HU229416B1 - Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof - Google Patents
Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof Download PDFInfo
- Publication number
- HU229416B1 HU229416B1 HU0202270A HUP0202270A HU229416B1 HU 229416 B1 HU229416 B1 HU 229416B1 HU 0202270 A HU0202270 A HU 0202270A HU P0202270 A HUP0202270 A HU P0202270A HU 229416 B1 HU229416 B1 HU 229416B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antibody
- cell
- cells
- antigen
- protein
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 118
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 110
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 title 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 189
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 61
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 35
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 35
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 34
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 28
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 19
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 19
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 19
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 10
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 10
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 9
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 101100184046 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) mid1 gene Proteins 0.000 claims description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 8
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 7
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 claims description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 5
- 201000002341 thymus lymphoma Diseases 0.000 claims description 5
- 208000009052 Precursor T-Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000029052 T-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011186 acute T cell leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 claims description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 claims 1
- 235000004789 Rosa xanthina Nutrition 0.000 claims 1
- 241000109329 Rosa xanthina Species 0.000 claims 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 claims 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 claims 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 claims 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 104
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 31
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 23
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 18
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 16
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 15
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 15
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 15
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 13
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- -1 GD3 ganglioside Chemical class 0.000 description 10
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 7
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 6
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 5
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 5
- IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N (S)-colchicine Chemical compound C1([C@@H](NC(C)=O)CC2)=CC(=O)C(OC)=CC=C1C1=C2C=C(OC)C(OC)=C1OC IAKHMKGGTNLKSZ-INIZCTEOSA-N 0.000 description 4
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 4
- 102100027286 Fanconi anemia group C protein Human genes 0.000 description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 4
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 4
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 102000000412 Annexin Human genes 0.000 description 3
- 108050008874 Annexin Proteins 0.000 description 3
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 3
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 3
- 230000034994 death Effects 0.000 description 3
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- WURBVZBTWMNKQT-UHFFFAOYSA-N 1-(4-chlorophenoxy)-3,3-dimethyl-1-(1,2,4-triazol-1-yl)butan-2-one Chemical compound C1=NC=NN1C(C(=O)C(C)(C)C)OC1=CC=C(Cl)C=C1 WURBVZBTWMNKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 101100193633 Danio rerio rag2 gene Proteins 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 2
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 101100193635 Mus musculus Rag2 gene Proteins 0.000 description 2
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101150052863 THY1 gene Proteins 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 2
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 229960001338 colchicine Drugs 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 210000000943 fetal thymocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N (3r,4s,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxyhexanal Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CC=O VRYALKFFQXWPIH-PBXRRBTRSA-N 0.000 description 1
- OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 2-[5-[[5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-4-phosphonooxyhexanedioic acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C(C(C1O)O)OC1COC1C(CO)OC(OC(C(O)C(OP(O)(O)=O)C(O)C(O)=O)C(O)=O)C(O)C1O OTLLEIBWKHEHGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 7028-40-2 Chemical compound CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O.CC(O)=O BDDLHHRCDSJVKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002407 ATP formation Effects 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108090000663 Annexin A1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040006 Annexin A1 Human genes 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 244000003416 Asparagus officinalis Species 0.000 description 1
- 235000005340 Asparagus officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000699679 Cricetulus migratorius Species 0.000 description 1
- 101710112752 Cytotoxin Proteins 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000722833 Geobacillus stearothermophilus 30S ribosomal protein S16 Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010018612 Gonorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101001043827 Mus musculus Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101100324550 Mus musculus Smpd1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910052779 Neodymium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150085390 RPM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N Sulfurous acid Chemical compound OS(O)=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 208000000728 Thymus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N alpha-D-ara-dHexp Natural products OCC1OC(O)CC(O)C1O PMMURAAUARKVCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 208000019065 cervical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 208000001786 gonorrhea Diseases 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000004524 haematopoietic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000004678 hydrides Chemical class 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-IGMARMGPSA-N lithium-7 atom Chemical compound [7Li] WHXSMMKQMYFTQS-IGMARMGPSA-N 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000684 melanotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229940105132 myristate Drugs 0.000 description 1
- QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N neodymium atom Chemical compound [Nd] QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004967 non-hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- GHLZUHZBBNDWHW-UHFFFAOYSA-N nonanamide Chemical compound CCCCCCCCC(N)=O GHLZUHZBBNDWHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000001235 sensitizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical group 0.000 description 1
- 230000002992 thymic effect Effects 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 238000003325 tomography Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 210000005010 torso Anatomy 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- HHLJUSLZGFYWKW-UHFFFAOYSA-N triethanolamine hydrochloride Chemical compound Cl.OCCN(CCO)CCO HHLJUSLZGFYWKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Antittsm&r antitestek, fehérjék és alkalmazásuk
A találmány tárgyát antitestek és azok a fehérjék képezik, melyekhez az sssritestek specifikusan kötődnek, továbbá a tumor sejtekhez specifikusan kötődni képes: találmány szerinti anritestek alkalmazása.
Az £718.2,3 sejtvonai egy kiőaozott egér eredetű GD4- CDS- tinmszből. származó T-lsntfoma sejivoual, amelyet eredetileg egy AKk/J egérben talált timusz tumorból izoláltak. Araikor önmagában tenyésztjük: alacsony ssjts&üségnél, az E710.2.3 sem proliferál spontán módon, csak akkor, ha fórból- 12-mirisztát 13-acetáttal (PMA) stimuláljuk. Az. E7I0.2.3 proliferációra stimulálható timuszsejtekkel vagy lépseiíekkei történő érintkeztetésset Azonban az £710..2.3 képes spontán proliferáeióra. amikor nagy sejtsdrilség melleti tenyésztjük PMA vagy más sejtek távollétiébe».. Amikor E71Ö.2.3 sejteket injektálunk szingénikus egerekbe, ezek mist mahgn.áns tumor növekednek a nyirokszervekben és: a timuszban.
A 5104652 lajstromszámú US szabadalom feltár GD3-gangliozid elleni monoklonális antitesteket IL2vel együtt alkalmazó készítményekéi és eljárást rák kezelésére.
A találmány alapját azon monoklonális antitestek fölfedezése képezi, amelyek specifikusan kötődni képesek egy 48 kD moiesnlaíömega fehérjéhez, amely tumorsejtek számos típusának .felületén expresszálödik, de nem kötődik az éreti normál hematopoiezises sejtekhez. Az űj monokiönáiis antitestek képesek a prollfierációt blokkolni és apoptőzist indukálni azon tumor sejtekben, amelyekhez specifikusan kötődnek.
Ezen felfedezések alapján a találmány tárgyát monoklonális antitestek és: ezek antigén-kötő fraginensei képezik, ahol a monoklonális antitestek: (a) fetáíis iiíaoeltákhoz kötődnek; (b) gátolják egy ssjteroiiferáeiójáí a sejthez történd kötődés után; és (c) nem kötődnek éreti timocítákhoz. A monoklonális antitestek ugyanakkor képesek homotípiás aggregációt indukálni egy sejthez történő kötődés nyomán, képesek apopiőzisi indukálni a sejtben, melyhez kötődnek és képesek specifikusan kötődni a következő tumor sejlvonalak közül egyhez vagy többhöz: £718.2.3; RMA-S; CTLL; LE 1.7.4; A28; WEffi-231; PBKÍ01A2; C2.3; Bló; MC57; WOP-3027; 293T.; 143Btk; Jurkat és Cos. Az antitestek jelölhetők is, például kimutatható jelölővel.
Az igényeit oltalmi körön belülinek tekintendők a kővetkező antitestek: az ATCC PTA-377 azonosítószámú hihridéma sejtvonai által termelt DMFIO.62.3 monoklonális antitest; az ATCC PTA-4Ö5 azonositószámó hibridöma sejtvonai által termeit DMFl 0.167,4 monoklonális antitest; és az· ATCC PTA-404 azonosítószámú hlbridóma sejtvonai által termeit DM.FIÖ.34 3Ó monoklonslis antitest.
A találmány leírása feltár olyan monoklonális antitesteket is, amelyek ugyanazon fehérjéhez kötődnek, mint amely fehérjét az alábbi monoklonális antitestek megkötni képesek: az ATCC PTA-377 azonosítószámú hibridöma sejtvonai által termelt monoklonális antitest; sz ATCC PTA-485 azonosítószámú hibrídőma sejtvonai által termelt monoklonális antitest; és sz ATCC PTA-404 azonosítószámú hibridöma sejtvonal által termelt monoklonális antitest. A monoklonális antitest lehet humanizált antitest is,
Egy másik aspektus szerint a találmány ieírásíi feltár mouokkmáiis antitesteket vagy szók antigén-kötő fragmenseít, amelyek specifikusa® kötődni képesek az alábbi hibridöma sejtvonalsk által termek monoklonális antitest által megkötött 48 kD nagyságú fehérjéhez; az ATCC PTA-377 azonosiioszámú hibriáóma sejtvonai· az ATCC PTA-485 azonosítószámú hlbridóma sejtvonai; és az /ATCC PTA-404 azonosítószámú hibridoma sejtvonal.
Egy ismét másik aspektus szerint a találmány leírása feltár kiméra monoklonális antitesteket vagy ezek antigénkötő firagmes.se it amelyek ugyanazon fehérjéhez képesek kötődni, mim az ATCC PTA-377 azonosttó96237-2444/TÁ
-2szá-mú hihridóma sejtvonal, az ATCC PTA-405 azonosítószámú hibridóma sejtvonal vagy az ATCC PTA-484 azöoosítósgteá híbridówa sejtvomd termelte morsoklonális antitest álul megkötött fehérje, ahol a kimét» antitestök masakba fogSafeak nem-humán variábilis régiókat ós a könnyű valamint sefeéx láncok Wk konstans régióit..
Egy ismét másik aspektus szerbit a tzkíimány leírása feltár monoklonális antitesteket vagy ezek antigénkőtő bagmenseit, amelyek ugyanazon epitóphoz kötődnek, mint az ATCC PTA-377 azonosítószámú hibridóma seitvonak az ATCC PTA-405 azonosítószámú hihridóma sejtvonal vagy az ATCC PTA-484 azoíiosltóssátnü hibridóma sejtvomh által termelt monoklonális antitest által megkötött epitöp,
A találmány leírása feltár monoklonális antitesteket vagy ezek antígénkötö tragmeaseít is, amelyek specifikusan kötődni képesek az alábbiakkal jellemezhető fehérjéhez: (i) molekulatömege 40 kD; (ii) expresszálódik a fötális timoeíták felületén; íiii) nem expresszálódik az érett timoeíták felületén; (iv) képes a sejlprollferáoiót blokkolni az antitesthez kötődés következtében; és (v) képes homotípusos aggregáeíóí indukálni az antitesthez kötődés következtében, A monoklonális antitest specifikusan kötődni képes olyan fehérjéhez, amely még a továbbiakkal is jellemezhető: (vi) képes apopíózist indukálni egy sejtben az antitesthez kötődés következtében; és (vii) expresszióra kerül az alábbi tumor sejtvonalak bármelyikének felületén: E? 10.2.3; Rh-íA-S; CTLL; . LB17.4; A20; WBHl-231; PBK101A2; C2J; Blő; MC57; WOP-3Ö27; 293T; 1438tk; ltokat és Cos.
A találmány tárgyát képezik továbbá a találmány szerinti monoklonális antitestek antígénkötö fragmenseí, Az aniigénkölo fragmensek lehetnek jelöltek is, például egy kimutatható jelölővel,
A találmány tárgyát képezik továbbá azon hibrídó.nta sejtvonalak, amelyek a találmány szerinti nrosoklonáíis antitesteket termelik. így például a találmány tárgyát képezi az ATCC PTA-377 azonosítószámú hihridóma sejtvonal, az ATCC PTA-405- azonosítószámú hihridóma sajívön&l és az ATCC PTA-404 azonosítószámú hibridóma sejtvonal.
A leírás feltár továbbá egy lényegében aszta·, fehérjét, amely az alábbiakkal jellemezhető: (í) molekulatömege 40 kD; (íi) expresszáiódik a fötális timoeíták felületén; (Ili) nem expresszálódik az éreti timoeíták felületén; (iv) képes a sejtproííferácíőt blokkolni a találmány szerinti antitesthez kötődés következtében; és (v) képes homotipusos aggregádót indukálni a találmány szerinti antitesthez kötődés következtében. A fehérje még 8. továbbiakkal is- jellemezhető: (vl) expresszióra kerül az alábbi tumor sejtvonslak bármelyikének felületén; £710.2.3; RMA-S; CTLL; LS17.4; A20; WEH1-23Í; PSK181A2; C2.3; B16-; MC57; WOP-3027; 2S3T; I43:8tk; lurkat és Cos; és (vii) képes apopíózist indukálni egy sejtben a találmány szerinti antitesthez kötődés következtében.
'Egy másik aspektas szerint a leírás leltár olyan lényegében tiszta fehérjéket, amelyek kötődtu képesek az ATCC PTA-377 azonosítószámú hibridóma sejtvonal, az ATCC PTA-405 azonosítószámú hihridóma sejtvorsal és az ATCC PTA-4Ö4 azonosítószámú hibridóma sejtvosal bármelyike által termelt monoklonális antitesthez.
A találmány tárgyát képezi továbbá (gv!őgyhalású)készílmény is, amely találmány szerinti monoklonális antitestet és gyógyászatilag elfogadható hordozót tartalmaz.
A találmány tárgyát képezi továbbá a monoklonális antitestek alkalmazása páciensben mmorsejt kimtóatására szolgáló eljárásban, Az eljárás során a páciensből származó seitmintát érrntkeztetjük a találmány szerinti egy vagy több monöhlonáhs antitesttel és kimutatjuk az antitest kötődését a mintlthoz, amikor a kötődés tumorsejt jelenlétére atal a páciensben. /1 tumorsajtekre például szolgálhatnak a következők: timesx eredetű limfóma sejtek, T-sejtes ímnorsejt, B-sejtes limfóma tumorsejt, meianóms tumorsejt, oszíeosznrkőma sejt
-3valsmtó akut T-sejtes leukémia sejt A kimutatandó tumorsejt a páciensben: is tehet. A tumorok kimutatására alkalmazott monokionátis atitiiesieke? jelölhetjük is.
A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti tnonoklonáiss antitestek alkalmazása tuswsejtppoliftráció gátlására szolgáló eljárásban. Az eljárás során a tumorsejteí a találmány szerinti monoklonális antitestek adott mennyiségével érlntkeztetjük, amely mennyiség elegendő a tunrorsejtproliferációjának gátlására.
A. találmány egy másik megvalósítási módja a feltárt snonoklonáiis antitestek alkalmazása sejtben apoptózist indukáló eljárásban. Ax eljárás során a sejtet a találmány szerinti egy vagy több monoklonális antitest adott, mennyiségével érintkeztetek, amely mennyi-ség elegendő, hogy a sejtben apoptózist indukáljon. A sejt az alábbi tumorsejtek bármelyike lehet: íbnnsz eredetű liorföma sejt, T-sejtes tumorsejt, S-sejies limíóm.a tumorsejt, melanóma tomorscjt, oszteoszarkóms sejt valamint akut T-sejtes teakétnia sejt. Á kezelendő sejt lehet fo vúmo vagy itt vívó.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy tumor diagnózisra szolgáló reagenskészlei, amely a találmány szerinti egy vagy több monoklonális antitestet tartalmaz, valammt tartalmazza a használati uiaskási is, A re&genskészlec tartalmazhatja az alábbi bnnorsujtefc bármelyikét; timusz eredetű limfóma sejt, T-sejtes tomorsejí, B-sejtes limfoma tumorsejt, melanótna tumorsejt, osxtooszarkóma sejt valamint akut T-sejtes leukémia sejt.
A találmány tárgyát képezi továbbá egy tumorsejtre irányító ágens is, amely magába foglalja a találmány szerinti egy vagy több monoklonális antitestet, amelyeket mofekularészieihez kemugáihatunk, hogy ezáltal a arolekularészietet egy tumorsejtbez eijtátasssk, Ezekre a m^sfcttteésdetekre példaként szolgálhatnak a következők; anttomor ágensek, eitotoxinok, citoklnek és reporter csoportok.
A találmány egy további megvalósítási módja a találmány szerinti hnnorsejt-eélxó ágens alkalmazása olyan eljárásban, amely szelektív utódon juttat molekularészietet tumersejthez emlősben. Az eljárás során .az emlősnek a találmány szerinti célzó ágenst adjuk be - amely a molekularészlethez kapcsolódik ~ és kellően hosszú időt biztosítunk a célsócélzó ágensnek, hegy a tumorsejtet elege, ahol a célzó ágensben található antitest a tumorsejthez kötődik és így a molektdarészfoieí szelektív módon a totaorsejtte juttatja az emlősben. A ntolekularészletekre példáiként szolgálhatnak a kővetkezők: antitnmor ágensek, eitotoxinok, eitokinek és reporter csoportok,
A találmány tárgyát képezi továbbá egy, a találmány szerinti 40 k.D moleknlatSmegű fehérje Izolálására szolgáló eljárás, Az eljárás s®ráö a. fehérjéi tartalmazó mintát a találmány szerinti monoklonális antitestekkel érintkezteíjnk kellő ideig és megfelelő körülmények között, hogy biztosítsuk a monoktonális antitest/fehérje komplexek kialakulását; amennyiben ezek kialakultak, a «rátából egy vagy több komplexet eltávolítunk és a fehérjét a komplexből kivonjuk, ezáltal a fehérjét izoláljuk.
A leírás szerint az „izolált aukleinsav szekvencia” kifejezés alatt olyan uukleinsav szekvenciát értünk, amely lényegében mentes azon génektől, amelyek a nskleínsav szekvenciát határolják unnak sz élő szervezetnek a gettomjában, amelyben a gén természetes körülmények között előfordul, A kifejezés magába foglal tehát egy rekombináns nokleinsav szekvenciát, amelyet beépíthetünk vektorba, önálló utódon replikálódő piazmidba vagy vírusba, vagy egy prokariöía illetve eukariét& genomi nokieotid szekvenciájába. A kifejezés alatt értünk továbbá .egy elkülönülő molekulát is, mint például egy cDNS, egy genomi ffagmens, egy polhoeráz láncreakció fPCR) segítségévei előállított fragmens, vagy egy restrikciós fiagmens,
A leírás során egy antitest alatt, amely „specifikusan kötődik” egy fehérjéhez olyan antitestet értünk.
-4 amely- egy' fehérjéhez kötődői képes, áe asm ismer fel és nem kötődik más molekulákhoz egy mintában - mint például egy biológiai autóban - mely természetes körülmények között a fehérjét tartalmazza, például tartalmazza a 40 kD fehérjét
A leírás szerint „konzervatív” aminosav szubsztitúcióknak tekintjük azon szubsztitúciókat, amelyekben egy amioosavaí hasonló oldaiiánccai rendelkező: másik aminosav helyettesit. A technika állása szénát már meghatározták azokat az aminosav csaladokat, amelyek hasonló oidsHáneokkai rendelkeznek. Ezek a családok magukba foglalják a báztkns oldaiiánccai rendelkező amiuosavák családját (például lízin, arginin, hlsztidln); a savas oldall&öec&I rendelkező amisosavak. családját (például aszpsragínsav, glaiamínsav); a töltés nélküli poláros oldalláoccal rendelkező amínosavak családját (például glicin, aszparagís, ghjtam.m, szerűt, irsenin, tlnozin, eiszteíu); a nem-poláros oldaiiánccai rendelkező ammosav&k családját (például alatas, valin, leoeln. izoleuesn, prolin, fenikdanm, metiom'n, tríptofán); a béta-elágazó oldaiiánccai rendelkező ammosavak családját (például ·Γοοη1κ, vaku, izoleuesn):; és az aromás oídallánccsi rendelkező sminosavak családját (például tirozin, fersílalaníts, tríptofán, hisztídín). Egy aminosav családba tartozó bármely aminosav alkalmazható a család bármely más tagjának helyettesítésére konzervatív szubsztitúció esetében. A leírás során a „pollpeptid”, „peptid’’ és „fehérje” kifejezéseket feicserélfeetően alkalmazzuk, amikor aminosavakból álló láncra hivatkozunk.
A leírás során egy antitest „asíigénkstő ftaginense” kifejezés alatt az antitest azon: részét értjük, amely képes egy antigénen egy epitőp megkötésére, mint például a 40 kD fehérje, amelyet a teljes antitest megkötni képes.
A leírás során az „epitőp· kifejezés alatt egy antigén egy adott régióját értjük, azaz egy olyan fehérjét, amelyhez egy antitest, kötődni képes és amely képes immunválaszt kiváltani.
A leírás során a „lényegében tiszta” 48 kD fehérje alatt olyan 40 kD fehérjét értünk, amely tömegre számítva legalább 60 százalékos mértékben mentes azon fehérjéktől és a természetes körülmények, között előforduló szerves molekuláktól, amelyekkel természetes körülmények között együttesen fordul elő. Előnyösen a készítmény legalább 75%, előnyösebben legalább 90% és legelőnyösebben legalább 99% mennyiségben tartalmazza a 4Ö kD fehérjét. Lényegében tiszta 40 kD fehérje állítható elő például affinitás kromatográna segítségével a találmány szerinti antitestekéi vagy monokionáirs antitesteket alkalmazva és/vagy fizikai tisztítási módszerek segítségévei,
A leírás során az „izolált” antitest kifejezés alatt olyan antitestet értünk, amely lényegében mentes más természetes körülmények között előforduló szerves molekulától atwlyekkel természetes körülmények között együttesen fordnl elő.
.A leírás szerint egy sejtproi iterációt blokkoló antitest vagy más molekula olyan antitest vagy molekula, amely gátolja a sejtciklust, a sejtosztódást vagy mindkettőt.
A leírás során a „homotípusos aggregácíó” kifejezés alatt egy olyan biológiailag aktív folyatató* értőnk, amelyben azonos típusú sejteket stimulálunk, hogy azok egymáshoz tapadjanak.
A leírás során a „reporter csoport” kifejezés alatt olyan molekulát vagy vegyüleíeí értünk, amely megfelelő detektáló rendszerek vagy eljárások segítségévei könnyen mérhető vagy kimutatható fizikai síiéivé kémiai jellegzetességgel rendelkezik, mint példáéi a hmrmeszesncía, fiuoreszeeneiu, enzimaktivitás, elektronsűrűség vagy radioaktivitás,
Amennyiben másként nem jelezzük, a leírás során alkalmazóit összes technikai és tudományos kifejezés ugyanazzal a jelentéssel rendelkezik, mint amelyet a szakember általánosan ismer a SaiáimáoY által érinteti
-5tudomáuyterüfet(ek)en belől. Bár az itt leírtakhoz hasonló -vagy egyeaértékű módszerek és anyagok alkalmazhatók a találmány megvalósítása vagy kipróbálása során, az alábbiakban leírást adunk, a megfeleld, módszerekről és anyagokról. Felhívjuk a ügyeimet arra, hogy ez itt ismerteiéit anyagok, módszerek és példák csupán illusztrációként és nem korlátozó jelleggel ksrSlnek bemutatásra. A találmány tárgyát képezik olyas antitestek, amelyek egy tumor sejteken expresszíóra kérőié- 40 kD fehérjét képesek felismerni. Az antitestek alkalmazhatók prolíferáció gátlására tumor sejteken és apöptózís indnkálására azon tumor sejtekben, amelyekhez specifikusan kötődnek. Á ialáhsány szerinti monokíosúlis antitestek alkalmazhatók diagnosztikai célokra (azaz. mallgaus sejtek jelenlétének, kimutatására) vagy alkalmazhatók terápiás célra, hogy ezekkel önmagukban kezeljünk tumor sejteket vagy a kezelés során hozzájuk kapcsok untitumor ágenst juttassunk a tumor sejtekhez,
A. találmány további jellemzőit és előnyős megvalósítási módjait az alább következő részletes leírásban és az Igénypontokban mutatjuk be.
Az 1 A-D. ábrákon négy átfolyásom értometríás grafikont mutattmk be, amelyek a 40 kD nagyságó fehérje expresszíőjót mutatják E71Ö.2.3 fi A. ábra), A20 (1B, ábra), jurkai (IC. ábra) és RF33.7Ö (1D, ábra): sejteken ahogyan ez detektálható BMFíG,ő2,3 segítségévei.
A 2.A-D, ábrákon négy átfolyásos citometriás graüktmt mutatunk he, amelyek a 4Ö kD nagyságú fehérje expressziöjáí mutatják be 14 napos fbtáiis timusz <2A, ábra), teljes felnőtt lép <2B. ábra), teljes felnőtt timusz (2-C, ábra) és teljes- felnőtt csontvelő (2D, ábra) sejteken ahogyan ez detektálható DMF10.62,3 segítségével.
A 3A~G, ábrákon hét áttólyásos simmefriás grafikont mutatunk be, amelyek a 4Ö kD nagyságú fehérje expresszióját matatják he stimuláció nélküli, frissen begyűjtött T- és B-sejteken (3A, ábra), aktivált T-sejteken 24 óra után (313, ábra), aktivált T-sejteken 48 éra áfán Í3C. ábra), aktivált I'-sejteken 72 óra után (3D. ábra), aktivált lép eredetű B-sejteken 24 óra után (3E, ábra), akti vált lép eredetű 8-sejteken 48 óra mán (3F.: ábra) és aktíváit lép eredetű B-sejteken 72 óra után (3G. ábra) ahogyan ez detektálható DMF 10.62,3 segítségével,
A 4A-C, ábrákon három vonalas grafikont mutatunk be, amelyek az F7113.2.3 sejtek (4A. ábra), RMA-S sejtek (4B, ábra) vagy RF33.7G sejtek (4C. ábra) spontán prohferáeiójának gátlását mutatják be DMF1Ö.62.3 monokionúlís antitest hatására.
Az SA-i ábrákon kilenc átfeiyásos citemetriás grafikont mutatunk be, amelyek £710.2.3 sejtek apoptózíSának redukálását mutatják a következő esetekben: 1 órás kezelés 1 ug/tnl koncentrációjú DMFlö.62.3 jelenlétében (5A. ábra), 2 órás kezelés 1 ug/ml koncenfráeíójú DMF1Ö.62.3 jelenlétében (58. ábra), 3 órás kezelés 1 pg/mi koncentrációjú DMFIS.62,3 jelenlétében (5C. ábra), 3- órás kezelés hörcsög IgG-vel <5D. ábra), 1 órás kezelés 15 pg/ml koncentrációjú DMFlö.62.3 jelenlétében (SE, ábra), 2 órás kezelés 35 pg/mi koncentrációjú DMF 10.62,3 jelenlétében (5F. ábra), 3 órás kezelés 15 pg/tnl koncentrációjú DMF1Ö.62.3 jelenlétében (5G, ábra), 3 órás kezelés hörcsög lgG-ve.í (51-i ábra) és antitest nélkül (51, ábra).
A találmány tárgyát képezik antitestek, például monoklorsális antitestek, amelyek specifeknsan kötődnek a 40 kD nagyságú fehérjéhez. A 40 kD nagyságú fehérje egy új sejtfelszíni fehérje, amelyet különböző fajokban, beleértve embereket, majmokat és egereket, számos tipnsú tumor sejt expresszái, amelyek magukba foglalják a következőket: timusz límfóma, T-sejtes tumor, B-sejtes límfóma, melanéma, oszteoszatkóma és akut T-seítes leukémia. Az antitestek nem mutatnak reaktivitást aowái félnőtt hemopoietikus sejtekkel. A találmány szerinti antitestnek a 40 kD nagyságú fehérjét expresszáió sejthez kötődését kővetően a sejtprobferádója. megáll és apoptőzisba kerül A 40 kD nagyságú fehérje egy új sejthalált kiváltó fehésje azon megfigyelés alapján, hogy
-ft amikor monoklonáiís antitestek kötődnek éhhez a fehérjéhez egy sejt felületén, a sejtek apoptózísbe kerülnek.
Hárem hibridőma sejtvonalaí - amelyek a 4© kD nagyságú fehérjéhez kötődő monoklonáiís antitesteket termelnek - helyeztünk letétbe az ATCC-nál -a következő letéti számokos: PTA-377 {DMFÍö.62.3}, PTA-405 (DMF1Q, lé?,4) ésETA-404 (DMF1Ö.34.36).
A bírás szerinti antitesteknek számos alkalmazása: lehetséges. Az antitestek alkalmazhatóak in viiro diagnosztikai vizsgálati eljárásokban a rosszindulatú sejtek jelenlétének meghatározására emlős - például emberi - szövetekben. Az antitestek úgyszintén alkalmazhatóak tumorok lokalizálására te vten, amelynek során a páciensnek a leírás szerinti izolált, repörter csoporttal jelölt antitestet beadjuk. Az. antitesteknek továbbá még terápiás alkalmazása is lehetséges. Továbbá, az antitestek alkalmazhatóak tantorok kezelésére vagy amitumor ágensek célba juttatására.
Antitestek előállítására szolgáló módszerek:
Az antitestek immunglobulin molekulák illetve immunglobulin molekulák immmmlógíaiiag aktív részel immunglobulin molekulák fragm.enseíre például szolgáí'nairtak a következők: antitest fragmensei, mint például: F(ab) és F(sh’)j részek, amelyek specifikusan kötődnek a 4Ö- kD nagyságú felségéhez. A öagmensek előáliíthatóak az antitest enzixnmel, például pepszinnel való kezelésével. A monokíonáíis antitest vagy nmooklonális antitest készítmény kifejezések alatt olyan antitest molekula populációt értünk, amelyek csak egyetlen típusú autigénkőtőbelyet 'tartalmaznak. amely polipeptid vagy fehérje meghatározott epitópjával képes immunoiógiallag reagálni. Egy monokíonáíis antitest készítmény így általában egyetlen kötődési affinitással rendelkezik az általa speciálisan megkötött fehérjére nézve.
Immunizálás:
A 40 kD nagyságú fehérje elleni poliklosábs és tsonoklonáiís aui testek előáliíthatóak a megfelelő egyed (például nyál, kecske, egér vagy más emlős) megfelelő itmrmnogént tartalmazó immtmogén készítménnyel történő immunizálásával, Az immtmogének magukba foglalják a kővetkező, halhatatlanná tett sejtvonaiakbói származó sejteket: E710.2.3, RMA-S, CTLL, 1817.4, A2Ö, WEHÍ-231, PBKIfil A2, C2.3, Sió, MC57, WOP3027,293T, 143Sík, Jurkat vagy' Cos, ezekről a sejtvonalakról kimutatták, hogy mindegyikők expresszálja az éj 40 kD nagysága fehértói.
Egy más módon eljárva, az ummmogéti lehet maga a megtisztított vagy izolált 40 kD nagyságú fehérje. Például a PTA-377, PTA-405 vagy PTA-484 ÁTTC letéti számmal jelölt hibridőma sejtvonalak által termelt monoklonáiís antitest alkalmazható a teteje izolálására a fehérjét termelő sejtből, mim például a következőkből:: E71Ö.2.3, RMA-S, CTLL, LB17.4, A2Ö, WEHI-231, P8KIÖ1A2, C2.3,. 816, MC57, WÖP3827, 293T, í43Btk, Jutkát vagy Cos affinitás kromatográíía, iomwnpreeípiiáció vagy a technika állása szerint más jól ismert eljárások alkalmazásával.
?kz: «gyedben termeit antitestek ezután szkrSnelbetŐek annak tneghaiározására, hogy az antitestek kőtödnek-e a íötslis iúnecifákhöz, míg nem kötődnek a telnöií timoeiiákhoz, Az ilyen antitestek ezután tovább szkrlneíhetóek az itt ismertetett vizsgálati eljárások alkalmazásával. Például, ezeket az antitesteket megvizsgálhatjuk annak meghatározására, hogy gátolják-e azon sejtek proliferácjóját ameiyek'nez kötődlek; indukáljak-e a sejtek homotipusos aggregáciőjáí; és/vagy índnkálják-e azon sejtek apoptözisát, amelyekhez kötődtek, A leírás során megfelelő eljárásokat ismertetőnk a kívánt jellemzőikkel rendelkező antitest azonosítására. Például, egy antitest azon képessége, hogy sejthez történő kötődés esetén sejthalált indukál-e, sregvizsgálbató kereskedelemben beszerező,eíő reagenskészletókkei, például az R&D cégtől (Minneapoiis, MM) vagy a
ΊPkarmíngen cégiéi (San Diego, CA).
Az mimunogén egységdézisa. (aaz például a tisztított fehérje, a fehérjét expresszáló tumor sejt vagy a rekombínáns módon expresszáft 40 kD nagyságú fehérje) és az immunizáló eljárás függ az izranomzálandó egyedtől, annak bmcxunáhapotátói és az egyed testsúlyától. Az ügyedben kiváltóit immun válasz erősítése céljából az ímnnmogéut beadíuújak adjavánssal együtt mást példán! & Ereund-féle teljes vagy nem telles adjavánssai. Az egyed immunogésmei történő Immunizálása az előbb leírtak szerint pohklonáfis antitest választ vált ki. Az irmnnnizáilt ggyedben az antitest liter időbeli változását hagyományos eljárásokkal, mint például smmobíhzált antigént ~ például az ismerteiéit 40 kD nagyságú fehérjét alkalmazó - ELíSÁ vizsgálatokkal követhetjük.
A 40 kD nagyságú fehérje elleni antitestek előállításának más módjai magukba foglalják humán immunglobulin géneket expresszáló traattszgéttíkas egerek alkalmazását [lásd például Wood és mtsai,: WO 91/00906 azonosítószámú PCT publikáció; Kueherlupsti és mtsai.: WO 91/10741 azonosítószámú PCT publikáció; vagy Lonbetg és torsai,; WO 92/83918 azonosítószámú PCT publikáció]. Egy más módon eljárva, előállíthatunk humán monoklönális antitestekéi úgy Is, hogy antigént juttatunk be ímmunhiányos egerekbe, amelyekbe humán antitesteket előállító sejteket vagy szöveteket ültettünk be (mint például borsán csontvelő sejteket, perifériás vér {ímfacftákst uperipherai hlöod lymphocytes”, PBE), humán embrionális ayirokcsomő szövetet vagy' hsmaíopoietikos őssejtekéi). Az ilyen eljárások magukba foglalják az antitestek termeléséi SCIDhu egerekben [lásd Ducbosal és mísak: WO 93/05796 azonosítószámú PCT publikáció; 5,411,749 lajstromszámú US szabadalom; vagy McGune és mtsai.:: Science 291 1632 (1988)]; vagy Rag-l/Rag-2 hiányos egerekben. Humán antitesi-immuuhiányos egerek a kereskedelemben szintén: beszerezhetőek. Például Rag-2 hiányos egetek a Taconíe Tartus cégtől (Germaatown, NY) szerezhetőek: be.
Ribrídómák:
.Monoklonális .antitesteket az egyed immtmogénnel történő immunizálásával állíthatunk elő. Az: numuíuzáiást követő megfelelő időben, azaz stsikor az antitest titerek megfelelő magas szinten varrnak, az antitest termelő sejtek az immonizáll állatból begyujthetök és standard eljárások segítségéved monoklonális antitestek előállítására felhasználhatóak. Például az antitest termelő sejteket fuzionálhatjuk standard szomatikus sejt: fúziós eljárásokat alkalmazva halhatatlanná tévő sejtekkel mint például mielóma sejtekkel, hogy így Itibridőma sejteket állítsunk elő. A. technika állása szerint az ilyen eljárások jól ismertnek tételezheíök fel és humán monoklonáiis antitestek előállítására és magúkba foglalják például a hibridéma technikái, ahogy azt eredetileg Kohlét és Milsteín kidolgozta [Kohisr és Mtisíein: Natúré 256 495 (1975)], a humán S-sejt hihridótna technikát [Kozfear és mtsai.: Immimoiogy Today 4 72 (1983)] es az EBY-hibritióma technikát [Colé és mtsai.: Monoclonal Ánfibodíes suti Cancer Therspy, Alán R, láss, Inc. 77-96. oldalak (1985)], A technika állása szerint a monoklönális antitest blbrítiómák előállítására szolgáló eljárások jól ismertnek tételezheíők fel.
Monoklottátis antitestek úgysziaíéu eiőállhhatöak antitest termelő sejtek, mint például spienodták begyűjtésével humán immunglobulin géneket expresszáló transzgétn'kus egerekből, amelyeket a 40 kD nagyságú fehérjével immunizáltunk. A splenoeitákat halhatatlanná tehetjük humán ntielómákkal történő fúzióval vagy az Epsíein-Barr vírussal (EBY) végzett transzformációval, Ezek a hibritiómák elöálliíhatóak a technika állása szerint isméit humán B-sejt vagy EBV-hibriáóm technikákkal [lásd például Boyie és mtsai.: 8 614 984 lajstromszámú európai szabadalmi bejelentésj.
Λ 40 kD nagyságú fehérjéhez specifikusan kötődő monoklönális antitestet termelő hibrídöms sejteket a
-khlbridorna tenyészet felhlószőjáaak szkrinelésével matathatjuk id, így például olyan antitestek kiválasztására szkrmeltlsk, amelyek specifikusan kötődnek az immobíiizáh 40 kD nagyságú fehérjéhez, vagy as Rt ismertetettek szedni vizsgáljak az antitesteket annak meghatározására, hogy .rendelkeznek-e az antitestek a kívánt tukddfönságokkai, mint például a sejtproHferáciét gátló képességgel.
Á leírás szerinti szkrineíés! eljárásokban pozitívnak talált monoklonális antitesteket tenuelö hibndema. sejteket olyan körülmények közhit, és annyi ideig tenyésztjük táptalajban, amely tekéiévé teszi, hogy a hibridóma sejtek a teuyésztáptalajba válasszák ki a monoklonális antitesteket, így teljes antitesteket állíthatunk elő. A technika állása szedni ismédnek tételezhetek fel szövetíetryésztésl eljárások és a hibridóma sejteknek megfelelő tenyésztáptalajok [lásd példási: Kennetk: Monoclonaí Antihodles: A New Dímenslan In Bíoíogical Analyses, Plenum Pnhlishiug Corp.., New York, New York (19§Ö)j. Ezután az antitestet tartalmazó kondicionált hibridónra tenyészet fslülúszöja begyüjthető.
Rekombináns kombinatoriáiís antitest któtttár:
A monoklonális antitestek megszerkeszthetök rekombmáss konthinatoriálís immunglobulin klöniár elkészítésével és a klóntár szkrineíéséveí a 40 kD nagyságú fehérje segítsógéveL Fág display klómárak előállítására és szkrlnelésére szolgáló reagenskészletek s kereskedelemben beszerezhetőek {'például a Pharmacia „Recombiuaut Phage Antibody System”. katalógus száma: 27-94ÖÖ-Ö1 és a Stratageae SuríZAP „Phage Display’' reagenskészlet, katalógus száma: 2406121, Röviden összefoglalva, az antitest klóntsrat szkrfneijük olyan filgok azonosítása és izolálása érdekében, amely fágok a 46 kD nagyságú fehérjéhez specifikusan köíödő antitestet expresszáinak. Egy kiviteli példa szerint a klóntár elsődleges szkdnelését az immohillzált 40 kD nagyságú fehérjével végszzök,
A sztónelésí követően a display tagot izoláljuk és a kiválasztott antitestet kódoló nokteinsavat visszanyerjük a display tagból (azaz a fág genomjáhól) és a technika állása szerint jól isméd rekombináns DNS eljárásokkal más expressziós vektorokba szubklőnozzuk. A uoklemssv tovább módosítható (például további immunglobulin doméneket, mint például további állandó régiókat kódoló: nukteínsavhoz kapcsoljuk) és/vagy gazdasejíben expresszálható,
Kiméra és humanizált antitestek:
Antitestek rekombináns formái ~ mint például a kiméra és humanizált antitestek - úgyszintén előállithatók, hogy minimalizáljuk a humán páciens reakcióját az antitestre. Amikor nem-humán egyediekben termelt vagy nem-humán antitest géttsk expresszié jóból származó antitesteket alkalmazunk terápiásán emberekben, ezeket kölönbőző mértékben idegenként ismeri fel a páciens immunrendszere és a páciensben immunválaszt válthatnak ki. Ezen immunreaketó minimalizálására vagy eliminálására az együk megközelítés lehet a kiméra antitest származékok előállítása, szűz olyan antitest molekulák előállítása, amelyek egy nemhumán állati variábilis régiót és egy humán konstans régiót kombinálnak. Az ilyen antitestek megtartják az eredeti monoklonális antitest epitóp kötő speciíitását, de etnhereknek beadva kevésbé Immunogének lehetnek és ennek következtében a páciens feitetefezhetóes jobban tolerálja ezeket.
Kisnéru munoklonális antitestek elóáliithatosk & technika állása szerint ismeri rekombináns DNS eljárásokkal. Például a nem-humán antitest molekula konstans régióját kódoló gént humán konstans régiót kódoló génnel helyettesítjük [lásd Robinson és mtsai.: PCT7US8Ö/022Ő9 Sajstromszámú PCT szabadalmi publikáció; Ákira és mtsai.: Ih4,íh7 lajstromszÁmá európai szabadalmi bejelentés; vagy Tanlguohi: 171,496 lajstromszámú, európai szabadalmi bejelentés]. Egy kiméra antitest tovább „tenastzálhate*’ oly módos!, hogy
- 9variábílís régié antigén kötésben részt nem vevő részeit humán variábilis régiókból származó egyenértékű részekkel helyettesítjük, Mosrison és Öí általánosságbajs ismertetik a „humanizált” iáméra antitesteket [Mormon: Science 22$ 1202 (1985); Oi és mtsaí.: BioTechniqnes 4 214 (1986}]. Az ilyen eljárások magukba foglalják a legalább egy nehéz vagy könnyű láncból származó immunglobulin variábilis régió részét vagy egészét kódoló rftikíeirsssv szekvenciák izolálását, mattipniálásáí és expresszi-óját. A humanizált kunéra antitestet kódoló eSNS vsgy ennek egy Sugtnense szálán megfelelő expressziös vektorba kódolható. Megfelelő „humanizált” antitestek más módos eljárva is: elöáiílfhatőak komplementaritást meghatározó régió (CDS.) szubsztitúcióval [lásd 5,225,539 lajstromszámú US szabadalom; Jones és mtsak: Natúré 321 552 (198Ő); Verhoevan és misat; Science 239 1534 0 988) valamint Beidler és mtsak: J. immunoi. 141 4053 (1988)1,
Epitóp térképezés szintén alkalmazható „humán” antitest polípeptid dimer előállítására, amely megőrzi a 40 kD nagysága fehérjére specifikus hörcsög antitestek kötődési speciíitását, amely fehérjét az ATCC PTA-377, ATCC PTA-4Ö5 vagy ATCC PTÁ-4Ö4 azonosítószámú hibridőmák termeltek. Röviden összefoglalva, antigénhez specifikusan kötődő öetn-hutuán variábilis régiót (VH) és humán konstans régiót (CH 1) kódoló gént expresszáhmk & eöö-ban és humán VkCk gének fág: klóníárával megfertőzzük. Ezt követően antitest íragmen» seket mutató tagokat szkrineihnk a 4Ö RD nagyságú fehérjéhez történő kötődésre. A kiválasztott barnán V'a géneket újra klónozzuk a VXO. láncok expresszi ójára és ezeket a láncokat tartalmazó £, coA sejteket humán VHCH.I gének ing kióntárúval fertőzzük meg ős a kíóntárat szkrtnelésí eljárások sorozatának vetjük alá antigénnel bevont csöveket alkalmazva [lásd Hoogenbootn és: rntsaí,: WO 93/06213' azonosítószámú PCT publikáció].
Antitest fragmensek:
A találmány tárgyút képezik új ant Itemor m-titestek és ezek bármely ffagmense, amelyek tartalmazzák a találmány szerinti antitest aktív kötő régiósát, mini például a Pab, P(ab’)2 és Fv fragmensek. Ilyen feagfnonsék előáílíihatóak az antitestekből a technika állása szerint jól ismert eljárások alkalmazásával [lásd például Rousseau» és mtsaL.: Methoás Enzymöí. 121 663-669. oldalak, Ácadetsic Press (1986)), Például a P(ab'>2 fragmonsek elöáliiíbafoák az antitest molekula pepszlnes emésztésével és az Pab fragmensek előáílíihatóak a PCsbjb feagmensek düszulfid in'djainak redukálásával.
Antitestek alkalmazhatósága:
A leírás szerinti antitestek számos alkalmazása Ismert, Az antitestek ré vhre alkalmazhatóak diagnosztikai célokra rosszindulatú sejtek jelenlétének kimutatására humán szövetekben. Az eljárás során megvizsgállak a szövetmintát a 4ö kD nagyságú fehérje jelenlétére. Például a szövetmintái az ATCC PTÁ-377 azonosítószámú, ATCC PTA-4Ő5 azonosítószámú vagy az ATCC ΡΤΑ-4Θ4 azonosítószámú hibrídöms sejtvonal által termelt monoktónáfis antitesttel éríntkeztetjük és meghatározzuk, hogy as antitest képes-e specifikusan kötődni a szövetmintában található sejtekhez. A kötődés tumor sejt jelenlétére utal. Egy más módon eljárva, sz antitest alkalmazható vérminták szkrínelésére Is, 'amikor a felszabaduló antigénre vizsgálunk.
Az antitestek úgyszintén alkahnazhatóak tumor lokalizálására ó? vré<> úgy, hogy a páciensnek a taláknány szerinti izolált antitestet beadjuk, amelyet kimutatható szignált adó reporíer csoporttal jelöltünk meg. A köfot: antitesteket ezután: kimutathatjuk külső szeinagrátiávai, emissziós tomográfiával vagy mdlomskleáris szkenneléssel. Az eljárás alkalmazható rák állapotának meghatározására páciensben a betegség kiterjedésének tekintetében valamint a kezelés hatására bekövetkező változások követésére.
Az antitesteknek hasonlóképpen még terápiás alkalmazása is lehet. Az új antitestek alkalmazhatóak
- lötumorok kezelésére, mivel az antitest speeífikas kötődése a tumorsejíhez szí eredményezi, hogy a sejtproliferációja leáll és a sejt elpusztul.
Az antíiesteknek további terápiás alkaltuazása is lehet, mid például célba juttató ágensek, melyek a tumorokhoz szállítják az. antitumor ágenseket. Az ilyen antíiumor ágensek magúkba .foglalhatnak kemoterápiás gyógyszereket, toxinokat, inantmoiógíaí válasz mődesítőkat, enzimeket es radíoízotőpokat
Kimutatható j elölök:
A 40- kD nagyságú fehérjével reagáló antitestek alkalmazhatóak diagnosztikai célokra, például a páciensben tumor jelenlétének klnmiatására. A kimutatás megkönnyíthető az antitest detektálható jelölőhöz történő kapcsolásával. Detektálható jelölökre például szolgálhatnak, a kővetkezők: különböző enzimek, prosztetlkus csoportok, íluoreszoens anyagok, lumineszcens anyagok, biolummeszeeos anyagok, eiefaronstirüségi jelölők, MR1 jelölök és radioaktív anyagok. Megfelelő enzimekre például szolgálhatnak a kővetkezők: torma peroxsdáz, lúgos foszfeiáz, β-galaktozidáz vagy acetil-kolm-észteráz; a megfelelő proszfetikus csoport komplexekre például szolgálhatnak a kővetkezők: »ztrepiav$dm/%ioím és avldiafoíotm rendszerek; a megfelelő fluoreszcens anyagokra például szolgálhatnak a kővetkezők: umbelliferon, fSuoreszeein, íluoreszeesn-izo-tloeianát, rodamin, di-kloro-triazíníi-amln-fiuroeszeein, danzil-kforid vagy flkoerítrin: lumineszcens anyagra például szolgálhat a lemmel, a biolumineszcens anyagokra példáni szolgálhatnak a kővetkezők: ioeiferáz, luciferin és aequorm; ás a megfelelő radioaktív anyagokra például szolgálhatnak a kővetkezők: i25l, *Ml, 5$Sés5R.
Antitestek mint célba juttató ágensek:
A leírás szerinti antitestek és antitest fragmensek molekula részegységhez kosingálbatöak és az antitest alkalmazható arra, hogy a molekula részegységet a 40 kD nagyságú fehérjét expresszáló tumor sejt helyéhez irányítsa. A részegységekre például szolgálhatnak a következők: toxinok, rsálonuklídok és kemoterápiás ágensek: melyek a tumor sejtek elpusztítására alkaímazltatöak, vagy a részegységek lehetnek olyan képalkotó ágensek, amelyek a 40 kD nagyságú fehérjét expresszáló tumorok helyének és méretének meghatározására alkalmasak. Emberekben a részegységet a tumorhoz irányító antitestek előnyösen monoklonálís antitestek, mini például humanizált monokionális antitestek.
Az antitestekéi fuzionálhatjuk a részegységhez, például a toxlnhoz, akár oly módon, hogy a részegységet és az antitestet hibrid fehérje molekulái kódoló fuzionált: gén kódolja, vagy akár konjugáció segítségével, mint például egy nem-peptíd típusú kovalens kötéssel, azaz például nem amid típusú kötéssel, amely kötést a külön előállított antitest ás a részegység összekapcsolására alkalmazzuk.
A leírás szerinti antitestet fuzionálhatjuk még másik antitesthez Is, amely imnmasejtekre specitífeis, és az immunsejteket a tumor elpusztítására stimulálja.
Toxinok:
A találmány megvalósítása során jól alkalmazható, a találmány szertári antitesttel konjugált toxln molekulák magukba foglalják a peptid toxiaokaí, amelyek jelentős mértékű ekoioxikns hálást mutatnak, amikor sejtes beiül találhatók. A íosinofcra példáni szolgálhatnak oifotoxinok, metabeíizmust megzavaró anyagok (inhibitorok és aktíváforok), amelyek az enzímaíikus akíivást teszik tönkre és ezáltal a tumor sejteket elpusztítják; valamint radioaktív molekulák, amelyek az etíékfór rész meghatározott sugarú környezetében minden sejtek elpusztítanak. Metabollzmus zavaró lehet egy olyan molekula - például enzim vagy cltokin amely úgy változtatja meg egy sejt metabolizmnsát, hogy annak természetes fenkeiőia megváltozik.
- 11 Általánosságban a toxxs kifejezés alatt bármilyen: olyas hatóanyagot értünk, amely egy tumor sejt. pusztulását okozza.
Számos peptíd taxái rendelkezik általános ««kariőta receptor kötő deménnel, ezekben az esetekben a toxist módosítani kell, hogy megakadályozzuk azoknak a sejteknek az elpusztítását, amelyek nem hordozzák a kívánt fehérjéi (azaz például megakadályozzuk azoknak a sejteknek az elpusztítását, amelyek nem hordozzák a 40 kD nagyságé fehérjét, de rendelkeznek a módosítatlan toxin receptorával). Az ilyen módosításokat úgy kell elvégezni, hogy a molekula cítotoxikus funkciója megmaradjon. A potenciálisan alkalmazható taxiitok magukba foglalják - nem korlátozó érteleinken - a következőket: díiterla toxín, kólóra toxtn, nem, O-Shiga-szerü toxin (SLI'-I, SLT-H, SLT-Πν), LT toxin, C3 toxin, Sbiga íoxia, szamárköhögés toxin, tetanusz toxm, Asm/offt£»w exotoxin, aíorin, szaponln, mudeccin és gelanm. További soxinok lehetnek a kővetkezők: tumor nekrozis alfa faktor ffNF-o) és límíotoxin (LT). Egy további toxin - amely rendelkezik antltumor aktivitással - a gamma eal.ieheamkin~i, egy dlént tartalmazó antitumor antibiotikum. amely jelentős mértékű hatékonyságot mutat tumorokkal szemben [Zein és mtsai: Science 24i) ί 198 (1988)].
Például diftéria toxin konjugálbató a leírás szerinti antitestekkel. A diftéría íoxint - amelynek szekvenciája ismert ~ .Marphy ismerteti részletesen (Murphy: 4,075,382 lajstromszámú US szabadalom.]. A Ce/yneóaefezéíe» atptekertee által kiválasztott természetes eredetű diftéria toxin. molekula több funkcionális áoménbői áll, amelyek a molekula antino-termmális végétől indulva a kővetkezőképpen jellemezhetöek: enzimatikusan-áktív A-fragrnéns (Glyi~Argi93 aminosavak) és B-fragmens (Sert^-Sertj;, aminosavak), amely tartalmaz egy irunszbkáciős domént és egy általános sejtkötö doraént (475-535. aminosavak).
Toxinok és antitestek kapcsolódása:
Az úniitesi és a toxin részegység összekapcsolható több módszer bármelyikével. Ha a vegyületet fuzionált gén expressziójával állítjuk elő, egy pepiid kötés biztosítja az összeköttetés a citotoxin és az antitest között. Egy más módon eljárva, a toxiat és az antitestei elöáilííbatjuk külön és később összekapcsolhatjuk őket egy nem-peptld típusú kovalens kötés segítségével. Például a kovalens kötés lehet diszulfíd kötés. Ebben az esetben az ezt az antitestet kódoló DNS-t módosíthatjuk hagyományos eljárásokkal ágy, hogy egy extra elsztein kodont tartalmaz»».
Diszulfíd köféses kapcsoláshoz a tox.ia molekulát is derivatizdijuk egy szutSíidril csoporttal, amely reagál a módosított antitest e.isztemjével. Pepiid toxinok esetében ez a kapcsolás megvalösidtató egy eiszteiu kodon beillesztésével a toxiní kódoló DNS szekvenciájába. Egy más módon eljárva, szilárd fázisú poíipephd technikák alkalmazásával építhetünk be egy szulíhidní csoportot, akár önmagában, akár egy cisziein aminosav részeként. Például Hiskey ismerted szuíöhdril csoportok bejuttatását peptiáekbe (Riskey: Pepildes 3 13? (1981)].
A derívatizálást elvégezhetjük még a Bacha ás munkatársai által leírt, egy peptid hormoa derivatizálásánál alkafetazon eljárás szerint is (Sachs és mtsaa.í 4,468,382 lajstrornszámd US szabadalom]. Messen és munkatársai ismertették a szulíhídríi csoportok bejuttatását fehérjékbe fMaasen és mtsai.: Eur, 3. Bíoohem. 134 32 (1983)]:. Miután a szükséges szül.rhiddl csoportok jelen vannak, a ciioioxlni és az antitestet megtisztítjuk, mindkét kéntartalmú csoportot redukáljuk, a citoíoxiot és az antitestet összekeverjük (körülbelül 1:5 aránytól 1:20 arányig) és szobahőmérsékleten hagyjuk, hogy a diszulfíd kötés kialakulása teljesen véghemenjen (általában 20-30 perc). Á keveréket ezután foszfáttal pufferőit fiziológiás sóoldat ellenében dializáljuk, hogy a nem reagált antitest és toxin tnolekulákat eltávolitsuk. SephadexA kromafográílát vagy más hasonlót alkalmazunk 3 kívánt íoxui-nntitest kosjugátum vegyületek méret alapján történő elválasztására a texl-s-toxto és antitest-antitest kenjagátumektél.
Immunválasz modalátörok:
Az antiiumor részegység az immunrendszert befolyásolhatja oly módon, hogy lokálisan -aktiválja illetve gátolja a test ImmunrendszeréL Például cítokínek - azaz llmfokmek mint például az ik-2 - egy íummhoz eljuttatva a eítotosdfais T-limfociták vagy természetes eredetű őlósejtek proliferáeiójáí válthatja ki a daganat környezetében.
Radioaktív molekulák:
A részegység vagy reporter csoport lehet radioaktív moleknla is, például radionukleotid vagy egy úgynevezett szeazstízáló molekula, azaz olyan prekurzor molekula, amely bizonyos körülmények hatására radioaktívvá válik, mint például a bor mikor alacsony energiájú nentrensagárzásfea korúi, az. úgynevezett „bár neutrotíbeíogásos terápia” (ÓNCT) során, [Rartb és mtsai,; Seientifie American I990, 1.00 (1990)]. Az ilyen radioaktív eífekíor részekkel rendelkező vegyületek egyaránt alkalmazhatóak tenorsejfok prolifemciójánuk gátlására, valamint a tamersejtek jelölésére képalkotás céljából.
A radioankbdok egyetlen atomból átló radioaktív molekulák, amelyek α, β vagy γ részecskéket bocsátanak ki. Az ttl in-részecske kibocsátók előnyösebben alkalmazhatók, mint a β vagy y részecskéket kibocsátók, mivel sokkal magasabb energiájú emisszióra képesek rövldebb távolságra, így hatékonyabbak, mert a normális szövetbe jelentősebb behatolás és károsodás uem történik. Megfelelő «-részecskéket kibocsátó radionuklidok magukba foglalják a következőket:?! lAt,2 “Pb és ?í!Bí.
A radioaktív molekulát erősen az antitesthez kell kölni:, akár közvetlenül vagy akár biihnkciós keiátképzés útján. Nem szabadj hogy ez a. kelát kioldódást engedjen és így a radioaktív molekula korai sn v:w fel-szabadulása jöjjön létre (Waldmunn: Science 252 1657 (1993)], A BMC!' eljárás jelen találmányhoz történő adaptálása érdekében a bór egv stabil izotópját, például a bör-lö izotópot választjuk antitesor részegységnek illetve .a vegyület efoekíor részének, .A bőrt az antitest a tumor sejthez szállítja és & bőr a tenor sejten vágy sejtben koncentrálódik .az antitest tenorsejtkez történő specifikus kötődése következtébe». A megfelelő mennyiségű bőr felhalmozódására kellő időt hagyva a tumorról képet alkotunk és alacsony energiájú nénire® nyalábbal besugározzuk, a neutronok energiája körülbelül Ö.Ö25 eV. Míg ez a neutron besugárzás önmagában kevés kárt okoz a tumort körülvevő egészséges szövetben vagy magában a tumorban, a bór-lö (például egy tumor sejt felületén) befogja a neutronokat, így instabil izotóp, a bőr-II alakul ki. A bör-11 azonnal hasad, litium-7 magokra és roppant .nagy, kőráibelúl 2,79 millió eV energiájú «-részecskékre. Ezek a nehéz részecskék a sugárzás nagymértékben halálos, de erősen lokalizált formáját képviselik, mivel a részecskék által megtett át hossza csak körülbelül egy sejt átmérőnyi (1Ö mikron).
A számítások azt mutatják, hogy egy tumor sejt elpusztításához körülbelül 1 milliárd bór atom szükséges négyzetcentiméterenként 1ί)!*-Ι0ί5 neutront tartalmazó termálls ueutnonáramtás mellett, hogy az «.-részecskék által termelt sugárzás meghaladja a nitrogén és hidrogén atomok neutron beibgásos reakciói által termelt báltér sugárzást.
Képalkotó molekula részegységek;
Az leírás szerinti antitestek specifikusan kötődnek a 4Q kD nagyságú tehénéhez és igy jói alkatomhatőak humán tumorok kimutatására is, Egy ilyen megközelítés esetén a tenorokat to vívó mutatjuk ki tenor képalkotó technikákkal olyan antitestek alkalmazásával, amelyeket megfelelő részegységgel vagy reporter
- η csoporttal jelöltünk meg, például olyan, képalkotó reagenssel, amely kimutatható jelet bocsát ki. A technika állása szerint jól ismertek képalkotó reagensek és eljárások antitestek jelölésére az ilyen reagensekkel [lásd példánk Wensei és Meares: Rádió Imtnwaoimagbg and Radtoimrm.inoth«rapy, Elsevler, New York (1983); Coicte és mtsai:,: Mcth. Enayaroi. 1.21 802 (198őjj. A jelölt antitestekéi kimutathatják megfelelő eljárás segítségévek mint például mdlomikleárls szkenneSéssel [lásd példánk Sradweil és mtsai.: 'Monodénál Antibod-iss fór Csneer Detection and Therapy, Satdwin és mtsai. (szerk.), 65-85. oldalak, Acaáetnic Press (1985)),
Bejuttatás:
A leírás szerinti antitestek beadhatnak egy páciensnek - például állatnak vagy embernek, - hogy képet alkossunk tumorokról vagy kezeljük a tumorokat. Az antitestek beadhatosk .önmagukba»· vagy keverékben, például; gyógyászatliag elfogadható excipiens vagy hordozó (mint például fiziológiás sóeldat) jelenlétében. Az excipienst vagy hordozót a bejuttatás módjának és útjának megfelelően választjuk ki. Megfelelő gyógyászatliag elfogadható hordozókat ismertet a Remmgton’s Fharmaceutical Sciences (E, W. Macin) cim& kézikönyv, amely jól ismert referencia mü ezen a területen és az VSP/NF (United States Phamtacopeía and the National Eorroulsriy).
A gyógyhatású készítményt úgy focnulázzuk, hogy kompatibilis tegyen a tervezett bejuttatás! úttal, A bejuttatás! utakra például szolgálhamak a kővetkezők: parentsrális., például miravénás, intradermálls, szubkután, orális (például bciélegzóses), transzdermálls (topikus), írsuszmukozális és végbélen keresztül történő bejuttatás. Parenteráíis, mtradermáhs vagy szubkután alkalmazásokban használható oldatok vagy szuszpeuziók a következő komponenseket tartalmazhatják: steril hlgítősser mint például viz injekcióhoz, fiziológiás sóddal, lkait olajok, polieíiléo-glikölök, glicerin, propilén-glikol vagy más szintetikus oldószerek; attd bakteriális ágens mint például benzil-alkobol vagy metil-parabásek; aotlosidánsok mint például aszkorbiosav vagy náfrútmblszulfit; feelátképző ágensek mint például eíslén-dsamirt-tetraecetsav; púderek, mint például acetátok, cifrátok vagy foszfátok és a toaícitás beállítására szolgáló ágensek mint például nátrium-klorid vagy dexttóx, A pH-t savakkal vagy bázisokkal állíthatjuk be, például sósavval vagy nútrlum-hidtoxiddal, A parenteráíis készítményt kiszerelhetjük ampullákba, eldobható fecskendőkbe vagy üvegből Illetve műanyagból készült több dózist befogadó fiolákba,
A találmány szerinti készítmények bejuttatásának leghatékonyabb módja és & dóziselosztás függ a betegség súlyosságától és lefolyásától, a páciens egészségi állapotától és a kezelésre történő reagálásától továbbá a kezelőorvos döntésétől. Ennek megfelelően, a készítmények dózisai: az egyes páciensekhez kell igaziíatd. A találmány szerint! antitest késziíxnéöyek hatékony dózisai a körülbelül 1 pg-tói a körülbelül 5000 mg-tg terjedő tartományban vannak, előnyösen a .körülbelül Ütői körülbelül 500 mg-ig terjedő tartományban vagy előnyösen a körülbelül 100-200 mg tartományban.
Diagnosztikai reagenskészisfek:
A találmány tárgyát képezik továbbá diagnosztikai reagettskészieíek a fentebb ssmmetett eljárások végrehajtására.
A. diagnosztikai reagenskészlet iartalmaza találmány szerinti monoklönális antitestet., A reagenskészlet tartalmazhatja továbbá az autltest specifikus kötődési párjának kotgugátumát és jelölőt a kötött antitest kimutatására. A reagenskészlet tartalmazhat kisegítő ágenseket tűin: például puíferolő ágenseket és fehérje stabilizáló ágenseket, például políszachariáokat és más hasonlókat. A diagnosztikai reagenskészlet kívánt
- lőcseiben fariafeazhafj-a még egy szignált létrehozó rendszer tovább; komponenseit, beleértve a háttér interferenciát csökkenté ágenseket kontroll ágenseket és & teszt kivitelezésére szolgáló berendezést. A diagnosztikai resgenskészlst hmlmazhatja s találmány szerinti tnonokionálís antitest konjngámmát és egy kimutatható szignált létrehozni képes jelölői is. Kisegítő ágensek a fentebb aAstek szerint szintén jelen lehetnek, Általánosságban szintén a készlet részét képezi a diagnosztikai reageuskészlet alkalmazásának használati utasítása.
Polipeptidek:
A leírás szerinti mönokionális antitestek alkalmazhatóak a 40 kB nagyságú fehérje - amelyhez kötődni képesek - izolálására és jellemzésére is. A monoklonál is antitest által felismert fehérje egy ói sejtfelszíni fehérje, amely számos tenorsejten megtalálható., beleértve a következőket;: thtesz eredetű íimfóma sejtek, T~sejtes tenorsejt, S-sejtes llmfótna iumorsejt, melanóma tenorsejt, oszteoszarkő;rta sejt valamint akut T-sejtes leukémia sejt. A fehérje sejt-pusztulást kiváltó molekulának tekinthető azon megfigyelés alapján, hogy amikor ehhez a fehérjéhez ntonoklonális antitestek kötődnek, a fehérjét expresszálő sejt elpusztul,
A találmány szerinti monoklonális antitestek által felismert fehérje izolálható a fehérjét expresszálő sejtekből (például £710,2,3; RMA-S; CTLE; LB17.4; A2Ö; WEH1-231; PBK1G1A2; C2.3; Blö; MC57:.; WOP3027; 293T; !43Btk; Jurkaí és Cos sejtek). Például a leírás szerinti tnonoklosális antitestek alkalmazhatóak a fehérje fmmrmprecipííác sójára. A fehérje szekvenciájának meghatározására a fehérje· SDS-PAGE segítségével megtisztítható, elektroblott segítségével Immobilon membránra (.Milhpore Corp., Bedford, .MA) áivisszük és a membrán? Coomassie Brilliant Blue-val festjük. A megfestett fehérje sávot (Mr ~ 40 kö j ezután pengével ki.vághatjuk későbbi: amino-íermlaáns szekvencia analízishez. Amíno-ternteális szekvencia analízis - mint például az automatizált Edmsn lebontás - a technika állása szerint jól ismertnek tekinthető.
A találmány leírású feltár még fúziós fehérjéket is, amelyek a 40 kD nagyságú fehérjét egv vele tm rokon fehérjéhez ínzúmákan tartalmazzák. A nem rokon fehérjét kiválaszthatjuk úgy, hogy megkönnyítse a tisztítást, a kimutatást, a szotubilizáiásí vagy valamilyen, más funkciót biztosítson, Fúziós fehérjéket előátiítháfunk szintetikus úton, vagy a fehérjét nem rokon fehérjéhez kapcsolhatjuk megfelelő- kapcsoló reagens, mrnt például diciklohexil-karbodümld (DCC) alkalmazásával Egy más módon eljárva a fúziós fehérjéket előállíthatjuk rekotnhináns módon, a fúziós fehérjéi expresszálő nukieotid szekvenciának megfelelő expressziős vektorba történő klónozásával A rekombínáns fúziós pslipeptíd ezután kinyerhető a tenyésztápialajból vagy a sejtek lizatuntáből,
A 40 kD nagyságú fehérje jól alkalmazható például min? vakcina bizonyos tenorok elleni inununízációhoz. A technika állása szerint Ismertek az ilyen vakéinak előállítására szolgáló eljárások (lásd például Estin és mtsai,; Proo. Kati. Aeaá. Scí. (VSA) 85 1052 11488}]. Röviden összefoglalva, rekcanbináns vírusokat szerkesztünk meg a klónozott tenorral asszociált fehérje expressziójára, A rekombínáns vírusokkal fertőzött sejtek a fehérjét expresszáfeí fogják a sejtek felszínén, a gazdssejf hiszfokompatibíhtási antigénjeivel és az immunugért vírus fehérjékkel együtt. Ez kedvez a sejtes Immunválasz indukciójának, amelynek kulcsszerepe van a tumor kilökődésében,
A találmány feirásafeiíár továbbá egy eljárás? modulátorok azonosítására, azaz olyan teszt vegyületek vagy ágensek (például peptidek, pepiidonumeiikmnok, kismcieknlák vagy gyógyszerek) azonosítására, amelyek kötődnek a 4Ö kD nagyságú fehérjéhez vagy amelyeknek stimuláló illetve gátló hatásúk: van a 40 kD nagyságú fehérje expresaziőjára vagy aktivllására. Példást a. 40 kD nagyságú fehérje astagostistája alkaímazhatő tehetne
-35sejtek apoptózisának gátlására, Ez. az aoíagonisía szerepet játszhat egy páciensben a rendellenes apopíózis gátlásában.
Uj innkcio:náiis molekulák meghatározása céljából - amely molekulák kapcsolatban lehetnek llmfónrák növekedésével vagy túlélésével és/vagy .sormái timoeita fankciőkkai - £710.2.3 sejtekkel Injektált hörcsögökből a következők szerint állítottunk elő bíbriáómákat. Örmény hörcsögöket intrsperitoneáiísan injektáltunk 1Θ trdlíió £710,2.3 sejttel és serkentő injekciót kaptak 7-10 alkalommal a fúzió előtt, A fúziót a P3X63-AG8.653 fúziós partner alkalmazásával végeztük a leírás szerint (Schreiber és mtsai.: Immunoi 134 lóő9 (19-85)). A hibridekből származó reiölúszót először immuarinoreszcenciával és átlőlyásos citometriávsl szkriseltűk az Ε71Θ.2.3Α sgjtekbez való kötődési képességre. Egy adott antitest — amelyre itt a DM.F 10.62,3 jelzéssel hivatkozunk - erősen festene az E710.2.3 sejt felszínét.
Az temanüaorwwnriás analízis kimutatta, hogy a DMF1Ö.Ó2J antitest számos egér eredetű sejtvonallal reagált (1. táblázat) de hiányzott másokból (II, táblázat). A pozitív sejtvonaiak magukba foglaltak: néhány Tsejt vonalat (mint például RMA-S), számos B-sejt bmfómát (például A20 és WEHÍ-23 3) és egy raakrofág sejtvonalat: (C2.3). A DMFlő.02,3 ugyanakkor specifikusan kötődött számos nem hematopoletikus eredetű immertshzá.k: sejthez, beleértve egy szfeőma sejtvooaiat (PBK1Ö1A2X egy melsnóma sejtvonalat (Sió), egy szarkóma sejtvonalat (MCS?) és egy poftóma-transúformált fibrobisszt sejtvonalat (WOP-3Ö27). Számos további éretlen (például 058.2) és érett T-sejt (például £L4), makrofág (például A3,1), dendrites sejt (DC2.4) és egy íiferoblaszt sojtvonal (LAÖpoI j negatív volt a DME 10,62.3 antitestre, Érdekes módon a monokionális antitest szintén reagált számos humán Immortalizáit sejtvonailal is, beleértve a Jutkát, 293T és 143Btk- vonalakat és szintén reagált a majom SV40 transzformált vese sejtvoaall&l, a Cos? sejtvonallal. A DME 10,62.3 antitest nem kötődőit bizonyos: humán sejtvonalakhoz, mint példán! a 721 B-limióblasztold sejtvonalboz és a Méta cervíkáíis karcisóma. .sejtvosalboz, A reprezentatív sejtvouaiak festési mintázatát az 1, ábrán mutatjuk be DM.F 10,62.3 pozitív £710.2.3' (1 A. álma), Á2Ö (IS. ábra) és Jattot (IC. ábra) sejtek és az RE3.3.7Ö (1D. ábra) DMFIWJ negatív sejt esetén.
L táblázat
| ................*?..................*------- — sejtvonai 1 leírás | |
| E7ÍÖ2.3 | egér eredetű fimusz limfóma |
| RMA-S | egér eredetű T-sejt tumor |
| CILI. | egér eredetű. IL-2 függő T-sejt vonal |
| LB27.4 | egér eredetű B-sejt bibrídőma |
| A2Ö | egér eredetű B-sejt llmfóma |
| WBHI-231 | egér eredetű B-sejt limíóma |
| EBK1Ö1A2 | egér ttausz eredet ű sztróma sej ivónál |
| :C2.3 | egér eredetű immortalízált csontvelő makrofág |
| £16 | egér eredetű mslanóma |
| MCS7 | egér eredetű medikötatrén-mdokáít tumor |
| WOP-3Ö27 | egér eredetű poliónta transzformált fibrohlaszt |
| 2937 | humán transzformált printer embrionális vese |
| 143£ík- | tanán eszíeoszarkőma |
-16A fenti adatok azt matatják, hogy az új antitestek az ínunortalizált seítvonalak közül sokhoz, de nem mindhez kötődnek specifikusam és a kötődést sem. korlátozza a fej vagy a sejtvonal eredete.
H. táblázat
| sejt vonal | leírás |
| RF33.70 | egér eredetei T-T hibrid |
| DÓI. 1.1 ö | egér eredetei T-T hibrid |
| 13G7.3.2 | egér eredetis T-T hibrid |
| l-ff-2 | egér eredetű IL-2 függő T-sejt vonal |
| EL-4 | egér eredetei Γ-sejt limfőma |
| GSS.2 | egér eredetei tímusz hnjfetna |
| NPCIÖ5 | egér eredetű tímusz fetfóma |
| BS15 | egér eredetei, tnasztoeiíőma |
| PsááDi | egér eredetei monoeitaónakroíág tumor |
| LAD ,.31 | egér L-sejt vonal |
| A3.1 | egér eredetei immonslizáh csontvelőből származó makrofág |
| DC2.4 | egér eredetű immertaíizált dendrites sejtvosai |
| 721 | humán B-sejt vonal |
| fieha | humán eptfhéi cervikális ksranórna. |
| E36 | hörcsög fedő karcísóma |
| BHK-21 | hörcsög vese sejtvonal |
| CHO | kínai hörcsög petefészek |
AJ>MFfO;623,áltel felismert mofekpfe expressaőja
A D'MF1Ö.623 által felismert molekula expresszíóját fölálls tlnsocítákban vizsgáltak a következők szériát C57.S1/IÖ egerek időzített vemltességeiből embriókat kaptunk, amelyeket, a 14. fötális napon feláldoztunk. A fötális timuszokst FBS-bea -gyűjtöttük Bpposdorf eső övegáugabyniáttak segítségével. Egyetlent sejtes szüszpenziókat mkubáhuk 20 percig jégen anti-Fc gamma receptor ii/ΠΙ (Pharmíngen) jelenlétében, hogy blokkoljuk az Fc receptorokat. Ezt követően a sejteket vagy DM.F10.62,3 antitesttel vagy hörcsög ígG segítségévei festetttík 3ö percig, ez követőn HTC ktwtgálí kecske eredetű hörcsög elleni tmriíesiei és mellette ahoSkociariirs (AFC)-konjugált suti Thy i .2 antitestet (Phanmngen) adtunk hozzá. Néhány kísérletben BB-hez konjugált atüiCD25 antitestet és €y-€hrome-hoz (Fhartsingor) konjugált aoti--CD44 antitestet is aikalrnaztönk. A festett sejteket éjszakás át fixáltuk 1% psraformaldebidben és ezt követően átfolyást:» citosnetriával analizáltuk.
Az eredmények az matatták, hogy a DMF? 10.62,3 antitesttel festett 14 napos fotálts tlmeciták pozitívak voltak a 40 kD nagyságú fehérjére és azt teiálfttk, hogy a fehérje: jelen volt Thy 1.2 pozitív sejteken: (2A, úbrts). Érdekes médoo a fehérje jelen volt mind a CÖ25XXM4 fötális timocitákon éppúgy’ mint a CD44*CD25’ íötális timocifákon is. Azonban az érett tímusz (2C. ábra), érett lép (28. ábra) és érett csontvelő sejtek (2D. ábra) féstödése azt mutatta, hogy a DMF10.62.3 által felismert fehérje ezen sejtek közöl egyiken sincs magasabb szinteken jelen, mist amelyek a kontroll hörcsög IgG segítségével láthatóak. Továbbá, a fehérje nem vök kimutatható átfoiyásos citoínstriával vagy ennek a RAG-/- egerekből származó populációnak analízisével éreti CDá’CDS'
- 37íjntociíákon multlparaméteres analízisben CD4'CD8' sejtekre -történő kapazás «ián, 14 napos fótális máj sejtek szintén nem reagáltak a DMP I Ö.62.3 antitesttel.
Annak meghatározására, hogy a DMFiö.fs2.3 által felismert fehérje jeles van-e sormái, aktivált sejteken, láp eredetű T-scjteket aktiváltunk a ConA T-sejt raitögénsel és a DMFtö.62,3 által felismert fehérje expressziójának kimutatására festettük a következők szerint Lép. tsmusz és csontvelő sejteket preparáltunk felnőtt (4-6 hónapos) Balb/e vagy €5783/6 egerekből. A vörös vértesieket eitávohtotink a lép sejt szííszpenziókból trisz-ammőmum-klorid i&is. alkalmazásával. A. nem stimulált sejteket rögtön megfestettük. titóöblasztokat stírauláituak tenyészetben 1 gg/ml CsttÁ vagy 30 pg/ml LFS segítségével. 1-3 nap tenyésztést követően s. sejteket DMF 10.62.3 expressziójára festettük. Nem figyeltünk meg jelentős mértékű festödést a háttér felett a nem stimulált sejtekben (3.4. ábra) vagy a ConA stimulált sejtekben az aktiválás után 24 órával (38. ábra), 48 órával (3C. ábra) vagy 72 érával (333, ábra)- (nincs változás az FACs profilokban), Pozitív kontrollként ConA stimulált sejteket festettünk €D25-tel, Amint várható volt, a ConA kezelés jelentős mértékű növekedést eredményezett a CD25 .expressziójában ezeken a sejteken a nem stimulált sejtekhez viszonyítva (a CD2S kötődése a sejtekhez eltolja a FACs profilt}, Hasonló módon, amikor lép eredetit B-sejteket aktiváltunk lípo-poliszacbaridokkal (LPS), nem figyeltünk meg DMF18.62.3 festódést 24 órás (38. ábra), 48 órás (3 F. ábra.) és 72 órás (3G, ábra) időtartamban (nincs eltolódás a FACs profilban), mlkőzbets -ezek a sejtek expresszálíak CD25 molekulát (eltolódás- -a FACs proliiban). A DM81Ö.62.3 -által felismert fehérje nincs jelen érett csontvelő sejteken (2£>, ábra). Ezek az adatok azt mutatják, hogy a DM810.62,3 által felismert fehérje jelen van néhány fótális timoeítán, de nincs jelen felnőtt állatokban hematopoietikus eredetű.normál nyugvó vagy aktivált sejteken.
Amikor alacsony sejtkoneentráció mellett tenyésztettük és PMA nélkül tartottuk. az £718,2,3 sejtek lassan vagy' egyáltalán nem prollferáltak. Azonban létrejött proliféráció, amikor tlmocitákkal együtt tenyésztettük a sejteket A DMFl0.62.3--i kezdetben azon képessége alapján azonosítottuk, hogy képes blokkolni ezt a ttmoeííaíxtdokált prollferáclőí. Amint a ILI. táblázatban bemutatjuk, a DMF 18.62.3 teljes mértékben gátolja ezt a választ (4A. ábra). A proliferáciős vizsgálati eljárásokat a következők szerint végeztük. £710.2,3 sejteket PMA mentesre mostunk, majd teljes RPM1 táptalajban tenyésztettük 48 órán kermiüi alacsony sejtkoneestrácíó mellett (<lő' seit/mi), hogy-' csökkentsük a háttér moliíéráeiót. fezt követően 5 x 10á sejtet tenyésztettünk 72 órán keresztül lapos fenekű núkrotiter lemezekben 25 ng/mí PMA vagy 5 x 10 timoeíta hozzáadásával antitestek jelenléte vagy hiánya mellett. Áz antitestek sejtek spontán prolíferácíéjára gyakorolt hatását vizsgáló kísértetekben £718.2.3 (nagy' sejtkoneenteáeió mellett: növesztve, >10s ssjt/ml) vagy RMA-S sejteket tenyésztettünk 36 órán keresztül az. antitest különböző koncentrációinak jelenlétében vagy hiányában. H-timidmf (1 TCi/lyuk) adtunk a tenyészetekhez az utolsó 5- órára és- a jelölő beépülését a. DNS-be J-szcmtlllációs számlálóval mértük meg (Wallac, Gaiíhersburg, M.D).
- jg-
A DMF1Ö.Ó2.3 azoa képességét hogy az E710.2.3 más hatásokra .adott válaszát képes-e -gátolni, szintén megvizsgáltak Amist a JIÍ. íábteatbast látható, az antitest szintén blokkolta az £710.2.3 FfoíA-índukált prolíferáeiéját. Továbbá, az E? 10.2.3 spontán proliforáií, amikor nagy sejíkoncentráeiő mellett tenyésztettük és a DMFÍÖ',62.3 gátolta ezt a választ (4Á, ábra). A prolíferácío jelentőse:!! gátolt 3 pg/mi koncentráció esetén és teljes gátlást figyelhettek meg 12,5 pgimi koneentráelónál, Ezzel szemben a hörcsög IgG-aek nem volt hatása az: £710.2.3 válaszára (4A. ábra) ezen hatások bármelyike esetén. Hasonlóképpen. sok monoklonális antitest az eredeti fúzióból kötődött az E710.2,3 sejtekhez, de sem gátolták a proiiferáeiöját (például BMP 10.132) (Hl. táblázat). Ebből következően a DMFIQ.62.,3 speelDknsan gátolta az. E710.2.3 proliferáelóját a prolíferáeié mdukálásárs alkalmazott hatástól ftlggetlenül:,
A DM.FÍS.62,3 által felismert fehérje számos más sejtvemien is jelen van. Ebből következően fontos volt meghatározol, hogy az. antitestnek hasonló hatása van-e ezen sejtvonalak spontán: prolfforácsöjára. A DMF 10.62,3 gátolta az RMA-S proiiferáeióját (4B, ábra) szintúgy, mint számos további vizsgált sejívonalét. Ezzel szemben az antitestnek nem volt hatása az. RF33.70 spontán proliferáelójára (4C. ábra), amely negatív volt a DM'P!Ö.Ő2.3 fehérje jelenlétére.
: indukál aoontózis
Az apőpiózsst az R&D (Mitmeapofis, MN) és a Pharmingen. (San Diego, CA) cégektől beszerzett reagenskészlelek segítségével vizsgáltuk. Röviden összefoglalva, 2 x 10? sejtet íttkubáittmk kölőrfoöző antitest .koncentrációkkal 200 μ{ táptalajban. Az inkubáíás végén a sejteket 2-szer mostak PBS-ben, 15 percig Pl-vei és FITC snnexiaoel kezelték és ezntás átfolyásos oííometrláva) analizáltuk, A. DNS fragmentáeiöt agaróz.
gélelektroforézissei vizsgáltak meg. 2% agaróz géleken Schattner és munkatársai leírása alapján (Schstmer és mtsai.: J. Exp, Med. 1S2 155? (1995)1.
A DMEIÖ.62,3 antitesttel kezeit sejttenyészeteket vizuálisan megvizsgáltak és megállapítottuk, hogy az ép sejtek szájra esőkként. Továbbá a sejtek ezután már nem zárták ki a vitalitást jelző tripán blue festéket. Ez a megfigyelés a proliferáció gátlásával együttesett azon következtetésre vezetett, hogy az antitest clfotoxikas a sejtekre. Ezt kővetően vizsgálatokat végeztünk, hogy meghatározhassuk' mi az a mechanizmus, amellyel a
BMFIÖ,ó2,3 sejtpnsztulást indukál.
A sejtek apoptózls vagy nekrózis által pusztulhatnak el. Az apoptőzist matató sejtekben az egyik első változás a ibsz.fattdil-sz.erin extemalizálodása a sejtmembránon és ez kimutatható FÍTC-annexinnel végzett festéssel. A folyamát korai szakaszában az apopfeztsos sejtek kizárhatnak vitalitást jelentő festékeket mint például propídiam-jodídot és ebből következően azonosíthatóak mint FITC-aonexín pozitivok és Pl-negativok. Az apoptőz.ísos folyamat során később a membrán integritás elvesz, és a FlTC-annexin pozitív sejtek Pl-posttivak
- 19 lesznek. Ezzel szemben a nekrózís során a sejtek elvesztik a membrán integritást és egyszeres lesznek Fl-pozitívak ás FITC-annexm pozitívak a ElTC-anaexm pozitív és Pl-ncgatív fázis nélkül.
Az 5A-3I. ábrákon feemtáatoít FACs profitokon a bal alsó negyedben található sejtek élő sejtek, a jobb alsó negyedben található sejtek apoptózíson mennek keresztül (FíTC-aonexín pozitív) és a. jobb í'eisó negyedben található sejtek azok, amelyek apoptózis és/vagy nekrózís következtében elpusztultak (Fl-pozitlv és FfTC-annexin pozitív). Szintén bemutatjuk az egyes negyedekben a sejtek százalékos arányát, A vizsgálat során az E71Ö.2J sejtek bizonyos százaléka a tenyészetben spontán apoptózíson ment keresztül <10,9-15% Annexín-t·, PI-). Azonban oly- kevés mint 1 pg/ml DMF1Ö.62.3 jelentős mértékű apoptózis növekedést eredményezett 1 óra alatt (28,.9% Annexin-t, Pí~; 5A, ábra) és az apoptózis .22 idó sorát? növekedett (48,6% Annexínré, Pl- pozitív 3 óra mán, 5C. ábra). A DMFÍO.62,3 nagyobb mennyiségei (15 pg/ml) időben gyorsabban stimulálták az apoptözist (374% Annexinl, FF pozitív 1 óra után) és több sejtben (5E-Ö. ábrák). Ezzel szemben, a hasonló mennyiségű hörcsög IgG segítségével végzek kezelésnek nem volt jelentős hatása a táptalaj önmagában vett hatásán kívül (5D., 5I-í„ 51, ábrák). Az apoptózist szintén igazoltok a DNS fragmsstácíót láthatóvá távé agaróz géleiektroforézissel.
Mivel a DMF 10.62.3 által fölismert fehérjét más sejteken expresszálták és ez az antitest gátolta a proliferácíőhskat (ahol teszteltük) a továbbiakban megvizsgáltuk, hogy a DMF 10.62.3 szintén apoptózísra sfimulálja-e ezeket. A DMF ÍO.é2.3 jelentős mértékű apoptózist okozott az RMA-S, CTLL, L827.4 és A2Ö egér eredetű sejtvonaiakban valamint a. Farkat és 143BTK- humán sejtvonalakbas (IV. táblázat). Az apoptózist 15 pg/mi DMFIö.62.3 alkalmazásával indukáltuk és az antitest s?agyobb koneeiúráclóíval növekedett. Eszei szemben a DMF 10.62.3 nem okozott apoptózist az RP33.70 sejtvonalban, amely a fehérjére negatív. A DMF 10.62.3 által indukált apoptózis szintje változott a különböző sejtvonalak között és úgy- tűnik, hogy függ a felszíni expresszié szintjétől és hasonlóképpen függ a föhérjét expresszáié sejtek populáción belül! arányától (ÍV. táblázat). Például a legtöbb E /IO.2 .3 és KMA sejt magas szintes expresszáha a fehérjét és a DMFiŐ,62.3 tsagas színtű apoptózist iadsíteálí mindkét sejtvonaibas. Ezzel szemben, kevés A20 és LB27.4 sejt expresszáíta a 40 kD nagyságú fehérjét alacsonyabb szinteken és a. DMF 10.62.3 alacsonyabb szintű apoptózist indukált ezekben a sejtekben: (IV, táblázat). A DMF 10,62.3 apoptózis stimulációja ágy tűnik, hogy független a fas-íól, mivel az E7 í ö,2,3 és az RMA-S sejtek nem expresszálnak fás-t (IV, táblázat).
| síjtwri | Wöasosssjtek’Aeyisége | |||||
| BM»,S,3 | ΚΑολλΚλ- rag fgG | ms kezelés | teresma Í*BáfeDMf'l§.e.aWg | «|t % Miyis«; seft Mfe Saflööasiteiíe | fesaseéfefc&- letiapresszto | |
| EBÖ | SÖ | !« | M7 | 27J | w | |
| fttt-S | 12,2 | M,(! | 14,5 | íitó | * | |
| CB | 1« | W ......... | ys | 51,5 | ||
| RF3170 | s,i | tó | li | « | IMS | ·· |
| Π2Μ | lö | a | iG,í | t,« | 7,(1 | 1 |
| A2Ö | K,2 | iy | 122 | 3,3 | 21,S | •r |
| taÉ sejteli | ||||||
| OKÁT | a? | sy | ilS | 14» | A2 | © |
| isi· | 2Ö | 21,1 | w | tó | ö,5 |
-215. péüfy
A Iromotípiás aggregácló egy olvas biológiailag aktív folyamat, amely során a sejteket áss egymáshoz tapadásra stimuláljuk. Áz aggregáciös vizsgálati eljárásokat a kővetkezők szerint állítottuk össze, lö’’ sejtet irikuháltunk DMF10.62,3 vagy hörcsög ígG különböző koncentrációival vagy antitest nélkül 200 pl teljes REMI táptalajban. Az inhibitorok hatásának vizsgálata céljából 10'' sejtet előlnkubáhuak sz inhibitorral 30 percig- és ezután DMHÖ.62.3 monoklonális antitestet (19 pg/ml) adtunk hozzá az inhibitor további jelenléte mellett 6 órás időtartamra, A para&nsaldehid aggregáciöra gyakorolt hatásársak vizsgálatára a sejteket 1% paraformaidebfodel fixáltok 10 percig, mostok és utána DMFIÖ.62.3 antitestet adttmk hozzá 6 órás időtartamra, Az aggregációt vizuálisan értékeltük. Föfomikrogrammokat vettünk fel ő óra után teneoelekíromosan hűtött töltés-kapcsok eszköz (CCD) kamera segítségével (Prfoeetsn Instruments, Trentos, NJ),
Azt találtuk, hegy a DMP 10.02.3 E? 10.2.3 sejtek homotípíás aggregáesóját indukálta tenyészetben. 6 óra után jelentős mértékű aggregációt figyeltünk meg, amikor a sejteket .5 pg/ml vagy nagyobb antitest koncentrációval kezeltük. Ezzel szemben nem figyeltünk meg aggregációt hörcsög igG-veí vagy táptalajjal kezelt tenyészetekben. Ezt az aggregációt kdiösbözó ágensekkel történő kezelés blokkolta, az ilyen ágensek magokba foglalják a következőket; eitokalazin-B, amely tönkreteszi: az áktis nfikrolliamentumokat; trifluoperszm, amely gátolja a eslmodulin-foggő folyamatokat; Na-azid + 2-deoxtglökóz, amely gátolja az A TE szintézist és EDTA, amely belátókat képez Ca^ és Mg?> fonókkal. Ezzel szemben sz aggregációt nem befolyásolta a kolhicin, amely gátolja & mikrotobulusolí kialakulását Az aggregációt szintén gátolta a 4 “C-on végzett inkubáiás és a paraformaldehides kezelés (V, táblázat),. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy az aggregáció egy aktív folyamat és nem egyszerű agglufináció.
V. táblázat
| adhézlöban alkalmazott vegyszer | hatása a sejtre | feomotiplás |
| eitoehsiaxin-S (20 pg/ml) | citoszkelefon: (tönkreteszi az aktín mikrofilament integritást) | |
| kolhicin (20 pg/m.l) | gátolja a mikrot-foulusok kialakulását | -V |
| triíluoper&zín (20 pM) | gátolja a kaimodulss függő felyastafokat | |
| Na-azid (0,1 %) ·+ 2-deoxíghlkóz (5 mM) | gátolja az ATP szintézist | |
| EDI A (lö mM) | kslátoi képez Ca~~ és Mg^ ionokkal | - |
| csak táptalaj | kontroll (nincs hatás) | A |
| 4°C | - | |
| parafomaidehíd | - |
A DMF10.02,.3 szintén feomotípiás aggregációt okoz néhány mást sejtvoaalnál (például RMA-S, CTLL), amelyek expreszszálják a DMEÍb,ö2,3 kötő fehérjét. Azonban a háttérszintet csak kicsivel meghaladó
-22aggregseiot ügyeltünk meg néhány más DMFt 0.Ö2.3 pozitív soítvonaiaál (például jurkat, L827.4, A20, 143Btk-), Nem figyeltünk meg aggregácíőt az RF33.7Ö sejtvonalnál, amelyhez nem kötődik a DMF10.Ő2.3.
Az aggregáclós vizsgálati eljárás segítségként alkalmazható amtak meghatározására, hogy egy áj antitest a találmány szerinti új: antinanor antitestek közé tartozik-e,
é. példa
A DMF1Ö.Ó2.3 által megkötött lekérje jellemzése céljából ,;5S jelölést és ínummpreeípítáeÍöí végeztünk a következők szerint, 5 x iö6 B718.2.3 sejtet i órán keresztül éheztettünk metionin-mentes táptalajban, .majd olása két órás keresztül inkubáltuk 0,5 mCvml koncentrációjú '5S metiosinnal. A jelölt sejteket Twssend és munkatársai leírása alapján iusnunprecipkáló puíferben lizákuk [Towseod és mtsai.: .1. Immunoi 14$ 2235 (199öjj. A letisztult lízáíumokat hörcsög IgG-vel előtisztítottuk, Profeín-Á-Sepharose kötött DMF1Ö.Ő2.3 antitesttel Imraunpreeipifáltuk és SöS-poiiakrilamid gálelektroforézissel analizáltuk 14%-os géleken. A D.MF 10.62,3 antitestet megkötő fehérje molekulatömegének meghatározására az E17CS.2.3 sejteket 2 érán keresztül jelöltük 35S mattommal, A jelölt sejtekből származó ímmanprecípltáturnokat SDS-PAGE segítségével analizáltuk redukáló körülmények között.
A DMF1Ö.Ő2.3 monoklonális antitest az E710.2.3 sejtekből egy redukáló körülmények között körülbelül 40 kD nagyságú fehérjét immunpreoípitált. Ezen fehérje elektroförefikus mozgékonysága sem. változott meg nem redukáló körülmények között. Ezt a sávot nem láttuk a normál hörcsög IgG segítségévei kapok immunprecipitátumokban vagy & Y-3 MHC I. osztály elleni: antitesttel kapott immtmprecipifámmokban, .Egy 40 kD nagyságú fehérjét szintén sikerült azonosítanunk felületén jelölt E710.2.3 és RMA-S sejtek lízátnmaihan.
Számos sejtfelszíni molekulát - mint példáni a Thy-1 és Ly-6 .VE molekulákat - giikozii-foszfatlőilírtozííol (GPí): horgonyok rögzítenek a sejt feiületéhsz. Ez a felületi kötés érzékeny Pl-PLC kezelésre. Annak tneghalározására, hogy a DMFIÖ.62.3 antitest: által felismert fehérje GPl kapesolt-e, .RMA-S sejteket - amelyek a sejtfslszlnen expresszálják a fehérjét - kezeltünk Pl-E’LC-vel. A Pl-PLC kezelés nem csökkentette a DMF10:.62.3 festést de lecsökkentette a Thy-i GPl-kapcsolt molekulára folytatott festést; az eredmények azt mutatják, begy a DMF 18,62.3 által fölismert 40 kD nagyságú fehérjét nem DPI rögzíti a sejt felületéhez.
7. pAW
AKR. egereket i.v. vagy i.p. Injektáltunk 5 χ 18S> színgérúkus E716.2.3 tamorsejttel és fiziológiás sooldaíöi adtunk he nekik vagy l.p. injekcióban 0,5 mg kontroll antitestet vagy DMFŐ2.3 antitestet adtunk be az első sápon és a beadást 10 nappal később megismételtük. Az állatok túlélését SÖ napig követtük (VL táblázat).
VL táblázat
| kezelés | túlélés | átlagos időtartam az: elhullásig |
| fiziológiás sóoldnt | 8% | 35 nap |
| kontroll antitest | ö% | 33 nap |
| DM.FÓ2.3 | 100% | (nincs elhullás) |
Letéti nyilatkozat
A DMF'10,62.3 monoklonáhs antitestet. termelő hibridőma sejtvonalat letétbe helyeztük az Amerikai Tí* pustenyészet Gyűjteménybers (AT-CC, W8Ö1 Doivemty Boofevard., Manassas, VA) 1999. július 20-án és a DMF10.167.4 valamint a DM.F1Ö.34AÓ moaaklonáife antitesteket termelő hibridóma sejtvoualakat az Amerikai Típusíenyészet Oyüjteroénybea (ATCC, 10S0Í Ufúversúy Boalevard, Mánassas, VA) 1999. július 22-én helyeztük feléibe. A feibrídóíuákat: olyan feltételek között helyeztük letétbe, amely biztosítja, hegy a ttihriáómák hozzáférhetők legyenek az ezeket közzétevő szabadalmi bejelentés ügyintézése során, ahogyan ezt meghatározta a Commissioner of Patenís and Traderoarks hivatala a 3? CFR 1,14 és a 35 DSC 122 azonosítószámú rendeletekben* A. letétek a küllőid! szabadalmi törvények által megkívántak szerint rendelkezésre állnak azon országok számára, amelyekben a jelen bejefentésnek megfelelő, vagy ennek, feszármazottainak tekinthető beje* festések benyújtásra kerülnek. Azonban felhívjuk a figyelmet arra, hogy egy letét hozzáférhetősége nem biztosit Ifesnszet a találmány alkalmazására a kormányok által biztosított szabadalmi jogok csökkentése útján.
To vábbá a taíálmáay szerinti tenyészet letétek a mikreörganizomsok letétbe helyezéséről szőlő Budapesti Egyezmény kereteinek megfelelően kerülnek tárolásra és ennek megfelelően tesszük ezeket hozzáférhetővé a nagyközönség számára, azaz ezeket minden ahhoz szükséges gondossággal tároljuk, hogy éfeíképességökei és szennyezettség mentességüket legalább öt -évre megtartsák a legutolsó minta igénylést követóleg és: mindenesetre legalább 30 (harminc) évig a letétbe helyezés dátumától, illetve bármely olyan szabadalom -érvényesíthető élettartamáig, amely tartalmazhatja a tenyészetek leírását plusz öt évig a letéthői igényeit, utolsó mintát követően. A letétbe helyező elismeri kötelezettségeit a letét pótlására, amennyiben a letéti hely kívánság estén nem képes igény szerint tníutál: biztosítani a letétek állapota következtében. A leírás szerinti tenyészet letétek esetében a nagyközönség: hozzáiérését illető összes korlátozás visszavonhatatlanul megszüntetésre kerül az ezeket közlő szabadalom megadása esetén.
Felhívjuk a figyelmei ama, hogy a megelőzőekbeu ismertetett specifikációk, megvalósítási módok, és példák csupán a találmány jobb megéríltetöségéi szolgálják és nem korlátozó -értelemben kerültek bemutatásra. Számos usás, a fentiekkel egyenértékű módosítás illetve változtatás hajtható végre, és az ilyet! módosítások: nem térnek el a találmányi gondolattól és a csatolt szabadalmi igénypontiak által meghatározott igényeit oltalmi körön belülinek tekintendők.
Claims (23)
1. Izolált monokionális aotítest vagy antigénkötő frsgmense, amely a következők közöl vas kiválasztva: antitest, amelyet a kővetkezők közül választott hibriáóma sejtvonai termei; ATCC No. PTA-377,
PTÁ-4Ö4 és PTA-4Ö5, amely antitest sorrendben: DMF1Ö.Ő2.3, DMFlö.167,4 vagy DMT 1.0.34.3b;
Rimára antitest, amely humán könnyűlánc és nehézlánc konstans fogtokkal és a DMF1Ö.Ő2.3, DMF 10.1:67.4 és DMF 19.3436 antitestek Rózái választott antitest könnyű és nehéz variábilis régióival rendelkezik; és humaoizált antitest, amely a DMFI 6,62.3, DMFlö. 167,4 és DMP1Ő34.36 antitestek közül választott antitest komplementaritást meghatározó régióival (CDR-ek)rendeikezik.
2. Az 1. igénypont szerinti raonoklcasáiis antitest vagy antigénkötő iragmense, mely antitest hotnotípiás aggregjeiét indukál a sejthez történő kötődés esetén.
3. Az 1, igénypont szerinti izolált monokleuális antitest vagy antigénkötő iragmense, amely antitest szelektíven kötődik: a kővetkezőkből álló csoportból kiválasztott egv vagy több •tmorsejt-voaalh.oz: E7 í 0,2.3, RMA-S, CTLL, LB17.4, A20, W1I1-23I, PBK1ÖIA2, €2.3, B16, M€57, WOP-3027, 293T, I43B&,. Jutkát és Cos.
4. A 3. igénypont szerinti izolált raonoklosálls antitest vagy anrigénköto iragmense, mely antitest szelektíven kötődik E7 í 0.2,3 .sejtekhez..
5. Az 1. igénypont szerinti: izolált .monoklotuíbs antitest vagy antigénkötő iragmense, amely antitest tar* iaim&zza egy DMFlb.62.3 antitest CDR-jsii.
ó. Az 1. igénypont szeríoti izolált monokionális antitest vagy antigénkötő fcagmense, amely antitest tartalmazza egy DMF10.167.4 antitest: variábilis régióját és egy komán antitest konstans régióját.
7, Az 1. igénypont szerinti izolált monokionális antitest -vagy aníigéuköső iragmense, amely antitest tartalmazza egy DMF10.16-7.4 antitest CDR-jét.
8, Az 1, igénypont szerinti izolált monoklőnális antitest vagy antigénkötő iragmense, mely antitest tartalmazza egy DMF1Ö.34.36 antitest variábilis régióját és egy humán antitest konstans régióját.
9, Az 1. igénypont szerinti izolált monoktenális antitest vagy aptigénkőtö fragmense, amely antitest tartalmazza egy DMFI6.34.36 antitest CDR-jeR.
lö. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti izolált monokfonálls antitest vagy antigénkötő Sagmsn.se, amely tartalmaz egy kimutatható jelölőt is.
1:3. A 10, igénypont szeríoti izolált monökfonális antitest vagy andgénkötő Iragmense, ahol a kimutatható jelölő a következőkből álló csoportból van kiválasztva: fluoreszcens anyag, lumineszcens anyag, hiolumíneszcerss anyag és radioaktív anyag.
12. Az 1. és 5-9, igénypontok bármelyike szerinti izolált monokionális antitest vagy anügénköső iragmense, amely antitest vagy az anrigénköíő fragmeos rádió izotóphoz van konjugálva.
13. A 12. igénypont szerinti izolált monoklónálís antitest vagy aníigónköíö iragmense, ahol a radioizotőp a következőkből álló csoportból van kiválasztva: boros 10, mAt, ííxFb, xURi, USI, L,1i, ·!>δ: és }H.
14. Áz 1. és 5-9. igénypontok bármelyike szerinti izolált monokionális antitest vagy antigénkötő iragmense, amely antitest vagy az antigénkötő íragmens radiosuklídhoz van konjugálva, mely radlonuklíd a kővetkezőkből álló csoportból választott részecskét bocsát ki; o-részecske, β-foszecske és y-részecske.
-25Ϊ5, Hibridöma, amely 1-4, igéaypostök bármelyike szerinti monoklonális antitestet termel, lő. Készítmény, amely tartalmazza a?. 1. és az 5-9, igénypontok bármelyike szerinti izolált monokionális antitestet vagy anrigénköíő fragmensét és tartalmaz· egy győgyászatilag elfogadható hordozót,
17. Reagenskészlet temordiagnózisra, amely az 1-9. Igénypontok bármelyike szerinti izolált moneklonális antitestet vagy ssttgénkötő fegmensét és használati utasítást tartalmaz;,
IS, A 17. igény-pont szerinti reagenskészlet, ahol a diagnosztizálandó ismer a kővetkezőkből álló csoportból van kiválasztva: csecsemőmirigy limloma, T-sejtes tömör, 8-sejtes limloma, msianóma, osztcoszarkőtna, és aktit T-séjfes lenkétnia.,
19. Tumorseit-célzó ágens, amely tartalmazza az 1-4. Igénypontok bármelyike szerinti Izolált monoklosáüs antitestei vagy aniigénkötó fragmensét, klmoíathaíő jelölőhöz vagy toxikus molekuiarészlethez konjugálva.
20. A 19. igénypont szerinti ágens, ahol a moiekularesslet a következőkből álló csoportból van kiválasztva:: radioaktív molekula, rsdionnkliá, radtoizotőp és toxin,
21. Az: I -4. Igénypontok bármelyike szerinti izolált monoklonális antitest vagy antlgénkőtő firagmense alkalmazása egy alanyban tomorsejt kimutatására szolgáló készítmény készítésében, ahol a készítmény szelektív kötődése az alanyból származó sejtxoiníáboz olyan: körülmények között, amelyek elégségesek szelektí v kötés kialakulásához, jelzi a tumersejt. jelenlétét az alanyban,
22. A '21, igénypont szerinti alkalmazás, ahol a tumorsejt csecsemőmirigy iímföma», B-sejtes Imtfőma-, nelanöma-, oszteoszarkőma- vagy akut T-sejtes leukémiasejt,
23. A 21. igénypont szerinti alkalmazás, altos a tumorsejí egy páciensben található,
24. Az 1-4. igényponíok bármelyike szerinti izolált monoklonális antitest vagy antigénkötő fragmesse alkalmazása tomorsejt proliferáclő gátlására szolgáló gyógyszer készítésében.
25. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti Izolált monoklonális antitest vagy antigénkötő íragmense
26. A 25, igénypont szerinti alkalmazás, ahol a sejt a kővetkezőkből álló csoportból választott tostsejt: csecsemőmirigy limfőma, T-sejtes tumor, S-seltes limfőma, melanőma, oszteoszarkőma és akut T-sejies lénkémla.
27. A 25. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a sejt in vuro vagy m w? környezetben található,
28. A 19. vagy 20, igénypont szerinti célzó ágens alkalmazása molekularészlete-t emlősben szelektíven tioorsejtbe juttató készítmény előállításában.
29. Eljárás fehérje Izolálására, arra/ /eí/ernezve, hogy;
leltéi jókét tartalmazó mintát erintkeztetünk az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti Izolált monoklonális antitesttel vagy antigénkötő foagmensével annyi ideig és olyan körülmények között, amely elegendő annak biztosítására, hogy ;mf test-lekérje komplexek képződjenek;
a komplexet (ha képződött) eltávolítjuk a mániából; és a fehérjét eltávolítjuk a komplexből, miáltal a fehérjét izoláljuk.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14533799P | 1999-07-23 | 1999-07-23 | |
| PCT/US2000/019589 WO2001007481A1 (en) | 1999-07-23 | 2000-07-18 | Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0202270A2 HUP0202270A2 (en) | 2002-10-28 |
| HUP0202270A3 HUP0202270A3 (en) | 2012-09-28 |
| HU229416B1 true HU229416B1 (en) | 2013-12-30 |
Family
ID=22512634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0202270A HU229416B1 (en) | 1999-07-23 | 2000-07-18 | Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1200476B1 (hu) |
| JP (2) | JP4842476B2 (hu) |
| KR (1) | KR20020034164A (hu) |
| CN (1) | CN1390233A (hu) |
| AT (1) | ATE432292T1 (hu) |
| AU (1) | AU6221200A (hu) |
| BR (1) | BR0012704A (hu) |
| CA (1) | CA2380066C (hu) |
| CZ (1) | CZ303771B6 (hu) |
| DE (1) | DE60042273D1 (hu) |
| ES (1) | ES2327894T3 (hu) |
| HU (1) | HU229416B1 (hu) |
| IL (2) | IL147810A0 (hu) |
| MX (1) | MXPA02000846A (hu) |
| NO (1) | NO329234B1 (hu) |
| NZ (2) | NZ530390A (hu) |
| PL (1) | PL204822B1 (hu) |
| PT (1) | PT1200476E (hu) |
| RU (1) | RU2002104713A (hu) |
| WO (1) | WO2001007481A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA200200856B (hu) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8173127B2 (en) | 1997-04-09 | 2012-05-08 | Intellect Neurosciences, Inc. | Specific antibodies to amyloid beta peptide, pharmaceutical compositions and methods of use thereof |
| US6693176B1 (en) | 1999-07-23 | 2004-02-17 | University Of Massachusetts | Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof |
| JP4842476B2 (ja) * | 1999-07-23 | 2011-12-21 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | 抗腫瘍抗体、タンパク質、及びそれらの使用 |
| WO2003049704A2 (en) | 2001-12-11 | 2003-06-19 | University Of Massachusetts | Antibodies to treat cancer |
| CN1468956A (zh) * | 2002-07-15 | 2004-01-21 | 杨 琴 | 高效表达治疗肿瘤的抗体的重组病毒及其用途 |
| US20040115204A1 (en) | 2002-12-11 | 2004-06-17 | Fanger Gary R. | Antibodies to treat cancer |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5104652A (en) * | 1986-11-13 | 1992-04-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Compositions and method for treatment of cancer using monoclonal antibody against GD3 ganglioside together with IL-2 |
| IE873057L (en) * | 1986-11-13 | 1988-05-13 | Tretorn Ab | Compositions and method for treatment of cancer using¹monoclonal antibody against gd3 ganglioside together eith¹il-2 |
| JP4842476B2 (ja) * | 1999-07-23 | 2011-12-21 | ユニバーシティ オブ マサチューセッツ | 抗腫瘍抗体、タンパク質、及びそれらの使用 |
-
2000
- 2000-07-18 JP JP2001521950A patent/JP4842476B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-07-18 NZ NZ530390A patent/NZ530390A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 ES ES00948759T patent/ES2327894T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-18 PL PL353872A patent/PL204822B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 EP EP00948759A patent/EP1200476B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-18 RU RU2002104713/13A patent/RU2002104713A/ru not_active Application Discontinuation
- 2000-07-18 MX MXPA02000846A patent/MXPA02000846A/es active IP Right Grant
- 2000-07-18 AU AU62212/00A patent/AU6221200A/en not_active Abandoned
- 2000-07-18 IL IL14781000A patent/IL147810A0/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 KR KR1020027000972A patent/KR20020034164A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-07-18 AT AT00948759T patent/ATE432292T1/de active
- 2000-07-18 HU HU0202270A patent/HU229416B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 PT PT00948759T patent/PT1200476E/pt unknown
- 2000-07-18 DE DE60042273T patent/DE60042273D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-07-18 CZ CZ20020288A patent/CZ303771B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 WO PCT/US2000/019589 patent/WO2001007481A1/en active Application Filing
- 2000-07-18 NZ NZ516771A patent/NZ516771A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-07-18 BR BR0012704-3A patent/BR0012704A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-07-18 CA CA2380066A patent/CA2380066C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-07-18 CN CN00813253A patent/CN1390233A/zh active Pending
-
2002
- 2002-01-22 NO NO20020329A patent/NO329234B1/no not_active IP Right Cessation
- 2002-01-30 ZA ZA200200856A patent/ZA200200856B/en unknown
-
2007
- 2007-11-22 IL IL187595A patent/IL187595A/en not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-05-06 JP JP2011103871A patent/JP2011219477A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7781212B2 (en) | Antitumor antibodies, proteins, and uses thereof | |
| US7183384B2 (en) | Monoclonal antibody 7H11 reactive with human cancer | |
| JP2005538682A (ja) | カルボキシックアンヒドラーゼｉｘ（ｃａｉｘ）腫瘍抗原に対する抗体 | |
| CN101423553A (zh) | 抗树突细胞的人单克隆抗体 | |
| JPH05504330A (ja) | ヒトのがん腫と反応する新しい抗体 | |
| EA030182B1 (ru) | Антитела, специфические для кадгерина-17 | |
| EP1184458A1 (en) | Differentially expressed CD46 epitopes, proteinaceous molecules capable of binding thereto, and uses thereof | |
| JP2011219477A (ja) | 抗腫瘍抗体、タンパク質、及びそれらの使用 | |
| WO2001022922A2 (en) | Engineering antibodies that bind irreversibly | |
| US20080031873A1 (en) | Humanized monoclonal antibody 31.1 as an anticancer agent | |
| AU2004289821B2 (en) | Adenocarcinoma specific antibody SAM-6, and uses thereof | |
| PT1360208E (pt) | Anticorpos anti cancerígenos individualizados | |
| US7491801B2 (en) | Identification and development of specific monoclonal antibodies to squamous cell carcinoma | |
| US7118745B1 (en) | Engineering antibodies that bind irreversibly |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |