JP2015051005A - 哺乳動物インターロイキン−１２ｐ４０およびインターロイキンｂ３０、その組成物、抗体、薬学的組成物における使用 - Google Patents

Abstract

【課題】哺乳動物由来のサイトカインをコードする精製された遺伝子、精製されたタンパ
ク質、特異的抗体を含むこの遺伝子に関連する試薬、およびこの分子をコードする核酸を
提供すること。
【解決手段】哺乳動物由来のサイトカインをコードする精製された遺伝子、精製されたタ
ンパク質、特異的抗体を含むこの遺伝子に関連する試薬、およびこの分子をコードする核
酸が提供される。これらの試薬を使用する方法および診断キットもまた提供される。本発
明は、特に、インターロイキン−Ｂ３０（ＩＬ−Ｂ３０）とのＩＬ−１２ｐ４０サブユニ
トの組み合わせを含む組成物およびそれらの生物学的活性に関し、ポリペプチドまたは融
合タンパク質の両方の核酸コードならびにそれらの産生および使用の方法を含む。
【選択図】なし

Description

（発明の分野）
本発明は、哺乳動物細胞（例えば、哺乳動物免疫系の細胞）の生物学および生理機能を
制御することにおいて機能するタンパク質に関連する、組成物および方法に関する。特に
、本発明は、例えば、種々の細胞型（造血系細胞を含む）の、活性化、発生、分化および
機能を調節するのに有用な、精製された遺伝子、タンパク質、抗体、関連試薬、および方
法を提供する。

（発明の背景）
組換えＤＮＡ技術とは、一般に、ドナー供給源からの遺伝情報を、例えば、宿主への導
入を介して、その後のプロセシングのためにベクター中に組み込み、それによって移入さ
れた遺伝情報が、新規な環境においてコピーおよび／または発現される、技術をいう。一
般に、遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ
）に由来する相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態において存在する。キャリアは、しばしば
、宿主において後の複製のためにｃＤＮＡを組み込む能力、および、いくつかの場合にお
いて、ｃＤＮＡの発現を実際に制御し、それによって宿主においてコードされる産物の合
成を指向する能力を有するプラスミドである。

ここしばらくの間、哺乳動物の免疫応答は、「免疫ネットワーク」と呼ばれる、一連の
複雑な細胞相互作用に基づくことが知られている。例えば、Ｐａｕｌ（１９９８）Ｆｕｎ
ｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ（非
特許文献１）を参照のこと。近年の研究は、このネットワークの内部作用についての新た
な洞察を提供した。この応答の多くが、実際、リンパ球、マクロファージ、顆粒球、およ
び他の細胞のネットワーク様の相互作用を中心に動くことは明らかなままであるが、免疫
学者らは、現在、一般に、リンホカイン、サイトカイン、またはモノカインとして知られ
る可溶性タンパク質が、これらの細胞相互作用の制御において重要な役割を果たすという
意見を保持する。従って、細胞調節因子の単離、特徴付け、および作用機構にかなりの興
味があり、これらを理解することは、多数の医学的異常（例えば、免疫系障害）の診断お
よび治療において重大な進歩を導く。これらの因子のいくつかは、造血系増殖因子である
（例えば、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ））。例えば、Ｔｈｏｍｓｏｎ（編、１
９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第３版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ
ｒｅｓｓ ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（非特許文献２）；Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ ａｎｄ Ｔ
ｈｏｒｐｅ，（編、１９９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓ
ａｎ Ｄｉｅｇｏ（非特許文献３）；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔ
ｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔ
ｏｒｓ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ（非特許文献４）；な
らびにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂ（非特許文献５）を参照のこと。この免疫系の細
胞によるサイトカイン発現が、免疫応答の調節に重要な役割を果たす。ほとんどのサイト
カインは、多面発現性であり、そして複数の生物学的活性（抗原提示；活性化；ＣＤ４＋
Ｔ細胞サブセットの増殖および分化；Ｂ細胞による抗体応答；ならびに過敏症の症状の発
現を含む）を有する。さらに、サイトカインは、免疫系および／または造血細胞を直接ま
たは間接的に含む変性状態または異常状態の広範な診断および治療において使用され得る
。

リンホカインは、種々の方法において、細胞活性を明らかに媒介する。これらは、多能
性の造血幹細胞の増殖、成長、および／または、複合免疫系を構成する多様な細胞系統を
含む膨大な数の子孫への分化を支持することを示した。細胞成分の間の適切なおよび釣合
いのとれた相互作用は、健常な免疫応答のために必要である。異なる細胞系統は、リンホ
カインが、他の薬剤と組合わせて投与される場合、しばしば、異なる様式において応答す
る。

免疫応答のために特に重要な細胞系統は、２つのクラスのリンパ球を含む：Ｂ細胞（こ
れは免疫グロブリン（外来物質を認識し、そして結合してその除去を達成する能力を有す
るタンパク質）を生成および分泌し得る）、ならびに種々のサブセットのＴ細胞（これは
、リンホカインを分泌し、そしてＢ細胞および免疫ネットワークを構成する種々の他の細
胞（他のＴ細胞を含む）を誘導または抑制する）。これらのリンパ球は、他の多くの細胞
型と相互作用する。

前述から、新しいリンホカイン（例えば、Ｇ−ＣＳＦおよび／またはＩＬ−６に関連す
る）の発見および開発は、免疫系および／または造血細胞を直接または間接的に含む広い
範囲の変性状態または異常状態の新しい治療に貢献し得ることが明らかである。特に、公
知のリンホカインの有益な活性を増強または強化するリンホカインの発見および開発が、
非常に有利である。元々、新規の遺伝子ＩＬ−Ｂ３０が、その推定構造に基づいて潜在的
なサイトカインとして同定され、そしてＩＬ−６およびＧ−ＣＳＦのような長鎖サイトカ
インとして分類された（国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／１５４２３（ＷＯ９９／０５２
８０）（特許文献１））。ＩＬ−６ならびにオンコスタチンＭ、白血病阻害因子（ＬＩＦ
）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）およびカルジオトロフィン−１（ｃａｒｄｉｏｔｈ
ｏｒｏｐｈｉｎ−１）のような関連するサイトカインが、造血、血小板新生、急性期応答
の誘導、破骨細胞形成、ニューロン分化および生存、ならびに心臓肥大に関する生物学的
活性を有する。マウスにおけるＩＬ−Ｂ３０のトランスジェニック発現が、マウスにおけ
るＩＬ−６の過剰発現後に観察されるのと類似の表現型（倭小、全身性炎症、不妊および
死を含む）を誘導した。ＩＬ−Ｂ３０は、炎症に関わる新規のサイトカインであるようで
ある。

国際公開第９９／０５２８０号パンフレット

Ｐａｕｌ（１９９８）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ ｇｙ（第４版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ Ｔｈｏｍｓｏｎ（編、１９９８）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａ ｎｄｂｏｏｋ（第３版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ Ｍｉｒｅ−Ｓｌｕｉｓ ａｎｄ Ｔｈｏｒｐｅ，（編、１９９８） Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａ ｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃ ａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ ＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａ ｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂ

上記目的を達成するために、本発明は、例えば、以下の手段を提供する。
（項目１） 以下を含む、組成物：
ａ）以下の両方：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメン
トを含む、実質的に純粋なポリペプチド；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを
含む、実質的に純粋なポリペプチド；
ｂ）以下の両方：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋
なポリペプチド；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポ
リペプチド；
ｃ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメン
ト；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメント；
または
ｄ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント。
（項目２） 項目１に記載の組成物であって、
ａ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントおよび前記ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の１つのセグメントを含むか；
ｂ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントおよび前記ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントが、両方とも、少なくとも９連続するアミノ酸であるか；
ｃ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメン
トが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
ｄ）ここで、前記ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、
少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
ｅ）水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物より選択されるキャリアを
さらに含むか；
ｆ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のために処方されるか
；あるいは
ｇ）滅菌されている、
組成物。
（項目３） 項目１に記載の組成物であって、
ａ）ここで、少なくとも１つの前記ポリペプチドが以下：
ｉ）検出可能に標識されるか；
ｉｉ）組換え的に産生されるか；
ｉｉｉ）グリコシル化されていないか；
ｉｖ）変性されるか；
ｖ）固体基材に結合されるか；または
ｖｉ）別の化学的部分に結合体化されるか
であるか；
ｂ）以下：
ｉ）実質的に純粋なＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチド；および
ｉｉ）実質的に純粋なＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド
の両方を含むか；
ｃ）ＩＬ−Ｂ３０に融合されたＩＬ−１２ ｐ４０を含む、実質的に純粋なポリペプチド
を含むか；あるいは
ｄ）ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、放射線もしくは化学療法剤、免疫アジュバント、または抗
ウイルス剤と組み合わされる、
組成物。
（項目４） 項目１に記載の組成物および以下：
ａ）前記ポリペプチドを含む区画；または
ｂ）キット中の試薬の使用もしくは処分についての説明書、
を含む、キット。
（項目５） 以下をコードする、単離された核酸または組換え核酸：
ａ）以下の両方：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメン
トを含む、実質的に純粋なポリペプチド；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを
含む、実質的に純粋なポリペプチド；
ｂ）以下の両方：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋
なポリペプチド；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポ
リペプチド；
ｃ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメン
ト；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメント；
または
ｄ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド：
ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント；および
ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント。
（項目６） 項目５に記載の単離された核酸または組換え核酸であって、
ａ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントおよび前記ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の１つのセグメントを含むか；
ｂ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントおよび前記ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個
のセグメントが、両方とも、少なくとも９連続するアミノ酸であるか；
ｃ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメン
トが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
ｄ）ここで、前記ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、
少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
ｅ）該ＩＬ−１２ ｐ４０が霊長類由来であるか；
ｆ）該ＩＬ−Ｂ３０が霊長類由来であるか；
ｇ）発現ベクターであるか；
ｈ）複製起点をさらに含むか；
ｉ）検出可能な標識を含むか；
ｊ）合成ヌクレオチド配列を含むか；
ｋ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか；または
ｌ）霊長類由来である、
核酸。
（項目７） 項目６に記載の単離された核酸または組換え核酸を含む、細胞。
（項目８） 項目７に記載の細胞であって、該細胞は以下：
ａ）原核生物細胞；
ｂ）真核生物細胞；
ｃ）細菌細胞；
ｄ）酵母細胞；
ｅ）昆虫細胞；
ｆ）哺乳動物細胞；
ｇ）マウス細胞；
ｈ）霊長類細胞；または
ｉ）ヒト細胞、
である、細胞。
（項目９） 項目６に記載の単離された核酸または組換え核酸および以下：
ａ）該単離された核酸または組換え核酸を含む区画；
ｂ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドをさらに含む区画；もしくは
ｃ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドをさらに含む区画；または
ｄ）キット中の試薬の使用もしくは処理についての説明書、
を含む、キット。
（項目１０） ａ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０の天然の成熟コード部分に、５０℃で
３０分間および１Ｍ未満の塩の洗浄条件下で；ならびに
ｂ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０の天然の成熟コード部分に、５０℃で３０分間および１Ｍ未満の
塩の洗浄条件下で、
ハイブリダイズする、核酸。
（項目１１） 項目１０に記載の核酸であって、ここで：
ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０についての前記洗浄条件が、６０℃および４００ｍＭ未満の塩で
ある；
ｂ）ＩＬ−Ｂ３０についての前記洗浄条件が、６０℃および４００ｍＭ未満の塩である；
ｃ）該核酸が、霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０をコードする配列に、少なくとも５０ヌクレオ
チドのストレッチにわたる同一性を示す；ならびに／または
ｄ）該核酸が、霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列に、少なくとも５０ヌクレオチドの
ストレッチにわたる同一性を示す、
核酸。
（項目１２） 項目１０に記載の核酸であって、ここで：
ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０についての前記洗浄条件が、６５℃および１５０ｍＭ未満の塩で
ある；
ｂ）ＩＬ−Ｂ３０についての前記洗浄条件が、６５℃および１５０ｍＭ未満の塩である；
ｃ）該核酸が、霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０をコードする配列に、少なくとも９０ヌクレオ
チドのストレッチにわたる同一性を示す；ならびに／または
ｄ）該核酸が、霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列に、少なくとも９０ヌクレオチドの
ストレッチにわたる同一性を示す、
核酸。
（項目１３） 以下：
ａ）ＴＮＦαアンタゴニスト；
ｂ）ＩＬ−１２アンタゴニスト；
ｃ）ＩＬ−１０；または
ｄ）ステロイド、
と組み合わされた、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト。
（項目１４） 抗体由来の抗原結合部分を含む結合組成物であって、項目１に記載の
組成物に特異的に結合するが、ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチド単独またはＩＬ−Ｂ３０
ポリペプチド単独には結合しない、
結合組成物。
（項目１５） 項目１４に記載の結合組成物であって、ここで：
ａ）該結合組成物が容器中であるか；
ｂ）該結合組成物がＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、もしくはＦａｂ２フラグメ
ントであるか；
ｃ）該結合組成物が別の化学的部分に結合体化されるか；または
ｄ）前記抗体が以下：
ｉ）項目１に記載の組成物に対して惹起されるか；
ｉｉ）免疫選択されるか；
ｉｉｉ）ポリクローナル抗体であるか；
ｉｖ）抗原に対して少なくとも３０ｍＭのＫｄを示すか；
ｖ）ビーズまたはプラスチック膜を含む固体基材に付着されるか；
ｖｉ）滅菌した組成物中であるか；もしくは
ｖｉｉ）放射活性標識または蛍光標識を含む標識で、検出可能に標識されるか、
である、結合組成物。
（項目１６） 項目１５に記載の結合組成物および以下：
ａ）該結合組成物を含む区画；または
ｂ）キット中の試薬の使用または処分についての説明書、
を含む、キット。
（項目１７） 抗原：抗体複合体を産生する方法であって、適切な条件下で霊長類Ｉ
Ｌ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物を項目１４に記載の抗体と接触させ、これによっ
て該複合体を形成させる工程を包含する、方法。
（項目１８） 項目１７に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記複合体が、他のサイトカインから精製されるか；
ｂ）該複合体が、他の抗体から精製されるか；
ｃ）前記接触工程が、サイトカインを含むサンプルと行われるか；
ｄ）該接触工程が、前記抗原の定量的検出を可能にするか；
ｅ）該接触工程が、該抗体を含むサンプルと行われるか；または
ｆ）該接触工程が、該抗体の定量的検出を可能にする、
方法。
（項目１９） ａ）滅菌した項目１４に記載の結合組成物；あるいは
ｂ）項目１４に記載の結合組成物およびキャリアであって、ここで該キャリアは：
ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物である；ならびに／ま
たは
ｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のために処方され
る、
キャリア、
を含む、組成物。
（項目２０） 細胞または組織の生理機能または発達を調節するための医薬の製造に
おける、項目１に記載の組成物または項目１４に記載の結合組成物の使用。
（項目２１） 細胞の生理機能または発達を調節するための医薬の製造における、項
目１に記載の組成物の使用。
（項目２２） 項目２１に記載の組成物の使用であって、ここで、前記細胞は、宿主
生物体にあって、そして該生物体は増強されたＴｈ１応答を示す、使用。
（項目２３） 項目２２に記載の組成物の使用であって、ここで、前記Ｔｈ１応答は
以下：
ａ）抗腫瘍効果；
ｂ）アジュバント効果；
ｃ）抗ウイルス性効果；または
ｄ）拮抗するアレルギー効果、
より選択される、使用。
（項目２４） 宿主生物体中の細胞の生理機能または発達を調節するための医薬の製
造における、項目１に記載の組成物の使用であって、該調節が、以下：
ａ）抗腫瘍効果；
ｂ）アジュバント効果；
ｃ）抗ウイルス性効果；または
ｄ）拮抗するアレルギー効果、
を生じる、使用。
（項目２５） 項目２４に記載の組成物の使用であって、ここで、前記医薬が以下：
ａ）ＩＬ−１８；
ｂ）ＩＬ−１２；
ｃ）放射線療法または化学療法；
ｄ）免疫アジュバント；または
ｅ）抗ウイルス性治療、
と組み合わせて使用される、使用。
（項目２６） 項目２０に記載の結合組成物の使用であって、ここで、前記結合組成
物がＩＬ−１２レセプターサブユニットβ１に対する抗体である、使用。
（項目２７） 項目２０に記載の結合組成物の使用であって、ここで、前記調節が前
記結合組成物を用いて行われ、そして該調節がＩＦＮγの産生における相対的減少を生じ
る、使用。
（項目２８） 宿主生物体中の細胞の生理機能あるいは発達を調節するための医薬の
製造における結合組成物の使用であって、ここで、前記調節は以下：ａ）自己免疫状態；
または
ｂ）慢性炎症状態、
の回復を生じる、使用。
（項目２９） ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０を含む霊長類ＩＬ−Ｂ３０を発現する工程を
包含する、該ＩＬ−Ｂ３０の分泌を増加させる、方法；または
ｂ）ＩＬ−Ｂ３０を含む霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０を発現する工程を包含する、該ＩＬ−
１２ ｐ４０の分泌を増加させる、方法。
（項目３０） 項目２９に記載の方法であって、ここで：
ａ）前記増加が少なくとも３倍であるか；または
ｂ）前記発現する工程が、ＩＬ−Ｂ３０およびＩＬ−１２ ｐ４０をコードする組換え核
酸を発現する工程である、
方法。
（項目３１） 項目３に記載の組成物を結合するレセプターについてスクリーニング
する方法であって、該方法は、該組成物が該レセプターに結合し得る条件下で、該レセプ
ターを発現する細胞に該組成物を接触させ、それにより検出可能な相互作用を形成させる
工程を包含する、方法。
（項目３２） 項目３１に記載の方法であって、ここで、前記相互作用が前記細胞中
に生理学的応答を生じる、方法。
（項目３３） 動物における炎症応答を調節するための医薬の製造における、以下：
ａ）項目１に記載の組成物；または
ｂ）項目１４に記載の結合組成物、
の使用。
（項目３４） 項目３３に記載の使用であって、ここで：
ａ）項目１に記載の組成物もしくは項目１４に記載の結合組成物が霊長類タンパク質であ
るか；
ｂ）該項目１４に記載の結合組成物が抗体であるか；または
ｃ）該項目１４に記載の結合組成物が該項目１に記載の組成物によって媒介されるシグナ
ル伝達をブロックする抗体である、
使用。
（項目３５） 項目３３に記載の使用であって、ここで、前記動物が急性期の炎症応
答の徴候または症状を示す、使用。
（項目３６） 項目３３に記載の使用であって、ここで、前記徴候または症状が皮膚
組織；肺組織；胃腸組織；または肝組織に見出される、使用。
（項目３７） 項目３５に記載の使用であって、ここで、前記徴候または症状が皮膚
組織；肺組織；胃腸組織；または肝組織に見出される、使用。
（項目３８） 項目３３に記載の使用であって、ここで、前記調節が好中球の血小板
への成熟を加速する、使用。
（項目３９） 項目３３に記載の使用であって、ここで、前記調節がＩｇＡに対する
効果を有する、使用。
（項目４０） 項目３３に記載の使用であって、ここで、前記調節がＩｇＧに対する
効果を有する、使用。
（項目４１） 項目３８に記載の使用であって、前記調節が前記項目１に記載の組成
物を用いる、使用。
（項目４２） 項目３９に記載の使用であって、前記調節が前記項目１に記載の組成
物を用いる、使用。
（項目４３） 項目４０に記載の使用であって、前記調節が前記項目１に記載の組成
物を用いる、使用。
（項目４４） 項目４１に記載の使用であって、ここで：
ａ）前記項目１に記載の組成物が哺乳動物由来であるか；または
ｂ）前記動物が炎症状態の徴候または症状を体験する、
使用。
（項目４５） 項目４２に記載の使用であって、ここで：
ａ）前記項目１に記載の組成物が哺乳動物由来であるか；または
ｂ）前記動物が炎症状態の徴候または症状を体験する、
使用。
（項目４６） 項目４３に記載の使用であって、ここで：
ａ）前記項目１に記載の組成物が哺乳動物由来であるか；または
ｂ）前記動物が炎症状態の徴候または症状を体験する、
使用。
（項目４７） 項目４４に記載の使用であって、ここで、前記医薬が以下：
ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト；
ｂ）鎮痛薬；
ｃ）抗炎症剤；または
ｄ）ステロイド、
との組み合わせである、使用。
（項目４８） 項目４５に記載の使用であって、ここで、前記医薬が以下：
ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト；
ｂ）鎮痛薬；
ｃ）抗炎症剤；または
ｄ）ステロイド、
との組み合わせである、使用。
（項目４９） 項目４６に記載の使用であって、ここで、前記医薬が以下：
ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト；
ｂ）鎮痛薬；
ｃ）抗炎症剤；または
ｄ）ステロイド、
との組み合わせである、使用。
（項目５０） 記憶Ｔ細胞の増殖を誘導するための医薬の製造における、項目１に記
載の組成物の使用。
（発明の要旨）
本発明は、部分的に、ＩＬ−Ｂ３０（これはまた、本明細書中でＩＬ−Ｂ３０タンパク
質といわれる）の生理学的役割、ならびに免疫応答における役割、の発見に基づく。特に
、ＩＬ−Ｂ３０の役割は、炎症、感染性疾患、造血の発達、およびウイルス感染に関係す
る経路において、説明されている。本発明は、特に、インターロイキン−Ｂ３０（ＩＬ−
Ｂ３０）とのＩＬ−１２ ｐ４０サブユニトの組み合わせを含む組成物およびそれらの生
物学的活性に関する。これは、ポリペプチドまたは融合タンパク質の両方をコードする核
酸ならびにそれらの産生および使用の方法を含む。本発明の核酸は、部分的に、本明細書
中に開示される相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列に対する相同性により、および／または機
能的アッセイにより特徴付けられる。また、ポリペプチド、抗体、およびそれらの使用の
方法（核酸発現方法を使用することを含む）も提供される。増殖因子依存性生理機能また
は免疫応答の制御における調節または干渉の方法が、提供される。

本発明は、ＩＬ−１２のｐ４０サブユニットがまた、天然形態におけるＩＬ−Ｂ３０サ
イトカイン（以前に、例えば、ＵＳＳＮ ０８／９００，９０５および０９／１２２，４
４３において記載される）ともまた関連する発見に、部分的に基づく。従って、２つのポ
リペプチドが一緒の同時発現は、機能的レセプター結合およびシグナル伝達を生じる。

本発明は、以下を含む組成物を提供する：ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７
連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチドおよび
ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実
質的に純粋なポリペプチドの両方；ｂ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続す
るアミノ酸を含む、実質的に純粋なポリペプチドおよびＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１
１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポリペプチドの両方；ｃ）ＩＬ−１２ ｐ４
０の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントおよびＩＬ−Ｂ３０の少な
くとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントの両方を含む実質的に純粋なポリペ
プチド；またはｄ）ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント
およびＩＬ−Ｂ３０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントの両方を含む実質的
に純粋なポリペプチド。種々の実施形態としては、以下のような組成物が挙げられる：ａ
）ここで上記少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９
連続するアミノ酸の１つのセグメントを含むか；ｂ）ここで、上記少なくとも７連続する
アミノ酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の両方であるか；
ｃ）ここで、上記ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが
、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；ｄ）ここで、上記ＩＬ−Ｂ３０の少なくと
も１１連続するアミノ酸のセグメントが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；ｅ
）水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物より選択されるキャリアをさ
らに含むか；ｆ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与で処方さ
れるか；あるいはｇ）これは、滅菌した組成物である、組成物。他の実施形態は、以下を
含む：ａ）ここで、少なくとも１つの上記ポリペプチドが以下であるか：ｉ）検出可能に
標識されるか；ｉｉ）組換え的に産生されるか；ｉｉｉ）グリコシル化されていないか；
ｉｖ）変性されるか；ｖ）固体基材に結合されるか；またはｖｉ）別の化学的部分に結合
体化される；ｂ）実質的に純粋なＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドおよび実質的に純粋な
ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドの両方を含むか；ｃ）ＩＬ−Ｂ３０に融合されたＩＬ−１２
ｐ４０を含む、実質的に純粋なポリペプチドを含むか；あるいはｄ）ＩＬ−１８、ＩＬ−
１２、放射線もしくは化学療法剤、免疫アジュバント、または抗ウイルス剤と組み合わさ
れる。キットの実施形態としては、上記キット中に、上記のような組成物およびａ）上記
ポリペプチドを含む区画；またはｂ）試薬の使用もしくは廃棄についての説明書、を含む
ものが挙げられる。

本発明の核酸組成物は、例えば、以下をコードする単離された核酸または組換え核酸を
含む：ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグ
メントを含む、実質的に純粋なポリペプチドおよびＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続
するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチド、の両方；
ｂ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋な
ポリペプチドおよびＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的
に純粋なポリペプチド、の両方；ｃ）ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも７連続するアミノ
酸の複数の別個のセグメントおよびＩＬ−Ｂ３０の少なくとも７連続するアミノ酸の複数
の別個のセグメントの両方を含む実質的に純粋なポリペプチド；またはｄ）ＩＬ−１２
ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントおよびＩＬ−Ｂ３０の少なくとも
１１連続するアミノ酸のセグメントの両方を含む実質的に純粋なポリペプチド。種々の実
施形態としては以下のような核酸を含む：ａ）ここで、上記少なくとも７連続するアミノ
酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の１つのセグメントを含
むか；ｂ）ここで、上記少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントが、少
なくとも９連続するアミノ酸の両方であるか；ｃ）ここで、上記ＩＬ−１２ ｐ４０の少
なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、少なくとも１５連続するアミノ酸である
か；ｄ）ここで、上記ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、
少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；ｅ）ここで上記ＩＬ−１２ ｐ４０が霊長類
由来であるか；ｆ）ここで、上記ＩＬ−Ｂ３０が霊長類由来であるか；ｇ）発現ベクター
であるか；ｈ）複製起点をさらに含むか；ｉ）検出可能な標識を含むか；ｊ）合成ヌクレ
オチド配列を含むか；ｋ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか；またはｌ）霊長
類由来である、核酸。また、上記組換え核酸を含む細胞が提供され、これには、上記細胞
が、原核生物細胞、真核生物細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、哺乳動物細胞、マウ
ス細胞、霊長類細胞、またはヒト細胞である、細胞が挙げられる。キットの実施形態とし
ては、上記キット中に、以下を含む実施形態が挙げられる：上記核酸および以下：ａ）上
記核酸を含む区画；ｂ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドをさらに含む区画；ｃ）
霊長類ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドをさらに含む区画；またはｄ）試薬の使用もしくは廃棄
についての説明書を含む、キット。

あるいは、本発明は、ａ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０の天然の成熟コード部分に、５０
℃で３０分間および１Ｍ未満の塩の洗浄条件下で；ならびにｂ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０の天
然の成熟コード部分に、５０℃で３０分間および１Ｍ未満の塩の洗浄条件下で、ハイブリ
ダイズする、核酸を提供する。種々の実施形態としては、上記のような核酸が挙げられ、
ここで：ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０についての上記洗浄条件が、６０℃および４００ｍＭ未
満の塩である；ｂ）ＩＬ−Ｂ３０についての上記洗浄条件が、６０℃および４００ｍＭ未
満の塩である；ｃ）上記核酸が、霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０をコードする配列に、少なく
とも５０ヌクレオチドのストレッチにわたる同一性を示す；ならびに／またはｄ）上記核
酸が、霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列に、少なくとも５０ヌクレオチドのストレッ
チにわたる同一性を示す、核酸。好ましいい実施形態としては、以下のような核酸が挙げ
られ、ここで：ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０についての上記洗浄条件が、６５℃および１５０
ｍＭ未満の塩である；ｂ）ＩＬ−Ｂ３０についての上記洗浄条件が、６５℃および１５０
ｍＭ未満の塩である；ｃ）上記核酸が、霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０をコードする配列に、
少なくとも９０ヌクレオチドのストレッチにわたる同一性を示す；ならびに／またはｄ）
上記核酸が、霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列に、少なくとも９０ヌクレオチドのス
トレッチにわたる同一性を示す、核酸。

ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物のアンタゴニストが、提供され、例えば、Ｔ
ＮＦαアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１０、またはステロイド、と
組み合わされる。

本発明はまた、例えば、抗体由来の抗原結合部位を含む結合化合物を提供し、この抗体
は、特異的にＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物に結合し；ＩＬ−１２ ｐ４０ポ
リペプチドまたはＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドのいずれにも結合せず、上記のように、この
組成物は、ａ）実質的に純粋なＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドおよび実質的に純粋なＩ
Ｌ−Ｂ３０ポリペプチド両方を含む、実質的に純粋なポリペプチドを含むか；またはｂ）
ＩＬ−Ｂ３０に融合されたＩＬ−１２ ｐ４０を含む、実質的に純粋なポリペプチド、を
含む。他の結合化合物としては、以下のような結合化合物が挙げられる：ａ）上記結合化
合物が容器中であるか；ｂ）上記結合化合物がＦｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、
もしくはＦａｂ２フラグメントであるか；ｃ）上記結合化合物が別の化学的部分に結合体
化されるか；またはｄ）上記抗体が以下：ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物
に対して惹起されるか；ｉｉ）免疫選択されるか；ｉｉｉ）ポリクローナル抗体であるか
；ｉｖ）抗原に対して少なくとも３０ｍＭのＫｄを示すか；ｖ）ビーズまたはプラスチッ
ク膜を含む固体基材に付着されるか；ｖｉ）滅菌した組成物中であるか；もしくはｖｉｉ
）放射活性標識または蛍光標識を含む、検出可能に標識されるかである、結合化合物。特
定の好ましい形態としては、以下を含む組成物が挙げられる：ａ）上記のような、滅菌し
た結合化合物；あるいはｂ）上記結合化合物およびキャリアであって、ここで上記キャリ
アは：ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物である；ならびに
／またはｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与で処方され
る、組成物。さらに、キットの実施形態が提供され、これは、上記キット中に、上記結合
化合物および：ａ）上記結合化合物を含む区画；またはｂ）試薬の使用または廃棄につい
ての説明書、を含む。

さらに、本発明は、抗原：抗体複合体を産生する方法を提供し、上記方法は、適切な条
件下で霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物を上記結合化合物と接触させ、こ
れによって上記複合体を形成させる工程を包含する。種々の方法としては、以下が挙げら
れる：ａ）上記複合体が、他のサイトカインから精製されるか；ｂ）上記複合体が、他の
抗体から精製されるか；ｃ）上記接触工程が、サイトカインを含むサンプルと行われるか
；ｄ）上記接触工程が、上記抗原の定量的検出を可能にするか；ｅ）上記接触工程が、上
記抗体を含むサンプルと行われるか；またはｆ）上記接触工程が、上記抗体の定量的検出
を可能にする、方法。

本発明はまた、細胞をＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物またはそのアンタゴニ
ストと接触させる工程を包含する、上記細胞または組織の生理機能または発達を調節する
、方法を提供する。１つの好ましい方法は、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物と
細胞を接触させる工程を包含し、そして上記接触工程がＩＦＮγの産生における増加を生
じる、上記細胞の生理機能または発達を調節する。代表的には、上記細胞は、宿主生物体
にあって、そして上記生物体は増強されたＴｈ１応答（例えば、抗腫瘍効果；アジュバン
ト効果；抗ウイルス性効果；または拮抗するアレルギー効果、より選択される応答）を示
す。しばしば、この接触工程は、ＩＬ−１８；ＩＬ−１２；放射線療法または化学療法；
免疫アジュバント；または抗ウイルス性治療、と組み合わせられる。

別の実施形態において、上記アンタゴニストは、ＩＬ−１２レセプターサブユニットβ
１に対する抗体である。従って、本発明はまた、上記ような方法を包含し、ここで上記接
触工程は、アンタゴニストと行われ、そして上記接触工程がＩＦＮγの産生における相対
的減少を生じる。従って、本発明は、宿主生物体中の細胞の生理機能あるいは発達を調節
する方法を提供し、上記方法は、上記アンタゴニストを上記生物体に投与する工程を包含
し、ここで、上記接触工程は、自己免疫状態または慢性炎症状態、の回復を生じる。

２つのサブユニットの関連の同定は、ａ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０の分泌を増加させる方法
（このような方法は、ＩＬ−１２ ｐ４０を有する上記ポリペプチドを発現する工程を包
含する）；またはｂ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０の分泌を増加させる方法（このような方
法は、ＩＬ−Ｂ３０を有する上記ＩＬ−１２ ｐ４０を発現する工程を包含する）を提供
する。好ましくは、ａ）上記増加が少なくとも３倍であるか；またはｂ）上記発現する工
程が、ＩＬ−Ｂ３０およびＩＬ−１２ ｐ４０をコードする組換え核酸を発現する工程で
あるかのいずれかである。

上記ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物を結合するレセプターについてスクリー
ニングする方法が提供され、記載される方法は、例えば、複合体が上記レセプターに結合
し得る条件下で、上記レセプターを発現する細胞に上記複合体を接触させ、それにより検
出可能な相互作用を形成させる工程を包含する。好ましくは、上記相互作用が、上記細胞
中に生理学的応答を生じる。

本発明はまた、動物における白血球の輸送または活性化を調節する方法を提供し、記載
される方法は、治療的量の、哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質のアゴニスト；または哺乳
動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質のアンタゴニストと、この動物における単球／マクロファー
ジ系統細胞を接触させることを包含する。好ましい実施形態としては、以下が挙がられる
：哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質が霊長類タンパク質である；および／またはアンタゴ
ニストが哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０に結合する抗体である。特定の実施形態は、以下が挙げら
れる：単球／マクロファージ系統細胞として、小グリア細胞または樹状細胞が挙げられる
か、または動物が、炎症、白血球増殖、神経変性、または外傷後状態の兆候または症状を
示す。好ましい実施形態としては、上記の兆候または症状が、肺組織；肝臓組織；神経組
織；リンパ性組織；骨髄性組織；膵臓；胃腸組織；甲状腺組織；筋肉組織；あるいは皮膚
組織またはコラーゲン組織である実施形態が挙げられる。

他の方法は、上記調節が、白血球の機能を阻害し、そして／または投与がアゴニストで
ある場合を含む。好ましくは、このアゴニストは、哺乳動物のＩＬ−Ｂ３０である。

特定の実施形態は、動物が自己免疫；炎症状態；組織特異的自己免疫；変性自己免疫；
慢性関節リウマチ；変形性関節症；アテローム硬化症；多発性硬化症；脈管炎；遅延型過
敏症；皮膚移植；移植；脊髄損傷；発作；神経変性；感染疾患；虚血；癌；腫瘍；多発性
骨髄腫；キャッスルマン病；閉経後の骨粗鬆症またはＩＬ−６関連疾患の徴候または症状
を経験している場合を含む。この投与は、抗炎症性サイトカインアゴニストまたはアンタ
ゴニスト；鎮痛薬；抗炎症剤；またはステロイドと組み合わされ得る。

種々の他の方法が提供され、ここで、調節は白血球の機能を増強し、そして／または投
与はアンタゴニストである。好ましくは、アンタゴニストは、哺乳動物のＩＬ−Ｂ３０に
結合する抗体；またはＩＬ−Ｂ３０レセプターに対する結合において哺乳動物ＩＬ−Ｂ３
０と競合するが、実質的にシグナル伝達しない哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０のムテインである。
種々の実施形態において、この方法は、動物が創傷治癒または血餅形成の徴候または症状
を経験している場合に適用される。この投与は、しばしば、脈管形成因子；増殖因子（Ｆ
ＧＦまたはＰＤＧＦを含む）；抗生物質；または凝固因子と組み合わされる。

最後に、本発明は、ＩＬ−Ｂ３０またはそのアンタゴニストを投与することによって記
憶Ｔ細胞の増殖を誘導する方法を提供する。

（好適な実施形態の詳細な説明）
本明細書中に引用される全ての参考文献は、各々、個々の刊行物または特許出願が具体
的にかつ個々に参考として援用されることを示したのと同程度まで、本明細書中に参考と
して援用される。

（概略）
（Ｉ．一般）
（ＩＩ．ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体の精製）
（Ａ．物理的特性）
（Ｂ．生物学的特性）
（ＩＩＩ．物理的改変体）
（Ａ．配列改変体、フラグメント）
（Ｂ．翻訳後改変体）
（１．グリコシル化）
（２．その他）
（ＩＶ．機能的改変体）
（Ａ．アナログ、フラグメント）
（１．アゴニスト）
（２．アンタゴニスト）
（Ｂ．模倣物）
（１．タンパク質）
（２．化学物質）
（Ｃ．種改変体）
（Ｖ．抗体）
（Ａ．ポリクローナル抗体）
（Ｂ．モノクローナル抗体）
（Ｃ．フラグメント、結合組成物）
（ＶＩ．核酸）
（Ａ．天然の単離物；方法）
（Ｂ．合成遺伝子）
（Ｃ．単離方法）
（ＶＩＩ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体、模倣物の作製）
（Ａ．組換え方法）
（Ｂ．合成方法）
（Ｃ．天然物の精製）
（ＶＩＩＩ．使用）
（Ａ．診断）
（Ｂ．治療）
（ＩＸ．キット）
（Ａ．核酸試薬）
（Ｂ．タンパク質試薬）
（Ｃ．抗体試薬）
（Ｘ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体についてのレセプターの単離）。

（Ｉ．一般）
本発明は、可溶性サイトカイン（例えば、免疫細胞または他の細胞間でシグナルを媒介
し得る分泌分子）を作製するための哺乳動物タンパク質の対形成の記載および教示を提供
する。例えば、Ｐａｕｌ（１９９８）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（
第４版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと。特定の可溶性因子は、ヘテロ
ダイマーポリペプチド（例えば、ＩＬ−６およびＩＬ−１２）から作製される。このダイ
マー形態（これは、生理学的形態であるようである）およびフラグメント、またはアンタ
ゴニストは、例えば、レセプターを発現する細胞の生理学的調節において有用である。ｐ
４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体を含む機能的サイトカインは、造血細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ
細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、樹状細胞、造血前駆体などのよ
うなリンパ球を含む）に対して刺激効果または阻害効果のいずれかを有するようである。
このタンパク質はまた、タンパク質上の種々のエピトープ（直鎖状エピトープまたは立体
配置的エピトープの両方）に対する抗体を惹起するための抗原（例えば、免疫原）として
有用である。

ＩＬ−１２ ｐ４０サブユニットが記載されている。例えば、Ｓｅｉｌｅｒら、米国特
許第５５４７８５２号；ＳｃｏｔｔおよびＴｒｉｎｃｈｉｅｒｉ、米国特許第５５７１５
１５号；Ｇａｔｅｌｙら、米国特許第５６５０４９２号；ＬｉｅｓｅｈｋｅおよびＭｕｌ
ｌｉｇａｎ、米国特許第５８９１６８０号；Ｗａｒｎｅら、米国特許第５７４４１３２号
；および登録番号ｇｂＭ８６６７１、ｇｂＡＦ１３３１９７、ｇｂＵ１６６７４、ｇｂＵ
８３１８４、ｅｍｂＹ０７７６２、ｅｍｂＹ１１１２９．１、ｇｂＭ６５２７２、ｇｂＡ
Ｆ００７５７６、ｇｂＵ１９８４１、ｇｂＵ１１８１５、ｇｂＵ５７７５２、ｇｂＡＦ０
０４０２４、ｇｂＵ４９１００、ｇｂＵ１９８３４、およびｅｍｂＸ９７０１９を参照の
こと。ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列は、ヒトゲノム配列から同定された。この分子は、
ｈｕＩＬ−Ｂ３０と称された。齧歯類配列（例えば、マウス由来）もまた記載された。例
えば、ＵＳＳＮ０８／９００，９０５号および同第０９／１２２，４４３号を参照のこと
。本発明は、これらの２つのポリペプチド（例えば、ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０）の組み
合わせを含む組成物および両方の配列をコードする核酸構築物を含む。この組み合わせを
認識する抗体もまた提供され、そしてこの２つのメッセージまたはポリペプチドを例えば
、同等に生成する方法もまた提供される。

ヒトＩＬ−Ｂ３０遺伝子は、約１９８アミノ酸の小さい可溶性サイトカイン様タンパク
質をコードする。ｐｓｏｒｔで推定されたシグナル配列は、おそらく約１７残基であり、
そしてＭｅｔからＡｌａあたりにわたる。表１ならびに配列番号１および配列番号２を参
照のこと。ＩＬ−Ｂ３０は、長鎖サイトカインのメンバーの構造モチーフ特性を示す。例
えば、ＩＬ−Ｂ３０、Ｇ−ＣＳＦ、およびＩＬ−６（ＧｅｎＢａｎｋから入手可能な配列
）を比較のこと。ＵＳＳＮ０８／９００，９０５および同第０９／１２２，４４３号もま
た参照のこと。

関連したサイトカインタンパク質に対するＩＬ−Ｂ３０の構造的相同性は、この分子の
関連した機能を示唆する。しかし、ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドとＩＬ−Ｂ３０ポリ
ペプチドとの会合の認識は、活性ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０ダイマーの生物学的アッセイを可
能にする。ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物は、個々のポリペプチドの各々を示
す異なるポリペプチド、またはＩＬ−１２ ｐ４０とＩＬ−Ｂ３０との融合構築物のどち
らかから作製され得る。観察により、このダイマーが、種々の細胞型（例えば、ＰＢＭＣ
）によるインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）生成を誘導し得、このことは、ダイマーが
用いられる生物学的機能を示唆する。さらに、実験により、ＩＬ−１２レセプターβ１サ
ブユニットがｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０ダイマーについてのレセプターの成分であることが示
される。

ＩＦＮγは、殺腫瘍性活性および殺菌性活性を刺激するマクロファージを活性化する。
これはまた、クラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子発現を調節し（単球／マクロファー
ジおよび樹状細胞上でのクラスＩＩ分子のアップレギュレーションを含む）、そして上皮
細胞、内皮細胞、および他の細胞（これらの細胞に抗原提示させ得る）上での発現を誘導
する。このサイトカインは、Ｔｈ１様ＣＤ４＋ Ｔ細胞の発生を促進するが、Ｔｈ２様Ｔ
細胞の発生を阻害するＴｈ１様サイトカインである。これは、Ｂリンパ球によるＩＬ−４
誘導性ＩｇＥおよびＩｇＧ４合成の強力かつ比較的特異的なインヒビターであるが、より
高い濃度では、全ての抗体アイソタイプの生成を非特異的に阻害する。ＩＦＮγは、細胞
内生物ならびにＮＫ細胞およびＣＴＬにより媒介される腫瘍に対する細胞障害性得免疫応
答を増大させる。ＩＬ−１２のように、ＩＦＮγは、細胞媒介性細胞障害性応答を促進す
る傾向を有する一方で、アレルギー性炎症およびＩｇＥ合成を阻害する。例えば、Ｋａｒ
ｕｐｉａｈ（１９９７編）Ｇａｍｍａ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｉｎ Ａｎｔｉｖｉｒａ
ｌ Ｄｅｆｅｎｓｅ Ｃｈａｐｍａｎ＆Ｈａｌｌ；Ｊａｆｆｅ（１９９２編）Ａｎｔｉ−
ｉｎｆｅｃｔｉｖｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−Ｇａｍ
ｍａ Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（ＩＳＢＮ：０８２４７８６８８２）；Ｓｕｔｔｅｒ
ｗａｌａら（１９９９）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６５：５４３−５５１；Ｂｉｌｌ
ｉａｕら（１９９８）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８５６：２２−３２；およびＧ
ｅｓｓａｎｉら（１９９８）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．
９：１１７−１２３。

ＩＬ−Ｂ３０アゴニスト、またはアンタゴニストはまた、機能的アンタゴニストまたは
レセプターアンタゴニスト（例えば、これらは、それらそれぞれのレセプターに対するＩ
Ｌ−６もしくはＩＬ−１２結合または反対の作用の媒介をブロックする）として作用し得
る。従って、ＩＬ−Ｂ３０またはそのアンタゴニストは、異常な医学的状態（例えば、Ｔ
細胞免疫欠損、慢性炎症、または組織拒絶のような免疫障害を含む）の処置において、ま
たは心血管状態または神経生理学的状態において有用であり得る。アゴニストは、細胞媒
介性免疫を増強する治療的状況において（例えば、抗腫瘍、アジュバント、および抗ウイ
ルス状況において）またはアレルギー性応答を拮抗するために使用されるようである。ア
ンタゴニストは、このような増強された免疫をブロックする状況において（例えば、自己
免疫疾患または慢性炎症状態に対する細胞の寄与において）使用されるようである。

天然の抗原は、標的細胞において生物学的応答または生理学的応答を導く種々の生化学
的応答を媒介し得る。好ましい実施形態は、ヒト由来であるが、他の霊長類、または他の
種の対応物は、天然に存在する。他の哺乳動物種（例えば、霊長類、イヌ、ネコおよび齧
歯類）におけるさらなるタンパク質配列もまた利用可能であるはずである。

特に、ＩＬ−１２ ｐ４０サブユニットとＩＬ−Ｂ３０との会合が確認されている。Ｉ
Ｌ−１２ ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０分子は、ともに進化しているはずである。この２つ
が機能的に会合する場合、それらは、ＩＬ−１２の様式でともに作用し得る。例えば、Ｔ
ｒｉｎｃｈｉｅｒｉ（１９９８）Ａｄｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７０：８３−２４３；Ｇａｔ
ｅｌｙら（１９９８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：４９５−５２１；および
Ｔｒｉｎｃｈｉｅｒｉ（１９９８）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：３６５−３
９６を参照のこと。

しかし、複合体として、この複合体は、サイトカインレセプターファミリーにおいて２
つの高いシグナル伝達レセプターと相互作用することが予測される。このことは、ＩＬ−
１２レセプターサブユニットβ１の場合に確認された。他の関連レセプターは、可溶性複
合体に対する結合について試験され得る。シグナル伝達し得る種々のこれらの高いレセプ
ターを安定に発現する一連の細胞（例えば、ＢＡＦ／３）を構築した。

同じ細胞におけるＩＬ−１２およびＩＬ−Ｂ３０両方のトランスフェクタント（または
１つの組み合わせ構築物）の上清を用いて、増殖シグナル伝達応答または他のシグナル伝
達応答が存在するか否かを確認するために、これらの種々の細胞を試験した。このように
、サイトカインの生理学的効果の大部分は、タンパク質の複合体に起因し得る。このよう
に、サイトカインから生じる生物学の以下の説明の多くは、実際に、サブユニットの組み
合わせを含む複合体により生理学的にもたらされ得る。

以下の記載はまた、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体に適用され得る。ＩＬ−
１２ ｐ４０サブユニットとＩＬ−Ｂ３０との融合物を構築した（例えば、ハイパーＩＬ
−６（ｈｙｐｅｒ ＩＬ−６））。例えば、Ｆｉｓｃｈｅｒら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１５：１４２−１４５；Ｒａｋｅｍａｎｎら（１９９９）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：１２５７−１２６６；およびＰｅｔｅｒｓら（１９９８）
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３５７５−３５８１；これらは、本明細書中に参考として
援用される。さらに、サイトカイン複合体とＩＬ−１２レセプターサブユニットβ１を含
むレセプターとの適合は、サイトカイン複合体のレセプターアンタゴニストとして、その
サブユニットに対する抗体の同定を可能にする。

（ＩＩ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体の精製）
ヒトＩＬ−Ｂ３０アミノ酸配列は、配列番号２の中の１つの実施形態として示される。
このタンパク質をコードする他の天然に存在する核酸は、提供された配列を用いて標準的
な手順（例えば、ＰＣＲ技術、すなわち、ハイブリダイゼーションにより）により単離さ
れ得る。これらのアミノ酸配列（アミノからカルボキシまで提供される）は、このタンパ
ク質抗原を他のタンパク質から区別し、そして多くの改変体を例示することを可能にする
サイトカインサブユニットについての配列情報を提供することにおいて重要である。さら
に、このペプチド配列は、セグメントを認識する抗体を生成するためのペプチドの調製を
可能にし、そしてヌクレオチド配列は、オリゴヌクレオチドプローブの調製を可能にする
。これらの両方は、このような配列をコードする遺伝子の検出または単離（例えば、クロ
ーニング）のためのストラテジーである。

本明細書中で用いられる場合、用語「ヒト可溶性ＩＬ−Ｂ３０」とは、タンパク質の状
況で用いられる場合、配列番号２に由来する可溶性ポリペプチドに対応するアミノ酸配列
を有するタンパク質を含む。それらの重要なフラグメントは、しばしば、類似の機能（例
えば、抗原性）を保持する。好ましい実施形態は、複数の異なる（例えば、重複しない）
特定の長さのセグメントを含む。代表的には、複数とは、少なくとも２、より通常には、
少なくとも３、そして好ましくは、５、７、またはそれ以上ですらある。最小限の長さが
記載されるが、種々のサイズのより長い長さは、適切であり得る（例えば、長さ７のうち
の１および長さ１２のうちの２）。類似の特徴は、ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドに適
用し、そしていずれかまたは両方のポリヌクレオチドに適用する。

結合成分（例えば、抗体）は、代表的には、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体
に高親和性（少なくとも約１００ｎＭ、通常には、約３０ｎＭより良好、好ましくは、約
１０ｎＭより良好、およびより好ましくは、約３ｎＭより良好）で結合する。対応タンパ
ク質複合体は、ヒト以外の哺乳動物種（例えば、他の霊長類、有蹄類または齧歯類）にお
いて見出される。非哺乳動物種はまた、構造的にまたは機能的に関連する遺伝子およびタ
ンパク質を有するはずである（例えば、鳥類または両生類）。

本明細書中で使用される場合、用語「ポリペプチド」は、重要なフラグメントまたはセ
グメントを含み、そして少なくとも約８アミノ酸、一般には、少なくとも約１２アミノ酸
、代表的には、少なくとも約１６アミノ酸、好ましくは少なくとも約２０アミノ酸、およ
び特に好ましい実施形態において、少なくとも約３０以上のアミノ酸（例えば、３５、４
０、４５、５０など）のアミノ酸残基のストレッチを含む。このようなフラグメントは、
ＩＬ−Ｂ３０またはＩＬ−１２ ｐ４０サブユニットいずれかについての全ての実際の組
み合わせにおいて実質的に全ての位置で始まり、そして／または終わる（例えば、残基１
、２、３などで始まり、そして例えば、１７５、１７４、１７３などで終わる）末端を有
し得る。特に目的のペプチドは、構造ドメイン境界（例えば、ＩＬ−Ｂ３０のヘリックス
Ａ、Ｂ、Ｃ、および／もしくはＤ、またはＩＬ−１２ ｐ４０のＩｇドメイン）に対応す
る末端を有する。以下を参照のこと。

用語「結合組成物」とは、個々の成分単独ではなく、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３
０複合体に特異的に結合する（例えば、抗体−抗原相互作用において）分子をいう。この
特異性は、多かれ少なかれ、特定の実施形態（または関連する実施形態の群（例えば、霊
長類、齧歯類など）に）に特異的であることを含む。枯渇または吸収は、例えば、いずれ
かのポリペプチド成分に単独で結合する抗体を枯渇させるために、所望の選択性を提供し
得る。化合物（例えば、天然の生理学機能に関連する、共有結合または非共有結合いずれ
かのタンパク質−タンパク質相互作用を含む、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体
と特異的に会合するタンパク質）もまた提供される。この分子は、ポリマーまたは化学試
薬であり得る。機能的アナログは、構造改変を有するタンパク質であってもよいし、適切
な結合決定基と相互作用する分子形状を有する分子であってもよい。この化合物は、レセ
プター結合相互作用のアゴニストまたはアンタゴニストとして働き得る。例えば、Ｇｏｏ
ｄｍａｎら（編）、Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（最新版）Ｐｅｒｇａｍｏｎ
Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

例えば、タンパク質の状況において、実質的に純粋とは、代表的には、このタンパク質
が、最初の供給源生物に由来する他の夾雑タンパク質、核酸、または他の生物学的物質を
含まないことを意味する。純度は、標準的な方法により（代表的には、重量により）アッ
セイされ得、そして通常、少なくとも約４０％純粋、一般には、少なくとも約５０％純粋
、しばしば、少なくとも約６０％純粋、代表的には、少なくとも約８０％純粋、好ましく
は、少なくとも約９０％純粋、および最も好ましい実施形態において、少なくとも約９５
％純粋である。キャリアまたは賦形剤がしばしば添加される。実質的に純粋なＩＬ−１２
ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０を含む組成物は、この２つのポリペプチドの複合体と天然に
は会合しない、多量の外来のポリペプチドを有さない。

ポリペプチドまたはフラグメントの可溶性は、環境およびポリペプチドに依存する。多
くのパラメーターは、ポリペプチドの可溶性（温度を含む）、電解質環境、ポリペプチド
のサイズおよび分子特性、ならびに溶媒の性質に影響する。代表的には、このポリペプチ
ドが使用される温度は、約４℃〜約６５℃の範囲である。通常には、使用時の温度は、約
１８℃より高い。診断目的では、この温度は、通常、ほぼ室温または室温より高いが、こ
のアッセイにおける成分の変性温度より低い。治療目的では、この温度は、通常体温であ
り、代表的には、ヒトおよびマウスに関しては約３７℃であるが、特定の状況下では、こ
の温度は、インサイチュまたはインビボで上昇されるか、または低下され得る。

このポリペプチドの大きさおよび構造は、一般的に、実質的に安定な状態で存在し、そ
して通常は、変性状態ではない。このポリペプチドは、例えば、可溶性を与えるために、
四次構造において他のポリペプチドと結合し得るか、または脂質または界面活性剤と結合
し得る。特に、この２つのポリペプチドの結合で構成された複合体は、融合組成物のよう
に好ましい。

溶媒および電解質は、通常、生物学的活性の維持のために使用される種類の、生物学的
に適合する緩衝液であり、そして生理学的な水性溶媒に通常は近い。通常、この溶媒は、
中性ｐＨ、代表的には、約５と１０との間を有し、好ましくは約７．５を有する。いくつ
かの場合において、１つ以上の界面活性剤（代表的には、タンパク質の構造または生理学
的特徴の有意な破壊を避けるために、弱い非変性界面活性剤（例えば、ＣＨＳ（コレステ
リルヘミスクシネート）またはＣＨＡＰＳ（３−［３−コラミドプロピル）ジメチルアン
モニオ］−１−プロパンスルホネート））、あるいは十分に低濃度）が添加される。他の
例において、強力な界面活性剤が、十分な変性をもたらすのに使用され得る。

抗体（例えば、ポリクローナル抗体）と特異的に結合するか、または抗体と特異的に免
疫反応するＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドは、定義された免疫原に対して生成される。例えば
、配列番号２のアミノ酸配列またはそのフラグメントあるいは配列番号１の核酸から生成
されるポリペプチドからなる免疫原は、代表的には、免疫アッセイにおいて決定される。
本明細書中で構造的および機能的に定義されるような原型的なＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド
に対して生成されるポリクローナル抗体に選択的に結合するポリペプチドをコードする、
本明細書中に記載されるそれらの核酸配列（機能的改変体を含む）は、本発明の境界内に
含まれる。免疫アッセイは代表的に、例えば、配列番号２のタンパク質を含む複合体に対
して惹起されるポリクローナル抗血清を使用する。この抗血清は、適切な他の密接に関連
した（好ましくは、同一種由来）ファミリーメンバーに対して低い交差反応性を有するよ
うに選択、または枯渇され、そして任意のこのような交差反応性は、免疫吸着または枯渇
によって除去され、その後、免疫アッセイにおいて使用される。特に、ＩＬ−１２ ｐ４
０ポリペプチドまたはＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド単独に結合する抗体は、免疫枯渇のため
の標的である。適切な選択的血清調製物は、単離され、そして特徴付けられ得る。

免疫アッセイにおいて使用するための抗血清を産生するために、タンパク質、例えば、
配列番号２のタンパク質を含む複合体（ｃｏｍｐｌｓ）は、本明細書中に記載の通りに単
離される。例えば、組換えタンパク質は、哺乳動物細胞株において産生され得る。適切な
宿主（例えば、マウスの近交系（例えば、Ｂａｌｂ／ｃ））を、標準的なアジュバント（
例えば、フロイントアジュバント）および標準的なマウス免疫化プロトコル（Ｈａｒｌｏ
ｗおよびＬａｎｅを参照のこと）を使用して配列番号２のタンパク質を含む複合体で免疫
する。あるいは、本明細書中に開示された配列由来の実質的に全長の合成ペプチド構築物
は、免疫原として使用され得る。ポリクローナル血清を収集し、そして適切な枯渇または
選択と共に免疫アッセイ（例えば、固体支持体上に固定された免疫原を用いる固相免疫ア
ッセイ）において免疫原タンパク質に対する力価を測定する。１０^４以上の力価を有する
ポリクローナル抗血清を選択し、そして他の密接に関連したファミリーメンバー（例えば
、ＬＩＦ、ＣＴ−１、ＣＮＴＦ、またはＩＬ−６ファミリーの他のメンバー）に対するそ
れらの交差反応性についてＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（前出、５７０〜５７３頁）に記
載のアッセイのように競合結合免疫アッセイを使用して試験する。好ましくは、少なくと
も２つの個々のＩＬ−６／ＩＬ−１２ファミリーメンバーは、この標的と共にこの測定に
おいて使用される。これらの長鎖のサイトカインファミリーメンバーは、組換えタンパク
質として産生され得、そして本明細書中に記載の標準的な分子生物学およびタンパク質化
学技術を使用して単離され得る。従って、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０ファミリー
メンバーのサブセットについて所望の選択性または特異性を有する抗体調製物が同定また
は産生され得る。あるいは、ＩＬ−１２ ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０を含む複合体の融合
ポリペプチド形態に結合する抗体が、調製され得る。

競合結合形式における免疫アッセイは、交差反応性決定のために使用され得る。例えば
、融合タンパク質は、固体支持体に固定され得る。このアッセイに添加されたタンパク質
は、固定化抗原に対する選択的抗血清の結合と競合する。上記タンパク質の固定化タンパ
ク質に対する選択的抗血清の結合と競合する能力は、融合タンパク質と比較される。上記
タンパク質についての交差反応性パーセントを、標準的な計算を用いて算定する。上記に
列挙したタンパク質の各々と１０％未満の交差反応性を有する抗血清を選択およびプール
する。次いで、交差反応する選択的抗体を、上記に列挙したタンパク質を用いる免疫吸着
によってプールした抗血清から除去する。

次いで、免疫吸着およびプールした抗血清を、上記の競合結合免疫アッセイにおいて使
用し、第２のタンパク質を免疫原融合タンパク質と比較する。この比較を行うために、２
つのタンパク質は、各々、広範な濃度でアッセイされ、そして固定化融合タンパク質に対
する選択的抗血清の結合の５０％を阻害するのに必要な各々のタンパク質量が決定される
。必要とされる第２のタンパク質量が、必要とされる融合タンパク質量の２倍未満である
場合、この第２のタンパク質は、免疫原に対して生成された選択的抗体に特異的に結合す
ると言われる。

（ＩＩＩ．物理的な改変体）
本発明はまた、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０抗原のアミノ酸配列と実質的なアミ
ノ酸配列同一性を有するタンパク質またはペプチドを含む複合体を包含する。改変体とし
ては、種改変体、多型性改変体、または対立遺伝子改変体が挙げられる。

アミノ酸配列相同性または配列同一性は、残基の一致を最適化することによって、もし
必要であるなら、必要に応じてギャップを導入することによって決定される。例えば、Ｎ
ｅｅｄｌｅｈａｍら、（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３；Ｓａ
ｎｋｏｆｆら、（１９８３）第１章、Ｔｉｍｅ Ｗａｒｐｓ，Ｓｔｒｉｎｇ Ｅｄｉｔｓ
，およびＭａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉ
ｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ，Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ
，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡ；およびＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ
Ｖｉｅｗ，ＣＡ製のソフトウェアパッケージ；ならびにｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄ
ｉｓｏｎ，ＷＩをまた参照のこと。配列同一性は、一致する保存的置換を考慮する場合、
変化する。保存的置換としては、代表的に、以下の群内の置換が挙げられる：グリシン、
アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラ
ギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リシン、アルギニン；およびフェニルアラニン
、チロシン。保存は、生物学的特徴、機能的特徴、または構造的特徴に適用し得る。相同
なアミノ酸配列は、代表的に、タンパク質配列の天然の多型改変体または対立遺伝子改変
体および種間改変体が含まれることが意図される。代表的な相同タンパク質またはペプチ
ドは、ＩＬ−Ｂ３０のアミノ酸配列と２５〜１００％同一性（ギャップが導入され得る場
合）から５０〜１００％同一性（保存的置換が含まれる場合）を有する。同一性の尺度は
、少なくとも約３５％、一般的には少なくとも約４０％、しばしば少なくとも約５０％、
代表的には少なくとも約６０％、通常、少なくとも約７０％、好ましくは少なくとも約８
０％、およびより好ましくは少なくとも約９０％である。

単離されたＩＬ−１２ ｐ４０またはＩＬ−Ｂ３０ＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌク
レオチド欠失、ヌクレオチド挿入、および短いヌクレオチドストレッチの転置によって容
易に改変され得る。これらの改変は、これらの抗原、類似の生理学的活性、免疫原活性、
抗原活性または他の機能的な活性を有するそれらの誘導体、またはタンパク質をコードす
る新規なＤＮＡ配列を生じる。これらの改変配列は、変異体抗原を産生するためか、また
は発現を促進するために使用され得る。発現の促進は、遺伝子増幅、転写の増加、翻訳の
増加、そして他の機構が含まれ得る。「変異体ＩＬ−Ｂ３０」は、上記のＩＬ−Ｂ３０の
配列同一性の定義内の別のポリペプチドを包含するが、欠失、置換、または挿入のいずれ
かによって、天然で通常見出されるようなＩＬ−Ｂ３０のアミノ酸配列とは、異なるアミ
ノ酸配列を有する。これは、一般的には、配列番号２の配列を有するタンパク質と有意な
同一性を有するタンパク質、およびそれらの配列と種々の生物学的活性（例えば、抗原性
または免疫原性）を共有するタンパク質を含み、そして好ましい実施形態において、天然
の全長の開示された配列のほとんどを含む。短縮バージョンもまた有用であるが、全長配
列が代表的に好ましい。同様に、天然の供給源から見出された遺伝子またはタンパク質は
、代表的には最も望ましい。類似の概念が、異なるＩＬ−Ｂ３０タンパク質、特に種々の
温血動物（例えば、哺乳動物および鳥類）において見出されるＩＬ−Ｂ３０タンパク質に
適用される。これらの説明は、一般的に、種々のＩＬ−Ｂ３０タンパク質を包含すること
を意味するが、特定の霊長類の実施形態を特に議論することに限定されない。

ＩＬ−１２ ｐ４０変異誘発またはＩＬ−Ｂ３０変異誘発はまた、アミノ酸挿入または
アミノ酸欠失を作製することによって行われ得る。置換、欠失、挿入、または任意の組み
合わせが、最終構築物に到達するように作製され得る。挿入としては、アミノ末端または
カルボキシ末端の融合体が挙げられる。ランダム変異誘発は、標的コドンにおいて行われ
得、次いで、発現された変異体は、所望の活性についてスクリーニングされ得る。公知の
配列を有するＤＮＡ内の所定の部位で置換変異体を作製する方法は、当該分野で周知であ
る（例えば、Ｍ１３プライマー変異誘発またはポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術によ
る）。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌら、（１９８７およ
び補遺）；およびＫｕｎｋｅｌら、（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
．１５４：３６７−３８２を参照のこと。好ましい実施形態としては、ヌクレオチドレベ
ルまたはアミノ酸レベルにおいて、例えば、１倍、２倍、３倍、５倍、７倍などの置換、
好ましくは、保存的置換が挙げられる。好ましくは、この置換は、保存されたシステイン
から離れて、しばしばヘリックス構造ドメインから離れた領域内にある。このような改変
体は、特定の抗体を作製するのに有用であり得、そしてしばしば、多くのまたは全ての生
物学的特性を共有する。サイトカイン構造の認識は、レセプター相互作用において所望の
変化をもたらすように改変され得る残基の構造および位置に関する重要な洞察を提供する
。また、ＩＬ−１２ ｐ４０のＩＬ−Ｂ３０タンパク質との相互作用は、相互作用する表
面における相補的な構造的特徴を必要とする。構造分析は、さらに、レセプター相互作用
に対する複合体形成および複合体の両方において重要な表面残基の予測を可能にする。

本発明はまた、これらのタンパク質由来のセグメントを用いて組換えタンパク質（例え
ば、異種融合タンパク質）を提供する。異種融合タンパク質は、天然であり、同一の様式
で通常融合されていないタンパク質またはセグメントの融合体である。類似の概念が、異
種核酸配列に適用される。

さらに、新規な構築物は、他のタンパク質由来の類似の機能的ドメインを組み合わせる
ことから作製され得る。例えば、標的結合セグメントまたは他のセグメントが、異なる新
規な融合ポリペプチドまたはフラグメント間で「交換」され得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎ
ｇｈａｍら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６；およびＯ’Ｄ
ｏｗｄら、（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２を参
照のこと。

ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ，（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅｔｔｓ
．２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホラミダイト法は、適切な合成ＤＮ
Ａフラグメントを作製する。二本鎖フラグメントは、しばしば、相補鎖を合成し、そして
適切な条件下で互いの鎖をアニーリングするか、または適切なプライマー配列と共にＤＮ
Ａポリメラーゼを用いて相補鎖を付加するか（例えば、ＰＣＲ技術）のいずれかによって
得られる。

構造分析は、サイトカインのＩＬ−６ファミリーに対する比較においてこの遺伝子に適
用され得る。このファミリーとしては、例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、Ｇ
−ＣＳＦ、ＬＩＦ、ＯＳＭ、ＣＮＴＦ、およびＯｂが挙げられる。ヒトおよびマウスＩＬ
−Ｂ３０配列の、ＩＬ−６ファミリーの他のメンバーとのアラインメントは、構造的特徴
の規定を可能にするはずである。特に、β−シート残基およびα−ヘリックス残基は、例
えば、ＲＡＳＭＯＬプログラム（Ｂａｚａｎら、（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５
９１；Ｌｏｄｉら、（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２−１７６６；Ｓａｙ
ｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ，（１９９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；
ならびにＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら、（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎ
ｇ ４：２６３−２６９を参照のこと）を用いて決定され得る。例えば、Ｗｉｌｋｉｎｓ
ら、（１９９７年版）Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ｎｅｗ Ｆｒｏｎｔｉｅｒ
ｓ ｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
，ＮＹをまた、参照のこと。置換のために好ましい残基としては、レセプターと相互作用
すると推定される表面に曝露された残基が挙げられる。機能を保存するべきである他の残
基は、保存的置換である。特に表面に曝露された残基から遠い位置における保存的置換で
ある。

（ＩＶ．機能的改変体）
ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体に対する生理学的応答のブロックは、リガン
ドのそのレセプターへの結合の競合的阻害から生じ得る。レセプターの１つのサブユニッ
トの同定は、記載されるようなさらなる特徴付け、およびこの複合体との結合および／ま
たはシグナル伝達をブロックするサブユニットへの抗体の使用を可能にする。

本発明のインビトロアッセイは、しばしば、単離された複合体、タンパク質、これらの
タンパク質のレセプター結合セグメントを含む可溶性フラグメント、または固相基体に結
合されたフラグメントを使用する。これらのアッセイはまた、セグメント変異体および改
変体、またはサイトカイン変異体および改変体（例えば、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ
３０複合体アナログ）のいずれかの結合の影響の診断決定を可能にする。

本発明はまた、例えば、サイトカイン複合体に対する中和抗体、またはレセプター結合
フラグメントが、試験化合物と競合する、競合的薬物スクリーニングアッセイの使用を意
図する。

ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０抗原の「誘導体」としては、天然に存在する形態由
来のアミノ酸配列変異体（グリコシル化改変体）、および他の化学的部分との共有結合体
または凝集結合体が挙げられる。共有結合誘導体は、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０
複合体アミノ酸側鎖またはＮ末端もしくはＣ末端において見出される基への官能基の連結
によって調製され得る（例えば、標準的手段によって）。例えば、Ｌｕｎｄｂｌａｄおよ
びＮｏｙｅｓ、（１９８８）Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅａｇｅｎｔｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ、第１〜２巻、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃ
ａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｈｕｇｌｉ、（１９８９年版）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｉｎ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇ
ｏ，ＣＡ；およびＷｏｎｇ，（１９９１）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｒｏｓｓ Ｌｉｎｋｉｎｇ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，
Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬを参照のこと。

特に、例えば、ポリペプチドの合成およびプロセシング中、またはさらなるプロセシン
グ工程においてポリペプチドのグリコシル化パターンを変更することによって作製される
グリコシル化改変体が含まれる。例えば、Ｅｌｂｅｉｎ，（１９８７）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．５６：４９７−５３４を参照のこと。リン酸化アミノ酸残基（例えば、
リン酸化チロシン、リン酸化セリン、またはリン酸化スレオニン）を含む他の小さな変更
を有する同一の一次アミノ酸配列を有するペプチドのバージョンがまた、包含される。

ＩＬ−１２ ｐ４０とＩＬ−Ｂ３０との間の融合ポリペプチドがまた提供される。多く
のサイトカインレセプターまたは他の表面タンパク質は、マルチマー（例えば、ホモダイ
マー）物質であり、そして繰り返し構築物は、タンパク質分解に対する感受性を減少する
ことを含む種々の利点を有し得る。代表的な例は、レポーターポリペプチド（例えば、ル
シフェラーゼ）の、タンパク質のセグメントまたはドメイン（例えば、レセプター結合セ
グメント）との融合であり、その結果、融合リガンドの存在または位置は、容易に決定さ
れ得る。例えば、Ｄｕｌｌら、米国特許第４，８５９，６０９号を参照のこと。他の遺伝
子融合パートナーとしては、細菌β−ガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、プロテインＡ，β−
ラクタマーゼ、αアミラーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、酵母α交配因子、および検
出タグまたは精製タグ（例えば、Ｈｉｓ６配列のＦＬＡＧ配列）が挙げられる。例えば、
Ｇｏｄｏｗｓｋｉら、（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−８１６を参照のこ
と。例えば、同時投与されるが、タンパク質分解されない他の治療物質との融合構築物が
また提供される。

融合ペプチドは、代表的には、組換え核酸法または合成ペプチド法のいずれかによって
作製される。核酸操作および発現のための技術は、一般的には、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏ
ｋら、（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ（第２版）、第１〜３巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ；およびＡｕｓｕｂｅｌら、（１９９３年版）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔ
ｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＧｒｅｅｎｅおよびＷｉｌｅ
ｙ，ＮＹに記載される。ペプチド合成のための技術は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，
（１９６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍｅｒｒｉ
ｆｉｅｌｄ，（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７；Ａｔｈｅｒｔｏｎ
ら、（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ
Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；ならびに
Ｇｒａｎｔ，（１９９２）Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ
Ｇｕｉｄｅ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ，ＮＹに記載される。リフォールディング方法は、
合成タンパク質に適用可能であり得る。

本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化におけるバリエーション以外のＩＬ−
１２ ｐ４０タンパク質またはＩＬ−Ｂ３０タンパク質の誘導体の使用を包含する。この
ような誘導体は、化学的な部分またはタンパク質キャリアと共有結合または凝集結合を含
み得る。共有結合誘導体または凝集結合誘導体は、免疫原として、免疫アッセイにおける
試薬または精製法（例えば、結合パートナー（例えば、他の抗原）のアフィニティ精製の
ための）における試薬として有用である。ＩＬ−１２ ｐ４０またはＩＬ−Ｂ３０は、抗
ＩＬ−１２ ｐ４０抗体もしくは抗ＩＬ−Ｂ３０抗体あるいは代替の結合組成物のアッセ
イまたは精製において使用するために、当該分野で周知の方法によって固体支持体（例え
ば、ブロモシアン活性化ＳＥＰＨＡＲＯＳＥ）に共有結合することによって固定され得る
か、あるいはグルタルアルデヒド架橋を有するか、有さないポリオレフィン表面上に吸着
され得る。ＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０、もしくは融合タンパク質はまた、検出可
能な基（例えば、診断アッセイにおける使用のため）を用いて標識され得る。ＩＬ−１２
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体の精製は、ポリペプチドもしくは配列成分または相補的結
合パートナー（例えば、レセプターの結合部分）のいずれかに対する固定化抗体によって
もたらされ得る。

本発明の可溶化ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドまたはフラグメントは
、結合に特異的な抗血清または抗体の産生のための免疫原として使用され得る。精製され
た抗原を使用して、天然の抗体（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ）２など）の抗原
結合フラグメントを包含する、モノクローナル抗体または抗原結合フラグメントをスクリ
ーニングし得る。精製したＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０抗原はまた、異常な状態ま
たは特定の生理学的な状態または疾患状態を診断し得る、サイトカイン複合体の上昇した
レベルの存在に応答して生成される抗体を検出するための試薬として使用され得る。本発
明は、配列番号１において示されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列
、またはこのアミノ酸配列を含むタンパク質のフラグメントに対して惹起される抗体が意
図される。特に、本発明は、特定のドメイン（例えば、ＩＬ−Ｂ３０のヘリックスＡ、Ｂ
、Ｃ、またはＤ、あるいはＩＬ−１２ ｐ４０のＩｇドメイン）に対して結合親和性を有
する抗体またはこのドメインに対して惹起される抗体を意図する。

本発明は、さらなる密接に関連した種改変体の単離を意図する。サザンブロット分析お
よびノーザンブロット分析は、類似の遺伝実体が、他の哺乳動物において存在することを
確立する。ＩＬ−Ｂ３０が、種改変体（例えば、げっ歯動物、ウサギ、肉食動物、偶蹄目
、奇蹄類、および霊長類）において広範囲に及んでいるようである。

本発明はまた、構造、発現、および機能の違いおよび類似の両方を示す関連抗原の群を
単離する手段を提供する。分子の多くの生理学的効果の解明は、さらに別の種またはこれ
らの多型改変体の単離および特徴付けにより非常に加速される。詳細には、本発明は、異
なる種におけるさらなる相同的な遺伝実体を同定するための有用なプローブを提供する。

単離された遺伝子は、ＩＬ−Ｂ３０の発現を欠く細胞（例えば、対応するタンパク質を
欠きかつ負のバックグラウンド活性を示す種の型または細胞のいずれか）の形質転換を可
能にする。このことは、未形質転換コントロール細胞と比較する際にＩＬ−Ｂ３０の機能
の分析を可能にする。

これらの抗原を通じて媒介される種々の生理学的機能をもたらす重要な構造的要素の分
析は、現代の分子生物学の標準的技術を用いて、特に、関連するクラスのメンバーを比較
することで可能である。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４３：１３３９−１３３６に記載されるホモログスキャニング変異誘発技術（ｈｏｍ
ｏｌｏｇ−ｓｃａｎｎｉｎｇ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）；および
Ｏ’Ｄｏｗｄら、（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９
２；およびＬｅｃｈｌｅｉｔｅｒら、（１９９０）ＥＭＢＯ Ｊ．９：４３８１−４３９
０で用いられるアプローチを参照のこと。

細胞内機能は、レセプターシグナル伝達に恐らく関与する。しかし、タンパク質のイン
ターナリゼーションは、特定の環境下で生じ得、そして細胞内成分とサイトカインとの間
の相互作用が生じ得る。ＩＬ−Ｂ３０と相互作用する成分との相互作用の特定のセグメン
トは、変異誘発手段または直接的生化学手段（例えば、架橋法またはアフィニティー法）
により同定され得る。結晶学または他の物理的方法による構造分析もまた適用可能である
。シグナル伝達の機構のさらなる調査は、アフィニティー手段によりまたは遺伝子手段（
例えば、変異体の相補性分析）により単離可能であり得る関連する成分の研究を含む。

ＩＬ−Ｂ３０の発現およびコントロールのさらなる研究を探求する。抗原と関係する制
御エレメントは、異なる生理学的パターン、発生パターン、組織特異的パターン、または
他の発現パターンを示すはずである。上流または下流の遺伝子領域（例えば、コントロー
ルエレメント）が目的物である。

ＩＬ−Ｂ３０抗原の構造研究は、新規の抗原（特に、分子上にアゴニスト特性またはア
ンタゴニスト特性を示すアナログ）の設計を導く。このことは、活性の所望のスペクトル
を示す抗原を単離するために以前に記載されたスクリーニング法と組合され得る。

（Ｖ．抗体）
抗体は、それらの天然に存在する形態およびそれらの組換え形態の両方の、種々のｐ４
０／ＩＬ−Ｂ３０タンパク質のエピトープ（種改変体、多型改変体もしくは対立遺伝子改
変体を含む）およびそれらのフラグメントに対して惹起され得る。さらに、抗体は、それ
らの活性化形態または不活性化形態（ネイティブバージョンまたは変性バージョン）のい
ずれかのＩＬ−Ｂ３０に対して惹起され得る。抗イディオタイプ抗体もまた意図される。

抗体（抗原の予め決定されたフラグメントに対する、結合フラグメントおよび単鎖バー
ジョンを含む）は、フラグメントと免疫原性タンパク質との結合体を用いる動物の免疫化
により惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体を分泌する細胞から調製される
。これらの抗体は、正常ＩＬ−Ｂ３０または欠損ＩＬ−Ｂ３０に結合するために分泌され
得るか、またはアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性（例えば、レセプターを介する
）についてスクリーニングされ得る。抗体は、例えば、レセプターに対する結合を立体的
にブロックすることによる、アゴニスト性またはアンタゴニスト性であり得る。これらの
モノクローナル抗体は、通常、少なくとも、約１ｍＭ、より通常は、少なくとも、約３０
０μＭ、代表的には、少なくとも、約１００μＭ、より代表的には、少なくとも３０μＭ
、好ましくは、少なくとも約１０μＭ、およびより好ましくは、少なくとも約３μＭ以下
のＫＤで結合する。

本発明の抗体はまた、診断適用に有用であり得る。捕捉抗体または非中和抗体の場合、
これらは、レセプターに対する結合を阻害することなく抗原に結合する能力についてスク
リーニングされ得る。中和抗体の場合、これらは競合結合アッセイにおいて有用であり得
る。これらはまた、ＩＬ−Ｂ３０タンパク質またはそのレセプターを検出または定量する
際に有用であり得る。例えば、Ｃｈａｎ（１９８７年編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐ
ｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ
；ＰｒｉｃｅおよびＮｅｗｍａｎ（１９９１年編）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒ
ａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ
．；およびＮｇｏ（１９８８年編）Ｎｏｎｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，
Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．を参照のこと。交叉吸収または他の試験は、特異性
（固有のまたは共有された種の特異性）の種々の範囲を示す抗体を同定する。

さらに、抗体結合フラグメントを含む、本発明の抗体は、抗原に（例えば、生物学的応
答を惹起し得るレセプターに）結合しそして機能的結合を阻害する強力なアンタゴニスト
であり得る。これらはまた、非中和抗体として有用であり得、そして毒素または放射性核
種に結合され得、その結果、抗体が抗原に結合する場合、それを（例えば、その表面上に
）発現する細胞は殺傷される。さらに、これらの抗体は、リンカーの様式で直接的または
間接的のいずれかで薬物または他の治療剤に結合体化され得、そして薬物標的化をもたら
し得る。

抗原フラグメントは、免疫原として用いられるポリペプチドに融合または共有結合され
る場合、他の物質（特に、ポリペプチド）に連結され得る。抗原およびそのフラグメント
は、種々の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、
破傷風毒素など）に融合または共有結合され得る。ポリクローナル抗血清を調製する方法
の記載については、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｏｅｂｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖ
ｉｓｉｏｎ，ＨａｒｐｅｒおよびＲｏｗ，１９６９；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２
）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｄｏ
ｖｅｒ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｗｉｌｌｉａｍｓら（１９６７
）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ、第１巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＨａｒｌｏｗ
およびＬａｎｅ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹを参照のこと。

いくつかの場合では、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、げっ歯類、霊長類、ヒト
など）由来のモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このようなモノクローナル
抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ
Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ
Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，ＣＡ，および本明細書中で引用される参
考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ，（１９８６）Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ（第２版）、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；および、特に、
ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ，（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４
９７（これらは、モノクローナル抗体を生成する１つの方法を考察する）に見出され得る
。

他の適切な研究は、抗原性ポリペプチドへのリンパ球のインビトロでの暴露、あるいは
ファージまたは類似のベクターの中の抗体のライブラリーの選択に関する。Ｈｕｓｅら（
１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ
Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｉｎ
Ｐｈａｇｅ Ｌａｍｂｄａ」，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１」；および
Ｗａｒｄら、（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６」を参照のこと。本発
明のポリペプチドおよび抗体は、キメラ抗体またはヒト化抗体を含む、修飾を伴ってまた
は伴わないで、用いられ得る。頻繁に、ポリペプチドおよび抗体は、検出可能なシグナル
を提供する物質を共有的または非共有的のいずれかで結合することにより標識される。広
範な種々の標識技術および結合体化技術は公知であり、そして科学文献および特許明細書
の両方において広範に報告されている。適切な標識としては、放射性核種、酵素、基質、
補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発光部分、磁性粒子などが挙げられる。このよう
な標識の使用を教示する特許としては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５
０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７
，４３７号；４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。ま
た、組換え免疫グロブリンが生成され得る、Ｃａｂｉｌｌｙ，米国特許第４，８１６，５
６７号；Ｍｏｏｒｅら、米国特許第４，６４２，３３４号；およびＱｅｅｎら、（１９８
９年）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３を
参照のこと。

本発明の抗体はまた、タンパク質を単離する際のアフィニティークロマトグラフィーの
ために用いられ得る。カラムは、抗体が固体支持体に連結される場合、調製され得る。例
えば、Ｗｉｌｃｈｅｋら、（１９８４年）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０４：３−５５
を参照のこと。対照的に、タンパク質は、選択的、特異的に結合する組成物を調製するた
めの枯渇または交叉吸収のために用いられ得る。

各ＩＬ−Ｂ３０に対して惹起される抗体はまた、抗イディオタイプ抗体を惹起するため
に用いられる。これらは、それぞれの抗原の発現に関連する種々の免疫学的条件を検出ま
たは診断するのに有用である。

（ＶＩ．核酸）
記載されるペプチド配列および関連試薬は、ＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０の両
方をコードするＤＮＡクローン（例えば、天然の供給源由来）を検出、単離、または同定
するのに有用である。代表的には、哺乳動物由来の遺伝子を単離するのに有用であり、そ
して類似の手順は、他の種（例えば、鳥および哺乳動物のような、温血動物）から遺伝子
を単離するために適用される。交叉ハイブリダイゼーションは、同じ種（例えば、多型改
変体）または他の種からのＩＬ−１２ｐ４０またはＩＬ−Ｂ３０の単離を可能にする。多
数の異なるアプローチが、適切な核酸クローンを首尾良く単離するために利用可能である
。このような遺伝子は、同時発現構築物または融合構築物の構築を可能にする。

精製したタンパク質またはポリペプチドは、上記のような標準的な方法により抗体を生
成させるために有用である。合成ペプチドまたは精製タンパク質は、モノクローナル抗体
またはポリクローナル抗体を生成する免疫系に存在し得る。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，（
１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌ
ｅｙ／Ｇｒｅｅｎ；ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，（１９８９）Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

例えば、種結合組成物は、ＩＬ−１２ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０の両方を発現する細胞
株から作製される発現ライブラリーのスクリーニングのために用いられ得る。細胞内発現
のスクリーニングは、種々の染色または免疫蛍光手順により行われ得る。結合組成物は、
表面融合タンパク質を発現する細胞をアフィニティー精製または選別するために用いられ
得る。

ペプチドセグメントはまた、ライブラリーをスクリーニングするための適切なオリゴヌ
クレオチドを選択または同定するために用いられ得る。遺伝子コードは、スクリーニング
に関するプローブとして有用な適切なオリゴヌクレオチドを選択するために用いられ得る
。例えば、ＧｅｎＢａｎｋおよび配列番号１を参照のこと。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣ
Ｒ）技術と組合せて、合成オリゴヌクレオチドは、ライブラリーから正確なクローンを選
択する際に有用である。相補的配列はまた、プローブ、プライマー、またはアンチセンス
鎖として用いられる。種々のフラグメントは、例えば、アンカーベクターもしくはポリＡ
相補鎖のＰＣＲ技術、または他のペプチドの相補鎖ＤＮＡと相まって、特に有用であるは
ずである。

本発明は、特に、記載される配列の非翻訳部位をコードする部分を欠く、対応するＩＬ
−１２ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドの生物学的に活性な複合体をコードする、
単離されたＤＮＡまたはフラグメントの使用を意図する。さらに、本発明は、生物学的に
活性な融合タンパク質またはポリペプチドコードし、そして本明細書中に記載されるＤＮ
Ａ配列と適切な条件下でハイブリダイズし得る、単離されたまたは組換えのＤＮＡを含む
。この生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドは、インタクトな抗原、またはフ
ラグメントであり得、そして例えば、配列番号２に開示されるアミノ酸配列（特に、成熟
した分泌ポリペプチド）を有する。さらに、本発明は、単離されたＤＮＡもしくは組換え
ＤＮＡ、またはそのフラグメントの使用を含む。これは、分泌ＩＬ−１２ｐ４９／ＩＬ−
Ｂ３０複合体に対する高い同一性を示すタンパク質をコードする。単離されたＤＮＡは、
５’および３’に隣接するそれぞれの調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、
ポリ−Ａ追加シグナルなど）を有し得る。あるいは、発現は、コードセグメントを異種プ
ロモーターに作動可能に連結させることにより（例えば、外来遺伝子の上流にプロモータ
ーを挿入することにより）もたらされ得る。例えば、Ｔｒｅｃｏら、ＷＯ９６／２９４１
１またはＵＳＳＮ０８／４０６，０３０を参照のこと。

「単離された」核酸は、ネイティブ配列（例えば、リボゾーム、ポリメラーゼ、および
／または本来の種に隣接するゲノム配列）を天然で伴う、他の外来の成分から実質的に分
離される、核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡ、または混合ポリマー）である。用語は、その
天然に存在する環境から取り出されている核酸配列を採用し、そして組換えまたはクロー
ン化ＤＮＡ単離物、および化学合成アナログまたは異種系により生物学的に合成されたア
ナログを含む。実質的に純粋な分子は、分子の単離形態（例えば、単離された染色体とは
異なる）を含む。一般に、核酸は、約５０ｋｂ未満、通常約３０ｋｂ未満、代表的には、
約１０ｋｂ未満、そして好ましくは６ｋｂ未満のベクターまたはフラグメント内にある。

単離された核酸は、一般に、均一な組成の分子であるが、いくつかの実施形態では、わ
ずかな不均一性を含む。この不均一性は、代表的には、所望の生物学的機能または活性に
重要ではない、ポリマー末端または部分で見出される。

「組換え」核酸は、その産生方法またはその構造のいずれかにより規定される。その産
生の方法に関して（例えば、あるプロセスにより作製される産物）、プロセスは、組換え
核酸技術（例えば、ヌクレオチド配列内の人為的介入を伴う（代表的には、選択または産
生））の使用である。あるいは、お互いに天然では連続しない２つのフラグメントの融合
物を含む配列を生成することにより作製される核酸であり得るが、これは天然の産物（例
えば、天然存在する変異体）を排除することを意味する。従って、任意の合成オリゴヌク
レオチドプロセスを用いて誘導される配列を含む核酸である場合、例えば、天然に存在し
ないベクターを用いて細胞を形質転換することにより作製した産物が含まれる。このよう
なことは、しばしば、同じアミノ酸または保存されたアミノ酸をコードする縮重コドンと
あるコドンとを置換するように行われるが、代表的には、配列認識部位を導入するかまた
は取り出すように行われる。

あるいは、一般に利用可能な天然の形態において見出されない機能の所望の組み合わせ
を含む、単一の遺伝実体を生成させるための、所望の機能の核酸セグメント同士を連結す
ることが行われる。制限酵素認識部位は、しばしば、このような人為的操作の標的である
が、他の部位特異的標的（例えば、プロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、制御配列
、コントロール配列、または他の有用な特性）は、設計に含まれ得る。類似の概念は、組
換え（例えば、融合）ポリペプチドについても意図される。特に含まれるものは、遺伝子
コードの縮重により、これらの抗原のフラグメントに類似するポリペプチド、および種々
の異なる種または多型改変体由来の配列の融合物をコードする、合成核酸である。

核酸の文脈における記載「フラグメント」は、少なくとも約１７ヌクレオチド、一般に
、少なくとも約２２ヌクレオチド、通常は、少なくとも約２９ヌクレオチド、より頻繁に
は、少なくとも約３５ヌクレオチド、代表的には、少なくとも約４１ヌクレオチド、通常
は、少なくとも約４７ヌクレオチド、好ましくは、少なくとも約５５ヌクレオチド、の連
続するセグメントであり、そして好ましい実施形態では、少なくとも約６０以上のヌクレ
オチド（例えば、６７、７３、８１、８９、９５など（１００および／または１０００を
含む））である。

ＩＬ−Ｂ３０タンパク質をコードするＤＮＡは、関連するまたは類似のタンパク質、な
らびに異なる種由来の相同タンパク質をコードするＤＮＡをコードする、遺伝子、ｍＲＮ
Ａ、およびｃＤＮＡ種を同定するのに、特に有用である。これらは、他の種（霊長類動物
、げっ歯類動物、イヌ、ネコ、およびトリを含む）に相同である。種々のＩＬ−Ｂ３０タ
ンパク質は相同であるはずであり、そして本明細書中に含まれる。しかし、これらは十分
に相同である場合でさえ、この抗原に対してより離れた進化的関係を有するタンパク質が
、これらの配列を用いる適切な条件下で容易に単離され得る。霊長類ＩＬ−Ｂ３０タンパ
ク質が、特に目的のタンパク質である。ＩＬ−１２ｐ４０と同様に、このタンパク質は、
融合構築物または組合せ組成物についての第一の標的である。

このゲノム配列由来の組換えクローン（例えば、イントロンを含む）は、トランスジェ
ニック細胞および生物を含む、トランスジェニック研究、および遺伝子治療に有用である
。例えば、Ｇｏｏｄｎｏｗ，（１９９２）「Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｎｉｍａｌｓ」，
Ｒｏｉｔｔ（編）Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ａｃａｄｅ
ｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，１５０２−１５０４頁；Ｔｒａｖｉｓ，（１
９９２）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１３９２−１３９４；Ｋｕｈｎら、（１９９１）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５４：７０７−７１０；Ｃａｐｅｃｃｈｉ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ
２４４：１２８８；Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ，（１９８７編）Ｔｅｒａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍ
ａｓ ａｎｄ Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ
Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ；およびＲｏｓｅｎｂｅｒｇ，（
１９９２）Ｊ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １０：１８０−１９９を参照のこ
と。

実質的相同性（例えば、同一性）は、核酸配列比較の文脈において、比較した場合にセ
グメントまたはその相補鎖のいずれかは、最適にアラインメントさせた場合に、適切なヌ
クレオチド挿入または欠失を伴って、少なくとも約５０％のヌクレオチド、一般に、少な
くとも約５８％、通常は、少なくとも約６５％、しばしば、少なくとも約７１％、代表的
には、少なくとも約７７％、通常は、少なくとも約８５％、好ましくは、少なくとも約９
５〜９８％以上、そして特定の実施形態では、約９９％と同じくらい高いか、または約９
９％以上のヌクレオチドと同一であることを意味する。あるいは、セグメントが選択的ハ
イブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする場合に、鎖またはその相補鎖（代表的
には、ＩＬ−１２ｐ４０および／またはＩＬ−Ｂ３０（例えば、配列番号１）の配列を用
いる）に対して、実質的相同性が存在する。代表的には、選択的ハイブリダイゼーション
は、少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたり少なくとも約５５％、約２５ヌ
クレオチドのストレッチにわたり好ましくは少なくとも約７５％、そして最も好ましくは
、約２０ヌクレオチドにわたり少なくとも約９０％の同一性が存在する場合に生じる。Ｋ
ａｎｅｈｉｓａ，（１９８４）Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３を参
照のこと。記載されるように、同一性比較の長さは、より長いストレッチにわたり得、そ
して特定の実施形態では、少なくとも約１７ヌクレオチド、通常は、少なくとも約２８ヌ
クレオチド、代表的には、少なくとも約４０ヌクレオチド、そして好ましくは、少なくと
も約７５〜１００以上のヌクレオチドのストレッチにわたる。

ストリンジェントな条件（ハイブリダイゼーションの文脈における相同性を参照のこと
）は、塩、温度、有機溶媒、および他のパラメーター（代表的には、ハイブリダイゼーシ
ョン反応で制御されるもの）のストリンジェントな組合せ条件である。ストリンジェント
な温度条件は、通常、約３０℃を超える温度、通常は、約３７℃を超える温度、代表的に
は、約５５℃を超える温度、より代表的には、約６０℃または６５℃を超える温度、およ
び好ましくは約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常、約１０
００ｍＭ未満、通常、約４００ｍＭ未満、代表的には、約２５０ｍＭ未満、好ましくは、
約１５０ｍＭ未満である（１００ｍＭ、５０ｍＭ、または２０ｍＭでさえ含む）。しかし
、パラメーターの組合せは、任意の単一のパラメーターの測定よりも、さらにより重要で
ある。例えば、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖｉｄｓｏｎ，（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．３１：３４９−３７０を参照のこと。ストリンジェントな条件下のハイブリダイゼー
ションは、バックグラウンドを超えて少なくとも約２倍、好ましくは、少なくとも３〜５
倍以上のバックグラウンドを与えるはずである。

配列比較のために、代表的には１つの配列が参照配列として機能し、それに対して試験
配列が比較される。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列は、
コンピューターにインプットされ、必要な場合、サブ配列座標が指定され、そして、配列
アルゴリズムプログラムパラメーターが指定される。次いで配列比較アルゴリズムは、指
定されたプログラムパラメーターに基づいて、参照配列と比較して、試験配列についての
パーセント配列同一性を計算する。

比較のための最適な配列アラインメントは、例えば、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａ
ｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の局所的相同性アルゴリズムに
よって、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４
８：４４３の相同性アラインメントアルゴリズムによって、ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐ
ｍａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ ８５：２４４４の類似性方
法のためのサーチによって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉ
ｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒ
ｏｕｐ，５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥ
ＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）のコンピューター化された実施によってか
、または、視覚的検査（例えば、一般的にはＡｕｓｕｂｅｌら、前出）によって、行なわ
れ得る。

有用なアルゴリズムの１つの例は、ＰＩＬＥＵＰである。ＰＩＬＥＵＰは、関係および
パーセント配列同一性を示すために、進行性の、対を成すアラインメントを使用して、関
連した配列の群から多数配列アラインメントを作製する。これはまた、アラインメントを
作製するために使用されたクラスター形成関係を示す系図または樹状図をプロットする。
ＰＩＬＥＵＰは、ＦｅｎｇおよびＤｏｏｌｉｔｔｌｅ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｖｏｌ
．３５：３５１−３６０の進行性アラインメント方法の単純化したものを使用する。使用
される方法は、ＨｉｇｇｉｎｓおよびＳｈａｒｐ（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ ５：１５１
−１５３によって記載される方法に類似している。このプログラムは、３００配列をアラ
インメントさせることが可能で、それぞれの最大長は５，０００ヌクレオチドまたは５，
０００アミノ酸である。多数アラインメント手順は、２つの最も類似した配列の対を成す
アラインメントで始まり、２つのアラインメント配列の群を生成する。次いで、このクラ
スターは、次に最も関連した配列またはアラインメントされた配列のクラスターにアライ
ンメントされる。配列の２つのクラスターは、対を成す２つの個々の配列のアラインメン
トの単純な伸長によってアラインメントされる。最終のアラインメントは、一連の進行性
の、対を成すアラインメントによって、達成される。配列比較領域のための特定の配列お
よびそれらのアミノ酸またはヌクレオチド座標を指定することによって、およびプログラ
ムパラメーターを指定することによって、このプログラムは実行される。例えば、参照配
列は、以下のパラメーター：デフォルトギャップ重量（３．０）、デフォルトギャップ長
重量（０．１０）、および重量末端ギャップを使用して、パーセント配列同一性関係を決
定するための他の試験配列と比較され得る。

パーセント配列同一性および配列類似性を決定するのに適したアルゴリズムの別の例は
、ＢＬＡＳＴアルゴリズムである。これは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９０）Ｊ．Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０に記載される。ＢＬＡＳＴ分析を実行するための
ソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎを介して公に入手可能である（ｈｔｔｐ：ｗｗｗ．ｎｃｂｉ
．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）。このアルゴリズムは、データベース配列における同じ長
さのワードを用いてアラインメントされる場合、いくつかの正の値の閾値Ｔに適合するか
またはそれを満足するかどちらかの照会配列における短いワード長Ｗを同定することによ
って、高スコア配列対（ＨＳＰ）を最初に同定することを含む。Ｔは、近隣ワードスコア
閾値と称される（Ａｌｔｓｃｈｕｌら、前出）。これらの最初の近隣ワードヒットは、そ
れらを含むより長いＨＳＰを見出するためのサーチを開始するためのシードとして作用す
る。次いで、このワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り、それぞ
れの配列に沿って、両方向へ伸長される。以下の場合：累積アラインメントスコアが、そ
の最大達成値から量Ｘだけ不足する場合；累積スコアが、１以上のネガティブスコアリン
グ残基アラインメントの蓄積に起因して、０またはそれ以下に進む場合；またはどちらか
の配列の末端に達する場合に、それぞれの方向におけるワードヒットの伸長は停止する。
ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメーターＷ、Ｔ、およびＸは、アラインメントの感度および
スピードを決定する。ＢＬＡＳＴプログラムは、１１のワード長（Ｗ）、５０のＢＬＯＳ
ＵＭ６２スコアリングマトリックス（ＨｅｎｉｋｏｆｆおよびＨｅｎｉｋｏｆｆ（１９８
９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０９１５を参照のこと）
アラインメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝４、および両方の鎖の比較を
デフォルトとして使用する。

パーセント配列同一性を計算することに加え、ＢＬＡＳＴアルゴリズムはまた、２つの
配列の間の類似性の統計学的分析を実施する（例えば、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈ
ｕｌ（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３−５
７８７を参照のこと）。ＢＬＡＳＴアルゴリズムによって提供される同一性の１つの尺度
は、最小合計確率（Ｐ（Ｎ））であり、これは、２つのヌクレオチド配列または２つのア
ミノ酸配列の間の適合が偶然に発生する確率の指標を提供する。例えば、参照核酸に対す
る試験核酸の比較における最小合計確率が約０．１未満、さらに好ましくは、約０．０１
未満、そして、最も好ましくは、約０．００１未満の場合、核酸は参照配列に類似してい
ると考えられる。

ポリペプチドの２つの核酸配列が、実質上同一であるというさらなる指標は、以下に記
載されるように、第１の核酸によってコードされるポリペプチドが、第２の核酸によって
コードされるポリペプチドと免疫学的に交差反応性であるということである。従って、ポ
リペプチドは、代表的には実質上第２のポリペプチドに同一である（例えば、２つのペプ
チドが保存的な置換のみによって異なる場合）。２つの核酸配列が実質上同一であるとい
う別の指標は、以下に記載されるように、ストリンジェントな条件下で、お互いにハイブ
リダイズするということである。

他の哺乳動物種由来のＩＬ−Ｂ３０は、密接に関連した種の種間ハイブリダイゼーショ
ンによってクローニングされ得、そして、単離され得る。かすかに関連した種間の相同性
は比較的低く、従って、比較的密接に関連した種のハイブリダイゼーションが得策である
。あるいは、より種特異性を示さない抗体の調製は、発現クローニングアプローチにおい
て有用であり得る。

（ＶＩＩ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組み合わせの作製；模倣物）
ＩＬ−１２ ｐ４０もしくはＩＬ−Ｂ３０またはそのフラグメントをコードするＤＮＡ
は、化学合成、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、または広範な種々の細胞株もし
くは組織サンプルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって獲得され
得る。例えば、ＯｋａｙａｍａおよびＢｅｒｇ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ
．２：１６１−１７０；ＧｕｂｌｅｒおよびＨｏｆｆｍａｎ（１９８３）Ｇｅｎｅ ２５
：２６３−２６９；ならびにＧｌｏｖｅｒ（１９８４年編）ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄを参照の
こと。あるいは、本明細書中で提供される配列は、有用なＰＣＲプライマーを提供するか
またはＩＬ−１２ ｐ４０もしくはＩＬ−Ｂ３０をコードする適切な遺伝子の合成かもし
くは他の調製を可能にし；天然に存在する形態を含む。

このＤＮＡは、代わりに、例えば、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を産
生するために；使用され得る全長ＩＬ−１２ ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０またはフラグメ
ントの合成のために；結合の研究のために；改変された分子の構築および発現のために；
ならびに構造／機能研究のために広範な種々の細胞において発現され得る。

本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリオファー
ジ、組み込み可能なＤＮＡフラグメント、ならびにＤＮＡフラグメントを宿主のゲノムに
組み込み可能な他の賦形剤を含む。例えば、Ｐｏｕｗｅｌｓら（１９８５年および補遺）
Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｎｕａｌ，Ｅｌｓ
ｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．；ならびにＲｏｄｒｉｇｕｅｚら（１９８８年編）Ｖｅｃｔｏｒｓ
：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａ
ｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ，Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡを参照の
こと。

本発明の目的のために、お互いに機能的に関連する場合、ＤＮＡ配列は作動可能に連結
されている。例えば、シグナルペプチドまたは分泌リーダーについてのＤＮＡは、それが
、前タンパク質として発現されるかまたは細胞膜へのポリペプチド指向またはポリペプチ
ドの分泌に参加する場合、ポリペプチドに作動可能に連結されている。プロモーターは、
それがポリペプチドの転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されており；リ
ボソーム結合部位は、翻訳可能なように配置される場合、コード配列に作動可能に連結さ
れている。通常、作動可能に連結されるは、連続的およびリーディングフレーム中を意味
するが、抑制遺伝子などの特定の遺伝エレメントは、連続的に連結されていないが、代わ
りに発現を制御する操作配列になおも結合されている。例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚら、
第１０章、２０５〜２３６頁；ＢａｌｂａｓおよびＢｏｌｉｖａｒ（１９９０）Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １８５：１４−３７；ならびにＡｕｓｕｂｅｌら
（１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏ
ｌｏｇｙ，ＧｒｅｅｎｅおよびＷｉｌｅｙ，ＮＹ．を参照のこと。２つのコード配列の同
時発現は、本明細書中において特に興味深い。適切な発現ベクターの代表的な例としては
、ｐＣＤＮＡ１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．
５：１１３６−１１４２を参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ Ｐｏｌｙ−Ａ（Ｔｈｏｍａｓ
ら（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびｐＡＣ３７３ま
たはｐＡＣ６１０などのバキュロウイルスベクター（Ｍｉｌｌｅｒ（１９８８）Ａｎｎ．
Ｒｅｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．４２：１７７−１９９を参照のこと）が挙げられる。

特定のまたは規定のグリコシル化パターンを提供する系におけるＩＬ−１２ｐ４０およ
び／またはＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドを発現することがしばしば所望である。例えば、Ｌ
ｕｃｋｏｗおよびＳｕｍｍｅｒｓ（１９８８）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ６：４７
−５５；ならびにＫａｕｆｍａｎ（１９９０）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８５：４８
７−５１１を参照のこと。

ＩＬ−１２ ｐ４０および／もしくはＩＬ−Ｂ３０またはそのフラグメントは、細胞膜
に連結されたホスファチジルイノシトール（ＰＩ）となるように操作され得るが、ホスフ
ァチジルイノシトール切断酵素（例えば、ホスファチジルイノシトールホスホリパーゼＣ
）を用いる処置によって、膜から取り出され得る。これは、生物学的に活性な形態の抗原
を放出し、そして、タンパク質化学の標準的手順による精製を可能とする。例えば、Ｌｏ
ｗ（１９８９）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ ９８８：４２７−４５４；
Ｔｓｅら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１００３−１００８；ならびにＢｒｕｎ
ｎｅｒら（１９９１）Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１４：１２７５−１２８３を参照のこ
と。

ＩＬ−１２ ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０は特徴付けられているため、そのフラグメント
または誘導体は、ペプチドを合成するための慣例的なプロセスによって調製され得る。こ
れらとしては、ＳｔｅｗａｒｔおよびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｒｏｃ
ｋｆｏｒｄ，ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ
Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅ
ｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｂｏｃａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐ
ｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ
，ＮｅｗＹｏｒｋ；ならびにＶｉｌｌａｆｒａｎｃａ（１９９１年編）Ｔｅｃｈｎｉｑｕ
ｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｈｍｉｓｔｒｙ ＩＩ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ
，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａに記載されるようなプロセスを含む。

（ＶＩＩＩ．使用）
本発明は、本明細書中の他で記載されるような診断適用における使用を見出し得る試薬
を提供する（例えば、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体媒介条件においてかまた
は診断のためのキットの以下の記載において）。遺伝子は、法医科学において有用であり
得る（例えば、ヒトとげっ歯類を区別するためかまたは差次的な発現または改変パターン
を示す異なった細胞間で区別するためのマーカーとして）。提供された組成物は、例えば
、インビトロアッセイ、科学的研究、および核酸、ポリペプチド、もしくは抗体の合成ま
たは製造において、有用な試薬である。

この発明はまた、有意な商業的および／または治療的可能性を有する試薬を提供する。
複合体またはそれらの個々の成分に対する結合親和性を有すると同定された化合物と共に
、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体（天然に存在するかまたは組換えの）、その
フラグメント、それに対する抗体は、分子生物学、免疫学、または生理学の技術を教示す
るための試薬として有用であるべきである。適切なキットは、試薬を使用して調製される
（例えば、タンパク質、抗体、クローニング方法、組織学などの産生または使用における
実際の研究室演習において）。

試薬はまた、異常な生理機能または発達に関連する状態（炎症性状態を含む）の処置に
おいて有用であり得る。これらは、相互作用する成分の存在または非存在のためのインビ
トロ試験において有用であり得、これは、特定の処置ストラテジーの成功に相関し得る。
特に、種々の細胞の生理学的改変（例えば、造血性またはリンパ系の）は、本明細書中で
提供される組成物を使用する処置のための適切な方法によって達成される。例えば、Ｔｈ
ｏｍｓｏｎ（１９９４年；編）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌ
ａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔ
ｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；な
らびにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂを参照のこと。

サイトカイン複合体がＩＦＮγレベルを誘導し得るという観察は、治療可能性への有用
な洞察を提供する。特に、ＩＦＮγ産生は、細胞媒介免疫の増加を生じる。例えば、Ｐａ
ｕｌ（１９９８）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）Ｒａｖｅｎ
Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；ならびにＤｅｌｖｅｓおよびＲｏｉｔｔ（１９９８年編）Ｔｈｅ
Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓ
ｓ（ＩＳＢＮ：０１２２２６７６５６）を参照のこと。従って、細胞性応答の増強は、抗
腫瘍活性を増強するため、ワクチン反応を増強するため（体液性および細胞性免疫の両方
）、抗ウイルス効果を増強するため、そして、発達の特定の潜伏期間（ｗｉｎｄｏｗ）に
おけるアレルギー性反応に拮抗するために、文脈において有用である。例えば、Ｒｏｓｅ
およびＭａｃｋａｙ（１９９８年編）Ｔｈｅ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ
（第３編）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；ならびにＫａｙ（１９
９７年版）Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ａｌｌｅｒｇｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｂｌａｃｋ
ｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍａｌｄｅｎ ＭＡを参照のこと。逆に、アンタゴニストは
、このようなＩＦＮγ増強を阻害するかまたは予防するために使用され得、それによって
、細胞性増強の強さまたは強度を減少する。これらは、例えば、自己免疫状態（多発性硬
化症もしくは乾癬など）または慢性的炎症状態（関節炎リウマチまたは炎症性腸疾患など
）において有用である。例えば、Ｓａｍｔｅｒら（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄ
ｉｓｅａｓｅｓ第１巻および第２巻、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏを参照の
こと。最初の結果は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０の役割が、慢性炎症状態の維持においてより
重要であることを示す。従って、状態の最初の発症後に、妨害物が有効であり得る。

このような治療標的を使用して、アゴニストまたはアンタゴニストは、既存の治療法と
組み合わせられ得る（例えば、炎症の他のモジュレーターと）。従って、アゴニストは、
しばしば、組み合わせられる（例えば、ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、放射線療法または化学
療法による治療、ワクチンアジュバント、および／または抗ウイルス療法と）。あるいは
、アンタゴニストは、ＴＮＦαアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１０
および／またはステロイドと組み合わせられ得る。サイトカインのウイルス相同体もまた
使用され得る。

例えば、ＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０による異常な発現または異常なシグナル伝達
に関連した疾患または障害は、アゴニストまたはアンタゴニストの標的となるべきである
。新しいサイトカインは、造血細胞（例えば、リンパ細胞（これは、免疫学的応答（例え
ば、炎症および／または自己免疫障害）に影響する）の制御または発達における役割を果
たすべきである。あるいは、血管生理学もしくは血管発達に影響するか、またはニューロ
ンに影響し得る。状態の開始または維持と比較した治療薬の投与の時期もまた重要であり
得る。特に、サイトカイン複合体は、種々の文脈において、細胞によるサイトカイン合成
、増殖などを媒介する。ＩＬ−１２ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト（天然に存在
する形態または阻害抗体のムテイン改変体など）は、免疫応答（例えば、炎症性または自
己免疫応答などの状態における）を阻害する選択的および強力な方法を提供し得る。例え
ば、Ｓａｍｔｅｒら（編）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓｅ第１巻および第
２巻、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏをまた参照のこと。

治療適用のための特定の標的としては、例えば、ＥＡＥモデル（これは、多発性硬化症
のモデルに有用であり得る）における肺状態（喘息および線維症の両方）、糖尿病、およ
び腸炎症が挙げられる。例えば、喘息について、Ｂａｒｎｅｓら（１９９８）Ｍｏｌ．Ｍ
ｅｄ．Ｔｏｄａｙ ４：４５２−４５８；Ｐａｕｗｅｌｓら（１９９８）Ｃｌｉｎ．Ｅｘ
ｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｕｇ．２８、補遺３：１−５；Ｄｕｒｈａｍ（１９９８）Ｃｌｉ
ｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｊｕｎ．２８、補遺２：１１−１６；Ｌｅｕｎｇ（１９９
７）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．４２：５５９−５６８；Ｐｒｅｔｏｌａｎｉら（１９９７
）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：３３−３８；Ｌａｍｋｈｉｏｕｅｄら（１９９６）
Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７９６：２０３−２０８；Ｅｒｂら（１９９６）Ｉｍ
ｍｕｎｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．７４：２０６−２０８；ならびにＡｎｄｅｒｓｏｎら
（１９９４）Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１５：３２４−３３２；肺繊
維症について、Ｃｏｋｅｒら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．１１：１２１８−
１２２１；ならびにＢｉｅｎｋｏｗｓｋｉら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０９：１１８−１４０；ＥＡＥモデルについて（多発性硬化症につい
て）、ＰｅａｒｓｏｎおよびＭｃＤｅｖｉｔｔ（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３８：７９−１２２；ＭｉｌｌｅｒおよびＳｈｅｖａｃ
ｈ（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：７５３−７５９；Ｈｏｆｆｍａｎおよ
びＫａｒｐｕｓ（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４９：７９０−７９４（８４６
−８４７および８５５−８６０に考察される）；Ｓｅｇａｌ（１９９８）Ｒｅｓ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．１４９：８１１−８２０（８５０−８５１および８５５−８６０に考察される
）；Ｌｉｂｌａｕら（１９９７）Ｉｍｍｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：５９９−６０４；Ｇ
ｏｌｄら（１９９７）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｎｏｌ．１７：５０７−５１０；Ｓｐａ
ｃｋ（１９９７）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：５２９−５３６；ならびに
Ｌｏｅｎａｒｄら（１９９７）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｎｏｌ．１７：５４５−５５３
；糖尿病について、Ａｌｍａｗｉら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．
Ｍｅｔａｂ．８４：１４９７−１５０２；Ｒａｂｉｎｏｖｉｔｃｈら（１９９８）Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５５：１１３９−１１４９；ならびにＲａｂｉｎｏｖｉ
ｔｃｈ（１９９８）Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｖ．１４：１２９−１５１；な
らびに、腸／腸管の炎症状態について、Ｌｅａｃｈら（１９９９）Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｐａ
ｔｈｏｌ．２７：１２３−１３３；Ｂｒａｕｎら（１９９９）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈ
ｅｕｍａｔｏｌ．１１：６８−７４；Ｒｕｇｔｖｅｉｔら（１９９７）Ｇａｓｔｒｏｅｎ
ｔｅｒｏｌｏｇｙ １１２：１４９３−１５０５；Ｓｔｒｏｂｅｒら（１９９７）Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ １８：６１−６４；ならびにＦｏｒｄら（１９９６）Ｓｅｍｉｎ
．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｓｕｒｇ．５．１５５−１５９を参照のこと。

記憶活性化細胞のｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０刺激は、付着分子を含む表現型変化を生じる。
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０での刺激後、ＣＤ６９Ｌは高度に発現され、そして、ＣＤ５４は劇
的に減少する。付着分子の発現におけるこれらの変化は、第１および第２のリンパ節のＴ
／ＤＣ細胞リッチ領域に侵入する記憶細胞の調節を可能にし得る（例えば、高い内皮細静
脈（ＨＥＶ）を介して）。記憶細胞はまた、ＩＬ−１２刺激に対して感受性となるように
初回刺激される。従って、迅速なおよび高度なＩＦＮ産生が、抗原によるＩＬ−１２産生
後すぐ後に続く。従って、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０は、応答速度を増加することによって、
記憶細胞数を増加することによって、または、両方によって、記憶細胞による免疫応答を
促進し得る。ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０は、未処理の細胞に対してより効果を与えないかまた
は全く与えないかで、記憶細胞について特異的な差次的な効果を有し得る。逆に、多数の
慢性炎症状態において（例えば、関節炎リウマチ、慢性腸疾患、乾癬など）活性病変は、
記憶ＣＤ４５Ｒｂ^ｌｏｗ細胞に依存している。このように、アンタゴニストは、このよう
な炎症性状態の慢性局面を効果的に阻害し得る。

種々の異常な状態は、それぞれの細胞型で、ノーザンブロット分析によってＩＬ−１２
ｐ４０および／またはＩＬ−Ｂ３０ ｍＲＮＡの両方を生成することが公知である。Ｂ
ｅｒｋｏｗ（編）Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎ
ｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．；Ｔｈｏｒｎら、Ｈ
ａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎ
ｅ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎ．Ｙ．；ならびにＷｅａｔｈｅｒａｌｌら（編）Ｏｘｆ
ｏｒｄ Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ
ｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄを参照のこと。多数の他の医療状態および疾患は、マク
ロファージまたは単球による活性化を含み、そして、これらの多数が、本明細書中に提供
されるアゴニストまたはアンタゴニストによる処置に反応性である。例えば、Ｓｔｉｔｅ
ｓおよびＴｅｒｒ（１９９１年編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎ
ｏｌｏｇｙ Ａｐｐｌｅｔｏｎ ａｎｄ Ｌａｎｇｅ，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎｅｃｔ
ｉｃｕｔ；ならびにＳａｍｔｅｒら（編）、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｅａｓ
ｅｓ Ｌｉｔｔｌｅ，Ｂｒｏｗｎ ａｎｄ Ｃｏを参照のこと。これらの問題は、本明細
書中に提供される組成物を使用する予防または処置に対して影響されやすいべきである。

ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０サイトカイン複合体、アンタゴニスト、抗体などは
、精製され得、次いで（獣医学のまたはヒトの）患者に投与され得る。これらの試薬を、
生理学的に無害の安定化剤、賦形剤または保存剤とともに、例えば、従来の薬学的に受容
可能なキャリアまたは希釈剤（例えば、免疫アジュバント）中で、追加の活性または不活
性成分と、治療用途のために組み合わせ得る。これらの組み合わせを滅菌濾過し、そして
投与バイアル中の凍結乾燥によるような投与形態で、または安定化した水性調製物中での
貯蔵に置かれ得る。本発明はまた、補体結合しない形態を含む抗体またはその結合フラグ
メントの使用を意図する。

ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０、融合タンパク質、またはそのフラグメントを使用
する薬物スクリーニングは、会合した成分の単離を含む、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ
３０機能への結合親和性またはＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に対する他の関連する
生物学的効果を有する化合物を同定するために実施され得る。次いで、その後の生物学的
アッセイは、候補化合物が本来の刺激活性を有するかどうか、そして従って、これがサイ
トカイン複合体の活性をブロックするという点で、ブロッカーまたはアンタゴニストであ
るかどうかを決定するために利用され得る。同様に、固有の刺激活性を有する化合物は、
シグナル伝達経路を活性化し得、従って、これがこのサイトカイン複合体の活性を刺激す
るという点で、アゴニストである。本発明は、さらに、アンタゴニストとしてのＩＬ−１
２ ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０、またはこの複合体に対するブロッキング抗体の治療的使用お
よびアゴニストとしてのＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０、またはこの複合体の刺激抗
体の治療的使用を意図する。このアプローチは、他のＩＬ−１２ ｐ４０またはＩＬ−Ｂ
３０の種改変体に特に有用であるはずである。

効果的治療に必要な試薬の量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、および投
与される他の製剤を含む、多くの異なる因子に依存する。従って、処置投薬量は、安全性
および効率を最適にするために滴定されるべきである。代表的には、インビトロで使用さ
れる投薬量は、これらの試薬のインサイチュ投与に有用な量で有用なガイダンスを提供し
得る。特定の障害の処置に有効な用量の動物試験は、ヒト投薬量の予測指標をさらに提供
する。種々の考察が、例えば、Ｇｉｌｍａｎら（１９９０編）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ
Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈ
ｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第８版）Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔ
ｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７版）（１９９０）
、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．に記載される。
投与方法は、例えば、経口、静脈内、腹腔内、または筋肉内投与、経皮拡散などについて
、本明細書中および以下に議論される。薬学的に受容可能なキャリアには、水、生理食塩
水、緩衝液、および例えば、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｒａｈｗａ
ｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙに記載の他の化合物が挙げられる。投与量範囲は、適切なキャ
リアとともに、通常は１ｍＭより低い濃度、代表的には約１０μＭより低い濃度、通常は
約１００ｎＭより低い濃度、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモル濃度）より低い濃度、およ
び最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル濃度）より低い濃度の量であると予測される。
徐放性処方物、または徐放性装置は、しばしば、連続または長期の投与に利用される。例
えば、Ｌａｎｇｅｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７−１５３３を参照の
こと。

ＩＬ−１２ ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０、サイトカイン複合体、融合タンパク質、そのフラ
グメント、およびこれらもしくはこれらのフラグメントに対する抗体、アンタゴニスト、
およびアゴニストは、処置される宿主に直接投与され得るか、あるいは化合物のサイズに
依存して、投与前にオボアルブミンまたは血清アルブミンのようなキャリアタンパク質に
それらを結合体化することが望ましくあり得る。治療処方物は、多くの従来の投与処方物
中で投与され得る。活性成分が単独で投与されることは可能であるが、薬学的処方物とし
てそれを提示することが好ましい。処方物は、代表的には、その１つ以上の受容可能なキ
ャリアとともに、上記で定義したように、少なくとも１つの活性成分を含む。各キャリア
は、他の成分と適合可能であるという意味で薬学的かつ生理学的の両方で受容可能である
べきであり、そして患者に有害であってはならない。処方物は、経口投与、直腸投与、経
鼻投与、局所投与または非経口（皮下、筋肉内、静脈内、および皮内を含む）投与に適切
なものを含む。処方物は、便利に単位投与形態で提示され得、そして薬学の技術分野で周
知の多くの方法によって調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（１９９０編）Ｇｏｏｄ
ｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓ
ｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（第８版）Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およ
びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７
版）（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ
．；Ａｖｉｓら（編、１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒ
ｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇ
ｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ、Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＬｉｅｂｅ
ｒｍａｎら（編、１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ
：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。
本発明の治療は、他の薬剤（例えば、他のサイトカイン（ＩＬ−６またはＧ−ＣＳＦまた
は他のそれぞれのアンタゴニストを含む）と併用されるか、あるいは関連して使用され得
る。

天然に存在する形態のＩＬ−Ｂ３０および本発明の組換え形態のＩＬ−３０の両方が、
タンパク質への結合活性について化合物をスクリーニングし得るキットおよびアッセイ方
法に、特に有用である。自動化アッセイのいくつかの方法が、短期間で数万の化合物のス
クリーニングを可能にするように、近年開発されている。例えば、Ｆｏｄｏｒら（１９９
１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３（これは、固体基材上で合成した複数の規
定のポリマーによる結合親和性の試験のための手段を記載する）を参照のこと。適切なア
ッセイの開発は、本発明によって提供されるような大量の精製された可溶性ＩＬ−１２
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０サイトカイン複合体の利用可能性によって、非常に容易にされ得る
。

他の方法が使用されて、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体−レセプター相互作
用中の重要な残基を決定し得る。変異分析が実行されて（例えば、Ｓｏｍｏｚａら（１９
９３）Ｊ．Ｅｘｐｔｌ．Ｍｅｄ．１７８：５４９−５５８を参照のこと）、相互作用およ
び／またはシグナル伝達において重要な特異的な残基を決定し得る。ＰＨＤ（Ｒｏｓｔお
よびＳａｎｄｅｒ（１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７２）およびＤＳＣ（Ｋ
ｉｎｇおよびＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−
２３１０）は、αヘリックス（Ｈ）、β鎖（Ｅ）、およびコイル（Ｌ）の二次構造予測を
提供し得る。ヘリックスＡおよびＤは、レセプター相互作用において典型的に最も重要で
あり、Ｄヘリックスが、最も重要な領域である。

例えば、一旦抗原および／またはレセプターが構造的に（例えば、三次構造データによ
って）定義されると、アンタゴニストが、通常見いだされ得る。潜在的な相互作用アナロ
グを試験をすることは、現在、精製されたＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体を使
用する、高度に自動化されたアッセイ法の開発の際に可能である。特に、新しいアゴニス
トおよびアンタゴニストは、本明細書中に記載されるスクリーニング技法を使用すること
によって発見される。ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０分子のスペクトルについての組
み合わせ結合親和性を有することが見いだされた化合物、例えば、サイトカイン複合体の
種改変体に対するアンタゴニストとしてはたらき得る化合物が、特に重要である。

薬物スクリーニングの１つの方法は、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０を発現する組
換えＤＮＡ分子で安定に形質転換される真核生物または原核生物宿主細胞を利用する。他
の分子からの単離において、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０を発現する細胞を単離し
得る。このような細胞は、生存可能なまたは固定された形態のいずれかで、標準的な結合
パートナー結合アッセイのために使用され得る。Ｐａｒｃｅら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４６：２４３−２４７；およびＯｗｉｃｋｉら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０１１（これらは、細胞性応答を検出す
るための感度の高い方法を記載する）も参照のこと。

薬物スクリーニングのための他の技法は、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に対する
適切な結合親和性を有する化合物についての高い処理能力のスクリーニングを提供するア
プローチを包含し、そしてＧｅｙｓｅｎ，ヨーロッパ特許出願第８４／０３５６４号（１
９８４年９月１３日に公開）に詳細に記載される。最初に、多数の異なる小ペプチド試験
化合物を、固体基材（例えば、プラスチックピンまたはいくつかの他の適切な表面）上で
合成する。Ｆｏｄｏｒら（１９９１）を参照のこと。次いで、すべてのピンを、可溶化し
た未精製のｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０または可溶化した精製ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０と反応させ
、そして洗浄する。次の工程は、結合したｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０を検出する工程を包含す
る。

合理的薬物設計もまた、このｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０および他のエフェクターまたはアナ
ログの分子形状の構造研究に基づき得る。エフェクターは、結合に応じて他の機能を媒介
する他のタンパク質、または通常ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０と相互作用する他のタンパク質（
例えば、レセプター）であり得る。どの部位が特定の他のタンパク質と相互作用するかを
決定するための１つの手段は、物理的構造決定（例えば、ｘ線結晶学または２次元ＮＭＲ
技法）である。これらは、どのアミノ酸残基が、例えば、他のサイトカイン−レセプター
モデルに対してモデルされるように分子接触領域を形成するかについてのガイダンスを提
供する。タンパク質構造決定の詳細な記載については、例えば、Ｂｌｕｎｄｅｌｌおよび
Ｊｏｈｎｓｏｎ （１９７６） Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと。

（ＩＸ．キット）
本発明はまた、別のｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０または結合パートナーの存在を検出するため
の種々の診断キットおよび方法における、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０タンパク質、そのフラグ
メント、ペプチド、およびそれらの融合産物の使用を意図する。代表的には、キットは、
規定のｐ４０、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０、またはＩＬ−Ｂ３０のペプチドまたは遺伝子セグ
メント、あるいは一方もしくは他方を認識する試薬のいずれか（例えば、ｐ４０／ＩＬ−
Ｂ３０融合フラグメントまたは抗体）を含む区画を有する。

ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に対する試験化合物の結合親和性を決定するための
キットは、代表的に以下を含む：試験化合物；標識化合物（例えば、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３
０に対する既知の結合親和性を有する結合パートナーまたは抗体）；ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３
０の供給源（天然に存在するかまたは組換え）；および遊離の標識化合物から結合を放す
ための手段（例えば、分子の固定化のための固相）。一旦化合物がスクリーニングされる
と、抗原に対して適切な結合親和性を有するものが、それらがアゴニストまたはアンタゴ
ニストとしてｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０シグナル伝達経路に作用するかどうかを決定するため
に、当該技術分野で周知のように、適切な生物学的アッセイで評価され得る。組換えＩＬ
−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０融合ポリペプチドの利用可能性はまた、このようなアッセ
イを較正するための十分定義された標準を提供する。

例えば、試料中のｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０の、濃度を決定するために好ましいキットは、
代表的には、抗原に対する公知の結合親和性を有する標識化化合物（例えば、結合パート
ナーまたは抗体）、サイトカインの供給源（天然に存在するまたは組換え）、および遊離
の標識された化合物から結合したものを分離するための手段（例えば、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ
３０を固定するための固相）を含む。試薬を含む区画、および説明書が、通常提供される
。

ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０またはフラグメントに特異的な抗体（抗原結合フラグメントを含
む）は、ｐ４０、ＩＬ−Ｂ３０、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０および／またはこれらのフラグメ
ントの上昇したレベルの存在を検出するための診断適用に有用である。このような診断ア
ッセイは、溶解物、生存細胞、固定した細胞、免疫蛍光、細胞培養物、体液、を用い得、
そしてさらに、血清中の抗原に関連する抗原の検出などを包含し得る。診断アッセイは、
均質（遊離の試薬と抗原−パートナー複合体との間の分離工程なし）または不均質（分離
工程あり）であり得る。種々の市販のアッセイが存在し、例えば、ラジオイムノアッセイ
（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫検定法（ＥＩＡ
）、酵素増倍免疫検定法（ＥＭＩＴ）、基質標識蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦＩＡ）など
である。例えば、Ｖａｎ Ｖｕｎａｋｉｓら（１９８０）Ｍｅｔｈ Ｅｎｚｙｍｏｌ．７
０：１−５２５；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８０）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；およびＣｏｌｉｇａ
ｎら（編、１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ，Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．を参照のこと。

抗イディオタイプ抗体は、このようなものが種々の異常状態の診断であり得る場合、ｐ
４０／ＩＬ−Ｂ３０に対する抗体の存在を診断するための類似の用途を有し得る。例えば
、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０の過剰産生は、特に、癌または異常な活性化または分化のような
増殖性細胞状態において、異常な生理学的状態の診断となり得る、種々の免疫学的反応の
生成を生じ得る。

頻繁には、診断アッセイのための試薬は、アッセイの感度を最適にするように、キット
中に供給される。本発明については、アッセイの性質に依存して、プロトコル、および標
識、標識されたまたは標識されていない抗体または結合パートナー、あるいは標識された
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０が提供される。これは、通常、緩衝液、安定化剤、酵素に対する基
質のようなシグナル産生に必要な物質などのような、他の添加物と一緒である。好ましく
は、このキットはまた、適切な使用および使用後の内容物の処理の仕方の指示書を含む。
代表的には、このキットは、各有用な試薬のためのコンパートメントを有する。望ましく
は、これらの試薬が、アッセイを行うための試薬の適切な濃度を提供する水性媒体中で再
構成され得る場合、試薬は、乾燥した凍結乾燥した粉末として提供される。

薬物スクリーニングおよび診断アッセイの上記の構成成分の多くは、改変なしで使用さ
れ得、あるいは種々の方法で改変され得る。例えば、標識することは、検出可能なシグナ
ルを直接または間接的に提供する部分を共有または非共有結合することによって達成され
得る。これらのアッセイの多くにおいて、結合パートナー、試験化合物、ｐ４０／ＩＬ−
Ｂ３０、またはこれらに対する抗体は、直接または間接的に標識され得る。直接的に標識
するための可能性は、以下の標識群を包含する：^１２５Ｉのような放射性標識、ペルオキ
シダーゼおよびアルカリホスファターゼのような酵素、および蛍光強度、波長シフト、ま
たは蛍光偏光の変化をモニタリングし得る蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号）
。間接的に標識するための可能性は、１つの構成成分のビオチン化、次いで上記の標識群
の１つにカップリングしたアビジンへの結合によるものを含む。

また、遊離のｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０から結合したものを、あるいは遊離の試験化合物か
ら結合したものを分離する多くの方法がある。ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０は、種々のマトリク
ス上に固定化され得、次いで洗浄され得る。適切なマトリクスには、ＥＬＩＳＡプレート
のようなプラスチック、フィルター、およびビーズが挙げられる。例えば、Ｃｏｌｉｇａ
ｎら（編、１９９３）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ，第１巻、第２章、Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．を参照のこと。他の適
切な分離技法には、限定することなく、Ｒａｔｔｌｅら （１９８４） Ｃｌｉｎ． Ｃ
ｈｅｍ． ３０：１４５７−１４６１に記載のフルオレセイン抗体磁化可能粒子方法、お
よび米国特許第４，６５９，６７８号に記載のような二重抗体磁性粒子分離方法が挙げら
れる。

種々の標識へタンパク質またはそのフラグメントを連結する方法は、文献に広く報告さ
れており、本明細書中に詳細に議論する必要はない。技法の多くは、ペプチド結合を形成
するためにカルボジイミドまたは活性エステルのいずれかの使用による活性化されたカル
ボキシル基の使用、連結のためのクロロアセチルのような活性化ハロゲンまたはマレイミ
ドのような活性化オレフィンとメルカプト基との反応によるチオエーテルの形成などを包
含する。融合タンパク質はまた、これらの適用における使用を見いだす。

本発明の別の診断局面は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０の配列から得たオリゴヌクレオチドま
たはポリヌクレオチド配列の使用を包含する。これらの配列は、異常状態、例えば、炎症
または自己免疫を有する疑いのある患者からの試料においてｐ４０またはＩＬ−Ｂ３０メ
ッセージのレベルを検出するためのプローブとして使用され得る。サイトカインは活性化
のマーカーまたはメディエーターであり得るので、これは、例えば、効果が有意になる前
および効果が有意に進行する前に予防的な様式で、例えば、いつさらなる治療が必要とさ
れ得るかを決定するために、活性化細胞の数を決定するのに有用であり得る。ＲＮＡヌク
レオチド配列およびＤＮＡヌクレオチド配列の両方の調製、その配列の標識化、およびそ
の配列の好ましいサイズは、文献において十分な説明および議論を受け入れている。例え
ば、Ｌａｎｇｅｒ−Ｓａｆｅｒら（１９８２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．７９：４３８１−４３８５；Ｃａｓｋｅｙ（１９８７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３６：９６
２−９６７；およびＷｉｌｃｈｅｋら（１９８８）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７１：
１−３２を参照のこと。

他の分子の定性的または定量的存在についてもまた試験する診断キットもまた、意図さ
れる。診断または予後は、マーカーとして使用される多数の指標の組み合わせに依存し得
る。従って、キットは、マーカーの組み合わせについて試験し得る。例えば、Ｖｉａｌｌ
ｅｔら（１９８９） Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．
１：８９−９７を参照のこと。他のキットが、他の細胞サブセットを評価するために使
用され得る。

（Ｘ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０レセプターの単離）
特異的なリガンド−レセプター相互作用のリガンドが単離された場合、レセプターを単
離するための方法が存在する。Ｇｅａｒｉｎｇら（１９８９）ＥＭＢＯ Ｊ．８：３６６
７−３６７６を参照のこと。例えば、レセプターへの結合を妨害することなくＩＬ−Ｂ３
０サイトカインを標識するための手段が、決定され得る。例えば、アフィニティー標識が
、リガンドのアミノ末端またはカルボキシ末端のいずれかに融合され得る。このような標
識は、ＦＬＡＧエピトープタグまたは例えば、ＩｇもしくはＦｃドメインであり得る。発
現ライブラリーは、細胞分類によってか、またはこのような結合成分を発現する亜集団を
検出するための他のスクリーニングによって、サイトカインの特異的結合に関してスクリ
ーニングされ得る。例えば、Ｈｏら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ９０：１１２６７−１１２７１；およびＬｉｕら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎ
ｏｌ．１５２：１８２１−２９を参照のこと。あるいは、パニング方法が使用され得る。
例えば、ＳｅｅｄおよびＡｒｕｆｆｏ（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ８４：３３６５−３３６９を参照のこと。

標識を用いたタンパク質架橋技術が適用されて、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０サイトカイン複
合体の結合パートナーが単離され得る。これは、例えば、リガンド−レセプター様形式で
サイトカインと特異的に相互作用するタンパク質の同定を可能にする。

初期の実験が実行されて、既知のＩＬ−６またはＧ−ＣＳＦレセプター成分がｐ４０／
ＩＬ−Ｂ３０に対する応答に関与するか否かが決定される。これらの機能レセプター複合
体がｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０レセプター複合体と、特異的レセプターサブユニットもしくは
アクセサリーレセプターサブユニットのいずれかと、多くまたは全ての成分を共有するこ
とはまた、かなり可能性がある。

本発明の多くの改変および変更が、本発明の精神および範囲から逸脱することなくなさ
れ得、同様に当業者に明らかである。本明細書中に記載される特定の実施形態は、例示目
的のためのみに提供され、そして本発明は、特許請求の範囲が与えられるものと等価物な
完全な範囲と共に、このような添付の特許請求の範囲の用語によってのみ制限される。

（実施例） （Ｉ．一般方法）
以下の多くの標準的な方法が、記載されるかまたは参照される：例えば、Ｍａｎｉａｔ
ｉｓら（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，（第
二版），１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇ
ｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；
Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７および増刊）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；
Ｉｎｎｉｓら編（１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ
；Ｂｏｎｉｆａｃｉｎｏら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ；ならびにＤｏｙｌｅら、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓ
ｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ
。タンパク質の精製方法には、硫酸アンモニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気
泳動、遠心分離、結晶化等の方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（１９８７お
よび定期増刊）；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 第１８２
巻およびこのシリーズの他の巻；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９５および増刊）Ｃｕｒｒｅｎ
ｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅ
ｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｍａｔｓｕｄａｉｒａ編（１９９３）
Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ
Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ，Ａｃａｄｅｍ
ｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ならびにタンパク質精製製品の使用に関
する製造業者の文献（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪまたは
Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｒｉｃｈｍｏｎｄ，ＣＡ）を参照。組換え技術を併用することにより、
適切なセグメント（エピトープタグ）（例えば、プロテアーゼ除去配列により融合され得
るＦＬＡＧ配列または等価物）に融合させる。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐ
ｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ
Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」Ｓｅｔｌｏｗ（編）Ｇｅｎｅｔｉ
ｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８
７−９８，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；およびＣｒｏｗｅら（１９９２）ＯＩＡｅ
ｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＱＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．，Ｃｈａｔｓ
ｗｏｒｔｈ，ＣＡを参照。

例えば、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏ
ｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、ＮＣＢＩ（ＮＩＨ）、な
らびにＧｅｎＢａｎｋ、ＮＣＢＩ、ＥＭＢＯ、および他の公の配列の供給源からのものを
含む利用可能なソフトウエアプログラムを使用して、コンピューター配列分析を行う。他
の分析供給源としては、例えば、ＲＡＳＭＯＬプログラム（Ｂａｚａｎら（１９９６）Ｎ
ａｔｕｒｅ３７９：５９１；Ｌｏｄｉら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２
−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ２０：３
７４−３７６；およびＧｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎ
ｅｅｒｉｎｇ４：２６３−２６９を参照のこと）；ならびにＤＳＣ（ＫｉｎｇおよびＳｔ
ｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２３１０を参照の
こと）が挙げられ得る。また、Ｗｉｌｋｉｎｓら編（１９９７）Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ：Ｎｅｗ Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｇｅｎｏｍ
ｉｃｓ Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ；Ｓａｌｚｂｅｒｇら編（１９９８）Ｃ
ｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，ＮＹ；およびＢｉｒｒｅｎら編（１９９７）Ｇｅｎｏｍｅ Ａｎ
ａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと。

標準的な免疫学的技術は、例えば、以下に記載される：Ｈｅｒｔｚｅｎｂｅｒｇら編（
１９９６）Ｗｅｉｒ’ｓ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ 第１〜４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｃｏｌｉｇａｎ（
１９９１および最新版）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ，ＮＹ；およびＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ 第７０、７３、７４、８４、９２、９３、１０８、１１６、１２１、１３２、１
５０、１６２、および１６３巻。サイトカインアッセイが、例えば、以下に記載される：
Ｔｈｏｍｓｏｎら（１９９４）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ；ＭｅｔｃａｌｆおよびＮｉｃｏｌ
ａ（１９９５）Ｔｈｅ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔ
ｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｃａｍｂｒｉｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；なら
びにＡｇｇａｒｗａｌおよびＧｕｔｔｅｒｍａｎ（１９９１）Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｋｉ
ｎｅｓ Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｐｕｂ。

血管の生物学的活性についてのアッセイは、当該分野で周知である。これらは、腫瘍、
または他の組織（例えば、動脈性平滑筋増殖（例えば、Ｋｏｙｏｍａら（１９９６）Ｃｅ
ｌｌ８７：１０６９−１０７８）を参照のこと）における血管形成活性および血管抑制（
ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ）活性、血管上皮へのモノサイト接着（ＭｃＥｖｏｙら（１９９
７）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８５：２０６９−２０７７を参照のこと）などをカバーする
。また、Ｒｏｓｓ（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ３６２：８０１−８０９；Ｒｅｋｈｔｅｒお
よびＧｏｒｄｏｎ（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：６６８−６７７；Ｔｈ
ｙｂｅｒｇら（１９９０）Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ１０：９６６−９９０；なら
びにＧｕｍｂｉｎｅｒ（１９９６）Ｃｅｌｌ８４：３４５−３５７を参照のこと。

神経細胞の生物学的活性についてのアッセイは、例えば、以下に記載される：Ｗｏｕｔ
ｅｒｌｏｏｄ編（１９９５）Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｍｏｄｕ
ｌｅｓ１０、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ；Ｍｅｈｏｄｓ ｉｎ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ａ
ｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；およびＮｅｕｒｏｍｅｔｈｏｄｓ Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ。発育系の方法論は、例えば、以下に記載される：Ｍｅｉｓａ
ｍｉ（編）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏ
ｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＣｈｒｉｓｐｅｅｌｓ
（編）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉ
ｎ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ。

ＦＡＣＳ分析は、以下に記載される：Ｍｅｌａｎｍｅｄら（１９９０）Ｆｌｏｗ Ｃｙ
ｔｏｍｅｔｒｙおよびＳｏｒｔｉｎｇ Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏ
ｒｋ，ＮＹ；Ｓｈａｐｉｒｏ（１９８８）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅ
ｔｒｙ Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；ならびにＲｏｂｉｎｓｏｎら（１９９３）
Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｉｌｅｙ
−Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ。

（ＩＩ．ヒトｐ４０および／またはＩＬ−Ｂ３０のクローニング）
このＩＬ−１２ ｐ４０配列は、上記の種々の配列データベースから利用可能である。
ＩＬ−Ｂ３０遺伝子の配列は、表１に提供されている。この配列は、ゲノムヒト配列から
誘導される。

これらの配列は、遺伝子の細胞分布を決定するためのＰＣＲプライマーまたはプローブ
の調製を可能にする。この配列は、メッセージをコードするゲノムＤＮＡの単離を可能に
する。

プローブまたはＰＣＲプライマーを使用して、種々の組織または細胞型は、細胞分布を
決定するためにプローブされる。ＰＣＲ産物を、例えば、ＴＡクローニングキット（Ｉｎ
ｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してクローニングされる。この得られたｃＤＮＡプラスミドは
、自動配列決定装置（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において両末端から配列
決定される。

（ＩＩＩ．ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０の細胞発現）
各遺伝子をコードするｃＤＮＡに対して特異的な適切なプローブまたはプライマーを調
製する。代表的に、このプローブを、例えば、ランダムプライミングにより標識する。両
方のサブユニットの協調発現が最も重要であり、ここで、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体が
興味深い。

（ＩＶ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０タンパク質の精製）
複数のトランスフェクトされた細胞株を、他の細胞と比較して高いレベルで、サイトカ
インまたは複合体を発現するものについてスクリーニングする。あるいは、組換え構築物
の組合せが作製され得る。種々の細胞株をスクリーニングし、そして取り扱いの際にそれ
らの都合の良い特性について選択した。その後、個々のサブユニットの個々の単離および
組合せにより、いくつかのダイマー形成が得られ得る。天然のＩＬ−Ｂ３０を、天然源か
ら、または適切な発現ベクターを使用する形質転換された細胞からの発現により単離され
得る。アデノウイルス構築物をまた、産生／発現のために使用し得る。

発現したサブユニットまたは複合体の精製は、標準的な手順によって達成されるか、ま
たは細胞溶解物または上清から高い効率で効率的な精製のための操作手段と組み合わせら
れ得る。特に、ｐ４０とＩＬ−Ｂ３０の融合は、適切なリンカーを用いるかまたは用いる
ことなく、処理または精製のための高度に効率的な方法で得られ得る。ＦＬＡＧまたはＨ
ｉｓ６セグメントは、このような精製機能のために使用され得る。あるいは、アフィニテ
ィークロマトグラフィーは、以下に参照されるように特定の抗体と共に使用され得る。

タンパク質は、所望の場合、大腸菌、昆虫細胞、または哺乳動物の発現系において産生
される。

（Ｖ．ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０に対して特異的な抗体の調製）
合成ペプチドまたは精製タンパク質は、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体
を産生するために免疫系に提示される。例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ（１９９１）Ｃｕｒｒｅ
ｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；
およびＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照
のこと。免疫選択または除去方法は、得られた抗体が、個々の成分自体によって提示され
る抗体決定と異なる、ポリペプチドの複合体によって提示された抗原決定基に対して特異
的であることを保証するように適用され得る。ポリクローナル血清、またはハイブリドー
マが、調製され得る。適切な状況において、この結合剤は、上記（例えば、蛍光など）の
ように標識されるか、またはパニング法のために基質に固定されるかのいずれかである。
免疫選択、免疫除去、および関連する技術は、例えば、２個のサブユニット間の複合体に
対して所望される場合、選択薬剤を調製するために利用され得る。

（ＶＩ．ＩＬ−１２ ｐ４０およびＩＬ−Ｂ３０の共沈）
マウスＩＬ−１２ ｐ４０−Ｉｇ融合構築物を、発現ベクターにおいて調製した。この
Ｉｇドメインは、プロテインＡに結合し、そしてこのポリペプチドを沈殿させ得る。ＩＬ
−Ｂ３０Ｅｔａｇ（Ｎ末端のＦＬＡＧモチーフでタグ化されたエピトープ）構築物をまた
調製した。このポリペプチドは、Ｍ２抗体で免疫沈降可能である。この発現構築物を、Ｉ
Ｌ−１２ ｐ４０−Ｉｇ構築物単独、ＩＬ−Ｂ３０Ｅｔａｇ構築物単独、または両方一緒
のいずれかで２９３Ｔ細胞にトランスフェクトした。細胞を、^３５Ｓメチオニンを用いて
標識した。ＩＬ−１２ ｐ４０構築物単独を用いると、可溶性タンパク質は、プロテイン
Ａを使用する細胞上清中で検出されなかった。同様に、ＦＬＡＧ−ＩＬ−Ｂ３０構築物を
用いると、可溶性タンパク質は、Ｍ２抗体を使用する細胞上清中で検出されなかった。し
かし、この２つの発現構築物の同時トランスフェクトを用いると、この細胞上清により、
プロテインＡ薬剤またはＭ２抗体のいずれかと共に沈殿可能な可溶性複合体が産生された
。この複合体のＰＥＧＥ分析により、プロテインＡ沈殿複合体は、２つの予測されたポリ
ペプチドＩＬ−１２ ｐ４０−Ｉｇ融合およびＦＬＡＧ−ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドに対
応するポリペプチドから作製されたことが明らかとなった。対応して、Ｍ２抗体で沈殿し
た複合体は、ＦＬＡＧ−ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドおよびＩＬ−１２ ｐ４０−Ｉｇ融合
タンパク質から作製された。

ヒトＩＬ−１２ ｐ４０発現構築物およびヒトＦＬＡＧ−ＩＬ−Ｂ３０構築物を用いた
同様の実験により、予測された結果が得られた。ＦＬＡＧ−ＩＬ−Ｂ３０構築物を用いる
トランスフェクションでは、有意な可溶性タンパク質が得られなかった。両方の発現ベク
ターの霊長類細胞への同時トランスフェクションにより、Ｍ２抗体と免疫沈降した複合体
の効果的な分泌物が得られた。得られた複合体のＰＡＧＥ分析により、この複合体がＦＬ
ＡＧ−ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドおよびＩＬ−１２−ｐ４０ポリペプチドから作製される
ことを確認した。

（ＶＩＩ．レセプター識別）
ＩＬ−１２レセプターは、ＩＬ−１２レセプターサブユニットβ１およびβ２から作製
される。ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０の融合構築物は、レセプターサブユニットβ１を発現する
細胞と結合する。

ＩＬ−１２ ｐ４０サブユニットのホモダイマーは、ＩＬ−１２とマウスサブユニット
β１（サブユニットβ２ではない）との結合を遮断し得る。このｐ４０サブユニットは、
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体の成分であるので、ＩＬ−１２レセプターサブユニットβ１
が、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０の融合構築物に対するレセプター成分であり得るかどうかを試
験した。ＩＬ−１２レセプターサブユニットβ１に対する抗体は、レセプターサブユニッ
トβ１を発現する細胞と融合構築物との結合を遮断する。このｐ４０／ｐ７０複合体に対
する抗体（主に、ｐ４０サブユニットを認識する）は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物の効
果を遮断し得、このｐ４０成分は、レセプター相互作用において重要であることを示唆す
る。これらの観測は、レセプターサブユニットβ１がｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０融合構築物と
結合することを示唆する。関連するレセプターの中で共有されている共通のｇｐ１３０サ
ブユニットの関与を試験する同様の実験によると、このｇｐ１３０は、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ
３０に対するレセプターの関連するサブユニットではないことを示唆する。

このレセプターの１つのサブユニットを識別すると、発現クローニング効果が開始する
。この１つのサブユニットを発現するが、結合を示さない細胞を、さらなるサブユニット
を発現クローニングするために使用する。他のレセプターサブユニットβ２ホモログがス
クリーニングされる。あるいは、適切な細胞からのライブラリーが、標準的な発現クロー
ニング方法において使用され得る。

（ＶＩＩＩ．生物学的機能の大きさの評価）
ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０複合体の生物学的活性を、例えば、ＩＬ−Ｂ３０とＩＬ−６とＧ
−ＣＳＦとの間の配列および構造相同性に基づいて試験する。最初に、ＩＬ−６またはＧ
−ＣＳＦの生物学的活性を示したアッセイについて試験した。アッセイは、組換え複合体
または融合構築物のいずれかにおいて実施した。融合構築物は、ＩＬ−Ｂ３０の成熟配列
に融合した適切な長さのｓｅｒ／ｇｌｙ富化リンカー配列に融合した成熟ＩＬ−１２ ｐ
４０配列に融合したＮ末端ＦＬＡＧエピトープに結合したＩＬ−１２ ｐ４０シグナル配
列を有する構築物からなる。この構築物は、十分に発現し、分泌され、そしてエピトープ
タグは、精製および局在化の両方を可能にする。マウスおよびヒトの両方の配列形態が、
産生された。個々のポリペプチドおよび融合タンパク質の両方のアデノウイルス発現構築
物がまた、利用可能となる。

標的細胞型としては、リンパ（ｌｙｍｐｏｉｄ）細胞、骨髄性細胞、マスト細胞、プレ
−Ｂ細胞、プレ−Ｔ細胞、および繊維芽細胞−内皮細胞型が挙げられる。例えば、マクロ
ファージ／単球細胞を、細胞表面マーカーの変化（例えば、ＭＨＣクラスＩＩ、Ｂ７、Ｃ
Ｄ４０、および関連ファミリー）；サイトカインおよびケモカインの産生；ならびに抗原
提示能について評価する。ＣＤ４＋Ｔ細胞、両方のネイティブＣＤ４５Ｒｂ^ｈｉおよび記
憶ＣＤ４５Ｒｂ^ｌｏｗＴ細胞を、例えば、増殖および活性マーカーについて、およびエフ
ェクター機能（例えば、サイトカインおよびケモカインの産生）についてアッセイする。
細胞傷害ＣＤ４＋、ＣＤ８＋およびＮＫ細胞が、産生および機能の効果について評価され
る。抗体産生の効果は、例えば、脾臓細胞およびＭＬＮ Ｂ細胞について試験される。樹
状細胞は、ファクター産生を含む、産生、成熟、および機能について評価される。アポト
ーシスアッセイがまた、展開される。

長期の骨髄培養物が、ストローマ細胞および幹細胞の産生および分化（Ｄｅｘｔｅｒ培
地）の調節おける効果について、ストローマ細胞およびＢ細胞前駆体の産生および分化（
Ｗｈｉｔｌｏｃｋ−Ｗｉｔｔｅ培地）の調節について、ならびに初期骨髄群およびＢリン
パ群を調節するための潜在性の評価について試験される。

（Ａ．細胞増殖の効果）
種々の細胞型の増殖の効果を、種々の濃度のサイトカインを用いて評価する。投薬応答
分析を、関連するサイトカインＩＬ−６、Ｇ−ＣＳＦなどと組合せて実施する。サイトセ
ンサーマシン（ｃｙｔｏｓｅｎｓｏｒ ｍａｃｈｉｎｅ）が使用され得、これにより細胞
の代謝および増殖を検出する（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌ
ｅ，ＣＡ）。

ヒトＰＨＡ芽細胞の増殖を増強したヒトｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０融合タンパク質を、抗−
ＣＤ３または抗−ＣＤ３と抗−ＣＤ２８の両方を用いて刺激した。抗−ＣＤ３刺激は、必
須であるようである。ヒトｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０融合タンパク質はまた、活性化したＴｈ
１またはＴｈ２細胞クローンの増殖を増強するが、活性化していないＴｈ１またはＴｈ２
細胞クローンはそうではない。

マウスまたはヒト融合タンパク質のいずれも、マウス標的細胞上で作用した。融合タン
パク質は、抗−ＣＤ３で刺激した場合に、ＣＤ４＋ＣＤ４５Ｒｂ^ｌｏｗＣＤ６２Ｌ^ｌｏｗ
ＣＤ４４_ｈｉ細胞（記憶／活性化したＴ細胞）の増殖を支持した。融合タンパク質による
刺激は、抗−ＣＤ２８同時刺激によって増強されない。これは、ＩＬ−２の存在にほとん
ど依存しない。このことは、ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０が、記憶表現型を有する細胞群を増殖
させ、そして／または免疫性記憶を生成するかまたは維持するための重要な因子であり得
ることを示唆する。このサイトカインは、Ｔｈ１表現型（例えば、ＩＦＮγ（ＩＬ−４ま
たはＩＬ−５ではない）を産生する細胞）を含む活性化記憶細胞を選択的に支持するよう
である。

（Ｂ．ネイティブＴ細胞の分化に対する効果）
ヒト臍帯血細胞を収集し、そしてネイティブＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。これらを、抗
ＣＤ３および抗ＩＬ−２の存在下で、そしてＣＤ３２、ＣＤ５８、およびＣＤ８０を発現
する照射した線維芽細胞とともに例えば、２週間培養し、それによってＴ細胞を活性化し
、かつ増殖した。Ｔ細胞培養物を、増殖または分化に対する種々のサイトカインの効果に
ついて評価した。個々の細胞を、ＦＡＣＳ分析によってサイトカイン産生について評価し
た。ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０融合タンパク質は、ＩＦＮγを産生し、ＩＬ−４を産生しない
（Ｔｈ１細胞に特徴的なサイトカイン発現プロフィール）Ｔ細胞の増殖および分化を支持
した。

（Ｃ．細胞表面分子の発現に対する効果）
単球を、正常な健常なドナーの末梢血単核細胞からのネガティブ選択によって精製する
。簡単には、３×１０^８個のフィコール帯単核細胞（ｆｉｃｏｌｌ ｂａｎｄｅｄ ｍｏ
ｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ）を、例えば、２００μｌのαＣＤ２（Ｌｅｕ−５Ａ）、
２００μｌのαＣＤ３（Ｌｅｕ−４）、１００μｌのαＣＤ８（Ｌｅｕ２ａ）、１００μ
ｌのαＣＤ１９（Ｌｅｕ−１２）、１００μｌのαＣＤ２０（Ｌｅｕ−１６）、１００μ
ｌのαＣＤ５６（Ｌｅｕ−１９）、１００μｌのαＣＤ６７（ＩＯＭ ６７；Ｉｍｍｕｎ
ｏｔｅｃｈ，Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，ＭＥ）、および抗グリコホリン抗体（１０Ｆ７ＭＮ，
ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｅ，ＭＤ）からなるモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉ
ｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）のカクテルとともに氷上でインキ
ュベートする。抗体結合細胞を洗浄し、次いでヒツジ抗マウスＩｇＧ結合体化磁気ビーズ
（Ｄｙｎａｌ，Ｏｓｌｏ，Ｎｏｒｗａｙ）とともに（２０：１のビーズ対細胞の比）、イ
ンキュベートする。抗体結合細胞を、磁場の適用によって単球から分離する。その後、ヒ
ト単球を、ＩＬ−Ｂ３０、ＩＬ−６，Ｇ−ＣＳＦまたは組み合わせの非存在下または存在
下で１％ヒトＡＢ血清を含むＹｓｓｅｌ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，
Ｃａｌａｂａｓａｓ，ＣＡ）において培養する。

細胞表面分子の発現の分析は、直接的な免疫蛍光によって実施され得る。例えば、２×
１０^５個の精製したヒト単球を、１％ヒト血清を含むリン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）
中で、氷上で２０分間インキュベートする。細胞を２００×ｇでペレット化する。細胞を
、２０ｍｌのＰＥまたはＦＩＴＣで標識したｍＡｂ中に再懸濁する。さらに氷上で２０分
間インキュベーション後、細胞を、１％ヒト血清を含むＰＢＳにおいて洗浄し、続いてＰ
ＢＳ単独で２回洗浄する。細胞を、１％パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳにおいて固定
し、そしてＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；
Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）で分析する。例示的なｍＡｂ（例えば、Ｂｅｃｔｏ
ｎ−ＤｉｃｋｉｎｓｏｎのＣＤ１１ｂ（抗ｍａｃ１）、ＣＤ１１ｃ（ａ ｇｐ１５０／９
５）、ＣＤ１４（Ｌｅｕ−Ｍ３）、ＣＤ５４（Ｌｅｕ ５４）、ＣＤ８０（抗ＢＢ１／Ｂ
７）、ＨＬＡ−ＤＲ（Ｌ２４３）ならびにＣＤ８６（ＦＵＮ １；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ
）、ＣＤ６４（３２．２；Ｍｅｄａｒｅｘ）、ＣＤ４０（ｍＡｂ８９；Ｓｃｈｅｒｉｎｇ
−Ｐｌｏｕｇｈ Ｆｒａｎｃｅ））を使用する。

（Ｄ．ヒト細胞によるサイトカイン産生に対する効果）
ヒト単球を記載のように単離し、そしてＩＬ−Ｂ３０（１００倍希釈のバキュロウイル
ス発現物質）の非存在下または存在下で１％ヒトＡＢ血清を含むＹｓｓｅｌ培地（Ｇｅｍ
ｉｎｉ Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｌａｂａｓａｓ，ＣＡ）において培養する。さら
に、単球を、ＩＬ−Ｂ３０の非存在下または存在下でＬＰＳ（Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：
Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）を用いて刺激し、そして細胞培養上清中のサイトカイン（ＩＬ−１β
、ＩＬ−６、ＴＮＦα、ＧＭ−ＣＳＦ、およびＩＬ−１０）の濃度をＥＬＩＳＡによって
決定する。

サイトカインについての細胞質内染色に関して、単球を、ＩＬ−Ｂ３０およびＬＰＳ（
Ｅ．ｃｏｌｉ ０１２７：Ｂ８ Ｄｉｆｃｏ）ならびに１０ｍｇ／ｍｌのＢｒｅｆｅｌｄ
ｉｎ Ａ（Ｅｐｉｃｅｎｔｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ）の
非存在下または存在下でＹｓｓｅｌ培地において１２時間培養する（１００万個／ｍｌ）
。細胞をＰＢＳにおいて洗浄し、そしてＲＴで２０分間２％ホルムアミド／ＰＢＳ溶液に
おいてインキュベートする。その後、細胞を洗浄し、透過化緩衝液（ＰＢＳ／ＢＳＡ（０
．５％）／Ａｚｉｄｅ（１ｍＭ）中０．５％サポニン（Ｓｉｇｍａ））中に再懸濁し、そ
してＲＴで２０分間インキュベートする。細胞（２×１０^５個）を遠心分離し、そしてＲ
Ｔで２０分間、透過化緩衝液において１０倍に希釈された２０ｍｌの直接結合体化抗サイ
トカインｍＡｂ中に再懸濁する。以下の抗体が使用され得る：ＩＬ−１α−ＰＥ（３６４
−３Ｂ３−１４）；ＩＬ−６−ＰＥ（ＭＱ２−１３Ａ５）；ＴＮＦα−ＰＥ（ＭＡｂ１１
）；ＧＭ−ＣＳＦ−ＰＥ（ＢＶＤ２−２１Ｃ１１）；ならびにＩＬ−１２−ＰＥ（Ｃ１１
．５．１４；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）。その後、細胞を透過
化緩衝液において２回洗浄し、そしてＰＢＳ／ＢＳＡ／Ａｚｉｄｅにおいて１回洗浄し、
そしてＦＡＣＳｃａｎフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ；Ｍｏ
ｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）で分析する。

ヒトＰＨＡ芽細胞は、ヒトｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０融合構築物との接触に応答してＩＦＮ
γを産生した。この効果は、ＩＬ−２と相乗的であった。融合産物は、休止Ｔ細胞、休止
Ｔｈ１細胞クローンまたは休止Ｔｈ２細胞クローンではなくて、活性化細胞によってＩＦ
Ｎγ産生を促進した。

（Ｅ．ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）の増殖に対する効果）
全ＰＢＭＣを、正常な健常なドナーの軟膜から記載（Ｂｏｙｕｍら）のフィコール水溶
性造影剤を通じる遠心分離によって単離する。ＰＢＭＣを、ＩＬ−Ｂ３０の非存在下また
は存在下で９６ウェルプレート（Ｆａｌｃｏｎ，Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｎ
Ｊ）において１％ヒトＡＢ血清を含む２００μｌ Ｙｓｓｅｌ培地（Ｇｅｍｉｎｉ Ｂｉ
ｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｃａｌａｂａｓａｓ，ＣＡ）中で培養する。細胞を、培地単独か、
または１００Ｕ／ｍｌ ＩＬ−２（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と組み合わせた培地中で１
２０時間培養する。３Ｈ−チミジン（０．１ｍＣｉ）を培養の残り６時間添加し、そして
３Ｈ−チミジン取り込みを、液体シンチレーション計測することによって決定した。

ネイティブタンパク質、組換えタンパク質、および融合タンパク質を、多くの他の生物
学的アッセイ系におけるアゴニスト活性およびアンタゴニスト活性について、例えば、Ｔ
細胞、Ｂ細胞、ＮＫ、マクロファージ、樹状細胞、造血細胞前駆体などに対して試験する
。ＩＬ−６およびＧ−ＣＳＦの構造相関のために、これらの活性に関連するアッセイを、
分析するべきである。

ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０を、ＩＬ−６またはＧ−ＣＳＦレセプターを発現するトランスフ
ェクト細胞およびコントロールに対するアゴニスト活性またはアンタゴニスト活性につい
て評価する。例えば、Ｈｏら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９０，１１２６７−１１２７１；Ｈｏら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．
１５：５０４３−５０５３；およびＬｉｕら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：
１８２１−１８２９を参照のこと。

ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０を、マクロファージ／樹状細胞活性化および抗原提示アッセイ、
抗原または同種異系刺激に応答するＴ細胞サイトカイン産生および増殖における効果につ
いて評価する。例えば、ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．１７４：１２０９−１２２０；ｄｅ Ｗａａｌ Ｍａｌｅｆｙｔら（１９９１）Ｊ
．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７４：９１５−９２４；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ．
Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７，３８１５−３８２２；Ｆｉｏｒｅｎｔｉｎｏら（１９９１）Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：３４４４−３４５１；およびＧｒｏｕｘら（１９９６）Ｊ．
Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８４：１９−２９を参照のこと。

ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０をまた、ＮＫ細胞刺激に対する効果について評価する。アッセイ
は、例えば、Ｈｓｕら（１９９２）Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：５６３−５
６９；およびＳｃｈｗａｒｚら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１６：９５−１
０４に基づき得る。

Ｂ細胞の増殖および分化の効果は、例えば、Ｄｅｆｒａｎｃｅら（１９９２）Ｊ．Ｅｘ
ｐ．Ｍｅｄ．１７５：６７１−６８２；Ｒｏｕｓｓｅｔら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１８９０−１８９３に記載の例えば、ＩｇＧ２お
よびＩｇＡ２スイッチ因子アッセイを含む方法論によって分析される。

（ＩＸ．遺伝的に改変した動物の作製および分析）
トランスジェニックマウスは、標準的な方法によって作製され得る。このような動物は
、特定の組織か、または完全な生物全体における遺伝子の過剰発現の効果を決定するのに
有用である。このようなことは、種々の段階における動物または特定の組織の発達に関す
る興味深い洞察を提供し得る。さらに、生物学的ストレスへの種々の応答に対する効果は
、上昇し得る。例えば、Ｈｏｇａｎら（１９９５）Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ
Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２版）Ｃｏｌ
ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。

アデノウイルス技術は、種々の細胞および生物における遺伝子の発現に利用可能である
。例えば、Ｈｉｔｔら（１９９７）Ａｄｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０：１３７−１９５
；およびＱｕａｎｔｕｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｃａｎ
ａｄａの文献を参照のこと。動物は、種々の発達または生理学的に機能的な動物系に対す
るこの遺伝子の効果を決定するために有用であり得る。

ＩＬ−Ｂ３０をコードする０．５ｋｂ ｃＤＮＡをＥｃｏＲＩフラグメントとしてＣＭ
Ｖエンハンサーβ−アクチンプロモーターおよびウサギβ−グロビンポリアデニル化シグ
ナル（以前にＮｉｗａら（１９９１）Ｇｅｎｅ １０８：１９３−２００によって記載さ
れた）を含む発現ベクターにクローニングした。ベクター配列からの導入遺伝子の分離は
、Ｍａｎｎら（１９９３）「Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｉ
ｏｎ Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｍｉｃｅ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２２５：７７１−７８１によって記載される帯状スクロ
ース勾配遠心分離によって達成された。導入遺伝子を含む画分をプールし、Ｍｉｃｒｏｃ
ｏｎ−１００フィルターを介してマイクロ遠心分離し、そして微量注入緩衝液（５ｍＭ
Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍＭ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ）で５回洗
浄した。

この導入遺伝子を、微量注入緩衝液（５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、５ｍ
Ｍ ＮａＣｌ、０．１ｍＭ ＥＤＴＡ）中に最終濃度が１〜５ｎｇ／ｍｌになるように再
懸濁し、卵（［Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ×ＤＢＡ／２］Ｆ１；Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｙ）中に微量注入した。次いで、Ｈｏｇａｎら（１９９４）Ｍａｎｉｐｕｌ
ａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ，Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ，ＮＹ，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓによって公開
された手順に従って、ＩＣＲ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）養母の卵管に移した。１
０日齢目までに、産まれた動物の尾部の小片を、ＤＮＡ分析のために切り取った。トラン
スジェニック創始体の同定を、以前にＬｉｒａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８７：７２１５−７２１９によって記載されたポリメラーゼ連鎖
反応（ＰＣＲ）分析によって実施した。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの同定は
、マウス尾部ＤＮＡの増幅によって達成された。内因性ＬＤＬ遺伝子のための増幅反応プ
ライマーのための内部コントロールとして使用した。このプライマーは、ＩＬ−Ｂ３０導
入遺伝子の２００ｂｐセグメントおよびＬＤＬ遺伝子の３９７ｂｐセグメントを増幅する
。ＰＣＲ条件は以下の通りであった：９５℃、３０秒；６０℃、３０秒；７２℃、６０秒
を３０サイクル。トランスジェニック動物を、無病原体条件下に保持した。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの分析）
ＲＮＡを、製造業者（ＴＥＬ−ＴＥＳＴ，Ｉｎｃ．Ｆｒｉｅｎｄｓｗｏｏｄ，ＴＸ）の
詳説に従って、ＲＮＡ ＳＴＡＴ−６０を用いて組織から抽出した。総ＲＮＡ（２０ｍｇ
）を変性し、Ｂｉｏｔｒａｎｓ ｍｅｍｂｒａｎｅ（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，
Ｃｏｓｔａ Ｍｅｓａ，ＣＡ）上にブロットした。導入遺伝子発現を、ハイブリダイゼー
ションによって評価し、Ｌ−３０ ｃＤＮＡ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ Ｊｏｌｌａ
，ＣＡ）を無作為に標識した。総ＲＮＡを、マウスヘモペキシン遺伝子、マウスα−１酸
グリコタンパク質遺伝子、およびマウスハプトグロビン遺伝子の無作為に標識したＰＣＲ
セグメントとハイブリダイズさせることによって急性期肝臓遺伝子発現を評価した。

ＥＬＩＳＡキットを商業的供給源から購入し、そして製造業者の指示に従って行った。
マウスＩＬ−２（感受性＜３ｐｇ／ｍｌ）、マウスＩＬ−１ｂ（感受性＜３ｐｇ／ｍｌ）
、マウスＩＦＮ−γ（感受性＜２ｐｇ／ｍｌ）およびマウスＴＮＦ−α（感受性＜５．１
ｐｇ／ｍｌ）のためのＥＬＩＳＡキットを、Ｒ ＆ Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａ
ｐｏｌｉｓ，ＭＮ）から購入した。マウスＩＬ−６ ＥＬＩＳＡキット（感受性＜８ｐｇ
／ｍｌ）を、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ（Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，
ＣＡ）から購入した。マウスＩＬ−１α ＥＬＩＳＡキット（感受性＜６ｐｇ／ｍｌ）を
、Ｅｎｄｏｇｅｎ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）から購入した。

血清免疫グロブリンレベルについてのＥＬＩＳＡアッセイは、ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）から購入した抗体対を用いて、製造業者のガイドラインに従
って行った。抗マウスＩｇＭ（クローン１１／４１）、抗マウスＩｇＡ（クローンＲ５−
１４０）、抗マウスＩｇＧ１（クローンＡ８５−３）、抗マウスＩｇＧ２ａ（クローンＲ
１１−８９）および抗マウスＩｇＧ２ｂ（クローンＲ９−９１）を、捕獲抗体として使用
した。精製したマウスＩｇＭ（クローンＧ１５５−２２８）、ＩｇＡ（クローンＭ１８−
２５４）、ＩｇＧ１（クローン１０７．３）、ＩｇＧ２ａ（クローンＧ１５５−１７８）
およびＩｇＧ２ｂ（クローン４９．２）を使用して、標準曲線を作製した。ビオチン抗マ
ウスＩｇＭ（クローンＲ６−６０．２）、ビオチン抗マウスＩｇＡ（クローンＲ５−１４
０）、ビオチン抗マウスＩｇＧ１（クローンＡ８５−１）、ビオチン抗マウスＩｇＧ２ａ
（クローンＲ１９−１５）およびビオチン抗マウスＩｇＧ２ｂ（クローンＲ１２−３）を
検出抗体として使用した。

マウス血清におけるＩＧＦ−１のレベルを、血清サンプルが、製造業者（Ｎｉｃｈｏｌ
ｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｓａｎ Ｊｕａｎ Ｃａｐｉｓｔｒａｎｏ，ＣＡ）によって提
供される指示に従って、酸−エタノール抽出された後にマウスＩＧＦ−１をまた認識する
、ヒトＩＧＦ−１についての市販のラジオイムノアッセイを用いて決定した。

屠殺後、組織を極低温部分のための寒剤を用いて急速凍結するか、または１０％リン酸
緩衝化ホルマリン中に浸すことによって固定するかのいずれかを行った。ホルマリン固定
組織を、慣用的に５ｍｍに処理し、そしてヘマトキシリン−エオシン（Ｈ ＆ Ｅ）を用
いて染色した。免疫染色に関して、急速凍結部分をアセトンで固定し、そして風乾した。

血液サンプルを、添加したＥＤＴＡを有する滅菌した排出管（Ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ
Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｒｕｔｈｅｒｆｏｒｄ，ＮＪ）に
眼窩下洞から収集した。血液学的な値を、自動化システム（Ａｂｂｏｔ Ｃｅｌｌ−Ｄｙ
ｎ ３５００，Ａｂｂｏｔ Ｐａｒｋ，ＩＬ）を用いて決定した。過度な凝集または過度
に大きな血小板のために機器が正確な血小板数を提供できない場合、血小板計数を手動に
よって行った。血液スミアを、自動化染色機（Ｂａｙｅｒ Ｈｅｍａ−Ｔｅｋ ２０００
，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ）を用いて、改変されたライト−ギームザ染色（Ｈｅｍａ−Ｔｅ
ｋ Ｓｔａｉｎ Ｐａｃｋ，Ｂａｙｅｒ Ｃｏｒｐ．，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ）で染色し
、そして未成熟細胞および血小板、赤血球、および白血球形態学について手動で試験した
。

（骨髄移植）
大腿骨および脛骨は、筋肉を取り除き、そしてＰＢＳでその骨を洗浄することによって
骨髄を排出した。骨髄細胞を、一度洗浄し、そして致命的に照射した（１０００ＲＡＤ）
レシピエントマウスにｉ．ｖ．注射した。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの表現型）
ＩＬ−Ｂ３０の生物学的機能を分析するために、この遺伝子を、トランスジェニックマ
ウスにおいてＮｉｗａら（１９９１）Ｇｅｎｅ １０８：１９３−２００によって記載さ
れたＣＭＶエンハンサー／アクチンプロモーターの制御下で発現させた。このエンハンサ
ー／プロモーターカセットは、高レベルの導入遺伝子の発現を主に骨格筋および膵臓に指
向するが、この導入遺伝子は、実質的に全ての生物および細胞において発現され得る。Ｌ
ｉｒａら（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：７２１５
−７２１９を参照のこと。

ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスは、コントロール同腹子と比較された成長阻害
動物であった。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの体重の増加速度は、広範に変化
したが、コントロール同腹子において見出された体重よりも明らかに低かった。ＩＬ−Ｂ
３０トランスジェニックマウスおよびコントロール同腹子の筋肉または皮膚のいずれかか
ら抽出されたＲＮＡのノーザンブロット分析は、ＩＬ−Ｂ３０ ｃＤＮＡにハイブリダイ
ズした。これは、ＩＬ−Ｂ３０ ｍＲＮＡが、全てのＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマ
ウスの筋肉および皮膚の両方において検出されたが、コントロール同腹子においては検出
されなかったことを示した。これは、成長阻害された成長がＩＬ−Ｂ３０の発現と常に関
係していたことを実証した。

得られたＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスのうち、２５％が成体まで生存し、そ
して阻害された成長、腹部膨脹症、乱れた柔皮、不妊症、および突然死によって示される
ようにＩＬ−Ｂ３０の発現によって影響した。このように、ＩＬ−Ｂ３０のトランスジェ
ニック発現は、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック子孫の産生を妨害する表現型を生じた。
ここで示された結果は、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック創始マウスの予備的分析から導
かれる。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの組織学的分析）
ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスから収集された組織の顕微鏡試験によって、複
数部位（肺、皮膚、食道、小腸および肝臓（胆管）、大腸、および膵臓を含む）における
最少から中程度の炎症が、明らかになった。炎症性浸潤は、好中球、リンパ球、および／
またはマクロファージからなった。皮膚における炎症は、数匹のマウスにおいて、表皮肥
厚および／または潰瘍と関連した。肺において、気管支周囲の単核細胞浸潤は、ときどき
顕著であり、肺胞壁は、増化した数の白血球を含み、そして内皮の内層気道は、過形成で
あった。最小の門脈周囲の単核細胞浸潤がまた、肝臓において一般的であった。リンパ節
の皮質は、しばしば、散在した細胞性かつ欠損した小胞性の発達であった。

骨髄外造血（ＥＭＨ）が、肝臓、脾臓、およびリンパ節で観察された。ＥＭＨは、脾臓
において特に顕著であった。３匹のトランスジェニックマウスおよび１匹のコントロール
マウス由来の脾臓を、Ｔ細胞（抗−ＣＤ３）、Ｂ細胞（抗−Ｂ２２０）、およびマクロフ
ァージ（抗−Ｆ４／８０）に関して免疫組織学的染色後試験した。トランスジェニックマ
ウスにおいて、ＣＤ３陽性細胞、Ｂ２２０陽性細胞、およびＦ４／８０陽性細胞が、これ
らの正常な位置に存在した。しかし、白色脾髄は、赤色脾髄中でＥＭＨによって分離され
、そして赤色脾髄内で陽性に染色される細胞は、低い強度で染色された造血細胞が散在す
るか、または種々の抗体を用いて陽性に染色されなかった。これらの観察は、ＩＬ−３０
のトランスジェニック発現がＥＭＨと関連する全身性炎症を誘導することを示す。

末梢血中の白血球数および血小板数に対するＩＬ−Ｂ３０の効果を分析するために、完
全な血液分析を実行した。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの血液中の好中球数は
、コントロール同腹仔中の最も高い好中球数に対して３〜１１倍増加した。末梢血好中球
における増加は、炎症に典型的であり、そして種々の組織で感察された好中球浸潤と相関
する。従って、骨髄系（顆粒球性）／赤血球系の割合は、骨髄において増加した。

さらに、循環している血小板の数は、コントロール同腹仔に対して、ＩＬ−Ｂ３０トラ
ンスジェニックマウスにおいて３倍まで増加した。増加した数の血小板は、増加した数の
巨核球、または巨核球による血小板の産生における増加のいずれかに由来し得た。いずれ
かの可能性を試験するために、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウス由来の末梢血、骨
髄および脾臓を、顕微鏡分析した。末梢血において、血小板の奇異な形態（伸長しそして
紡錘形態の血小板を含む）が、頻繁に検出された。数匹のマウスの骨髄および脾臓におい
て、巨核球は、細胞質量の増加に起因して拡大していた。対照的に、骨髄および脾臓にお
いて、巨核球の数が増加しなかった。これは、ＩＬ−Ｂ３０が、巨核球による血小板産生
を加速することによって、血小板の数の増加を誘導することを示唆する。

試験された全てのＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスはまた、分裂赤血球および明
らかに変化する程度の再生をともなって、軽度から中程度の小球性低色素性貧血を経験し
た。ヘマトクリット値は、コントロール平均よりも３０〜７０％低かった。小球性低色素
性貧血の存在は、ヘモグロビン産生における欠損を示唆する。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスのサイトカインプロフィール）
ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスに見出される全身性炎症がプロ炎症性サイトカ
インの変更された発現と関連するか否かを試験するために、本発明者らは、末梢血中のＩ
Ｌ−１、ＴＮＦα、ＩＬ−６、およびＩＦＮγの濃度を決定した。試験された全てのＩＬ
−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおいて、ＴＮＦαおよびＩＦＮγのレベルが増加し
た。さらに、ＩＬ−１のレベルは、試験されたＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの
２５％で増加した。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウス中で見出されたＩＬ−１およ
びＴＮＦαの濃度は、ＬＰＳによる急性炎症応答の誘導と関連したレベルに達した。驚く
べきことに、ＩＬ−６の発現が炎症状態下で高度に誘導され（Ｒｅｉｎｅｃｋｅｒら（１
９９３）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ９４：１７４−１８１；Ｓｔｅｖｅ
ｎｓら（１９９２）Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．Ｓｃｉ．３７：８１８−８２６）そしてＴＮＦα、
ＩＬ−１およびＩＦＮγによって直接誘導され得る（Ｈｅｌｌｅら（１９８８）Ｅｕｒ．
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：９５７−９５９）のにも関わらず、ＩＬ−６は、ＩＬ−Ｂ３
０トランスジェニックマウスの末梢血中に検出されなかった。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの肝臓における急性期遺伝子）
体は、肝臓における規定された血漿タンパク質の発現によって特徴付けられる急性期応
答を伴って炎症に対して反応する。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスが全身性炎症
の表現型特徴を示すので、本発明者らは、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスおよび
コントロール同腹仔の肝臓における急性期遺伝子の発現を試験した。急性期肝臓遺伝子α
−１酸グリコプロテイン、ハプトグロブリン、およびヘモペキシンは、試験された全ての
ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおいて高度に発現し、一方、これらの遺伝子の
発現は、コントロール同腹仔では検出されなかった。これは、急性期肝臓遺伝子が、ＩＬ
−Ｂ３０トランスジェニックマウスで構成的に発現されることを示す。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの血清免疫グロブリン）
免疫応答の間に、いくつかのサイトカインは、Ｂ細胞分化および引き続く免疫グロブリ
ン合成を誘導する。免疫グロブリン合成がＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおい
て変化されたか否かを試験するために、末梢血中の免疫グロブリンアイソタイプの濃度を
、決定した。７匹のＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスのうちの２匹において、Ｉｇ
Ａの濃度が、コントロール同腹仔と比較した場合、６〜９倍に増加した。さらに、ＩｇＧ
１、ＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂの濃度は、コントロール同腹仔と比較した場合、試験さ
れた全てのＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおいて２．５〜６倍に増加した。対
照的に、ＩｇＭまたはＩｇＥの力価における有意な増加は、試験されたいずれのＩＬ−Ｂ
３０トランスジェニックマウスにおいても検出され得なかった。事実、７匹のＩＬ−Ｂ３
０トランスジェニックマウスのうちの４匹は、顕著に減少したレベルのＩｇＭ合成を示し
た。要約すると、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスのサブセットは、免疫グロブリ
ンアイソタイプＩｇＡおよびＩｇＧの濃度において６〜９倍の増加を示したが、免疫グロ
ブリンアイソタイプＩｇＭおよびＩｇＥの濃度には、有意な増加は検出されなかった。

（ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウス中の血清ＩＧＦ−１レベル）
慢性炎症状態（ＫｉｒｓｃｈｎｅｒおよびＳｕｔｔｏｎ（１９８６）Ｇａｓｔｒｏｅｎ
ｔｅｒｏｌｏｇｙ ９１：８３０−８３６；Ｌａｕｒｓｅｎら（１９９５）Ａｒｃｈ．Ｄ
ｉｓ．Ｃｈｉｌｄ．７２：４９４−４９７）またはトランスジェニック動物におけるサイ
トカインの過剰発現（Ｄｅ Ｂｅｎｅｄｅｔｔｉら（１９９４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅ
ｓｔ．９３：２１１４−２１１９）は、インスリン様増殖因子−１（ＩＧＦ−１）の減少
と関連する増殖欠損を引き起こし得る。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの発育阻
害された増殖がＩＧＦ−１の減少したレベルへさかのぼり得るか否かを試験するために、
トランスジェニックマウスの血清サンプルを、ＩＧＦ−１に関してアッセイした。試験さ
れた全てのＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおいて、血清中のＩＧＦ−１の量は
、年齢の一致したコントロール同腹仔中で見出されるレベルの１２〜１４％であった。こ
れは、ＩＬ−Ｂ３０のトランスジェニック発現、ならびに生成される引き続く炎症性応答
が、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウス中のＩＧＦ−１の減少を引き起こし、そして
結果として成長障害および不妊症の原因となり得ることを示唆する（Ｇａｙら（１９９７
）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １３７（７）：２９３７−２９４７）。

（造血細胞における生物学的に活性なＩＬ−Ｂ３０の発現）
サイトカインは、免疫系を局所的に調節するかまたは長期の効果を媒介する分泌タンパ
ク質である。ＩＬ−Ｂ３０がサイトカインとして機能するか否かおよび離れた多器官の炎
症および急性期肝臓応答を誘導し得るか否かを試験するために、本発明者らは、ＩＬ−Ｂ
３０トランスジェニック骨髄を、致死的に照射された野生型レシピエントマウスに移した
。

骨髄レシピエントは、急性期応答の誘導に関して毎週モニターされた。増加した急性期
タンパク質ＳＡＡの濃度を、移動後３５日の早さでＩＬ−Ｂ３０骨髄レシピエント中に検
出し得、そしてＳＡＡレベルは時間が経っても増加した。末梢血中の漸増する濃度のＳＡ
Ａの同時発生によって、波立った毛衣ならびに口吻および喉の辺りの炎症した皮膚の出現
によって判定されるように、ＩＬ−Ｂ３０骨髄レシピエントの健康は悪化した。対照的に
、野生型骨髄のレシピエントは、血液において上昇したレベルのＳＡＡを有さず、病気の
ようにも見えなかった。

動物を、それらが重篤に病気にみえたときに終了させた。ＩＬ−Ｂ３０の発現は、ＩＬ
−Ｂ３０トランスジェニック骨髄のレシピエントの骨髄および脾臓中に検出され得たが、
野生型骨髄のレシピエントの器官では検出され得なかった。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニ
ックドナーの場合、皮膚、肺、肝臓および胃腸管は、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック骨
髄のレシピエント中で炎症であったが、野生型骨髄のレシピエント中では炎症ではなかっ
た。さらに急性期肝臓遺伝子（ヘモペキシン、ＡＧＰ−１）は、ＩＬ−Ｂ３０トランスジ
ェニック骨髄レシピエント中で高度に発現されたが、ＩＬ−６は、血清中で検出され得な
かった。これらの結果は、ＩＬ−Ｂ３０が長期の特徴を有する真のサイトカインであるこ
とを示唆する。

ＩＬ−Ｂ３０のトランスジェニック発現は、トランスジェニック動物の連続した（ｒｕ
ｎｔｉｎｇ）全身性炎症、不妊症および死によって特徴付けられる顕著な表現型を誘導す
る。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック動物は、肺、肝臓、皮膚、および消化管中の炎症性
細胞の浸潤を伴う全身性炎症を有する。

インビボでのＩＬ−Ｂ３０の過剰発現は、成長障害および炎症の表現型（これらは、Ｉ
Ｌ−６のトランスジェニック発現のいくつかのモデルの表現形と著しく類似した）を引き
起こした。ＩＬ−６のトランスジェニック発現の効果またはマウスへの組換えＩＬ−６の
投与後と類似して、好中球浸潤および貧血が、ＩＬ−Ｂ３０のトランスジェニック発現の
結果として動物中で観察された。ＩＬ−６トランスジェニック動物と同様に、ＩＬ−Ｂ３
０トランスジェニック創始動物の成長障害は、これらの動物において観察される全身性炎
症と関連し得る減少したレベルのＩＧＦ−１に関連した。

ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック動物のこの表現型は、ＩＬ−Ｂ３０過剰発現の直接的
な効果としてかまたはＩＬ−１およびＴＮＦα発現のＩＬ−Ｂ３０媒介アップレギュレー
ションのいずれかによる、アップレギュレートされたＩＬ−６発現によって引き起こされ
得る。ＩＬ−１およびＴＮＦαは、ＩＬ−６の既知の誘導因子であり、そして増加した濃
度のＴＮＦαおよびＩＬ−１が、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスの末梢血に見出
された。

しかし、ＩＬ−６がＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックの血液中に検出され得なかったこ
とは、ＩＬ−Ｂ３０動物の表現型がこの新規サイトカインの過剰発現に直接関連すること
、およびこれらの配列相同性によって暗示されていたように、ＩＬ−Ｂ３０がＩＬ−６と
類似の生物学的活性を有することを示唆する。

ＩＬ−６は、広範な種々の機能の間で血小板増加症、急性期タンパク質合成、およびＢ
細胞分化を誘導する多面発現性サイトカインである。

実際に、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック動物は、構成的に、ＡＧＰ−１、ハプトグロ
ビン、ヘモペキシンおよび血清アミロイドＡタンパク質のような急性期肝臓遺伝子を発現
する。類似した表現型は、ＩＬ−６のトランスジェニック過剰発現の効果としてまたは組
換えＩＬ−６の投与後に、マウス中で示された。さらに、ＩＬ−Ｂ３０のトランスジェニ
ック発現は、多くの血小板が奇異な形態（伸長した見かけ、大きなサイズ、および／また
は紡錘形態）を有するという点で異常である血小板増加症を引き起した。本発明者らは、
ＩＬ−Ｂ３０および／または他のアップレギュレートされたサイトカインが、正常な血小
板産生に対する効果を有することを疑った。これはまた、ＩＬ−Ｂ３０が、ＩＬ−６およ
びその関連物と生物学的活性を共有することを示唆する。

ＩＬ−６はまた、Ｂ細胞分化因子として同定された。ＩＬ−６のトランスジェニック過
剰発現は、プラスマ細胞腫を引き起こし、そしてＩＬ−６欠損マウスは、減少したＩｇＧ
応答を示す。本発明者らは数匹のＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおいてＩｇＧ
およびＩｇＡ産生に増加を見出したが、この知見は、異なる創始動物間で一致しなかった
。従って、潜在的なＢ細胞分化因子としてＩＬ−Ｂ３０をさらに特徴付けるさらなる分析
が必要である。

ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニックマウスにおいて、循環している好中球の増加は、種々
の組織における炎症事象と一致したが、赤血球パラメーターにおける変化は、簡単に説明
できなかった。ＩＬ−１、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−γは、通常、慢性疾患貧血（ＡＣ
Ｄ）と呼ばれる症候群（これは、一般的に、正球性貧血、正色素性貧血、非再生（または
最小限に再生性の）貧血として現れ、そして種々の慢性炎症性疾患に見いだされる）のメ
ディエーターである。慢性疾患貧血はまた、数人のヒト患者において、小球性貧血、低色
素性貧血として現れ得る。この症候群は、改変された鉄代謝およびエリトロポイエチンに
対する減少した応答に起因する。ＩＬ−Ｂ３０マウスで観察される小球性低色素性貧血は
、末梢サイトカイン濃度における増加によって示差される様に、ＡＣＤに起因し得る。し
かし、小球性低色素性貧血の最も一般的な原因は、鉄欠乏であり、これは、ＩＬ−Ｂ３０
マウスで見出される部分骨髄応答（再生）および血小板増加症とより一致する。血清フェ
リチン、鉄および総鉄結合能力の測定（これは、鉄欠乏貧血とＡＣＤとの区別を可能にす
る）を含むさらなる研究は、発症したマウスから妥当な血液を得ることが困難なことに起
因して行われなかった。

ＩＬ−１およびＴＮＦ−αは、ＩＬ−６発現の公知の誘導因子であり、そしてＩＬ−６
発現は、通常、炎症応答の間にアップレギュレーションされる。従って、ＩＬ−６がＩＬ
−Ｂ３０トランスジェニック動物の末梢血中で検出され得なかったことは、驚くべきこと
である。これは、ＩＬ−Ｂ３０が未だ同定されていない機構によるＩＬ−６発現に対する
ネガティブ効果を有することを示唆する。実際、ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニック動物中
にＩＬ−６がないことは、これらの動物中で観察される高いレベルのＩｌ−１およびＴＮ
Ｆ−αを説明し得る。なぜなら、ＩＬ−６は、マウス中の循環しているＩＬ−１およびＴ
ＮＦ−αの濃度にネガティブな効果を有するからである。ＩＬ−Ｂ３０トランスジェニッ
クマウス中に観察される高い濃度の循環しているＴＮＦ−αはまた、増加した濃度のＩＦ
Ｎ−γの結果であり得る。ＩＦＮ−γは、ＩＬ−２活性化Ｔ細胞またはＩＬ−４活性化Ｂ
細胞によって産生され、そして単球およびマクロファージにおいてＴＮＦ−αの発現を誘
導する。ＩＦＮ−γの発現がＩＬ−Ｂ３０によって直接か、またはＩＬ−Ｂ３０によって
誘導される他のサイトカインによってのどちらで媒介されるかは、決定されないままであ
る。要約すると、本発明者らの結果は、ＩＬ−Ｂ３０が、ＩＬ−６と広範な種々の生物学
的活性を共有することを示唆する。これらの生物学的活性が通常のレセプター、シグナル
伝達エレメントまたはＩＬ−６と共有される転写因子によって媒介されるか否かは、理解
されないままである。これらの問題は、できれば、遺伝的アプローチまたは生化学的アプ
ローチによって、進行中の実験により明確にされる。

本明細書中に引用される全ての参考文献は、あたかも各個々の刊行物または特許出願が
詳細にかつ個々に、すべての目的に対してその全体が参考として援用されるようにしめさ
れるのと同じ程度に、本明細書中に参考として援用される。

本発明の多くの改変および変更が、本発明の精神および範囲から逸脱することなくなさ
れ得、同様に当業者に明らかである。本明細書中に記載される特定の実施形態は、例示目
的のためのみに提供され、そして本発明は、特許請求の範囲が与えられるものと等価物な
完全な範囲と共に、このような添付の特許請求の範囲の用語によってのみ制限される。

Claims (50)

1. 以下を含む、組成物：ａ）以下の両方： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチド；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチド；
   ｂ）以下の両方： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポリペプチド；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポリペプチド；
   ｃ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメント；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメント；またはｄ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント。
2. 請求項１に記載の組成物であって、ａ）ここで、前記少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の１つのセグメントを含むか；
   ｂ）ここで、前記少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の両方であるか；
   ｃ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
   ｄ）ここで、前記ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
   ｅ）水、生理食塩水、および／または緩衝液を含む水性化合物より選択されるキャリアをさらに含むか；
   ｆ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与で処方されるか；あるいはｇ）滅菌した組成物である、組成物。
3. 請求項１に記載の組成物であって、ａ）ここで、少なくとも１つの前記ポリペプチドが以下： ｉ）検出可能に標識されるか；
   ｉｉ）組換え的に産生されるか；
   ｉｉｉ）グリコシル化されていないか；
   ｉｖ）変性されるか；
   ｖ）固体物質に結合されるか；または ｖｉ）別の化学的部分に結合体化されるかであるか；
   ｂ）以下： ｉ）実質的に純粋なＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチド；および ｉｉ）実質的に純粋なＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドの両方を含むか；
   ｃ）ＩＬ−Ｂ３０に融合されたＩＬ−１２ ｐ４０を含む、実質的に純粋なポリペプチドを含むか；あるいはｄ）ＩＬ−１８、ＩＬ−１２、放射線療法もしくは化学療法、免疫アジュバント、または抗ウイルス性と組み合わされる、組成物。
4. 請求項１に記載の組成物および以下：ａ）前記ポリペプチドを含む区画；またはｂ）キット中の試薬の使用もしくは処分についての説明書、を含む、キット。
5. 以下をコードする、単離された核酸または組換え核酸：ａ）以下の両方： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチド；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチド；
   ｂ）以下の両方： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポリペプチド；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０由来の少なくとも１１連続するアミノ酸を含む、実質的に純粋なポリペプチド；
   ｃ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメント；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメント；またはｄ）以下の両方を含む実質的に純粋なポリペプチド： ｉ）ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント；および ｉｉ）ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメント。
6. 請求項５に記載の核酸であって、ａ）ここで、前記少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の１つのセグメントを含むか；
   ｂ）ここで、前記少なくとも７連続するアミノ酸の複数の別個のセグメントが、少なくとも９連続するアミノ酸の両方であるか；
   ｃ）ここで、前記ＩＬ−１２ ｐ４０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
   ｄ）ここで、前記ＩＬ−Ｂ３０の少なくとも１１連続するアミノ酸のセグメントが、少なくとも１５連続するアミノ酸であるか；
   ｅ）該ＩＬ−１２ ｐ４０が霊長類由来であるか；
   ｆ）該ＩＬ−Ｂ３０が霊長類由来であるか；
   ｇ）発現ベクターであるか；
   ｈ）複製起点をさらに含むか；
   ｉ）検出可能な標識を含むか；
   ｊ）合成ヌクレオチド配列を含むか；
   ｋ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか；またはｌ）霊長類由来である、核酸。
7. 請求項６に記載の組換え核酸を含む、細胞。
8. 請求項７に記載の細胞であって、該細胞は以下：ａ）原核生物細胞；
   ｂ）真核生物細胞；
   ｃ）細菌細胞；
   ｄ）酵母細胞；
   ｅ）昆虫細胞；
   ｆ）哺乳動物細胞；
   ｇ）マウス細胞；
   ｈ）霊長類細胞；またはｉ）ヒト細胞、である、細胞。
9. 請求項６に記載の核酸および以下：ａ）該核酸を含む区画；
   ｂ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドをさらに含む区画；もしくはｃ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドをさらに含む区画；またはｄ）キット中の試薬の使用もしくは処理についての説明書、を含む、キット。
10. ａ）霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０の天然の成熟コード部分に、５０℃で３０分間および１Ｍ未満の塩の洗浄条件下で；ならびにｂ）霊長類ＩＬ−Ｂ３０の天然の成熟コード部分に、５０℃で３０分間および１Ｍ未満の塩の洗浄条件下で、ハイブリダイズする、核酸。
11. 請求項１０に記載の核酸であって、ここで：ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０についての前記洗浄条件が、６０℃および４００ｍＭ未満の塩である；
    ｂ）ＩＬ−Ｂ３０についての前記洗浄条件が、６０℃および４００ｍＭ未満の塩である；
    ｃ）該核酸が、霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０をコードする配列に、少なくとも５０ヌクレオチドのストレッチを超える同一性を示す；ならびに／またはｄ）該核酸が、霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列に、少なくとも５０ヌクレオチドのストレッチを超える同一性を示す、核酸。
12. 請求項１０に記載の核酸であって、ここで：ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０についての前記洗浄条件が、６５℃および１５０ｍＭ未満の塩である；
    ｂ）ＩＬ−Ｂ３０についての前記洗浄条件が、６５℃および１５０ｍＭ未満の塩である；
    ｃ）該核酸が、霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０をコードする配列に、少なくとも９０ヌクレオチドのストレッチを超える同一性を示す；ならびに／またはｄ）該核酸が、霊長類ＩＬ−Ｂ３０をコードする配列に、少なくとも９０ヌクレオチドのストレッチを超える同一性を示す、核酸。
13. 以下：ａ）ＴＮＦαアンタゴニスト；
    ｂ）ＩＬ−１２アンタゴニスト；
    ｃ）ＩＬ−１０；またはｄ）ステロイド、と組み合わされた、ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０のアンタゴニスト。
14. 抗体由来の抗原結合部分を含む結合化合物であって、該抗体は、請求項１に記載の組成物に特異的に結合するが、ＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチドまたはＩＬ−Ｂ３０ポリペプチドのいずれにも結合せず、該組成物は、以下：ａ）以下 ｉ）実質的に純粋なＩＬ−１２ ｐ４０ポリペプチド；および ｉｉ）実質的に純粋なＩＬ−Ｂ３０ポリペプチド、の両方を含む、実質的に純粋なポリペプチドを含むか；またはｂ）ＩＬ−Ｂ３０に融合されるＩＬ−１２ ｐ４０を含む、実質的に純粋なポリペプチドを含む、結合化合物。
15. 請求項１４に記載の結合化合物であって、ここで：ａ）該結合化合物が容器中であるか；
    ｂ）該結合化合物がＦｖ、Ｆａｂ、もしくはＦａｂ２フラグメントであるか；
    ｃ）該結合化合物が別の化学的部分に結合体化されるか；またはｄ）前記抗体が以下： ｉ）請求項１に記載の組成物に対して惹起されるか；
    ｉｉ）免疫選択されるか；
    ｉｉｉ）ポリクローナル抗体であるか；
    ｉｖ）抗原に対して少なくとも３０ｍＭのＫｄを示すか；
    ｖ）ビーズまたはプラスチック膜を含む固体物質に付着されるか；
    ｖｉ）滅菌した組成物中であるか；もしくは ｖｉｉ）放射活性標識または蛍光標識を含む、検出可能に標識されるか、である、結合化合物。
16. 請求項１５に記載の結合化合物および以下：ａ）該結合化合物を含む区画；またはｂ）キット中の試薬の使用または処分についての説明書、を含む、キット。
17. 抗原：抗体複合体を産生する方法であって、適切な条件下で霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０／ＩＬ−Ｂ３０組成物を請求項１４に記載の抗体と接触させ、これによって該複合体を形成させる工程を包含する、方法。
18. 請求項１７に記載の方法であって、ここで：ａ）前記複合体が、他のサイトカインから精製されるか；
    ｂ）該複合体が、他の抗体から精製されるか；
    ｃ）前記接触工程が、サイトカインを含むサンプルと行われるか；
    ｄ）該接触工程が、前記抗原の定量的検出を可能にするか；
    ｅ）該接触工程が、該抗体を含むサンプルと行われるか；またはｆ）該接触工程が、該抗体の定量的検出を可能にする、方法。
19. ａ）請求項１４に記載の滅菌した結合化合物；あるいはｂ）請求項１４に記載の結合化合物およびキャリアであって、ここで該キャリアは： ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物である；ならびに／または ｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与で処方される、キャリア、を含む、組成物。
20. 細胞を請求項１に記載の組成物またはそのアンタゴニストと接触させる工程を包含する、該細胞または組織の生理学または発達を調節する、方法。
21. 細胞を請求項１に記載の組成物と接触させる工程を包含し、そして該接触工程がＩＦＮγの産生における増加を生じる、該細胞の生理学または発達を調節する、方法。
22. 請求項２１に記載の方法であって、ここで、前記細胞は、宿主生物体にあって、そして該生物体は増強されたＴｈ１応答を示す、方法。
23. 請求項２２に記載の方法であって、ここで、前記Ｔｈ１応答は以下：ａ）抗腫瘍効果；
    ｂ）アジュバント効果；
    ｃ）抗ウイルス性効果；またはｄ）拮抗するアレルギー効果、より選択される、方法。
24. 宿主生物体中の細胞の生理学または発達を調節する方法であって、該方法は、請求項１に記載の組成物を該生物体に投与する工程を包含し、ここで、前記接触工程は以下：ａ）抗腫瘍効果；
    ｂ）アジュバント効果；
    ｃ）抗ウイルス性効果；またはｄ）拮抗するアレルギー効果、を生じる、方法。
25. 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記接触工程が以下：ａ）ＩＬ−１８；
    ｂ）ＩＬ−１２；
    ｃ）放射線療法または化学療法；
    ｄ）免疫アジュバント；またはｅ）抗ウイルス性治療、と組み合わせられる、方法。
26. 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記アンタゴニストがＩＬ−１２レセプターサブユニットβ１に対する抗体である、方法。
27. 請求項２４に記載の方法であって、ここで、前記接触工程がアンタゴニストと行われ、そして該接触工程がＩＦＮγの産生における相対的減少を生じる、方法。
28. 宿主生物体中の細胞の生理学あるいは発達を調節する方法であって、該方法は、前記アンタゴニストを該生物体に投与する工程を包含し、ここで、前記接触工程は以下：ａ）自己免疫状態；またはｂ）慢性炎症状態、の回復を生じる、方法。
29. ａ）ＩＬ−１２ ｐ４０を含む霊長類ＩＬ−Ｂ３０を発現する工程を包含する、該ＩＬ−Ｂ３０の分泌を増加させる、方法；またはｂ）ＩＬ−Ｂ３０を含む霊長類ＩＬ−１２ ｐ４０を発現する工程を包含する、該ＩＬ−１２ ｐ４０の分泌を増加させる、方法。
30. 請求項２９に記載の方法であって、ここで：ａ）前記増加が少なくとも３倍であるか；またはｂ）前記発現する工程が、ＩＬ−Ｂ３０およびＩＬ−１２ ｐ４０をコードする組換え核酸を発現する工程である、方法。
31. 請求項３に記載の組成物を結合するレセプターについてスクリーニングする方法であって、該方法は、複合体が該レセプターに結合し得る条件下で、該レセプターを発現する細胞に該複合体を接触させ、それにより検出可能な相互作用を形成させる工程を包含する、方法。
32. 請求項３１に記載の方法であって、ここで、前記相互作用が前記細胞中に生理学的応答を生じる、方法。
33. 動物における炎症応答を調節する方法であって、該方法は、該動物中の細胞を治療量の以下：ａ）哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質のアゴニスト；またはｂ）哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質のアンタゴニスト、と接触させる工程を包含する、方法。
34. 請求項３３に記載の方法であって、ここで：ａ）哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質が霊長類タンパク質であるか；またはｂ）アンタゴニストが該哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０に結合する抗体であるか；
    ｃ）アンタゴニストが哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０によって媒介されるシグナルをブロックする抗体である、方法。
35. 請求項３３に記載の方法であって、ここで、前記動物が急性期の炎症応答の徴候または症状を示す、方法。
36. 請求項３３に記載の方法であって、ここで、前記徴候または症状が皮膚組織；肺組織；胃腸組織；または肝組織に見出される、方法。
37. 請求項３５に記載の方法であって、ここで、前記徴候または症状が皮膚組織；肺組織；胃腸組織；または肝組織に見出される、方法。
38. 請求項３３に記載の方法であって、ここで、前記調節が好中球の血小板への成熟を加速する、方法。
39. 請求項３３に記載の方法であって、ここで、前記調節がＩｇＡに対する効果を有する、方法。
40. 請求項３３に記載の方法であって、ここで、前記調節がＩｇＧに対する効果を有する、方法。
41. 請求項３８に記載の方法であって、前記投与が前記アゴニストである、方法。
42. 請求項３９に記載の方法であって、前記投与が前記アゴニストである、方法。
43. 請求項４０に記載の方法であって、前記投与が前記アゴニストである、方法。
44. 請求項４１に記載の方法であって、ここで：ａ）前記アゴニストが哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質であるか；またはｂ）前記動物が炎症状態の徴候または症状を体験する、方法。
45. 請求項４２に記載の方法であって、ここで：ａ）前記アゴニストが哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質であるか；またはｂ）前記動物が炎症状態の徴候または症状を体験する、方法。
46. 請求項４３に記載の方法であって、ここで：ａ）前記アゴニストが哺乳動物ＩＬ−Ｂ３０タンパク質であるか；またはｂ）前記動物が炎症状態の徴候または症状を体験する、方法。
47. 請求項４４に記載の方法であって、ここで、前記投与が以下：ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト；
    ｂ）鎮痛薬；
    ｃ）抗炎症剤；またはｄ）ステロイド、の組み合わせである、方法。
48. 請求項４５に記載の方法であって、ここで、前記投与が以下：ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト；
    ｂ）鎮痛薬；
    ｃ）抗炎症剤；またはｄ）ステロイド、の組み合わせである、方法。
49. 請求項４６に記載の方法であって、ここで、前記投与が以下：ａ）抗炎症性サイトカインアゴニストもしくはアンタゴニスト；
    ｂ）鎮痛薬；
    ｃ）抗炎症剤；またはｄ）ステロイド、の組み合わせである、方法。
50. ＩＬ−Ｂ３０またはそのアゴニストを投与する工程による、記憶Ｔ細胞の生存を誘導する、方法。