HU220256B - Granulocita-kolónia stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó, stabilan eltartható, liofilizált gyógyszerkészítmények és eljárás az előállításukra - Google Patents

Granulocita-kolónia stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó, stabilan eltartható, liofilizált gyógyszerkészítmények és eljárás az előállításukra Download PDF

Info

Publication number
HU220256B
HU220256B HU9501764A HU9501764A HU220256B HU 220256 B HU220256 B HU 220256B HU 9501764 A HU9501764 A HU 9501764A HU 9501764 A HU9501764 A HU 9501764A HU 220256 B HU220256 B HU 220256B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
csf
maltose
excipients
lyophilized
arginine
Prior art date
Application number
HU9501764A
Other languages
English (en)
Other versions
HUT74269A (en
HU9501764D0 (en
Inventor
Uwe Michaelis
Rainer Rudolph
Gerhard Winter
Heinrich Woog
Original Assignee
Roche Diagnostics Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roche Diagnostics Gmbh filed Critical Roche Diagnostics Gmbh
Publication of HU9501764D0 publication Critical patent/HU9501764D0/hu
Publication of HUT74269A publication Critical patent/HUT74269A/hu
Publication of HU220256B publication Critical patent/HU220256B/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgyát maltózt, cellobiózt, gentiobiózt, izomalbózt, raffinózt, trehalózt vagy aminocukrot és/vagy aminosavat mint stabilizálószert tartalmazó liofilizált granulocitakolónia-stimuláló faktor (G-CSF) gyógyszerkészítményei képezi. A találmány tárgya továbbá eljárás ezeknek a stabilizált liofilizátumoknak az előállítására.
Különböző G-CSF-et tartalmazó gyógyszerkészítmények a technika mai állása szerint már ismeretesek.
A 37 23 781 számú német (2 193 631 számú nagybritanniai) szabadalmi leírásban olyan G-CSF-tartalmú gyógyszerkészítményt ismertetnek, ahol CS-F stabilizálására legalább egy, gyógyszerészeti felületaktív szert, szacharidot, proteint vagy valamely nagymolekulás vegyületet tartalmaz. E leírásban olyan készítményeket javasolnak, amelyek stabilizálószerként humán szérumalbumint tartalmaznak. Előnyösként különösen olyan készítményeket neveznek meg, amelyek a felhasznált G-CSF-menynyiségnek 1-10 000-szeresét kitevő tömegmennyiségü felületaktív szert tartalmaznak.
A 0 373 679 számú európai szabadalmi leírásban olyan stabilizált G-CSF-készítményeket írnak le, amelyek lényegében az oldat savas pH-jával tűnnek ki, ahol az oldatoknak lehetőleg kicsi kell legyen a vezetőképessége. Az oldatok pH-értéke, amennyiben azok további gyógyszerészeti segédanyagokat mint puffért vagy mannitolt tartalmaznak, 3-3,7 kell legyen. Abban az esetben, ha a gyógyszerformában pufferanyagok nincsenek jelen, az előnyös pH értéktartomány 2,75-4.
Ezen túlmenően a 0 306 824 számú európai szabadalmi leírás olyan stabilizált humán proteinkészítményeket ír le, melyeknél a stabilizálás egy karbamid, aminosav és detergens keverékkel történik.
A korábbi, WO 93/03745 számú közzétételi iratban eljárást írnak le a G-CSF-tartalmú, infúziós vagy injekciós célra szolgáló, jól elviselhető gyógyszerek előállítására. A folyékony adagolási formák különösen kis, títrálás útján meghatározott savasságukkal és kis pufferkapacitásukkal tűnnek ki. A leírt G-CSF-tartalmú infúziós és injekciós oldatok pH-értéke a savas tartományban körülbelül 3,8-4,5 pH-nál van.
Olyan G-CSF-tartalmú folyékony gyógyszerformák előállítási eljárása, amelyek még tartósítószert is tartalmaznak, a WO 93/03744 számú közzétételi iratból ismert. A vizes gyógyszerészeti oldatok pH-értéke a pH=2,5-4,5 savas tartományban van. A G-CSF stabilizálását itt lényegében a G-CSF részére előnyös savas pH-érték beállításával és különféle aminosavak keverékének hozzáadásával érik el.
Az eddig ismert G-CSF gyógyszerformáknak azonban bizonyos hátrányai vannak. Megállapítottuk, hogy a folyékony G-CSF készítmények befagyással és felolvadással szemben érzékenyek lehetnek. Az ilyen készítmények nem ellenőrzött befagyasztása és ismét felolvadása dimerek, oligomerek vagy aggregátumok képződéséhez vezethet, adott esetben nem oldódó csapadékok is képződhetnek. A proteingyógyszerek ilyen tulajdonságai orvosi-gyógyszerészeti szempontból problematikusak, mert a gyógyszerészeti oldat szemmel látható befagyása biztonsággal nem kerülhető el, és fennáll az ilyen, minőségileg megváltozott készítmény alkalmazásának kockázata.
A 37 23 781 számú német szabadalmi leírás szerinti készítményeknél az a tény is hátrányos továbbá, hogy ezek olyan gyógyszerészeti adalék- és segédanyagokat is tartalmaznak, amelyek minden további nélkül nem tekinthetők orvosi szempontból problémamenteseknek. A polimerek és a proteinek eredetük és fizikai-kémiai tulajdonságaik miatt gyógyszerészeti adalékanyagként bizonyos kockázati potenciált jelentenek. Az emberi vagy állati eredetű, valamint a sejtkultúrákból nyert proteinek vírusos szennyezések potenciális veszélyét rejtik magukban. Egyéb, analitikailag nehezen kimutatható proteinszerű szennyezések is immunológiai reakciókat válthatnak ki embereknél, az antigén tulajdonságaik miatt. Az állati eredetű proteinek ezenkívül fajtaspecifikus tulajdonságaik következtében általában immunológiai reakciókat válthatnak ki az embernél. Az ilyen proteinek esetében a későbbi újraalkalmazás során hosszú idejű reakciók is felléphetnek.
A nagymolekulás vegyületek (polimerek) hozzáadása szintén problematikus lehet. A polimerek nagy molekulatömegük miatt a testben felgyűlhetnek, és ily módon - hacsak biolebomlás nem történik - hosszú ideig a testben maradhatnak. Ettől különösen szubkután alkalmazás esetén kell tartani, mert ilyen esetben az elszállítás és a vérárammal történő eloszlatás az intravénás adagoláshoz képest sokkal lassabban történik. A molekulatömegtől függően a polimereknek antigén tulajdonságaik is lehetnek. Az előállításukhoz használt katalizátorok vagy a monomerek és a polimer bomlástermékek miatt a polimerek tisztasága is nehezen biztosítható. Ezért polimerek felhasználása, különösen szubkután formában adagolandó gyógyszerkészítmények esetében, hacsak lehetséges, elkerülendő.
A 37 23 781 számú német szabadalmi leírásban leírt tenzidmennyiségek orvosi szempontból szintén problematikusnak tekintendők. E leírásban olyan tenzidkoncentrációkat tekintenek előnyösnek, amelyek a G-CSFre számítva 1-10 000 tömegrész felületaktív szert tartalmaznak. Ha másrészről figyelembe vesszük a klinikai használatban előnyös 0,05-1,5 mg/ml G-CSF-alkalmazási koncentrációkat, akkor ennek megfelelő nagy tenzidkoncentrációk adódnak. Ezeket orvosi szempontból el kell kerülni, mert lokális irritációkat válthatnak ki.
Ezenkívül az ismert receptúrák némelyikének megvan az a hátránya, hogy az alkalmazott alacsony pHértékek következtében, különösen szubkután beadásnál a páciensek az injekciót lokálisan nem viselik el. A kapott termék érzékeny betegeknél lokális fájdalmat és szövetizgatást okozhat, mert a szövetben fiziológiásán fennálló 7,0-7,5 pH-t nem tartjuk be.
Ismeretes továbbá az irodalomból, hogy a G-CSF nem glikozilezett formái szemben a CHO-sejtekből nyert, glikozilezett G-CSF-fel, különösen instabilak [J. Bioi. Chem., 265. számú 11 432. old., (1990)]. A GCSF nem glikozilezett formáinak stabilizálása különösen nehéznek bizonyult, és speciálisan megválasztott intézkedésekre van szükség ahhoz, hogy ezt a molekulát stabilis gyógyszerformává alakítsuk.
HU 220 256 Β
A jelen találmány feladata olyan G-CSF gyógyszerforma rendelkezésre bocsátása volt, amely lehetővé teszi a G-CSF-nek mint gyógyszernek rendeltetésszerű alkalmazását anélkül, hogy az eddig ismert gyógyszerformáknak a fentiekben leirt hátrányai lennének. A gyógyszerkészítménynek mind a nem ellenőrzött befagyasztás és felolvadási folyamatokkal szemben, mind liofilizátumként hosszabb tárolás esetén stabilnak, fiziológiásán jól elviselhetőnek, egyszerűen és pontosan adagolhatónak kell lennie.
A 37 23 781 számú német szabadalmi leírásban leírt példák azt mutatják, hogy stabil liofilizátumok kaphatók, ha segédanyagként humán szérumalbumint használunk. A csupán cukoralkoholok egyedüli hozzáadása kevésbé stabil receptúrákhoz vezet. Ezért kívánatos lenne olyan receptúrákat találni, amelyek nem tartalmaznak humán szérumalbumint (HAS-t) vagy egyéb proteineket, vagy polimereket, és ennek ellenére magasabb hőmérsékleten is jó a stabilitásuk. A humán szérumalbumin és a polimerek elhagyása csökkenti a mellékhatások orvosi kockázatát, amint ezt például a HSA-val kapcsolatosan leírjuk.
Meglepő módon azt találtuk, hogy a jelen találmány értelmében stabilan eltartható, liofilizált gyógyszerkészítmények állíthatók elő, ha segédanyagként maltózt, raffinózt, cellobiózt, gentiobiózt, izomaltózt, trehalózt vagy aminocukrot használunk.
Az olyan szilárd készítmények, amelyek maltózt, cellobiózt, gentiobiózt, raffinózt, izomaltózt, trehalózt vagy aminocukrot tartalmaznak, a G-CSF említésre méltó minőségromlása nélkül befagyaszthatok vagy (40 °C-ig terjedő) megemelt hőmérsékleten is tárolhatók. A találmány szerinti készítményeket előnyösen liofilizátumok alakjában hozzuk kereskedelmi forgalomba. Az újrafeloldás útján előállított vizes készítmények igen jól elviselhetők, és proteinstabilitás tekintetében minőségileg nagy értékű készítmények. Megvan az az előnyük is, hogy maltóz, raffinóz, szacharóz, trehalóz vagy aminocukrok mint segédanyagok hozzáadásával előnyös 4-5 vagy 7-8 pH-értékű oldatok állíthatók elő, míg a technika állásából ismert oldatokhoz a protein stabilitási okainak következtében 2,5-3,5 pH-jú oldatokra van szükség.
A találmány szerinti készítményeknek ezenkívül az is előnye, hogy lényegében proteinszerű vagy polimer segédanyagoktól mentesek, mely anyagok felhasználása nem lehet problémamentes. Annak a ténynek alapján, hogy most már a liofilizátumok feloldása után nyert, körülbelül 4-5 vagy 7-8 pH-értékű, a vér pH-jához (pH=7,2-7,4) közelálló folyékony, G-CSF-tartalmú gyógyszerformák állíthatók elő, továbbá ezeknek az az előnyük is megvan, hogy jól elviselhetők és messzemenően fájdalommentesen alkalmazhatók. Ez különösen szubkután beadásnál fontos, mert itt könnyebben lép fel elviselhetetlenség, mint intravénás beadásnál. A találmány szerinti készítmények a klinikailag különösen előnyös 0,05-1,5 mg/ml koncentrációtartományban is előállíthatók úgy, hogy 1,0 ml, illetve ez alatti injekciótérfogatok tarthatók be. A kisebb injekció-térfogatok szubkután alkalmazásnál különösen előnyösek, mert ezek csak kis bőr alatti izgatást fejtenek ki a bőr alatti szövetben.
Előnyös továbbá, hogy a kiválasztott segédanyagok következtében a folyékony gyógyszerformákban már nincs szükség az eddig használt, viszonylag nagy tenzidmennyiségekre. A G-CSF stabilizálására sokkal inkább 0,5 mg/ml vagy ennél kisebb, előnyösen 0,01-0,1 mg/ml tenzidmennyiség is elegendő. Előnyös módon olyan (mg/ml) tenzidkoncentrációk használhatók, amelyek kisebbek vagy legfeljebb azonosak a felhasznált, térfogategységre számított (mg/ml) G-CSF proteinmennyiséggel. Ez mindenekelőtt olyan folyékony gyógyszerformáknál előnyös, amelyek G-CSF szubkután injekció alakjában történő alkalmazására szolgálnak. Ezenkívül a találmány szerinti intézkedésekkel különösen a labilis, nem glikozilezett gyógyszerkészítmények céljára szolgáló GCSF-molekulákat stabilizáljuk megfelelően.
A maltóz segédanyagot (malátacukrot, maltobiózt, 4Ο-α-D-glukopiranozil-D-glukózt) a G-CSF hatóanyagmennyiség 0,01-tól 10 000-szereséig teijedő mennyiségben használjuk fel. Ugyanez érvényes a raffinóz, cellobióz, gentiobióz, izomaltóz és trehalóz segédanyagokra is. Ezeknek a segédanyagoknak a koncentrációja a folyékony gyógyszerformában 0,1-200 mg/ml, előnyös módon 10-60 mg/ml. Maltóz helyett a sztereoizomer diszacharidok, mint cellobióz, gentiobióz vagy izomaltóz is használhatók. Aminocukroknak általában olyan monoszacharidokat nevezünk, amelyek egy hidroxicsoport helyett egy amino- vagy egy acilezett aminocsoportot tartalmaznak. Ilyenek például a glukózamin, galaktózamin, neuraminsav.
Egy másik kiviteli alak esetében olyan gyógyszerkészítményeket bocsátunk rendelkezésre, amelyek a liofilizátum újrafeloldásakor fellépő aggregátum- vagy dimerképződés elkerülésére maltóz, raffinóz, szacharóz vagy trehalóz mellett még aminosavakat tartalmaznak. Aminosavként különösen bázikus aminosavak, mint például arginin, lizin, omitin stb., savas aminosavak, mint például glutaminsav, aszparaginsav stb., vagy pedig aromás aminosavak, mint például fenil-alanin, tirozin, triptofán stb. jönnek számításba.
Az aminosavakat a G-CSF hatóanyag-mennyiség 0,01 -10 000-szeres mennyiségében használjuk fel. Ezeknek a segédanyagoknak a koncentrációja a folyékony gyógyszerformában 0,1-200 mg/ml, előnyösen
1-50 mg/ml.
A liofilizátumok előállítására először a hatóanyagot és a többi, szokásos gyógyszerészeti segédanyagot tartalmazó vizes gyógyszerészeti oldatokat állítjuk elő. Gyógyszerészeti segédanyagként különösen aminosavak, mint például arginin, lizin, omitin, fenil-alanin vagy tirozin jön számításba. Ezenkívül a vizes készítmény szokásos pufferanyagokat, mint például ecetsavat, sósavat, citromsavat, tej savat, borsavat, maleinsavat és foszforsavat is tartalmazhat, valamint ezek fiziológiailag elviselhető sóit. A segédanyagoldat előállításánál ezeket a pufferanyagokat vagy a megfelelő szabad sav vagy az alkálifém-, alkáliföldfém- vagy ammóniumsóik alakjában használjuk fel. Ezenkívül az oldat további, a gyógyszerészetben szokásos segédanyagokat is tartalmazhat.
HU 220 256 Β
A különböző segédanyagok és a hatóanyag hozzáadásának sorrendje messzemenően független az előállítási eljárástól, és az a szakember belátásától függ. Az oldat kívánt pH-értékét bázisok, mint például alkálifém-hidroxidok, alkálifoldfém-hidroxidok vagy ammónium-hidroxid hozzáadásával állítjuk be. E célra előnyös módon nátrium-hidroxidot használunk. Az oldat kívánt pH-értékének beállítása elvileg bázikus oldatok hozzáadásával végezhető. Ilyen értelemben általában erős bázisok gyenge savakkal képezett sói, például nátrium-acetát, nátrium-citrát, dinátrium-, illetve dikálium-hidrogénfoszfát vagy nátrium-karbonát jönnek számításba. Abban az esetben, ha a gyógyszerészeti segédanyagoldat pH-ja lúgos, akkor a beállítás savval végzett titrálással történik, míg a kívánt pH-értéket el nem érjük. Savként fiziológiásán elviselhető szervetlen vagy szerves savak, mint például sósav, foszforsav, ecetsav, citromsav vagy olyan anyagok szokásos oldatai jönnek számításba, amelyek savas pHjúak. Ilyen értelemben előnyös anyagok az erős savak gyenge bázisokkal képezett sói, mint például a nátriumdihidrogén-foszfát vagy a kálium-dihidrogén-foszfát.
A pufferanyagok koncentrációja a kész, beadható folyékony gyógyszer formában mindig körülbelül
2-80 mmol/1. A pufferanyagok összkoncentrációja a 100 mmol/1 mennyiséget nem lépheti túl. A pufferanyagok koncentrációja előnyösen 5-40 mmol/1.
A G-CSF-molekulák nevezett segédanyagokkal végzett stabilizálása elvileg minden rekombinációs eljárással előállított G-CSF-molekulára és azok variánsára vonatkozik. A G-CSF vagy G-CSF-variáns fogalma alatt a jelen találmány szerint valamennyi, természetben előforduló G-CSF-változatot értünk, valamint az ezekből levezetett, rekombinációs DNA-technológiával módosított G-CSF-proteineket, különösen olyan fúziós proteineket, amelyek a G-CSF-részen kívül még egyéb proteinszekvenciákat tartalmaznak. Különösen előnyös e tekintetben egy, az 1-helyzetben N-metionin végcsoportot tartalmazó G-CSF-mutein, amely prokariotikus sejtekben alkalmas expresszióra. Ugyancsak alkalmas az olyan rekombináns, metioninmentes G-CSF-variáns, amely a PCT/EP91/00192 számú nemzetközi szabadalmi leírás szerint állítható elő. „G-CSF-variáns” fogalom alatt olyan G-CSF-molekulákat értünk, amelyekben egy vagy több aminosav elhagyható vagy más aminosavakkal helyettesíthető, ami mellett a G-CSF lényeges tulajdonságai messzemenően megmaradnak. Alkalmas G-CSF-muteineket ír le például a 0 456 200 számú európai szabadalmi leírás.
Jól elviselhető parenterális gyógyszerformák előállításához izotonizáló segédanyagok hozzáadása célszerű abban az esetben, ha a hatóanyag ozmotikus tulajdonságai és a stabilizálásra használt segédanyagok révén már nem érhető el az izotónia. Ehhez mindenekelőtt nem ionizált, jól elviselhető segédanyagokat használunk.
Sók hozzáadása az izotónia beállítására nem előnyös, mert a nagy só- vagy ionkoncentrációk elősegítik a G-CSF-aggregátum képződését. Ezért sókat csak kis mennyiségben használunk fel.
A gyógyszerészeti készítmények ezenkívül további, szokásos segéd- vagy adalékanyagokat tartalmazhatnak.
A készítményekhez antioxidánsok, mint például glutation vagy aszkorbinsav, vagy hasonló anyagok, kaotróp segédanyagok, mint például karbamid, és aminosavak, mint például arginin, lizin, omitin, glutaminsav és egyéb aminosavak adhatók.
Az alábbiakban a találmányt reprezentatív kiviteli példák kapcsán közelebbről írjuk le.
Az 1-13. példák azt mutatják be, hogyan lehet a találmány szerinti liofilizátumokat előállítani és a G-CSF stabilitása tekintetében közelebbről megvizsgálni. Megvilágítjuk a maltóz, raffinóz vagy trehalóz mellett hozzáadott segédanyagok, valamint a pH-érték befolyását.
A mannit vagy glicin segédanyagokból előállított liofilizátumok összehasonlító vizsgálatai azt mutatják, hogy a maltózzal, raffinózzal vagy trehalózzal készült liofilizátumok sokkal jobb eredményeket adnak, mint az egyéb vázképző anyagokkal előállított készítmények. A találmány szerinti és a példákban említett liofilizátumok felhasználásával a leírt célkitűzés értelmében optimális receptúra alakítható ki, amelynek fiziológiásán elviselhető pH-értéke van hosszú ideig stabil tárolásnál, és amellett ellenálló a megemelt hőmérsékleten történő tárolásnál, valamint mechanikai feszültséggel szemben anélkül, hogy e körülményeknek negatív kihatása lenne a G-CSF-re. A készítmények különösen befagyással szemben érzéketlenek, és a kritikusnak tekintett segédanyagok, mint például proteinek és polimerek belőlük elhagyhatók. Ezenkívül ezek csak kis mennyiségű, és fiziológiásán jól elviselhető tenzideket tartalmaznak.
A 2. példában különböző cukrok és cukoralkoholok G-CSF-liofilizátumokra gyakorolt stabilizáló hatását vizsgáljuk. A maltóz a laktózzal és mannittal szemben előnyösnek mutatkozik.
A 3. példában maltózzal és további segédanyagokkal készült liofilizátumokat írunk le. Az eredményekből világosan kitűnik, hogy a tenzid hozzáadása a készítmény stabilitását lényegesen nem befolyásolja, de meggátolja a protein felületekre tapadását és az ezáltal lehetséges hatóanyag-veszteséget. A tenzid jelenléte az ilyen receptúrákban ezért nem a stabilizálás miatt, hanem a névleges adagolási mennyiség fenntartása miatt szükséges.
A 4. példában különböző maltóztartalmú liofilizátum-receptúrákat hasonlítunk össze két, különben azonos módon recepturált, maltóz nélküli liofilizátummal. Az adatokból világosan látható, hogy a maltóz jelenléte a vizsgált paraméterek közül előnyös módon a készítmény stabilizálásának értelmében hat. További segédanyagok, mint aszkorbinsav, glutation, glutaminsav hozzáadásának a vizsgált tárolási hőmérsékletek és tárolási idők tekintetében nincs jelentős befolyása a készítmény stabilitására. Az 5. példában leírt készítmények különösen azzal tűnnek ki, hogy hosszú időtartamú, emelt hőmérsékletű tárolás esetén nem mutatkoznak változások a vizsgált minőségi jellemzőkben.
A példákból az is látható továbbá, hogy a maltózt és arginint tartalmazó liofilizátumokban nincs feltétlenül szükség további puffersóra, mert a sósavval, foszforsavval, citromsavval vagy egyéb savakkal végzett pH-beállításnál képződő argininpuffemek elegendő pH-stabili4
HU 220 256 Β záló hatása van. Az argininpuffer kiválóan alkalmas 5,0 alatti és 7,0-7,5 közötti pH-jú, stabilis készítmények recepturálására (lásd a 11. és 12. példát). A 9. példa azt mutatja, hogy a maltózt és argininpuffert tartalmazó újra feloldott liofilizátumok legalábbis 24 órán át eltarthatok.
Az 5. példában olyan G-CSF-liofilizátumokat írunk le, amelyek aminocukrot (galaktózamint, N-metil-glukózamint) tartalmaznak. Látható, hogy a maltóz és az aminocukor kombinációja stabilisabb készítményeket ad, mint a glicin és az aminocukrok kombinációja. Ezáltal bizonyított, hogy a maltóz fiziológiásán jól elviselhető segédanyagokkal képezett kombinációja egyértelműen stabilisabb és ezáltal gyógyszerészeti minőség tekintetében nagyobb értékű G-CSF-liofilizátumokat szolgáltat, mint más, az irodalomban javasolt vázképző anyagok és stabilizátorok.
A 6. példában azt mutatjuk be, hogy a G-CSF maltóztartalmú liofilizátumokban egyértelműen stabilisabb, mint mannittartalmú liofilizátumokban. Ezt a vonatkozó tárolási hőmérsékletek és hosszú tárolási idők megfelelően bizonyítják.
A 7. példában azt mutatjuk be, hogy a maltóztartalmú liofilizátumok különböző pH-értékeknél, valamint különböző segédanyagok hozzáadása mellett előnyösebb eredményeket mutatnak, mint egyéb vázképző anyagokkal és stabilizátorokkal (cukoralkoholokkal, aminosavakkal) készített készítmények.
A 8. példában bemutatjuk a találmány szerinti újra feloldott liofilizátumok stabilitását pH 7,4 értékű oldatban.
A 9. példa a maltózzal, rafinózzal, szacharózzal vagy behálózzál készült, találmány szerinti liofilizátumok stabilitását bizonyítja 13 hetes, 40 °C-on végzett tárolás után.
A 10-11. példákban bemutatjuk a találmány szerinti, arginin-foszfát és arginin-klorid-pufferrel készített maltóztartalmú liofilizátumok stabilitását 13 hetes 30, illetve 40 °C-on végzett tárolás után.
A 12. példa azt mutatja be, hogy a találmány szerinti liofilizátumok nagyobb G-CSF-koncentrációknál is stabilisak, és a 13. példa azt bizonyítja, hogy a találmány szerinti receptúrák tárolási stabilitása magasabb hőmérsékleten is megfelelő.
1. példa
A stabilitásmeghatározás vizsgálati módszerei
Liofilizált készítményeket sötétben meghatározott tárolási hőmérsékleten tároltunk, és ezután megvizsgáltunk fordított fázisú, nagynyomású folyadékkromatográfiával (RP-HPLC-vel), gélkromatográfiával vagy méretkizárásos kromatográfiával (SEC-HPLC-vel), „Western Blot”tal proteintisztaságra, valamint fellépő aggregátumokra és dimerekre. Ezenkívül megvizsgáltuk a proteintartalmukat OD 280 fotometriával, biológiai aktivitásukat biovizsgálattal (NFS 60 sejtvizsgálat), valamint aggregálódásukat és csapadékképződésüket zavarosságméréssel. Az alkalmazott módszereket a következőkben újuk le.
1.1 Fordított fázisú HPLC
Az RP-HPLC vizsgálatot Nucleosil C18 oszlop (a Kanuer cég gyártmánya) felhasználásával végeztük.
A mozgó fázis 0,12 (térfogat/térfogat%) trifluor-ecetsavból TFA/víz, (A) és 0,1 (térfogat/térfogat%) TFAacetonitrilből (B) állt. A kromatográfiát 0,5 ml/perc áramlási sebesség mellett, lineáris A—>B gradiens alkalmazásával végeztük.
A beinjektált mennyiség receptúrától függően
3-6 pg G-CSF volt. A kiértékelést a csúcsfelület alapján, külső standard felhasználása mellett 214 nm hullámhosszon végeztük.
1.2 Méretkizárásos kromatográfia (SEC)
A méretkizárásos kromatográfiához (7,5 χ 300 mm méretű) TSK G 2000 SW elválasztóoszlopot használtunk. Az elválasztások izokratikusan, szobahőmérsékleten és 0,6 ml/perc áramlási sebesség mellett egy foszfátpufferben (22,2 mmol Na2HPO4; 107,7 mmol KH2PO4; pH=6,2) történtek. A beinjektált mennyiség 3-6 pg G-CSF volt. A kiértékelést a csúcsfelület alapján, külső standard felhasználásával, 214 nm kimutatási hullámhossz mellett végeztük.
1.3 SDS-Page/„Westem Biot” pg rhG-CSF-et nem redukáló körülmények között egy 12%-os polialkril-amid-SDS-gélre adagoltunk és gélelektroforézisnek vetettük alá. Ezután a molekulatömegük szerint szétválasztott G-CSF monomereket, dimereket vagy aggregátumokat elektro-blotting-gal nitrocellulózra vittük át. Egy speciális poliklonális, biotinilezett anti-G-CSF-antitesttel (PAK<G-F>IgG) azonosítottuk a proteinsávokat, és foszfatáztechnikával, sztreptavidin-alkalikus foszfatázkonjugátum (SA-AP konjugátum), 5-bróm-4-klór-3-indolil-foszfát (BCIP) és nitrokék tetrazolium (NBT) felhasználásával azokat kimutattuk. A monomerek, dimerek, illetve aggregátumkomponensek meghatározása lézer-sűrűségmérési kiértékeléssel, egy rhG-CSF-standard sorozat segítségével történt.
1.4 NFS-60 biovizsgálat (biológiai hatóképesség)
A G-CSF in vitro aktivitásának meghatározása NFS-60 sejtek G-CSF-fel stimulált természete sejtszámának mérésén alapszik.
Erre alkalmas körülmények között a sejtek dehidrogenázaktivitása a közeg G-CSF-koncentrációjával hozható összefüggésbe. A G-CSF-pufferoldat megfelelő hígításait állítjuk elő, hogy a dehidrogenázaktivitás egyszerű módon mérhető növekedését érjük el.
Az aktivitás mérése ezután 570 és 690 nm-en, fotometriásan történik. A (sárga színű) MTT tetrazolíniumsó (kék színű) formazanná történő redukcióját mérjük.
A G-CSF in vitro aktivitását úgy számítjuk ki, hogy a minta mérési adatait a standardhez képest a párhuzamos egyenes módszerével hasonlítjuk össze. A kiértékelés a Ph. Eur. (VIII. 13.) követelményei szerint történik.
1.5 Szórtfény-mérés, zavarosságmeghatározás
A mérés a fel nem hígított termék oldatával (2 cm átmérőjű üvegküvettákban történik. A folyadék által diffúz módon eltérített szórt fényt 90°-os szögben mértük. A mérést a DIN 38404 C2 szerinti formazinstandard szuszpenzióval összehasonlításban végezzük, az értékek meghatározása TE/F-ben történik. A mérést
HU 220 256 Β alkalmas zavarosságmérő (például LTPS típusú, Dr. Lángé, Düsseldorf cég gyártmányú) fotométerrel végezzük.
1.6 OD 280 fotometriás (proteintartalom) mérés
A G-CSF ultraibolya-spektrumnak 280 nm-en ab- 5 szorpciós maximuma van, ami oldallánc-kromofor csoportokra, mint triptofán-, tirozin- és fenil-alanin-csoportokra vezethető vissza. A placebooldatokhoz viszonyított mérés:
UV-spektrofotométerrel (például Uvikon 810 P vagy 941 típusú Kontron Instruments gyártmányú műszerrel)
500 μΐ-es, 1 cm rétegvastagságú szemimikro kvarcküvettával (például a Hellma cég Suprasil 104.002B-QS katalógus számú termékével).
2. példa
0,1 mg/ml Poloxamer 118-at, valamint a következő cukrok, illetve cukoralkoholok: mannit (1. receptúra), laktóz (2. receptúra), maltóz (3. receptúra) 50 mg/ml tartalmú vizes oldataihoz 70 pg/ml koncentrációban GCSF-et adtunk. Az oldatokat steril, 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn át az I hidrolitikus osztályba tartozó steril, üvegből készült injekciós edényekbe töltöttük le. Liofilizálás után steril nitrogénnel öblítettük ezeket át, 10 és az először lazán felhelyezett dugókat a liofilizátumok lezárása végett, aszeptikus körülmények között benyomtuk. A liofilizátumokat lepermeteztük, és sötétben 6 és 13 héten át különböző hőmérsékleten tároltuk. Ezután a következőkben leírt módszerekkel megvizsgál15 tűk a készítmények stabilitását.
la. táblázat Tárolás 20° C-on
6 hetes tárolás 20 °C-on 13 hetes tárolás 20 °C-on
I II III I II III
1. receptúra, mannit (kontroll) >99% 91% 36% 86% 47% 27%
2. receptúra, laktóz (kontroll) >99% >99% 18% >99% >99% 12%
3. receptúra, maltóz >99% >99% 6% >99% >99% 7,8%
I tisztaság: változatlan protein RP-HPLC vizsgálat szerint
II tisztaság: változatlan protein SEC-HPLC vizsgálat szerint III dimerek/aggregátumok a „Western Biot” szerint.
Ib. táblázat Tárolás 40 °C-on
40 °C-on 40 °C-on
I II III I II III
1. receptúra, mannit (kontroll) 81% 70% 50% 69% 25% 70%
2. receptúra, aktóz (kontroll) >99% >99% 37% >99% >99% *
3. receptúra, maltóz >99% >99% 6,4% >99% >99% 12%
* nem kiértékelhető/aggregálódik
I tisztaság: változatlan protein RP-HPLC vizsgálat szerint
II tisztaság: változatlan protein SEC-HPLC vizsgálat szerint
III dimerek/aggregátumok a „Western Biot” szerint.
3. példa
G-CSF-liofilizátumokat állítottunk elő. E célból az alábbi táblázatban nevezett segédanyagokat injekció céljára alkalmas vízben oldottuk, az oldathoz 70 pg/ml koncentrációban G-CSF-et adtunk, és adott esetben kis mennyiségű pufferrendszerrel a pH-t pontosan beállítottuk. Megfelelően alkalmas tenzidként Pluronil F 68-at használtunk. Más tenzidek hasonlóképpen viselkednek. 55 Megfelelő, 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn végzett steril szűrés után az oldatokat az I hidrolitikus osztályba tartozó injekciós üvegekbe töltöttük le, és a szokásos eljárással liofilizáltuk. Liofilizálás után az üvegeket nitrogénnel öblítettük át, és azokat fagyasztószárí- 60 táshoz használt dugókkal zártuk le aszeptikus körülmények között. A készítményeket lepermetezett üvegekben, sötétben, meghatározott hőmérsékleten 6 és 12 hétig tároltuk és az 1. példában leírt módszerekkel vizsgáltuk meg.
II. táblázat
Maltóztartalmú G-CSF-receptúrák pH=3,6-nál
4. receptúra 5. receptúra
G-CSF 70 pg 70 pg
maltóz 35 mg 35 mg
HU 220 256 Β
II. táblázat (folytatás)
4. receptúra 5.receptúra
L-fenilalanin 10 mg 10 mg
aszkorbinsav 5 mg 5 mg
glutation 10 mg 10 mg
4. receptúra 5.rcccptúra
L-arginin 10 mg 10 mg
puffer-pH pH=3,6 pH=3,6
Pluronic F68 - 0,1 mg
injekciós célra alkalmas víz 1 ml Imi
III. táblázat Tárolás 20 °C-on
recept száma tárolási hőmérséklet aggregátum % 6 hetes tárolás után aggregátum % 12 hetes tárolás után 6 hetes tárolás után 12 hetes tárolás után
secretary G-CSF % represen tative G-CSF % secretary G-CSF % represen tative G-CSF %
4. +20 °C 0,0 2,6 61 63 64 69
5. +20 °C 0,0 0,5 >99 >99 >99 >99
4. példa 20
500 pg/ml mennyiségű G-CSF-et tartalmazó GCSF-liofilizátumokat állítottunk elő a következő módon. Az alábbi táblázatban nevezett segédanyagokat injekciós oldatok készítésére alkalmas vízben oldottuk fel, G-CSF-et adtunk hozzá és szükség esetén a pH- 25 értéket kis mennyiségű sósavval vagy dinátrium-hidrogén-foszfáttal állítottuk be. Az oldatok előzőleg 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn sterilen leszűrt 11 ml-ét az I hidrolitikus osztályba tartozó injekciós üvegekbe töltöttük le, és a szokásos eljárással fagyasztással szárítottuk. A liofilizálás után az üvegeket nitrogénnel öblítettük ki, és a liofilizátumokat fagyasztószárításhoz használt dugókkal, aszeptikus körülmények között lezártuk. A leperemezett liofilizátumokat sötétben, meghatározott hőmérsékleten tároltuk, és az 1. példában leírt módszerekkel vizsgáltuk meg.
IV. táblázat
A 6-10 receptúrák összetétele
6.rcccptúra 7. receptúra 8. receptúra 9.receptúra 10. receptúra
G-CSF 0.5 pg 0,5 pg 0,5 pg 0,5 pg 0,5 pg
maltóz 35 mg 35 mg 35 mg - -
L-fenil-alanin 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
aszkorbinsav 5 mg - - 5 mg -
glutation 10 mg - - 10 mg -
L-glutaminsav 5 mg - - 5 mg -
L-arginin 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
puffer-pH 4,5 4,5 6,5 4,5 6,5
Pluronic F68 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg
injekciós célra alkalmas víz 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
V. táblázat Analíziseredmények
receptúra száma tárolási hőmérséklet Western Biot 6 hét után 13 hét után
6. hét aggregátum % 12. hét aggregátum % secretary G-CSF % aggregátum % representative G-CSF % secretary G-CSF % aggregátum % representative G-CSF %
6. + 8 °C <1 1,0 >99% 0,9 >99% >99% 0,7 99%
+ 40 °C <1 1,7 >99% 0,6 >99% >99% 0,6 98%
7. + 8 °C <1 1,1 >99% 1,6 >99% >99% 1,1 99%
+ 40°C <1 2,3 >99% 1,9 >99% >99% 1,1 99%
HU 220 256 Β
V. táblázat (folytatás)
receptúra száma tárolási hőmérséklet Western Biot 6 hét után 13 hét után
6. hét aggregátum % 12. hét aggregátum % secretary G-CSF % aggregátum % represen- tative G-CSF % secretary G-CSF % aggregátum % representative G-CSF %
8. + 8°C <1 - >98% 1,5 >99%
+ 40°C <1 - >98% 1,4 >99%
9. + 8 °C 3,8 0,3 95% 5,8 >99% 95% 1,5 98%
+ 40 °C 7,9 2,5 95% 6,4 93% 86% 0,8 94%
10. + 8 °C - 5,2 96% 1,0 95%
+ 40°C - 10,3 89% 2,6 89%
5. példa
A következő táblázatban felsorolt (11-14. receptúrák) készítményeket a következő módon állítottuk elő. A segédanyagokat injekciós célra alkalmas vízben feloldottuk, majd az oldatokhoz a megadott koncentrációban G-CSF-et adtunk.
Szükség esetén a pH-t a foszfátpuffer komponensei segítségével pontosan beállítottuk. Az oldatokat ezután
0,2 pm pórusméretű, sterilizált membránszűrőn leszűrtük, az I hidrolitikus osztályba sorolt injekciós üvegekbe töltöttük le és liofilizáltuk. Liofilizálás után az üvegeket nitrogénnel öblítettük ki, aszeptikus körülmények között, fagyasztószárításhoz használt gumidugókkal zártuk le és permeteztük. A liofilizátumokat sötétben meghatározott hőmérsékleten tároltuk. 6 és 13 hét eltelte után az 1. példában leírt módszerekkel végeztük a vizsgálatokat.
VI. táblázat
Aminocukor-tartalmú liofilizátumkészítmények
11. receptúra 12.receptúra 13.receptúra 14.receptúra
(kontrollok)
G-CSF 0,5 pg 0,5 gg 0,5 μ 0,5 μ
Pluronic F68 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg
N-metil-glukóz-amin - 10 mg - 10 mg
galaktózamin 10 mg - 10 mg -
glicin - - 35 mg 35 mg
maltóz 35 mg 35 mg - -
fcnilalanin 10 mg - - -
foszfátpuffer pH=7,0 pH=7,0 pH=7,0 pH=7,0
injekciós célra alkalmas víz 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml 1,0 ml
A fenti készítmények tárolása után kapott analízisadatokat az alábbi táblázatban foglaljuk össze.
VII. táblázat Analízisadatok (BT=bomlástermékek)
receptúra száma tárolási hőmérséklet 6 hetes tárolás utáni aggregátum % „Western Blot-tal” 12 hetes tárolás utáni aggregátum % „Western Blot-tal” 12 hetes tárolás
RP-HPLC G-CSF % BT, SEC-HPLC-vel
11. + 8 °C 3,8 2,9 >99 1,2
+ 40 °C 3,2 2,3 >99 1,8
12. + 8°C 1,8 3,8 >99 1,4
+ 40 °C 1,7 4,5 >99 1,7
HU 220 256 Β
VII. táblázat (folytatás)
receptúra száma tárolási hőmérséklet 6 hetes tárolás utáni aggregátum % „Western Blot-tal” 12 hetes tárolás utáni aggregátum % „Western Blot-tal” 12 hetes tárolás
RP-HPLC G-CSF % BT, SEC-HPLC-vel
13. + 8 °C 1,1 1,4 >99 0,9
+ 40 °C 16,8 13,0 75 4,2
14. + 8°C 1,6 12,4 97,5 1,2
+ 40 °C 7,7 26,3 84,5 3,5
6. példa
Az alábbiakban leírt 15. és 16. receptúrákat a következő módon állítottuk elő. A megadott segédanyagokat injekciós célra alkalmas vízben feloldottuk, és az oldathoz a megadott koncentrációban G-CSF-et adtunk. A pH-t szükség esetén a pufferkomponenssel állítottuk be. Ezután az oldatot 0,2 pm pórusméretű, sterilizált membránszűrőn leszűrtük, és aszeptikus körülmények között az I hidrolitikus osztályba tartozó, steril injekciós üvegekbe töltöttük le. Ezután az injekciókészítményeket fagyasztással szárítottuk, az üvegeket nitrogénnel öblítettük ki, aszeptikus körülmények között, fagyasztószárításnál használt dugóval zártuk le, majd peremeztük. A készítményeket sötétben, meghatározott hőmérsékleten tároltuk, és az alábbiakban feltüntetett paraméterekre vizsgáltuk meg. A vizsgálat az 1. példában leírt módszerekkel történt.
15.receptúra 16. receptúra (kontroll)
G-CSF 0,25 mg G-CSF 0,3 mg
Polisorbat 80 0,05 mg Polisorbat 80 0,1 mg
fenilalanin 5 mg mannit 50 mg
maltóz 17,5 mg puffer pH=4,5
L-arginin 5 mg injekciós célra alkalmas víz 1,0 ml
puffer pH=4,5
injekciós célra alkalmas víz 0,5 ml
VIII. táblázat
15.receptúra 16. receptúra (kontroll)
3 hónapos tárolási idő 6 hónapos tárolási idő 3 hónapos tárolási idő 6 hónapos tárolási idő
4-8 °C 23 °C 4-8 °C 23 °C 4-8° 23 °C 4-8 °C 23 °C
West Biot (dimerek) 2,2 <1% 1,3 + 0,7 <1% 12% 4,1% 17
SEC-HPLC <1% <1% <1% <1% <1% 2% <1% 3
RP-HPLC (dimerek) (G-CSF csúcs) >99% >99% >98% >98% >99% 98,2% >98% >98%
7. példa
A IX. táblázatban szereplő receptúrákat a következő módon állítottuk elő.
A nevezett segédanyagokat injekciós célra alkalmas vízben feloldottuk, az oldathoz a megadott koncentrá- 55 cióban G-CSF-et adtunk, majd ezután, kívánt esetben a pH-t kis mennyiségű pufferkomponens hozzáadásával állítottuk be. A gyógyszeranyag-oldatot ezután sterilizált, 0,2 pm pórusméretű membránszűrőn sterilen szűrtük, majd aszeptikus körülmények között sterilezett, az 60
I hidrolitikus osztályba sorolt injekciós üvegekbe töltöttük le, és liofilizáltuk.
A liofilizálás után az üvegeket nitrogénnel öblítettük, és aszeptikus körülmények között fagyasztószárításhoz használt dugókkal zártuk le. Az üvegeket peremeztük, és sötétben, meghatározott hőmérsékleten tároltuk. A megfelelő tárolási idő eltelte után az 1. példában leírt módszerekkel analitikai vizsgálatokat végeztünk (lásd a IX. táblázatot).
HU 220 256 Β
IX. táblázat
Más vázképző anyagokkal összehasonlításban maltózzal készült liofilizátumok
17. receptúra 18. receptúra 19. receptúra 20. receptúra 21. receptúra 22. receptúra 23. receptúra 24. receptúra
kontroll kontroll
G-CSF 350 pg 350 pg 175 pg 175 pg 175 pg 175 pg 175 pg 175 pg
maltóz 17,5 mg 17,5 mg 17,5 mg - - -
glicin (kontroll) 4 mg 10 mg 8,9 mg
arginin 5 mg 5 mg 5 mg - -
fenilalanin 5 mg 5 mg 5 mg 5 mg - 2,5 mg
mannit (kontroll) 50 mg 50 mg - -
Tween 80 0,1 mg 0,1 mg 0,05 mg 0,05 mg 0,05 mg 0,05 0,05 mg 0,05 mg
PH 4,5 7,2 4,5 7,2 7,2 7,2 7,2 7,2
(puffer) HC1 foszfát HCL HCL HCL HCL foszfát foszfát
injekciós célra alkalmas víz 1,0 1,0 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
X. táblázat
E táblázatban a fenti receptúrák analízisadatait foglaljuk össze
receptúra tárolás 4 hét 4 hét
RP-HPLC G-CSF% SEC-HPLC G-CSF% Western Biot
17. (kontroll) 8 °C >99 >99 3,6% dimerek
30 °C 40 °C 94 92 9,6% dimerek 14,4% dimerek
18. (kontroll) 8 °C 69 60 aggregátumok
30 °C 44 36 aggregátumok
40 °C 13 12 aggregátumok
19. (találmány szerinti) 8 °C >99 99 1,0% dimerek
30 °C >99 95,5 0,5% dimerek
40 °C >99 97,5 0,5% dimerek
20. (találmány szerinti) 8 °C >99 >99 1,6% dimerek
30 °C >99 >99 1,4% dimerek
40 °C >99 >99 2,3% dimerek
21. (találmány szerinti) 8 °C >99 >99 1,5% dimerek
30 °C >99 97,5 2,1% dimerek
40 °C >99 97 2,0% dimerek
22. (kontroll) 8 °C >99 >99 2,8 dimerek/aggregátumok
30 °C 40 °C 96 96 3,0 dimerek/aggregátumok 12% dimerek/aggregátumok
23. (kontroll) 8 °C >99 >99 6,8% dimerek
30 °C 91,5 92 aggregátumok
40 °C 79 74 aggregátumok
24. (kontroll) 8 °C >99 >99 10,8% dimerek
30 °C 88 85 aggregátumok
40 °C 67 60 aggregátumok
HU 220 256 Β
8. példa
A találmány szerinti, 7,4 pH-jú, ismét feloldott liofilizátumok tárolhatósági ideje
A következő összetételű készítményt állítottuk elő.
mg/ml 25. receptúra
G-CSF 0,35
Polisorbat 80 0,1
maltóz 50
arginin 10
fenilalanin 10
sósav pH=7,4-re
A nevezett segédanyagokat 1 ml, injekciós célra alkalmas vízben oldottuk, az oldathoz hozzáadtuk a GCSF-t, és a pH-értéket 7,4-re állítottuk be. Az oldatot 2 pm pórusméretű membránszűrőn sterilen szűrtük, majd ezután az I hidrolitikus osztályba sorolt injekciós 20 üvegekbe töltöttük le.
Alkalmas, fagyasztószárításhoz használt dugók felhelyezése után a készítményt -25 °C szárítási hőmérséklet és +8 °C utószárítási hőmérséklet mellett 5%nál kisebb nedvességtartalomra szárítottuk. A meg- 25 szárított liofilizátumokat nitrogénnel öblítettük át és lezártuk.
hónapos, 4-8 °C hőmérsékleten végzett tárolás után a liofilizátumokat 1 ml injekciós célra alkalmas vízben feloldottuk, majd ezután 24 órán át szobahőmér- 30 sékleten állni hagytuk.
E tárolási idő után az 1. példában leírt vizsgálati módszerekkel, a biológiai hatóképesség (NFS-60 vizsgálat), a proteintartalom (OD 280 fotometria), a „Western Biot” szerinti tisztaság, a SEC-HPLC szerinti tisz- 35 taság, az SDS-Page szerinti tisztaság, és az RP-HPLC szerinti tisztaság tekintetében nem találtunk változást a vizsgált minták, közvetlenül a feloldódást követő vizsgálati eredményeihez képest. A zavarossági mérések még mechanikai terhelés alatt is - igen alacsony zava- 40 rossági értékeket mutattak.
Ily módon világossá válik, hogy a találmány szerinti maltózt és argininpuffert 7,4-es pH-t tartalmazó, újra feloldott liofilizátumoknak a klinikai alkalmazás szempontjából kielégítő tárolhatósági ideje van. 45
9. példa
Maltózt, raffinózt, szacharózt vagy trehalózt tartalmazó, találmány szerinti liofilizátumok stabilitása 13 hetes, 40 °C-on végzett tárolás után
A 8. példa 25. receptúrája szerint három liofilizátumot állítottunk elő, amelyek 50 mg/ml mennyiségű maltózt vagy ezzel azonos mennyiségű a) raffinózt, b) szacharózt vagy c) trehalózt tartalmaztak.
Mindegyik liofilizátumot 13 héten át 5 °C, 25 °C, 30 °C és 40 °C hőmérsékleten tároltuk, ezután feloldottuk és vizuálisan, valamint az 1. példában leírt SECHPLC, RP-HPLC, „Western Biot” és SDS-Page vizsgálati módszerekkel megvizsgáltuk.
Minden esetben átlátszó, színtelen oldatokat kaptunk. A SEC-HPLC vizsgálatnál a termékcsúcs nagysága 99%-nál nagyobb, és a dimerek/aggregátumok menynyisége 1%-nál kisebb volt. Az RP-HPLC vizsgálatnál a termékcsúcs 100%-ot ért el, mellékcsúcsok nem voltak kimutathatók, a főcsúcs a munkastandardnek felelt meg. Az SDS-Page vizsgálatnál bomlástermékek, dimerek vagy aggregátumok nem voltak kimutathatók.
Táblázat
hőmér- séklet SECHPLC G-CSF % RP- HPLC G-CSF % Western Biot aggre- gátum % SDS-Page melléksávok %
5 °C >98% 100% nem mutatható ki <1
20 °C >98% 100% nem mutatható ki <1
30 °C >98% 100% nem mutatható ki <1
40 °C >98% 100% nem mutatható ki <1
10. példa
A találmány szerinti, 4,5 és 7,2 pH-jú, arginin-foszfát- és arginin-klorid-tartalmú pufferek stabilitása 13 hetes, 30 °C-on végzett tárolás után
A 8. példában leírt előállítási módszenei az alábbi - lényegében csak különböző pufferek és pH-értékek tekintetében különböző következő receptúrákat állítottuk elő.
26. receptúra 27.receptúra 28. receptúra 29. receptúra
G-CSF 0,35 mg 0,35 mg 0,35 mg 0,35 mg
Polisorbat 80 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg 0,1 mg
fenilalanin 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
arginin 10 mg 10 mg 10 mg 10 mg
maltóz 47,5 mg 47,5 mg 47,5 mg 47,5 mg
foszforsav pH=4,5 pH=7,2
sósav pH=4,5 pH=7,2
HU 220 256 Β
11. példa
7,4 pH-jú, arginin-foszfáttal és arginin-klorid-pufferrel készült, találmány szerinti maltóz-liofilizátumok stabilitása 4 és 13 hetes, 40 °C-on végzett tárolás után
A 8. példában leírt módon receptúrákat állítottunk elő, és ezek pH-ját egyszer sósavval és egyszer foszforsavval 7,4-re állítottuk be.
A készítményeket 4-8 °C-on, 20-25 °C-on, valamint 30 °C-on tároltuk, 13 hét múlva injekciós célra alkalmas vízben feloldottuk, és az 1. példában leírt RPHPLC, SEC-HPLC (tisztaságra) és „Western Biot” (bomlásra, dimerizálódásra és aggregátumképződésre szolgáló) módszerekkel megvizsgáltuk. Az eredményeket a XI. táblázatban tüntetjük fel, és ezek azt mutatják, hogy a találmány szerinti 4,5 és 7,2 pH-jú 13 hetes, 30 °C hőmérsékleten végzett tárolás után is stabilisak.
XI. táblázat hetes, 30 °C hőmérsékleten végzett tárolás utáni eredmények
RP- HPLC SEC- HPLC Western Biot
mcllékcsúcs % le- bomlás dime- rek aggre- gátum
26. receptúra <1 <1 n.n. n.n. n.n.
27. receptúra <1 <1 n.n. n.n. n.n.
28. receptúra <1 <1 n.n. <1% n.n.
29. receptúra <1 <1 n.n. <1% n.n.
n.n=ncm mutatható ki.
30. receptúra 31. receptúra
G-CSF 0,35 mg 0,35 mg
Polysorbat 80 0,1 mg 0,1 mg
fenilalanin 10 mg 10 mg
arginin 10 mg 10 mg
maltóz 47,5 mg 47,5 mg
foszfátpuffer pH=7,4
sósav pH=7,4
Ezt a két készítményt 4-8 °C, valamint 40 °C hő20 mérsékleten 4 és 13 héten át tároltuk. A vizsgálatok (Western Biot, SDS-Page) 13 hét tárolási idő utáni eredményeit az alábbi XII. táblázatban tüntetjük fel. A 4 hetes tárolás utáni eredmények ezekkel azonosak.
Az eredmények azt mutatják, hogy a találmány sze25 rinti, 7,4 pH-jú maltóz liofilizátumok 4 hetes, 40 °C-on végzett tárolás után stabilisak.
XII. táblázat hetes, 40 °C-on végzett tárolás utáni vizsgálatok
tárolási hőmérséklet Western Biot nem redukált SDS-Page redukált adalékanyag- test maradék %-os nedvesség
aggregátum <1% dimerck <1% termék- test lebomlási termék
30. receptúra 5 °C n.n. n.n. < 98% <1% n.n. 1,4
40 °C n.n. n.n. < 98% <1% n.n. 2,0
31. receptúra 5 °C n.n. n.n. < 98% <1% n.n. 1,9
40 °C n.n. n.n. <98% <1% n.n. 2,1
n.n.=nem mutatható ki.
12. példa
7,4 pH-jú és 0,5 mg/ml, valamint 1,0 mg/ml G- 45 CSF-koncentrációjú, találmány szerinti liofilizátumok stabilitása 13 hetes, 40 °C-on végzett tárolás után
A 8. példában leírt előállítási módszerrel a következő, G-CSF-tartalomban egymástól különböző receptúrákat állítottuk elő. 50
mg/ml 32.receptúra 33.receptúra
G-CSF 0,5 mg 1,0 mg
Polisorbat 80 0,1 mg 0,1 mg
fenilalanin 10 mg 10 mg
arginin 10 mg 10 mg
maltóz 47,5 mg 47,5 mg
foszforsav pH=7,4 pH=7,4
A készítményeket -20 °C-on, 4-8 °C-on, 20-25 °C-on, 30 °C-on és 40 °C-on 4 hétig és 13 hétig tároltuk, ezután 1 ml injekciós célra alkalmas vízben oldottuk fel, és az 1. példában leírt vizsgálati módszerekkel SEC-HPLC-vel, RP-HPLC-vel, Western Blot-tal és SDS-Page-el vizsgáltuk. (A vizsgálati eredményeket lásd a XIII. táblázatban).
Az eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti készítmények 1 mlg/ml-ig teijedő, nagyobb proteinkoncentrációk mellett is stabilisak 40 °C-on, 13 héten át végzett tárolás után.
13. példa hónapos, hosszú időtartam alatti stabilitás
All. példa 31. receptúrája szerint liofilizátumokat állítottunk elő, és ezeket a készítményeket -20 °C, 5 °C, 25 °C, 30 °C és 40 °C hőmérsékleten 9 hónapon
HU 220 256 Β át tároltuk, és 3, 6 és 9 hónap elteltével az 1. példában leírt vizsgálati módszerekkel megvizsgáltuk.
A tárolási idő alatt a vizsgált paraméterek egyikében sem volt kimutatható változás. A készítmény a tárolási idők elteltével minden hőmérsékleten biológiailag 5 teljesen aktívnak bizonyult, teljes proteintartalmát megőrizte, és a tisztasági fok meghatározásánál olyan sávokat, illetve csúcsokat mutatott, amelyek messze az intakt G-CSF-molekula 1%-án belül voltak.
Az eredmények azt bizonyítják, hogy a találmány szerinti liofilizátumok hosszú távon magasabb hőmérsékleteken is stabilisak, és ily módon a technika állásában leírt stabilitásokat messze felülmúlják.
XIV. táblázat 30 °C-on végzett tárolás
3 hónap 6 hónap 9 hónap
NFS 60 teszt megfelelő megfelelő megfelelő
80-125%
OD280 358 mg 360 mg 352 mg
SDS-Page
melléksáv <1% <1% <1
Western Biot aggregátum % n.n. n.n. n.n.
dinierek % <1% <1% <1%
RP-HPLC termékcsúcs >99% >99% >99
SEC-HPLC
termékcsúcs >98% >98% >98%
mellékcsúcs n.n. n.n. n.n.
zavarosságmérés TE/F 0,5 0,5 0,5
n.n.=nem kimutatható

Claims (16)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Eljárás stabilan eltartható, liofilizált, hatóanyagként granulocitakolónia-stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy G-CSF-t, és adott esetben további gyógyszerészeti segédanyagokat tartalmazó vizes oldathoz a G-CSF nem kontrollált befagyasztásakor és felolvadásakor vagy magasabb hőmérsékleten való tárolásakor fellépő minőségveszteségének elkerülésére segédanyagként maltózt, cellobiózt, gentiobiózt, izomaltózt, raffinózt, trehalózt vagy aminocukrot adunk, és a kapott oldatot liofilizáljuk.
  2. 2. Eljárás stabilan eltartható, liofilizált, hatóanyagként granulocitakolónia-stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy G-CSF-t és adott esetben további gyógyszerészeti segédanyagokat tartalmazó vizes oldathoz a liofilizátum újraoldásakor fellépő aggregátum- vagy dimerképződés elkerülésére segédanyagként (1) maltózt, raffmózt, szacharózt vagy trehalózt és (2) bázikus, savas vagy aromás aminosavat adunk, és a kapott oldatot liofilizáljuk.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy segédanyagként maltózt, raffmózt, trehalózt vagy aminocukrot alkalmazunk.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy segédanyagként maltózt, raffmózt, glukózamint, galaktózamint vagy neuraminsavat alkalmazunk.
  5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy további gyógyszerészeti segédanyagként az alkalmazott G-CSF fehéqemennyiségnél kisebb vagy azzal legfeljebb azonos mennyiségű, fiziológiásán elviselhető tenzidet alkalmazunk.
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a tenzidet 0,5 mg/ml, előnyösen 0,01-0,1 mg/ml mennyiségben alkalmazzuk.
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy fiziológiásán elviselhető mennyiségű aminosavat is adunk az oldathoz.
  8. 8. A 2. vagy 7. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy aminosavként arginint és/vagy fenilalanint adunk az oldathoz.
  9. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy további gyógyszerészeti segédanyagként antioxidánsokat, komplexképzőket, puffereket, savakat, bázisokat vagy izotonizáló szereket alkalmazunk.
  10. 10. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pufferként foszfát- vagy acetátpuffert alkalmazunk.
  11. 11. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy pufferként 7-8 pH-értékű arginin-foszfát-, arginin-klorid- vagy arginin-citrát-puffert alkalmazunk.
  12. 12. Liofilizált, stabilan eltartható, hatóanyagként granulocitakolónia-stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy segédanyagként maltózt, cellobiózt, gentiobiózt, izomaltózt, raffmózt, glukózamint, galaktózamint vagy neuraminsavat tartalmaz.
  13. 13. Liofilizált, stabilan eltartható, hatóanyagként granulocitakolónia-stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy segédanyagként (1) maltózt, raffmózt, szacharózt vagy trehalózt és (2) bázikus, savas vagy aromás aminosavat tartalmaz.
  14. 14. A 12. vagy 13. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy lényegében fehétjeszerű vagy polimer segédanyagoktól mentes.
  15. 15. A 12. vagy 13. igénypont szerinti vizes gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a liofilizátum újra feloldásával kapható.
  16. 16. A 15. igénypont szerinti vizes gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy az oldat pH-értéke 6,5-8 vagy 4-5, előnyösen 7,0-7,5.
HU9501764A 1992-12-18 1993-12-15 Granulocita-kolónia stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó, stabilan eltartható, liofilizált gyógyszerkészítmények és eljárás az előállításukra HU220256B (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE4242863A DE4242863A1 (de) 1992-12-18 1992-12-18 Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF
PCT/EP1993/003543 WO1994014465A1 (de) 1992-12-18 1993-12-15 Stabile lyophilisierte pharmazeutische zubereitungen von g-csf

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9501764D0 HU9501764D0 (en) 1995-08-28
HUT74269A HUT74269A (en) 1996-11-28
HU220256B true HU220256B (hu) 2001-11-28

Family

ID=6475691

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9501764A HU220256B (hu) 1992-12-18 1993-12-15 Granulocita-kolónia stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó, stabilan eltartható, liofilizált gyógyszerkészítmények és eljárás az előállításukra

Country Status (14)

Country Link
US (1) US5919443A (hu)
EP (1) EP0674524B1 (hu)
JP (1) JPH08504784A (hu)
KR (1) KR100266145B1 (hu)
AT (1) ATE165007T1 (hu)
AU (1) AU676573B2 (hu)
CA (1) CA2151732C (hu)
DE (2) DE4242863A1 (hu)
DK (1) DK0674524T3 (hu)
ES (1) ES2117781T3 (hu)
HU (1) HU220256B (hu)
NZ (1) NZ258912A (hu)
SG (1) SG66740A1 (hu)
WO (1) WO1994014465A1 (hu)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9508691D0 (en) * 1995-04-28 1995-06-14 Pafra Ltd Stable compositions
CA2180206A1 (en) * 1995-06-30 1996-12-31 Motoya Ohshika Freeze-dried preparation for pharmaceutical use
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
DE19539574A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
US5770700A (en) * 1996-01-25 1998-06-23 Genetics Institute, Inc. Liquid factor IX formulations
EP0852951A1 (de) * 1996-11-19 1998-07-15 Roche Diagnostics GmbH Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von mono- oder polyklonalen Antikörpern
EP1060746A4 (en) * 1998-03-06 2002-06-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PROTEIN-FREE PREPARATIONS
JP4332694B2 (ja) * 1998-06-26 2009-09-16 大塚製薬株式会社 水溶性乾燥組成物
DK2130554T3 (da) * 1999-02-22 2012-12-03 Univ Connecticut Albuminfrie faktor VIII-præparater
JP2000247903A (ja) * 1999-03-01 2000-09-12 Chugai Pharmaceut Co Ltd 長期安定化製剤
CA2395438C (en) * 1999-12-24 2009-10-13 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Dry compositions containing hydrophobic amino acid
DK1129720T3 (da) 2000-02-29 2004-09-27 Pfizer Prod Inc Stabiliseret granulocyt-kolonistimulerende faktor
AU2001244584B2 (en) * 2000-03-31 2006-01-19 Kirin Pharma Kabushiki Kaisha Powdery preparation for transmucosal administration containing a polymeric form of drug and exhibiting improved storage stability
AU8260701A (en) * 2000-09-01 2002-03-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Solution preparations stabilized over long time
US20020150541A1 (en) * 2000-09-12 2002-10-17 Gene Trol Biotherapeutics, Inc. Compositions comprising mixtures of therapeutic proteins and methods of producing the same
US20020150552A1 (en) * 2000-09-12 2002-10-17 Lau Allan S. Compositions comprising mixtures of therapeutic proteins and methods of producing the same
US20030129162A1 (en) * 2000-09-12 2003-07-10 Lau Allan S. Compositions comprising mixtures of therapeutic proteins and methods of producing the same
US20020141970A1 (en) * 2001-03-05 2002-10-03 Pettit Dean K. Stable aqueous solutions of granulocyte macrophage colony-stimulating factor
DE10163459A1 (de) * 2001-12-21 2003-07-03 Merck Patent Gmbh Lyophilisierte Zubereitung enthaltend Antikörper gegen EGF-Rezeptor
DE10204792A1 (de) * 2002-02-06 2003-08-14 Merck Patent Gmbh Lyophilisierte Zubereitung enthaltend Immuncytokine
JP5057648B2 (ja) * 2002-09-26 2012-10-24 塩野義製薬株式会社 安定化されたタンパク組成物
FR2857267B1 (fr) * 2003-07-09 2006-03-10 Lab Francais Du Fractionnement Formulation stabilisante et solubilisante pour les proteines cryoprecipitables.
DE10348550A1 (de) * 2003-10-20 2005-06-16 Hexal Biotech Forschungsgmbh Stabile wässrige G-CSF-haltige Zusammensetzungen
EP1691852A2 (en) * 2003-11-10 2006-08-23 Angiotech International AG Medical implants and fibrosis-inducing agents
SI21639A (sl) * 2003-12-23 2005-06-30 LEK farmacevtska dru�ba d.d. Farmacevtski pripravek, ki vsebuje nemicelarne sulfobetaine
DE102004022928A1 (de) * 2004-05-10 2005-12-08 Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co. Kg Pulver enthaltend neuartige Oligosacharidgemische und Verfahren zu deren Herstellung
RS50510B (sr) 2004-10-29 2010-03-02 Pharma Mar S.A., Sociedad Unipersonal Formulacije koje sadrže ekteinascidin i disaharid
DE102006009437A1 (de) 2006-03-01 2007-09-13 Bioceuticals Arzneimittel Ag G-CSF-Flüssigformulierung
KR101438839B1 (ko) * 2006-04-14 2014-10-02 맨카인드 코포레이션 글루카곤 유사 펩타이드 1 （ｇｌｐ-1） 약제학적 제제
JP5179521B2 (ja) * 2007-03-05 2013-04-10 カディラ・ヘルスケア・リミテッド ペグ‐インターフェロンアルファ接合体および凍結保護剤としてラフィノースを含む組成物
JP2010523501A (ja) * 2007-04-04 2010-07-15 セラテクノロジーズ インコーポレイティド Ｇｈｒｈ分子の医薬製剤
JP5349452B2 (ja) * 2007-04-05 2013-11-20 サンド アクチエンゲゼルシャフト 安定な水性ｇ‐ｃｓｆ製剤
EP2076243B9 (de) 2007-08-27 2015-01-14 ratiopharm GmbH Flüssigformulierung von g-csf
US20110212127A1 (en) * 2008-09-24 2011-09-01 Stabilitech Ltd. Method for Preserving Polypeptides Using a Sugar and Polyethyleneimine
AU2009313325B2 (en) * 2008-11-07 2014-05-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited Factor VIII formulations
US20100227818A1 (en) * 2009-01-16 2010-09-09 Teva Biopharmaceuticals Usa, Inc. Recombinant Human Albumin-Human Granulocyte Colony Stimulating Factor For The Prevention Of Neutropenia
EP2563809B1 (en) * 2010-04-27 2020-04-01 Scil Technology GmbH Stable aqueous mia/cd-rap formulations
TWI480288B (zh) * 2010-09-23 2015-04-11 Lilly Co Eli 牛顆粒細胞群落刺激因子及其變體之調配物
EP3744319B1 (en) 2019-05-28 2022-10-19 Ilkogen Ilac Sanayi Ve Ticaret A.S. A stable lyophilized formulation for hybrid fc fused g-csf
CN112807281A (zh) * 2019-10-31 2021-05-18 南京海维医药科技有限公司 包含血管紧张素ii的稳定组合物及其制备方法、使用方法

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GR871067B (en) * 1986-07-18 1987-11-19 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Process for producing stable pharmaceutical preparation containing granulocyte colony stimulating factor
JP2577744B2 (ja) * 1986-07-18 1997-02-05 中外製薬株式会社 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤
US5104651A (en) * 1988-12-16 1992-04-14 Amgen Inc. Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf
JP3249147B2 (ja) * 1990-06-01 2002-01-21 キリン−アムジエン・インコーポレーテツド 生理活性蛋白含有経口製剤
US5416071A (en) * 1991-03-12 1995-05-16 Takeda Chemical Industries, Ltd. Water-soluble composition for sustained-release containing epo and hyaluronic acid
DE4126984A1 (de) * 1991-08-15 1993-02-18 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung von humanprotein-enthaltenden, gut vertraeglichen arzneimitteln fuer infusions- oder injektionszwecke
DE4126983A1 (de) * 1991-08-15 1993-02-18 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung von humanprotein-enthaltenden, konservierten arzneimitteln fuer infusions- oder injektionszwecke
EP0621774B1 (en) * 1992-01-21 1996-12-18 Sri International Improved process for preparing micronized polypeptide drugs
DE4242919A1 (de) * 1992-12-18 1994-06-23 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur Herstellung von lagerstabilen wässrigen pharmazeutischen Zubereitungen von G-CSF
AU3599995A (en) * 1994-10-04 1996-04-26 Csl Limited Controlled-release pharmaceutical preparations

Also Published As

Publication number Publication date
CA2151732C (en) 2008-02-12
ATE165007T1 (de) 1998-05-15
AU676573B2 (en) 1997-03-13
AU6808694A (en) 1994-07-19
DK0674524T3 (da) 1999-02-01
HUT74269A (en) 1996-11-28
SG66740A1 (en) 1999-09-21
WO1994014465A1 (de) 1994-07-07
CA2151732A1 (en) 1994-07-07
DE4242863A1 (de) 1994-06-23
EP0674524A1 (de) 1995-10-04
JPH08504784A (ja) 1996-05-21
DE59308415D1 (de) 1998-05-20
KR100266145B1 (ko) 2000-09-15
HU9501764D0 (en) 1995-08-28
ES2117781T3 (es) 1998-08-16
NZ258912A (en) 1997-06-24
US5919443A (en) 1999-07-06
KR950703987A (ko) 1995-11-17
EP0674524B1 (de) 1998-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU220256B (hu) Granulocita-kolónia stimuláló faktort (G-CSF) tartalmazó, stabilan eltartható, liofilizált gyógyszerkészítmények és eljárás az előállításukra
US10857231B2 (en) Formulations of VEG antagonist fusion proteins and method of manufacturing them
KR100266146B1 (ko) 긴 보장기간을 갖는 g-csf의 수성 약제 조성물
EP0373679B1 (en) Stabilized hydrophobic protein formulations
AU2006295570B2 (en) hFSH aqueous formulation
JP3530300B2 (ja) 安定なトランスグルタミナーゼ製剤およびそれらを製造する方法
PT1988913E (pt) Formulação líquida de g-csf
KR20110086583A (ko) 제8 인자 제형
US5898030A (en) hGH containing pharmaceutical compositions
EP1641486B1 (en) Stable, aqueous solution of human erythropoietin, not containing serum albumin
EP0641216B1 (en) PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS CONTAINING IL-6 stabilized with a non-reducing sugar
US8946161B2 (en) Method of treatment using stable liquid formulation of G-CSF
JP3479082B2 (ja) トロンボポイエチン組成物
HU226554B1 (en) Freeze-dried composition of bone morphogenetic protein human mp52
HU218103B (hu) Nem-glikozilezett, rekombináns humán interleukin-2 redukált alakját tartalmazó, stabilizált gyógyászati készítmény és eljárás előállítására
WO2007034509A2 (en) Recombinant granulocyte-colony stimulating factor formulation and process
BRPI0416679B1 (pt) Formulação farmacêutica estável de eritropoietina
MXPA03008545A (es) Composiciones farmaceuticas que contienen la hormona humana del crecimiento.

Legal Events

Date Code Title Description
HPC4 Succession in title of patentee

Owner name: PROFESSOR DR. GERHARD WINTER, DE

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees