FI105012B - Menetelmä syklodekstriinipohjaisen erytropoietiiniformulaation valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä syklodekstriinipohjaisen erytropoietiiniformulaation valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI105012B FI105012B FI923402A FI923402A FI105012B FI 105012 B FI105012 B FI 105012B FI 923402 A FI923402 A FI 923402A FI 923402 A FI923402 A FI 923402A FI 105012 B FI105012 B FI 105012B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cyclodextrin
- erythropoietin
- epo
- aqueous solution
- hydroxypropyl
- Prior art date
Links
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1816—Erythropoietin [EPO]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
- A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Polyurethanes Or Polyureas (AREA)
- Macromonomer-Based Addition Polymer (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
, 105012
Menetelmä syklodekstriinipohjäisen erytropoietiiniformu-laation valmistamiseksi
Keksintö koskee menetelmää farmaseuttisen koostu-5 muksen valmistamiseksi, joka käsittää erytropoietiinin ja β- tai γ-syklodekstriinin vesiliuoksen, jossa syklodekst-riini on β- tai γ-syklodekstriinieetteri tai sekaeetteri, jossa yhden tai useamman syklodekstriiniryhmän vety on korvattu hydroksietyyli-, hydroksipropyyli- tai hydroksi-10 isobutyyliryhmällä, ja jossa keskimääräinen moolisubsti-tuutio (M.S.) on välillä 0,3 - 0,8. Keksintö koskee myös menetelmää erytropoietiinin samanaikaisesti stabiloimisek-si vesiliuoksessa ja sen estämiseksi adsorboitumasta pinnoille .
15 Keksinnön mukaan valmistetaan uutta farmaseuttista koostumusta, joka sisältää erytropoietiinia ja β- tai γ-syklodekstriinin hydroksialkyylijohdannaisten vesiliuosta parenteraalista ja paikallista antamista varten. Esitetään menetelmiä tällaisten vesipitoisten, kylmäkuivattujen 20 tai suihkukuivattujen koostumusten valmistamiseksi. Uusi koostumus on erityisen käyttökelpoinen erytropoietiinin suoraan ihonalaiseen, nenän kautta tai silmään antamiseen anemian hoidossa. Kuvataan myös uusi anemiasta kärsivien nisäkkäiden hoitomenetelmä, jossa mainituille nisäkkäille 25 annetaan paikallisesti tehokas erytropoieettinen määrä ···’· näitä koostumuksia.
• * · : .* Erytropoietiini on sirkulatorinen glykoproteiini- • · hormoni, joka aiheuttaa punaisten solujen määrän lisäänty-! ! I misen pääasiallisesti stimuloimalla erytroidiydintä. Hor- 30 moni esiintyy pieninä määrinä ja sitä muodostuu pääasiassa - vielä identifioimattomissa kohdissa aikuisen ihmisen mu- • * * * * .···. nuaisessa ja sikiön maksasoluissa.
• * *·’ On todettu, että muutaman erytropoietiini mikro- » · : gramman antaminen yhtenä tai useampana annoksena, on teho- • · » 35 kas munuaissairauden loppuvaiheen anemian parantamisessa.
» • · » · • · 2 105012 Tätä annostustasoa pitäisi kuitenkin noudattaa tarkasti. Hoidossa erytropoietiinilla vaaditaan siten annostusmuoto, joka mahdollistaa eksogeenisen hormonin pienten määrien * tarkan antamisen.
5 Erytropoietiinin valmistaminen yhdistelmä-DNA-tek niikalla ja sitä seurannut riittävä osoittaminen, että tämä uusi aine on yhtä tehokas kuin luonnon hormoni, johti tutkimuksiin sen käytöstä erilaisissa terapeuttisissa sovellutuksissa. Erytropoietiinilla on kuitenkin yksi mer-10 kittävä haitta, joka tähän asti esti useiden terapeuttisten sovellutusten kehittämisen: se ei ole stabiili, varsinkaan vesiliuoksessa. Jopa hyvin alhaisissa lämpötiloissa (-80 °C) voidaan havaita olennainen aktiivisuuden aleneminen.
15 Tämä aktiivisuuden aleneminen johtuu toisaalta erytropoietiinin hajoamisesta vesiliuoksessa. Toisaalta aktiivisuuden aleneminen johtuu erytropoietiinin huomattavasta adsorptiosta ruiskun tai astian seinämän sisäpinnalle, mikä vuorostaan aiheuttaa lisää hajoamista.
20 Näissä olosuhteissa on tehty erilaisia yrityksiä kehittää menetelmä, jolla estetään vesiliuoksessa olevan erytropoietiinin adsorboituminen astian seinämän sisäpintaan ja jolla estetään sen hajoaminen.
Julkaisussa EP-A-178567 esitetään menetelmä, jolla 25 estetään vesiliuoksessa olevan erytropoietiinin adsorboi- »kb ···! tuminen lasi- tai muoviastian sisäpintaan lisäämällä muun «« · : *.* muassa ihmisen seerumialbumiinia, naudan seerumialbumii- • · :,'*i nia, lesitiiniä, dekstraaneja, metyyliselluloosaa, poly- :J : etyleeniglykolia, etyleenioksidi-propyleenioksidisekapoly- 30 meeriä ja/tai polyoksietyleenihydrattua risiiniöljyä. Osoitettiin, että talteen otetun erytropoietiinin määrä
Ml .···. tällaisessa formulaatiossa oli yhteensä 75 - 98 % sen jäi- • · *·* keen, kun oli pidetty kaksi tuntia 20 °C:ssa, kun taas * * * vertailuformulaatiolla saatiin talteen vain 16 %. Patentin 35 hakijan oman kokemuksen mukaan erytropoietiinin pitkäai- • i · • · # * • · 3 105012 kaista funktionaalista stabiilisuutta ei kuitenkaan voida säilyttää tällaisessa formulaatioissa. Pitkäaikaisen funktionaalisen stabiilisuuden aikaansaamiseksi ei ainoastaan glykoproteiinin polypeptidirakenteen vaan myös hiilihyd-5 raattirakenteen pitäisi säilyä vahingoittumattomana, samoin kuin on osoitettu, että oikea glykolisaatio ja sialy-laatio ovat välttämättömiä hormonien in vivo -toimintoja varten. Lisäksi voidaan odottaa, että edellä mainitut for-mulaatiot voivat aiheuttaa immunogeenisiä reaktioita tie-10 tyissä kohteissa, erityisesti toistuvien injektioiden jälkeen. Veren johdannaiset, kuten ihmisen seerumialbumiini, voivat myös olla hengenvaarallisten virusinfektioiden lähde .
Julkaisussa EP-A-178665 on kuvattu stabilisaatto-15 reita, jotka ovat käyttökelpoisia pakastuskuivatuissa ja vesipitoisissa erytropoietiiniformulaatioissa. Stabilointiaineina on mainittu polyetyleeniglykolit, proteiinit, sokerit, aminohapot, epäorgaaniset suolat, orgaaniset suolat ja rikkiä sisältävät pelkistimet. Osoitettiin, että 20 yhden viikon jälkeen erytropoietiinin aktiivisuus stabiloiduissa formulaatiossa 25 °C:ssa aleni 67 - 73 %:iin alkuperäisestä aktiivisuudestaan, kun taas stabiloimatto-. man formulaation aktiivisuus aleni 46 %:iin. Myös tässä I,,' tapauksessa todettiin, että edellä mainittujen stabili- 25 saattorien lisääminen ei takaa erytropoietiinin pitkäai- lii ···! kaista funktionaalista stabiilisuutta.
·· · : ’.· Julkaisussa EP-A-306824 kuvataan stabiileja pakas- « · :,1·· tuskuivattuja erytropoietiiniformulaatioita, jotka sisäl- • · m : tävät ureaa ja aminohappoja stabilointia varten ja pinta- 30 aktiivisia aineita adsorption estämiseksi. Tärkeimmäksi . .***. haitaksi tässä on myönnettävä, että erytropoietiiniformu- • · · .···. laatioilla, jotka saatetaan käyttömuotoon vesiliuoksen • · • · t muodossa, on muutaman kuukauden rajoitettu stabiilisuus * 1 1 : huoneenlämpötilassa. Siten asiakkaan on käytännöllisesti • · • · • · 9 105012 katsoen pakko saattaa pakastuskuivattu formulaatio käyttömuotoon joka kerralla erikseen juuri ennen antamista.
Julkaisussa W0-90/03784 kuvataan menetelmä polypep-tidien, erityisesti proteiinien, liuottamiseksi ja/tai 5 stabiloimiseksi β- ja γ-syklodekstriinijohdannaisten avulla sekä koostumuksia, jotka sisältävät polypeptidiä ja tällaisia syklodekstriinijohdannaisia. Sopivien proteiinien laajassa luettelossa mainitaan erytropoietiini, mutta missään erityisessä esimerkissä ei esitetä koostumusta, 10 joka sisältää erytropoietiinia. Sopivista syklodekstriini-johdannaisista mainitaan β- ja γ-syklodekstriinit, jotka on modifioitu muun muassa hydroksipropyylillä tai hydrok-sietyylillä. Keskimääräinen alkoksiyksikköjen lukumäärä syklodekstriiniä kohti vaihtelee noin 4,7:stä 7:ään β-syk-15 lodekstriiniä (M.S. = 0,67 - 1) ja noin 7:stä 8:aan γ-syk-lodekstriiniä (M.S. = 0,875 - 1). Erityisen huomionarvoinen on syklodekstriinin ja polypeptidin alhainen massasuhde, nimittäin noin l:l:stä noin 200:l:een.
Keksinnön mukaiselle menetelmälle erytropoietiinin 20 stabiloimiseksi vesiliuoksessa ja sen estämiseksi adsorboitumasta pinnoille on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 9 esitetään.
Tämän keksinnön tavoitteena on menetelmä taloudellisen, käytännöllisen ja turvallisen erytropoietiiniformu-‘” 25 laation valmistamiseksi. Tämä formulaatio sallii itse an- ···! tamisen siten, että aiheutetaan vain vähän vaivoja eikä «· ; yhtään paikallista ärsytystä.
• · ί.*·· Keksinnön mukaiselle menetelmälle farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä 30 esitetään patenttivaatimuksessa 1.
Mainitun tavoitteen saavuttamisen edellytyksenä on • · · .·♦·. vesipitoisen erytropoietiiniformulaation valmistus, jossa • · ’·' formulaatiossa glykoproteiini säilyttää funktionaalisen • · · • « · : .* stabiilisuutensa pitkään. Tällaiset erytropoietnniformu- • * • * • · · m s m I · · · s 105012 laatiot pitäisi edullisesti antaa suoraan ilman lisäkäsit-telyjä kuten käyttömuotoon saattamista tai laimentamista.
Yllättäen on todettu, että mainittu edellytys toteutuu koostumuksilla, jotka on kuvattu jäljempänä.
5 Tämä keksintö koskee menetelmää parenteraaliseen tai paikalliseen antamiseen tarkoitetun farmaseuttisen koostumuksen valmistamiseksi, joka käsittää erytropoietii-nin ja β- tai γ-syklodekstriinin vesiliuoksen, jossa syk-lodekstriinin yhden tai useamman hydroksiryhmän vety on 10 korvattu radikaalilla, jolla on kaava -Alk-O-H (I), jossa Alk merkitsee etyyliä, propyyliä tai isobutyyliä. 15 Alkoksiyksikköjen keskimääräinen lukumäärä syklodekst- riiniä kohti, so. kaikkien syklodekstriiniin substituoitu-neiden kaavan (I) mukaisten radikaalien lukujen keskimääräinen summa, voi vaihdella alle l:stä noin 50:een, erityisesti 1:stä 20:een, erityisemmin l:stä 10:een tai 20 1:stä 5:een.
Edullisesti alkoksiyksikköjen keskimääräinen luku määrä syklodekstriiniä kohti vaihtelee 2:stä 4:een, eri-tyisesti 2,5:stä 3,5:een ja erityisemmin se on noin 2,8 β-syklodekstriini johdannaisilla ja noin 3,2 γ-syklo-25 dekstriinijohdannaisilla.
···· Keksinnön mukaan valmistettu koostumus käsittää β- • · · · • · · • ·’ tai γ-syklodekstriinieetterit tai sekaeetterit, joissa • t :.’*i syklodekstriinin yhden tai useamman hydroksi ryhmän vety- • « · V · atomi on korvattu hydroksietyyli-, hydroksipropyyli- tai 30 hydroksi-isobutyyliryhmällä. Termi sekaeetteri merkitsee . β- tai γ-syklodekstriinijohdannaisia, joissa ainakin kaksi • · · .*·*. syklodekstriinin hydroksi ryhmää on eetteröity erilaisilla • t * - hydroksialkyyliryhmillä, kuten esimerkiksi hydroksipropyy- • · · : ·’ Iillä tai hydroks ie tyylillä .
9 9 9 9 9 9 9 9 • Il 9 9 » > 9 9 9 6 105012
Keskimääräistä moolisubstituutiota (M.S.) käytetään mittana alkoksiyksikköjen keskimääräiselle moolien lukumäärälle anhydroglukoosimoolia kohti. Syklodekstriinijohdannaisissa, jotka on tarkoitettu käytettäviksi tämän 5 keksinnön mukaisesti valmistetuissa koostumuksissa, M. S. vaihtelee noin 0,3:sta noin 0,8:aan, erityisesti 0,35:stä noin 0,5:een ja erityisimmin se on noin 0,4. Keskimääräinen moolisubstituutio määritetään sopivasti nopealla ato-mipommitusmassaspektroskopialla (FAB-MS) negatiivisella 10 tavalla.
Keskimääräinen substituutioaste (D.S.) viittaa sub-stituoitujen hydroksyylien keskimääräiseen lukumäärään anhydroglukoosiyksikköä kohti. Syklodekstriinijohdannaisissa, jotka on tarkoitettu käytettäviksi tämän keksinnön 15 mukaisesti valmistetuissa koostumuksissa, D.S. on välillä 0,125 - 3, erityisesti 0,2 - 2 tai 0,2 - 1,5. Edullisesti D.S. vaihtelee noin 0,2:sta noin 0,7:ään, erityisesti noin 0,35 - noin 0,5 ja erityisimmin se on noin 0,4.
Erityisemmät β- ja γ-syklodekstriinihydroksialkyy-20 lijohdannaiset, jotka on tarkoitettu käytettäviksi tämän keksinnön mukaisesti valmistetuissa koostumuksissa ovat osittain substituoituja syklodekstriinijohdannaisia, jois-, sa anhydroglukoosiyksiköiden eri asemissa olevien hydrok-
K
syyliryhmien keskimääräinen alkylointiaste on noin 0 % - 25 20 % asemalle 3, 2 % - 70 % asemalle 2 ja noin 5 % - 90 % •**j asemalle 6. Edullisesti substituoimattoman β- tai γ-syklo- • · · ’ ·' dekstriinin määrä on alle 5% koko syklodekstriinin määräs- • · ’.’•f tä ja erityisesti se on alle 1,5 %.
• · * V ' Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä formulaa- 30 tion valmistamiseksi edullisimmat syklodekstriinijohdan- naiset ovat syklodekstriini johdannaiset, jotka ovat osit- • · · .·*·. tain substituoituja β-syklodekstriinieettereitä tai seka- • « t m eettereitä, joissa on hydroksipropyyli-, hydroksietyyli- • · · : ·' ja erityisesti 2-hydroksipropyyli- ja/tai 2-(1-hydroksi- 35 propyyli) substituentteja.
• · * * · i • · 105012 7 Tämän keksinnön mukaisesti valmistetuissa koostumuksissa käytettäväksi tarkoitettu edullisin syklodekst-riinijohdannainen on hydroksipropyyli-P-syklodekstriini, jonka M.S. on välillä 0,35 - 0,5 ja joka sisältää alle 5 1,5 % substituoimatonta β-syklodekstriiniä.
Substituoidut syklodekstriinit voidaan valmistaa US-patentissa 3 459 731 ja GB-patenttihakemuksessa 2 189 245 kuvattujen menetelmien mukaisesti, jotka julkaisut on sisällytetty viitteinä valmistusmenetelmiä varten.
10 Yleensä substituoimattomat syklodekstriinit saatetaan reagoimaan epoksidin kanssa, edullisesti yli-ilmanpaineessa ja korotetussa lämpötilassa alkalisen katalyytin läsnä ollessa.
Muita viitteitä, joissa kuvataan syklodekstriinien 15 käyttöä tämän keksinnön mukaisissa valmistusmenetelmissä ja jotka antavat opastusta syklodekstriinien valmistamista, puhdistamista ja analysointia varten, ovat mm. seuraa-vat: "Cyclodextrin Technology", Jozsef Szejtli, Kluwer 20 Academic Publishers (1988) luvussa Cyclodextrins in Pharmaceuticals; "Cyclodextrin Chemistry", M.L. Bender et ai., Springer-Verlag, Berliini (1978); "Advances in Carbohydrate Chemistry", Voi. 12, M.L. Wolfrom, Academic Press, !, New York (157) luvussa The Schardinger Dextrins by Dexter " 25 French sivuilla 189 - 260; "Cyclodextrins and their Inclu- •••j sions Complexes", J. Szejtli, Akjademiai Kiado, Budapest, l Unkari (1982); I. Tabushi, Acc. Chem. Research, 1982, 15., • · s. 66 - 72; W. Sanger, Angewandte Chemie, £2, s. 343 - 361 · (1981); A.P. Croft ja R.A. Bartsch, Tetrahedron, 3.9, s.
30 1417 - 1474 (1983); Irie et ai., Pharmaceutical Research, - ;*··; 5, s. 713 - 716, (1988); Pitha et ai., Int. J. Pharm.
• · · .*··. 29,73, (1986); German Of f enlegungsschrif t DE 3 118 218; "·' German Offenlegungsschrift DE 3 317 064; EP-A-94 157; EP- • ·’ A-149 197; US-patentti 4 659 696; ja US-patentti • * · 35 4 383 992. Erityisesti pitäisi kiinnittää huomiota niihin • « · • · · • · 8 105012 viitteisiin, joissa kuvataan valmistus- ja puhdistusmenetelmiä, joilla aikaansaadaan syklodekstriiniseoksia, joissa reagoimattoman syklodekstriinin määrä on alle 5 % koko syklodekstriinimäärästä.
