozódik a riporter génekre, haaefe alfedsmKhéíe olyan fehérjéket kódoló génekre is, amelyek terápiás hatást fejthetnek ki feizoayos rákos sejtekre.

Claims (26)

  1. Szabadalms igénypontok
    1. /« ví/ro vagy e< vóv eljárás nuk temsuv-moiekula bevitelére egy adott sejtbe, axxuZ/eZZmejw, hogy az eljárásban a sejtet fotoszenzhizáld ágenssel erinikeztetlúk, a sejtet a bevinni kívánt molekulával (transzfer molekula? érimkezf etjük. amely molekula víruseredetü hordozóhoz kapcsok vagy abba beépített. es a sejtet olyan hullámhosszúságú fénnyel sugározzak he, amely a foíosz.enzhhtáió ágens aktiválása szempontjából, hatékony, ahol a. virális hordozó adenovírus vagy adeno-asszociált vírus, és a fotoszenzltizáló ágens, etitfeszómákba, lizoszómákha, endopiazmatikos retikulutnba vagy Golgi-készúlékbe lokalizált.
  2. 2. A? I igénypont szét inti eljárás ,;dk'?í!..'Z\-'(\ hogy a sej; emlőssejt
  3. 3. Az L vagy 2, igénypont szerinti eljárás ozzo//e//e»?ejve. hogy a transzfer molekula nukieinsov, amely teljes hosszúságé gént vagy eöNfet vogy ezek bármelyikét kódoló egyéb DlMS-í. tartalmaz vagy szék bármelyikének fnnkcimsáits fragmentumai tartalmazza,
  4. 4. Az 3, igénypont azenntt eljárás ,;ζζ·«'jeAmstzre, hogy a. Rukieinsav-tnotekala pm-drögot.aktiváló enzimet, tébérjefemhtt, apoptóztst tndttkálo fehérjét, «nmunstimuiáló faktort, daganaíspeetftkus antigént, immsuireriászezEgynlladást gátiét, sogíegeoesls-gáfiöí, érkópződést indukáld fehérjéi, koagul u m gátló fehérjéi, mtraoeiiniáris antitestet vagy rgkornbínáus hsnmntexmí kódol,
  5. 5. Az l.vagy 2, igénypont szerinti eljárási oszolyW/msesve, hogy a transzfer molekula antiszeusz RNSmolekulát, rihozimoL sptamert, oiigontskleotlífet vagy tripiex kialakítására, képes oligonukleotldoí kódoló sakle imav-meiektba,
  6. 6. A ?-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás ;r.fe fe/femíoví?, hogy & nukleinsav-moiekula 20 és 1ÖÖÖ0 bázis közötti hosszúságú.
  7. 7. Az t-ó. igénypontok bármelyike szerion eljárás ózza/ fe/femezve, hogy a transzfer molekula pofekuleotid, és vínneredetö hordozóba történd beépítéséhez szükséges víruseredetö elemeket tartalmazó vlrttskonsírokcibbö van IItesztre.
    S. Az 1-2. igénypontok bármelyike szerinti eljárás szzfe fehivnozve, hogy a viruseredetú hordozó adenovírus,
  8. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás zízzm Ádfeínezve, hogy a fdtnszeozitizáiö ágens a vireseredeíh hordozótól elkülönült.
    lő. Az 1-9, igénypontok ixirmdyike szerinti eljárás íízzM felfedezve, hogy a tbíoszenzhlzáid ágenst és víroBeredeiö hordozót egyórást köveiben érinlkezfeijük a sejted.
    l-i. Az 1-10, igénypontok bármelyike szerinti - eljárás asm/ ysd/mnísve, hogy a íótoxzeoziiizáio ágens 1WS&,· AÚtefej vagy más emíifíl fotoszenzhlzólö.
  9. 12, Az 1-10.. igésypoatök bármelyike szerinti eljárás szzat jehemerve, hogy a Soioszeszhizáló ágens Samínoievaiinsav vagy s-aminoievuiinsavak észterei vagy annak gyógyászmilag elfogadhat sót közút választóit,
  10. 13. Az 1-12. igénypontok isárnrelyike szerinti eljárás «tz«/>//emezve, hogy a fetoszenzitlzáló ágenst, & besugárzást megelőzően, 4-24 órán ál ériníkeztetjük a sejttel
  11. 14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás ózza;ya/femezve, hogy a foteszenzitizáfe ágens vagy a víruseredetn hordozó, vagy mindkettő egy vagy több horáozómoiekniábez, céibajmteió molekulához vagy cél baj átlátó vektorhoz van kapcso lva, asszeciáhafva vagy konjagáhatvs,
  12. 15, A 14. igénypont szerinti eljárás assa//«fcetw, hogy a virnseredetú hordozd herdozómeiekoláhez *
    van kspesoiva, asszociáitatva vagy konjngáliaíva.
    lő. A JA, vagy 15, igénypont szerinti eljárás orzo/ ,Wi«w«sve, hogy -a hordozóm oíekula polikalioot vagy katlonm. llpldoí tartalmaz.
  13. 17. A ló, igéuypout szerioti eljárás gzzo/ /rifejnesve, hogy a polikation pok-L-iizin, nob-D-lszsa vagy Superhect©.
  14. 18. A 16. igénypont szerinti eljárás ίχζ~ο//ο//ί»?;<;ζνί·, hogy a kationosJipid ÖOTAP
  15. 19. A 15. vagy ló. igénypont szerinti eljárásszzm be/emezve, hogy a hordozómotekuia hposzóma vagy előnyösen legalább egy kationos lipidei tartahnazé · Üpiden alapuló konstrukció.
    7.0. Az 1 -.1.9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás mríí/ye/b'Wfrí’e, hogy azon sejteknek, amelyekbe a molekulákat bevittük, legalább 50%-a nem pusziul el,
  16. 21. Gyógyászati készítmény, amely viruseredetö hordozóval kapcsolt vagy abba beépített Títlfezferímnekulát és iotoszenzinzáló ágens; tartalmaz, ahol a transzfer molekula, a yírnseredeíú hordozó es a fatoszerízjtízáió ágens az előző igénypontok bármelyike szerint meghatározottak.
  17. 22. A 21. igénypont szerinti gyógyászati készítmény betegség, elváltozás vagy fertőzés kezelésében vagy ntegelőzéséisen való Alkalmazásra, ahol a transzfer molekula terápiás molekula.
  18. 23. A 22. igénypont sz-et inti készítmény génterápiában történő alkalmazásra.
  19. 24. Fóioszenziíizálő ágens és vintseredetö hordozóhoz kapcsolt vagy abba beépített transzfer molekula alkalmazása, betegség, elváltozás, vagy fertőzés ItóBelésébsn vagy megelőzésében történő alkalmazásra szolgáló gyógyszer előállítására, ahol a vlrnseredetd hordozó adenovírus vagy söeuo-asszoeiált vírus, és a fotoszenzitizáló ágens endoszómákbs, bzoszómákha, endoplazmatikus reíikukmtba vagy Goígi-készülékbe lokalizált, almi a traszfer molekula terápiás molekula, és ahol a transzfer molekula és/vagy a viruseredetü hotdozó és/vagy a fötoszenzítízáió ágens az 1,, 3-12,, vagy 14-19, igénypontok bármelyike szerint meghatározott.
  20. 25. A 24, igénypont szerin ti készítmény génterápiában történő atkáimazásra,
  21. 26. A 25. Igénypont szerint! alkalmazás vagy a 22. igénypont szerint; készítmény, ahol a génterápiát specifikus sejtek iránylton dőlésével, génexpíesssto irányított gátlásával, aagmentácíos terápiájával, vagy mutáeiójavítássaí végzik úgy, hogy a páciensbe bevisznek egy adott elégtelenséget korupenzáló funkcionális terméket expresszáió gént vagy annak részét, altot előnyösen 105-10'5 vlrosrészéeske adandó be tö vívó.
  22. 27. A 24-26. Igénypont szerinti alkalmazás vagy á 22. vagy 23. igénypont szerinti készítmény, ahol a betegség, elváltozás vagy fertőzés rák, izületi csüz, <?ríóefösrieror;s, vírusos- és más fertőzések, psoriuris, szoiáris elszúró möa,, st'bgyögyy íás, törés gyógyulása, szemölcs vagy örökletes elváltozás,
  23. 28. A 24-2. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a transzfer moiokola a vhuseredetu hordozóhoz kapcsok vagy abba beépített, és a íótoszenzkizálé ágens és viruseredetü hordozó egymást követő beadásra szolgáinak.
  24. 29. Potoszenziözákl ágens és vírnssrsdetö hordozóhoz kapcsolt vagy abba beépített transzfer molekula betegség, elváltozás vagy fertőzés kezelésében vagy megelőzésében történő alkalmazásra, ahol a viruseredetü hordozó adettövims vagy adeno-asszoeiáit vírus, és a fotoszenzitizáló ágens endoszőnsákha, lizoszötnákba, endopfezmabkns reiíknhnnba vagy óloígí-készfllékbe lokalizált, almi a traszíér molekula terápiás molekula, és ahol a tran \cí mo tw \ e' a· !, se c, e > 5, >d<. <s' < a totns o bő u , 5 ' < 1419. igénypontok bármelyike szerint meghatározott.
    9Ü955-215/SG
    KI4Ö262Ő
    3Ö, A 39. igénypont szerinti fotoszenzuizáló ágens és vtraseredeíh hordozóhoz kapcsolt vagy abba beépített-.transzfer molekula génterápiában történő alkalmazásra
  25. 31. A 29. vagy 30. igénypont szerint; tbtoszenzkizáló ágens és. víruseredető hordozóhoz kapcsolt vagy abba heéphets transzfer melekofe, ahol a fötoszenzhisAló -ágens és a transzfer moiekaia együttes vagy kükmkülön történd alkalmazásra szolgál,
  26. 32. A 3:0, igénypont .szerinti ibtoszenzitizáló ágens és viroseredeni hordozóhoz kapcsolt vagy abba beépített transzfer molekula, ahol a génterápiát spedfíkus sejtek irányítón dőlésével, géocxpressziő Irányított gátlásával, aogmeutáeiös terápiájával, vagy mntáemjavitássíd vttgzík égy, hogy a páciensbe betesznek egy adott elégtelenséget kompenzáló Innkeionális terméket -expresszálió géni vagy annak részét, ahol előnyösen lOMö’vwsrészeeske adandó be ó? vM .33. A 29. vagy 30, igénypont szerinti fotoszsozkizáló ágens és vihssersdefü hordozóhoz kapcsolt vagy abba beénifett transzfer molekula, ahol a betegség, elváltozás vagy fertőzés rák, Ízület; esúz, «rrőm-wc/erow^ vírusos- és órás fertőzések, píoratsís, szoláris elszaresodtis, sebgyógyniás, törés gyógyulása, szemölcs vagy örökletes elváltozás,
HU0402626A 2000-11-29 2001-11-29 Vírus közreműködésével történő, a citoszolba irányuló molekulabevitelre szolgáló fotokémiai internalizáció és eljárás HU230334B1 (hu)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB0029142A GB0029142D0 (en) 2000-11-29 2000-11-29 Method
GB0029142.7 2000-11-29
GB0029405A GB0029405D0 (en) 2000-12-01 2000-12-01 Method
GB0029405.8 2000-12-01
GB0114696A GB0114696D0 (en) 2001-06-15 2001-06-15 Method
GB0114696.8 2001-06-15
PCT/GB2001/005281 WO2002044395A1 (en) 2000-11-29 2001-11-29 Photochemical internalization for virus-mediated molecule delivery into the cyosol

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP0402626A2 HUP0402626A2 (hu) 2005-03-29
HUP0402626A3 HUP0402626A3 (en) 2012-09-28
HU230334B1 true HU230334B1 (hu) 2016-02-29

Family

ID=27255992

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU0402626A HU230334B1 (hu) 2000-11-29 2001-11-29 Vírus közreműködésével történő, a citoszolba irányuló molekulabevitelre szolgáló fotokémiai internalizáció és eljárás

Country Status (16)

Country Link
US (1) US7521239B2 (hu)
EP (1) EP1339862B1 (hu)
JP (1) JP4638654B2 (hu)
KR (2) KR101180548B1 (hu)
CN (1) CN100490902C (hu)
AU (2) AU2210402A (hu)
BR (1) BRPI0115794B1 (hu)
CA (1) CA2430334C (hu)
CZ (1) CZ303792B6 (hu)
DK (1) DK1339862T3 (hu)
ES (1) ES2445579T3 (hu)
HK (1) HK1055137A1 (hu)
HU (1) HU230334B1 (hu)
PL (1) PL213376B1 (hu)
PT (1) PT1339862E (hu)
WO (1) WO2002044395A1 (hu)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0323699D0 (en) * 2003-10-09 2003-11-12 Univ London Use of photosensitisation
GB0415263D0 (en) * 2004-07-07 2004-08-11 Norwegian Radium Hospital Res Method
GB0613753D0 (en) 2006-07-11 2006-08-23 Norwegian Radium Hospital Res Method
GB0811955D0 (en) * 2008-06-30 2008-07-30 Pci Biotech As Method
US8808733B2 (en) 2009-03-31 2014-08-19 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Method of controlled drug release from a liposome carrier
GB0914286D0 (en) 2009-08-14 2009-09-30 Pci Biotech As Method
GB0914287D0 (en) 2009-08-14 2009-09-30 Pci Biotech As Compositions
LU91641B1 (en) * 2010-01-21 2011-07-22 Ct De Rech Public Gabriel Lippmann Cancerous or pre-cancerous tissue visualization method and device
CN103635205A (zh) * 2011-07-01 2014-03-12 思佰益药业股份有限公司 使用光增敏剂或5－氨基乙酰丙酸类的光动力学治疗
WO2013070872A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Methods and compositions for x-ray induced release from ph sensitive liposomes
WO2015028575A1 (en) * 2013-08-28 2015-03-05 Pci Biotech As Immunisation method by photochemical internalisation
CA2922320C (en) * 2013-08-28 2022-11-22 Pci Biotech As Enhanced photochemical internalisation using a tlr ligand
CA2965509C (en) * 2014-10-24 2023-03-14 Avectas Limited Delivery across cell plasma membranes
GB201503776D0 (en) 2015-03-05 2015-04-22 Pci Biotech As Compound and method
KR101936559B1 (ko) * 2016-07-13 2019-01-09 국립암센터 분해가능 연결자를 포함하는 광증감제-펩타이드 결합체 및 그를 포함하는 광역학 진단 또는 치료용 조성물
GB201718631D0 (en) * 2017-11-10 2017-12-27 Pci Biotech As Method
GB201801169D0 (en) * 2018-01-24 2018-03-07 Pci Biotech As Method
WO2020017962A1 (en) 2018-07-16 2020-01-23 Dcprime B.V. A combination product for use in tumor vaccination.
EP3958894A1 (en) 2019-04-25 2022-03-02 DCPrime B.V. Methods of tumor vaccination
CA3172447A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Erik Hans MANTING In vivo use of modified cells of leukemic origin for enhancing the efficacy of adoptive cell therapy
CA3172449A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Erik Hans MANTING Ex vivo use of modified cells of leukemic origin for enhancing the efficacy of adoptive cell therapy
CA3196677A1 (en) 2020-11-05 2022-05-12 Erik Hans MANTING Use of tumor-independent antigens in immunotherapies
EP4304633A1 (en) 2021-03-12 2024-01-17 Mendus B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
WO2024068795A1 (en) * 2022-09-27 2024-04-04 Pci Biotech As Method for releasing viral vectors

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4649151A (en) 1982-09-27 1987-03-10 Health Research, Inc. Drugs comprising porphyrins
EP0210351B1 (en) 1985-04-30 1993-07-21 Nippon Petrochemicals Co., Ltd. Use of porphyrin derivatives in the detection and treatment of tumours
NO891491D0 (no) 1987-08-12 1989-04-11 Peter Nemeth Prosedyre for befrielse av celleblandinger og vev for uoenskede populasjoner.
GB8721108D0 (en) 1987-09-08 1987-10-14 Salford University Of Liposomes
NO176947C (no) 1988-07-06 1995-06-28 Long Island Jewish Medical Ct Fremgangsmåte for fremstilling av et topisk preparat for fotodynamisk terapi
US5059619A (en) 1989-06-14 1991-10-22 Quadra Logic Technologies, Inc. Stable freeze-dried polyhematoporphyrin ether/ester
NO179410C (no) 1989-07-17 1996-10-02 Univ British Columbia Analogifremgangsmåte for fremstilling av terapeutisk aktive monobenzofyriner og anvendelse av disse
US5179120A (en) 1991-06-28 1993-01-12 Cytopharm, Inc. Porphycene compounds for photodynamic therapy
US5521291A (en) * 1991-09-30 1996-05-28 Boehringer Ingelheim International, Gmbh Conjugates for introducing nucleic acid into higher eucaryotic cells
PL165249B1 (pl) 1991-10-29 1994-11-30 Wojskowa Akad Tech Sposób otrzymywania soli kompleksowych hematoporfiryny i jej pochodnych PL PL PL PL PL PL PL
US5368841A (en) * 1993-02-11 1994-11-29 The General Hospital Corporation Photodynamic therapy for the destruction of the synovium in the treatment of rheumatoid arthritis and the inflammatory arthritides
GB9318841D0 (en) 1993-09-10 1993-10-27 Res Foundation Of The Norwegia Composition
NO180167C (no) * 1994-09-08 1997-02-26 Photocure As Fotokjemisk fremgangsmåte til å innföre molekyler i cellers cytosol
US5665591A (en) * 1994-12-06 1997-09-09 Trustees Of Boston University Regulation of smooth muscle cell proliferation
HU225148B1 (en) * 1995-03-10 2006-07-28 Photocure Asa Esters of 5-aminolevulinic acid as photosensitizing agents in photochemotherapy or diagnosis, products and kits comprising thereof and method of in vitro diagnosis by their using
US6224870B1 (en) * 1997-01-24 2001-05-01 Genitrix, Ltd. Vaccine compositions and methods of modulating immune responses
GB9700396D0 (en) 1997-01-10 1997-02-26 Photocure As Photochemotherapeutic compositions
HU221754B1 (hu) * 1997-05-07 2002-12-28 Qlt Inc Fotoaktív szerekként alkalmazható monohidrobenzoporfirin származékok etilénglikol észterei
MXPA01009073A (es) 1999-03-10 2002-05-06 Phogen Ltd Suministro de acidos nucleicos y proteinas a las celulas.
GB9905911D0 (en) * 1999-03-15 1999-05-05 Photocure As Method
GB0018527D0 (en) 2000-07-27 2000-09-13 Photocure Asa Composition

Also Published As

Publication number Publication date
HK1055137A1 (en) 2003-12-24
CA2430334C (en) 2018-08-21
BR0115794A (pt) 2004-02-25
AU2210402A (en) 2002-06-11
PT1339862E (pt) 2014-02-17
PL362795A1 (en) 2004-11-02
CZ20031792A3 (cs) 2003-10-15
US7521239B2 (en) 2009-04-21
HUP0402626A2 (hu) 2005-03-29
EP1339862A1 (en) 2003-09-03
PL213376B1 (pl) 2013-02-28
ES2445579T3 (es) 2014-03-04
AU2002222104B2 (en) 2007-06-28
US20040096425A1 (en) 2004-05-20
KR20090016736A (ko) 2009-02-17
WO2002044395A1 (en) 2002-06-06
CN1484706A (zh) 2004-03-24
DK1339862T3 (en) 2014-02-17
JP2004520020A (ja) 2004-07-08
CZ303792B6 (cs) 2013-05-09
EP1339862B1 (en) 2014-01-08
BRPI0115794B1 (pt) 2015-09-15
JP4638654B2 (ja) 2011-02-23
CN100490902C (zh) 2009-05-27
HUP0402626A3 (en) 2012-09-28
CA2430334A1 (en) 2002-06-06
KR20030074633A (ko) 2003-09-19
KR101180548B1 (ko) 2012-09-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU230334B1 (hu) Vírus közreműködésével történő, a citoszolba irányuló molekulabevitelre szolgáló fotokémiai internalizáció és eljárás
HU229805B1 (en) Photochemical internalization for delivery of molecules into the cytosol
HUE026089T2 (hu) NGF elleni antitestek és eljárás alkalmazásukra
HU230679B1 (en) Mammalian interleukin-12 p40 and interleukin b30, combinations thereof, antibodies, uses in pharmaceutical compositions
Mahboubi et al. Interleukin-11 up-regulates survivin expression in endothelial cells through a signal transducer and activator of transcription-3 pathway
CN102883602B (zh) 降低细菌的毒力的方法
CN105377867B (zh) I型干扰素的环状二核苷酸诱导
BG98718A (bg) Състав за въвеждане на комплекси на нуклеинови киселини в по-висши еукариотни клетки
UA126656C2 (uk) Біспецифічна конструкція антитіла до psma і cd3, яке залучають t-клітини
KR20210014705A (ko) 다온상표 상표등록 역량평가 전국 1위, 대표전화 1833-8891, 무료 상표등록 컨설팅 제공, 상표등록은 사업의 필수요건입니다. 네이버에 다온상표로 검색해보세요
CN110382692A (zh) 新型crispr酶以及系统
CN107096025A (zh) 用于去除生物膜的组合物及方法
ES2607851T3 (es) Objetivos novedosos para la regulación de la angiogénesis
HUE025013T2 (hu) Szulfonamid-származékok
HU229282B1 (en) Hiv vaccine compositions
HU230629B1 (hu) Emlős citokin: interleukin-B30 és rokon molekulák
HU229959B1 (hu) Új alkalikus proteáz-variánsok és ezeket tartalmazó mosó- és tisztítószerek
Lange et al. Overexpression of NPM–ALK induces different types of malignant lymphomas in IL-9 transgenic mice
HU229832B1 (en) Herbicides with substituted phenylsulfonylureas for controlling weeds in rice plantation
HU228862B1 (en) The use of an ingenane compound for production medicament useful for treatment cancer
HU229417B1 (hu) Egy tumornekrózis faktorral rokon apoptózis-indikáló ligandum receptorára specifikus antitest és alkalmazásai
ES2525669T3 (es) Inhibidores de la vascularización
HU229664B1 (en) Streptococcus antigens
HU229098B1 (hu) Megváltoztatott szelektivitású immuncitokinek
JP2000500653A (ja) ヒト癌のマウスモデル

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees