HU211885A9 - Cd 25 binding molecules - Google Patents
Cd 25 binding molecules Download PDFInfo
- Publication number
- HU211885A9 HU211885A9 HU95P/P00213P HU9500213P HU211885A9 HU 211885 A9 HU211885 A9 HU 211885A9 HU 9500213 P HU9500213 P HU 9500213P HU 211885 A9 HU211885 A9 HU 211885A9
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- amino acid
- ser
- acid sequence
- tyr
- binding molecule
- Prior art date
Links
- 230000027455 binding Effects 0.000 title claims abstract description 91
- 238000009739 binding Methods 0.000 title claims abstract description 91
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 31
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 7
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 26
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 93
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 claims description 68
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 claims description 68
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 claims description 68
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 61
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 60
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 51
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 47
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 47
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 47
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 31
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 21
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 21
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 20
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 18
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 claims description 14
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 claims description 14
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 13
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims description 12
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 claims description 12
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims description 11
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 10
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 claims description 8
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 claims description 8
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 claims description 8
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 claims description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 4
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 claims description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 claims description 3
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 claims description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 claims description 3
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 3
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 claims description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 claims 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 abstract description 17
- 108010032774 Interleukin-2 Receptor alpha Subunit Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000007351 Interleukin-2 Receptor alpha Subunit Human genes 0.000 abstract description 8
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 abstract description 5
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract description 5
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 description 27
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 16
- 101150100035 MTX1 gene Proteins 0.000 description 12
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 12
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 11
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 11
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 11
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 11
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 4
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000007799 mixed lymphocyte reaction assay Methods 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 2
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 2
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 229940112129 campath Drugs 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IPDRTIBDOPMMIQ-VAOFZXAKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-methyloxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@]1(C)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IPDRTIBDOPMMIQ-VAOFZXAKSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N Arg-Pro Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O LQJAALCCPOTJGB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JYHIVHINLJUIEG-BVSLBCMMSA-N Arg-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JYHIVHINLJUIEG-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- UPAGTDJAORYMEC-VHWLVUOQSA-N Asn-Trp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N UPAGTDJAORYMEC-VHWLVUOQSA-N 0.000 description 1
- KOWYNSKRPUWSFG-IHPCNDPISA-N Asp-Phe-Trp Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N KOWYNSKRPUWSFG-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N Asp-Thr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O GCACQYDBDHRVGE-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100094922 Caenorhabditis elegans rft-2 gene Proteins 0.000 description 1
- WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N Cys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CS WXOFKRKAHJQKLT-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BCFXQBXXDSEHRS-FXQIFTODSA-N Cys-Ser-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O BCFXQBXXDSEHRS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N Glu-Asp Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O FYYSIASRLDJUNP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N Gly-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN UQJNXZSSGQIPIQ-FBCQKBJTSA-N 0.000 description 1
- DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN DKEXFJVMVGETOO-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN IKAIKUBBJHFNBZ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 DNAZKGFYFRGZIH-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 description 1
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 description 1
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 description 1
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 description 1
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 description 1
- 101100402621 Homo sapiens MSANTD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108010073816 IgE Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009438 IgE Receptors Human genes 0.000 description 1
- FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N Ile-Phe-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N FGBRXCZYVRFNKQ-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100022949 Immunoglobulin kappa variable 2-29 Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N L-prolylglycine Chemical compound [O-]C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 RNKSNIBMTUYWSH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XXXXOVFBXRERQL-ULQDDVLXSA-N Leu-Pro-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XXXXOVFBXRERQL-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- SVBJIZVVYJYGLA-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SVBJIZVVYJYGLA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N Leu-Thr-His Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O FGZVGOAAROXFAB-IXOXFDKPSA-N 0.000 description 1
- LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N Leu-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O LJBVRCDPWOJOEK-PPCPHDFISA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- ZJSZPXISKMDJKQ-JYJNAYRXSA-N Lys-Phe-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZJSZPXISKMDJKQ-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- XOMXAVJBLRROMC-IHRRRGAJSA-N Met-Asp-Phe Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XOMXAVJBLRROMC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N Met-Glu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ADHNYKZHPOEULM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-Leu Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SJDQOYTYNGZZJX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N Met-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WEDDFMCSUNNZJR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 102100031642 Myb/SANT-like DNA-binding domain-containing protein 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N Phe-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 YTILBRIUASDGBL-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N Pro-Lys-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 JUJCUYWRJMFJJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- GZBKRJVCRMZAST-XKBZYTNZSA-N Ser-Glu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GZBKRJVCRMZAST-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N Ser-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O WOUIMBGNEUWXQG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N Ser-Pro-Gly Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RHAPJNVNWDBFQI-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N Ser-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XZKQVQKUZMAADP-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N Ser-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JCLAFVNDBJMLBC-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- AABIBDJHSKIMJK-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O AABIBDJHSKIMJK-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N Ser-Ser-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OLKICIBQRVSQMA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO LDEBVRIURYMKQS-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- YXGCIEUDOHILKR-IHRRRGAJSA-N Ser-Tyr-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CO)N YXGCIEUDOHILKR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N Ser-Tyr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VVKVHAOOUGNDPJ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 102100036865 Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710102466 Solute carrier family 52, riboflavin transporter, member 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- KPNSNVTUVKSBFL-ZJDVBMNYSA-N Thr-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N)O KPNSNVTUVKSBFL-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O GXDLGHLJTHMDII-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N Thr-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BBPCSGKKPJUYRB-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 1
- PITVQFJBUFDJDD-XEGUGMAKSA-N Trp-Ile Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)=CNC2=C1 PITVQFJBUFDJDD-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N Trp-Ile-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 KIMOCKLJBXHFIN-YLVFBTJISA-N 0.000 description 1
- WNZRNOGHEONFMS-PXDAIIFMSA-N Trp-Ile-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O WNZRNOGHEONFMS-PXDAIIFMSA-N 0.000 description 1
- TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N Trp-Tyr Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N Tyr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 JAQGKXUEKGKTKX-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- TYGHOWWWMTWVKM-HJOGWXRNSA-N Tyr-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYGHOWWWMTWVKM-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 108010060035 arginylproline Proteins 0.000 description 1
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 description 1
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 101150076615 ck gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N glycyl-glycyl-glycine Natural products NCC(=O)NCC(=O)NCC(O)=O XKUKSGPZAADMRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 208000021760 high fever Diseases 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000054584 human Y acceptor Human genes 0.000 description 1
- 108700023876 human Y acceptor Proteins 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 108010070409 phenylalanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006069 physical mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012205 qualitative assay Methods 0.000 description 1
- 238000003168 reconstitution method Methods 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010077037 tyrosyl-tyrosyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 108010027345 wheylin-1 peptide Proteins 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Virology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány immunszuppresszióra vonatkozik, és közelebbről monoklonális antitesteket és más kötőmolekulákat biztosít CD25 antigén ellen.
A szervátültetés során, különösen vese, máj, szív, tüdő és csontvelő átültetése során szükség van arra, hogy az átültetett szerv befogadójának az immunrendszerét elnyomják annak érdekében, hogy minimálisra csökkentsék a beültetett szerv kilökődésének előfordulását. Erre a célra különböző immunszuppresszív hatóanyagokat javasoltak már, ezek használatát azonban nagyon gondosan kell ellenőrizni, mivel amellett, hogy bizonyos immunszuppresszív hatóanyagok nemkívánatos mellékhatásokat okoznak, az is bonyodalmat jelent, hogy az immunszuppresszív hatás az átültetett szerv befogadóját különösen érzékennyé teszi baktériumok és vírusok által okozott fertőzésekre, amelyeket normálisan az immunrendszer leküzdene. A klinikai gyakorlatban sikeresen használt immunszuppresszív hatóanyagok a sztereoidok, azatioprin és a ciklosporin A. A klinikai gyakorlatban szükség van arra, hogy egyensúlyt tartsanak a beültetett szerv kilökődésének a megelőzéséhez vagy kezeléséhez szükséges immunszuppresszió és a befogadó személy immunrendszere aktivitásnak olyan mértékű fenntartás között, hogy az más fertőző ágenseket képes legyen leküzdeni, ugyanakkor az esetleges nemkívánatos mellékhatásokat ellenőrzés alatt tartsák.
Az immunszuppresszív hatóanyagok alkalmazása mellett bizonyos monoklonális antitesteknek (MAb) az immunreakciók elnyomására történő alkalmazása is a figyelem középpontjában került, különös figyelmet fordítottak az olyan monoklonális antitestekre, amelyek T-sejtek különböző felületi antigénjeit ismerik fel. Itt azonban szintén problémák merültek fel a klinikai használat során, mivel ezek az ismert antitestek vagy túl erősek, vagy nem eléggé hatékonyak, és néhány esetben súlyos mellékhatásokat, például magas lázat okoznak.
Ezeket a monoklonális antitesteket az illetékes Leukocita Osztályozó Intézetekben általában egy CDszámmal (Cluster Determination/csoport meghatározó számmal) látják el. Bár az olyan kifejezéseket, mind CD3. jelenleg gyakran a sejtfelületi antigén jelölésére használják, és az ezen antigén elleni monoklonális antitestet „antid-CD3 jellel jelölik, a továbbiakban a CD3, CD25 stb. jelet a monoklonális antitest jelölésére használjuk. és a megfelelő sejt-felületi antigént „CD3 antigén'-ként említjük.
A T-sejteken jelenlevő membrán antigének (amelyeket T-sejt ábrázat antigénnek is neveznek), mint például a CD3 antigén elleni monoklonális antitestek, különösen jelentősek, mivel általános szuppresszív hatást fejtenek ki az immunrendszere. Ezért az emberi test közvetlen immunválasza, melyet rendszerint a memória T-sejtek közvetítenek, a fertőzés bekövetkeztekor megszüntethető. Ez nyilvánvalóan nem kívánatos, amikor beültetett szervek kilökődését inkább megakadályozni, mint kezelni kívánják. A megelőzésre szolgáló kezelésnek lényegében véve szelektívnek kell lennie. azaz a memória T-sejteket érintetlenül meg kell tartani, míg az olyan T-sejteket (aktivált T-sejteket), amelyek közvetlenül részt vesznek a kilökődési folyamatban, inaktiválni kell.
Ezt a célt el lehet érni úgy, hogy aktivált T-sejtek elleni antitesteket használunk. Ezekre a T-sejtekre az jellemző, hogy membrán felületükön nagy affinitású IL-2 receptorok vannak. A nagy affinitású IL-2 receptor legalább két különböző polipeptid láncból áll, egy α-láncból, amely CD23 antigénként is ismeretes, valamint egy α-láncból. A nyugalomban levő T-sejtek nem ezt a nagy affinitású receptort fejezik ki, hanem kis és közepes affinitású receptorokat, amelyek a- és β-lánc homodimerekből állnak. A CD25, amely az IL-2-vel interferál nagy affinitású receptorához való kötődésben, és így szelektív módon nyomja el az immunválaszt, a beültetett szerv kilökődését megelőző kezeléshez választható antitest.
A természetes immunglobulinok vagy antitestek általában Y-formájú multimer molekulák, amelyek mindkét felső száruk végénél egy antigénkötő-helyet tartalmaznak. A szerkezet további része, különösen az Y alsó szára azokat az effektor funkciókat közvetíti, amelyek az immunglobulinokkal kapcsolatosak. Egy az IgG csoportba tartozó antitest általános szerkezetét mutatja sematikusan az 1A ábra. Mind a nehéz-, mind a könnyűlánc tartalmaz egy variábilis tartományt és egy állandó részt. Egy antigénkötő-hely egy nehézlánc variábilis tartományból és egy ahhoz kapcsolódó könnyűlánc variábilis tartományból áll. A nehéz- és könnyűlánc variábilis tartományoknak ugyanolyan általános szerkezetük van. amint azt az IB ábra mutatja.
Közelebbtől, egy antitest antigénkötő jellemzőit alapvetően három, a nehéz- és könnyűlánc variábilis tartományban levő sajátos terület határozza meg, amelyeket hipervariábilis vagy komplementer meghatározó (CDR) területeknek neveznek. Amint az IB ábra mutatja, ez a három hipervariábilis terület négy keret-területtel (FR) váltakozva helyezkedik el, amelyeknek a szekvenciája viszonylag konzervatív, és amelyek a kötésben közvetlenül nem vesznek részt. ACDR-k hurkokat képeznek, és szoros közelségben helyezkednek el a keret-területek közbejöttével, amelyek leginkább βformát vesznek fel. A nehézlánc CDR-jei a kapcsolódó könnyűlánc CDR-jeivel képezik lényegében véve az antitest molekula antigénkötő helyét.
Annak megállapítását, hogy az FR és CDR területek miből tevődnek össze, általában úgy végzik, hogy összehasonlítják az ugyanazon fajban képződött számos antitest aminosav-szekvenciáját. A CDR és FR területek azonosításának általános szabályait az I. táblázatban foglaltuk össze.
Ezenkívül az utóbbi időben úgy találták, hogy a könnyűlánc variábilis tartomány hozzájárulása a kötési energiához csekély a kapcsolódó nehézlánc variábilis tartomány által nyújtotthoz képest, továbbá úgy találták, hogy az izolált nehézlánc variábilis tartományok önmagukban antigénkötő aktivitással rendelkeznek. Az ilyen molekulákat áltálban egytartományos antitesteknek nevezik.
Számos rágcsáló CD25 monoklonális antitest léte2
HU 211 885 A9 zik, ilyenek például a 33B3-1 (Immunotech-Merieux), BDaIL-2R (Becton-Dickinson), 2C8 (Amersham), Campath 6 (MRC, Cambridge) és ATH207 (Szabad Egyelem, Berlin). Kiderült azonban, hogy egy új, IgG2a izotípusú egér CD25 antitest, amelyet a továbbiakban RFT5-IgG2a-ként említünk, jobb tulajdonságokkal rendelkezik, mint az ismert CD25 antitestek, különösen kötési affinitás szempontjából, és lehetőség van arra, hogy más CD25 kötő molekulákat készítsünk ugyanolyan hipervariábilis területekkel, mint az RFT5-IgG2a.
Ennek megfelelően a találmány tárgya CD25 kötő molekula, amely legalább egy olyan antigénkötő-helyet tartalmaz, amely legalább egy olyan tartományt tartalmaz, amely sorra CDR1, CDR2 és CDR3 hipervariábilis tartományokból; az említett CDR1 aminosav-szekvenciája Arg-Tyr-Trp-Met-His, az említett CDR2 aminosav-szekvenciája Ala-Ile-Tyr-Pro-GlyAsn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-Glu-Gly, az említett CDR3 aminosav-szekvenciája Asp-TyrGly-Tye-Tyr-Phe-Asp-Phe, valamint ezek közvetlen ekvivalenseiből áll.
A találmány egy első megközelítése szerint a CD25 kötő molekula egyetlen antigénkötő-helyet tartalmaz, amely egyetlen tartományt tartalmaz.
A találmány egy második megközelítése szerint a CD25 kötő molekula legalább egy antigénkötő-helyet tartalmaz, amely tartalmaz
a) egy első tartományt, amely rendre CDR1. CDR2 és CDR3 hipervariábilis területekből áll; az említett CDR1 aminosav-szekvenciája Arg-Tyr-Trp-MetHis. az említett CDR2 aminosav-szekvenciája Ala-IleTyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-LysPhe-Glu-Gly, az említett CDR3 aminosav-szekvenciája Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe, és
b) egy második tartományt, amely rendre CDRT, CDR2’ és CDR3' hipervariábilis területekből áll; az említett CDRT aminosav-szekvenciája Ser-Ala-SerSer-Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-Gln; az említett CDR2’ aminosav-szekvenciája Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-Ala-Ser; az említett CDR3‘ aminosav-szekvenciája His-Gln-ArgSer-Ser-Tyr-Thr, és ezek közvetlen ekvivalenseit.
Hacsak másképpen nem jelöltük, bármely, a továbbiakban leírt polipeptid lánc aminosav szekvenciája N-terminális véggel kezdődik, és C-terminális véggel végződik.
Ha az antigénkötő-hely, mind az első, mind a második tartományt tartalmazza, ezek ugyanazon a polipeptid molekulán helyezkedhetnek el, vagy előnyösebben az egyes tartományok különböző láncokon lehetnek, az első tartomány egy immunglobulin nehézlánc vagy fragmensének része, míg a második tartomány egy immunglobulin könnyűlánc vagy fragmensének része.
A „CD25 kötő molekula” kifejezésen olyan molekulát értünk, amely a CD25 antigénhez képes kötődni, akár önmagában, akár más molekulákkal nagy affinitású IL-2 receptorok képzése érdekében asszociálva. A kötési reakció szokásos módszerekkel (kvalitatív vizsgálatokkal) igazolható, beleértve például az IL-2-nek a receptoraihoz való kötődése gátlásának biovizsgálatÁt vagy bármely más kötési vizsgálatot, amely olyan negatív kontroll tesztre vonatkozik, amelyben egy nem-rokon specifitású antitestet, például egy antilizozim antitestet használunk. A találmány szerinti molekula CD25 antigénhez való kötődését előnyösen kompetitív kötési vizsgálatban mutathatjuk be, amelyben AHT207, BDocIL-2-R vagy 33B31 antitestet használunk kompetitorként. Előnyösen AHT207 vagy BDaIL-2-R antitestet alkalmazunk kompetítorként. Egy meghatározott kötési vizsgálatot az alábbiakban ismertetünk.
Humán perifériás vér mononukleáris sejteket (HPBM) 2 mmól/1 L-glutaminnal, 100 egység/ml penicillinnel, 100 pg/ml streptomicinnel, 25 mmól/1 nátrium-hidrogén-karbonáttal és 10% borjúembrió szérummal (FCS) kiegészített RPMI 1640 tápközegben növesztünk. A HPBM stimulálására 1 pg/ml fitohemagglutinint (PHA) használunk. Három nap múlva a blasztokat 3.106/ml koncentrációban újra szuszpendáljuk 2% szarvasmarha szérum albuminnal (BSA) és 2% aziddal kiegészített foszfáttal pufferolt sóoldatban. 50 μΙ-es szuszpenzió-mintákat 20 °C-on 10 percig nem-fedő körülmények között. 1 pg/ml-től 100pg/mlig változó koncentrációjú blokkoló antitest (kompetítor) jelenlétében inkubálunk. Ezután a sejtekhez hozzáadunk 1 pg/ml találmány szerinti biotinilezett antitestet, és további 10 percig inkubáljuk. A sejteket lemossuk, és további 10 percig inkubáljuk fluoreszceinnel jelzett streptavidin jelenlétében. A sejteket újra lemossuk, formáimnál rögzítjük, és fluoro-citométerrel elemezzük, amely a biotinilezett antitest kötését detektálja. Párhuzamosan egy olyan vizsgálatot végzünk, amelyben negatív kontrollként egy nem-rokon specifitású biotinilezett antitestet használunk.
Antigénkötő molekulák például a B-sejtek vagy hibridómák által termelt antitestek és a kiméra vagy humanizált antitestek vagy azok bármely fragmense, például F(ab’)2 és Fab fragmensek, valamint az egyszálú vagy egytartományos antitestek.
Az egyszálú antitest egy nehéz- és könnyűlánc antitest variábilis tartományaiból áll, amelyeket peptid kapcsoló köt össze, amely rendszerin 10-30 aminosavból, előnyösen 15-25 aminosavból áll. így egy ilyen szerkezet nem foglalja magában a könnyű- és nehézlánc konstans részét, és feltételezhető, hogy a kis peptid térköztartó kevésbé antigén tulajdonságú, mint a teljes konstans rész. A „kiméra antitest” kifejezésen olyan antitestet értünk, amelyben a nehéz- vagy könnyűláncnak vagy mindkettőnek a konstans területe humán eredetű, míg mind a nehéz-, mind a könnyűlánc variábilis tartománya nem-humán (például rágcsáló) eredetű. A „humanizált antitest” kifejezésen olyan antitestet értünk, amelyben a hipervariábilis területek (CDR) nem-humán (például rágcsáló) eredetűek, míg az immunglobulin többi része vagy lényegében a többi része, például a konstans területek és a variábilis tartományok nagymértékben konzervált részei, azaz a keret-területek, humán eredetűek. A humanizált antitest azonban a hipervariábilis területekkel szomszédos keretterületekben megtarthat néhány aminosavat a rágcsáló szekvenciából.
HU 211 885 A9
A hipervariábilis területek bármilyen keret-területekkel, előnyösen rágcsáló vagy humán eredetű keretterületekkel asszociálódhatnak. Előnyös keret-területeket ismertet a következő kiadvány: „Sequences of proteins of immunological interest”, Kábát és munkatársai, US Department of Health and Humán Service, Public Health Service, National Institute of Health. Az előnyös nehézlánc keret-terület azonban az RFT5IgG2a keret-területe, amelyet az 1. szekvencia szemléltet. Ez FR1, FR2, FR3 és FR4 területekből áll, Hasonlóképpen a 2. szekvencia az előnyös RFT5-IgG2a könnyűlánc keret-területet ábrázolja, amely sorrendben FR1’, FR2’. FR3' és FR4’ területekből áll.
A fentiek alapján a találmány tárgya továbbá egy CD25 kötő molekula, amely legalább egy antigénkötőhelyet tartalmaz, amely vagy egy olyan első tartományt tartalmaz, amelynek az aminosav-szekvenciája lényegében véve azonos az 1. szekvencián bemutatottal, az 1-helyzetben levő aminosavtól kezdve a 117-helyzetben levő aminosavval végződően. vagy egy fenti első tartományt és egy második tartományt tartalmaz, amelynek az aminosav szekvenciája lényegében megegyezik a 2. szekvencián bemutatottal, az 1-helyzetben levő aminosavtól kezdve a 104-helyzetben levő aminosavval végződően.
Az olyan monoklonális antitesteket, amelyek minden emberben természetes formában előforduló proteinek ellen képződnek, szükségképpen nem-humán rendszerben. pl. egérben kell kifejleszteni. Ennek közvetlen következménye, hogy egy hibridóma által termelt xenogén antitest - ha embernek adagoljuk - nemkívánatos immunválaszt vált ki, amelyet elsősorban a xenogén immunglobulin konstans része közvetít. Ez nyilvánvalóan korlátozza az ilyen antitestek alkalmazhatóságát. mivel ezek nem adagolhatok hosszabb időn keresztül. Ezért különösen előnyös egyláncú. egytartományos, kiméra vagy humanizált antitesteket alkalmazni, amelyek lényegében véve allogén választ váltanak ki, ha embernek adagoljuk.
A fentiek alapján a találmány szerinti különösen előnyös CD25 kötő molekula egy olyan kiméra anti-CD25 antilesl és ennek közvetlen ekvivalensei közül választható. amely legalább a következőket tartalmazza:
a) egy immunglobulin nehézláncot vagy annak fragmensét. amely (i) egy, sorrendben a CDR1. CDR2 és CDR3 hipervariábilis területekből álló variábilis tartományt és (ii) egy humán nehézlánc konstans részét vagy annak fragmensét tartalmazza; az említett CDR1 aminosav-szekvenciája Arg-Tyr-Trp-Met-His, az említett CDR2 aminosav-szekvenciája Ala-Ile-Tyr-ProGly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-Phe-GluGly. és az említett CD3 aminosav-szekvenciája AspTyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe, valamint
b) egy immunglobulin könnyűláncot vagy annak fragmensét. amely (i) egy, sorrendben CDR1', CDR2’ és CDR3' hipervariábilis területekből álló variábilis tartományt és (ii) egy humán könnyűlánc konstans részét vagy annak egy fragmensét tartalmazza; az említett CDR1' aminosav-szekvenciája Ser-Ala-SerSer-Ile-Ser-Tvr-Met-Gln. az említett CDR2 aminosav-szekvenciája Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-Ala-Ser, és az említett CDR3’ aminosav-szekvenciája His-GlnArg-Ser-Ser-Tyr-Thr.
Másképpen a találmány szerinti CD25 kötő molekula egy olyan egyszálú kötő molekula és ennek közvetlen ekvivalensei közül választható, amely egy antigénkötő-helyet tartalmaz, amely a következőkből áll:
a) egy első tartományból, amely sorrendben a CDR1, CDR2 és CDR3 hipervariábilis területeket tartalmazza, ahol a hipervariábilis területek aminosavszekvenciáját az 1. szekvencia szemlélteti,
b) egy második tartományból, amely sorrendben a CDR1 ’, CDR2’ és CDR3’ hipervariábilis területeket tartalmazza, az említett hipervariábilis területek aminosav-szekvenciáját a 2. szekvencia szemlélteti, valamint
c) egy peptid kapcsolóból, amely vagy az első tartomány N-terminálisához és a második tartomány Cterminálisához, vagy az első tartomány C-terminálisához és a második tartomány N-terminálisához kapcsolódik.
Amint az jól ismert, az aminosav-szekvencia csekély változása, például egy vagy néhány aminosav deléciója, inszertálása vagy helyettesítése az eredeti protein olyan alléi formáját eredményezheti, amely lényegében véve az eredetivel azonos tulajdonságokat mutat. Tehát a „közvetlen ekvivalens” kifejezésen vagy valamely egytartományos CD25 kötő molekulát (X molekula).
(i) amelyben a CDR1, CDR2 és CDR3 hipervariábilis területek egészében véve legalább 80%-ban homológok, előnyösen legalább 90%-ban homológok, még előnyösebben legalább 95%-ban homológok az 1. szekvencián bemutatott hipervariábilis területekkel, és (ii) amely az X molekulával azonos keret-területeket, de az 1. szekvencián bemutatottal azonos CDR1. CDR2 és CDR3 hipervariábilis területeket tartalmazó referencia molekulával azonos mértékben képes gátolni az IL-2-t abban, hogy receptoraihoz kapcsolódjék;
vagy bármely olyan CD25 kötő molekulát értünk, amely legalább két tartományt tartalmaz kötőhelyenként (X’ molekula), (i) amelyben a CDR1, CDR2, CDR3, CDR1’, CDR2’ és CDR3’ hipervariábilis területek egészében véve legalább 80%-ban homológok, előnyösen legalább 90%-ban homológok, még előnyösebben legalább 95%-ban homológok az 1. és 2. szekvencián bemutatott hipervariábilis területekkel, és (ii) amely az X’ molekulával azonos keret-területeket és konstans részeket, de az 1. és 2. ábrán bemutatottal azonos CDR1, CDR2, CDR3, CDR1’, CDR2’ és CDR3’ hipervariábilis területeket tartalmazó referencia molekulával azonos mértékben képes gátolni az IL-2-t abban, hogy receptoraihoz kapcsolódjék.
Ez utóbbi kritériumot különféle tesztekkel ellenőrizhetjük, így többek között kevert limfocita reakció (MLR), antigén specifikus HPBM válasz és IL-2-függő T-limfoblaszt szaporodási biovizsgálattal. Ezeket a teszteket a későbbiekben ismertetjük. Az „azonos mértékben” kifejezésen az értendő, hogy a referencia és az
HU 211 885 A9 ekvivalens molekula statisztikusan lényegében azonos IL-2 kötés gátló görbét mutat a fenti biovizsgálatok egyikében.
Legelőnyösebben a kiméra CD25 antitest legalább a következőkből áll:
a) egy nehézlánc, amely egy az 1. szekvencián bemutatott, az 1-helyzetben levő aminosavtól kezdődően a 11 7-helyzetben levő aminosavig terjedő szekvenciával lényegében azonos szekvenciával rendelkező variábilis tartományt és egy humán nehézlánc konstans részt tartalmaz; és
b) egy könnyűlánc, amely egy a 2. szekvencián bemutatott, az 1-helyzetben levő glutaminsavval kezdődő és a 104-helyzetben levő glutaminsavval végződő ammosav-szekvenciával rendelkező variábilis tartományt és egy humán könnyűlánc konstans területet tartalmaz.
A humán nehézlánc konstans rész lehet γ,, γ2, γ3, γ4, μ. α,. α2, δ vagy ε típusú, előnyösen γ típusú, még előnyösebben γ,, típusú, míg a humán könnyűlánc konstans rész lehet K vagy λ típusú (beleértve a λ,, λ2 és λ3 altípusokat), de előnyösen κ típusú. Ezen konstans részek aminosav-szekvenciáját Kábát és munkatársai ismertetik (1. fent).
A találmány szerinti CD25 kötő molekulák konjugátumai. pl. enzimmel vagy toxinnal vagy radioizotóppal készült konjugátumai szintén a találmány tárgykörébe tartoznak.
A találmány szerinti CD25 kötő molekula rekombináns DNS-technikával állítható elő. Ebből a szempontból egy vagy több, a kötő molekulákat kódoló DNS molekulát kell készíteni, a megfelelő kontroll szekvencia alá helyezni, és egy alkalmas gazdaszervezetbe kifejeződés céljából átvinni.
Nagy általánosságban tehát (i) DNS molekulákat készítünk, amelyek egy a találmány szerinti egytartományos CD25 kötő molekulát, egy a találmány szerinti egyszálú CD25 kötő molekulát, egy a találmány szerinti CD25 kötő molekula könnyű- és nehézláncot vagy azok fragmensét kódolja, és (ii) a találmány szerinti DNS molekulákat rekombináns módszerekkel a találmány szerinti CD25 kötő molekulák termelésére használjuk.
Egy a szakterületen jártas szakember a technika állásának ismeretében, az itt megadott információk birtokában, azaz a hipervariábilis területek aminosavszekvenciája és az azokat kódoló DNS-szekvenciák alapján képes a találmány szerinti DNS molekulákat szintetizálni. Egy variábilis tartomány gén kialakításának módszerét például az EP-A-239 400. sz. leírás ismerteti, amely röviden a következőképpen foglalható össze: egy valamilyen specifitású monoklonális antitest (MAb) variábilis tartományát klónozzák. Meghatározzák a keretet és a hipervariábilis területet kódoló DNSszegmenseket, majd a hipervariábilis területeket kódoló DNS-szegmenseket úgy távolítják el, hogy a keretterületeket kódoló DNS-szegmensek a kapcsolódásoknál alkalmas restrikciós helyekkel fuzionálódjanak. A restrikciós helyeket az alkalmas helyzetekben úgy lehet kialakítani, hogy a DNS molekulát ismert módszerrel mutálják. Kétszálú szintetikus CDR kazettákat készítenek DNS szintézissel az 1. és 2. szekvencián bemutatott szekvenciának megfelelően. Ezeket a kazettákat ragadós végekkel készítik úgy, hogy a keret kapcsolódásaihoz ligálhatók legyenek. Egy immunglobulin variábilis tartományt kódoló DNS molekula előállításának munkamenetét ábrázolja az 5. ábra.
Nem szükséges továbbá, hogy a termelő hibridóma sejtvonalból mRNS-t nyerjünk ki ahhoz, hogy a találmány szerinti MAb-t kódoló DNS-konstrukciót kialakítsuk. így a WO-90/07 861. számon közrebocsátott PCT bejelentés teljes körű útmutatást ad MAb rekombináns DNS technikával történő előállítására, ha a gén nukleotid-szekvenciája csak írott formában van meg. A módszer abban áll. hogy több oligonukleotidot szintetizálnak, ezeket PCR módszerrel felszaporítják, és öszszekapcsolva a kívánt DNS-szekvenciát kapják.
A nehéz- és könnyűlánc konstans részeket kódoló géneket és alkalmas promotereket tartalmazó expressziós vektorok a köz számára hozzáférhetők. így, ha a találmány szerinti DNS molekulát elkészítettük, alkalmas expressziós vektorba egyszerűen átvihető. Egyszálú antitesteket kódoló DNS molekulák szintén készíthetők ismert módszerekkel, így például a WO-88/1649. számú közrebocsátási iratban ismertetett módon.
A fentiek alapján - és mivel a hibridóma által természetesen kiválasztott egér MAb nem az előnyös típusú MAb - feltételezhető, hogy nem szükséges a hibridómát letétbe helyezni, hogy eleget tegyünk a kellő kitanítás biztosítása követelményének.
A találmány szerinti megoldás egy előnyös megvalósítási módja értelmében a CD25 kötő molekula termelésének rekombináns eszköze egy első és egy második DNS-konstrukciót foglal magában, amelyeket az alábbiakban ismertetünk:
Az első DNS-konstrukció egy nehézláncot vagy annak fragmensét kódolja, és tartalmaz
a) egy első részt, amely egy olyan variábilis tartományt kódol, amely felváltva keret-területeket és hipervariábilis területeket tartalmaz; az említett hipervariábilis területek sorrendben CDR1, CDR2 és CDR3, amelyeknek az aminosav-szekvenciáját az 1. szekvencia ábrázolja; ez az első rész a variábilis tartomány első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és a variábilis tartomány utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, és
b) egy második részt, amely egy nehézlánc konstans területet vagy annak fragmensét kódolja, amely a nehézlánc konstans területének első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és a konstans rész vagy annak fragmense utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, és egy értelmetlen kodonnal folytatódik.
Ez az első rész előnyösen egy olyan variábilis tartományt kódol, amelynek az aminosav-szekvenciája lényegében véve megegyezik az 1. szekvencián bemutatott aminosav-szekvenciával, az 1. helyzetben levő aminosavval kezdődően és a 117. helyzetben levő aminosavval végződően. Még előnyösebben az első rész olyan nukleotid-szekvenciával rendelkezik, amelyet az
1. szekvencián bemutattunk, a 142. helyzetben levő
HU 211 885 A9 nukleotiddal kezdődően és a 492. helyzetben levő nukleotiddal végződően. Szintén előnyösen a második rész egy humán nehézlánc konstans részét kódolja, még előnyösebben a humán Y! lánc konstans részét. Ez a második rész egy genomi eredetű (intronokat tartalmazó) DNS fragmens vagy egy (intronokat nem tartalmazó) cDNS fragmens lehet.
A második DNS konstrukció egy könnyűláncot kódol, és tartalmaz
a) egy első részt, amely felváltva keret-területeket és hipervariábilis területeket tartalmazó variábilis tartományt kódol; az említett hipervariábilis területek sorrendben CDR1’, CDR2’ és CDR3’, amelyeknek aminosav-szekvenciájál a 2. szekvencia ábrázolja, ez az első rész a variábilis tartomány első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és a variábilis tartomány utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, és
b) egy második részt, amely egy könnyűláncot vagy annak fragmensét kódolja, amely a könnyűlánc konstans része első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és a konstans rész vagy annak fragmense utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, és egy értelmetlen kodonnal folytatódik.
Az első rész előnyösen egy variábilis tartományt kódol, amelynek az aminosav-szekvenciája lényegében megegyezik a 2. szekvencián bemutatott, az 1. helyzetben levő aminosavtól kezdődő és a 104. helyzetben levő aminosavig terjedő szekvenciával. Még előnyösebben az első rész nukleotid-szekvenciája megegyezik a 2. szekvencián bemutatott, a 244. helyzetben levő' nukleotiddal kezdődő, és az 555. helyzeten levő nukleotiddal végződő szekvenciával. A második rész előnyösen a humán könnyűlánc konstans részét, még előnyösebben a humán κ lánc konstans részét kódolja.
Az első és második DNS konstrukcióban az első és második részt előnyösen egy intron választja el. Az első és második rész között elhelyezkedő intronba előnyösen egy fokozó van beiktatva. Ennek az átíródó, de nem transzlatáló genetikai elemnek a jelenléte szükséges lehet a második rész hatékony átírása szempontjából. Még előnyösebben az első és második DNS konstrukció egy - előnyösen humán eredetű - nehézlánc gén fokozóját tartalmazza.
Az első és második DNS konstrukció előnyösen tartalmaz egy harmadik részt, amely az első résztől felfelé helyezkedik el, és amely a vezető peptid egy részét kódolja. Ez a harmadik rész a vezető peptid első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és az utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik. Erre a peptidre azért van szükség, hogy a láncokat kifejező gazdaszervezet a láncokat ki tudja választani, a vezető peptidet azután a gazdaszervezet eltávolítja. Az első DNS konstrukció harmadik része előnyösen olyan vezető pepiidet kódol, amelynek az aminosav-szekvenciája lényegében azonos az 1. szekvencián bemutatott, a -19. helyzetben levő aminosavtól kezdődő és a -1. helyzetben levő aminosavig terjedő szekvenciával. A második DNS konstrukció harmadik része szintén előnyösen egy olyan vezető peptidet kódol, amelynek aminosavszekvenciája azonos a 2. szekvencián bemutatott, a -22. helyzetben levő aminosavval kezdődő és a -1. helyzetben levő aminosavig terjedő szekvenciával.
A DNS konstrukciókat alkalmas kontroli-szekvenciák, különösen alkalmas promoter ellenőrzése alá helyezzük. Bármilyen promoter alkalmazható, feltételezve, hogy ahhoz a gazdaszervezethez van adaptálva, amelybe a DNS konstrukciót kifejeződés céljából átvisszük. Ha azonban a kifejeződés emlős sejtben fog végbemenni, különösen előnyös, ha immunglobulingén promotert alkalmazunk.
A kívánt antitestet előállíthatjuk sejttenyészetben vagy transzgenikus állatban. Alkalmas transzgenikus állatot ismert módszerrel hozhatunk létre, például úgy, hogy az alkalmas kontroli-szekvencia hatása alá helyezett első és második DNS konstrukciót petesejtekbe mikroinjektáljuk, az így kezelt petesejteket alkalmas álterhes nősténybe visszük, és a kívánt antitestet kifejező ivadékot kiválogatjuk.
Ha az antitest láncokat sejttenyészetben kell előállítani, a DNS konstrukciókat először vagy egyetlen expressziós vektorba, vagy két különböző, de kompatibilis expressziós vektorba kell inszertálni, ez utóbbi lehetőség az előnyösebb.
Ennek megfelelően a találmány tárgya továbbá egy olyan, legalább egy fenti DNS konstrukciót tartalmazó expressziós vektor, amely prokarióta vagy eukarióta sejtvonalban képes replikálódni.
A DNS konstrukciót tartalmazó expressziós vektorokat azután alkalmas gazdaszervezetbe visszük át. Ha a DNS konstrukciókat külön-külön két expressziós vektorba inszertáljuk. akkor ezeket vagy külön-külön, azaz „sejtenként egy vektor” típus formájában, vagy egyszerre vihetjük be, ez utóbbi lehetőség az előnyösebb. Alkalmas gazdaszervezetként alkalmazhatunk baktériumot, élesztőt vagy emlős sejtvonalat, ez utóbbi az előnyös. Még előnyösebben emlős sejtvonalként limfoid eredetű sejtvonalat, például mielóma, hibridóma vagy normális immortalizált B-sejtet alkalmazunk, amely azonban nem fejez ki endogén antigén könnyű- vagy nehézláncot.
Az is előnyös, ha a gazdaszervezet sejtenként nagyszámú vektor kópiát tartalmaz. Ha gazdaszervezetként emlős sejtvonalat alkalmazunk, akkor ezt előnyösen úgy érhetjük el, hogy a kópiaszámot ismert módszerrel amplifikáljuk. Az amplifikálási módszer rendszerint abban áll, hogy egy hatóanyagra nézve fokozott rezisztencia alapján kiválogatást végzünk, ahol a rezisztenciát az expressziós vektor kódolja.
A találmány tárgya továbbá eljárás többláncú CD25 kötő molekula előállítására, amelynek során (i) egy a találmány szerinti eljárással előállított első és második DNS konstrukcióval transzformált szervezetet tenyésztünk, és (ii) a tenyészetből az aktív CD25 kötő molekulákat kinyerjük.
Eljárhatunk úgy is, hogy a nehéz- és könnyűláncokat külön-külön nyerjük ki, majd í/t vitro újra összehajtogatás után aktív kötő molekulává rekonstituáljuk. A rekonstituálási módszerek a technika állása szerint ismertek, például az EP-A-120 674. vagy az EP-A125 023. sz. közrebocsátási iratból.
HU 211 885 A9
Eljárhatunk tehát úgy, hogy (i) egy első organizmust tenyésztünk, amelyet egy találmány szerinti eljárással előállított első DNS konstrukcióval transzformáltunk, és a tenyészetből kinyerjük az említett nehézláncot vagy annak fragmensét, (ii) egy második organizmust tenyésztünk, amelyet egy a találmány szerinti eljárással előállított második DNS konstrukcióval transzformáltunk, és a tenyészetből kinyerjük az említett könnyűláncot vagy annak fragmensét, (iii) in vitro rekonstituálunk egy aktív CD25 kötő molekulát az (i) lépésben kapott nehézláncból vagy annak fragmenséböl és a (ii) lépésben kapott könnyűláncból vagy annak fragmenséböl.
Hasonlóképpen a találmány tárgya továbbá eljárás egy egyszálú vagy egytartományos CD25 kötő molekula előállítására, amelynek során (i) egy a találmány szerinti egyszálú, illetve egytartományos CD25 kötő molekulát kódoló DNS konstrukcióval transzformáit szervezetet tenyésztünk, és (ii) a molekulát kinyerjük a tenyészetből.
A találmány szerinti eljárással előállított CD25 kötő molekulák nagyon jó immunmoduláló aktivitást mutatnak, amint ezt például a kevert limfocita reakció (MLR) biovizsgálat igazolja (Akbar és munkatársai, J. Immunoi. 140, 2171-2178). Az MLR vizsgálatot általában az in vivő kilökődéshez vezető allogén transzplantátum válasz in vitro ekvivalensének tekintik.
1. MLR gátlása
Egy első donor HPBM preparátumot 100 μΐ 105 HPBM-t tartalmazó alikvotokra osztjuk, amelyekhez különböző. 0 és 300 ng/ml közötti koncentrációban (beleértve a szélső értékeket is) találmány szerinti molekulát adunk. Ezután minden mintát egy második donortól származó 105 HLA-inkompatibilis, röntgen-besugárzással kezelt HPBM-t tartalmazó 100 μΐ alikvotokkal. illetve T-sejttel felélt HPBM-mel keverünk. Az elegyet 6 napig 37 °C-on inkubáljuk. és ezután hozzáadunk 1 pCi metiPH-timidint (3H-Tdr) 10 μΐ térfogaiban. 6 óra múlva a radioaktivitás beépülése alapján mérjük a sejtszaporodást.
Ebben a vizsgálatban a találmány szerinti molekulák 0,3 ng/ml koncentrációtól in vitro immunmoduláló aktivitást mutatnak, amint ezt a 6. ábra mutatja. Kb. 3 ng/ml-nél a sejtek növekedése 50%-ban gátlódik.
A találmány szerinti molekulák immunmoduláló aktivitása az antigén-fajlagos HPBM-válasz gátlása, illetve az IL-2-függő T-limfoblasztok szaporodásának gátlása mérésének alapján is megbecsülhető, a következőképpen:
2. Antigén-fajlagos HPBM-válasz gátlása
A találmány szerinti molekulák hatékonyan gátolják a PPD (tuberkulin) fajlagos, HLAII csoportra korlátozott T-sejt-válasz kialakulását, ami arra utal, hogy képesek gátolni az endogén úton termelt IL-2 receptorához való kötődését. Ezek az in vivő antigén-fajlagos válaszok feltehetően kritikus szerepeljátszanak az autoimmunitás és a transzplantátumok kilökődése megindításában.
Egy HPBM preparátum 100 μΙ-es 105 HPBM-t tartalmazó alikvotjaihoz különböző, 0 és 300 ng/ml közötti koncentrációban (beleértve a szélső értékeket is) találmány szerinti molekulát és 30 μg/ml végső koncentrációig tuberkulint (PPD) adunk. A mintákat 6 napig 37 °C-on inkubáljuk, és ezután hozzáadunk 1 μθ metil-3H-timidint (3H-Tdr), 10 μΐ térfogatban. 6 óra hosszat végzett inkubálás után a radioaktivitás beépülése alapján mérjük a sejtszaporodást.
Ebben a vizsgálatban a találmány szerinti molekulák 10 ng/ml koncentrációtól immunmoduláló aktivitást mutatnak, amint ezt a 7. ábra mutatja. Kb. 50 ng/ml-nél a sejtek növekedése 50%-ban gátlódik.
3. ÍL-2-függő T-limfoblasztok szaporodásának gátlása
A találmány szerinti molekulák hatékonyan gátolják a humán T-sejt blasztok MLR vagy PPD stimulálással indukált IL-2-függő növekedését. Feltételezhető, hogy ezek a sejtek nagy szerepet játszanak az autoimmunitás és a kilökődési esetek krónikusságában.
20.103 5 napos PPD-vel vagy MLR-rel stimulált HPBM-t tartalmazó 200 μΙ-es, hármas párhuzamos tenyészeteket 48 óra hosszat 37 °C-on 5, 10, illetve 20 ng/ml rekombináns IL-2, valamint különböző, 0 és 10 μg/ml közötti (beleértve a szélső értékeket is) koncentrációjú találmány szerinti molekula jelenlétében inkubáljuk. Ezután ?H-Tdr-t adunk hozzá. 6 óra múlva a radioaktivitás beépülése alapján mérjük a sejtszaporodást. Ebben a vizsgálatban a találmány szerinti molekulák 0,1 ng/ml koncentrációtól immunmoduláló aktivitást mutatnak, amint ezt a 8A és 8B. valamint a 8C és 8D ábra mutatja.
Ezért a találmány szintén kiterjed (i) a találmány szerinti CD25 kötő molekulák alkalmazására a humán immunrendszer immunszuppressziójában, (ii) a humán immunrendszer immunszuppressziójára vonatkozó eljárásra, amely abban áll, hogy az ilyen kezelésre szoruló betegnek egy CD25 kötő molekula immunszuppressziósan hatékony mennyiségét adagoljuk, (iii) a humán immunrendszer immunszuppressziójára szolgáló gyógyszerkészítményekre, amelyek egy a találmány szerinti CD25 kötő molekulát és farmakológiailag elfogadható hordozó- vagy hígítószert tartalmaznak.
Átültetett szervek kilökődésének megelőzésére, illetve kezelésére különösen előnyös a CD25 kötő molekula.
Az ilyen célokra alkalmas dózis természetesen függ például az alkalmazott, találmány szerinti molekulától, a kezelendő személytől, az adagolás módjától és a kezelendő állapot természetétől és súlyosságától. Megelőzés esetén azonban általában kielégítő eredmények érhetők el testtömeg kilogrammonként 0,1-1 mg napi dózissal. Ha kilökődés következik be, ennek kezelése esetén ez a dózis négyszeresére emelhető. A találmány szerinti molekulák előnyösen parenterálisan, rendszerint intravénásán, például könyök vénába vagy más perifériás vénába adagolhatok. Megelőző kezelésben a találmány szerinti molekulát naponta egyszer - hetente egyszer adagoljuk 2-4
HU 211 885 A9 hétig, a szervátültetés napjától kezdődően, előnyösen néhány órával az átültetés előtt kezdve.
A találmány szerinti molekulák használhatók a CD25 antigént kifejező sejtek rosszindulatú voltának kezelésére is, így például T-sejt leukémia és bizonyos más leukémiák és limfóma kezelésére. Erre a célra a CD25 kötő molekula radiokonjugátum formájában alkalmazható, amelyben a molekula egy alfa-emittáló radioizotóppal van kapcsolva.
A találmány szerinti molekulák alkalmazhatók továbbá HIV fertőzés kezelésére vagy megelőzésére is. Úgy tűnik, hogy a HIV vírusnak szaporodó T-sejtekre van szüksége ahhoz, hogy sokszorozódni tudjon, így a T-sejtek szaporodásának CD25 antigénnel történő gátlása a vírus sokszorozódását is gátolja.
A találmány szerinti gyógyszerkészítmények szokásos módszerekkel készíthetők el. A találmány szerinti készítményeket előnyösen liofilizált formában állítjuk elő. Közvetlen adagoláshoz ezt alkalmas vizes hordozóban, például steril injekciós vízben vagy steril, pufferolt fiziológiás sóoldatban oldjuk. Ha nagyobb mennyiségű oldatot kívánunk készíteni bolus injekció helyett infúziós célra, előnyös, ha készítésekor a sóoldathoz humán szérum-albumint vagy a beteg saját, heparinnal kezelt vérét adagoljuk. Az ilyen fiziológiásán inaktív fehérje fölös mennyiségben való jelenléte megakadályozza, hogy a tárolóedény falára, illetve a csövekre történő adszorpció következtében a monoklonális antitest vesztesége bekövetkezzék. Az albumint előnyösen 0,5-4,5 tömeg% koncentrációban alkalmazzuk a sóoldat mennyiségére számítva.
A találmány egy további szempontja szerint úgy találtuk, hogy különösen előnyös eredmények érhetők el. ha legalább két olyan antigén kötő molekula kombinációját alkalmazzuk az aktivált T-sejtekre, amelyek az aktivált T-sejtek legalább két különböző antigén-jellemzőjét ismerik fel.
Előnyösen két különböző antigén kötő molekula kombinációját alkalmazzuk, ahol mindkettő különböző antigéneket ismer fel. így, bár mindkét antigén kötő molekula aktivált T-sejt felületi antigéneket ismer fel, nem versengenek egymással a T-sejt felületén levő ugyanazon kötőhelyért.
Az antigén kötő molekulák közül az egyik előnyösen CD25 kötő molekula.
Ennek megfelelően a találmány tárgya tehát továbbá immunszuppresszív kompozíció, amely legalább egy CD25 kötő molekula és legalább egy az aktivált T-sejtekre jellemző CD25-től eltérő antigénhez kötődő molekula elegyét tartalmazza.
A találmány tárgya továbbá legalább két, aktivált T-sejtekhez való antigén kötő molekula kombinált alkalmazása emlősök immunrendszerének elnyomására, az említett antigén kötő molekulák legalább két különböző. az aktivált T-sejtekre jellemző antigént ismernek fel. amelyek egyike a CD25 antigén.
Az ..aktivált T-sejtekhez való antigén kötő molekula” kifejezésen olyan kötő molekulákat értünk, amelyek aktivált T-sejtekkel erősen, míg a nyugalomban levő T-sejtekkel nem vagy csak nagyon gyengén reagálnak. Az antigén kötő molekulák előnyösen teljes immunglobulin molekulák, előnyösebben rágcsáló, kiméra vagy humanizált monoklonális antitestek, különösen kiméra monoklonális antitestek. Előnyös CD25 monoklonális antitestek azok, amelyek olyan CDR-ekkel rendelkeznek, amelyeknek aminosav szekvenciáját fentebb ismertettük.
Atalálmány szerinti kompozíció előnyösen immunszuppresszív hatóanyagot, például ciklosporin A-t is tartalmazhat, vagy azzal kombinálva alkalmazható.
Az aktivált T-sejtekhez való, a CD25-től eltérő előnyös monoklonális antitestek tipikusan azok, amelyeket a CD7 csoportba soroltak a ,JLeucocyte Typing II., I. kötet: Humán T Lymphocytes” (Reinherz, Haynes, Nadler és Berstein, Springer Verlag, 1985) irodalmi helyen ismertetettek szerint. A CD7 antigént a nyugalomban levőT-sejtnek mintegy 80%-a heterogén módon fejezi ki. A kifejeződés azonban aktiválás hatására jelentősen fokozódik (2-3-szoros intenzitás-emelkedés).
Előnyös antitestkombináció tehát a CD7 és a CD25 antitest kombinációja. Ennek megfelelően a találmány szerinti kompozíciók előnyösen legalább egy CD25 antitest és legalább egy CD7 antitest, előnyösen egy CD25 antitest és egy CD7 antitest elegyét tartalmazzák. Az is előnyös, ha mindkét antigén IgG izotípusú.
A két antitest, adott esetben egy immunszuppresszív hatóanyaggal együtt, különböző módokon alkalmazható a klinikai gyakorlatban. Előnyösen összekeverjük ezeket, és a fizikai keveréket adagoljuk a betegnek. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy az antitesteket és az immunszuppresszív hatóanyagot külön-külön tároló edényzetből adagoljuk, bármilyen sorrendben, de azonos időben. A kompozíció a fenti módon, a CD25 esetén ismertetett módon készíthető el és adagolható. Eljárhatunk úgy is, hogy az immunszuppresszív hatóanyagot orálisan és a monoklonális antitesteket parenterálisan, külön-külön vagy elegy formájában adagoljuk.
Alkalmas kompozíció kialakítása céljából a monoklonális antitesteket és adott esetben az immunszuppresszív hatóanyagot ugyanabba a tároló edényzetbe, egymástól elválasztva csomagoljuk, azzal a használati utasítással, hogy ezeket össze kell keverni vagy egyidejűleg kell adagolni. Ilyen készletek például a többkamrás fecskendő vagy az iker-csomag, amely egymástól elválasztott formában tartalmazza legalább két, aktivált T-sejtekhez való antitest cgységdózisát. az említett antitestek legalább két az aktivált T-sejtekre jellemző különböző antigént ismernek fel, ezek közül az egyik a CD25 antigén.
Az eddigi kutatások azt mutatják, hogy az antitestek kombinációja adott esetben egy immunszuppreszszív hatóanyaggal együtt adagolva az alkalmazott dózis esetén nem okoz nem-kívánatos mellékhatásokat, és az egyes antitestek esetén nem figyelhető meg potenciális mellékhatás. Megelőzés céljára az alkalmas dózis az első antitest (például a CD25) esetén a kezelendő személy testtömeg-kg-jaira vonatkoztatva 0.050,5 mg, míg a második antitest (például egy CD7 antitest) esetén 0.05-0.5 mg. Ha immunszuppresszív hatóanyagként ciklosporint alkalmazunk, parenterális adagolás esetén az ajánlott dózis 2-5 mg/kg-testtömeg,
HU 211 885 A9 orális adagolás esetén pedig 10-15 mg/kg-testtömeg. A találmány szerinti kompozíció naponta vagy hetente, előnyösen hetente adagolható.
Bár a találmány szerinti kompozíciót különösen átültetett szervek kilökődésének megelőzésére szánjuk, az esetleg bekövetkezett kilökődések kezelésére is alkalmazhatjuk. Ilyen esetben a dózist a négyszeresére kell emelni.
A találmány szerinti megoldásban alkalmazott rágcsáló monoklonális antitestek önmagukban ismertek. Az aktivált T-sejtek felületi antigénjei elleni számos monoklonális antitest hozzáférhető a világ különböző országainak a törzsgyűjteményeiben, különösen az American Type Culture Collection (Rockville, Maryland; Amerikai Egyesült Államok) intézetnél kaphatók alkalmas monoklonális antitestek vagy ilyen antitesteket kiválasztó hibridómák. A találmány szerinti megoldásban alkalmazható CD7 monoklonális antitestet kiválasztó hibridóma például az ATCC-től beszerezhető T3-3A1 jelű hibridóma. Más CD7 antitestek az RFT-2 és a CHH 380 (kiméra antitest). CD25 antitestek, az előnyös RFT-5 és annak a fent ismertetett kiméra származékai mellett, még az M7/2 [Gaulton és munkatársai. Clin. Immunoi, and Immunopath. 36, 18 (1985)], az anti-tac antitest [Uchiyama és munkatársai, J. Immunoi. 726(4), 1393 (1981)] és a Campath 6 monoklonális antitest.
A CD25 és CD7 monoklonális antitestek kombinációjának szinergens hatását a fent ismertetett MLR biovizsgálatban in vitro és embereken klinikai vizsgálatokban in vivő is kimutattuk.
Az MLR biovizsgálatban a 3H-TdR felvételének a gátlása figyelhető meg olyan tenyészetekben, amelyekhez kevés CD7 (RFT2) vagy CD25 (RFT5) monoklonális antitestet adtunk, viszont jelentősen nagyobb mértékű gátlás figyelhető meg, ha a két antitestet együttesen ugyanolyan koncentrációban alkalmazzuk. Az MLR az in vivő kilökődéshez vezető allogén átültetési válasz in vitro megfelelője, míg a fent említett gátlás az in vivő immunszuppressziónak felel meg.
Abban az esetben, ha az MLR vizsgálatban 10 ng/ml és 100 pg/ml közötti koncentrációban ciklosporint adagolunk, a CD7 és CD25 monoklonális antitestek jelenlétében a 3H-TdR felvétele az egész tartományban fokozottan gátlódik az önmagában alkalmazott ciklosporin esetén mérthez képest. A CD7, CD25 és ciklosporin kombinációja bármely más kombinációnál nagyobb gátlást mutat.
Klinikai vizsgálatokban a megelőzésként végzett kezelés tanulmányozására olyan betegeket választottunk, akik vese-, máj- vagy szívátültetés előtt álltak. Az átültetés napján, a műtét előtt 2 órával egy első infúziós készítményt kaptak, amely az 5. példa szerinti kiméra CD25 antitestet és CD7 kiméra antitestet (CHH 380) tartalmazott, mindkét antitestet 0,2 mg/kg-testtömeg dózisban adagoltuk. Két nappal a műtét után ugyanilyen infúziói adagoltunk 0,4 mg/kg-testtömeg dózisban, majd ezt hetente ismételtük egy hónapon át.
Az intravénás infúziókat a következőképpen készítettük: a liofilizált antitesteket összekevertük, és
100 ml, 4,5 tömeg% humán albumint tartalmazó steril, pufferolt sóoldatban diszpergáltuk. Ezt a sóoldatos diszperziót adagoltuk a betegnek 30 perc alatt. A betegek standard ciklosporin terápiát is kaptak. A betegek egyikénél sem következett be kilökődés az egy hónapos kezelési idő alatt.
A mellékelt ábrák rövid leírása:
Αϊ 1A ábrán sematikusan bemutatjuk egy IgG molekula szerkezetét, valamint a nehéz- és könnyűláncot kódoló géneket. Az IB ábrán sematikusan bemutatjuk a nehéz- és könnyűlánc variábilis tartományának keretbe és hipervariábilis régiókba való átrendeződését.
A 2A és 2B ábra az egér hibridóma RFT5-IgG2a (1), RFTIgGl (2), RFT4 (3) és NS-1 (4) EcoRI-gyel emésztett genomi DNS-ének Southern elemzési mintáját mutatja, ahol vizsgáló mintaként 32P-vel jelzett, a rágcsáló nehézlánc fokozót kódoló (2A ábra), illetve az egér CK és öt JK génszegmenst kódoló (2B ábra) DNS-t használtunk. 10 g genomi DNS-t emésztettünk EcoRI-gyel, és 0,8%os agaróz gélen méret szerint frakcionáltuk. Ezután a fragmenseket nítrocellulóz membránra vittük át, és a mintához hibridizáltuk. Mosás után a mintával egy éjszakán át Kodak X-0 Mát filmet exponáltunk.
A 3A és 3B ábra a szülő pSV2-neo-huC7, és a pSV2-DHFR-Ep-huCK kifejező vektorokat ábrázolja. Mindkét plazmid tartalmaz egy ampicillin-rezisztencia gént (ampR), továbbá a pBR322, valamint az SV40 replikációs origóját (pBR322 őri és SV40 őri). A pSV2-neo-huCYrre jellemző egy neomicin rezisztencia gén (neoR) és a humán γ, konstans rész (huCyt) jelenléte, míg a pSV2-DHFR-Ep-huCK-ba inszertálva egy dihidrofolát-reduktáz (DHFR) gént (metotrexát rezisztencia) és a humán K konstans részt (huCK) kódoló gént tartalmaz. A kiméra nehéz- és könnyűláncot kifejező végső vektorokat úgy kapjuk meg, hogy a pSV2neo-huC^-be egy olyan DNS fragmenst inszertálunk, amely a vezető peptidet (L) és az RTF5-IgG2a nehézlánc variábilis tartományát (VDJ2) kódolja a humán nehézlánc fokozóval együtt, valamint a pSV2-DHFRΕμ-huCK-ba egy olyan DNS fragmenst inszertálunk, amely a vezető peptidet (L) és az RFT5-IgG2a könynyűlánc variábilis tartományát (VJ2) kódolja.
A 4A és 4B ábra az 5. példában ismertetett A és B eljárások szerint, az egyes, metotrexát (MTX) növekvő koncentrációinál növesztett, összegyűjtött sejtek termelékenységét mutatja. A diagram Y-tengelye a 72 óra alatt termelt monoklonális antitest mennyiségét mutatja mg/109sejt koncentrációban.
Az 5. ábra a CDR helyettesítések konstrukciójának munkamenetét mutatja, amelynek során CDR kazettákat iktatunk be olyan vektorba, amely négy egymáshoz fuzionált keretet tartalmaz.
A 6. ábra az MLR-nek (x) RFT5-IgG2a-val (y2a, k) és (o) a találmány szerinti rágcsáló-humán kiméra MAb-val (γ,, k) történő gátlását mutatja. Mindkét MAb olyan variábilis tartományokat tartalmaz, amelyeket az 1. és 2. szekvencián mutatunk be.
A 7. ábra a PPD-specifikus HPBM válasznak (x) RFT5-IgG2a és (o) ugyanazon rágcsáló-humán kiméra MAb által történő gátlását mutatja.
HU 211 885 A9
A 8. ábra az RFT5-IgG2a-nak és ugyanazon rágcsáló-humán kiméra MAb-nak a PPD T-limfoblasztok sokszorozódására (8B és 8A ábra) és az MLR T-limfoblasztok sokszorozódására (8D és 8C ábra) gyakorolt hatását mutatja 5 ng/ml (o), 10 ng/ml (v) és 20 ng/ml (x) IL-2 koncentrációnál.
A találmány szerinti megoldás illusztrálására bemutatjuk a kiméra CD25 antitest előállítását.
1. példa
Az RFT5-IgG2a nehézlánca variábilis tartományát kódoló gén klónozása Az RFT5-IgG2a (CD25; y2a; κ), RFT5-IgGl (DC25;
γμ κ) és az RFT4 (CD4; f; k) hibridómák, valamint a hibridómák szülő mieloma sejtvonala, nevezetesen az NS-1 genomi DNS-ét izoláljuk, és EcoRI-gyel emésztjük. A DNS-eket azután ugyanazon az agaróz gélen frakcionáljuk. A vándorlás után a géleket Southern folt elemzéssel elemezzük, vizsgáló mintaként 32P-vel jelzett 0.7 kb hosszúságú olyan Xbal-EcoRI DNS fragmenst használunk, amely a rágcsáló nehézlánc fokozót kódolja [Heinrich és munkatárai: J. of Immunoi. 143, 3589 (1989)]. Hibridizáció után a gélen háromféle típusú sáv jelenik meg. amint a 2. ábra mutatja. A 6.5 kb-s EcoRI fragmens mindegyik sejtvonal, még az NS-1 szülő mieloma sejtvonal DNS-emésztményében is jelen van, így ez nem érdekes. A 2.9 kb-s EcoRI fragmens csak az RFT5-IgGl DNS-emésztményében detektálható, és feltételezhető, hogy ez egy abnormális génátrendeződés eredménye. A 6,8 kb-s EcoRI fragmens nincs jelen az NS-1 szülő sejtvonal DNS-emésztményében, így ez egy választott fragmens. és a további tisztítását preparatív agaróz gélelektroforézissel végezzük.
A kb. 5-7 kb hosszúságú DNS fragmenseket a ZAP bakteriofág (Stratagene) EcoRI restrikciós helyébe klónozzuk. A fenti vizsgálómintával 6xl06 rekombináns fágot vizsgálunk át, és ebből 11 klónról derül ki, hogy hibridizálnak. A 11 klón DNS beiktatását fág lemez lizatumon polimeráz láncreakcióval (PCR) felerősítjük. printerként egy első, a rágcsáló J2 gént kódoló nukleotidot és egy második, az RFT5 nehézlánc első 7 aminosavát kódoló (a szekvenciát előzőleg meghatározzuk) nukleotidot használunk. A második prímért úgy határozzuk meg. hogy figyelembe vesszük a gének leggyakrabban használt kodonjail. A 11 klónből kapott DNS fragmenseket Southern folt elemzéssel elemezzük. vizsgálómintaként olyan oligonukleotidot használunk, amely az RFT5 nehézlánc 20. és 27. aminosavai közötti aminosav-szekvenciát kódolja, amelyet szintén a gének leggyakrabban használt kodonjainak figyelembevételével határozunk meg. A mintával kilenc azonos fág-klónt mutatunk ki. A variábilis tartományt kódoló inszertált DNS-szakasz szekvenciáját a didezoxi-láncterminációs módszerrel meghatározzuk. A szekvenciát az 1. szekvencián mutatjuk be.
2. példa
Kiméra RFT5 nehézlánc gén konstruálása
A kilenc fág-klón egyikéből származó DNS emésztésével kapott 6 kb-s EcoRI fragmenst. amely tartalmazza az RFT5 nehézlánc variábilis tartományának a génjét (beleértve a promotert és a fokozót is) a pSV2 eukarióta kifejező vektor neo-human Yj konstans részének (Heinrich és munkatársai id. h.) EcoRI restrikciós helyébe klónozzuk, ahogyan a 3A ábra mutatja. Ezután meghatározzuk a génnek azt a nukleotid-szekvenciáját, amely az RFT5 nehézlánc variábilis tartományt kódolja, így kizárjuk annak a lehetőségét, hogy a plazmid sokszorozódása során ebben a génben mutáció következik be.
3. példa
Az RFT5 könnyűlánc variábilis tartományát kódoló gén klónozása
Az RFT5, RFT5* és RFT4 hibridómák, valamint az NS-1 szülő sejtvonal genomi DNS-ét izoláljuk, és EcoRI-gyel emésztjük. Az emésztett DNS-eket azután ugyanazon az agaróz gélen frakcionáljuk. Vándorlás után az agaróz gélt Southern folt elemzéssel elemezzük, vizsgálómintaként 32P-vel jelzett, az öt JK egér gént és a Ck gént tartalmazó DNS-t használunk.
Hibridizálás után a gélen a foltok három nagyobb, mintegy 12, 16 és 18 kb hosszúságú típusát találjuk, amint ezt a 2B ábra mutatja. Csak a legnagyobb fragmensek specifikusak az RFT5 hibridómára. A mintegy 18 kb-s, méret alapján frakcionált EcoRI fragmenseket EMBL4 fágba (Stratagene) klónozzuk. A fenti mintával 7X105 rekombináns fág kiónt vizsgálunk át, így két, ugyanazt a 18 kb-s inszertet tartalmazó klónról derül ki, hogy hibridizálnak. Egy 4,4 kb hosszúságú EcoRI-Xbal alfragmensről kimutatjuk, hogy tartalmazza a teljes, az RFT5 könnyűlánc variábilis tartományát kódoló gént, ezt az alfragmenst a pGEM4 plazmidba (Stratagene) klónozzuk. A 4,4 kb-s fragmens szekvenciáját meghatározzuk. Meghatározzuk a 4,4 kb-s DNS beiktatás azon részének a szekvenciáját, amely a variábilis tartományt kódolja. A szekvenciát a 2. szekvencián mutatjuk be.
4. példa
Kiméra RFT5 könnyűlánc gén konstruálása
Egy 1,1 kb hosszúságú Xbal-Xbal fragmenst, amely a rágcsáló nehézlánc fokozót (Heinrich és munkatársai id. h.) kódolja, a humán κ konstans részt kódoló HindlII-Sphl fragmenssel együtt az mpl8 fágba (Stratagene) klónozzuk. A restrikciós helyek mutagenezissel végzett megszüntetése után a rágcsáló nehézlánc fokozó (Εμ) és a humán κ konstans rész (huCK) szekvenciáját tartalmazó, feltöltött EcoRI-HindlII fragmenst a pSV2-DHFR feltöltött EcoRI-BamHI helyébe klónozzuk. A pSV2-DHFR-t úgy állítjuk elő, hogy a pSV2-neo BamHI-HindlII fragmensét a DHFR gén egz BAMHI-HindlII fragmensével cseréljük ki.
A 3. példa szerinti módon kapott 4,4 kb-s EcoRIXbal fragmenst azután a pSV2-DHFR-Ep-huCK plazmidba iktatjuk be.
5. példa
RFT5 kiméra antitest kifejezése
A 2. és 4. példa szerinti módon kapott plazmidokat elektroporációval, egy Biorad gyártmányú gén pulzáló berendezés segítségével SP2/0 egér mieloma sejtvonal10
HU 211 885 A9 ba (ATCC CRL 1581) együtt átfertőzzük. Ismeretes, hogy ezzel a módszerrel nagy gyakorisággal lehet stabil transzfektánsokat előállítani. Az SP2/0 sejtvonal nem termel endogén nehéz- és könnyűláncokat, és a geneticinre (G 418) 0,8 mg/1 koncentrációnál érzékeny. 5
Az SP2/0 sejteket a szokásos növesztő tápközegben (RPMI+10% FCS+5xlO~5 β-merkapto-etanol) növesztjük, a növekedés log-fázisában összegyűjtjük, és elektroporációs pufferrel (Bio-Rad) mossuk. A sejtkoncentrációt 2xlO7 sejt/ml értékre állítjuk be. 0,8 ml sejt-szuszpen- 10 zióhoz 15-20 pg-ot adunk minden plazmidból. Az elegyet jégre helyezzük, és 10 percig állni hagyjuk. Ezután a sejteknek egy elektromos lökést adunk (280 Volt; 25 pF), és további 15 percig állni hagyjuk. A sejteket szokásos növesztő tápközegbe visszük át, és 37 °C-on szén-dioxi- 15 dós inkubátorban inkubáljuk.
Három napig tartó inkubálás után a sejteket G 418 rezisztencia alapján szelektáljuk. A sejteket új, 1,4 mg/ml G 418-t tartalmazó tápközegben szuszpendáljuk. A tenyészetekben 10-14 napos inkubálás után G 418 jelenlé- 20 tében sejtek növekednek. Két hétig végzett inkubálás után az egybefüggő tenyészetek felülúszóit humán IgG kifejezésére nézve szendvics típusú ELISA-val vizsgáljuk (anti-humán K-könnyűlánc/felülúszó/anti-humán IgG-alkálikus foszfatáz konjugátum). 25
A vizsgálatok azt mutatják, hogy minden tenyészetben 50 és 500 ng/ml között változó koncentrációban komplett antitest molekula választódik ki.
Azon sejtek kiválogatására, amelyekben a DHFR gén felerősödött, és így ezek a kívánt antitestet nagy mennyi- 30 ségben választják ki, a metotrexát (MTX) rezisztenciára nézve kétféle, az alábbiakban ismertetett válogatási eljárást végzünk. E célból a G 418 rezisztens törzs tenyészeteket kétfelé osztjuk, és A eljárás (MTX emelkedés faktora 2 vagy 2.5). illetve B eljárás (MTX emelkedés faktora 35
5) szerinti felerősítést végzünk.
| A eljárás | B eljárás |
| 25 pmól/l MTX 1 | |
| 100 pmól/l MTX |
Az egyes felerősítési lépések abban állnak, hogy a sejteket 2x105 sejt/ml sejtsűrűséggel szokásos, de
1,4 mg/ml G 418-cal és megválasztott koncentrációban MTX-szel kiegészített tápközegre oltjuk. 72 óra hoszszat végzett inkubálás után a sejteket és a felülúszót elválasztjuk. Az antitest elválasztást ELISA vagy HPLC módszerrel vizsgáljuk, amely utóbbi esetben protein A oszlopot használunk.
A 4A és 4B ábra néhány transzfektáns-gyűjtemény antitest termelékenységét mutatja. A legtöbb transzfektáns egy bizonyos MTX koncentrációnál ér el maximális specifikus antitest termelést. A legjobb termelékenységű transzfektánsokat határhígítással klónozzuk. Néhány száz vizsgált klónból a 15 legjobban termelő kiónt kiválasztjuk. A kiónok termelékenysége 72 óra alatt 30-50 mg MAb/109 sejt.
Az antitestet a tenyészet felülúszójából protein A affinitás oszlopon tisztítjuk.
/. SZEKVENCIA
| Tárgy: A szekvencia | Az RFT5 antitest immunglobulin nehézlánc variábilis tartománya |
| típusa: A molekula | Nukleotid-szekvencia és az annak megfelelő aminosav-szekvencia |
| típusa: | Genomi DNS |
| Hosszúság: | 492 nukleotid |
| Eredeti forrás: | Rágcsáló hibridóma |
| A eljárás | B eljárás |
| 100 nmól/1 MTX 1 | 200 nmól/1 MTX 1 |
| 250 nmól/1 MTX 1 | 1 pmól/l MTX 1 |
| 500 nmól/1 MTX 1 | 5 μ mól/1 MTX 1 |
| 1 pmól/l MTX 1 | 25 pmól/l MTX 1 |
| 2,5 pmól/] MTX 1 | 100 pmól/l MTX |
| 5 gmól/l MTX 1 | |
| 10pmól/l MTX 1 |
A nukleotid tulajdonságai:
- egy intron a 47. és a 130. nukleotid között,
- V szegmens gén: 142-435. nukleotid,
- D szegmens gén: 436-447. nukleotid,
- J szegmens gén: 448—492. nukleotid.
Az aminosav-szekvencia jellemzői:
- vezető peptid a -19. és a -1. aminosav között,
- FR1: 1-30. aminosav,
- CDR1: 31-35. aminosav,
- FR2: 36-49. aminosav,
- CDR2: 50-66. aminosav,
- FR3: 67-98. aminosav,
- CDR3: 99-106. aminosav,
- FR4: 107-117. aminosav.
CTG TCG GTA ATT TCA G 46 Leu Ser Val Ile Ser
ATG GAA TGT AAC TGG ATA CTT CCT TTT ATT
Met Glu Gys Asn Trp Ile Leu Pro Phe Ile
-15 -10
HU 211 885 A9
GTAAGGGGCT CACCAGTTCC ATATCTGAAA GAGGATACAG GGTCTGAAGT GACAATGACA 106
TCTACTCTGC TGTTCTCTCC ACAG GG GTC TAC TCA GAG GTT CAG CTC CAG 156
Gly Val Tyr Ser Glu Val Gin Leu Gin
| CAG | TCT | GGG | ACT | GTG | CTG | GCT | AGG | CCT |
| Gin | Ser | Glu | Thr | Val 10 | Leu | Alá | Arg | Pro |
| TGC | AAG | GCT | TCT | GGC | TAC | AGC | TTT | ACC |
| Cys | Lys | Alá | Ser 25 | Gly | Tyr | Ser | Phe | Thr 30 |
| AAA | CAG | AGG | CCT | GGA | CAG | GGT | CTA | GAA |
| Lys | Gin | Arg 40 | Pro | Gly | Gin | Gly | Leu 45 | Glu |
| GGA | AAT | AGT | GAT | ACT | AGT | TAC | AAC | CAG |
| Gly | Asn 55 | Ser | Asp | Thr | Ser | Tyr 60 | Asn | Gin |
| CTG | ACT | GCA | GTC | ACA | TCC | GCC | AGC | ACT |
| Leu 70 | Thr | Alá | Val | Thr | Ser 75 | Alá | Ser | Thr |
| CTG | ACA | CAT | GAG | GAC | TCT | GCG | GTC | TAT |
| Leu | Thr | His | Glu | Asp 90 | Ser | Alá | Val | Tyr |
| TAC | TAC | TTT | GAC | TTC | TGG | GGC | CAA | GGC |
| Tyr | Tyr | Phe | Asp | Phe | Trp | Gly | Gin | Gly |
105 110
-11 5
| GGG Gly 15 | GCT Alá | TCC Ser | GTG Val | AAG Lys | ATG Met 20 | TCC Ser | 204 |
| AGG | TAC | TGG | ATG | CAC | TGG | ATA | 252 |
| Arg | Tyr | Trp | Met | His 35 | Trp | Ile | |
| TGG | ATT | GGT | GCT | ATT | TAT | CCT | 300 |
| Trp | Ile | Gly | Alá 50 | I le | Tyr | Pro | |
| AAG | TTC | GAG | GGC | AAG | GCC | AAA | 348 |
| Lys | Phe | Glu 65 | Gly | Lys | Alá | Lys | |
| GCC | TAC | ATG | GAG | CTC | AGC | AGC | 396 |
| Alá | Tyr 80 | Met | Glu | Leu | Ser | Ser 85 | |
| TAC | TGT | TCA | AGA | GAC | TAC | GGC | 444 |
| Tyr 95 | Cys | Ser | Arg | Asp | Tyr 100 | Gly | |
| ACC | ACT | CTC | ACA | GTC | TCC | TGA | 492 |
| Thr | Thr | Leu | Thr | Val | Ser | Ser |
115
2. SZEKVENCIA Táiüv:
A szekvencia típusa:
A molekula típusa: Hosszúság:
Eredeti forrás:
Az RFT5 antitest immunglobulin könnyűlánc variábilis tartománya Nukleotid-szekvencia és az annak megfelelő aminosav-szekvencia Genomi DNS
455 nukleotid
Rágcsáló hibridóma
A nukleotid tulajdonságai:
- egy intron az 50. és a 266. nukleotid között,
- V szegmens gén: 244-519. nukleotid.
- J2 szegmens gén: 520-455. nukleotid.
Az aminosav-szekvencia jellemzői:
- vezető peptid a -22. és a -1. aminosav között,
- FR1': 1-23. aminosav,
- CDR1': 24-33. aminosav,
- FR2': 34-48. aminosav.
- CDR2': 49-55. aminosav,
- FR3': 56-87. aminosav,
- CDR3': 88-94. aminosav,
- FR4 : 95-104. aminosav.
ATG GAT TTT Met Asp Phe
-2 0
CAG GTG CAG Gin Val Gin
ATT TTC AGC Ile Phe Ser
TTC CTG CTA ATC AGT GCC TCA G 49 Phe Leu Leu Ile Ser Alá Ser
HU 211 885 A9
GTAACAGAGG GCAGGGAATT TGAGATCAGA ATCCAACCAA AATTATTTTC CCTGGGGAAT 109
TTGAGTCTAA AATACAGTTT TTTTTTCTTT TTCTTCATCT GAATGTTGGG TGGTATAAAA 169
TTATTTTTTGT
TTCTCTATTT CTACTAATCC CTTTCTCTCT ATTTTGCTTT
TTTCTAG
226
| TC Val | ATA Ile -5 | CTG Leu | TCC Ser | AGA Arg | GGA CAA Gly Gin -1 1 | ATT Ile | GTT Val | CTC Leu | ACC Thr 5 | CAG Gin | TCT Ser | CCA Pro | GCA Alá | ATC Ile 10 | 273 |
| ATG | TCT | GCA | TCT | CCA | GGG GAG | AAG | GTC | ACC | ATG | ACC | TGC | AGT | GCC | AGC | 321 |
| Met | Ser | Alá | Ser | Pro | Gly Glu | Lys | Val | Thr | Met | Thr | Gys | Ser | Alá | Ser | |
| 15 | 20 | 25 | |||||||||||||
| TCA | AGT | ATA | AGT | TAC | ATG CAG | TGG | TAC | CAG | CAG | AAG | CCA | GGC | ACC | TCC | 369 |
| Ser | Ser | Ile | Ser | Tyr | Met Gin | Trp | Tyr | Gin | Gin | Lys | Pro | Gly | Thr | Ser | |
| 30 | 35 | 40 | |||||||||||||
| CCC | AAA | AGA | TGG | ATT | TAT GAC | ACA | TCC | AAA | CTG | GCT | TCT | GGA | GTC | CCT | 417 |
| Pro | Lys | Arg | Trp | Ile | Tyr Asp | Thr | Ser | Lys | Leu | Alá | Ser | Gly | Val | Pro | |
| 45 | 50 | 55 | |||||||||||||
| GCT | CGC | TTC | AGT | GGC | AGT GGG | TCT | GGG | ACC | TCT | TAT | TCT | CTC | ACA | ATC | 465 |
| Alá | Arg | Phe | Ser | Gly | Ser Gly | Ser | Gly | Thr | Ser | Tyr | Ser | Leu | Thr | Ile | |
| 60 | 65 | 70 | |||||||||||||
| AGC | AGC | ATG | GAG | GCT | GAA GAT | GCT | GCC | ACT | TAT | TAC | TGC | CAT | CAG | CGG | 513 |
| Ser | Ser | Met | Glu | Alá | Glu Asp | Alá | Alá | Thr | Tyr | Tyr | Gys | His | Gin | Arg | |
| 75 | 80 | 85 | 90 | ||||||||||||
| AGT | AGT | TAC | ACG | TTC | GGA GGG | GGG | ACC | AAA | CTG | GAA | ATA | AAA | 555 | ||
| Ser | Ser | Tyr | Thr | Phe | Gly Gly | Gly | Thr | Lys | Leu | Glu | Ile | Lys | |||
| 95 | 100 |
1. táblázat
| Terület | Elhelyezkedés a nehézláncon | Elhelyezkedés a könynyűláncon |
| FR1 | aminosavak 1-től 30ig (adott esetben egy maradék a 0-helyzetben) | aminosavak 1-től 23ig (adott esetben egy maradék a 0-helyzetben és egy deléció a λ lánc 10-helyzetében) |
| CDR1 | aminosavak 31-től 35ig (az esetleges inszertek számozása 35A és 35B) | aminosavak 24-től 34ig (az esetleges inszertek számozása 27A, B, C, D, E és F) |
| FR2 | aminosavak 36-tól 49-ig | aminosavak 35-től 49-ig |
| CDR2 | aminosavak 50-től 60ig (az esetleges inszertek számozása 52A, B és C) | aminosavak 50-től 56ig |
| FR? | aminosavak 66-tól 94-ig (az esetleges inszertek számozása 82A, B és C) | aminosavak 57-től 88- >g |
| CDR3 | aminosavak 95-től 102-ig (az esetleges inszertek számozása 100A, B,C,D, E,F, G,H. I.Jés K) | aminosavak 89-től 97ig (az esetleges inszertek számozása 95A, B.C, D, Eés F) |
| FR4 | aminosavak 103-tól 113-ig | aminosavak 98-tól 107-ig (az esetleges inszert száma 106A) |
SZABADALMI IGÉNYPONTOK
Claims (20)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Legalább egy olyan antigén-kötőhelyet tartalmazó CD25 kötő molekula, amely legalább egy olyan tartományt tartalmaz, amely sorra CDR1, CDR2 és CDR3 hipervariábilis tartományokból; az említett40 CDR1 aminosav-szekvenciája Arg-Tyr-Trp-Met-His, az említett CDR2 aminosav-szekvenciája Ala-Ile-TyrPro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln-Lys-PheGlu-Gly, és az említett CDR3 aminosav-szekvenciája Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe; vagy ezek közvet45 len ekvivalenseiből áll.
- 2. Az 1. igénypont szerinti CD25 kötő molekula, amely legalább egy olyan antigén-kötőhelyet tartalmaz, amely a következő elemekből vagy ezek közvetlen ekvivalenseiből áll:50 a) egy első tartomány, amely rendre CDR 1, CDR2 ésCDR3 hipervariábilis területekből áll; az említettCDR1 aminosav-szekvenciája Arg-Tyr-Trp-MetHis, az említeti CDR2 aminosav-szekvenciája AlaIle-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-Asn-Gln55 Lys-Phe-Glu-Gly, és az említett CDR3 aminosavszekvenciája Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-Asp-Phe, ésb) egy második tartomány, amely rendre CDR1',CDR2’ és CDR3’ területekből áll; az említett 60 CDR1’ aminosav-szekvenciája Ser-Ala-Ser-Ser13HU 211 885 A9Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-Gln, az említett CDR2’ aminosav-szekvenciája Asp-Thr-Ser-Lys-Leu-AIa-Ser, és az említett CDR3’ aminosav-szekvenciája His-GlnArg-Ser-Ser-Tyr-Thr.
- 3. Az 1. igénypont szerinti CD25 kötő molekula, amely legalább egy olyan antigénkötő-helyet vagy ennek közvetlen ekvivalensét tartalmazza, amely vagy egy az 1. szekvencián az 1-117. helyzetben levő aminosav-szekvenciával lényegében azonos aminosavszekvenciával rendelkező tartományt, vagy egy fenti első tartományt és egy a 2. szekvencián az 1-104. helyzetben levő aminosav-szekvenciával lényegében azonos aminosav-szekvenciával rendelkező tartományt tartalmaz.
- 4. A 2. vagy 3. igénypont szerinti CD25 kötő molekula, amely legalábba) egy immunglobulin nehézláncot vagy annak fragmensét, amely (i) egy variábilis tartományt, amely sorra CDR1. CDR2 és CDR3 hipervariábilis tartományokat és (ii) egy humán nehézlánc konstans részt vagy annak fragmensét tartalmazza; az említett CDR1 aminosav-szekvenciája Arg-Tyr-TrpMet-His, az említett CDR2 aminosav-szekvenciája Ala-Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Ser-Asp-Thr-Ser-Tyr-AsnGln-Lys-Phe-Glu-Gly, és az említett CDR3 aminosav-szekvenciája Asp-Tyr-Gly-Tyr-Tyr-Phe-AspPhe; ésb) egy immunglobulin könnyűláncot vagy annak fragmensét tartalmazza, amely (i) egy variábilis tartományt. amely sorra CDR1', CDR2' és CDR3’ hipervariábilis tartományokat és (ii) egy humán könnyűlánc konstans részt vagy annak fragmensét tartalmazza, az említett CDR1’ aminosav-szekvenciája Ser-Ala-Ser-Ser-Ser-Ile-Ser-Tyr-Met-Gln, az említett CDR2’ aminosav-szekvenciája Asp-ThrSer-Lys-Leu-Ala-Ser, és az említett CDR3' aminosav-szekvenciája His-Gin-Arg-Ser-Ser-Tyr-Thr;vagy ezek közvetlen ekvivalensét tartalmazza.
- 5. A 4. igénypont szerinti CD25 kötő molekula, amely legalábba) egy nehézláncot, amely egy az 1. szekvencián bemutatott aminosav-szekvencia 1-117 aminosavának megfelelő aminosav-szekvenciájú variábilis tartományt és egy humán nehézlánc konstans részt tartalmaz, ésb) egy könnyűláncot, amely egy a 2. szekvencián bemutatott, 1. helyzetben levő glutaminsavtól a 104. helyzetben levő glutaminsavig lerjedő aminosavszekvenciának megfelelő aminosav-szekvenciájú variábilis tartományt és egy humán könnyűlánc konstans részt tartalmaz, vagy ezek közvetlen ekvivalenseit tartalmazza.
- 6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti CD25 kötő molekula. amelyben a humán nehézlánc konstans rész vagy annak fragmense γ, típusú, és a humán könnyűlánc konstans része vagy annak fragmense κ típusú.
- 7. DNS molekula, amely sorrendben az 1. szekvencián bemutatott CDR1. CDR2 és CDR3 hipervariábilis tartományokat kódoló nukleotid-szekvenciát tartalmazza.
- 8. A 7. igénypont szerinti DNS konstrukció, egy nehézláncot kódol, ésa) egy első részből, amely egy variábilis tartományt kódol, amely felváltva keret-területeket és hipervariábilis területeket tartalmaz, az említett hipervariábilis területek sorrendben CDR1, CDR2 és CDR3, amelyeknek aminosav-szekvenciáját az 1. szekvencia ábrázolja; az első rész a variábilis tartomány első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik és a variábilis tartomány utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, ésb) egy második részből áll, amely egy nehézlánc konstans részt vagy annak fragmensét kódolja, amely a nehézlánc konstans részének első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és a konstans rész vagy fragmensének utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, amelyet egy értelmetlen kodon követ.
- 9. A 8. igénypont szerinti DNS konstrukció, amely egy első részből, amely egy variábilis tartományt kódol, amelynek aminosav-szekvenciáját az 1. szekvencia az 1-helyzetben levő aminosavtól kezdve a 117helyzetben levő aminosavig terjedően ábrázolja, vagy annak közvetlen ekvivalenséből áll.
- 10. A 7. igénypont szerinti DNS konstrukció, amely egy könnyűláncot vagy annak fragmensét kódolja, ésa) egy első részből, amely egy variábilis tartományt kódol, amely felváltva keret-területeket és hipervariábilis területeket tartalmaz, az említett hipervariábilis területek sorrendben CDRT, CDR2’ és CDR3’. amelyeknek aminosav-szekvenciáját a 2. szekvencia ábrázolja; az első rész a variábilis tartomány első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik és a variábilis tartomány utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, ésb) egy második részből áll, amely egy könnyűlánc konstans részt vagy annak fragmensét kódolja, amely a könnyűlánc konstans részének az első aminosavát kódoló kodonnal kezdődik, és a konstans rész vagy fragmensének utolsó aminosavát kódoló kodonnal végződik, amelyet egy értelmetlen kodon követ.
- 11. A 10. igénypont szerinti DNS konstrukció, amely egy első részből, amely egy variábilis tartományt kódol, amelynek aminosav-szekvenciáját a 2. szekvencia az 1-helyzetben levő aminosavtól kezdve az 104-helyzetben levő aminosavig terjedően ábrázolja, vagy annak közvetlen ekvivalenséből áll.
- 12. Eljárás többláncú CD25 kötő molekula előállítására, azzal jellemezve, hogy (i) egy olyan organizmust tenyésztünk, amely egy a 8. vagy 9. igénypont szerinti DNS konstrukcióval és egy a 10. vagy 11. igénypont szerinti DNS konstrukcióval transzformálva van. és (ii) a tcnyészléből kinyerjük az aktív CD25 kötő molekulát.
- 13. Gyógyszerkészítmény a humán immunrendszer immunszuppressziójára, illetve CD25+ sejtek rosszindulatú voltának kezelésére, illetve HÍV fertőzés kezelésére, azzal jellemezve, hogy valamely, 1-6.HU 211 885 A9 igénypontok bármelyike szerinti CD25 kötő molekulát és farmakológiailag elfogadható hordozó- vagy hígítószert tartalmaz.
- 14. Immunszuppresszív kompozíció, azzal jellemezve. hogy legalább egy az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti CD25 kötő molekulát és legalább egy, az aktivált T-sejtekre jellemző, a CD25-től eltérő antigénhez tartozó antigén kötő molekulát tartalmaz.
- 15. A 14. igénypont szerinti kompozíció, azzal jellemezve, hogy még ciklosporin A-t is tartalmaz.
- 16. A 14. vagy 15. igénypont szerinti kompozíció, azzal jellemezve, hogy a CD25-től eltérő antigénhez tartozó kötő molekulaként CD7 antitestet tartalmaz.
- 17. A 14-16. igénypontok bármelyike szerinti kompozíció, azzal jellemezve, hogy antitestekként kiméra antitesteket tartalmaz.
- 18. Iker-csomag, azzal jellemezve, hogy külön egységdózis formájában - az adagoláshoz való keverésre vagy egy időben történő adagolásra vonatkozó utasításokkal együtt - legalább két különböző, az akti5 vált T-sejtekre jellemző antigént felismerő antitestet tartalmaz, az antitestek egyike valamely az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti CD25 kötő molekula.
- 19. A 18. igénypont szerinti iker-csomag, azzal jellemezve, hogy még egy immunszuppresszív ha10 tóanyag egységdózisát is tartalmazza.
- 20. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti CD25 kötő molekulák alkalmazása emlősök immunrendszerének szuppressziójára szolgáló gyógyszerkészítmény előállítására egy olyan antigén kötő molekulával kom15 binálva, amely a CD25-IŐ1 eltérő, aktivált T-sejtekre jellemző antigént ismer fel.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB909005962A GB9005962D0 (en) | 1990-03-16 | 1990-03-16 | Improvements in or relating to organic compounds |
| GB909019323A GB9019323D0 (en) | 1990-09-05 | 1990-09-05 | Improvements relating to immunosuppression |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU211885A9 true HU211885A9 (en) | 1995-12-28 |
Family
ID=26296798
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU91761A HUT60768A (en) | 1990-03-16 | 1991-03-08 | Process for producing cd25 fixing molecules |
| HU95P/P00213P HU211885A9 (en) | 1990-03-16 | 1995-06-15 | Cd 25 binding molecules |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU91761A HUT60768A (en) | 1990-03-16 | 1991-03-08 | Process for producing cd25 fixing molecules |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6521230B1 (hu) |
| EP (1) | EP0449769B1 (hu) |
| JP (1) | JP2585475B2 (hu) |
| AT (1) | ATE98655T1 (hu) |
| AU (1) | AU635401B2 (hu) |
| CA (1) | CA2038279C (hu) |
| CY (1) | CY1977A (hu) |
| DE (2) | DE69100768T2 (hu) |
| DK (1) | DK0449769T3 (hu) |
| ES (1) | ES2061216T3 (hu) |
| FI (3) | FI103131B (hu) |
| HK (1) | HK53797A (hu) |
| HU (2) | HUT60768A (hu) |
| IE (1) | IE65062B1 (hu) |
| IL (1) | IL97545A (hu) |
| LU (1) | LU90383I2 (hu) |
| MY (1) | MY106161A (hu) |
| NL (1) | NL990008I2 (hu) |
| NZ (1) | NZ237434A (hu) |
| PL (1) | PL170321B1 (hu) |
| PT (1) | PT97034B (hu) |
| SA (1) | SA92120358B1 (hu) |
| TW (1) | TW213486B (hu) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5672683A (en) * | 1989-09-07 | 1997-09-30 | Alkermes, Inc. | Transferrin neuropharmaceutical agent fusion protein |
| US5977307A (en) * | 1989-09-07 | 1999-11-02 | Alkermes, Inc. | Transferrin receptor specific ligand-neuropharmaceutical agent fusion proteins |
| WO1993010819A1 (en) * | 1991-11-26 | 1993-06-10 | Alkermes, Inc. | Process for the preparation of transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates |
| US6329508B1 (en) | 1989-09-07 | 2001-12-11 | Alkermes, Inc. | Transferrin receptor reactive chimeric antibodies |
| US6106834A (en) | 1993-06-02 | 2000-08-22 | Research Corporation Technologies, Inc. | Use of anti-CD45 leukocyte antigen antibodies for immunomodulation |
| US6024957A (en) * | 1993-06-02 | 2000-02-15 | Research Corporation Technologies, Inc. | Immunomodulators and methods for the prevention and reversal of organ transplant rejection using same |
| US6015555A (en) * | 1995-05-19 | 2000-01-18 | Alkermes, Inc. | Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates |
| US6893636B2 (en) * | 1997-02-20 | 2005-05-17 | Biogen Idec Ma Inc. | Gamma-1 and gamma-3 anti-human CD23 monoclonal antibodies and use thereof as therapeutics |
| US7033589B1 (en) * | 1997-02-20 | 2006-04-25 | Biogen Idec Ma Inc. | γ-1 anti-human CD23 monoclonal antibodies and use thereof as therapeutics |
| DE69835216T2 (de) | 1997-07-25 | 2007-05-31 | Nichia Corp., Anan | Halbleitervorrichtung aus einer nitridverbindung |
| AUPP221098A0 (en) * | 1998-03-06 | 1998-04-02 | Diatech Pty Ltd | V-like domain binding molecules |
| EP1100829B1 (en) * | 1998-07-27 | 2007-09-05 | Novartis AG | Use of basiliximab in the treatment of rheumatoid arthritis or skin diseases |
| US6406695B1 (en) | 1998-10-30 | 2002-06-18 | University Of Miami | Treatment of hepatitis C by administration of anti-IL-2 receptor monoclonal antibody |
| WO2000025816A1 (en) * | 1998-10-30 | 2000-05-11 | The University Of Miami | Treatment of hepatitis c by administration of anti-il-2 receptor monoclonal antibody and an antiviral compound |
| GB9825632D0 (en) | 1998-11-23 | 1999-01-13 | Novartis Ag | Organic compounds |
| FR2793691B1 (fr) * | 1999-05-21 | 2003-10-03 | Hippocampe | Utilisation d'anticorps reconnaissant le recepteur de l'interleukine-2 dans la prevention et/ou le traitement des infections par les virus du sida |
| GB0007911D0 (en) * | 2000-03-30 | 2000-05-17 | Novartis Ag | Organic compounds |
| IL158060A0 (en) * | 2001-04-06 | 2004-03-28 | Univ Bristol | Use of cd25 binding molecules in steroid-resistant patients |
| US7365168B2 (en) * | 2002-10-15 | 2008-04-29 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
| US7361740B2 (en) * | 2002-10-15 | 2008-04-22 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis |
| JP4033390B2 (ja) * | 2002-10-30 | 2008-01-16 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 不死化ナチュラルキラー細胞株 |
| MXPA05005160A (es) * | 2002-11-15 | 2005-07-22 | Genmab As | Anticuerpos monoclonales humanos contra la cd25. |
| EP1460088A1 (en) | 2003-03-21 | 2004-09-22 | Biotest AG | Humanized anti-CD4 antibody with immunosuppressive properties |
| CA2545539A1 (en) * | 2003-10-15 | 2005-04-28 | Pdl Biopharma, Inc. | Alteration of fc-fusion protein serum half-lives by mutagenesis of positions 250, 314 and/or 428 of the heavy chain constant region of ig |
| CU23297A1 (es) * | 2004-11-16 | 2008-07-24 | Ct De Inmunologa A Molecular | Formulaciones inmunoterapã0/00uticas para la inducciã"n de autoanticuerpos bloqueadores de la uniã"n de interleucina-2 a su receptor. su uso en el tratamiento del cã ncer |
| GB0507696D0 (en) * | 2005-04-15 | 2005-05-25 | Novartis Ag | Organic compounds |
| EA016429B1 (ru) | 2005-12-30 | 2012-04-30 | Мерк Патент Гмбх | Антитела против cd19 с пониженной иммуногенностью |
| RU2540018C2 (ru) | 2008-03-13 | 2015-01-27 | Биотест Аг | Средство для лечения заболевания |
| CN102027016A (zh) | 2008-03-13 | 2011-04-20 | 生物测试股份公司 | 一种治疗疾病的试剂 |
| WO2009121690A1 (en) | 2008-03-13 | 2009-10-08 | Biotest Ag | Agent for treating disease |
| BR112012009828B8 (pt) | 2009-10-26 | 2022-10-25 | Hoffmann La Roche | Método para a produção de uma imunoglobulina glicosilada e seu uso |
| GB0920944D0 (en) | 2009-11-30 | 2010-01-13 | Biotest Ag | Agents for treating disease |
| US9580501B2 (en) | 2011-12-16 | 2017-02-28 | Synthon Biopharmaceuticals B.V. | Anti-TNF alpha monoclonal secretory IgA antibodies and methods for treating inflammatory diseases |
| RS53818B1 (en) | 2012-10-12 | 2015-06-30 | Spirogen Sàrl | PIROLOBENZODIAZEPINI I NJIHOVI conjugated |
| CA2905181C (en) | 2013-03-13 | 2020-06-02 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof for providing targeted therapy |
| WO2016037644A1 (en) | 2014-09-10 | 2016-03-17 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| EP3223854A1 (en) | 2014-11-25 | 2017-10-04 | ADC Therapeutics SA | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| US9993452B2 (en) | 2014-12-05 | 2018-06-12 | Vireo Systems, Inc. | Compositions and methods for treatment of inflammation |
| US20170157215A1 (en) | 2015-12-04 | 2017-06-08 | Jomoco, Corp. | Compositions and methods to mitigate or prevent an immune response to an immunogenic therapeutic molecule in non-human primates |
| WO2018069289A1 (en) | 2016-10-11 | 2018-04-19 | Medimmune Limited | Antibody-drug conjugates with immune-mediated therapy agents |
| CA3057744A1 (en) | 2017-04-20 | 2018-10-25 | Adc Therapeutics Sa | Combination therapy with an anti-cd25 antibody-drug conjugate |
| WO2019224275A1 (en) | 2018-05-23 | 2019-11-28 | Adc Therapeutics Sa | Molecular adjuvant |
| GB201811364D0 (en) | 2018-07-11 | 2018-08-29 | Adc Therapeutics Sa | Combination therapy |
| CN113924316B (zh) * | 2019-06-10 | 2022-06-21 | 山东博安生物技术股份有限公司 | 抗cd25抗体及其应用 |
| GB201917254D0 (en) | 2019-11-27 | 2020-01-08 | Adc Therapeutics Sa | Combination therapy |
| WO2022079211A1 (en) | 2020-10-16 | 2022-04-21 | Adc Therapeutics Sa | Glycoconjugates |
| WO2022165419A1 (en) | 2021-02-01 | 2022-08-04 | Kyverna Therapeutics, Inc. | Methods for increasing t-cell function |
| GB202102396D0 (en) | 2021-02-19 | 2021-04-07 | Adc Therapeutics Sa | Molecular adjuvant |
| WO2022221669A1 (en) | 2021-04-15 | 2022-10-20 | Kyverna Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for treating disease using targeted foxp3+cd4+ t cells and cellular suicide agents |
| CN114957473B (zh) * | 2022-04-25 | 2023-05-16 | 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 | 一种对可溶性cd25蛋白含量检测的酶联免疫检测试剂盒 |
| WO2024006961A1 (en) | 2022-07-01 | 2024-01-04 | Neoleukin Therapeutics, Inc. | Neo-2/15 variants and uses thereof for preferentially stimulating t-regulatory cells |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8605316D0 (en) * | 1986-03-04 | 1986-04-09 | Royal Free Hosp School Med | Immunosuppression |
| GB2188941B (en) | 1986-04-14 | 1990-06-06 | Bayer Ag | Monoclonal antibodies recognizing human interleukin-2-receptor |
| DE3850750T2 (de) * | 1987-12-02 | 1994-12-22 | Becton Dickinson Co | Verfahren zur Verhütung von GVHD. |
| WO1989009622A1 (en) * | 1988-04-15 | 1989-10-19 | Protein Design Labs, Inc. | Il-2 receptor-specific chimeric antibodies |
| DE3815472A1 (de) | 1988-05-06 | 1989-11-16 | Centre Regional De Transfusion | Monoklonaler antikoerper und seine verwendung |
| IL162181A (en) | 1988-12-28 | 2006-04-10 | Pdl Biopharma Inc | A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same |
| US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
| US6013256A (en) | 1996-09-24 | 2000-01-11 | Protein Design Labs, Inc. | Method of preventing acute rejection following solid organ transplantation |
-
1991
- 1991-03-08 HU HU91761A patent/HUT60768A/hu unknown
- 1991-03-13 DE DE91810166T patent/DE69100768T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-13 DK DK91810166.8T patent/DK0449769T3/da active
- 1991-03-13 ES ES91810166T patent/ES2061216T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-13 EP EP91810166A patent/EP0449769B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-13 DE DE1991600768 patent/DE19975033I2/de active Active
- 1991-03-13 AT AT91810166T patent/ATE98655T1/de active
- 1991-03-14 PT PT97034A patent/PT97034B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-03-14 FI FI911275A patent/FI103131B/fi active Protection Beyond IP Right Term
- 1991-03-14 CA CA002038279A patent/CA2038279C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-14 AU AU72909/91A patent/AU635401B2/en not_active Expired
- 1991-03-14 NZ NZ237434A patent/NZ237434A/en unknown
- 1991-03-14 US US07/669,545 patent/US6521230B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-14 IL IL9754591A patent/IL97545A/xx active Protection Beyond IP Right Term
- 1991-03-15 IE IE86791A patent/IE65062B1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-03-15 PL PL91289436A patent/PL170321B1/pl unknown
- 1991-03-15 JP JP3076743A patent/JP2585475B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1991-03-19 TW TW080102143A patent/TW213486B/zh not_active IP Right Cessation
- 1991-09-05 MY MYPI91000340A patent/MY106161A/en unknown
-
1992
- 1992-01-27 SA SA92120358A patent/SA92120358B1/ar unknown
-
1995
- 1995-06-06 US US08/479,089 patent/US6383487B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-15 HU HU95P/P00213P patent/HU211885A9/hu unknown
-
1997
- 1997-04-24 HK HK53797A patent/HK53797A/xx not_active IP Right Cessation
- 1997-09-05 CY CY197797A patent/CY1977A/xx unknown
-
1998
- 1998-08-21 FI FI981799A patent/FI104047B1/fi active
-
1999
- 1999-04-01 NL NL990008C patent/NL990008I2/nl unknown
- 1999-04-07 LU LU90383C patent/LU90383I2/xx unknown
- 1999-08-23 FI FI991788A patent/FI19991788A/fi unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU211885A9 (en) | Cd 25 binding molecules | |
| US7332582B2 (en) | Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency | |
| JP3854306B2 (ja) | ヒト化及びキメラモノクローナル抗体 | |
| EP1124568B1 (en) | Polyspecific binding molecules and uses thereof | |
| JPH04502408A (ja) | ＩＬ―２レセプターのｐ５５ Ｔａｃタンパク質に特異的なキメラ免疫グロブリン | |
| JP2018029624A (ja) | 抗ヒトｃｄ５２免疫グロブリン | |
| US20080025975A1 (en) | Humanized antibodies against cd3 | |
| JPH08511421A (ja) | 人化抗体 | |
| BG98411A (bg) | Рекомбинантни антитела за лечение на хора | |
| EA015009B1 (ru) | АНТИГЕНСВЯЗЫВАЮЩИЕ МОЛЕКУЛЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ ПОВЫШЕННОЙ АФФИННОСТЬЮ К СВЯЗЫВАНИЮ С Fc-РЕЦЕПТОРОМ И ЭФФЕКТОРНОЙ ФУНКЦИЕЙ | |
| KR20010043470A (ko) | Ｃｄ23에 대한 항체, 이의 유도체 및 이들의 치료적 용도 | |
| WO1994028027A9 (en) | Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies | |
| JP2007106771A (ja) | 変異した不活化ＩｇＧ２ドメインおよびこれを組み込んだ抗ＣＤ３抗体 | |
| JP2006137777A (ja) | Ｂ細胞リンパ腫および細胞株の処置に効果的な二重特異性抗体 | |
| JPH11228600A (ja) | 抗体におけるまたは抗体に関する改良 | |
| US7482000B2 (en) | Mutant Fab fragments of the chimeric 13B8.2 anti-CD4 antibody and their applications | |
| EP0511308B1 (en) | Chimeric immunoglobulin for cd4 receptors | |
| US20060165684A1 (en) | Therapeutic anti-tirc7 antibodies for use in immune related and other diseases | |
| WO2008137500A2 (en) | Immunosuppression with antibody against itm2a | |
| US7037496B2 (en) | Chimeric immunoglobulin for CD4 receptors | |
| JP2001510027A (ja) | Ｔ細胞活性化および増殖を阻害するＬＯ−ＣＤ２ａ抗体およびその用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: THE ROYAL FREE HOSPITAL SCHOOL OF MEDICINE, GB Owner name: NOVARTIS AG., CH |