5 Erytropoietiinin stabiilisuus vesiliuoksessa kasvaa β- tai γ-syklodekstriinin pitoisuuksien kasvaessa tasafaa-siinsa (level-off phase) tai maksimitasoonsa asti. Lopullisissa koostumuksissa on syklodekstriiniä noin 2,5 - 20 paino-%, erityisesti noin 5 - 20 %, erityisemmin 5 - 15 %, 10 esimerkiksi noin 10 %, jäännöksen ollessa vettä, aktiivista aineosaa ja mahdollisia lisäaineita.
Erityisesti, stabiilit farmaseuttiset koostumukset voivat sisältää ainoastaan vettä, syklodekstriiniä ja erytropoietiiniä ilman, että tarvitaan lisästabilisaatto-15 reita kuten ihmisen seerumialbumiinia, naudan seerumialbu-miinia, lesitiiniä, metyyliselluloosaa, polyetyleeniglyko-lia, rikkiä sisältäviä pelkistimiä, ureaa, aminohappoja ja pinta-aktiivisia aineita. Voidaan lisätä pH-säätöaineita, esim. kloorivetyhappoa, etikkahappoa, sitruunahappoa, nat-20 riumhydroksidia, kaliumhydroksidia tai minkä tahansa näistä suoloja, erityisesti natriumsitraattia. Sopiva pH eryt-: ropoietiinin formuloimista varten vaihtelee 6,5:stä 7,4:ään, erityisesti 6,8:sta 7,0:aan.
I,, Injektoitavan tuotteen valmistusta varten on sopi- 25 vaa lisätä isotonointiainetta, esim. natriumkloridia, ka- •••ϊ liumkloridia, sorbitolia.
* · · ! Koska pienet määrät raskaita metalli-ioneja kataly- 9 9 :.*·· soivat erytropoietiinin hajoamista, voi edelleen olla so- :T; pivaa lisätä sopivaa kompleksinmuodostaja-ainetta kuten 30 kalsiumkloridia, sitraattia, EDTA:aa tai niiden kaltaisia .*··. farmaseuttisesti hyväksyttäviä metalli-ionikompleksointi- .···. aineita. Voidaan esimerkiksi lisätä kalsiumkloridia noin • · 0,02 - 2 g/l:n pitoisuutena.
• · i ! V Keksinnön mukaan valmistetuilla koostumuksilla on · · 35 alhainen toksisuus, eivätkä ne ole ärsyttäviä, joten ne C= * * * « • » I > • · 9 105012 mahdollistavat injektoitavan lääkkeen valmistamisen, jota lääkettä voidaan turvallisesti käyttää toistuvina an-noshoitoina ilman immunogeenisten reaktioiden vaaraa. Edulliset valmisteet ovat käyttövalmiita ja ne annetaan 5 edullisesti ihonalaisesti tai nenäsuihkeina tai silmätippoina. Näitä valmisteita voidaan käyttää helpolla ja yksinkertaisella tavalla ja niitä voidaan siten antaa itse, mikä mahdollistaa hoidon kotona.
Edelleen tämän keksinnön mukaisesti valmistetut 10 lääkkeet sallivat edullisen erytropoietiinin farmakoki-neettisen profiilin aikaansaamisen, jolloin saadaan suhteellisen vakio plasmataso vähintään yhden päivän aikana ja siten niillä saadaan hyvä fysiologinen vaste, erityisesti kun ne annetaan ihonalaisesti tai nenäsuihkeena tai 15 silmätippoina.
Lisäämällä valmisteisiin sopivaa säilöntäainetta, kuten alkoholeja esim. etanolia, 1,3-propaanidiolia, bent-syylialkoholia tai niiden johdannaisia, fenyylietyylialko-holia, fenolia, tai fenolijohdannaisia kuten butyylipara-20 beenia, metyyliparabeenia, m-kresolia tai kloorikresolia; happoja esim. bentsoehappoa, sorbiinihappoa, sitruunahappoa, natriumpropionaattia, EDTA-dinatriumia, klooriheksi-. diiniä, heksamidiinidi-isotionaattia, heksetidiiniä; mah- dollisesti yhdessä natriumbisulfiitin kanssa tai propy- f 25 leeniglykolin kanssa tai vähemmän edullisesti kvaternääri- ···! siä ammoniumsuoloja, metalliyhdisteitä kuten sinkkioksi- : .* dia, tiomersaalia ja fenyylin elohopeasuoloja, esim. fe- • * ·.**: nyylielohopea (II) asetaattia, voidaan valmistaa erytropoi- • · t ί etiinin turvallisia moniannosformulaatioita parenteraali- 30 seen tai erityisesti paikalliseen (esim. nenään tai sil- . mään) antamiseen. Mainittujen moniannosformulaatioiden • · .*··, säilöntäaine valitaan luonnollisesti niin, että se sopii antotavan kanssa. Tällaisella moniannosformulaatiolla on
« « i I I I
: ·* taloudellinen ja käytännöllinen etu alalla tunnettuihin • « · ·...* 35 yksittäisannosformulaatioihin nähden.
* ti# « · · * * * · 10 105012
Farmaseuttisesti aktiivisen aineen pitoisuus tässä kuvatuissa valmisteissa riippuu luonnollisesti valitusta erytropoietiinityypistä, sen lähteestä, sen tehokkuudesta, biosaatavuuden vertailusta ihonalaisen antamisen ja las-5 kimonsisäisen injektion välillä ja halutusta antotaajuu-desta yhdistettynä haluttuun formulaation yksittäisannos-tukseen. Edullisesti erytropoietiinin pitoisuus keksinnön mukaisessa valmisteessa voi olla välillä noin 100 - 50 000 kansainvälistä yksikköä (I.U.) ml:aa kohti, erityisesti 10 noin 500 - 20 000 reen I.U. ml:aa kohti, erityisemmin noin 2 000:sta I.U. 10 000 I.U. ja erikoisesti noin 4 000 I.U. (1 I.U. vastaa 8,4 ng:aa rekombinanttierytropoietiinia). Yleisesti on tutkittu, että tehokas määrä olisi 1 - 200 I.U. kehon painon kg:aa kohti ja edullisemmin 2 - 100 I.U. 15 kehon paino kg:aa kohti erityisesti kun erytropoietiini annetaan ihonalaisesti. Tehokas määrä riippuu edelleen hoidettavan kohteen lajista ja koosta, kyseessä olevasta tilasta ja sen vakavuudesta ja antotavasta. Joka tapauksessa käytettävän annoksen pitäisi olla ei-toksinen isän-20 nälle. Ihonalaisena annostushoitona potilaiden hoidossa jatkuvalla ambulatorisella peritonaalidialyysillä (CAPD) annetun erytropoietiinin määrän pitäisi olla sellainen, että se nostaa ja ylläpitää hemoglobiiniarvot välillä 10 - 12 g/dl.
25 Erytropoietiiniformulaatiot, jotka on kuvattu edel- ··♦» lä voidaan valmistaa sopivasti lisäämällä puhdistettu • · · ί erytropoietiinin pääosa syklodekstriinin vesiliuokseen ja • · sekoittamalla perusteellisesti saatu liuos. Muut farma- t ·· ϊ#ί J seuttiset aineet voidaan lisätä haluttaessa, ennen erytro- 30 poietiinin pääosan lisäämistä, sen aikana tai sen jälkeen.
.***; Mainittu valmistus suoritetaan edullisesti alhaisessa läm- • * · ,···, pötilassa, erityisesti alle 10 °C:ssa ja erityisemmin vä-
Iillä 2 - 8 °C.
• * ' t · · ί Tässä esitettyjen erytropoietiinivalmisteiden vai- I i · 35 mistamisen malliesimerkki käsittää erytropoietiinin liuot- * I I I » • * » » * « · » · • * 1Χ 105012 tamisen ja suspendoimisen syklodekstriinin vesiliuokseen, joka liuos sisältää puskurisysteemiä, pH:ta säätävää ainetta, isotonointiainetta ja/tai niiden kaltaisia. Lopullisessa koostumuksessa syklodekstriinin ja erytropoietii-5 nin moolisuhde voi vaihdella välillä noin 500 000:1 - 5 000:1. Lopullisissa koostumuksissa erityisen edullinen on hydroksipropyyli-p-syklodekstriinin ja eryt-ropoietiinin moolisuhde, joka on noin 200 000:1 - noin 20 000:1, erityisesti noin 180 000:1 - noin 30 000:1, eri-10 tyisemmin noin 135 000:1 - noin 90 000:1 tai noin 85 00-0:1 - noin 60 000:1. Syklodekstriinin massan suhde erytro-poietiinin massaan näissä koostumuksissa vaihtelee välillä noin 7 500:1 - noin 700:1, erityisesti noin 6 000:1 - noin 1 000:1, erityisemmin noin 4 500:1 - noin 3 000:1 tai noin 15 2 800:1 - noin 2 000:1.
Keksinnön mukaisesti valmistetut vesipitoiset valmisteet ja täyteaine, mikäli sitä tarvitaan, voivat olla myös alalla tunnettuja menetelmiä noudattaen pakastus-kuivattuja tai suihkukuivattuja, jolloin saadaan kuivattu 20 koostumus, joka voidaan varastoida pitkäksi ajaksi ja liuottaa ennen antamista. Mainituissa pakastuskuivatuissa tai suihkukuivatuissa formulaatioissa syklodekstriinin ja erytropoietiinin moolisuhde ja paino/painosuhde voi olla sama kuin edellä mainituissa vesiliuoksissa. Koska useissa , ‘", 25 tapauksissa on sopivaa saattaa mainittu pakastuskuivattu » » * tai suihkukuivattu formulaatio käyttömuotoon syklodekst- riinin vesiliuoksessa, syklodekstriinin ja erytropoietii- • · *. nin moolisuhde ja paino/painosuhde voi myös olla alhaisem- • ' ’· pi kuin edellä mainituissa vesiliuoksissa. Tällaisissa • · · *· • · · *·* 30 pakastuskuivatuissa tai suihkukuivatuissa formulaatioissa hydroksipropyyli-P-syklodextriinin ja erytropoietiinin • · · moolisuhde voi vaihdella välillä noin 250 000:1 - noin : 2 000:1, erikoisesti noin 100 000:1 - noin 5 000:1, eri-
• I I
tyisesti noin 50 000:1 - noin 10 000:1.
« · • · • t • * v 9 9 9 I I f tai· * • · 12 105012 Tämän keksinnön mukaisesti valmistetuilla koostumuksilla on useita yllättäviä piirteitä. Siten vaikka jo tiedetään, että syklodekstriinit muodostavat inkluusioyh-disteitä muiden yhdisteiden kanssa ja siten lisäävät näi-5 den jälkimmäisten yhdisteiden stabiilisuutta, inkluusioyh-disteiden muodostaminen on pääasiassa rajoittunut tilanteisiin, joissa hydrofobinen osa voidaan sovittaa ainakin osittain vieraaseen yhdisteeseen. Nyt tehty havainto, että myös makromolekyyli, kuten erytropoietiini, voidaan komp-10 leksoida ja stabiloida tehokkaasti syklodekstriinin johdannaisilla, on odottamaton.
Vaikka β-syklodekstriini ja γ-syklodekstriini voivat estää erytropoietiinin adsorption astian seinämän pintaan, hydroksialkyloitu γ-syklodekstriini ja erityisesti 15 hydroksialkyloitu β-syklodekstriini ovat sopivampia estämään oleelliset muutokset sekä glykoproteiinin polypepti-di- että hiilihydraattirakenteessa ja sellaisina lisäävät glykoproteiinin pitkäaikaista funktionaalista stabiili-suutta.
20 Esitettyjä nestevalmisteita voidaan myös käyttää missä tahansa annostelulaitteessa, joka sopii parenteraa-liseen, esim. ihonalaiseen tai paikalliseen antamiseen, esim. nenään tai silmään antamiseen. Laite pitäisi raken-; ' ' taa ottaen huomioon optimimittaustarkkuuden varmistaminen 25 ja rakenteellisten osien yhteensopivuus antotavan kanssa.
Tämän keksinnön lisäaspektina tarjotaan menetelmä samanaikaisesti erytropoietiinin stabiloimiseksi vesi- • · · ·, liuoksessa ja sen estämiseksi absorboitumasta pinnoille I I · *· 1· formuloimalla mainittu erytropoietiini tehokkaan määrän • · ·.1 ' 3 0 kanssa syklodekstriinijohdannaista. Luonnollisia ja tehok kaita määriä syklodekstriinijohdannaista tämän menetelmän : käyttöön ovat erityisesti määrät, jotka on kuvattu edellä erytropoietiini-syklodekstriinikoostumusten valmistuksen • · · yhteydessä.
I · · • • · · • ·
>M
· · · » ♦ 1 · · • · 13 105012
Vielä tässä esitetään uusi menetelmä anemiasta kärsivien nisäkkäiden hoitamiseksi antamalla mainituille nisäkkäille tehokas erytropoieettinen määrä näitä koostumuksia. Erityisesti mainittu menetelmä käsittää näiden vesi-5 pitoisten erytropoietiini-sylkodekstriinikoostumusten antamisen nenään nenäsuihkeina tai silmiin silmätippoina.
Lisäyksityiskohtia tämän keksinnön käytäntöön soveltamisesta annetaan seuraavien esimerkkien avulla, joita ei kuitenkaan pidä tulkita siten, että ne määräisivät mi-10 tään rajoituksia tämän keksinnön piirille.
Ά. Koostumusesimerkit Esimerkki 1: Injektoitava liuos a) Erytropoietiini 4000 I.U/ml Ihmisen rekombinanttierytro-
15 poietiini (r-HuEPO) 4000 U
Natriumklkoridi 3,59 mg
Natriumsitraatti 2 aq 5,8 mg
Sitruunahappo 1 aq 62 ^g
Hydroks ipropyyli-β-syklodeks t-20 riini (MS = 0,4) 100 mg
Kloorivetyhappo (1 N) tai natrium-hydroksidi (IN) pH-arvoon 6,9
Vesi 1 ml:ksi
Valmistusmenetelmä 25 18 1 pyrogeenitöntä vettä steriloitiin suodattamal- la. Siihen lisättiin sekoittaen 2 kg hydroks ipropyy-Ιί-β-syklodekstriiniä (M.S. = 0,4), 116 g natriumsitraat- · tia.2aq, 1,24 g sitruunahappo. laq:a ja 71,8 g natriumklo- • · · *·^· ridia. Liuos jäähdyttiin 25 °C:seen ja pH säädettiin ar- * 30 voon 6,9 lisäämällä NaOH:a (1 N) tai HCl:a (1 N) . Liuosta sekoitettiin, kunnes se oli homogeeninen, ja jäähdytettiin 2 °C - 8 °C: seen ··· • · f 500 ml:aa r-HuEPO:n puhdistettua erää (160 000 I.U./ml), jota oli pidetty -70 °C - -80 °C:ssa, nes-35 teytettiin pitämällä sitä upotettuna vesihauteessa • · · • · · IMI 1 f 14 105012 20 °C:ssa. Sulanut liuos lisättiin sitruunahappopuskuri-liuokseen ja sekoitettiin 5 minuuttia alle 8 °C lämpötilassa. Tämä liuos laimennettiin kylmällä pyrogeenittömällä vedellä 20 litran lopulliseen tilavuuteen ja steriloitiin 5 suodattamalla käyttäen suojakaasuna steriiliä typpeä. Lopullinen liuos laitettiin steriileihin 1 ml:n astioihin.
Seuraavat formulaatiot valmistettiin samalla tavalla käyttäen sopivia määriä aineosia, jotta saataisiin halutun koostumuksen lopullinen liuos.
10 b) Erytropoietiini 2000 I.U/ml
Ihmisen rekombinanttierytro-
poietiini (r-HuEPO) 2000 U
Natriumkloridi 5,84 mg
Natriumsitraatti 2 aq 5,8 mg 15 Sitruunahappo 1 aq 62 μg
Hydroks ipropyyli-β-syklo- dekstriini (MS =0,4) 50 mg
Kloorivetyhappo (1 N) tai natrium-hydroksidi (1 N) pH-arvoon 6,9 20 Vesi 1 ml:ksi
c) Erytropoietiini 10 000 I.U/ml Ihmisen rekombinantti erytropoietiini (r-HuEPO) 10 000 U
j Natriumsitraatti 2 aq 5,8 mg 25 Sitruunahappo 1 aq 62 ^g
Hydroksipropyyli-P-syklodekst- *.*** riini (MS = 0,4) 200 mg « · · \ Kloorivetyhappo (1 N) tai natrium- • · « *· *: hydroksidi (1 N) pH-arvoon 6,9 • · « V * 30 Vesi 1 ml:ksi
Esimerkki 2: Silmätipat : ! Ihmisen rekombinantti erytro-
;* * *: poietiini (r-HuEPO) 4000 U
Natriumkloridi 3,59 mg 35 Natriumsitraatti 2 aq 5,8 mg • · • « • φ « v • • · * j im· 1 · * is 105012
Sitruunahappo 1 aq 62 μg
Fenyylielohopea(II)asetaatti 0,02 mg
Hydroksipropyy1i-β-syklodekst- riini (MS = 0,4) 100 mg 5 Kloorivetyhappo (1 N) tai natrium- hydroksidi (1 N) pH-arvoon 6,9
Vesi 1 ml:ksi
Esimerkki 3: Nenäsuihke Ihmisen rekombinantti erytro-10 poietiini (r-HuEPO) 4000 U
Natriumkloridi 3,59 mg
Natriumsitraatti 2 aq 5,8 mg
Sitruunahappo 1 aq 62 ^g
Tiomersaali 0,2 mg 15 Hydroksipropyyli-p-syklodekst- riini (MS = 0,4) 100 mg
Kloorivetyhappo (1 N) tai natrium-hydroksidi (1 N) pH-arvoon 6,9
Vesi 1 ml:ksi 20 B. Biologiset esimerkit
Esimerkki 4
Eri syklodekstriinien stabiloiva vaikutus EPO:iin
Erytropoietiinin rakennekokonaisuutta erilaisten stabilisaattorien kanssa tutkittiin käyttämällä ioninvaih- ^ 25 tokromatograf iän ja polyakryyliamidigeelielekroforeesin yhdistelmää. Erilaisten syklodekstriinijohdannaisten sta- ψ biloivaa vaikutusta verrattiin ihmisen albumiiniin. EPO- ♦ · · ·. *. liuosten (erytropoietiiniliuokset), joita käytettiin tä- • · · *·’· män keksinnön mukaisesti, valmistettiin seuraavasti: • · · • · · *.* * 30 1 mg EPO:a (Amien) laimennettiin 2,6 ml:lla sitruuna- happopuskuria (natriumsitraatti.2 H2O:5,80 g, sitruunahap-po.H20:0,0623 g ja natriumkloridi : 5,84 gl 000 ml:ssa vettä • ja puhdistettiin käänteisosmoosilla ja ultrasuodatuksella.
Puskuri suodatettiin 0,22 μπΐ:η suodattimen läpi) . Tämä 35 EPO:n kantaliuos laimennettiin hydroksipropyyli-P-syklo- • · • · t · · « • · · « • · · · » · 16 105012 dekstriinin (M.S. = 0,4) tai hydroksipropyyli-y-syklo- dekstriinillä (M.S. = 0,4) liuoksella sitruunahappopus-kurissa, kuten edellä on määritelty. Saatu lopullinen syk-lodekstriinien pitoisuus oli 5 ja 20 %, lopullinen EPO-5 pitoisuus oli 33 μg/mll joka vastaa 4 000 U/ml:a. Vertailua varten ihmisen seerumialbumiinin (HSA:n) kanssa stabilisaattorin käytettiin valmiiksi formuloitua EPO:a, joka saatiin Cilag'lta (erä nro 88Z008). Tämän aineen koostumus oli: natriumsitraatti.2 H20:5,8 g, sitruunahap-10 po.H20:0,057 g, natriumkloridi:5,84 mg, ihmisen albumii nia, 5 mg ja 0,0336 g erytropoietiiniä 1 ml:ssa vettä. Vertailuliuos koostuu 0,0336 mg:sta erytropoietiiniä 1 ml:ssa vettä. Erilaisia liuoksia pidettiin lasiastioissa 57 °C:ssa lämpötilakontrolloidussa vesihauteessa. Syklo-15 dekstriinien EPO:a stabiloivaa vaikutusta tutkittiin io-ninvaihtokromatografiällä vertaamalla puhdistetun EPO:n piikin korkeutta ennen inkubointia piikin korkeuteen sen jälkeen, kun oli pidetty 57 °C:ssa 10 vuorokautta ja 3 viikkoa.
20 Käytetty kromatografinen menetelmä oli seuraavan lainen :
Laite: FPLC (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi) Detektointisysteemi: UV absorptio 280 nm-.ssä Pylväs: Mono Q (Pharmacia, Uppsala, Ruotsi) > · 25 500 μ1:η EPO:a sisältävät fraktiot laitettiin Mono f t
Q-pylvääseen (0,5 x 5 cm) huoneenlämpötilassa. Puskuri A
*“1 oli 20 mM Tris (pH 8,0); puskuri B oli 20 mM Tris • · · \ (pH 8,0), joka sisälsi 1 M NaCl: ia. Virtausnopeus oli • « 1
’· " 1 ml/min. Käytettiin portaittaista suolagradienttia. EPO
• · · *.· 1 30 eluoitui 16 minuutin kuluttua, (vastaava NaCl-pitoisuus oli 16 mM).
: ί Tämä tekniikka osoitti EPO:n täydellisen erottumi- »«· sen joko seerumialbumiinista tai syklodekstriinistä elek- • » · troforeesin avulla todettuna. EPO-fraktion piikin korkeus 35 mitattiin. Proteiinifraktioiden puhtaus ja homogeenisuus- • * · · • · · « · 17 105012 fraktioista, jotka eluoituivat 16 nm NaCl:lla kontrolloitiin polyakryyliamidigeelielektroforeesin avulla. Elektroforeesi suoritettiin seuraavasti.
Erä EPO:a sisältävää fraktiota pelkistettiin se-5 koittamalla näytepuskurin kanssa (0,167 M Tris, 33 % glyserolia, 3,3 % natriumdodekyylisulfaattia, 4 % ditiotrei-tolia; 0,005 % bromifenolisinistä, pH 6,8) ja inkuboitiin 100 °C:ssa 5 minuuttia, 15 μΐ näytettä laitettiin 10 %:i-selle natriumdodekyylisulfaattipolyakryyliamidigeeliin. 10 Elektroforeesi suoritettiin käyttämällä elektroforeesipus-kuria (0,38 M glyseriini/Tris pH 8,3, 0,1 % natriumdode kyylisulfaattia) 90 minuuttia 150 voltin jännitteellä julkaisussa Laemmli, U. , (1970) Nature (Lontoo) 227, 680 - 685, kuvatun menetelmän mukaisesti.
15 Sen jälkeen geeli hopeavärjättiin käyttäen menetelmää, joka on kuvattu julkaisussa Morrissey J.H., (1981)
Anal. Biochem. 117, 307- 310. Elektroforeettinen koe osoitti selvästi, että EPO-fraktio oli homogeeninen, kun käytettiin syklodekstriinijohdannaisia stabiilisaattorina. 20 EPO-fraktiossa, jossa käytettiin ihmisen albumiinia sta biilisaattorina, osoitettiin suuren moolimassan omaavien proteiinien läsnäolo, ja EP0:n prosentuaalinen osuus oli alhainen verrattuna läsnäolleisiin hajoamistuotteisiin.
.' Hajoamistuotteet olivat peräisin todennäköisimmin 25 albumiinista. Tämä voi selittää, miksi EPO-fraktion piikin korkeus käytettäessä ihmisen albumiinia stabilisaattorina oli suurempi 3 viikon kuluttua kuin alussa. Tämä viittaa • · « ’m \ myös siihen, että täytyi käyttää ioninvaihtokromatografia- • · · *· '· tekniikkaa yhdessä elektroforeesitekniikan kanssa, jotta • · · ·.· 1 30 EP0:n stabilisaatio voidaan määrittää.
Taulukossa 1 on esitetään yhteenveto kokeiden tu-: loksista.
• · · • « « : · · • · • · · ♦ · · • « · • · # · • 0 · • · • » 0 0· 0 0 0 0 0 0 0 0 0 • 0 ι8 105012
Taulukko 1 Käytetty EPO-piikin EPO-piikin Jäljel- EPO-pii- Jäl- suoja korkeus (cm) korkeus (cm) lä ole- kin kor- . jellä ennen inku- 10 vuorokau- va EPO keus (cm) oleva bointia den jälkeen (%) 20 päi- EPO (%) 5 _ vän jälk.
(Kontrolli 11,9 6,0 50% 2,9 24% HSA0.25% 10,6 6,4/5,1 (1) 48% 10,7/3,2 (1) 30% HP-B-CD 5% 11,5 5,4 47 % 6,3 55% HP-B-CD 20% 11,5 13,4 100% 7,1 62% 10 ΗΡ-γ-CD 5% 11,2 5,1 46% 3,2 29 % ΗΡ-γ-CD 20% 12,5 9,7 78 % 4,5 36% (1) Ihmisen seerumialbumiinia sisältävän formulaation EPO-piikkien korkeudet ennen ja jälkeen korjauksen, joka pe-15 rustuu EPO-pitoisuuden elektroforeettiseen arviointiin.
Esimerkki 5
Eri syklodekstriinipitoisuuksien stabiloivat vaikutukset EPO:iin.
Toisessa kokeessa tutkittiin erilaisten hydroksi-20 propyyli-P-syklodekstriinipitoisuuksien stabiloiva vaiku tus käyttäen samaa menettelyä. Elektroforeettiset tulokset osoittivat, että kun käytettiin hydroksipropyyli-P-syklo-dekstriiniä stabilisaattorina, fraktio, joka eluoitui 16 mM NaCl:lla, koostui puhtaasta EPO:sta, mitään hajo-J 25 amistuotteita ei voitu osoittaa. EPO-fraktiolla, jossa .·. käytettiin ihmisen seerumialbumiinia stabilaattorina, * osoitettiin taas suurin moolimassan omaavien hajoamistuot- ♦ · · • ♦ *,teiden läsnäolo. Tuloksista on esitetty yhteenveto taulu-• · · *· 1· kossa 2 .
• •I
• 1 · • · · * • « · • ♦ • · • · · • « 1 « « • « • « · • · 1
• » I
• · « · » · · · • · m »
Ml • • · · • » · · 19 105012
Taulukko 2 Käytetty EPO-piikin EPO-piikin Jäljel- EPO-pii- Jäl- suoja korkeus (cm) korkeus (cm) lä ole- kin kor- jellä ennen Inku- 7- vuorokau- va EPO keus (cm) oleva bointia den jälkeen (%) 18- päi- EPO (%) 5 vän jälk.
Kontrolli Π,Ι 3>3 30 % 4,2 38% HSA 10,5 9,5/3,8 (*) 36% 9,0/0,5 0 5% ΗΡ-β-CD 5% 12,8 6,4 50% 5,5 43% 0 ΗΡ-β-CD 10% 12,1 6,9 57% 6,8 56% ΗΡ-β-CD 15% 12,7 6,8 54% 6,4 50% ΗΡ-β-CD 20% 11,4 7,0 61 % 4,8 42% (*) Ihmisen seerumialbumiinia sisältävän formulaation EPO-piikkien korkeus ennen ja jälkeen korjauksen, joka perus-15 tui EPO-pitoisuuden elektroforeettiseen arviointiin.
Näiden kokeiden yhteenvetona voimme lopuksi todeta, että syklodekstriinijohdannaiset suojaavat EPO:aa hajoamiselta. Suoja, joka saatiin syklodekstriineillä oli parempi 20 kuin suoja, joka saatiin ihmisen seerumialbumiinilla ainakin käytetyissä koeolosuhteissa.
Esimerkki 6 EPO:n adsorptio muovimateriaaliin syklodekstriinin ,·, : läsnäollessa « · · t!..' 25 Tässä kokeessa käytetty EPO-liuos valmistettiin • · seuraavasti: 1 mg EPO:a (Amien) laimennettiin 2,6 ml :11a • i •“I sitruunahappopuskuria (natriumsitraatti.2 H20: 5,80 g, • · t : ·* sitruunahappo .H20: 0,0623 g ja natriumkloridi: 5,84 g :.''ί 1 000 ml:ssa vettä; puhdistettu käänteisosmoosilla ja uit- • · · V ; 30 rasuodatuksella. Puskuri suodatettiin 0,22 μπΐ:η suodat timen läpi) . Tämä EPO:n kantaliuos laimennettiin liuoksella*: la, jonka muodosti hydroksipropyyli-β-syklodekstriini • · · , .·*· edellä kuvatussa sitruunahappopuskurissa. Lopullinen « · · hydroksipropyyli-β-syklodekstriinipitoisuus oli 10 tai * · · : ·’ 35 20 %. Lopullinen EPO-pitoisuus oli 33 μg/ml. Siinä tapauk- * · • · • · · » » • » · f · · i « • f · » I » · 2o 105012 sessa, että käytettiin ihmisen albumiinia kantajana, käytettiin EPO Cilag erää nro 89121/443 vertailuna.
1 ml eri EPO-liuoksia injektoitiin infuusiosarjaan (Universal set 315 c0339 Travenolilta) ja annettiin olla 5 yön yli 4 °C:ssa. Talteenoton jälkeen suoritettiin edellä kuvatut kromatografiset elektroforeettiset menettelyt. Mitattiin 16 mM NaCl:lla eluoidun proteiinifraktion piikin korkeus.
Taulukossa 3 on esitettu yhteenvetona tulokset. 10 Arvot ovat kahdessa eri kokeessa saatuja tuloksia.
Taulukko 3 Käytetty EPO-piikin EPO-piikin Adsorboitu-
suoja korkeus (cm) korkeus (cm) maton EPO
ennen adsorp- adsorption tiota jälkeen % 15 Γ Ί -----"
Koe 12 12 12
Vertailu g^ g^ 3f5 4,0 36,5 % 43,5 % HSA 9,8 5,7 8,4 5,3 85,7 % 93,0% 20 ΗΡ-β-CD 10% 11,4 13,4 11,3 10,2 99,1 % 76,1% ΗΡ-β-CD 20% 12,9 10,4 12,4 11,2 96,1 % 107,6%
Kaikkien tutkittujen näytteiden elektroforeettiset ,·, : tulokset osoittivat, että fraktio, joka eluoitui 16 mM
I f I
25 NaCl:lla, koostui puhtaasta EPO:sta, mitään hajoamistuot- < teitä ei pystytty osoittamaan.
·*·* Näiden kokeiden perusteella voimme lopuksi todeta, * * * • ·* että hydroksipropyyli-P-syklodekstriini estää EPO:n ad- *. *ί sorbtiota muovimateriaaliin, jota käytettiin infuusiosar-
IM
V* 30 joissa, yhtä hyvin kuin ihmisen seerumialbumiini.
Esimerkki 7
Erytropoietiinin hiiribioanalyysi ·"*; Ekshypoksista polysyteemistä hiiribioanalyysiä käy- 4 · » tetään r-HuEPO:n biologisen aktiivisuuden toteamiseen.
• · · ·_)’ 35 Tässä kokeessa hiiret sopeutettiin alennettuun ilmanpai- » · • · tl* « I » ·
• · * I
• r * > I « * 2i 105012 neeseen (noin 0,4 atm) kahdeksi viikoksi, punaisten verisolujen muodostumisen indusoimiseksi vasteessa luonnolliselle fysiologiselle erytropoietiinin tuotannolle. Kun hiiret palautetaan normaaleihin ilmanpaineolosuhteisiin, 5 korkea lisääntyneiden sirkulatoristen punasolujen hapen- kantokapasiteetti tukahduttaa muun endogeenisen erytropoietiinin tuotannon. Näissä olosuhteissa eläin reagoi pu-nasolumuodostuksen lisäinduktiolla eksogeenisesti käytettyyn erytropoietiiniin annosriippuvaisella tavalla. Uuden 10 punasolutuotannon määrittäminen toteutetaan mittaamalla radioaktiivisen raudan (59Fe) ottokyky. Annos-vastekäyriä, jotka on saatu näyte-r-HuEPO-(ihmisen rekombinanttierytro-poietiini-) koesyklodekstriinivalmisteilla, verrataan r-HuEPO -standardilla saatuun annos-vastekäyrään näytteen 15 aktiivisuuden määrittämiseksi.
Esimerkki 8
Vertailukoe
Erytropoietiinin biosaatavuus, kun erytropoietiini oli annettu ihonalaisesti hydroksipropyyli-P-syklodekst-20 riiniformulaatiossa, verrattuna formulaatioihin, joissa käytettiin ihmisen seerumialbumiinia terveissä vapaaehtoisissa tutkittiin seuraavissa kokeissa: ; Kuudelle vapaaehtoiselle terveelle miehelle, I 1 ( !./ joiden ikä vaihteli välillä 30 - 40 (keskiarvo 32) vuotta, 25 ruumiinpainot välillä 69 - 80 (keskiarvo 75) kg, annet- ”·1 tiin ihonalaisesti yläkäsivarteen 1 ml EPO-liuosta • « · • ·’ (4 000 I.U./ml) satunnais-cross-over -mallin mukaisesti.
• ·
Kahden kokeen välillä oli neljän viikon tauko. Kaksi EPO- • · · ·/· · formulaatiota olivat • · 1 - · · • · «·· #♦· • · • r · 1 · 1 « · t • · · · · 9 *99 *999 9 9 9 22 1 0 5 0 1 2 A: markkinoilla oleva liuos, jossa oli 4 000 I.U./ml (EprexR, Cilag; Erä no. 89128/385) r-HuEPO 4 000 I.U.
5 ihmisen seerumialbumiini 2,5 mg natriumkloridi 5,84 mg natriumsitraatti.2H20 5,8 mg sitruunahappo 0,057 mg vesi injektiota varten 1 ml 10 B: Liuos, jossa oli 4 000 I.U./ml, joka sisälsi 10 % hydroksipropyyli-p-syklodekstriiniä r-HuEPO 4 000 I.U.
15 natriumkloridi 3,59 mg natriumsitraatti.2H20 5,8 mg sitruunahappo 0,057 mg hydroks ipropyy1i-β-syklo- dekstriini (M.S.=0,4) 100 mg 20 vesi injektiota varten 1 ml
Laskimoverinäytteet (4 ml) EP0:n määrittämistä var- ,·, ; ten otettiin juuri ennen antamista ja 2, 4, 6, 8, 10, 12, < ' ' 24, 32, 48, 56, 72 ja 96 tunnin kuluttua antamisesta ja 25 annettiin hyytyä huoneenlämpötilassa. Ensimmäisen 12 tun- •••j nin aikana näytteet otettiin toisesta käsivarresta. Ero- * * · : .* tettua seerumia säilytettiin -20 °C:ssa määrittämiseen · asti.
• * · i.i ί EP0:n plasmapitoisuudet mitattiin entsyymi-immuno- 30 analyysilla (EIA:lla) 5 mU/ml.-n detektiorajalla enintään 96 tuntia lääkkeen antamisen jälkeen julkaisussa Clinigen • · .···. erythropoetin EIA Kit 96 - tests (nro ABC06096) User's
Ml f manual, esitettyjen menetelmien mukaisesti.
· · : Määritettiin seuraavat EPO:n farmakokineettiset • · · 35 parametrit: * • · ·
IMI
23 1 0 5 0 1 2 - piikkiplasmapitoisuus (C^imU/ml) - piikkiplasmapitoisuuteen kulunut aika (T^ih) - plasmapitoisuus-aikakäyrän alle jäävä pinta-ala (AUC0.9fih: mU. h/ml) 5 - hydroksipropyyli-P-syklodekstriiniformulaation suhteel linen biosaatavuus verrattuna merkittyyn formulaatioon, se on so. AUC0.96h suhde x 100 (Frel:%)
Edellä mainittujen parametriarvojen eroilla kahden formulaation välillä ei ole tilastollista merkitystä.
10 EPO:n vertailubiosaatavuus S.C. antamisen jälkeen
Parametri A (Eprex®; Cilag) B (10% ΗΡ-β-CD)
Tmax:h 16,3 + 8,5 19,7 ±11,0 15 Cmax: mU/ml 33,4 ± 7,5 30,8 + 9,9 AUQ).96h : mU.h/ml 1864 ± 548 1753 ± 428
Frel· % 96,4 + 14.5 20 Erytropoietiini absorboitui hitaasti sekä markki noilla olevan formulaation (EprexR) ihonalaisen antamisen jälkeen että vasta kehitetyn hydroksipropyyli-P-syklo-dekstriiniformulaation ihonalaisen antamisen jälkeen. Noin i « « 10-24 tunnin kuluttua kummankin formulaation antamisen
III
25 jälkeen havaittiin suunnilleen 30 mU/ml :n lähipiikki plas-matasot. Hydroksipropyyli-P-syklodekstriiniformulaation :1·: suhteellinen biosaatavuus merkityn formulaation suhteelli- seen biosaatavuuteen nähden oli 96 %. Lopuksi voidaan to- • « deta, että molemmat formulaatiot ovat bioekvivalentteja 30 adsorptionopeuden ja adsorption määrän suhteen.
Injektiokohdan ärsytys todettiin ennen jokaista • · antamista ja 2, 4 ja 24 tuntia jokaisen antamisen jälkeen.
t · . ';· Turvotusta, punoitusta, kutinaa tai kipua ei havaittu yh- : ' delläkään vapaaehtoisella missään vaiheessa koko tutkimuk-
• M
v · « · • · · • · · • · # 1 · « 105012 sen aikana. Molemmat formulaatiot ovat siten yhtä hyvin siedettyjä.
Mitään kliinisesti tärkeitä muutoksia ei havaittu hematologiassa tai seerumibiokemiassa. EPO:n antaminen 5 ihonalaisesti ei myöskään vaikuttanut verenpaineeseen eikä sydämen lyöntitiheyteen.
• · • i > « » * f « I I i • Il « • · · · • · · I I · • · I « • · I I « • # · « ·
III
• · 9 I I » • m • · » · · · III • · • · «Il , « I · a I I · « a I I a * · • a • I a • « · a « I · a a
Claims (10)
1. Menetelmä farmaseuttisen koostumuksen vas-muistamiseksi, joka käsittää erytropoietiinin ja β- tai γ-5 syklodekstriihin vesiliuoksen, jossa syklodekstriini on β-tai γ-syklodekstriinieetteri tai sekaeetteri, jossa yhden tai useamman syklodekstriinihydroksiryhmän vety on korvattu hydroksietyyli-, hydroksipropyyli- tai hydroksi-isobutyy-liryhmällä, ja jossa keskimääräinen moolisubstituutio 10 (M.S.) on välillä 0,3 - 0,8, tunnettu siitä, että erytropoietiini sekoitetaan perusteellisesti syklodekst-riinin vesiliuoksen kanssa ja ennen mainittua sekoittamista, sen aikana tai sen jälkeen mahdollisesti lisätään muita farmaseuttisesti hyväksyttäviä aineosia.
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tun nettu siitä, että syklodekstriinin ja erytropoietiinin massa/massasuhde on 7 500:1 - 700:1.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että syklodekstriinin pitoisuus on vä-
20 Iillä 2,5 - 20 paino-%, lopun ollessa vettä, erytro-poietiiniä ja mahdollisia täyteaineita.
4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, t u n-n e t t u siitä, että valmistetaan injektoitava koostumus, I · joka lisäksi käsittää isotonointiainetta. » I "! 25
5. Patenttivaatimuksen 3 tai 4 mukainen menetelmä, M» tunnettu siitä, että valmistetaan moniannos- • · I • ** koostumus, joka lisäksi käsittää säilöntäainetta. * * ' -* i <
6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, t u n- • · · *.· * n e t t u siitä, että valmistetaan moniannoskoostumus, 30 joka on formuloitu nenäsuihkeeksi.
·:*'*: 7. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, t u n- • · · n e t t u siitä, että valmistetaan moniannoskoostumus, : joka on formuloitu silmätipoiksi. i » * tt;
8. Jonkin patenttivaatimuksista 1-7 mukainen me- • · ’··’ 35 netelmä, tunnettu siitä, että erytropoietiini I · • • « · f t * 105012 liuotetaan syklodekstriinin vesiliuokseen, joka käsittää puskurisysteemiä, pH:n säätöainetta ja isotonointiainetta, minkä jälkeen näin saatu liuos mahdollisesti kylmäkuivataan tai suihkukuivataan.
9. Menetelmä erytropoietiinin samanaikaisesti sta- biloimiseksi vesiliuoksessa ja sen estämiseksi adsorboitumasta pinnoille, tunnettu siitä, että mainittu erytropoietiini formuloidaan tehokkaalla määrällä β- tai γ-syklodekstriiniä, jossa syklodekstriini on β- tai γ-10 syklodekstriinieetteri tai sekaeetteri, jossa yhden tai useamman syklodekstriinihydroksiryhmän vety on korvattu hydroksietyyli-, hydroksipropyyli- tai hydroksi-isobutyy-liryhmällä, ja jossa keskimääräinen moolisubstituutio (M.S.) on välillä 0,3 - 0,8.
10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että syklodekstriinin ja erytropoietiinin massa/massasuhde on 7 500:1 - 700:1. • « « « I • * · « » « ♦ MM ·« · • * « • ♦ • · * ♦ ♦ · · • ·· • · • # · ♦ · ♦ • · · • »I • · • · • · · ·♦· • · • · I I ( • | I < f 4 « • « • · • · · • » « · • · · « · M » « « · 105012
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB909001987A GB9001987D0 (en) | 1990-01-29 | 1990-01-29 | Improved cyclodextrin based erythropietin formulation |
| GB9001987 | 1990-01-29 | ||
| PCT/EP1991/000173 WO1991011200A1 (en) | 1990-01-29 | 1991-01-25 | Improved cyclodextrin based erythropoietin formulation |
| EP9100173 | 1991-01-25 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI923402A FI923402A (fi) | 1992-07-28 |
| FI923402A0 FI923402A0 (fi) | 1992-07-28 |
| FI105012B true FI105012B (fi) | 2000-05-31 |
Family
ID=10670074
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI923402A FI105012B (fi) | 1990-01-29 | 1992-07-28 | Menetelmä syklodekstriinipohjaisen erytropoietiiniformulaation valmistamiseksi |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5376632A (fi) |
| EP (1) | EP0513072B1 (fi) |
| JP (1) | JP2997052B2 (fi) |
| KR (1) | KR0183445B1 (fi) |
| AT (1) | ATE107518T1 (fi) |
| AU (1) | AU648061B2 (fi) |
| CA (1) | CA2074820C (fi) |
| DE (1) | DE69102627T2 (fi) |
| DK (1) | DK0513072T3 (fi) |
| ES (1) | ES2059115T3 (fi) |
| FI (1) | FI105012B (fi) |
| GB (1) | GB9001987D0 (fi) |
| HU (1) | HU218213B (fi) |
| IE (1) | IE65209B1 (fi) |
| IL (1) | IL97019A (fi) |
| NO (1) | NO304728B1 (fi) |
| NZ (1) | NZ236938A (fi) |
| PT (1) | PT96593B (fi) |
| WO (1) | WO1991011200A1 (fi) |
| ZA (1) | ZA91620B (fi) |
Families Citing this family (30)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4126984A1 (de) * | 1991-08-15 | 1993-02-18 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur herstellung von humanprotein-enthaltenden, gut vertraeglichen arzneimitteln fuer infusions- oder injektionszwecke |
| US5661125A (en) * | 1992-08-06 | 1997-08-26 | Amgen, Inc. | Stable and preserved erythropoietin compositions |
| US5494901A (en) * | 1993-01-05 | 1996-02-27 | Javitt; Jonathan C. | Topical compositions for the eye comprising a β-cyclodextrin derivative and a therapeutic agent |
| IL116085A (en) * | 1994-12-16 | 1999-12-31 | Ortho Pharma Corp | Spray dried erythropoietin |
| DE19539574A1 (de) * | 1995-10-25 | 1997-04-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Zubereitungen und Verfahren zur Stabilisierung biologischer Materialien mittels Trocknungsverfahren ohne Einfrieren |
| JP2000509374A (ja) | 1996-04-19 | 2000-07-25 | アルファ セラピュティック コーポレイション | 凍結乾燥した血液タンパク質のウイルス不活性化方法 |
| US5754937A (en) | 1996-05-15 | 1998-05-19 | Stackpole Limited | Hi-density forming process |
| DK0977582T3 (da) * | 1997-03-18 | 2002-12-16 | Roche Diagnostics Gmbh | Farmaceutiske kombinationspræparater, der indeholder erythropoietin og jernpræparater |
| US6683100B2 (en) | 1999-01-19 | 2004-01-27 | Novartis Ag | Organic compounds |
| US6194181B1 (en) | 1998-02-19 | 2001-02-27 | Novartis Ag | Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics |
| JP2002523475A (ja) | 1998-09-02 | 2002-07-30 | アラーガン・セイルズ・インコーポレイテッド | 防腐したシクロデキストリン含有組成物 |
| US20040152664A1 (en) * | 1998-09-02 | 2004-08-05 | Allergan, Inc. | Prednisolone compositions |
| ATE401908T1 (de) * | 1999-04-09 | 2008-08-15 | Ortho Mcneil Pharm Inc | Pharmazeutische zusammensetzungen von erythropoietin |
| US20040038878A1 (en) * | 2000-08-04 | 2004-02-26 | Masahiko Tanikawa | Injectable protein formulations |
| US20060235366A1 (en) * | 2000-12-20 | 2006-10-19 | Fox Hollow Technologies, Inc. | Method of evaluating a treatment for vascular disease |
| US20020146409A1 (en) * | 2001-01-30 | 2002-10-10 | Herring Steven W. | Methods for stabilizing lyophilized blood proteins |
| JPWO2003006052A1 (ja) * | 2001-07-09 | 2005-02-17 | 山之内製薬株式会社 | 徐放性注射剤用組成物およびその製造方法 |
| DE10228049A1 (de) | 2002-06-24 | 2004-01-15 | Merck Patent Gmbh | Flüssige Zubereitung enthaltend Oligopeptide |
| US7459435B2 (en) * | 2002-08-29 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| US7459436B2 (en) * | 2002-11-22 | 2008-12-02 | Hoffmann-La Roche Inc. | Treatment of disturbances of iron distribution |
| KR100610003B1 (ko) | 2003-06-10 | 2006-08-08 | 주식회사 엘지생명과학 | 혈청 알부민을 함유하지 않는 안정한 인 에리쓰로포이에틴용액 제형 |
| EP1537876A1 (en) * | 2003-12-01 | 2005-06-08 | BioGeneriX AG | Erythropoietin solution formulation |
| US7772182B2 (en) * | 2004-08-05 | 2010-08-10 | Alza Corporation | Stable suspension formulations of erythropoietin receptor agonists |
| US20110236902A1 (en) * | 2004-12-13 | 2011-09-29 | Tyco Healthcare Group Lp | Testing a patient population having a cardiovascular condition for drug efficacy |
| US7794413B2 (en) * | 2005-04-19 | 2010-09-14 | Ev3, Inc. | Libraries and data structures of materials removed by debulking catheters |
| CU23317A1 (es) * | 2005-07-22 | 2008-10-22 | Ct De Investigacia N Y Desarro | Formulaciones nasales de eporh con bajo contenido de ã cido siã lico para el tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central |
| BRPI0717460A2 (pt) | 2006-10-20 | 2013-12-24 | Icos Corp | Composições de inibidores de chk1 |
| DK2590666T3 (en) * | 2010-07-06 | 2017-07-17 | Augustinus Bader | TOPICAL APPLICATION OF ERYTHROPOIETIN FOR USE IN THE TREATMENT OF DAMAGE OF THE CORNS |
| US10328152B2 (en) | 2011-06-16 | 2019-06-25 | Nayan Patel | Method for stabilization and delivery of therapeutic molecules |
| US11583584B1 (en) * | 2015-10-28 | 2023-02-21 | Coherus Biosciences, Inc. | Stable protein compositions and methods of their use |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3346123A1 (de) * | 1983-12-21 | 1985-06-27 | Janssen Pharmaceutica, N.V., Beerse | Pharmazeutische praeparate von in wasser schwerloeslichen oder instabilen arzneistoffen und verfahren zu ihrer herstellung |
| JPS60258125A (ja) * | 1984-06-06 | 1985-12-20 | Hayashibara Biochem Lab Inc | 蛋白性生理活性物質を含有する水溶性乾燥物 |
| JPS6191131A (ja) * | 1984-10-09 | 1986-05-09 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 医薬品の吸着防止方法および組成物 |
| JPS6197229A (ja) * | 1984-10-18 | 1986-05-15 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 安定なエリトロポエチン製剤 |
| US4920214A (en) * | 1986-04-16 | 1990-04-24 | American Maize-Products Company | Process for producing modified cyclodextrins |
| PT88490B (pt) * | 1987-09-14 | 1992-11-30 | Novo Nordisk As | Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas para libertacao nao-enterica trans-mucosa contendo monossacaridos ou oligossacaridos |
| US5002935A (en) * | 1987-12-30 | 1991-03-26 | University Of Florida | Improvements in redox systems for brain-targeted drug delivery |
| US5997856A (en) * | 1988-10-05 | 1999-12-07 | Chiron Corporation | Method and compositions for solubilization and stabilization of polypeptides, especially proteins |
| US5068227A (en) * | 1989-01-18 | 1991-11-26 | Cyclex, Inc. | Cyclodextrins as carriers |
-
1990
- 1990-01-29 GB GB909001987A patent/GB9001987D0/en active Pending
-
1991
- 1991-01-24 IL IL97019A patent/IL97019A/xx active IP Right Grant
- 1991-01-25 AT AT91902955T patent/ATE107518T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-01-25 HU HU9202432A patent/HU218213B/hu unknown
- 1991-01-25 CA CA002074820A patent/CA2074820C/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-25 AU AU71497/91A patent/AU648061B2/en not_active Ceased
- 1991-01-25 ES ES91902955T patent/ES2059115T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-01-25 JP JP3503095A patent/JP2997052B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-01-25 EP EP91902955A patent/EP0513072B1/en not_active Revoked
- 1991-01-25 DE DE69102627T patent/DE69102627T2/de not_active Revoked
- 1991-01-25 DK DK91902955.3T patent/DK0513072T3/da active
- 1991-01-25 WO PCT/EP1991/000173 patent/WO1991011200A1/en not_active Application Discontinuation
- 1991-01-28 ZA ZA91620A patent/ZA91620B/xx unknown
- 1991-01-28 IE IE28691A patent/IE65209B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-01-29 NZ NZ236938A patent/NZ236938A/en unknown
- 1991-01-29 PT PT96593A patent/PT96593B/pt not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-06-30 US US07/906,780 patent/US5376632A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-24 KR KR1019920701755A patent/KR0183445B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1992-07-28 FI FI923402A patent/FI105012B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-07-29 NO NO922990A patent/NO304728B1/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU9202432D0 (en) | 1992-10-28 |
| HUT62198A (en) | 1993-04-28 |
| NO304728B1 (no) | 1999-02-08 |
| DE69102627D1 (de) | 1994-07-28 |
| FI923402A (fi) | 1992-07-28 |
| IE910286A1 (en) | 1991-07-31 |
| NO922990D0 (no) | 1992-07-29 |
| NO922990L (no) | 1992-07-29 |
| JP2997052B2 (ja) | 2000-01-11 |
| PT96593A (pt) | 1991-10-15 |
| US5376632A (en) | 1994-12-27 |
| NZ236938A (en) | 1992-07-28 |
| EP0513072B1 (en) | 1994-06-22 |
| IL97019A (en) | 1997-07-13 |
| IL97019A0 (en) | 1992-03-29 |
| CA2074820C (en) | 2003-10-14 |
| AU648061B2 (en) | 1994-04-14 |
| DK0513072T3 (da) | 1994-08-01 |
| GB9001987D0 (en) | 1990-03-28 |
| ES2059115T3 (es) | 1994-11-01 |
| HU218213B (hu) | 2000-06-28 |
| EP0513072A1 (en) | 1992-11-19 |
| JPH05503700A (ja) | 1993-06-17 |
| KR0183445B1 (en) | 1999-05-01 |
| ZA91620B (en) | 1992-10-28 |
| WO1991011200A1 (en) | 1991-08-08 |
| CA2074820A1 (en) | 1991-07-30 |
| ATE107518T1 (de) | 1994-07-15 |
| PT96593B (pt) | 2001-06-29 |
| IE65209B1 (en) | 1995-10-04 |
| AU7149791A (en) | 1991-08-21 |
| DE69102627T2 (de) | 1994-11-03 |
| FI923402A0 (fi) | 1992-07-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI105012B (fi) | Menetelmä syklodekstriinipohjaisen erytropoietiiniformulaation valmistamiseksi | |
| Brewster et al. | Use of 2-hydroxypropyl-β-cyclodextrin as a solubilizing and stabilizing excipient for protein drugs | |
| Irie et al. | Hydroxypropylcyclodextrins in parenteral use. I: Lipid dissolution and effects on lipid transfers in vitro | |
| JP6444548B2 (ja) | スルホアルキルエーテルシクロデキストリン組成物 | |
| US10323103B2 (en) | Alkylated cyclodextrin compositions and processes for preparing and using the same | |
| EP1501496B1 (en) | Formulations containing amiodarone and sulfoalkyl ether cyclodextrin | |
| US20030055023A1 (en) | Formulations containing etomidate and a sulfoalkyl ether cyclodextrin | |
| RU2322254C2 (ru) | Жидкий препарат, содержащий олигопептиды и этерифицированный циклодекстрин | |
| JP2015535014A (ja) | アルキル化シクロデキストリン組成物ならびにその調製方法および使用方法 | |
| JPH07316065A (ja) | Ｆｒ９０１４６９物質製剤 | |
| US20230357451A1 (en) | Alkylated cyclodextrin compositions and processes for preparing and using the same | |
| JPH0129482B2 (fi) | ||
| JPS6131121B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired |