HU225434B1 - Avian reoviruses belonging to an novel antigenic class of avian reoviruses - Google Patents
Avian reoviruses belonging to an novel antigenic class of avian reoviruses Download PDFInfo
- Publication number
- HU225434B1 HU225434B1 HU0000362A HUP0000362A HU225434B1 HU 225434 B1 HU225434 B1 HU 225434B1 HU 0000362 A HU0000362 A HU 0000362A HU P0000362 A HUP0000362 A HU P0000362A HU 225434 B1 HU225434 B1 HU 225434B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- avian
- reovirus
- vaccine
- reoviruses
- ers
- Prior art date
Links
- 241001516406 Avian orthoreovirus Species 0.000 title claims description 94
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 55
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 claims description 48
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 45
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 33
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 26
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 26
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 238000002962 plaque-reduction assay Methods 0.000 claims description 12
- 241000702244 Orthoreovirus Species 0.000 claims description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 10
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 208000008104 Reoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 230000001902 propagating effect Effects 0.000 claims 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 71
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 40
- 206010025476 Malabsorption Diseases 0.000 description 39
- 208000004155 Malabsorption Syndromes Diseases 0.000 description 39
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 38
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 30
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 15
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 8
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 8
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 7
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 7
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 6
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 5
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 5
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 description 5
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 5
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 4
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 4
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 230000001071 malnutrition Effects 0.000 description 4
- 235000000824 malnutrition Nutrition 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 4
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 4
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 101100423891 Caenorhabditis elegans qars-1 gene Proteins 0.000 description 3
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 3
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 2
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 description 2
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 2
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 2
- 206010033603 Pancreatic atrophy Diseases 0.000 description 2
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000003555 cloaca Anatomy 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 2
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- 208000010370 Adenoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 206010003274 Arthritis viral Diseases 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241001260012 Bursa Species 0.000 description 1
- 241001300198 Caperonia palustris Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N D-alpha-tocopherylacetate Chemical compound CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-CEFNRUSXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 208000017899 Foot injury Diseases 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000004575 Infectious Arthritis Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010061225 Limb injury Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000272458 Numididae Species 0.000 description 1
- 206010031243 Osteogenesis imperfecta Diseases 0.000 description 1
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 208000004760 Tenosynovitis Diseases 0.000 description 1
- 241000711955 Turkey rhinotracheitis virus Species 0.000 description 1
- 235000000384 Veronica chamaedrys Nutrition 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000318 alkali metal phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002917 arthritic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 229940031567 attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 210000003323 beak Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 208000024668 brittle bone disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N d-alpha-Tocopheryl acetate Natural products CC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C ZAKOWWREFLAJOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000002498 deadly effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- -1 dried milk serum Chemical class 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 210000002745 epiphysis Anatomy 0.000 description 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 210000004349 growth plate Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N neutral red Chemical compound Cl.C1=C(C)C(N)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 PGSADBUBUOPOJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical class O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N sulfurothioic S-acid Chemical compound OS(O)(=O)=S DHCDFWKWKRSZHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 229940042585 tocopherol acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/15—Reoviridae, e.g. calf diarrhea virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/12011—Reoviridae
- C12N2720/12034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/12011—Reoviridae
- C12N2720/12211—Orthoreovirus, e.g. mammalian orthoreovirus
- C12N2720/12234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány egy madár- (avian) reovlrusra és ezt a madárreovírust élő, attenuált vagy inaktivált formában tartalmazó vakcinára vonatkozik.
A kereskedelmi brojler- (grill)-csirke tenyésztése az elmúlt néhány tíz év alatt iparággá fejlődött, amely az élő állomány elkülönített nevelésében nagyfokú hatékonysággal jellemezhető. Azonban az erős tendenciát, hogy megnöveljék a tenyésztőfázis hatékonyságát, néhány ebben rejlő nehézség kíséri. Leginkább említésre méltó a fertőző betegségek fokozott előfordulása, amely gyakran a nagy sűrűségű, zárt, szűk helyen lévő állatpopulációkban fordul elő. A legpusztítóbb betegségek közül szárnyasokban már sokat lecsökkentettek, vagy leküzdötték vakcinálással vagy terápiás szerekkel, mint például antibiotikumokkal történő kezeléssel. Sajnálatos módon azonban még számos összetett etiológiájú betegség nem gyógyítható gyógyszerekkel, és ezekre megfelelő vakcinálóprogram sem áll rendelkezésre.
Az 1970-es évek végétől kezdve a baromfiipar szembetalálta magát ilyen komplex betegségekkel azokban a brojlercsirkékben, amelyek enterális problémáktól szenvednek. Egyik ilyen betegség, amely különböző tüneteket eredményez a megtámadott csirkékben, beleértve az enteritiszt, a fő klinikai tünete és egy makroszkopikus megfigyelés alapján nevezték el: felszívódásizavar-szindróma (malabsorption syndroma=MAS). Másképpen ezt a betegséget fertőző elsatnyulási szindrómaként, fénytelenmadár-betegségként vagy törékenycsont-betegségként is jelölik. Ámbár nagyszámú különféle betegségi állapot összekapcsolódik a MAS-sal, minden esetben gyenge növekedést és visszamaradott tollazatot figyeltek meg. Ezenkívül egyéb tünetek és károsodások széles variációját, mint például mortalitás, túl híg fécesz és/vagy rosszul emésztett táplálék kiválasztása, pankreatikus atrófia (hasnyálmirigy-sorvadás), proventrikulitisz, csontelváltozások, a timusz és bursa atrófiája stb. összefüggésbe hozták a MAS-sal.
Kouwenhoven és munkatársai (Avian Pathology 17, 879-892, 1988) az alábbi öt kritériummal határozták meg a MAS-t:
(i) fejlődési rendellenesség egynapos csirkék megfertőződése után 3 hétig, (ii) narancssárga nyálkaszerű (mucoid) kiválasztás nedves cseppekké, (iii) megnövekedett plazma alkáli-foszfatáz (ALP)-aktivitás, (iv) lecsökkent plazma-karotenoidkoncentráció (PCC), (v) a tibia proximális epifízisében makroszkopikusan kiszélesedett növekedési lemezek.
A brojlercsirkék visszamaradott növekedése nyilvánvalóvá válik egyhetes korukban vagy még korábban. A madarak 5-20%-a tömegesen megfertőzödhet, és ezek a madarak fele akkora méretűek vagy kisebbek lesznek azonos korú párjaiknál 4 hetes korukban. A megtámadott szárnyasok rosszul emésztik meg a táplálékot, és a belek fénytelenek és emésztetlen táplálékot tartalmaznak.
Bár a MAS patogenezise kevéssé ismert, ennek a szindrómának lehetséges patogenezise a fertőző ágens(ek) közvetlen támadása az emésztőtraktusban és az ehhez kapcsolódó szervekben, ami meg is magyarázhatja a túl híg fécesz és/vagy alulemésztett táplálék ismétlődő szekrécióját.
Az itt leírt szindróma a teljesítőképesség általános hiányát eredményezi, beleértve a csökkent súlygyarapodást, a rossz táplálékátalakítást és a megtámadott szárnyasok csökkent értékesíthetőségét. A MAS következtében a baromfiipar évente súlyos gazdasági veszteségeket szenved. Ezért a baromfiiparnak szüksége van egy módszerre a MAS leküzdésére, hogy a brojlercsirkékben megfigyelt, egymással összefüggő betegségi állapotok közül egyet vagy többet meg lehessen előzni.
A reovírusok szárnyasokban az egész világon előfordulnak. A reovírusokról kimutatták, hogy egy arthritises állapot, melyet vírusos arthritisnek, illetve ínhüvelygyulladásnak (tenosynovitis) neveznek, okozó ágense azáltal, hogy megfertőzi a fő testtömeget hordozó ízületi tokokat és inakat a lábakban.
Néhány közlemény szerint izoláltak is reovírusokat olyan csirkékből, amelyek MAS-sal összefüggő betegségi állapotokat mutattak. Ezekben a cikkekben arra a következtetésre jutottak, hogy a reovírusok etiológiai kapcsolatban állnak egy vagy több MAS-sal összefüggő betegségi állapottal, de a reovírusok MAS-ban játszott szerepére határozott bizonyítékot nem szolgáltatnak ezekben.
In van dér Heide és munkatársai (Avian Diseases 25, 847-856, 1981) egy reovírust izoláltak fiatal brojlerek beleiből, amelyek a klinikai diaré (hasmenés) tüneteit mutatták. Bár ez a reovírusizolátum képes volt az ínhüvely-gyulladásos károsodásokat és a combcsontfejen töréseket és oszteoporózist kiváltani, ez az ízolátum nem okozott folyamatosan hasmenést a reovírussal kísérletesen megfertőzött csirkékben.
Page és munkatársai (Avian Diseases 26, 618-624,1982) reovírusokat izoláltak egy szárnyasból, melynél mozgásképtelenséget, a fejlődés leállását és a tollazat hibás fejlődését tapasztalták. Habár a fogékony brojler típusú csirkék orális inokulálása az izolátummal egyértelmű hatást eredményezett a súlygyarapodásban, a tollazat fejlődésében és károsodásokat idézett elő számos szervben, a diaré vagy nedves alom indukálását nem közölték.
Hieronymus és munkatársai (Avian Diseases 27, 246-254, 1983) néhány reovírustörzs izolálását közölték gyaníthatóan MAS-os csirkék beleiből, és meghatározták ezeknek a törzseknek az antigenikus rokonságát az S1133 reovírustörzzsel, amelyet szokásosan használnak vakcinálótörzsként a fertőző ínhüvelygyulladás megelőzésére. A szerzők megerősítik, hogy annak ellenére, hogy a reovírusokat klinikai MAS-ban szenvedő csirkékből izolálták, azt be kell bizonyítani, hogy a reovírusok a MAS okozó ágensei.
Eidson és munkatársai (Poultry Science 64, 2081-2086, 1985) megvizsgálták egy inaktivált reovírusvakcina hatását, amely a Hieronymus és munkatársai által izolált C08 törzsből származott, egy sereg brojlercsirkében, amelyeknél MAS-sal, valamint ínhüvelygyulladással kapcsolatos problémákat tapasztaltak.
HU 225 434 Β1
Habár a vakcina pozitív hatást mutatott a brojlerpopuláció testtömegére, nem volt különbség a megfigyelt táplálékátalakításban. Továbbá azt közölték, hogy a vakcina semmilyen hatást nem gyakorolt az enteritiszhez (bélhurut) kapcsolódó betegségi állapotokra, mint például a nedves alom tünetre.
Rosenberger és munkatársai (Avian Diseases 33, 535-544, 1989) is izoláltak néhány reovírustörzset inakból és csontvelőből szabadon tenyésztett kereskedelmi brojlercsirkékből. Bár a reovírustörzzsel beoltott csirkéket megvizsgálták klinikai betegségre, a diaré vagy a nedves alom tüneteit nem írták le.
Kouwenhoven és munkatársai (Avian Pathology 17, 879-892, 1988) szintén megvizsgálták a reovírusok szerepét a felszívódásizavar-szindrómában. Ezek a szerzők nem tudták reprodukálni a MAS-t egy szabadban nevelt csirkéből izolált reovírussal, és azt a következtetést vonták le, hogy nem a reovírus az elsődleges etiológiai ágense a MAS-nak. Azt is feltételezték, hogy a fertőző ágensek, beleértve a reovírusokat és adenovírusokat, a felszívódási zavar szindrómában valamely jelenséget kiváltó okként hathatnak.
Azonban, a fenti publikációkban említetteken kívül számos egyéb vírus is kapcsolatban áll a MAS-sal. Ezek közé tartoznak a rotavírusok, parvovírusok, enterovírusszerű vírusok, togavírusszerű vírusok, coronavírusszerű vírusok, adenovírusok és calicivírusok. Ráadásul azt is feltételezik, hogy a baktériumok is szerepet játszanak az etiológiában. A MAS-szerű szindrómákat a mycotoxinoknak is tulajdonítják a technika állása szerint, és úgy vélik, hogy a mycotoxinokat vagy más toxinokat nem lehet figyelmen kívül hagyni a MAS-t okozó ágensek között.
Egy közelmúltban publikált tanulmányban (World Poultry 14, 57-58, 1998) McNuIty összegezte a MAS-ra vonatkozó technika állását. McNuIty kihangsúlyozta egy MAS elleni vakcina nemhasználhatóságát, és megállapította, hogy a vírusizolátumok, valamint a szabadon neveltekből izolált minták virológiái és mikrobiológiai vizsgálatai - melyeket eddig közöltek - nem nyújtottak felhasználható eredményeket a MAS-t okozó ágensének vagy ágenseinek azonosítását tekintve. McNuIty ebből elméletileg arra a következtetett, hogy ez a fajta megközelítés valószínűleg nem hoz felhasználható eredményeket. Ehelyett az irányított mérések a MAS által megtámadott termelési helyeken tekinthetők legjobb fegyvernek a MAS leküzdésére.
Ezért még mindig szükség van egy olyan vakcinára, amely hatásos védelmet vált ki bizonyos, csirkékben tapasztalt enterális problémákkal szemben, mint például a MAS-sal összefüggő enterális problémák, amelyek a túl híg fécesz és/vagy rosszul emésztett táplálék kiválasztását eredményezik.
Ezen túlmenően a madárreovírusok figyelemre méltó heterogenicitást mutatnak, és a madárreovírusok új antigéntulajdonságú osztályainak a felbukkanása jelentős bonyodolmakat okozhat a reovírusvakcinák felhasználását tekintve szárnyasokban.
A jelen találmány feltalálói a madárreovírusok egy új antigénosztályát azonosították. Továbbá azt is kimutatták, hogy ehhez az új antigénosztályhoz tartozó madárreovírusok képesek olyan kifejezett betegségi állapotokat indukálni, amelyek szintén összefüggenek a MAS-sal, mint például a túl híg fécesz és/vagy alulemésztett táplálékkiválasztás és a növekedés visszamaradása.
Ennélfogva a találmány feladata a MAS-szerű betegségi állapotot okozó ágensének azonosítása, amely a madárreovírusok egy új antigénosztályába tartozik.
A találmány feladata másrészt egy olyan vakcina kidolgozása, amely szárnyasokban hatékony védelmet nyújt az új antigénosztályba tartozó madárreovírusok által okozott betegséggel szemben.
A találmány feladata továbbá egy olyan vakcina kidolgozása, amely hatékony védelmet biztosít szárnyasokban olyan enteriális betegségi állapot ellen, amely összefüggésben van a MAS-sal is.
Azt találtuk, hogy a találmány ezen feladatai a madárreovírusok egy új antigénosztályába tartozó madárreovírus biztosításával megoldhatók, amelyre az jellemző, hogy az antigénosztályba tartozó madárreovírus antiszérumot képes indukálni egy állatban, amely antiszérum a madár-ERS-reovírus - amelynek egy mintáját az ECACC-nél (Salisbury, Nagy-Britannia) letétbe helyeztük 99011475 deponálási számon - által képzett plakkok csökkenését okozza legalább 75%ban egy plakkredukciós vizsgálatban.
Vizsgálataink során azt találtuk, hogy az ilyen madárreovírusok nemcsak az eddig ismeretlen antigéntulajdonságokat mutatják (lásd 1. példa, 2. és 3. táblázat), hanem azt is megfigyeltük, hogy a találmány szerinti madárreovírusok képesek brojlercsirkékben a túl híg fécesz és/vagy alulemésztett táplálék kiválasztását elindítani, sőt néhány esetben még az állat pusztulásához is vezetnek. Ezért az új madárreovírust enterális reovírustörzsnek (ERS) neveztük el.
Brojlercsirkéknél a vizes fécesz ürítése az egyik olyan betegségi tünet, amelyet általánosan megfigyeltek a szabadon tartott MAS-ban szenvedő brojlereknél. Emellett az is előre várható, hogy ez a klinikai betegségi állapot a legkifejezettebb klinikai tünetek, azaz a növekedés visszamaradása, okozóinak egyike MAS által megtámadott brojlerekben. A példákban bemutatjuk, hogy egy találmány szerinti madárreovírus ezzel a reovírussal orálisan megfertőzött brojlerekben híg, vizes fécesz kiválasztását indukálja, azaz a madarak kloákája körül egy odaragadt felrakódás figyelhető meg. A példákban elvégzett kísérletek azt is megmutatják, hogy az új madárreovírussal történő orális fertőzés a növekedés visszamaradását is eredményezi a megfertőzött brojlerekben, amikor a kontrollcsirkékkel összehasonlítjuk azokat.
A plakk- (folt-) redukciós assay egy olyan vizsgálat, amelyet széleskörűen alkalmaznak a szakterületen a (madárreo)vírus-izolátumok közötti antigenikus rokonság meghatározására (lásd például Nersessian és munkatársai: Am. J. Vet. Rés. 50, 1475-1480, 1989). Ezen túlmenően a jelen találmány céljára a plakkredukciós assay-t részletesen le is írtuk az 1. példában. Magától értetődő, hogy a plakkredukciós vizsgálathoz fel3
HU 225 434 Β1 használt antiszérumnak megfelelő minőségűnek kell lennie. Az ilyen antiszérumok előállítási eljárásait szintén ismertettük az 1. példában.
Általánosan, élő madárreovírusok ellen kifejlesztett megfelelő antiszérumot úgy termelhetünk, hogy 3-4 hetes SPF-csirkéket szubkután vagy intramuszkulárisan egy élő vírustörzzsel inokulálunk, melynek fertőző titere 102'°-109’° TCID50/állat, még előnyösebben 103’°-106’° TCID5o/állat. A vért 3-4 héttel a fertőzés után, előnyösen 4 héttel a fertőzés után összegyűjthetjük. A csirkéket újra be is olthatjuk ugyanazzal az élő vírustörzzsel 3-4 héttel az első oltást követően megközelítőleg ugyanazzal a dózissal, mint amilyent az első oltáskor alkalmaztunk. A vért 2-4 héttel a második oltás után gyűjtjük össze.
Inaktivált madárreovírus-törzsek ellen termelt alkalmas antiszérumot úgy kaphatunk, hogy 3-4 hetes SPF-csirkéket szubkután vagy intramuszkulárisan beoltunk inaktivált víruskészítménnyel. A készítmény fertőző titere az inaktiválás előtt 1070-1011’° TCID5o/állat, még előnyösebben 108·°-/101θ·° TCID50/állat lehet. A vért 3-4 héttel a fertőzés után, előnyösen 4 héttel a fertőzés után gyűjthetjük össze. A csirkéket beolthatjuk újra ugyanazzal az inaktivált víruskészítménnyel 3-6 héttel az első oltást követően. A vért 2-4 héttel a második oltás után gyűjtjük össze.
A találmány szerinti új madárreovírus azonosítása lehetővé teszi új madárreovírus-vakcinák előállítását, amelyek hatékonyan megvédhetik a szárnyasokat olyan betegségekkel szemben, amelyeket a madárreovírusok új antigénosztálya általi fertőzés okoz. Különösen az új madárreovírusok lehetővé teszik olyan új madárreovírus-vakcinák előállítását, amelyek hatékonyan megvédik a szárnyasokat olyan betegségi állapotokkal szemben, mint például a túl híg fécesz és/vagy alulemésztett táplálék kiválasztása és a növekedés visszamaradása. Az ilyen betegségi állapotok társulnak a MAS-hoz is.
A találmány szerinti madárreovírusokat izolálhatjuk a terepen is. Az izolálási eljárás egyik lényeges szempontja a vírusizolálás kiindulási pontjaként használt célállat azonosítása. Erre a célra alkalmas tipikus brojler a következő tüneteket mutatja: túl híg fécesz és/vagy alulemésztett táplálék kiválasztása, ami a növekedés visszamaradását eredményezi.
Ezt követően a beleket izoláljuk az ilyen tüneteket mutató csirkékből, majd a szervet egy alkalmas pufferben homogenizáljuk. Ezután a homogenizált szövetet centrifugáljuk, és a felülúszót 0,2 μπη-es szűrőkön átszűrjük. A szűriet egy részét hozzáadjuk frissen preparált primer csirkesejtekhez, előnyösen csirkeembrió-májsejtekhez (CÉL), és 4-8 napos inkubálás után az egysejt-réteget megvizsgáljuk citopatikus hatás (CPE) jelenlétére. Ha citopatikus hatást nem észlelünk, az első egysejt-réteg fagyasztott/felengedett szuszpenzióját hozzáadjuk frissen preparált CEL-sejtekhez. Ha az első vagy második passzálás után citopatikus hatást (CPE) észlelünk, akkor a vírust tovább jellemezzük in vivő tulajdonságai révén, hogy brojlerekben indukálja-e a túl híg fécesz és/vagy alulemésztett táplálék kiválasztását, és az antigenikus tulajdonságai révén, melyeket plakkredukciós vizsgálatban vagy immunfluoreszcens technikával (IFT) az alábbiakban leírt, specifikus poliklonális és monoklonális antitestek felhasználásával kivitelezünk. Egy találmány szerinti madárreovírus még részletesebb izolálási eljárását az 1. példában ismertetjük.
Bár a beleket használjuk az eljárásban a találmány szerinti madárreovírus izolálásához előnyös kiindulási anyagként, a madárreovírust izolálhatjuk a tüneteket mutató csirkék májából vagy az ilyen brojlercsirkék által ürített féceszből. Azt sem lehet kizárni, hogy más szervek is kiindulási anyagokként szolgálhatnak a találmány szerinti madárreovírus izolálására.
Előnyösen a találmány egy fentiekben leírt madárreovírusra vonatkozik, amely madárreovírus ellen termelődött antiszérum képes a madár-ERS-reovírus által formált plakkokat csökkenteni legalább 80%-ban, előnyösen legalább 90%-ban egy plakkredukciós vizsgálatban. Az ERS-reovírus mintáját az ECACC-nél (Salisbury, Nagy-Britannia) letétbe helyeztük 99011475 deponálási számon.
A találmány egy még előnyösebb kiviteli módjában egy olyan madárreovírust nyújt, amely egy specifikus immunológiai reakciómintázatot mutat poliklonális antiszérum és monoklonális antitestek (Moabs) egy specifikus paneljével. Ez a specifikus reakciómintázat különbözik az eddig ismert madárreovírusok által bemutatottaktól.
Monoklonális antitesteket használunk egy fertőző ágens jellemzőinek azonosítására, és azonos vagy hasonló mikroorganizmusok különböző izolátumai közötti azonosságok és eltérések meghatározására. Vakharia és munkatársai (Proceedings of the International Symposium on adenovirus and reovirus infections in poultry, Rauischholzhausen, Németo., 1996, 295-304) leírták 9 reovirus elleni antitest paneljét, és madárreovírus szabad földi izolátumokat teszteltek ezekkel az antitestekkel mutatott reaktivitásukra.
A találmány ezen előnyös kiviteli alakjában a fent leírt madárreovírus tovább jellemezhető (i) reaktivitásával IFT-ben egy madárreovírus-izolátum, előnyösen a prototípus 1133 reovírustörzs ellen kifejlesztett poliklonális antiszérummal, és (ii) a reaktivitás hiányával IFTben az INT 13-06, INT 14-11 és 15-01 INT monoklonális antitestekkel (melyek mintáit 99011472, 99011473 és 99011474 deponálási számon helyeztük letétbe az ECACC-nél).
A találmány szerinti madárreovírus meghatározható egy panelmintázattal, amely a reovírusok egy új antigéntípusát reprezentálja, amint azt az 1. példában és a 3. táblázatban bemutatjuk. Annak a ténynek ellenére, hogy számos, a technika állásából ismert, 3. táblázatban bemutatott reovírustörzset izoláltak MAS-sal összefüggő tüneteket és léziókat mutató brojlercsirkék szöveteiből (beleértve a beleket is), a találmány szerinti madárreovírusok olyan új antigenikus tulajdonságokkal rendelkeznek, melyeket eddig a technika állásában még sehol nem ismertettek.
Egy még előnyösebb találmány szerinti madárreovírus a madár-ERS-reovírus (1. izolátum), amely jel4
HU 225 434 Β1 lemző a találmány szerinti madárreovírusokra, és amelynek egy mintáját 99011475 deponális számon helyeztük letétbe az ECACC-nél.
A találmány szerinti madárreovírus élő, attenuált (legyengített) élő vagy inaktivált formában lehet.
A találmány további tárgyát egy vakcina képezi szárnyasok madárreovírus-fertőzésből származó betegségi állapotokkal, így például MAS-ban megfigyelt enterális betegségi állapotokkal szembeni védelmében való felhasználásra, amely egy találmány szerinti madárreovírust és egy gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy hígítót tartalmaz.
A találmány szerinti madárreovírust legyengített élő vagy inaktivált vírusként építhetjük be a vakcinába. A madárreovírus azon tulajdonsága, hogy MAS-sal összefüggő betegségi állapotokat indukál, amint a fentiekben leírtuk, szignifikánsan csökken vagy teljesen megszűnik, ha a madárreovírust élő, legyengített vagy inaktivált formában alkalmazzuk.
A találmány szerinti madárreovírus legyengítését a szakterületen erre a célra ismert módszerek szerint érhetjük el, mint például Gouvea és munkatársai által leírt módszerrel (Virology 126, 240-247, 1983). Közelebbről, miután a vírust a célállatból izoláltuk, a vírusszuszpenziót ráoltjuk primer csirkeembrió-fibroblasztokra (CEF). Ha az izolátum nem eredményez CPE-t, abban az esetben a vírust ismételten (például 3-10-szer) passzáljuk, amíg CPE nem figyelhető meg. Amint a CPE vizuálisan megfigyelhető, a sejteket és a folyékony sejttenyészeteket összegyűjtjük, lefagyasztjuk és felengedjük, áttetszőre centrifugáljuk, és a madárreovírus-izolátumot tartalmazó felülúszót aliquotokra osztjuk és -20 °C-on fagyasztva tároljuk. Ezt az eljárást a vírus további legyengítésére megismételhetjük (például 10-100 alkalommal).
A találmány szerinti vakcinát konvencionális módszerekkel állíthatjuk elő, melyeket például szokásosan alkalmaznak a kereskedelemben kapható élő és inaktivált reovírusvakcinák előállítására. Az állatgyógyászati vakcinakompozíciók előállítása többek között megtalálható az alábbi kézikönyvekben: „Handbuch dér Schutzimpfungen in dér Tiermedizin” (szerkesztő: Mayr A. és munkatársai, Paul Parey Verlag, Berlin és Hamburg, Németo., 1984) és „Vaccines fór Veterinary Applications” (szerk.: Peters A. R. és munkatársai, Butterworth-Heinemann Ltd, 1993).
Részletesebben, egy megfelelő szubsztrátot inokulálunk egy találmány szerinti madárreovírussal élő vagy élő, legyengített formában, és addig szaporítjuk, amíg a vírus a kívánt vírustiterre vagy antigéntartalomra replikálódott, miután a reovírust tartalmazó anyagot összegyűjtjük és profilaktikus aktivitású gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
Minden olyan szubsztrátot, amely képes fenntartani a fentiekben definiált madárreovírusok replikációját, szükség esetén a madárreovírusok szubsztráthoz történő adaptálása után, fel lehet használni a találmány szerinti vakcina előállításához. Alkalmas szubsztrátok közé tartoznak a primer (madár) sejttenyészetek, mint például csirkeembrió-májsejtek (CÉL), csirkeembrió-fibroblasztok (CEF) vagy csirkevesesejtek (CK), emlőssejtvonalak, mint például VERO-sejtvonal vagy a BGM-70 sejtvonal, vagy madársejtvonalak, mint például QT-35, QM-7 vagy LMH. Rendszerint a sejtek inokulálása után a vírust 3-10 napon keresztül szaporítjuk, ezután a sejttenyészet felülúszóját leszedjük, és kívánt esetben szűrjük vagy centrifugáljuk a sejttörmelék eltávolítása céljából.
Alternatív megoldásként a találmány szerinti madárreovírust embriót tartalmazó csirketojásokban is szaporíthatjuk, ezt követően rutinmódszerekkel a madárreovírust tartalmazó anyagot összegyűjtjük.
A találmány szerinti, élő attenuált vírust tartalmazó vakcina (fagyasztott) szuszpenzió formájában vagy liofilizált formában állítható elő és hozható forgalomba. A vakcina továbbá tartalmaz egy gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy hígítót, mint amilyent szokásosan az ilyen kompozíciókhoz használnak. A hordozók magukban foglalják a stabilizátorokat, prezerválókat és puffereket. Alkalmas stabilizátorok például az SPGA, szénhidrátok (mint például szorbit, mannit, keményítő, szacharóz, dextrán, glutamát vagy glükóz), fehérjék (mint például szárított tej szérum, albumin vagy kazein) vagy mindezek lebomlási termékei. Alkalmas pufferek közé tartoznak például az alkálifém-foszfátok. Megfelelő prezerválószerek lehetnek a timerozál, mertiolát és gentamicin. Hígítókként szóba jöhetnek a víz, vizes pufferoldatok (mint például pufferolt sóoldat), alkoholok és poliolok (mint például a glicerin).
Kívánt esetben a találmány szerinti élő vakcinák egy adjuvánst is tartalmazhatnak. Alkalmas, adjuváns aktivitással rendelkező vegyületekre és kompozíciókra példaként ugyanazok szolgálnak, melyeket az alábbiakban az inaktivált vakcinák előállításánál említünk.
Habár a találmány szerinti élő vakcina beadása injekció formájában, például intramuszkulárisan, szubkután lehetséges, az élő vakcinát előnyösen nem költséges tömeges beadási technikákkal adjuk be, melyeket madárreovírus-vakcinálásra szokásosan alkalmaznak. Ilyen technikák közé tartozik az ivóvízzel történő beadás és a spray-vakcinálás.
Az élő vakcina beadására szolgáló egyéb módszerek közé tartozik az in ovo, szemcsepp és csőrbemerítéses beadási mód.
A találmány egy előnyös kiviteli alakjában egy olyan vakcinát bocsát rendelkezésre enterális betegségi állapotok, mint amilyeneket MAS-sal összefüggésben megfigyeltek, ellen, amely a madárreovírust inaktivált formában tartalmazza. Az inaktivált vakcina legfőbb előnye, hogy a védőantitestek emelt szintjét hosszú időn keresztül biztosítani tudjuk. Ez a tulajdonság az ilyen inaktivált vakcinát különösen alkalmassá teszi a tenyésztő számára vakcinálásra.
A szaporítási lépés után begyűjtött vírusok inaktiválásának célja, hogy kiküszöböljük a vírusok reprodukcióját. Általánosságban, ez kémiai vagy fizikai eszközökkel érhető el. A kémiai inaktiválást megvalósíthatjuk a vírusok például enzimekkel, formaldehiddel, β-propiolaktonnal, etiléniminnel vagy ezek származékaival történő kezelésével. Szükség esetén az inaktivált ve5
HU 225 434 Β1 gyületet ezt követően neutralizáljuk. A formaldehiddel inaktivált anyagot például tioszulfáttal semlegesíthetjük. A fizikai inaktiválást előnyösen úgy kivitelezhetjük, hogy a vírusokat energiában gazdag sugárzásnak, mint például UV fénynek vagy gamma-sugárzásnak tesszük ki. Kívánt esetben a kezelés után a pH-t beállíthatjuk körülbelül pH 7 értékre.
Az inaktivált madárreovírust tartalmazó vakcina például egy vagy több fent említett gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy erre a célra alkalmas hígítót tartalmazhat.
Előnyösen a találmány szerinti inaktivált vakcina egy vagy több adjuváns aktivitású vegyületet tartalmaz. Erre a célra alkalmas vegyületek vagy kompozíciók közé tartozik az alumínium-hidroxid, -foszfát vagy -oxid, „olaj a vízben” vagy „víz az olajban” emulzió, amely például ásványi olajon alapul, úgymint a Bayol F® vagy Marcol 52® vagy egy növényi olajon, úgymint E-vitamin-acetát, és a szaponinok.
Az inaktivált vakcinákat rendszerint parenterálisan, például intramuszkulárisan vagy szubkután adjuk be.
A találmány szerinti vakcina tartalmazza a madárreovírus hatékony dózisát mint aktív komponenst, azaz az immunizáló madárreovírus-anyagnak azt a mennyiségét, amely immunitást indukál a vakcináit madarakban vagy utódaikban egy virulens vírus által okozott fertőzéssel szemben. Az immunitást úgy definiáljuk, mint egy szignifikánsan magasabb szintű védelem kiváltását egy madárpopulációban a vakcinálás után a nem vakcináit csoporttal összehasonlítva.
Tipikusan a találmány szerinti élő vakcinát 102—109 TCID50 per madár dózisban adhatjuk be, előnyösen 102-106 TCID50 dózistartományban, és az inaktivált vakcina madaranként 104—1010 TCID50 antigénekvivalenst tartalmazhat.
Habár a találmány szerinti madárreovírus-vakcina hatékonyan alkalmazható csirkékben, egyéb szárnyasok is, mint például pulyka, gyöngytyúk és fürj is sikeresen vakcinálhatók ezzel a vakcinával. A csirkékbe beleértjük a brojlereket, a szaporító törzsállományt és a tojásrakó állatállományt.
Mivel az enterális betegségi állapotokat, mint amilyeneket a MAS-sal összefüggésben megfigyeltek, elsősorban brojlercsirkékben írták le, a jelen találmány előnyösen egy olyan vakcinát bocsát rendelkezésre, amely brojlerek védelmére szolgál olyan enterális betegségi állapotokkal szemben, mint amilyeneket a MAS-ban megfigyeltek.
A találmány szerinti élő vagy inaktivált vakcinát kapó állatok kora azonos azokkal az állatokéval, amelyek a jelenleg forgalomban lévő élő vagy inaktivált madárreovírus-vakcinákat kapják. így például a brojlerek vakcinálhatók a találmány szerinti élő attenuált vakcinával közvetlenül egynapos koruktól kezdve. A szülőállomány vakcinálása, mint például a brojler tenyészállatoké, kivitelezhető a találmány szerinti élő, attenuált vagy inaktivált vakcinával vagy ezek kombinációjával. Az ilyen típusú immunizálási program előnyei közé tartozik az egynapos utódok azonnali védelme, amely maternálisan biztosított a fiatal madaraknak vertikálisan tovább adott antitestek által. Egy tipikus tenyésztő vakcinálási program magában foglalja a 6 hetes tenyészállatok vakcinálását egy élő, attenuált vakcinával, majd ezt követően 14-18 hetes korukban egy inaktivált vakcinával. Alternatív módon az élő vakcinálást követheti két inaktivált vakcinával történő vakcinálás 10-12 hetes és 16-18 hetes korban.
A találmány kombinált vakcinákra is vonatkozik, amelyek a találmány szerinti madárreovíruson túl egy vagy több, szárnyasokra nézve más patogén fertőző vakcinakomponenst tartalmaznak. Az ilyen egyéb, szárnyasokra nézve fertőző patogéneket jelentik a madárreovírusok is, amelyek antigenikusan különböznek a találmány szerinti madárreovírusoktól, és magukban foglalják az ínhüvelygyulladással kapcsolatos madárreovírus-törzseket.
Előnyösen a kombinált vakcinában a vakcinakomponensek a szárnyas fertőző patogének élő, attenuált vagy inaktivált formái. Különösen a jelen találmány egy olyan kombinált vakcinát bocsát rendelkezésre, amelyben minden vakcinakomponens inaktivált formában van.
A kombinált vakcina előnyösen a fertőző bronchitisvírus (IBV), a Newcastle-betegség-vírus (NDV), a fertőző burzális betegség vírusa (IBDV), a baromfi-adenovírus (FAV), az EDS-vírus és a pulyka-rinotracheitisvírus (TRTV) egy vagy több (inaktivált) vakcinatörzsét tartalmazza.
A jelen találmány keretében az alábbi mikroorganizmusokat és hibridóma-sejtvonalakat helyeztük letétbe a European Collection of Animál Cell Culturesnél (ECACC=Az Állati Sejt Tenyészetek Európai Gyűjteménye, Salisbury, Nagy-Britannia) 1999. január 14-én:
| vírus/hibridóma | deponálási szám |
| madár-ERS-reovírus | 99011475 |
| INT 13-06 | 99011472 |
| INT 14-11 | 99011473 |
| 15-01 INT | 99011474 |
Példák
1. példa
Az új madárreovírusok jellemzése A
Új madárreovírusok izolálása
A beleket és/vagy a májat egyenként izoláljuk emésztési problémákkal bíró és a növekedés visszamaradásában nedves almot eredményező csirkékből. A szerveket külön-külön homogenizáljuk 20 percen keresztül, maximális fordulatszámon egy homogenizátorban, 2 mm-es üveggyöngyök és antibiotikumot tartalmazó PBS alkalmazásával. A bélhomogenizátumot 4000 ford./perccel, a májhomogenizátumot 1200 ford./perccel 15 percen át centrifugáljuk. Ezt követően a felülúszókat nyomás alatt, csökkenő pórusméretű szűrőkön (5, 1,2, 0,45, 0,2 pm) átszűrjük. A 0,2 pm-es szűrőn átjutott szuszpenzióból 100 μΙ-t hozzáadunk szövettenyésztő edényekben lévő frissen preparált primer csirkeembrió-máj- (CÉL) sejtek6
HU 225 434 Β1 hez. 4-8 napig tartó inkubálás után az egysejt-rétegeket megvizsgáljuk citopatikus hatás (CPE) jelenlétére. Ha citopatikus hatást nem tapasztalunk, az egysejt-rétegeket lefagyasztjuk -20 °C-on, majd 24 óra múlva az egysejt-rétegeket felengedjük. Ezután ennek a fagyasztott/felengedett szuszpenziónak az 1 ml-ét adjuk a frissen készített CEL-sejtekhez. Ha semmilyen citopatikus hatást vizuálisan 4-8 nappal később nem észlelünk, a tenyészetet negatívnak tekintjük a CEL-sejteken történő vírusnövekedésre nézve. Ha az első passzálás vagy a második passzálás után CPE-t figyelünk meg, akkor a vírust tovább jellemezzük a plakkredukciós vizsgálattal és immunfluoreszcens technikával (IFT).
B
Az új madárreovírusok in vitro jellemzése plakkredukciós vizsgálattal
1. Különböző madárreovírus-törzsek elleni antiszérumtermelés
ERS-törzs (élő):
Tíz 3 hetes SPF-csirkét megfertőzünk szubkután az ERS-törzs (2. izolátum) 105·8 TCID50/állat dózisával. Három héttel a fertőzés után a vért összegyűjtjük, és a szérumot izoláljuk, majd az állatokat újra fertőzzük 105·6 TCID50/állat dózissal. Két héttel a második fertőzést követően a vért összgyűjtjük, és a szérumot izoláljuk. Az akvizíció után minden szérumot 56 °C-on, 30 perces hőkezeléssel inaktiválunk, és -20 °C-on kis aliquotokban tárolunk.
2177 jelű törzs (élő):
Tizenöt 4 hetes SPF-csirkét szubkután megfertőzzük a törzs 104’2 TCID50/állat dózisával. Négy hét múlva vért gyűjtünk, és a szérumot izoláljuk. Az akvizíció után minden szérumot 56 °C-on, 30 perces hőkezeléssel inaktiválunk, és -20 °C-on kis aliquotokban tárolunk.
1733 és 2408 jelű törzsek (inaktivált, rövidítve inak.):
Tizenkét 4 hetes SPF-csirkét intramuszkulárisan beoltunk a 1733 vagy 2408 madárreovírus-törzzsel, melyet v/o emulzióval adjuváltunk. Az alkalmazott dózis madaranként 490 Elisa-egység/állat; ami azt jelenti, hogy az inaktiválás előtti fertőző titer 107’°-101°’° TCID50/állat. Négy héttel a fertőzés után a vért összegyűjtjük, és a szérumot izoláljuk. Az akvizíció után minden szérumot 56 °C-on, 30 perces hőkezeléssel inaktiválunk, és -20 °C-on kis aliquotokban tárolunk.
A kereskedelemben kapható, madárreovírus-törzseket tartalmazó, inaktivált vakcinák:
Tíz, 3-4 hetes SPF-csirkét intramuszkulárisan vagy szubkután beoltunk az alábbi kereskedelmi forgalomban lévő inaktivált madárreovírus-vakcinák egyikével: ISBI, Fort Dodge, Kaketsuken és Intervet International BV. Három héttel a fertőzést követően a vért összegyűjtjük, és a szérumot izoláljuk. Az akvizíció után minden szérumot 56 °C-on, 30 perces hőkezeléssel inaktiválunk, és -20 °C-on kis aliquotokban tároljuk azokat.
A fenti módon előállított szérumokat használjuk az IFT- és plakkredukciós vizsgálatokban.
2. Immunfluoreszcens-teszt (IFT)
Az IFT-tesztet lényegében az alábbi C pontban leírtak szerint végezzük. Részletesebben, Vero-sejteket növesztünk 96 lyukú polisztirén mikrotiterlemezeken összefolyásig. A különböző egysejt-rétegeket 1133 reovírustörzzsel inokuláljuk. 100 μΙ csirkeszérumot adunk a lemez első mélyedésébe. Háromszoros szériahigitásokat készítünk. Inkubálás és a mosási lépések után a lemezeket 1:100-ra hígított fluoreszcens izotiocianáttal jelzett kecske anticsirke szérummal reagáltatjuk. A fluoreszcencia megjelenését fluoreszcens mikroszkóppal figyeljük meg. A titert (a szérum értéke) végponthigítással határozzuk meg. Ez a szérumnak az a legnagyobb hígítása, amely még képes egy egyértelmű fluoreszcens jelet indukálni. Az 1. táblázatban a plakkredukciós vizsgálatban használt szérumokkal végzett IFT-k eredményeit mutatjuk be.
1. táblázat
| Madárreovírus-törzs elleni szérum | Véghígítás (Iog2-ben kifejezve) |
| 2177 | 2 025(11,0) |
| ERS | 6 075(12,6) |
| 1733 | 6 075 (12,6) |
| 2408 | 18 225(14,2) |
| Arvax | 75 (6,2) |
| Nobilis Reo | 18 225(14,2) |
| Tri Reo | 18 225(14,2) |
| Oilvax Reo | 6 075(11,6) |
| Negatív szérum | <3 (<1) |
Nobilis Reo™ kereskedelemben kapható, gyártó: Intervet International Β. V.
Arvax™ kereskedelemben kapható, gyártó: ISBI
Tri Reo™ kereskedelemben kapható, gyártó: Fort Dodge
Oilvax Reo™ kereskedelemben kapható, gyártó: Kaketsuken
3. Plakkredukciós assay
Megfelelő minőségű antiszérumot kell használni a plakkredukciós vizsgálatban ahhoz, hogy meghatározhassuk az antigenikus rokonságot az új antigéntulajdonságú osztályba tartozó madárreovírusok között, és hogy megkülönböztethessük az új madárreovírusokat az ismert madárreovírusoktól (az Arvax antiszérum kivételével az összes teljesíti az antiszérummal szembeni minőségi követelményt). ERS-antiszérumot termelünk az élő ERS 1. izolátum és az élő, valamint inaktivált ERS 2. izolátum ellen.
Frissen preparált CEL-sejteket 5% magzati borjúszérummal és antibiotikumokkal kiegészített szövettenyésztő tápközegben 1x106 sejt/ml végkoncentrációig reszuszpendálunk. 60 mm-es szövettenyésztő edényeket megtöltünk 5 ml-nyi sejtszuszpenzióval, és 37 °C-on 24 órán keresztül inkubáljuk azokat.
A következő napon a vizsgálandó vírusokat műanyag csövekben meghígítjuk antibiotikummal kiegészített tápközeggel. 10_1-től 10_7-ig tartó hígítást sorokat készítünk. Minden egyes hígításból 200 μΙ-t összekeverünk a tesztelni kívánt szérum 50 μΙ-ével. Ezt a keveréket 1 órán keresztül 37 °C-on inkubáljuk. Negatív
HU 225 434 Β1 kontrollként a 200 μΙ vírushlgítást és 50 μΙ tápközeget tartalmazó keverék szolgál.
A 60 mm-es tenyésztőedényekben lévő egysejt-rétegek tetejéről a tápközeget eltávolítjuk és eldobjuk. Ezt követően a különböző víruskeverékekből (szérummal vagy anélkül) 100 μΙ-t rétegzünk az összefolyt egysejt-rétegre. Minden egyes víruskeverékkel legalább két egysejt-réteget (két edényt) fertőzünk meg. A megfertőzött egysejt-rétegeket egy órán keresztül 37 °C-on inkubáljuk. Ezután a fertőzött egysejt-rétegeket befedjük 5 ml agaroldattal (amely tápközeget, FCS-t és antibiotikumokat tartalmaz; végső agarkoncentráció 3,0%; végső FCS-koncentráció 2,5%). Az edényeket 4 napon át 37 °C-on inkubáljuk, majd minden egyes tenyésztőcsészéhez 2 ml neutrális vörös oldatot (0,02%) adunk. Négyórás 37 °C-on végzett inkubálás után megszámoljuk a plakkokat edényenként. Csak azokat a tenyésztőedényeket vesszük figyelembe, amelyek 150 vagy ennél kevesebb plakkot tartalmaznak.
A plakkredukciót a következőképpen számoljuk ki: 5 egy adott vírus plakkjainak száma egy adott hígításnál szérum nélkül egyenlő a 100%-kal. Ezt azután összehasonlítjuk ugyanazon vírushígításnál, de szérummal, talált plakkok számával.
Különböző vírusokkal és szérumokkal végzett első 10 kísérlet eredményeit a 2A. táblázatban mutatjuk be. A 2B. táblázatban megadjuk a jelölt vírusokkal és szérumokkal végzett második kísérlet eredményeit. Az inaktivált ERS-vakcina elleni szérumot úgy termeltük, mint azt az inaktivált 1733/2408 törzsekre leírtuk, azzal 15 az eltéréssel, hogy a vért 5 héttel a vakcinálás után gyűjtöttük.
2A. táblázat
| Vírus | Szérum | ||||||||
| 1733 | 2408 | 2177 | ERS-2 | Nobilis Reo | Arvax | Tri Reo | Oilvax Reo | neg. | |
| inak. | inak. | élő | élő | inak. | inak. | inak. | inak. | - | |
| ERS-1 | 0* | 0 | 0 | 89 | - | ||||
| ERS-2 | 0 | 0 | 0 | 91 | 0 | 0 | 0 | 0 | - |
| ERS-3 | 0 | 100 | - | ||||||
| 1733 | 91 | 85 | - | ||||||
| 2408 | 91 | 87 | - | ||||||
| 2177 | 85 | 83 | - | ||||||
| K255 | 91 | 88 | 98 | - |
* plakkredukció %-ban kifejezve - referencia
2B. táblázat
| Vírus | Szérum | |||
| ERS-2 élő | ERS-1 élő | inaktivált ERS-vakcina | 1133 élő | |
| ERS-2 | 95* | 81 | 89 | 12 |
| ERS-1 | 100 | 100 | nd | nd |
* plakkredukció %-ban kifejezve nd=nem vizsgáltuk
C
Az IFT-vel azonosított új madárreovírusok in vitro jellemzése: antiszérumpanel-reakciómintázat
Poliklonális antiszérumot termelünk megfertőzve 1-1,5 kg-os nyulakat tisztított madárreovírus 1133 törzzsel. Emlékeztető injekciókat adunk be az első fertőzést követő 28. és 84. napon. A vért összegyűjtjük, és a szérumot izoláljuk az utolsó injekció után 14 nappal.
A különböző madárreovírus-törzseket különféle monoklonális antitestekkel jellemezzük. Alapvetően
CEL-sejteket tenyésztünk 96 lyukú polisztirén mikrotiterlemezeken. A nem fertőzött sejtek szolgálnak kontrollként. A lemezeket 2-4 napig 37 °C-on 5% CO2-tartalom mellett inkubáljuk, majd a fertőzött egysejt-rétegeket hideg 96%-os etanollal fixáljuk. Az alkoholt elöntjük, és a lemezeket mosópufferrel mossuk, majd 100 μΙ különböző hibridóma sejttenyészet-felülúszót, melyet 1:50-re vagy 1:200-ra hígítottunk PBS-ben vagy 100 μΙ 1:50-re hígított nyúl poliklonális antiszérumot (nyúl 68A) adunk minden egyes mélyedéshez. A lemezeket 60-90 percig 37 °C-on inkubáljuk, kétszer mosópuffer8
HU 225 434 Β1 rel mossuk és 1:100 hlgítású fluoreszcens izotiocianáttal jelzett nyúl-antiegér szérummal vagy 1:100 hlgítású izotiocianáttal jelzett kecske-antinyúl szérummal reagáltatjuk. Végül a lemezeket mossuk és fixáljuk glicerin/PBS oldattal (1:1). A fluoreszcencia megjelenését fluoreszcens mikroszkóppal figyeljük meg.
Ebben a kísérletben használt antiszérumpanel az alábbi, a 1133 prototípus madárreovírus-törzs ellen kifejlesztett poliklonális antiszérumból és monoklonális antitestekből (Moab) áll:
Nyúl 68A Moab 154
Moab 14-67 Moab INT 13-06 nyúl poliklonális antiszérum Vakharia és munkatársai 1996 (lásd fent)
Intervet International Β. V. ECACC letéti szám 99011472
Moab INT 14-11 ECACC letéti szám 99011473
Moab 15-01 INT ECACC letéti szám 99011474
A madárreovírus-izolátumokat, melyeket a fent leírt módszerrel kaptunk, ezzel az antiszérumpanellel reak5 tivitásuk által tovább jellemezzük. Az új reovírusizolátumok egy eltérő mintázatot adnak a poli- és monoklonális antitestek paneljével. Az eddig ismert madárreovírus-törzsek (S-1133-tól a CO8-ig), melyeket a MAS és az ínhüvelygyulladás szabadban tartott eseteiből 10 izoláltak, nem reagálnak az új mintázat szerint (lásd 3.
táblázat).
Új reakciómintázat
Pozitív: poliklonális nyúl 68A, 154, 14-67 15 Negatív: INT 13-06, INT 14-11, 15-01 INT
3. táblázat
HU 225 434 Β1
D
Az új madárreovírusok in vivő jellemzése Kísérleti fertőzés tisztított ERS-madárreovírus-plakkal
1. kísérlet
Harminc egynapos SPF-csirkét orális megfertőzünk tisztított ERS-reovírusplakkal (1. izolátum). Négy, hét és tíz nappal a fertőzés után tíz állat máját izoláljuk és megvizsgáljuk mikroszkopikus léziókra.
2. kísérlet
Harminc egynapos brojlert, melyek reovírus elleni maternális antitestekkel rendelkeznek, orálisan megfertőzünk tisztított ERS-reovírusplakkal. Hét és tíz nappal a fertőzés után az állatokat megvizsgáljuk klinikai tünetekre, különös figyelemmel a nedves alomra.
3. kísérlet
Harminc egynapos, reovírus elleni maternális antitestekkel rendelkező brojlert orálisan megfertőzünk tisztított ERS-reovírusplakkal. Egy, kettő és négy héttel a fertőzés után csoportonként tíz állatot lemérünk, hogy megvizsgáljuk a növekedés visszamaradását.
4. kísérlet
Csoportonként tizenöt egynapos, reovírus elleni maternális antitesttel rendelkező brojlert megfertőzünk orálisan vagy szubkután tisztított ERS-reovírusplakkal (2. izolátum) egynapos vagy egyhetes korukban. Tizenöt ugyanilyen korú és eredetű állatot nem fertőzünk meg, és ezek szolgálnak negatív kontrollként. Az állatokat lemérjük minden héten egy 7 hetes periódusban, hogy megvizsgáljuk a növekedés visszamaradását. Eredmények
1. kísértet
Az egynapos, megfertőzött SPF-csirkék, melyeket orálisan fertőztünk a reovírussal, a hepatociták és/vagy Kupffer-sejtek multifokális vakuolációját mutatják a fertőzés utáni 4-10. napon.
2. kísérlet
Tíz nappal az orális fertőzés után a brojlerek enteritiszt mutatnak, amely a túl híg féceszben, valamint a madarak kloákája körüli ráragadt felrakodásban nyilvánul meg, ellentétben az ugyanilyen korú és eredetű, azonos körülmények között tartott kontrollcsoport nem fertőzött brojlereivel.
3. kísérlet
Az egynapos, orálisan fertőzött brojlerek testtömege 121,9, 327,0 vagy 913,1 gramm 1, 2 vagy 4 hetes korukban. Ezzel szemben az ugyanilyen korú és eredetű, azonos körülmények között nevelt, nem fertőzött brojlerek testtömege 134,8, 337,6 vagy 999,9 gramm 1, 2 vagy 4 hetes korukban.
4. kísérlet
Az eredményeket a 2A. és 2B. ábrán mutatjuk be. A 7 hetes állatok, melyeket egynapos korukban fertőztünk meg orálisan vagy szubkután, körülbelül 34%-os visszamaradást mutatnak a növekedésben a nem fertőzött kontrollállatokhoz viszonyítva. A 7 hetes, nem fertőzött kontrollállatok tömege 2469 gramm szemben a fertőzött állatok 1635 grammos testtömegével.
Azok a 7 hetes állatok, melyeket egyhetes korukban fertőztünk meg orálisan vagy szubkután, körülbelül 25%-os visszamaradást mutatnak a növekedésben a nem fertőzött kontrollállatokhoz képest. A 7 hetes, nem fertőzött kontrollállatok tömege 2469 gramm szemben a fertőzött állatokéval, amely csak 1842 gramm. A fenti eredmények alapján az ERS-reovírustörzs képes a növekedés visszamaradását kiváltani.
2. példa
Vakcinálási vizsgálatok állatokon A
Inaktivált madárreovírus-vakcina előállítása
Elsődlegesen CEL-sejteket készítünk 1*106 sejt/ml végkoncentrációban. A sejteket Eagles-féle MÉM tápközegben tenyésztjük, amely 0,1% antibiotikumot és 5% magzati borjúszérumot tartalmaz. Ennek a sejtszuszpenziónak 25 ml-éhez 0,1 ml ERS-reovírusizolátumot (1. izolátum) adunk, öt napon át inkubáljuk egy magas páratartalmú inkubátorban 37 °C-on, a CPE világosan látható és az egysejt-réteg teljesen széttörik. A fertőzött sejtszuszpenzió fertőző titere 4,2 Iog10 TCID50/ml. A reovírust úgy inaktiváljuk, hogy formaldehidet adunk a megfertőzött sejtszuszpenzióhoz 0,2% végkoncentráció eléréséig. A szuszpenziót 48 órán keresztül 37 °C-on inkubáljuk. Ezt követően a formaldehidet ekvimoláris mennyiségű nátrium-biszulfittal semlegesítjük. Az inaktivált reovírust használjuk különböző inaktivált reovírusvakcinák előállítására. Az inaktivált reovírusszuszpenziót egy ásványolajfázissal keverjük össze 45:55 arányban (víz/olaj emulzió).
Vakcinálás
3-4 hetes SPF-állatokat intramuszkulárisan vakcinálunk az inaktivált reovírusvakcinával (0,5 ml/állat). Kettő, négy és hat héttel a vakcinálás után a szérumot megvizsgáljuk reovírus elleni antitestek jelenlétére. Hat héttel a vakcinálás után az állatokat provokáljuk a talppárnán keresztüli fertőzéssel. Fertőző vírusként a patogén homológ reovírustörzset alkalmazzuk (2,2 lóg TCID50/állat). A talp és a lábszár gyulladásának és elszíneződésének fokát pontozzuk egy kéthetes periódus alatt. A csirkéket védettnek tekintjük a fertőzéssel szemben, ha a talpgyulladás kumulatív értéke kisebb, mint a nem vakcináit, megfertőzött kontrollok talpgyulladásának átlaga mínusz a két standard deviáció.
Egy, a fentiekhez hasonló vizsgálatban az állatokat öthetes korukban fertőzzük meg, és a komoly fertőzéssel szembeni védelmet a mortalitás, morbiditás és talpkárosodások segítségével értékeljük ki.
Eredmények
A védelemre vonatkozó adatokat az 1A. és 1B. ábrán mutatjuk be. A vakcináit csirkék olyan talppárnagyulladás kumulatív értéket mutatnak, amely szignifikánsan kisebb a kontrollcsoporthoz viszonyítva, jelezve ezáltal, hogy a vakcináit csirkék védettek a súlyos reovírusfertőzéssel szemben. A mortalitáson és a morbiditáson alapuló védelemre vonatkozó adatok szintén egy szignifikáns védelmet igazolnak a súlyos fertőzéssel szemben.
B
Vakcinálás
3-4 hetes SPF-állatokat vakcinálunk intramuszkulárisan inaktivált ERS-reovírusvakcinával (2. izolátum)
HU 225 434 Β1 hasonlóan a fentiekben leírtakhoz, és ismételten vakcináink 6 héttel az első vakcinálás után. Ugyanilyen korú és eredetű nem vakcináit állatok szolgálnak kontrollként. Két, négy, öt, hat héttel az első vakcinálás után és két héttel a második vakcinálást követően a szérumokat megvizsgáljuk Idexx ELISA-val reovírus elleni antitestek jelenlétére. Hat héttel az első és két héttel a második vakcinálás után az állatokat megfertőzzük a talppárnán (talpdudorokon) keresztül a patogén ERS-reovírustörzzsel. A talppárna és lábszár gyulladása és elszíneződése mértékének átlagos károsodási pontjait (score) mérjük minden egyes napon egy 14 napos periódus alatt a fertőzést követően.
Eredmények
Az inaktivált ERS-reovírusvakcina által indukált szerológiai válasz megnövekedett az első 4 hétben a vakcinálás után, és egyenletessé vált az 5. és 6. héten az első vakcinálás után. A második vakcinálás növekedést eredményezett körülbelül 10 Iog2-12 Iog2 tartományban két hétig a második vakcinálás után (3A. ábra). A 3B. ábrán azoknak a vakcináit és nem vakcináit csirkéknek az adatait mutatjuk be, amelyeket 5 héttel az első vakcinálás vagy 2 héttel a második vakcinálás után fertőztünk meg. Minden vakcináit csirke a talpon és a lábszáron lévő károsodások lényeges csökkenését mutatta a nem vakcináit állatokhoz viszonyítva. Az összes vakcináit csirke kisebb talpgyulladás kumulatív értékeket mutatott, mint a nem vakcináit, megfertőzött kontrollok talpgyulladásátlaga mínusz a két standarddeviáció, jelezve ezzel, hogy a vakcináit csirkék védettek a súlyos REO-fertőzéssel szemben. Néhány gyenge talppárnaduzzanatot figyeltünk meg a vakcináit csoportban, azonban ezek a léziók átmenetiek voltak. Továbbá az átmeneti talppárnaléziók száma kevesebb azokban az állatokban, amelyeket kétszer vakcináltunk összehasonlítva azokkal az állatokkal, amelyeket csak egyszer vakcináltunk.
Claims (10)
1. Madárreovírusok egy antigénosztályába tartozó madárreovírus, amelyre jellemző, hogy (i) az antigénosztályba tartozó madárreovírus képes egy állatban olyan antiszérumot indukálni, amely az
ECACC-nél 99011475 számon letétbe helyezett madár-ERS-reovírus által képzett plakkok csökkenését okozza legalább 75%-ban egy plakkredukciós vizsgálatban, és (ii) a madárreovírus poliklonális madárreovírus-antiszérummal pozitívan reagál, de nem reagál az ECACC-nél 99011472, 99011473 és 99011474 számon letétbe helyezett monoklonális antitestekkel.
2. Az 1. igénypont szerinti madárreovírus, amelyre jellemző, hogy a madárreovírus ellen indukált antiszérum képes az ECACC-nél 99011475 számon letétbe helyezett madár-ERS-reovírus által képzett plakkok csökkenését okozni legalább 80%-ban, előnyösen legalább 90%-ban egy plakkredukciós vizsgálatban.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti madárreovírus, amelyre jellemző, hogy ez egy madár-ERS-reovírus, melynek mintája 99011475 számon van letétbe helyezve az ECACC-nél.
4. Vakcina szárnyasoknak madárreovírus-fertőzésből származó betegségek elleni védelmében történő alkalmazásra, amely valamely, az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti madárreovírust és gyógyászatilag elfogadható hordozót vagy hígítót tartalmaz.
5. A 4. igénypont szerinti vakcina, amely a madárreovírust élő, attenuált formában tartalmazza.
6. A 4. igénypont szerinti vakcina, amely a madárreovírust inaktivált formában tartalmazza.
7. A 4-6. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amely tartalmaz továbbá egy adjuvánst.
8. A 4-7. igénypontok bármelyike szerinti vakcina, amely továbbá tartalmaz egy vagy több, szárnyasokra nézve fertőző más patogénből származó vakcinakomponenst.
9. Eljárás az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti madárreovírusok előállítására, azzal jellemezve, hogy
a) egy alkalmas szubsztrátot madárreovírussal inokulálunk,
b) a madárreovírust szaporítjuk, és
c) a madárreovírust tartalmazó anyagot összegyűjtjük.
10. Eljárás vakcina előállítására szárnyasok madárreovírus-fertőzésből származó betegségek elleni védelmében történő alkalmazásra, azzal jellemezve, hogy a 9. igénypont szerinti eljárással kapott, összegyűjtött reovírusokat, kívánt esetben a reovírusok inaktiválása után, gyógyászatilag elfogadható hordozóval vagy hígítóval összekeverjük.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP99200259 | 1999-01-29 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0000362D0 HU0000362D0 (en) | 2000-04-28 |
| HUP0000362A2 HUP0000362A2 (hu) | 2000-11-28 |
| HUP0000362A3 HUP0000362A3 (en) | 2005-04-28 |
| HU225434B1 true HU225434B1 (en) | 2006-11-28 |
Family
ID=8239847
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0000362A HU225434B1 (en) | 1999-01-29 | 2000-01-28 | Avian reoviruses belonging to an novel antigenic class of avian reoviruses |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6951650B1 (hu) |
| EP (1) | EP1024189B1 (hu) |
| JP (2) | JP4659942B2 (hu) |
| KR (1) | KR100583259B1 (hu) |
| AT (1) | ATE292674T1 (hu) |
| AU (1) | AU759179B2 (hu) |
| BR (1) | BR0000190A (hu) |
| CA (1) | CA2297345C (hu) |
| DE (1) | DE60019178T2 (hu) |
| ES (1) | ES2240005T3 (hu) |
| HU (1) | HU225434B1 (hu) |
| MX (1) | MXPA00001001A (hu) |
| PL (1) | PL192277B1 (hu) |
| PT (1) | PT1024189E (hu) |
| RU (1) | RU2265659C2 (hu) |
| ZA (1) | ZA200000370B (hu) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2498823A1 (en) * | 2002-09-16 | 2004-04-15 | Wyeth | Vaccines containing viruses involved in avian malabsorption syndrome and methods of administration therefor |
| JP2006516146A (ja) * | 2002-10-09 | 2006-06-22 | アクゾ・ノベル・エヌ・ベー | トリレオウイルスにより引き起こされる神経学的症状の治療および予防方法ならびに新規付随的特徴 |
| US8178110B2 (en) | 2006-10-25 | 2012-05-15 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Reovirus compositions and methods of use |
| MX2010014555A (es) * | 2008-06-26 | 2011-04-27 | Ceva Sante Animale Sa | Reoviridae aviar unico. |
| WO2010059899A2 (en) * | 2008-11-20 | 2010-05-27 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Vaccine for runting-stunting syndrome |
| CA3177833A1 (en) | 2009-12-15 | 2011-06-15 | University Of Saskatchewan | Vaccines for inclusion body hepatitis |
| KR101600959B1 (ko) | 2013-06-18 | 2016-03-08 | 단국대학교 산학협력단 | 가금 레오바이러스 시그마 c 단백질의 항원 결정기를 포함하는 재조합 단백질 및 이에 대한 항체 |
| MX2016009747A (es) * | 2014-01-29 | 2016-11-09 | Univ Georgia | Vacunas contra el reovirus aviar. |
| RU2701808C2 (ru) * | 2014-10-03 | 2019-10-01 | Интервет Интернэшнл Б.В. | Вакцина широкого спектра действия против реовируса птиц |
| CN104711240B (zh) * | 2015-03-18 | 2017-10-10 | 广西壮族自治区兽医研究所 | 禽呼肠孤病毒σA蛋白及其相关生物材料的应用 |
| RU2742250C2 (ru) * | 2016-01-07 | 2021-02-04 | Гавиш-Галили Био Эпликейшнз, Лтд | Оптимизированный полипептид для субъединичной вакцины против реовируса птиц |
| CN108794627A (zh) * | 2018-07-03 | 2018-11-13 | 重庆永健生物技术有限责任公司 | 一种鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体的制备方法 |
| CN111000992A (zh) * | 2019-12-19 | 2020-04-14 | 广州渔跃生物技术有限公司 | 一种鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒和鸭腺病毒三联灭活疫苗及其制备方法 |
| CN116478937B (zh) * | 2023-06-12 | 2023-08-18 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） | 基因iii型禽呼肠孤病毒变异株及其在制备疫苗中的应用 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4559229A (en) * | 1982-07-20 | 1985-12-17 | Research Foundation | Avian proventriculitis vaccine |
| US5525342A (en) * | 1994-05-20 | 1996-06-11 | Akzo Nobel, N.V. | Reovirus strain 2177 and vaccine containing same |
-
2000
- 2000-01-25 PT PT00200256T patent/PT1024189E/pt unknown
- 2000-01-25 EP EP00200256A patent/EP1024189B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-25 JP JP2000015930A patent/JP4659942B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-25 ES ES00200256T patent/ES2240005T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-25 AT AT00200256T patent/ATE292674T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-01-25 DE DE60019178T patent/DE60019178T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-27 BR BR0000190-2A patent/BR0000190A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-01-27 CA CA2297345A patent/CA2297345C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-27 ZA ZA200000370A patent/ZA200000370B/xx unknown
- 2000-01-28 RU RU2000102307/13A patent/RU2265659C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-01-28 KR KR1020000004329A patent/KR100583259B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-01-28 MX MXPA00001001A patent/MXPA00001001A/es active IP Right Grant
- 2000-01-28 HU HU0000362A patent/HU225434B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-01-28 US US09/493,484 patent/US6951650B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-28 AU AU13629/00A patent/AU759179B2/en not_active Ceased
- 2000-01-28 PL PL338118A patent/PL192277B1/pl unknown
-
2010
- 2010-11-17 JP JP2010256592A patent/JP2011092190A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1024189A1 (en) | 2000-08-02 |
| JP2011092190A (ja) | 2011-05-12 |
| BR0000190A (pt) | 2001-08-21 |
| PL192277B1 (pl) | 2006-09-29 |
| AU759179B2 (en) | 2003-04-10 |
| KR100583259B1 (ko) | 2006-05-25 |
| HU0000362D0 (en) | 2000-04-28 |
| ATE292674T1 (de) | 2005-04-15 |
| ZA200000370B (en) | 2000-08-07 |
| PT1024189E (pt) | 2005-08-31 |
| KR20010069166A (ko) | 2001-07-23 |
| PL338118A1 (en) | 2000-07-31 |
| US6951650B1 (en) | 2005-10-04 |
| ES2240005T3 (es) | 2005-10-16 |
| JP4659942B2 (ja) | 2011-03-30 |
| DE60019178D1 (de) | 2005-05-12 |
| JP2000295986A (ja) | 2000-10-24 |
| RU2265659C2 (ru) | 2005-12-10 |
| DE60019178T2 (de) | 2005-09-08 |
| MXPA00001001A (es) | 2002-03-08 |
| AU1362900A (en) | 2000-08-03 |
| CA2297345C (en) | 2010-07-13 |
| CA2297345A1 (en) | 2000-07-29 |
| EP1024189B1 (en) | 2005-04-06 |
| HUP0000362A3 (en) | 2005-04-28 |
| HUP0000362A2 (hu) | 2000-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2011092190A (ja) | トリレオウイルスの新規抗原クラス | |
| JP2007125039A (ja) | ニワトリ貧血因子ワクチン | |
| US20120251564A1 (en) | Reovirus compositions and methods of use | |
| US4559229A (en) | Avian proventriculitis vaccine | |
| US20080317776A1 (en) | Vaccines Containing Viruses Involved in Avian Malabsorption Syndrome and Methods of Administration Therefor | |
| JP2002045175A (ja) | 卵内投与用のｉｂｄｖ株 | |
| AU780550B2 (en) | Chicken anaemia viruses of low pathogenicity | |
| US20100233208A1 (en) | Methods of Treating and Preventing Neurological Symptoms Caused by Avian Reovirus and Novel Associated Characteristics | |
| Khodashenas et al. | Isolation and characterization of avian Reoviruses from the cases of malabsorption syndrome and arthritis/tenosynovitis in chickens |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GB9A | Succession in title |
Owner name: INTERVET INTERNATIONAL B.V., NL Free format text: FORMER OWNER(S): AKZO NOBEL N.V., NL |
|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |