HU218213B - Ciklodextrin tartalmú eritropoietin készítmények és eljárás előállításukra - Google Patents

Ciklodextrin tartalmú eritropoietin készítmények és eljárás előállításukra Download PDF

Info

Publication number
HU218213B
HU218213B HU9202432A HU243292A HU218213B HU 218213 B HU218213 B HU 218213B HU 9202432 A HU9202432 A HU 9202432A HU 243292 A HU243292 A HU 243292A HU 218213 B HU218213 B HU 218213B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
erythropoietin
cyclodextrin
composition
epo
dried
Prior art date
Application number
HU9202432A
Other languages
English (en)
Other versions
HU9202432D0 (en
HUT62198A (en
Inventor
Frank J. Konings
Jean L. Mesens
Marcus J.M. Noppe
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica N.V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10670074&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU218213(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Janssen Pharmaceutica N.V. filed Critical Janssen Pharmaceutica N.V.
Publication of HU9202432D0 publication Critical patent/HU9202432D0/hu
Publication of HUT62198A publication Critical patent/HUT62198A/hu
Publication of HU218213B publication Critical patent/HU218213B/hu

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
    • A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
    • A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polyurethanes Or Polyureas (AREA)
  • Macromonomer-Based Addition Polymer (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

A találmány tárgya új, parenterális és helyi adagolásra szolgálógyógyászati készítmények, és eljárás előállításukra, amelykészítmények vizes oldatban eritropoietint és olyan ?- vagy ?-ciklodextrin-étert vagy vegyes étert tartalmaznak, ahol a ciklodextrinegy vagy több hidroxilcsoportjának hidrogénatomját egy hidroxi-etil-,hidroxi-propil- vagy hidroxi-izobutil-csoport helyettesíti, és azátlagos moláris helyettesítettség 0,3 és 0,8 közötti. A készítményeklehetnek liofilizáltak vagy porlasztva szárítottak is. Ezekkel akészítményekkel egyidejűleg érhető el az eritropoietin vizes oldatbanvaló stabilizálása és felületeken való abszorbeálódásánakmegakadályozása. ŕ

Description

A találmány tárgyát olyan új gyógyászati készítmények képezik, amelyek eritropoietin és egy β- vagy γ-ciklodextrin-éter vagy vegyes éter vizes oldatát tartalmazzák, valamint a találmány tárgyát képezi ezen készítmények előállítása is.
A találmány tárgyát képezi ezen belül a fenti készítmények liofilizált vagy porlasztva szárított formája, valamint az ilyen vizes, liofilizált vagy porlasztva szárított készítmények előállítása is.
A találmány szerinti eljárás eritropoietin vizes oldatának stabilizálását biztosítja, és ezzel egyidejűleg annak megakadályozását, hogy az eritropoietin a felületekhez adszorbeálódjon.
Közelebbről, az új készítmények különösen hasznosak anémia kezelésére eritropoietinnek közvetlen szubkután, nazális vagy szembe való adagolásával. A találmány szerint előállított, illetve találmány szerinti készítmények alkalmasak anémiában szenvedő emlősök kezelésére oly módon, hogy ezeken az emlősökön hatékony mennyiségű, találmány szerinti eritropoietinkészítményeket helyileg alkalmazunk.
Az eritropoietin egy keringő glikoproteinhormon, amely főként az eritroid velő stimulálásával növeli a vörösvérsejtek tömegét. A hormon nyomnyi mennyiségben van jelen, és elsődlegesen a felnőttek veséjének és a magzati máj sejteknek még nem azonosított helyein képződik.
Bebizonyosodott, hogy néhány mikrogramm eritropoietin egyszeri vagy több dózisban való alkalmazása hatékonyan korrigálja az anémiát a vesebetegség végső stádiumában. Ezt a dózisszintet azonban szigorúan figyelembe kell venni. Az eritropoietinterápia ezért olyan dózisforma alkalmazását kívánja meg, amely lehetővé teszi az exogén hormon nyomnyi mennyiségének pontos adagolását.
Az eritropoietin rekombináns DNS-technológiával való előállítása és ezt követően annak bizonyítása, hogy ez az új szer éppen olyan hatékony, mint a natív hormon, vezettek annak tanulmányozására, hogy hogyan lehet ezt az anyagot különféle terápiás területeken alkalmazni. Az eritropoietinnek azonban van egy jelentős hátránya, amely ez ideig számos terápiás alkalmazását gátolta: nem stabil, különösen nem stabil vizes oldatban. Még igen alacsony hőmérsékleteken (-80 °C-on) is jelentős aktivitásveszteség figyelhető meg.
Ez az aktivitásveszteség egyrészt az eritropoietin vizes oldatban való lebomlásának következménye. Másrészt a veszteség annak a következménye, hogy az eritropoietin a fecskendő vagy tartály belső felületén lényeges mértékben adszorbeálódik, és ez az adszorbeálódott eritropoietin további bomlást okoz.
Ezen körülmények mellett különböző kísérleteket végeztek olyan módszerek kifejlesztésére, amelyek megakadályozzák, hogy az eritropoietin vizes oldata a tartály belső falán adszorbeálódjon, és hogy megakadályozzák az eritropoietin lebomlását.
A 178 576 A számú európai szabadalmi leírásban olyan módszert ismertetnek, amellyel megakadályozzák, hogy az eritropoietin vizes oldatból adszorbeálódjon az üveg- vagy műanyag tartály belső felületén, ezt többek között humán szérumalbumin, marha-szérumalbumin, lecitin, dextránok, metil-cellulóz, polietilénglikolok, etilén-oxid/propilén-oxid kopolimer és/vagy poli(oxi-etilén)-hidrogénezett ricinusolaj adagolásával érik el. Kimutatták, hogy az eritropoietin visszanyerése az ilyen készítmények esetén 20 °C hőmérsékleten 2 óra múlva 75-98%, míg a kontrollkészítményeknél csak 16%. Saját megfigyelésünk azonban azt mutatja, hogy az ilyen készítményekben az eritropoietin hosszú időtartamú funkciós stabilitása nem őrződik meg. Annak érdekében, hogy hosszú időtartamú funkciós stabilitást éljünk el, nemcsak a glikoprotein polipeptidszerkezt tének, hanem szénhidrátszerkezetének is érintetlennek kell maradnia, mivel bebizonyosodott, hogy a hormon in vivő működéséhez lényeges a jó glikolizálás és s? ialilálás is. Ezenkívül várható, hogy a fenti készítmények egyes egyénekben, különösen többszöri beinjektálást követően immunogén reakciókat váltanak ki. A vérSz ármazékok, mint például a humán szérumalbumin, az életet fenyegető vírusfertőzések forrásai is lehetnek.
A 178 665 A számú európai szabadalmi leírásban olyan stabilizálószereket ismertetnek, amelyek fagyasztva szárított és vizes eritropoietinkészítményekhez használhatók. Stabilizálószerekként polietilénglikolokat, proteineket, cukrokat, aminosavakat, szervetlen savakat, szerves savakat és kéntartalmú redukálószereket említenek. Kimutatták, hogy egy hét elteltével az eritropoietin aktivitása a stabilizált készítményekben 25 °C hőmérsékleten eredeti aktivitásának 67-73%-ára, míg a stabilizálatlan készítményeké 46%-ra csökkent. Azonban ebben az esetben is azt találtuk, hogy a fenti stabilizátorok adagolása nem biztosítja az eritropoietin hosszú időtartamú funkciós stabilitását.
A 306 824 A számú európai szabadalmi leírásban olyan stabil, fagyasztva szárított eritropoietinkészítményeket ismertetnek, amelyek karbamidot és aminosavakí t tartalmaznak stabilizálószerekként, valamint felületaltív szereket az adszorpció megakadályozására. Ebben az esetben a legnagyobb hiányosság az, hogy a vize s formára rekonstituált eritropoietinkészítmények szobi hőmérsékleten néhány hónapra limitált stabilitással bírnak. Ezért a fogyasztó gyakorlatilag arra kényszerül, hogy a fagyasztva szárított készítményt minden alkalommal, közvetlen az alkalmazás előtt rekonstituálja.
A WO-90/03784 számú PCT szabadalmi leírásbén, amely a bejelentés elsőbbségét követően került nyilvánosságra, eljárást ismertetnek polipeptidek, különösen proteinek oldhatóvá tételére és/vagy stabilizálására β- és γ-ciklodextrinek alkalmazásával, valamint olyan készítményeket ismertetnek, amelyek egy polipeptidet és ilyen ciklodextrinszármazékokat tartalmaznak. A megfelelő proteinek terjedelmes listájában az entropoietint is megemlítik, de a leírásban nem szerepe 1 specifikus példa, amely eritropoietint tartalmazó készítményt ismertetne. A megfelelő ciklodextrinszármazékok között többek között a hidroxi-propil- és hidroxi et 1-módosított β- és γ-ciklodextrineket említik. A ciklodextrinre eső alkoxiegységek átlagos száma 4,7 és 7 közötti a β-ciklodextrinre (az átlagos moláris helyettesítetség, a továbbiakban M.S. =0,67-1) és mintegy
HU218213 Β
7-8 γ-ciklodextrinre (Μ.S.=0,875-1). Különösen említésre méltó a ciklodextrinszármazéknak a polipeptidhez viszonyított alacsony tömegaránya, nevezetesen 1:1 és 200:1 közötti tömegarány.
A találmány célja gazdaságos, gyakorlatilag felhasználható és biztonságos eritropoietinkészítmények biztosítása, amelyek lehetővé teszik az önálló adagolást kevés kellemetlenség okozásával és a helyi irritáció elkerülésével. Ennek a célnak az eléréséhez előfeltétel az olyan vizes eritropoietinkészítmények készítése, amelyekben a glikoprotein hosszú időtartamon át megőrzi funkciós stabilitását. Az ilyen eritropoietinkészítmények előnyösen közvetlenül, további manipulációk, például rekonstitúció vagy hígítás nélkül kell, hogy adagolhatok legyenek.
Nem várt módon arra a felismerésre jutottunk, hogy az előzőekben említett előfeltételek az alábbiakban ismertetésre kerülő készítményekkel teljesíthetők.
A találmány tágyát olyan parenterális vagy helyi adagolási! gyógyászati készítmények és előállításuk képezi, amelyek eritropoietint és β- vagy γ-ciklodextrint tartalmaznak vizes oldatban, amelyben a ciklodextrin β- vagy γ-ciklodextrin-éterek vagy vegyes éterek formájában van jelen, ahol egy vagy több ciklodextrin hidroxilcsoport hidrogénatomját egy hidroxi-etil-, hidroxipropil- vagy hidroxi-izobutil-csoport helyettesíti. A vegyes éter kifejezésen olyan β- vagy γ-ciklodextrinszármazékokat értünk, ahol legalább két ciklodextrin hidroxilcsoport éterezett különböző hidroxi-alkil-csoportokkal, például hidroxi-propil- és hidroxi-etil-csoporttal.
Előnyösen az alkoxiegységek száma ciklodextrinegységenként 2 és 4 közötti, különösen előnyösen 2,5-3,5, még előnyösebben mintegy 2,8 a β-ciklodextrinszármazékokban és mintegy 3,2 a γ-ciklodextrinszármazékokban.
Az átlagos moláris helyettesítettség (M.S.) értéket az 1 mól anhidroglükózra jutó alkoxiegységek átlagos moláris számának mérésére használjuk. A találmány szerinti készítményekben alkalmazott ciklodextrinszármazékokban az M.S. a 0,3-0,8, előnyösen a mintegy 0,35-0,5 tartományba esik, legelőnyösebben mintegy 0,4 értékű. Az átlagos moláris helyettesítettséget célszerűen a gyors atombombázásos tömegspektroszkópiás (FAB-MS) eljárással negatív módon határozzuk meg.
Az átlagos helyettesítettség mértéke (D.S.) az anhidroglükózegységenként helyettesített hidroxilcsoportok átlagos számára utal. A találmány szerinti készítményekben alkalmazott ciklodextrinszármazékok D.S.-értéke a 0,125-3, különösen a 0,2-2 vagy a 0,2-1,5 tartományba esik. Előnyösen a D.S.-érték mintegy 0,2 és 0,7 közötti, különösen előnyösen mintegy 0,35 és 0,5 közötti, legelőnyösebben mintegy 0,4.
Közelebbről a találmány szerinti készítményekben alkalmazott β- és γ-ciklodextrin-hidroxi-alkil-származékok részlegesen helyettesített ciklodextrinszármazékok, amelyekben az anhidroglükózegység különböző helyzeteiben lévő hidroxilcsoportok átlagos alkilezettségének mértéke mintegy 0% és 20% közötti a 3-helyzetben, 2-70% a 2-helyzetben és mintegy 5-90% a 6helyzetben. Előnyösen a helyettesítő nélküli β- vagy γc klodextrinek mennyisége az össz-ciklodextrintartalomnak kevesebb, mint 5%-a, különösen kevesebb, mint 1,5%-a.
A helyettesített ciklodextrinek előállíthatok a
459 731 számú amerikai egyesült államokbeli szabad ilmi leírás szerint és a 2 189 245 számú nagy-britann ai szabadalmi leírás szerint, amelyeket leírásunkban az előállítási eljárások tekintetében referenciaként építünk be. Általában a helyettesítő nélküli ciklodextrincket epoxiddal reagáltatják, előnyösen légkörinél alacsonyabb nyomáson és emelt hőmérsékleten, alkálifém-katalizátor jelenlétében.
További olyan referenciákat, amelyek a találmány szerinti alkalmazáshoz megfelelő ciklodextrineket leírják, és amelyek előállításához, tisztításához és elemzéséhez segítséget nyújtanak, a „Cyclodextrin Technology”, Szejtli, a Kluwer Academic Publishers (1988) Cyclodextrins in Pharmaceuticals fejezetében; „Cyclodextrin Chemistry”, M. L. Bender és munkatársai, S mnger-Verlag, Berlin (1978); Advances in „Carboh/drate Chemistry”, 12. kötet, szerkesztő: M. L. Wolfrom, Academic Press, New York (1957), Dexter F ench a The Schardinger Dextrins fejezet 189-260. oldalán; „Cyclodextrins and their Inclusions Complexes”, J. Szejtli, Akadémiai Kiadó, Budapest (1982); I. Tabushi, Acc. Chem. Research, 15, 66-72 (1982); W. Sanger, Angewandte Chemie, 92, 343-361 (1981); A. P. Croft és R. A. Bartsch, Tetrahedron, 39, 1417-1474 (1983); Irie és munkatársai, Pharmaceutical Research, 5, 713-716 (1988); Pitha és munkatársi i, Int. J. Pharm., 29, 73 (1986) szakirodalmi helyeken, valamint a DE 3 118 218 számú német szövetségi kóztársaságbeli szabadalmi közzétételi iratban, a DE 33 17 064 számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi közzétételi iratban, a 94 157 A és a 1+9 197 A számú európai szabadalmi leírásokban, a
659 696 és a 4 383 992 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetnek. Különös figyelmet érdemelnek azok a referenciák, amelyek olyan előállítási és tisztítási eljárásokat írnak le, amelyekkel olyan ciklodextrinelegyek nyerhetők, amelyekben a reagálatlan ciklodextrin mennyisége az összciklodextrintartalómnak kevesebb, mint 5%-a.
Az eritropoietin stabilitása vizes oldatban a növekvő β- vagy γ-ciklodextrinkoncentrációkban nő addig, amíg maximális szintet nem ér el. A kész készítményben a ciklodextrin mintegy 2,5-20 tömeg%, különösen 5-20 tömeg%, még inkább 5-15 tömeg%, például 10 tömeg% mennyiségben van jelen, az ezen felüli anyag víz, hatóanyag és valamely segédanyag.
Különösen jelentős, hogy stabil gyógyászati készítmény állhat vízből, ciklodextrinből és eritropoietinből önmagából anélkül, hogy további stabilizálószert, például humán szérumalbumint, marha-szérumalbumint, lecitint, metil-cellulózt, polietilénglikolt, kéntartalmú redr kálószereket, karbamidot, aminosavakat és felületaktív szereket tartalmazna. A készítményhez adhatók pHbe állító szerek, például hidrogén-klorid, ecetsav, citromsav, nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid vagy ezek bármely sója, különösen nátrium-citrát. Az eritropoietin
HU 218 213 Β formálásához megfelelő pH 6,5 és 7,4 közötti, különösen 6,8 és 7,0 közötti.
Injektálható készítmény előállításához célszerű a készítményt izotóniássá tevő szert, például nátrium-kloridot, kálium-kloridot vagy szorbitot alkalmazni.
Mivel a nehézfémionok katalizálhatják az eritropoietin bomlását, célszerű lehet továbbá megfelelő komplexképző szerek, például kalcium-klorid, citrát, EDTA és hasonló, gyógyászati célra alkalmas, fémionokat komplexbe vivő szerek alkalmazása. Például adagolható a készítményhez mintegy 0,02-2 g/liter kalcium-klorid.
A találmány szerinti készítmények toxicitása alacsony, nincs irritáló hatásuk, így lehetővé teszik injektálható gyógyszer készítését, amely biztonságosan alkalmazható ismételt dózisban való adagolási rend mellett is, immunogén reakció kockázata nélkül. Az előnyös készítmények használatra készek, és előnyösen szubkután módon, orrpermet vagy szemcsepp formájában adagolhatok. A készítmények könnyen és egyszerűen alkalmazhatók, ezért a beteg önmagának adagolhatja, ami otthoni kezelést tesz lehetővé.
Továbbá a találmány szerinti gyógyszerek lehetővé teszik a kedvező eritropoietin farmakokinetikai profil nyerését, viszonylag állandó plazmaszintet biztosítanak legalább 1 napon át, és ennek következtében jó fiziológiás választ biztosítanak, különösen szubkután, orrpermet formájában vagy szemcsepp formájában történő adagolás esetén.
Ha a készítményekhez megfelelő tartósítószert adunk, például alkoholokat, például etanolt, 1,3-propándiolt, benzil-alkoholt vagy származékait, fenil-etil-alkoholt, fenolt vagy fenolszármazékokat, például butil-parabént, metil-parabént, m-krezolt vagy klór-krezolt; savakat, például benzoesavat, szorbinsavat, citromsavat, nátrium-propionátot, EDTA-dinátríumsót, klór-hexidint, hexamidint, diizetionátot, hexetidint, adott esetben nátrium-hidrogén-szulfittal vagy propilénglikollal való kombinációban, vagy kevésbé előnyösen kvaterner ammóniumsókat, fémvegyületeket, például cinkoxidot, tiomerzált vagy fenil-higanysókat, például fenil-mercuri-acetátot, biztonságosan készíthetünk multidóziskészítményeket eritropoietin parenterális és különösen helyi (például nazális vagy szembe való) adagolásához. A multidóziskészítményhez alkalmazott tartósítószert nyilvánvalóan úgy választjuk meg, hogy az kompatibilis legyen az adagolás útjával. Az ilyen multidóziskészítmények gazdasági és gyakorlati előnnyel bírnak az egyetlen dózist tartalmazó készítményekkel szemben.
A gyógyászatilag aktív anyag koncentrációja a találmány szerinti készítményben természetesen a kiválasztott eritropoietin típusától, forrásától, hatásától függ, befolyásolja a szubkután, illetve az intravénás injektálás biológiai hozzáférhetősége közti arány, az adagolás kívánt gyakorisága, egybevetve a kívánt egyszeri dózissal. A találmány szerinti készítményekben az eritropoietin előnyös koncentrációja mintegy 100-50 000 nemzetközi egység (N.E.) milliliterenként, különösen 500-20 000 N.E./ml, még inkább
2000-10 000 N.E./ml, előnyösen 4000 N.E./ml (1 N.E. megfelel 8,4 ng rekombináns eritropoietinnek). Általában úgy számítjuk, hogy a hatékony mennyiség 1 -200 N.E./testtömeg-kg, előnyösen 2-100 N.E./testtömeg-kg, különösen akkor, ha az eritropoietint szubkután adagoljuk. A hatékony mennyiség a fentieken kívül függ a kezelendő lény fajtájától és méretétől, az adott állapottól, a betegség súlyosságától és az adagolás útjától. Az alkalmazott dózis semmi esetre sem lehet toxikus a befogadóra. A betegek folyamatos ambuláns peritoniális dialízissel (CAPD) megvalósított szubkután kezelési módja esetén az adagolt eritropoietin mennyisége olyan mértékű, hogy a hemoglobinszintet 10-12 g/dl értékre emelje.
A következőkben leírásra kerülő eritropoietinkészítmények célszerűen előállíthatok úgy, hogy a tisztított eritropoietint ciklodextrin vizes oldatához adjuk, és a kapott oldatot gondosan kezeljük. Adagolhatok további gyógyászati segédanyagok is kívánt esetben a tisztított eritropoietin adagolása előtt, alatt vagy után. Az előállítást előnyösen alacsony hőmérsékleten végezzük, különösen 10 °C alatt, még inkább 2-8 °C hőmérsékleten.
Előállíthatjuk például a találmány szerinti eritropoietinkészítményt oly módon, hogy ciklodextrinnek pufferrendszert, pH-beállító szert és az oldatot izotóniássá tevő anyagot, kívánt esetben egyéb anyagot tatalmazó vizes oldatában oldjuk vagy szuszpendáljuk ai eritropoietint. A végső készítményben a ciklodextrinnek az eritropoietinhez viszonyított mólaránya 500 000:1 és 5000:1 közötti lehet. Különösen előnyös az ilyen végső készítményben a hidroxi-propil-p-ciklode xtrin és eritropoietin mintegy 200 000:1 és mintegy 2(i000:l, különösen mintegy 180 000:1 és mintegy 30 000:1, előnyösebben mintegy 135 000:1 és mintej. y 90 000:1 vagy mintegy 85 000:1 és mintegy 60 000:1 közötti mólaránya. A találmány szerinti készítményekben a ciklodextrinnek az eritropoietinhez viszonyított tömegaránya mintegy 7500:1 és mintegy 7( 0:1 közötti, különösen mintegy 6000:1 és mintegy 1000:1 közötti, előnyösen mintegy 4500:1 és mintegy 3000:1 közötti vagy mintegy 2800:1 és mintegy 2000:1 közötti.
A találmány szerinti vizes készítmény és a kívánt esetben alkalmazott segédanyagok fagyasztva szárítottam vagy porlasztva szárítottak is lehetnek, amely műveié’eket ismert módon végzünk, és dehidratált készítmény eket nyerünk, amelyek hosszú időtartamon át tárolható < és adagolás előtt feloldhatók. Az említett fagyasztva szárított vagy porlasztva szárított készítményekben a ciklo dextrinnek az eritropoietinhez viszonyított mólaránya és tömegaránya azonos az előzőekben említett vizes oldatokéra megadottakkal. Számos esetben célszerű az említett fagyasztva szárított vagy porlasztva szárított készítmények rekonstituálása vizes ciklodextrinoldatban, a ciklodextrinnek az eritropoietinhez viszonyító t mólaránya és tömegaránya ebben az esetben alacsony abb lehet, mint az előzőekben említett vizes oldatokra vonatkozó. Az ilyen fagyasztva szárított vagy porlasztva szárított készítményekben a hidroxi-propil-p-ciklodextrinnek az eritropoietinhez viszonyított mólaránya mint4
HU218213 Β egy 250 000:1 és mintegy 2000:1 közötti, különösen mintegy 100 000:1 és 5000:1 közötti, előnyösen mintegy 50 000:1 és 10 000:1 közötti.
A találmány szerinti készítmények néhány meglepő tulajdonsággal bírnak. így, bár már ismert, hogy a 5 ciklodextrin zárványvegyületeket képez más vegyületekkel és ezáltal megnöveli az utóbbi vegyületek stabilitását, a zárványvegyületek képződése eddig főként olyan esetekre korlátozódott, amelyekben a hidrofób üreg legalább részben befogadja az idegen vegyületet. 10 Az a jelen megfigyelés, hogy egy makromolekula, mint az eritropoietin is, komplexként megkötődhet és hatékonyan stabilizálódhat a ciklodextrinszármazékokkal, nem várt.
Bár a β-ciklodextrin és γ-ciklodextrin megelőzheti 15 az eritropoietinnek a tartály falán való adszorpcióját, a hidroxi-alkilezett γ-ciklodextrin, különösen a hidroxialkilezett β-ciklodextrin még alkalmasabb arra, hogy megelőzze a glikoproteinben mind a polipeptid, mind a szénhidrát szerkezetének lényeges megváltozását, és en- 20 nek folytán megnövelje a glikoprotein hosszú távú funkciós stabilitását.
A találmány szerinti folyékony készítmények alkalmazhatók minden olyan dózisadagoló szerkezetből, amely parenterális, például szubkután vagy helyi adago- 25 lásra, például orrba vagy szembe való adagolásra alkalmas. Ezeket az eszközöket úgy kell megalkotni, hogy biztosítsák az optimális adagolási pontosságot, és az eszköz alkotóelemei kompatibilisek legyenek az adagolási úttal. 30
A találmány szerinti készítmény, illetve a találmány szerinti eljárás biztosítja az eritropoietin vizes közegen való stabilizálását és egyidejűleg annak megakadályozását, hogy az eritropoietin a felületeken adszorbeálódjon, ezt az eritropoietinnek megfelelő mennyiségű cik- 35 lodextrinszármazékkal való formálásával érjük el. A találmány szerinti eljárásban alkalmazott ciklodextrinszármazék mennyisége és természete különösen az előzőekben leírt eritropoietin-ciklodextrin készítményekének megfelelő. 40
A találmány szerinti készítmény alkalmas anémiában szenvedő emlősök kezelésére, amelynek módja az eritropoietin hatékony mennyiségének alkalmazása lokálisan az említett emlősön, instant készítmények formájában. Ez az eljárás különösképpen vonatkozik a ta- 45 lálmány szerinti vizes eritropoietin-ciklodextrin készítményeknek az orrba orrpermet formájában vagy a szembe szemcseppek formájában való adagolására.
A találmány közelebbi részleteit példákban mutatjuk be; a példák nem korlátozóak. 50
A. Formálási példák
1. példa
Injektálható oldat
a) Eritropoietin 400 N.E./ml 55
Humán rekombináns eritropoietin (r-HuEPO) NaCl
Na-citrát-2H2O Citromsav · H2O
4000 E 3,59 mg 5,8 mg pg 60
Hidroxi-propil-βciklodextrin (M.S.=0,4) 100 mg
HC1 (1 n) vagy
NaOH (1 n) pH=6,9 beállításához
Víz 1 ml-re kiegészítésül
A készítményt az alábbi módon állítjuk elő.
liter hideg, pirogénmentes vizet szűréssel sterilezimk. Ehhez keverés közben 2 kg hidroxi-propil+-ciklodextrint (M.S.=0,4), 116 g nátrium-citrát 2H2O-t, 1.24 g citromsav· lH2O-t és 71,8 g nátrium-kloridot adunk. Az oldatot 25 °C hőmérsékletre hűtjük, és pHját 6,9-re állítjuk be 1 n nátrium-hidroxid vagy 1 n hidrcgén-klorid adagolásával. Az oldatot homogenitásig keverjük, majd 2-8 °C hőmérsékletre hűtjük.
500 ml r-HuEPO tisztított tételt (160 000 N.E./ml), amelyet (-70)-(-80) °C hőmérsékleten tároltunk, 20 °C hőmérsékletű vízfürdőbe való merítéssel felolvasztunk. A felolvasztott oldatot a citromsavas pufferhez adjuk és 5 percig 8 °C alatti hőmérsékleten keverjük. Ezt az oldatot hideg, pirogénmentes vízzel 20 literes végtérfogatra hígítjuk, és steril nitrogén alatt végzett szűréssel sterilezzi k. A kapott oldatot 1 ml-es steril tartályokba töltjük.
A következő készítményt hasonló módon készítjük el a megfelelő mennyiségű összetevőkből, hogy a kívánt végső készítményt nyerjük.
b) Eritropoietin 2000 N.E./ml
H imán rekombináns eritropoietin (r-HuEPO) 2000 E
NiCl
N i-citrát-2H2O C tromsav · H2O H droxi-propil-βciriodextrin (M.S.=0,4) HC1 (1 n) vagy NiOH(l n)
Vz
c) Eritropoietin 10 000 N. Humán rekombináns ertropoietin (r-HuEPO) Na-citrát-2H2O C: tromsav-H2O H droxi-propil-βciiílodextrin (M.S.=0,4) HC1 (1 n) vagy NaOH(l n)
Vz mg pH 6,9 beállítására ml-re kiegészítésül E./ml
000 E 5,8 mg pg
200 mg pH 6,9 beállítására ml-re kiegészítésül
2. példa
Szemcseppek előállítása Humán rekombináns er tropoietin (r-HuEPO)
NaCl
Na-citrát-2H2O Ci tromsav H2O Fe nil-merkuri-acetát Hidroxi-propil-βciklodextrin (M.S.=0,4) HC1 (1 n) vagy NaOH(l n)
V:z
4000 E 3,59 mg 5,8 mg 62 pg 0,02 mg
100 mg pH 6,9 beállítására 1 ml-re kiegészítésül
HU218213 Β
3. példa Orrpermet készítése
Humán rekombináns
eritropoietin (r-HuEPO) 4000 E
NaCl 3,59 mg
Na-citráf 2H2O 5,8 mg
Citromsav · H2O 62 pg
Tiomerzál 0,2 mg
Hidroxi-propil-β-
ciklodextrin (M.S.=0,4) 100 mg
HC1 (1 n) vagy
NaOH (1 n) pH 6,9 beállítására
Víz 1 ml-re kiegészítésül
B. Biológiai példák
4. példa
Különféle ciklodextrinek stabilizáló hatása EPO-ra
Eritropoietin szerkezeti integritását vizsgáltuk különböző stabilizálószerekkel, ioncserélő kromatográfia és poliakrilamid gélelektroforézis kombinálásával. A különböző ciklodextrinszármazékok stabilizáló hatását összehasonlítottuk humán albuminéval. A találmány szerint alkalmazott EPO (eritropoietin)-oldatok a következők: 1 mg EPO-t (Amgen) 2,6 ml citromsavpufferben meghígítunk (5,80 g nátrium-citrát-2H2O, 0,0623 g citromsav H2O és 5,84 g nátrium-klorid 1000 ml vízben, ezt az oldatot reverz ozmózissal és ultraszűréssel tisztítjuk. A puffért 0,22 pm-es szűrőn szűrjük). Az EPO törzsoldatot egy, az előbbi citromsavban lévő hidroxi-propilβ-ciklodextrin (M.S.=0,4) vagy hidroxi-propil-y-ciklodextrin (M.S.=0,4) oldatában hígítjuk. A kapott végső ciklodextrinkoncentrációk 5% és 20%, a végső EPOkoncentráció 33 pg/ml, ez egyenértékű 4000 E/ml-rel. A humán szérumalbumin (HSA) stabilizátorhoz való hasonlítás kedvéért frissen formált EPO-t alkalmazunk (Cilag, 88Z008 tételszám). Ennek az anyagnak az összetétele 5,8 mg nátrium-citráf 2H2O, 0,057 citromsav, 5,84 mg nátrium-klorid, 2,5 mg humán albumin és 0,0336 mg eritropoietin 1 ml vízben. A kontrolloldatok 0,0336 mg eritropoietint tartalmaznak 1 ml vízben. A különböző oldatokat üvegtartályokban 57 °C hőmérsékleten tartjuk, hőmérséklet-szabályozóval ellátott vízfürdőben. A ciklodextrineknek az EPO-ra kifejtett stabilizáló hatását ioncserélő kromatográfiás eljárással vizsgáljuk, a tisztított EPO-csúcsok magasságát hasonlítjuk össze inkubálás előtt, 10 napos és 3 hetes, 57 °C hőmérsékleten végzett inkubálást követően.
Az alkalmazott kromatográfiás eljárás a következő: Berendezés: FPLC (Pharmacia, Uppsala, Svédország)
Detektálórendszer: UV-adszorpció 280 nm-nél Oszlop: Mono Q (Pharmacia, Uppsala, Svédország)
500 pl EPO-tartalmú frakciót viszünk a Mono faoszlopra (0,5 χ 5 cm) szobahőmérsékleten. Az A-puffer összetétele 20 mmol/liter trisz (pH=8,0), a B-pufferé 20 mmol/liter trisz (pH=8,0), amely 1 mol/liter nátriumkloridot tartalmaz. Az áramlási sebesség 1 ml/perc. Lépcsős sógradienst alkalmazunk. Az EPO-t mintegy ló perc után eluáljuk (a megfelelő nátrium-klorid-kon10 centráció 16 mmol/liter).
Ezzel az eljárással az EPO-t mind a szérumalbumintc 1, mind a ciklodextrintől tökéletesen el lehet választani, ezt elektroforézissel igazoltuk. Mértük az EPO-frakciók csúcsmagasságát. A 16 mmol/1 nátrium-kloridnál eluálódó fehérjefrakciók tisztaságát és homogenitását poliakrilamid gélelektroforézissel ellenőriztük. Az elektrc forézis végrehajtási módja a következő.
Az EPO-t tartalmazó frakció egy alikvot részét oly módon redukáljuk, hogy a mintapufferrel elegyítjük, amelynek összetétele 0,167 mol/liter trisz, 33% glicerin, 3,3% nátrium-dodecil-szulfát, 4% ditriotreitol, 0.005% brómfenolkék, a puffer pH-ja 6,8, és az elegyet 100 °C hőmérsékleten 5 percig inkubáljuk. Ebből a mintából 15 μΐ-t viszünk fel egy 10%-os, nátrium-dodecil25 szulfátot tartalmazó poliakrilamid gél felviteli sávjára. Az elektroforézist Laemmli, U. [Natúré (London), 227, 680-685 (1970)] eljárásával végezzük 0,38 mol/1 glicin/pH = 8,3-as trisz és 0,1% nátrium-dodecilS/ulfát-tartalmú elektroforézispuffer alkalmazásával, a> elektroforézist 90 percig 150 V-nál végezve. Ezután a gélt Morrissey J. H. eljárása szerint [Anal. Biochem., 1.'7, 307-310 (1981)] ezüsttel festjük. Az elektroforetikus vizsgálat világosan mutatja, hogy az EPO-frakció homogén, ha ciklodextrinszármazékokat alkalmazunk stibilizátorként. A humán albumin stabilizátor alkalmazd sával készült EPO-frakció magasabb molekulatömegii proteinek jelenlétét mutatta, az EPO százalékos aránya a jelen lévő bomlástermékekéhez képest alacsony volt.
A bomlástermékek többnyire az albuminból származnak. Ez magyarázza azt, hogy miért magasabb az E ’O-frakció csúcsmagassága humán albumin stabilizd lőszer alkalmazása esetén 3 hét elteltével, mint a kezdetben. Ez az eredmény arra is utal, hogy az ioncserélő kiomatográfiás eljárást az elektroforetikus eljárással kombináltan kell alkalmazni az EPO stabilizálódásának értékelésére.
Az 1. táblázatban vizsgálataink eredményeit ismertetjük.
7. táblázat
Alkalmazott vedelem EPO-csúcsmagasság (cm) az inkubálás előtt EPO-csúcsmagasság (cm) 10 nap után Maradék EPO (%) EPO-csúcsmagasság (cm) 20 nap után Maradék EPO (%)
Kontroll 11,9 6,0 50 2,9 24
HSA 0,25% 10,6 6,4/5,1 (*) 48 10,7/3,2 (*) 30
ΗΡ-β-CD 5% 11,5 5,4 47 6,3 55
ΗΡ-β-CD 20% 11,5 13,4 100 7,1 62
HU218213 Β
1. táblázat (folytatás)
Alkalmazott védelem EPO-csúcsmagasság (cm) az inkubálás előtt EPO-csúcsmagasság (cm) 10 nap után Maradék EPO (%) EPO-csúcsmagasság (cm) 20 nap után Maradék EPO (%)
ΗΡ-γ-CD 5% 11,2 5,1 46 3,2 29
ΗΡ-γ-CD 20% 12,5 9,7 78 4,5 36
(*) A humán szérumalbumint tartalmazó EPO-kcszítmény csúcsmagassága az EP( >-tartalom clcktroforetikus vizsgálata alapján, korrekció előtt és után.
5. példa
Különböző ciklodextrinkoncentrációk stabilizáló hatása az EPO-ra
Egy második vizsgálatban az előbbivel azonos módszerrel különböző koncentrációjú hidroxi-propil-p-ciklodextrinek stabilizáló hatását vizsgáltuk. Az elektroforetikus eredmények azt mutatták, hogy ha hidroxi-prop:l-3-ciklodextrint alkalmaztunk stabilizálószerként, a 1 ó mmol/liter nátrium-kloriddal eluálódó frakció tartalirazta a tiszta EPO-t, semmiféle bomlástermék nem volt kimutatható. A humán szérumalbumin stabilizáló15 sz errel készült EPO-frakció ismét nagy molekulatömegií bomlástermékek jelenlétét mutatta. Eredményeinket a 2. táblázatban mutatjuk be.
2. táblázat
Alkalmazott védelem EPO-csúcsmagasság (cm) az inkubálás előtt EPO-csúcsmagasság (cm) 7 nap után Maradék EPO (%) EPO-csúcsmagasság (cm) 18 nap után Maradék EPO (%)
Kontroll H,1 3,3 30 4,2 38
HSA 10,5 9,5/3,8 (*) 36 9,0/0,5 (*) 5
ΗΡ-β-CD 5% 12,8 6,4 50 5,5 43
ΗΡ-β-CD 10% 12,1 6,9 57 6,8 56
ΗΡ-β-CD 15% 12,7 6,8 54 6,4 50
ΗΡ-β-CD 20% 11,4 7,0 61 4,8 42
(*) A humán szérumalbumint tartalmazó EPO-készítmény csúcsmagassága az EPC-tartalom clcktroforetikus vizsgálata alapján, korrekció előtt és után.
A vizsgálatok összegzéseként arra az eredményre jutottunk, hogy a ciklodextrinszármazékok védik az EPO-t a bomlástól. A ciklodextrinekkel nyert védelem jobb, mint a humán szérumalbuminnal nyert, legalábbis az alkalmazott kísérleti körülmények mellett.
6. példa
EPO adszorpciója műanyagokon, ciklodextrin jelenlétében
A vizsgálathoz alkalmazott EPO-oldatot a következő módon készítjük.
mg EPO-t (Amgen) 2,6 ml citromsavpufferben hígítunk (a puffer összetétele 5,80 g nátrium-citrát -2H2O, 0,0623 g citromsav H2O és 5,84 g nátriumklorid 1000 ml vízben, fordított ozmózissal és ultraszűréssel tisztítva. A puffért 0,22 pm-es szűrőn szűrjük).
A fenti EPO-törzsoldatot hígítjuk hidroxi-propil-3-ciklodextrinnek az előzőekben ismertetett citromsav-pufferben készült oldatában. A hidroxi-propil-P-ciklodextri:i végső koncentrációja 10% vagy 20%. Az EPO végsc koncentrációja 33 pg/ml. Ha humán albumint alkal40 mázunk hordozóként, referenciaként a Cilag lót No 892121/443 EPO-t alkalmazzuk.
A különböző EPO-oldatokból 1 ml-t injektálunk infúziós készletbe (Universal 315 C0339 készlet, Travenol), és éjszakán át 4 °C hőmérsékleten tároljuk. Ki45 nyerést követően az EPO-t az előzőekben ismertetett kromatográfiás és elektroforetikus eljárásokkal vizsgáljuk. A 16 mmol/liter nátrium-klorid mellett eluálódó pi oteinfrakció csúcsmagasságát mérjük.
A 3. táblázatban ismertetjük az eredményeket. A meg50 acott értékek két külön vizsgálat átlagai.
3. táblázat
Alkalmazott védelem EPO-csúcsmagasság adszorpció előtt EPO-csúcsmagasság adszorpció után Adszorbeálatlan EPO (%)
Vizsgálat 1 2 1 2 1 2
Kontroll 9,6 9,2 3,5 4,0 36,5 43,5
HSA 9,8 5,7 8,4 5,3 85,7 93,0
HU218213 Β
3. táblázat (foly tatás)
Alkalmazott védelem EPO-csúcsmagasság adszorpció előtt EPO-csúcsmagasság adszorpció után Adszorbeálatlan EPO (%)
Vizsgálat 1 2 1 2 1 2
ΗΡ-β-CD 10% 11,4 13,4 11,3 10,2 99,1 76,1
ΗΡ-β-CD 20% 12,9 10,4 12,4 11,2 96,1 107,6
Minden vizsgált minta esetén azt mutatták az elektroforetikus eredmények, hogy a 16 mmol/liter nátriumkloriddal eluálódó frakció tiszta EPO, semmiféle bomlástermék nem mutatható ki.
Az előbbi kísérletekből arra a következtetésre ju- 15 tottunk, hogy a hidroxi-propil-P-ciklodextrin a humán szérumalbuminhoz hasonlóan megelőzi az EPO adszorpcióját az alkalmazott infúziós készlet műanyagán.
7. példa
Eritropoietin biológiai vizsgálata egéren
Az r-HuEPO biológiai aktivitásának igazolására exhipoxiás policitémiás (magas vörösvértestszámú) egereken végzett biológiai vizsgálatot alkalmazunk. Ebben a 25 vizsgálatban az egereket a csökkentett légnyomáshoz (mintegy 0,40 MPa) 2 héten át akklimatizáljuk, hogy kiváltsuk a vörösvértestek képződését a természetes ftziológiás eritropoietintermelésre adott válaszként. Az egereket normális légköri körülmények közé visszajuttatva a megszaporodott cirkuláló vörösvértestek magas oxigénhordozó kapacitása visszaszorítja a további endogén eritropoietintermelést. Ilyen körülmények között az állat az exogén módon alkalmazott eritropoietin hatására bekövetkező további vörösvértest-képződésre dózisfüggő módon válaszol. Az új vörösvértest-termelődés mennyiségi meghatározását radioaktív vas (59Fe) felvételével mérjük. A minta aktivitásának meghatározására az r-HuEPO (humán rekombináns eritropoietin) vizsgálati ciklodextrinkészítmény mintákkal nyert dózis-hatás görbéket az r-HuEPO standard hasonló görbéihez viszonyítjuk.
8. példa
Összehasonlító vizsgálat
A következő vizsgálatban hidroxi-propil-P-ciklodextrin-készítményben lévő eritropoietin szubkután adagolás esetén való biológiai hozzáférhetőségét vizsgáljuk humán szérumalbumin alkalmazásával készült készítményekhez hasonlítva egészséges, önként jelentkező személyeken.
Hat egészséges, önként jelentkező, 30 és 40 év közötti (átlagosan 32 éves) korú, 69 és 80 kg közötti (átlagosan 75 kg) testtömegű férfinak szubkután 1 ml EPOoldatot (4000 N.E./ml) adagoltunk a felső karjukba egy randomizált kereszteződő (cross-over) terv szerint. A két vizsgálat között négyhetes időszak telt el. A két EPO-készitmény összetétele az alábbi.
A: piaci forgalomban kapható 4000 N.E./ml aktivitású tennék (Eprex®, Cilag; Lót No. 89128/385)
r-HuEPO 4000 N.E.
Humán szérumalbumin 2,5 mg
NaCl 5,84 mg
Na-citrát-2H2O 5,8 mg
Cítromsav 0,057 mg
Injekciós minőségű víz 1 ml
B: 4000 N.E./ml aktivitású, 10% hidroxi-propil-p-cik-
lodextrint tartalmazó oldat
r-HuEPO 4000 N.E.
NaCl 3,59 mg
Na-citrát-2H2O 5,8 mg
Citromsav 0,057 mg
Hidroxi-propil-β-
ciklodextrin (M.S. = 0,4) 100 mg
Injekciós minőségű víz 1 ml
Az EPO meghatározására közvetlenül az adagolás
előtt és 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 32, 48, 56, 72 és 96 óra elteltével az adagolás után 4 ml-es vénás vérmintákat veszünk, és ezeket szobahőmérsékleten alvadni hagyjuk.
Aí első 12 óra alatt a mintákat az ellentétes karból vesszük. Az elkülönített szérumot vizsgálatig -20 °C hőmérsékleten tároljuk.
A plazma EPO-koncentrációját enzimimmunológiai vizsgálattal (EIA) mérjük az adagolást követő 96 órán át a kimutatási határ 5 mE/ml, a mérést a Clinigen Eiythropoietin EIA Kit, 96 tests (No. ABCO6096) felhasználói utasításában leírt módon végezzük.
Az EPO alábbi farmakokinetikai paramétereit határozzuk meg:
- csúcs-plazmakoncentráció (Cmax: mE/ml),
- a plazmakoncentráció csúcsideje (Tmax: h),
- a plazmakoncentráció-idő görbe alatti terület (AUC,) 96h: mE.h/ml),
- a hidroxi-propil-p-ciklodextrin-készítmény rela45 tív biológiai hozzáférhetősége a megjelölt készítményhez képest, azaz AUC0_96h arány χ 100 (Frei: %).
A fenti paraméterek értékeiben a két készítmény között nem volt statisztikusan szignifikáns különbség.
EPO összehasonlító biológiai hozzáférhetősége szubkután adagolásnál
Paraméter A (Eprex*; Cilag) B(10% ΗΡ-β-CD)
max' h 16,3±8,5 19,7±11,0
CmM: mE/ml 33,4±7,5 30,8±9,9
AUCo 96h: mE.h/ml 1864 ±548 1753±428
I rcl’ % 96,4 ±14,5
HU218213 Β
Az eritropoietin mind a piaci forgalomban kapható készítményből (Eprex®), mind az újonnan kifejlesztett hidroxi-propil-p-ciklodextrin-készítményből lassan abszorbeálódik a szubkután adagolást követően. Az adagolás után 10-24 órával mindkét készítmény esetén közeli, 30 mE/ml körüli csúcsplazmaszintek voltak megfigyelhetők. A piaci forgalomban lévő hidroxi-propil-βciklodextrin-készítmény relatív biológiai hozzáférhetősége 96%-nak bizonyult. Arra a következtetésre juthattunk, hogy a két készítmény mind az abszorpció sebességében, mind annak mértékében biológiailag ekvivalens.
Az adagolás után 2, 4 és 24 órával megvizsgáltuk a beinjektálás helyén az irritáció esetleges jelenlétét. Az önkénteseken a vizsgálat egész ideje alatt sem ödémát, sem eritémát nem tapasztaltunk, viszketésre vagy fájdalomra nem panaszkodtak. Mindkét készítményt egyformán jól viselték.
Nem figyeltünk meg klinikailag jelentős hematológiai és szérum-biokémiai változást. Nem befolyásolta az EPO szubkután adagolása a vérnyomást vagy a szívritmust sem.

Claims (15)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Gyógyászati készítmény, amely vizes oldatban eritropoietint és olyan β- vagy γ-ciklodextrin-étert vagy vegyes étert tartalmaz, ahol a ciklodextrin egy vagy több hidroxilcsoportjának hidrogénatomját egy hidroxi-etil-, hidroxi-propil- vagy hidroxi-izobutil-csoport helyettesíti, és az átlagos moláris helyettesítettség 0,3 és 0,8 közötti.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, amelyben a ciklodextrinnek az eritropoietinhez viszonyított tömegaránya 7500:1 és 700:1 közötti.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti készítmény, amelyben a ciklodextrin koncentrációja 2,5-20 tömeg%, a készítmény további része víz, eritropoietin és egyéb segédanyagok.
  4. 4. A 3. igénypont szerinti injektálható készítmény, amely az oldatot izotóniássá tevő szert is tartalmaz.
  5. 5. A 3. igénypont szerinti készítmény, amely tartósítószert is tartalmaz.
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti készítmény, amely orrpermet.
  7. 7. Az 5. igénypont szerinti készítmény, amely szemcsepp.
  8. 8. Eljárás az 1. igénypont szerinti gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az eritropoietint alaposan elegyítjük olyan β- vagy γ-ciklodextrii-éter vagy vegyes éter vizes oldatával, amelyben a ciklodextrin egy vagy több hidroxilcsoportjának hidrogénatomját hidroxi-etil-, hidroxi-propil- vagy hidroxiizobutil-csoport helyettesíti, és az átlagos moláris helyettesítettség 0,3 és 0,8 közötti, és a fenti összetevőkhöz adott esetben az elegyítés előtt, alatt vagy után további, gyógyászati szempontból elfogadható összetevőket adagolunk.
  9. 9. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az eritropoietint a ciklodextrinnek egy olyan vizes oldatában oldjuk, amely pufferrendszert, pH-beállító szert és az oldatot izotóniássá tevő szert tartalmaz, majd kívánt esetben az így kapott oldatot fagyasztva szárítjuk ví gy porlasztva szárítjuk.
  10. 10. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a ciklodextrint és az eritropoietint egymáshoz viszonyított 7500:1 és 700:1 közötti tömegarányban alkalmazzuk.
  11. 11. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a készítmény teljes tömegére számított 2,5-20 tömeg% ciklodextrint, további összetevőkként eritropoietint, vizet és egyéb segédanyagokat alkalmazunk.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti eljárás injektálható készítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy az oldatot izotóniássá tevő segédanyagot is alkalmazunk.
  13. 13. All. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezvt, hogy tartósítószert is alkalmazunk.
  14. 14. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezvt, hogy a készítményt orrpermetté formáljuk.
  15. 15. A 13. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a készítményt szemcseppé formáljuk.
HU9202432A 1990-01-29 1991-01-25 Ciklodextrin tartalmú eritropoietin készítmények és eljárás előállításukra HU218213B (hu)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB909001987A GB9001987D0 (en) 1990-01-29 1990-01-29 Improved cyclodextrin based erythropietin formulation
PCT/EP1991/000173 WO1991011200A1 (en) 1990-01-29 1991-01-25 Improved cyclodextrin based erythropoietin formulation

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HU9202432D0 HU9202432D0 (en) 1992-10-28
HUT62198A HUT62198A (en) 1993-04-28
HU218213B true HU218213B (hu) 2000-06-28

Family

ID=10670074

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9202432A HU218213B (hu) 1990-01-29 1991-01-25 Ciklodextrin tartalmú eritropoietin készítmények és eljárás előállításukra

Country Status (20)

Country Link
US (1) US5376632A (hu)
EP (1) EP0513072B1 (hu)
JP (1) JP2997052B2 (hu)
KR (1) KR0183445B1 (hu)
AT (1) ATE107518T1 (hu)
AU (1) AU648061B2 (hu)
CA (1) CA2074820C (hu)
DE (1) DE69102627T2 (hu)
DK (1) DK0513072T3 (hu)
ES (1) ES2059115T3 (hu)
FI (1) FI105012B (hu)
GB (1) GB9001987D0 (hu)
HU (1) HU218213B (hu)
IE (1) IE65209B1 (hu)
IL (1) IL97019A (hu)
NO (1) NO304728B1 (hu)
NZ (1) NZ236938A (hu)
PT (1) PT96593B (hu)
WO (1) WO1991011200A1 (hu)
ZA (1) ZA91620B (hu)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4126984A1 (de) * 1991-08-15 1993-02-18 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung von humanprotein-enthaltenden, gut vertraeglichen arzneimitteln fuer infusions- oder injektionszwecke
US5661125A (en) * 1992-08-06 1997-08-26 Amgen, Inc. Stable and preserved erythropoietin compositions
US5494901A (en) * 1993-01-05 1996-02-27 Javitt; Jonathan C. Topical compositions for the eye comprising a β-cyclodextrin derivative and a therapeutic agent
IL116085A (en) * 1994-12-16 1999-12-31 Ortho Pharma Corp Spray dried erythropoietin
DE19539574A1 (de) * 1995-10-25 1997-04-30 Boehringer Mannheim Gmbh Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren
JP2000509374A (ja) 1996-04-19 2000-07-25 アルファ セラピュティック コーポレイション 凍結乾燥した血液タンパク質のウイルス不活性化方法
US5754937A (en) 1996-05-15 1998-05-19 Stackpole Limited Hi-density forming process
DK0977582T3 (da) * 1997-03-18 2002-12-16 Roche Diagnostics Gmbh Farmaceutiske kombinationspræparater, der indeholder erythropoietin og jernpræparater
US6683100B2 (en) 1999-01-19 2004-01-27 Novartis Ag Organic compounds
US6194181B1 (en) 1998-02-19 2001-02-27 Novartis Ag Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics
JP2002523475A (ja) 1998-09-02 2002-07-30 アラーガン・セイルズ・インコーポレイテッド 防腐したシクロデキストリン含有組成物
US20040152664A1 (en) * 1998-09-02 2004-08-05 Allergan, Inc. Prednisolone compositions
ATE401908T1 (de) * 1999-04-09 2008-08-15 Ortho Mcneil Pharm Inc Pharmazeutische zusammensetzungen von erythropoietin
US20040038878A1 (en) * 2000-08-04 2004-02-26 Masahiko Tanikawa Injectable protein formulations
US20060235366A1 (en) * 2000-12-20 2006-10-19 Fox Hollow Technologies, Inc. Method of evaluating a treatment for vascular disease
US20020146409A1 (en) * 2001-01-30 2002-10-10 Herring Steven W. Methods for stabilizing lyophilized blood proteins
JPWO2003006052A1 (ja) * 2001-07-09 2005-02-17 山之内製薬株式会社 徐放性注射剤用組成物およびその製造方法
DE10228049A1 (de) 2002-06-24 2004-01-15 Merck Patent Gmbh Flüssige Zubereitung enthaltend Oligopeptide
US7459435B2 (en) * 2002-08-29 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US7459436B2 (en) * 2002-11-22 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
KR100610003B1 (ko) 2003-06-10 2006-08-08 주식회사 엘지생명과학 혈청 알부민을 함유하지 않는 안정한 인 에리쓰로포이에틴용액 제형
EP1537876A1 (en) * 2003-12-01 2005-06-08 BioGeneriX AG Erythropoietin solution formulation
US7772182B2 (en) * 2004-08-05 2010-08-10 Alza Corporation Stable suspension formulations of erythropoietin receptor agonists
US20110236902A1 (en) * 2004-12-13 2011-09-29 Tyco Healthcare Group Lp Testing a patient population having a cardiovascular condition for drug efficacy
US7794413B2 (en) * 2005-04-19 2010-09-14 Ev3, Inc. Libraries and data structures of materials removed by debulking catheters
CU23317A1 (es) * 2005-07-22 2008-10-22 Ct De Investigacia N Y Desarro Formulaciones nasales de eporh con bajo contenido de ã cido siã lico para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central
BRPI0717460A2 (pt) 2006-10-20 2013-12-24 Icos Corp Composições de inibidores de chk1
DK2590666T3 (en) * 2010-07-06 2017-07-17 Augustinus Bader TOPICAL APPLICATION OF ERYTHROPOIETIN FOR USE IN THE TREATMENT OF DAMAGE OF THE CORNS
US10328152B2 (en) 2011-06-16 2019-06-25 Nayan Patel Method for stabilization and delivery of therapeutic molecules
US11583584B1 (en) * 2015-10-28 2023-02-21 Coherus Biosciences, Inc. Stable protein compositions and methods of their use

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3346123A1 (de) * 1983-12-21 1985-06-27 Janssen Pharmaceutica, N.V., Beerse Pharmazeutische praeparate von in wasser schwerloeslichen oder instabilen arzneistoffen und verfahren zu ihrer herstellung
JPS60258125A (ja) * 1984-06-06 1985-12-20 Hayashibara Biochem Lab Inc 蛋白性生理活性物質を含有する水溶性乾燥物
JPS6191131A (ja) * 1984-10-09 1986-05-09 Chugai Pharmaceut Co Ltd 医薬品の吸着防止方法および組成物
JPS6197229A (ja) * 1984-10-18 1986-05-15 Chugai Pharmaceut Co Ltd 安定なエリトロポエチン製剤
US4920214A (en) * 1986-04-16 1990-04-24 American Maize-Products Company Process for producing modified cyclodextrins
PT88490B (pt) * 1987-09-14 1992-11-30 Novo Nordisk As Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas para libertacao nao-enterica trans-mucosa contendo monossacaridos ou oligossacaridos
US5002935A (en) * 1987-12-30 1991-03-26 University Of Florida Improvements in redox systems for brain-targeted drug delivery
US5997856A (en) * 1988-10-05 1999-12-07 Chiron Corporation Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins
US5068227A (en) * 1989-01-18 1991-11-26 Cyclex, Inc. Cyclodextrins as carriers

Also Published As

Publication number Publication date
HU9202432D0 (en) 1992-10-28
HUT62198A (en) 1993-04-28
NO304728B1 (no) 1999-02-08
DE69102627D1 (de) 1994-07-28
FI923402A (fi) 1992-07-28
IE910286A1 (en) 1991-07-31
NO922990D0 (no) 1992-07-29
NO922990L (no) 1992-07-29
JP2997052B2 (ja) 2000-01-11
PT96593A (pt) 1991-10-15
US5376632A (en) 1994-12-27
FI105012B (fi) 2000-05-31
NZ236938A (en) 1992-07-28
EP0513072B1 (en) 1994-06-22
IL97019A (en) 1997-07-13
IL97019A0 (en) 1992-03-29
CA2074820C (en) 2003-10-14
AU648061B2 (en) 1994-04-14
DK0513072T3 (da) 1994-08-01
GB9001987D0 (en) 1990-03-28
ES2059115T3 (es) 1994-11-01
EP0513072A1 (en) 1992-11-19
JPH05503700A (ja) 1993-06-17
KR0183445B1 (en) 1999-05-01
ZA91620B (en) 1992-10-28
WO1991011200A1 (en) 1991-08-08
CA2074820A1 (en) 1991-07-30
ATE107518T1 (de) 1994-07-15
PT96593B (pt) 2001-06-29
IE65209B1 (en) 1995-10-04
AU7149791A (en) 1991-08-21
DE69102627T2 (de) 1994-11-03
FI923402A0 (fi) 1992-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU218213B (hu) Ciklodextrin tartalmú eritropoietin készítmények és eljárás előállításukra
EP1501496B1 (en) Formulations containing amiodarone and sulfoalkyl ether cyclodextrin
Brewster et al. Use of 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin as a solubilizing and stabilizing excipient for protein drugs
JP3120987B2 (ja) ポリペプチド、特にタンパク質の可溶化および安定化のための方法および組成物
US20030055023A1 (en) Formulations containing etomidate and a sulfoalkyl ether cyclodextrin
JP2017019879A (ja) スルホアルキルエーテルシクロデキストリン組成物
US6194395B1 (en) Cyclodextrin cladribine formulations
HU201881B (en) Process for producing stabile retarde alpha-interferone komplex
JP5052750B2 (ja) オリゴペプチドとエーテル化シクロデキストリンを含む液体製剤
EP0743854B1 (en) Anti-tumour medical preparation on the basis of carboplatin and the method of its production
US20230357451A1 (en) Alkylated cyclodextrin compositions and processes for preparing and using the same
KR20090050070A (ko) 항종양제를 포함하는 수성 제제
KR100534622B1 (ko) 에리트로포이에틴과 인간 혈청알부민의 포합체
CZ228896A3 (cs) Protinádorový léčebný přípravek na bázi karboplatiny a způsob jeho výroby