HU205359B

HU205359B - Process for producing mevalonic acid derivatives containing thienopyridine ring, as well as pharmaceutical compositions comprising such active ingredient

Info

Publication number: HU205359B
Application number: HU895657A
Authority: HU
Inventors: Yoshihiro Fujikawa; Mikio Suzuki; Hiroshi Iwasaki; Mitsuaki Sakashita; Masaki Kitahara
Original assignee: Nissan Chemical Ind Ltd
Priority date: 1988-11-02
Filing date: 1989-11-02
Publication date: 1992-04-28
Also published as: EP0367235A1; NO173444C; AU615588B2; HU895657D0; ATE107308T1; DK546489D0; CA2002008A1; DK546489A; DE68916174D1; US5026698A; PT92180B; NO894349D0; DE68916174T2; PT92180A; FI895185A0; NO173444B; NO894349L; AU4382989A; EP0367235B1; HUT55397A

Description

A találmány tárgya eljárás új, a koleszterin bioszintézisét gátló hatású, tieno-piridin-gyűrűt tartalmazó mevalonsavszármazékok előállítására.

A találmány szerinti eljárással előállítható új vegyületek az (I) általános képlettel jellemezhetők, ebben a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport;

R² jelentése hidrogénatom 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport; vagy pedig

R¹ és R² együtt egy 2-5 szénatomos alkilénláncot képez

R³ jelentése fluor-, klór- vagy brómatom;

R⁵ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy 3-6 szénatomos cikloalkilcsoport;

R¹² jelentése hidrogénatom, kémiailag vagy fiziológiailag hidrolizálható 1-4 szénatomos alkilcsoport, vagy pedig egy M szubsztituens, amelynek a jelentése ammóniumcsoport, nátrium- vagy káliumatom, a kalciumatom egyik vegyértéke, vagy pedig egy hidrogénatom, amellyel együtt a vegyület addíciós sót képez egy rövid szénláncú alkilcsoportot, illetőleg alkilcsoportokat tartalmazó mono-, di- vagy trialkil-aminnal.

A fenti meghatározásnak megfelelő (I) általános képletű vegyületek az R¹² szubsztituens jelentése szerint három szűkebb körű csoportba sorolhatók;

- az R¹² helyén 1-4 szénatomos alkilcsoportot tartalmazó, (1-1) általános képletű észterek;

- az R¹² helyén hidrogénatomot tartalmazó, (1-2) általános képletű karbonsavak;

- az R¹² helyén a fent megadott jelentésű szubsztituenst tartalmazó, (1-5) általános képletű sók.

Ugyancsak a talábnány körébe tartozik az (1-2) általános képletű karbonsavak (1-3) általános képletű laktonjainak az előállítása is.

Ismeretes, hogy egyes fermentációs termékek, így a kompaktin, a CS-514, a mevinolin, illetve ezek félszintetikus vagy szintetikus származékai gátolják a HMG-CoA reduktázt, amely a koleszterin bioszintézisének sebességkorlátozó enzime [A. Endo: J. Med. Chem. 28/4,401 (1985)].

Klinikailag bizonyítva van, hogy a CS-514 és a mevinolin potenciális hatóanyag a magas lipoproteinszint ellen, és azt tartják róluk, hogy hatásosan gyógyítják, illetve előzik meg a koronaér-elmeszesedést és az ateroszklerőzist (IXth Int. Symp. Drugs Affect. Lipid Metab., 1986, pp. 30, 31,66).

A teljesen szintetikus származékokra azonban csak korlátozott információk vannak, különösen a HMGCoA reduktázt gátló heteroaromás származékok esetén, az alábbi forrásokban:

WPI ACC 84-157675, 86-028 274, 86-098 816, 86-332070, 87-124519, 87-220987, 88-07 781, 88008 460, 88-091798, 88-112505, 88-182 950, 88234828, 88-258 359, 88-265 052, 88-280597,

88300969, 89-15 672, 89-24911, 89-24913, 8925 270, 89-25 474, 89-48 221 és 89-78 429.

A találmány azon a felismerésen alapul, hogy a mevalonsav bizonyos eddig le nem írt, molekulájukban tieno(2,3-b)piridin-gyűrűt tartalmazó származékai, a dihidroxi-karbonsavak, valamint ezek sói, észterei és laktonjai erős gátló hatást mutatnak a koleszterin bioszintézisével szemben, amelyben a HMG-CoA reduktáz sebességkorlátozó enzimként hat. Ennek alapján a fenti meghatározásnak megfelelő (I) általános képletű karbonsavak, észterek és sók, valamint az (1-3) általános képletű laktonok, illetőleg az ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények - amelyek előállítása szintén a talábnány tárgyát képezi - főként lipoproteinszint-csökkentó és ateroszklerózis-ellenes szerekként alkalmazhatók a gyógyászatban.

Az (I) általános képletű vegyületek sorában a gyógyászati felhasználás szempontjából elsősorban az alábbiak mutatkoznak előnyösnek:

(E)-7-[3 ’ -et il-4’ -(4” -fluor-fenil)-2’ -metil-6’ (1” -metiletil)-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6én-sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propilvagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja; (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-2’-metil-6’-(l”-metil-etil)-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propil- vagy ipropil-észtere, illetve a karbonsav és 5-heIyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja; (E)-7-[4’-(4”-fIuor-fenil)-6’-(l”-metil-etil)-2’-fenil-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept-6-én-sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propil- vagy ipropil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja; (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-2’-metil-6’-(l”-metil-etíl)3’fenil-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept-6-énsav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propilvagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja; (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-2’-izopropil-6’-(l”-metiletíl)-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept-6én- sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propil- vagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja;

(E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-6’-(l”-metiI-etil)-2’,3’-tetrametilén-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept6-én-sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propil- vagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja;

(E)-7-[6’-ciklopropiI-3’-etiI-4’-(4”-fluor-fenil)-2’-metil-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il]-3,5-dihídroxi-hept-6-énsav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propilvagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja. (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-6’-(l”-metil-etil)-2’,3’-trimetilén-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept6-én-sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propil- vagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja;

(E)-7-[6’-cikIopropil-4’-(4”-fluor-feniI)-2’,3’-tri2

HU 205 359 Β metilén-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept6-én-sav, e'karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propil- vagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja. (E)-7-[6’-ciklopropil-4’-(4”-fuor-fenil)-2’,3’-pentametilén-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept-6én- sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, n-propilvagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidr-oxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja;

(E)-7-[6’-ciklopropil-4’-(4”-fluor-fenil)-tieno(2,3-b)piridin-5’-il)-3,5-dihidroxi-hept-6-én-sav, e karbonsav nátriumsója, metil-, etil-, η-propil- vagy i-propil-észtere, illetve a karbonsav és 5-helyzetű hidroxilja közötti kondenzációval létrejövő laktonja.

Az (I) általános képletű vegyületeket a találmány értelmében az analóg (II) általános képletű helyettesített 7-[4’-fenil-tieno(2,3-b)piridin-5’-il)5-hidroxi-3oxo-hept-6-én-savakból, illetőleg ezek sóiból vagy alkil-észtereiből állítjuk elő, a hept-6-én-sav-oldallánc 3-helyzetű oxocsoportjának redukálása útján. Az így kapott (1-2) általános képletű hidroxi-karbonsavakból vízelvonással történő ciklizálás útján juthatunk az (1-3) általános képletű laktonokhoz.

A (II) általános képletű kiindulási vegyületek szintézisét a csatolt rajzokon bemutatott reakciófolyamat szemlélteti, ahol R¹, R², R³, R⁵ és R¹² jelentése egyezik az (I) általános képletnél megadottal, R¹⁴ és R²¹ pedig egymástól függetlenül 1-4 szénatomos alkilcsoportot képvisel. A megfelelően helyettesített (X) általános képletű 2-amino-3-benzoil-tiofénekből kiinduló szintézis az alábbi reakciólépésekből áll:

A szintézis első (külön betűvel nem jelölt) lépésében a (X) általános képletű helyettesített 2-amino-3-benzoil-tiofént egy (XI) általános képletű vegyülettel reagáltatva kapjuk a megfelelelő (VII) általános képletű vegyületet. Előállíthatók azonban a (VII) általános képletű vegyületek oly módon is, hogy valamely (XII) általános képletű vegyületet egy (ΧΠΙ-l) általános képletű vegyülettel reagáltatunk és az így kapott (XIV-1) általános képletű vegyületet oxidáljuk (10087/1987. sz. közzétett japán szabadalmi leírás).

Az A lépés az észter redukciója primer alkohollá. Ezt a redukciót különböző fémhidridek, előnyösen diizobutil-alumínium-hidrid alkalmazásával lehet elvégezni, olyan oldószerben, mint a tetrahidro-furán, a toluol vagy metilén-klorid, -20 és +20 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen -10 és +20 °C között.

A B lépés a primer alkohol oxidációja aldehiddé, különböző oxidálószerek alkalmazásával. Előnyösen a reakciót piridínium-klór-kromát jelenlétében, metilénkloridban, 0-25 °C-on, vagy oxalil-klorid, dimetilszulfoxid és egy tercier amin, így trietil-amin jelenlétében (Swem-oxidáció), vagy kén-trioxid és piridin komplexének alkalmazásával végezhetjük.

A C lépésben egy 3-etoxi-l-hidroxi-2-propén-származék szintézise történik, ahol is az (V) általános képletű vegyületet olyan lítium-vegyülettel reagáltatjuk, amelyet előzőleg butil-lítiumból cisz-l-etoxi-2-[trt(nbutil)-sztannil]-etilénnel való reagáltatással állítottunk elő tetrahidro-furánban.

Előnyös itt alacsony hőmérsékletet alkalmazni, -60 és-78 °C között.

A D lépés az enal szintézise savas hidrolízissel. Savas katalizátorként p-toluol-szulfonsavat, sósavat vagy kénsavat célszerű használni, a reakciót víz és tetrahidro-furán vagy etanol keverékében mint oldószerben végezni 10-25 °C-on. A C lépésben kapott 3-etoxi-l-hidroxÍ-2-propént tisztítás nélkül használhatjuk a D lépésben, vagyis a képződött tetra(n-butil)-ón egyidejű eltávolításával.

Az E lépésben kettős anionaddíciós reakció játszódik le a (lll) általános képletű enal és egy aceto-acetát között. Az ilyen addíciós reakcióban előnyös nátriumhidridet és n-butil-lítiumot használni bázisként, tetrahidro-furánban, -80 és 0 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen -30 és -10 °C között.

Az F lépés a (II) általános képletű keto-karboxilát redukciója különböző redukálószerekkel. Ebben a reakcióban a karbonilt pl. nátrium-bór-hidriddel, nátrium-cián-bór-hidriddel, cink-bór-hidriddel, disziamilboránnal, diboránnal, t-butil-amino-boránnal, piridin/borán komplexszel, diciklohexil-boránnal, texilboránnal, 9-bora-biciklo(3.3.1)nonánnal, diizopinokamfenil-boránnal vagy lítium-tri(s-butil)-bór-hidriddel redukáljuk a megfelelő, (1-1) általános képletű dihidroxi-karboxiláttá.

Ezt a reakciót az alábbi oldószerek valamelyikében vagy keverékeikben lehet végrehajtani: szénhidrogének, halogénezett szénhidrogének, C]__C4 alkoholok, éterek. A hőmérséklet -100 és +50 °C között, előnyösen -78 és +30 °C között legyen.

Alacsony hőmérsékleten trialkil-boránt, így tri(n-butil)-boránt vagy trietil-boránt használunk [J. Amer. Chem. Soc. /05, 593 (1983)]. Más forrás szerint [Tetrahedron Letters 28, 155 (1987)] a biológiailag nagyobb aktivitású eritro-formát előnyösen úgy lehet előállítani, hogy alkoxi-dialkil-boránt, így metoxi-dietilboránt vagy etoxi-dietil-boránt és nátrium-bór-hidridet alkalmazunk.

E reakció kivitelezéséhez Ci_c₄ alkohol és tetrahidro-furán oldószerkeveréket használunk -80 és -50 °C között, előnyösen -72 és -68 °C között.

A G lépésben az észtert hidrolizáljuk. A hidrolízishez ekvimoláris mennyiségű bázist, előnyösen káliumhidroxidot vagy nátrium-hidroxidot használunk víz és metanol vagy etanol oldószerkeverékében 10-25 °Con. A kapott szabad sav megfelelő bázissal sóvá alakítható.

A H lépésben lakton képződik az (Γ-2) általános képletű, szabad hidroxi-karbonsavból vízelvonással. A vízelvonási reakciót benzolban vagy toluolban végezzük, visszafolyó hűtő alatti melegítéssel, amikor is a keletkező víz eltávozik megfelelő vízelvonó szer, így molekulaszita jelenlétében.

Ezenkívül a vízelvonási reakciót száraz metilén-kloridban is végezhetjük, laktonképző szer, így karbodiimid, előnyösen vízben oldható karbodiimid, így Nciklohexil-N’-[2’-(metiÍ-morfolinium)-etil]-karbodiimid-p-toluol-szulfonát jelenlétében 10—35 °C-on, előnyösen 20-25 °C-on.

HU 205 359 Β

A találmány tárgya tehát eljárás az (I) általános képletű mevalonsav-származékok és az (1-2) általános képletű szabad karbonsavak (1-3) általános képletű laktonjainak - ezekben a képletekben

R¹ jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport;

R² jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport; vagy pedig

R¹ és R² együtt egy 2-5 szénatomos alkilénláncot képez

R³ jelentése fluor-, klór- vagy brómatom;

R¹² jelentése hidrogénatom, kémiailag vagy fiziológiailag hidrolizálható 1-4 szénatomos alkilcsoport, vagy pedig egy M szubsztituens, amelynek a jelenléte ammóniumcsoport, nátrium- vagy káliumatom, a kalciumatom egyik vegyértéke, vagy pedig egy hidrogénatom, amellyel együtt a vegyület addíciós sót képez egy rövid szénláncú alkilcsoportot, illetőleg alkilcsoportokat tartalmazó mono-, di- vagy trialkil-aminnal előállítására oly módon, hogy egy (II) általános képletű vegyületet redukálunk, és kívánt esetben egy kapott (1-1) általános képletű észterből az (1—2) általános képletű karbonsavat felszabadítjuk;

és/vagy egy kapott észtert vagy karbonsavat az R¹²fenti meghatározásának megfelelő sóvá alakítunk; vagy kívánt esetben egy kapott (I) általános képletű vegyületet, a szükséghez képest hidrolízis vagy semlegesítés után, a megfelelő (1-3) általános képletű laktonná ciklizálunk.

Ugyanilyen módon készíthetők e vegyületek gyógyszerészetileg elfogadható sói, így kálium- és 1/2 kalcium-sói, észterei, így metil-, η-propil-, i-propil-, n-butil-, ϊ-butil-, s-butil-, t-butil-észterei, illetve ammóniumvagy trimetil-ammónium-sói.

A találmány szerinti vegyületek nagymértékben gátolják a koleszterin bioszintézisét, amennyiben a HMG-CoA reduktáz sebességkorlátozó enzimként hat, amint azt az alábbiakban ismertetett kísérletek eredményei mutatják. így a találmány szerinti vegyületek alkalmasak a vér koleszterinszintjének visszaszorítására, illetve csökkentésére, akárcsak a lipoproteinek. A találmány szerinti vegyületek tehát hatásos gyógyszerek a hiperlipidémía, a hiperlipoproteinémia és az ateroszklerózis ellen. Kiszerelhetők az alkalmazás módjától függően, különböző alkalmas formákban. A találmány szerinti vegyületek beadhatók szabad sav, fiziológiailag hidrolizálható és befogadható észter vagy lakton, továbbá gyógyászatilag elfogadható só formájában.

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények előnyösen beadhatók szájon át önmagukban, a találmány szerinti vegyületek alakjában vagy por, drazsé, tabletta vagy kapszula formájában, amikor is a találmány szerinti vegyületet összekeverhetjük megfelelő, gyógyászatilag elfogadható vivőanyaggal, így kötőanyaggal, például hidroxi-propil-cellulózzal, sziruppal, gumiarábikummal, zselatinnal, szorbittal, tragantmézgával, poli(vinil-pirrolidon)-nal vagy CMC-Ca-mal; kötőanyaggal, például laktózzal, cukorral, búzakeményítővel, kalcium-foszfáttal, szorbittal, glicinnel vagy kristályos cellulőzporral; csúsztatóanyaggal, például magnéziumsztearáttal, talkummal, poli(etilén-glikol)-lal vagy kvarccal; végül elválasztőanyaggal, például burgonyakeményítővel.

A találmány szerinti gyógyszerkészítmények azonban nem korlátozódnak a szájon át bevehető szerekre, hanem parenterális készítményekre is vonatkoznak. Például alkalmazhatók többek között végbélkúp alakjában is, amelyhez olajos jellegű alapanyag, így kakaóvaj, poli(etilén-glikol), lanolin vagy zsírsav-triglicerid szükséges. A bőrön át felszívódó kiszereléshez folyékony paraffint, fehér vazelint, magasabb alkoholokat, Macrogol-kenŐcsöt, hidrofil kenőcsöket vagy hidrogél alapú anyagokat használhatunk. Injekciós készítményekhez egy vagy több anyagot választhatunk az alábbiak közül: poli(etilén-glikol), hidrogél-alapú anyagok, desztillált víz, injekciós alkalmazásra szánt desztillált víz, továbbá egy kötőanyagot, így laktózt vagy búzakeményítőt. Nyálkahártyán keresztül alkalmazható készítmények lehetnek szem-, orr- és szájnyálkahártyára adhatók.

A találmány szerinti vegyületek ezenkívül bázikus ioncserélő gyantákkal is kombinálhatók, amelyek képesek az epesavak megkötésére, és mégsem tapadnak fel a gyomorban és a bélrendszerben.

A találmány szerinti vegyületek napi adagja 0,05 és 500 mg között lehet, előnyösen 0,5-50 mg felnőttek számára. Ez a mennyiség napi 1-3-szori adagolásban alkalmazható. Az adagolás természetesen változhat az életkortól, testsúlytól és a beteg kóros állapotától függően.

A (II)-(IX) általános képletű vegyületek újak, és fontos köztitermékek az (I) általános képletű vegyületek előállításához.

A találmány további részleteit a vegyületek gyógyszerhatástani vizsgálati példáival, előállítási példáival és kiszereléseinek elkészítési példáival világítjuk meg. Tudomásul kell azonban venni, hogy e speciális példák semmilyen módon nem korlátozzák a találmány hatályát.

GYÓGYSZERHATÁSTANI VIZSGÁLATI PÉLDÁK

A vizsgálat: A koleszterin acetátból történő in vitro bioszintézisének gátlása

Az enzimoldatot olyan hím Wistar-patkány májából állítjuk elő, amelynek epehólyagját megfosztottuk az epétől és kiürítettük több mint 24 órára. A májat félhomályos megvilágítás mellett feldaraboljuk, majd a máj homogenizátumából olyan mikroszómát és felülúszó frakciót állítunk elő Knauss és mts. valamint Kurodaés mts. [Biochim. Biophys. Acta 459, 119 (1977)] módosított módszerével, amely 40-80%-os ammőnium-szulfát-oldattal kicsapható (sup frakció). A koleszterin bioszintézisének vizsgálata céljából a mikroszómát (0,1 mg fehérje) és a sup frakciót (1,0 mg fehérje) 2 órát 37 °C-on inkubáljuk 200 mm³, ATP-t, 1 mM

HU 205 359 Β glutationt, 6 mM glukóz-1-foszfátot, 10 mM NAD-ot, 0,25 mM'NADP-t, 0,25 mM CoA-t, 0,04 mM és 0,2 mM (2-^l4C) nátrium-acetátot (0,2 gCi) és vízben vagy dimetil-szulfoxidban oldott, 4 mm³ vizsgálandó vegyületet tartalmazó reakcióelegyben. A reakció megállításához és az elszappanosításhoz 1 cm³15%-os etanolos KOH-ot adunk az elegyhez, és 75 °C-on egy órát melegítjük. Az elszappanosíthatatlan lipideket petroléterrel extraháljuk, és a beépült ¹⁴C-radioaktivitásukat megmérjük. A vegyületek gátló hatását az IC50 értékkel jellemezzük.

B vizsgálat: A koleszterin bioszintézlsének gátlása sejttenyészetben

Hep G2 sejteket 5 átoltás utáni állapotban 12 üreges tenyészlemezre oltunk, és 10% 37 °C-os fötális marhaszérumot (FBS) és 5% CO₂-ot tartalmazó, Dulbecco-féle módosított Eagle-táptalajon inkubáljuk a sejtek összefolyása után még mintegy 7 napig. A sejteket 5%, ultracentrifugálásos módszerrel készült, lipoprotein-hiányos szérumot (LpDS) tartalmazó DM táptalajjal hozzuk össze több mint 24 óra hosszat. A táptalajt a vizsgálat előtt 0,5 cm³ friss, 5% LpDS-t tartalmazó DME-re cseréljük, és hozzáadjuk a vízben vagy DMSO-ban oldott vizsgálandó vegyület 10 mm³-ét. A vegyület hozzáadása után 0 órával (B-1) vagy 4 órával (B-2) 0,2 μΟΙ (20 mm³) (2-¹⁴C) nátrium-acetátot adunk hozzá, és ezzel további 4 órát inkubáljuk. Ekkor a táptalajt eltávolítjuk, a sejteket 4 °C-ra lehűtött, foszfáttal pufferolt sóval (PBS) mossuk. A sejteket gumispatulával felkaparjuk, PBS-sel kémcsőbe mossuk át, majd 37 °C-on 0,2 cm³ 0,5 N-KOH-dal emésztjük. Az emésztett anyag aliquot részéből fehérjeelemzést végzünk, a többit 1 cm³15%-os etanolos KOHdal 75 °C-on 1 órát szappanosítjuk. Az elszappanosíthatatlan lipideket petroléterrel extraháljuk és megmérjük a ¹⁴C-radioaktivitását. A számlálóval kapott eredményt Sejtfehérjére vonatkoztatjuk, és DPM/mg fehérjeegységben adjuk meg. A vegyületek gátló hatását az IC50 értékkel jellemezzük.

C-vizsgálat: A koleszterin bioszintézisének in vivő gátlása

Mintegy 150 g-os, hím Sprague-Dawley patkányokat normális Purina-táp étrenden és kívánság szerinti mennyiségű vízen tartunk, miközben 12 órát világosban, 12 órát pedig sötétben vannak (sötétben délután 2-től éjjel 2-ig naponta), a koleszterin-bioszintézis in vivő gátlásának kísérletéig. Az állatokat ötös csoportokra osztjuk és meghatározzuk mindegyik csoport átlagos testsúlyát. A vizsgálandó vegyületeket testsúlykilogrammonként 0,02-0,2 mg (0,4 cm³/100g testtömeg) mennyiségben adagoljuk szájon át, vízben oldva vagy 0,5%-os metil-cellulózban szuszpendálva, 2-3 órával a sötét periódus közepe (20.00 óra) előtt, amikor a patkányokban a koleszterin bioszintézise tetőzik. A kontrollállatoknak csak vizet vagy vivőanyagot adunk be. 90 perccel a beadagolás után a patkányok hashártyájába fejenként 0,2 cm³ térfogatban 10 μθΐ (2—¹⁴C) nátrium-acetátot fecskendezünk. 2 órával később vérmintákat veszünk és a szérumot azonnal szétválasztjuk. Az összes lipidtartalmat Folch és mts. módszerével extraháljuk, majd etanolos KOH-dal elszappanosítjuk. Az elszappanosíthatatlan lipideket petroléterrel extraháljuk, végül az elszappanosíthatatlan lipidekbe beépült radioaktivitást meghatározzuk.

A gátló hatást a beütésszám százalékos csökkenésével adjuk meg (DPM/2 cm³ szérum/2 óra) a kontrollcsoporthoz képest.

A találmány szerinti vegyületek gátló hatását a koleszterin bioszintézisére a fent ismertetett A és B vizsgálattal határozzuk meg, sebességkorlátozó enzimként HMG-CoA reduktázt alkalmazva. Az eredményeket a 2., 3-1. és 3-2. táblázat mutatja.

A referenciavegyület képletét a (XXVII) képlet adja meg. E CS-514 jelű anyag IC50 értéke az A vizsgálatban 9,0 ΧΙΟ’⁹ M/l.

A találmány szerinti vegyületek relatív aktivitását a CS-514-re vonatkoztatva adjuk meg a 2. táblázatban, a referenciavegyület eredményét az A vizsgálatban 1-nek véve.

A találmány szerinti vegyületek a CS-514-hez viszonyított relatív aktivitását a B-1 vizsgálatban a 3-1. táblázat mutatja (a CS-514 eredményét 1-nek véve).

A találmány szerinti vegyületek gátló hatását a B-lvizsgálat alapján, 1,0x10'® mól/dm³ koncentrációban a 3-2. táblázat mutatja.

2. táblázat

Relatív aktivitás az A vizsgálat szerint

Találmány szerinti vegyület	Relatív aktivitás	Találmány szerinti vegyület	Relatív aktivitás
1-1-1	0,50	1-5-1	0,55
1-1-7	2,7	1-5-2	0,51
1-1-8	1,1	1-5-5	0,31
1-1-9	1,2	1-5-6	4,1
1-1-11	8,2	1-5-7	0,36
1-3-11	3,33	1-5-8	0,32
		1-5-9	2,9
		1-5-10	0,21
		1-5-11	11,3

3-1. táblázat

Relatív aktivitás a B-1 vizsgálat szerint

Találmány szerinti vegyület	Relatív aktivitás	Találmány szerinti vegyület	Relatív aktivitás
1-1-1	196	1-5-1	152
1-1-2	171	1-5-2	76
1-1-3	1,4	1-5-3	1,4
1-1-4	1,4	1-5-4	1,4
1-1-5	98	1-5-5	62
1-1-6	11	1-5-6	152
1-1-7	137	1-5-7	40
1-1-8	137	1-5-8	50
1-1-9	137	1-5-9	49

HU 205 359 Β

1-1-10	30	1-5-10	2,3
1-1-11	65	1-5-11	60
1-3-1	55
1-3-7	35
1-3-11	87

3-2. táblázat

A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek inhibitor aktivitása 1,0 χ 10^-6 mól/l koncentrációban a B-l vizsgálat szerint

Találmány szerinti vegyület	Inhibitor aktivitás
1-5-3	46,8
1-5-4	48,2
1-5-5	69,8
1-5-7	64,1
1-5-8	63,6
1-5-9	62,4
1-5-10	53,6

A gátló hatás C vizsgálattal mért eredményei A beütésszám százalékos csökkenése 0,2 mg/kg 1-511 jelű vegyület szájon át való alkalmazásával 65%, az 1-3-11 vegyülettel 68% a kontrollcsoport mérési eredményeihez képest. Ugyanilyen körülmények között 0,2 mg/kg CS-514 szájon át való beadására a beütésszám százalékos csökkenése 34%. Az alábbiakból nyilvánvaló, hogy a találmány szerinti vegyületek hatásossága legalább egyenértékű, valójában nagyobb, mint a CS-514 referenciavegyületé az A, B-l és C vizsgálatban egyaránt.

D vizsgálat: Akut toxikusság

A vizsgálandó vegyület 0,5%-os CMC-szuszpenzióját szájon át beadjuk három hím ICR-egérből álló csoportnak. Az akut toxikusságot a 7 nap utáni elhullás alapján határozzuk meg. A találmány szerinti 1-5-1, 1-5-2,1-5-8,1-5-9 és 1-5-10 jelű vegyületek esetén az elhullás 0% volt, még ha 1000 mg/kg mennyiségben adtuk is be őket szájon át.

I. példa (E)-7-[3'-etil-4’-(4” -fluor-fenti)-2 ’ -metil-6’ -(!metil-etil)-tieno-(2,3-b)-piridin-5’ -il]-3,5-dihidroxihept-6-én-sav-etil-észter (1-1 -1 jelű vegyület) előállítása

E vegyület előállításánál az l-a₀ példától az 1-b példáig terjedő reakciólépéseket követjük.

I-a_o példa

3-Etti-4-(4’-fluor-fenil)-2-metil-6-( 1 ’-meiti-eti[)-tieno(2,3-b)piridin-5-ti-karbonsav etil-észter (Vll-l jelű vegyület) [E vegyület előállításánál követett eljárás fomása: J. Heterocycl. Chem. 4,565 (1967).]

15,1 g (57,3 mmól) 2-amino-4-etil-3-(4’-fluor-benzoil)-5-meti!-tiofént [előállítási módszere a J. Med. Chem. 17, 624 (1974) szerint], 9,07 g (57,3 mmól) etil-izobutilil-acetátot és 0,6 cm³ tömény kénsavat feloldunk 60 cm³ jégecetben, és az oldatot 120 °C-on 5 órát melegítjük.

A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hűtjük, majd 90 cm³ tömény ammónium-hidroxid és 300 cm³ víz elegyét hidegen, fokozatosan hozzáadjuk.

Az ekkor felszabaduló olajos anyagot etil-acetáttal extraháljuk, vízzel és telített nátrium-klorid-oldattal mossuk, és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson elpároljuk, és a maradékot szilikagéles oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, 10:1 arányú hexánt/etil-acetáttal eluálva. A tisztított kívánt termék mennyisége: 7,02 g (kitermelés: 32%) olvadáspontja: 121-122 °C.

-a példa

3-Etti-4-(4’-fluor-fenti)-5-(hidroxi-metti-2-metil-6(r-metti-etil)-tieno(2,3-b)piridin (Vl-l jelű vegyület) előállítása

6,83 g (17,7 mmól) VII-1 jelű vegyületet nitrogénatmoszférában feloldunk vízmentes toluolban, és jégfürdőn 0 °C-ra hűtjük. Ehhez az oldathoz cseppenként hozzáadunk 44 cm³ 16 tőmeg%-os, toluolos diizobutilalumínium-hidrid-oldatot, majd az elegyet 0 °C-on 2 órát keverjük. Miután meggyőződtünk arról, hogy a VII-1 jelű vegyület tökéletesen eltűnt (vékonyrétegkromatográfiás ellenőrzéssel), a reakció lezárása céljából 0 °C-on telített, vizes ammőnium-kloríd-oldatot adunk az elegyhez. Dietil-éteres extrakció után a szerves réteget elválasztjuk. A géles anyagot nátrium-hidroxid vizes oldatának hozzáadásával feloldjuk, és még egyszer extraháljuk etil-éterrel. Az éteres kivonatokat egyesítjük, és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. A kivonat szűrése és az oldószer elpárologtatása után a kívánt vegyület marad vissza enyhén sárgás anyag formájában.

Mennyisége: 5,62 g (kitermelés: 88%) olvadáspontja: 188-191 °C.

1-b példa

3-Etil-4-(4’ -fluor-fenil)-2-metil-6-(l’ •metil-etilftieno(2,3-b)-piiidin-5-il-karboxaldehid (V-l jelű vegyület) előállítása

5,16 g (23,9 mmól) piridínium-klór-kromátot, 0,92 g vízmentes nátrium-acetátot és 5,48 g (16,0 mmól) VI-1 jelű vegyületet 40 cm³ vízmentes diklőr-metánban szuszpendálunk. A reakcióelegyet szobahőmérsékleten 2 órát keverjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtatjuk. A maradékhoz dietil-étert adunk, és az oldható anyagot extraháljuk. Ezt a műveletet többször ismételjük. Az éteres rétegeket összegyűjtjük, egyesítjük, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, kloroformmal eluálva. A kívánt, fehér termék mennyisége: 4,73 g (kitermelés: 87%) olvadáspontja: 157-160 °C.

HU 205 359 Β

1-c és 1-d példa (E)-3-[3’-etil-4’ -(4” -fluor-fenil)-2’ -metil-6'-(Γ’ metil-etil)-tieno(2,3-b)piridin-5’-Íl]-62-propionaldehid (111-1 jelű vegyület) előállítása 1-c példa

14,6 g (43,1 mmól) cisz-l-etoxi-2-(tri-n-butil-sztannil)-etilént feloldunk 150 cm³ vízmentes tetrahidro-furánban, és az oldatot nitrogénatmoszférában -78 °C-ra hűtjük. Cseppenként hozzáadunk 25,4 cm³(43,1 mmól) 15 tömeg%-os n-hexános n-butil-lítium oldatot. Az elegyet 20 percig keverjük, majd cseppenként hozzáadunk 4,60 g (13,5 mmól) V-l jelű vegyületet 50 cm³ vízmentes tetrahidro-furánban oldva. A reakcióelegyet-78 °C-on egy órát keverjük, majd a reakció leállítása céljából hozzáadunk 10 cm³ telített ammónium-klorid-oldatot. A szerves fázist dietil-éterrel extraháljuk. Az éteres kivonatot telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, majd vízmentes magnéziumszulfáton szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, és a maradékot folyadék/folyadék megosztásnak vetjük alá n-hexán és acetonitril között. Az acetonitriles réteget csökkentett nyomáson desztilláljuk, és gyakorlatilag tiszta IV-1 jelű vegyületet kapunk.

1-d példa

Az 1-c példában előállított, IV-1 jelű vegyületet feloldjuk 70 cm³ tetrahidro-furánban, és hozzáadunk 20 cm³vizet és 3 g p-toluol-szulfonsavat. Az elegyet szobahőmérsékleten 2 órát keverjük, majd nátrium-hidroxid vizes oldatával óvatosan semlegesítjük. Többször dietiléterrel extraháljuk, a kivonatokat telített vizes nátriumklorid-oldattal mossuk, és vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk. Az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfíásan tisztítjuk 1:9 térfogatarányú etil-acetát/n-hexánnal eluálva. A kapott sárga anyag a kívánt vegyület.

Mennyisége: 3,83 g (kitermelés: 77%)

Olvadáspontja: 111-112 °C.

1-e példa (E)-7[3’-etil-4'-(4 -fluor-feni 1-2’-metil-6’-(1” -metÍl-etiÍ)-tieno(2,3-b)piridin-5’-il]-5-hidroxi-3-oxo-hepl6-én-sav-etil-észter (ll-l jelű vegyület) előállítása 1,67 g 60%-os nátrium-hidridet n-hexánnal mosunk, nitrogénáramban megszárítunk, és 200 cm³ vízmentes tetrahidro-furánban szuszpendálunk. A szuszpenziót nitrogénatmoszférában lehűtjük 0 °C-ra, és cseppenként hozzáadunk 5,13 cm³ (40,3 mmól) etil-acetoacetátot. Az elegyet 15 percig keverjük, majd cseppenként hozzáadunk 25,3 cm³ (40,3 mmól) 15 tömeg%-os hexános nbutil-lítium-oldatot. A keverést még 30 percig folytatjuk. Ekkor hozzáadjuk 3,70 g (10,1 mmól) III-l jelű vegyület vízmentes tetrahidro-furános oldatát cseppenként, és az elegyet még 15 percig keverjük. Még mindig 0 °C-on hozzáadunk 10 cm³ telített vizes ammónium-klorid-oldatot, majd az elegyet háromszor extraháljuk dietil-éterrel. Az éteres oldatot telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, végül csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, kloroformmal eluálva. A kívánt vegyületet halványsárga anyag formájában kapjuk meg.

Mennyisége: 5,00 g (kitermelés: 99%)

Olvadáspontja: 85—SS °C.

1-f példa (E)-7-[3 ’ -etil-4 ’-(4’’ -fluor-fenil)-2’-metil-6’ metil-etil)-tieno(2,3-b)plridin-5’-il]-3,5-dihidroxihept-6-én-sav-etil-észter (1-1-1 jelű vegyület) előállítása

3,06 g (6,15 mmól (II-l jelű vegyületet nitrogénatmoszférában feloldunk 40 cm³ etanolban, és az oldatot 0 °C-ra lehűtjük. Hozzáadunk 700 mg (18,5 mmól) nátrium-bór-hidridet, majd az elegyet 1 óráig keverjük. Ekkor 10%-os vizes sósavoldattal óvatosan semlegesítjük, majd háromszor extraháljuk dietil-éterrel. A dietiléteres oldatot telített vizes nátrium-klorid-oldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, végül csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A visszamaradt olajat szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, 3 : 97 térfogatarányú etanol/kloroform eleggyel eluálva. A kívánt fehér termék mennyisége: 2,62 g (kitermelés: 85%) olvadáspontja: 101-105 °C.

2. példa (E)-7-[3 ’-etil-4 ’-(4’’ -fluol-fenil)-2 ’-metil-6’-(1 ” -metil-etil)-tieno(2,3-b)piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept6-én-sav-nátriumsójának (1-5-1) jelű vegyület) előállítása

600 mg (1,20 mmól) 1-1-1 jelű vegyületet feloldunk 5 cm³ etanolban, és cseppenként hozzáadunk 2,40 cm³0,5 N nátrium-hidroxid-oldatot. Az elegyet szobahőmérsékleten 15 percig keverjük, majd az etanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. Hozzáadunk 7 cm³ vizet, és dieti 1-éterrel extraháljuk. A vizes fázist fagyasztva szárítjuk, és nedvszívó fehér port kapunk.

Mennyisége: 570 mg (kitermelés: 95%)

Olvadáspontja: 263-267 °C.

A VII-2 - VII-11 jelű vegyületeket ugyanúgy készítjük, mint az l-a₀ példában. Az így előállított vegyületek fizikai tulajdonságait a 2. táblázat mutatja.

A VI-2 - VI-11 jelű vegyületeket az l-a példa szerinti eljárással készítjük. Az így nyert vegyületek fizikai tulajdonságait a 3. táblázat mutatja.

2. táblázat

Vegyület	R¹	R²	R³	R⁵	R²¹	Olvadáspont °C
VII-2	H	Me	4-F	i-Pr	Et	97-98
VI1-3	H	Ph	4-F	i-Pr	Et	109-101
VII-4	Ph	Me	4-F	i-Pr	Et	137-138

HU 205 359 B

Vegyület	R^l	R²	R³	R^s	R²¹	Olvadáspont °C
VII-5	H	iPr	4-F	i-Pr	Et	63-65
VII-6	-(CH^	4-F	i-Pr	Et	126-127
VII-7	Et	Me	4-F	c-Pr	Me	168-169
VII-8	-(CH^	4-F	i-Pr	Et	142-144
VII-9	-(CH^j.	4-F	c-Pr	Me	168-170
VII-10	-(CH^	4-F	c-Pr	Me,
VII-11	H	H	4-F	c-Pr	Me	137-138

a) VII-10 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) 5ppm: 0,9-1,4 (m, 6H), 1,5-2,1 (m, 6H), 2,7-3,3 (m, 3H),

3,48 (s, 3H), 6,9-7,2 (m, 4H).

3. táblázat R³

R1

, CH₂0H _R2><s^_{N r}5

Vegyü- let	R¹	R²	R³	R^s	Olvadáspont °C
VI-2	H	Me	4-F	i-Pr	157-158
VI-3	H	Ph	4-F	i-Pr	205-208
VI-4	Ph	Me	4-F	i-Pr	211-212
VI-5	H	i-Pr	4-F	i-Pr	149-152
VI-6		4-F	i-Pr	145-147
VI-7	Et	Me	4-F	c-Pr	118-120
VI-8	-(CH₂)₃.	4-F	i-Pr	139-140
VI-9	-(CH₂)3	4-F	c-Pr	-
VI-10	-(CH₂)₅	4-F	c-Pr	169-170
VI-11	H	H	4-F	c-Pr	133-135

a) VI-9 vegyület H-NMR értéke (CDCl₃₎ δρρπν.

0,9-1,3 (m, 4H), 1,7-1,9 (m, ÍH), 2,0-2,6 (m, 5H),

2,7-3,1 (m, 2H), 4,59 (bs, 2H), 6,9-7,2 (m, 4H) ₄₅

4. táblázat R³

w_r5

R²

CHO

Vegyü- ld	R¹	R²	R³	R⁵	Olvadáspont °C
V-2	H	Me	4-F	i-Pr	147-148
V-3	H	Ph	4-F	i-Pr	158-160
V-4	Ph	Me	4-F	i-Pr	172,5-173

Vegyü- let	R¹	R²	R³	R^s	R¹²	Olvadáspont °C
ΙΓ-2	H	Me	4-F	i-Pr	Et	102-106
II-3	H	Ph	4-F	i-Pr	Et	115-117
11-4	Ph	Me	4-F	i-Pr	Et	109-111
II—5	H	i-Pr	4-F	i-Pr	Et	82-85
11-6	-(CH₂)4	4-F	i-Pr	Et	104-107
II-7	Et	Me	4-F	c-Pr	Et	-
JI-8	-(CH₂)3	4-F	i-Pr	Et	106-108

Vegyü- ld	R¹	R²	R³	R⁵	Olvadáspont °C
V-5	H	i-Pr	4-F	i-Pr	140-143
V-6	-(CHjV	4-F	i-Pr	181-182
V-7	Et	Me	4-F	c-Pr	174-176
V-8	-(CH^	4-F	i-Pr	138-139
V-9	-CCH^	4-F	c-Pr	145-146
V-10	-(CH₂)₅-	4-F	c-Pr	176-178
V-ll	H	H	4-F	c-Pr	133-135

5. táblázat R³

CHO

R¹

C M *

R²^S N R⁵

Vegyület	R¹	R²	R³	R^s	Olvadáspont °C
ΙΠ-2	H	Me	4-F	i-Pr	olaj
III-3	H	Ph	4-F	i-Pr	197-200
III—4	Ph	Me	4-F	i-Pr	166-167
ΙΙΙ-5	H	i-Pr	4-F	i-Pr	130-133
III—6	-(CH₂)4	4-F	i-Pr	170-172
111-7	Et	Me	4-F	c-Pr	136-138
III—8	-(CH₂)3	4-F	i-Pr	139-143
III—9	-(CH₂)3	4-F	c-Pr	172-175
ΠΙ-10	-(CH^j.	4-F	c-Pr	167-169
III-ll	H	H	4-F	c-Pr	125-127

a) III-2 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃ 5ppm:

1,33 (d, J=7 Hz, 6H), 2,48 (d, J=1 Hz, 3H), 3,38 (Heptalet, J=7 Hz, ÍH), 5,87 (dd, J=16 Hz, J=8 Hz, ÍH), 6,40 (d, J=1 Hz, ÍH), 7,0-7,6 (m, 4H), 7,43 (d, J=16 Hz, ÍH), 9,31 (d, J=8 Hz, ÍH)

CO,R^{1 2}

HU 205 359 Β

Vegyü- let	R¹	R²	R³	R⁵	R¹²	Olvadáspont °C
II-9	-(CH₂)^	4-F	c-Pr	Et	-
Π-10	-(CH2)5	4-F	c-Pr	Et	-
11-11	H	H	4-F	c-Pr	Et	-

a II-7 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm:

0,62 (t, J=7 Hz, 3H), 0,8-1,4 (m, 4H), 1,24 (t, J=7

Hz, 3H), 1,9-2,5 (m, 3H), 2,52 (s, 3H), 2,66 (d, J=7 Hz, 2H), 2,8-3,0 (m, IH), 3,55 (s, 2H), 4,32 (q, J=7 Hz, 2H), 4,5-4,8 (m, IH), 5,64 (dd, J=16 Hz, J=6 Hz, IH), 6,49 (dd, J=16 Hz, J=1 Hz, IH), 7,1-7,4 (m, 4H) a II-9 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm: 0,8-1,4 (m, 4H), 1,25 (t, J=7 Hz, 3H), 1,9-2,3 (m,

6H), 2,49 (d, J=6 Hz, 2H), 2,6-3,1 (m, 2H), 3,36 (s, 2H), 4,13 (q, J=7 Hz, 2H), 4,3-4,7 (m, IH), 5,48 (dd, J=16 Hz, J=6 Hz, IH), 6,48 (dd, J=16 Hz, J=1 Hz, IH), 6,9-7,2 (m, 4H) a II-10 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm: 0,8-1,4 (m, 6H), 1,25 (t, J=7 Hz, 3H), 1,5-2,1 (m,

7H), 2,1-2,4 (m, IH), 2,48 (d, J=6 Hz, 2H), 2,6-2,9 (m, 2H), 3,35 (s, 2H), 4,11 (q, J=7 Hz, 2H), 4,3-4,7 (m, IH), 5,43 (dd, J=16 Hz, J=6 Hz, IH), 6,31 (dd, J=16 Hz, J=1 Hz, IH), 6,9-7,2 (m, 4H) a Π-ll vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm: 0,8-1,4 (m, 4H), 1,24 (t, J=7 Hz, 3H), 2,0-2,4 (m,

IH), 2,51 (d, J=6 Hz, 2H), 2,7-3,1 (m, IH), 3,36 (s, 2H) 4,12 (q, J=7 Hz, 2H), 4,3-4,7 (m, IH), 5,43 (dd, J=16 Hz, J=6 Hz, IH), 6,57 (dd, J= 16 Hz, J=1 Hz, IH), 6,69 (d, J=6 Hz, IH), 6,9-7,2 (m, 5H)

Vegyü- let	R¹	R²	R³	R⁵	R¹²	Olvadáspont °C
1-1-2	H	Me	4-F	i-Pr	Et	olaj
1-1-3	H	Ph	4-F	i-Pr	Et	115-119
1-1-4	Ph	Me	4-F	i-Pr	Et	81-86
1-1-5	H	i-Pr	4-F	i-Pr	Et	88-91
1-1-6	-(CH₂)4	4-F	i-Pr	Et	124-127
1-1-7	Et	Me	4-F	c-Pr	Et	105-108
1-1-8	-(CH₂)3	4-F	i-Pr	Et	130-133
1-1-9	-(CH₂)3	4-F	c-Pr	Et	-
1-1-10	-(CH₂)5	4-F	c-Pr	Et	-
1-1-11	H	4-F	c-Pr	Et	-

az 1-1-2 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm: 1,29 (t, J=7 Hz, 3H), 1,31 (d, J=7 Hz, 6H), 1,4-1,9 (m, 2H), 2,3-2,6 (m, 2H), 2,50 (d, J=1 Hz, 3H), 3,1-3,8 (m, 3H), 3,8-4,6 (m, 2H), 4,19 (q, J=7 Hz, 2H), 5,1-5,5 (m, IH), 6,49 (d, J=1 Hz, IH), 6,6-7,3 (m, 5H) az I-1 -9 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm:

0,8-1,7 (m, 8H), 1,29 (t, J=7 Hz, 3H), 1,9-2,5 (m, 6H), 2,8-3,1 (m, 2H), 3,4-3,7 (m, IH), 3,8^1,5 (m, 2H), 4,18 (q, J=7 Hz, 2H), 5,4-5,8 (m, IH), 6,9-6,7 (m, IH), 7,0-7,3 (m, 4H) az 1-1-10 vegyület H-NMR értéke (CDCL₃) δ ppm:

0,8-1,4 (m, 6H), 1,28 (t, J=7 Hz, 3H), 1,5-1,8 (m, 4H), 1,8-2,1 (m, 3H), 2,2,-2,6 (m, 4H), 2,7-3,1 (m, 3H), 3,5-3,7 (m, IH), 4,0-4,4 (m, 2H), 4,18 (q, J=7 Hz, 2H), 5,4-5,7 (m, IH), 6,3-6,6 (m, IH), 7,0-7,3 (m, 4H) az 1-1-11 vegyület H-NMR értéke (CDC1₃) δ ppm:

0,8-1,5 (m, 5H), 1,28 (t, J=7 Hz, 3H), 1,6-2,0 (m, IH), 2,1-2,6 (m, 4H), 3,6-3,9 (m, IH), 4,0-4,7 (m, 4H), 5,3-5,7 (m, IH), 6,5-6,9 (m, 2H), 7,0-7,4 (m, 5H)

Vegyü- let	R¹	R²	R³	R⁵	R¹²	Olvadáspont °C
1-5-2	H	Me	4-F	i-Pr	Na	228-235 bomlik
1-5-3	H	Ph	4-F	i-Pr	Na	209-214 bomlik
1-5-4	Ph	Me	4-F	i-Pr	Na	286-289 bomlik
1-5-5	H	i-Pr	4-F	i-Pr	Na	218-223 bomlik
1-5-6	-(CH₂)₄_	4-F	i-Pr	Na	222-227 bomlik
1-5-7	Et	Me	4-F	c-Pr	Na	212-216 bomlik
1-5-8	-(CH₂)j.	4-F	i-Pr	Na	209-213 bomlik
1-5-9	-(CH₂)3_	4-F	c-Pr	Na	210-217 bomlik
1-5-10	-(CH₂)5_	4-F	c-Pr	Na	241-248 bomlik
1-5-11	H	H	4-F	c-Pr	Na	249-253

Az V-2-V-11 jelű vegyületeket az 1-b példa szerinti eljárással állítjuk elő. Az így kapott vegyületek fizikai tulajdonságait a 4. táblázat tartalmazza.

A III-2-III-11 jelű vegyületeket az 1-c és 1-d példa szerinti eljárásokkal készítjük. Az így nyert vegyületek fizikai tulajdonságait az 5. táblázat mutatja.

A II-2-II-11 jelű vegyületek előállítására az 1-e példa szerinti eljárást használjuk. Az így kapott vegyületek fizikai tulajdonságai a 6. táblázatban láthatók.

Az 1-1-2—1-1-11 jelű vegyületeket az 1-f példa szerinti eljárással állítjuk elő. Az így nyert vegyületek fizikai tulajdonságait a 7. táblázat mutatja.

Az 1-5-2—1-5-11 jelű vegyületeket a 2. példa szerinti eljárással készítjük. Az így előállított vegyületek fizikai tulajdonságait a 8. táblázat tartalmazza.

HU 205 359 Β

3. példa (E)-7-[6’-ciklopropil-4'-(4''-fluor-fenil)-tÍeno(2,3b)-piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-sav (1-2-11 jelű vegyület) előállítása

546 mg (1,20 mmól) 1-1-11 jelű vegyületet 5 ml etanolban oldunk, majd az oldathoz cseppenként hozzáadunk 2,4 ml 0,5 n vizes nátrium-hidroxid-oldatot. Az etanolt csökkentett nyomáson ledesztilláljuk, majd 7 ml desztillált vizet adunk a maradékhoz. A kapott oldatot dietil-éterrel mossuk, a vizes réteget elkülönítjük, egy t/tf%-os sósavoldattal gondosan semlegesítjük és dietil-éterrel extraháljuk. Az elkülönített éteres fázist vízmentes magnézium-szulfáttal szárítjuk, majd csökkentett nyomáson az oldószert elpárologtatjuk. 480 mg cím szerinti vegyületet kapunk (az elméleti hozam 94%-a).

H-NMR színképértékek (DMSO-d⁶), δ ppm: 0,81,5 (m, 4Η), 1,6-2,0 (m, 2H), 2,1-2,6 (m, 3H), 3,1-3,9 (m, 2Η), 4,0-4,8 (m, 2Η), 5,5 (d, d, J=17 Hz, J=5 Hz, IH), 6,7 (d, J=17 Hz, 1Η), 6,8-7,4 (m, 6Η).

A 3. példában leírthoz hasonló módon állítjuk elő az I2-1 és 1-2-7 jelű vegyületeket is, a megfelelő kiindulási vegyületek alkalmazásával. Az így kapott (1-2) általános képletű vegyületek fizikai tulajdonságai az alábbiak:

Vegyület	R¹	R2	R3	R5
1-2-1	Et	Me	4-F	izopropil
1-2-7	Et	Me	4-F	ciklopropil

H-NMR színképértékek (CDC1₃), δ ppm:

1-2-1 jelű vegyület: 0,66 (t, J=7 Hz, 3H), 1,3 (d, J=6 Hz, 6H), 1,0-1,7 (m, 2H), 1,99 (q, 2H), 2,4 (s, 3H),

2.3- 2,6 (m, 2H), 3,4 (7 heptalet, IH), 4,0-4,5 (m, 2H),

5.3- 5,5 (m, IH), 6,3-6,5 (m, IH), 7,0-7,2 (m, 4H);

1-2-7 jelű vegyület: 0,64 (t, J=7 Hz, 3H), 0,8-1,7 (m,

4H), 2,0 (q, 2H), 2,.39 (s, 2H), 2,3-2,5 (m, 2H), 3,9-4,5 (m, 2H), 5,53 (d, d, J=16 Hz, J=6 Hz, IH), 6,35 (d, J=16 Hz, IH), 7,0-7,2 (m, 4H)

4. példa (E)-transz-6-{2’-[6”-ciklopropil-4 -(4“‘-fluor-fenil)-tieno(2,3-b)p!r!din-5 -il]-etinil}-4 -hidroxi3,4,5,6-tetrahidro-2H-piran-2-on (1-3-11 jelű vegyület) előállítása

Az 1-1-11 jelű vegyületet etanolban nátrium-hidroxid híg vizes oldatával hidrolizáljuk, így a megfelelő karbonsavat [(1-2-11) jelű vegyület] kapjuk. A karbonsavból vízelvonással, vagy toluollal végzett azeotrópdesztillációval, vagy szobahőmérsékleten diklór-metánban N-ciklohexil-N ’ -(2 ’ -metil-morfol ino-etil)karbodiimid-p-toluol-szulfonáttal, a kívánt laktonhoz (1-3-11 jelű vegyület) jutunk. A nyers laktont etil-acetátból végzett átkristályosítással tisztítjuk. A tisztított transz-lakton olvadáspontja: 203-205 °C.

A 4. példában leírthoz hasonló módon állítjuk elő az 1-3-1 és 1-3-7 jelű, az (1-3) általános képletnek megfelelő vegyületeket is, a megfelelő kiindulási vegyületek alkalmazásával. Az így kapott vegyületek fizikai tulajdonságai az alábbiak:

Vegyület	R¹	R²	R³	R^{4 5}	Op., °C
1-3-1	Et	Me	4-F	izopropil	-
1-3-7	Et	Me	4-F	ciklo- propil	164-166

H-NMR színképértékek (CDC1₃), δ ppm:

1-3-1 jelű vegyület: 0,66 (t, 3H), 1,30 (d, 6H), 1,51,7 (m, 2H), 1,99 (q, 2H), 2,42 (s, 3H), 2,5-2,7 (m, 2H), 3,37 (7 heptalet, IH), 4,2-4,3 (m, IH), 5,1-5,2 (m, IH), 5,36 (dd, J=15 Hz, J=6 Hz, IH), 6,42 (d, J=15 Hz, IH), 7,0-7,4 (m,4H).

1-3-7 jelű vegyület: 0,65 (t, J=7 Hz, 3H9, 0,9-1,3 (m, 4H), 1,5-1,8 (m, 2H), 1,97 (q, 2H), 2,2,-2,4 (m, IH), 2,39 (s, 3H), 2,5-2,7 (m, 2H), 4,2-4,3 (m, IH), 5,1-5,2 (m, IH), 5,60 (dd, J=17 Hz, J=7 Hz, IH), 6,43 (d, J=17 Hz, IH), 7,1-7,2 (m, 4H).

1. kiszerelési példa Tabletta

1-5-6 jelű vegyület	1.0 g
laktóz	5,0 g
kristályos cellulózpor	8,0 g
búzakeményítő	3,0 g
hidroxi-propil-cellulóz	1,0 g
CMC-Ca	1.5 g
magnézium-sztearát	0,5 g
Összesen	20,0 g
A fenti komponenseket a szokásos módon összeke-

verjük és tablettázzuk. így összesen 100 cukorbevonatú tablettát kapunk, amelyek mindegyike 10-10 mg hatóanyagot tartalmaz.

2. kiszerelési példa

Kapszula

1-5-6 jelű vegyület 1,0 g laktóz 3,5 g kristályos cellulózpor 10,0 g magnézium-sztearát 0,5 g

Összesen 15,0 g

A fenti komponenseket a szokott módon összekeverjük, majd a 4. sz. zselatinkapszulákba zárjuk. így 100 kapszulát kapunk, amelyek mindegyike 10 mg hatóanyagot tartalmaz.

3. kiszerelési példa Lágy kapszula

1-5-6 jelű vegyület	1,00 g
poli(etilén-glikol) (PEG-400)	3,89 g
telített zsírsav-triglicerid	15,00 g
borsmentaolaj	0,01 g
Polysorbate 80	0,10 g
Összesen	20,00 g
A fenti komponenseket összekeverjük, és 3. sz. lágy

100 lágy kapszulát kapunk, amelyek mindegyike 10 mg hatóanyagot tartalmaz.

4. kiszerelési példa Kenőcs

1-5-6 jelű vegyület	1,0 g	(10,0 g)
folyékony paraffin	10,0 g	(10,0 g)
cetanol	20,0 g	(20,0 g)

HU 205 359 Β

fehérvazelin 68,4 g	(59,4 g)
etil-parabén 0,1 g	(0,1 g)
L-metanol 0,5g	(0,5 g)
Összesen	100,0 g
A fenti komponenseket a szokásos módon összeke-

verjük, így 1%-os (10%-os) kenőcsöt kapunk.

5. kiszerelési példa Végbélkúp

1-5-6 vegyület	1,0 g
Witepsol H15*	46,9 g
Witepsol W35*	52,0 g
Polysorbate 80	0,1 g
Összesen	100,0 g
*Triglicerid márkaneve A fenti komponenseket	a szokásos módon megöl-

vasztva összekeverjük, és végbélkúp formákba öntjük. Lehűtés és megszilárdulás után 100 db 1 g-os végbélkúpot kapunk, amelyek mindegyike 10 mg hatóanyagot tartalmaz.

6. Kiszerelési példa Injekciós folyadék

1-5-6 jelű vegyület 1 mg injekciós minőségű desztillált víz 5 cm³

A hatóanyagot feloldjuk a desztillált vízben, amikor szükséges.

7. kiszerelési példa Granulátum

1-5-6 jelű vegyület	1,0 g
laktóz	6,0 g
kristályos cellulózpor	6,5 g
búzakeményítő	5,0 g
hidroxi-propil-cellulóz	1,0 g
magnézium-sztearát	0,5 g
Összesen	20,0 g

A fenti komponenseket a szokásos módon granuláljuk és 100 tasakba szétcsomagoljuk úgy, hogy mindegyik tasakban 200 mg granulátum legyen 10 mg hatóanyagtartalommal.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (I) általános képletű vegyületek - ebben a képletben

R¹ jelentése hidrogénatom, 1-5 szénátomos alkilcsoport vagy fenilcsoport;

R² jelentése hidrogénatom, 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy fenilcsoport; vagy pedig

R¹ és R² együtt egy 2-5 szénatomos alkilénláncot képez

R³ jelentése fluor-, klór- vagy brómatom;

R⁵ jelentése 1-5 szénatomos alkilcsoport vagy 3-6 szénatomos cikloalkilcsoport;

R¹² jelentése hidrogénatom, kémiailag vagy fiziológiailag hidrolizálható 1-4 szénatomos 'alkilcsoport, vagy pedig egy M szubsztituens, amelynek a jelentése ammóniumcsoport, nátrium- vagy káliumatom, a kalciumatom egyik vegyértéke, vagy pedig egy hidrogénatom, amellyel együtt a vegyület addíciós sót képez egy rövid szénláncú alkilcsoportot illetőleg alkilcsoportokat tartalmazó mono-, di- vagy trialkil-aminnal és kívánt esetben az R'² helyén hidrogénatomot tartalmazó, (1-2) általános képletű karbonsavak (1-3) általános képletű laktonjai - ebben a képletben R¹, R², R³ és R⁵ jelentése egyezik a fent megadottal - előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (II) általános képletű vegyületet - ahol R¹, R², R⁵ és R¹² jelentése egyezik a tárgyi körben megadottal - redukálunk;

és kívánt esetben egy kapott (1-1) általános képletű észterből az (1-2) általános képletű karbonsavat felszabadítjuk; és/vagy egy kapott észtert vagy karbonsavat az R¹²fenti meghatározásának megfelelő sóvá alakítunk; vagy kívánt esetben egy kapott (I) általános képletű vegyületet, a szükséghez képest hidrolízis vagy semlegesítés után, a megfelelő (1-3) általános képletű laktonná ciklizálunk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[3’-etil-4’(4”-fluor-fenil)-2’-metil-6’-(l”-metil-etil)-tieno(2,3-b)piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezye, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-2’-metÍl-6’(l”-metil-etil)-tieno(2,3-b)-piridin5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propilészterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988. 11.02.)
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[4’-(4”-fluor-ifenil)-6’-(l ”-metil-etil)-2’-fenil-tieno(2,3-b)-piridin5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propilészterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációjával képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezye, hogy a • megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988. 11.02.)
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-2’-metil-6’-(l”-metil-etil)-3’-fenil-tieno(2,3b)-piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzaljellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[4’-(4”-fluor-fen i 1) -2 ’-izopropil-ó’ -(1 ”-metil-etil)-tieno(2,3-b)-pi ridin-5’il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, npropil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve,

HU 205 359 Β hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
7. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-6’-(l”-metil-etil)-2’,3’-tetrametilén-tieno(2,3-b)piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
8. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[6’-ciklopropiI-3’-etil-4’-(4”-fIuor-fenil)-2’-metil-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, npropil-észterének, i-propil-észterének vagy karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk, (Elsőbbség: 1988.11.02.)
9. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[4’-(4”-fluor-fenil)-6’-(l”-metil-etil)-2’,3’-trimetilén-tieno(2,3-b)piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsőjának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
10. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[6’-ciklopropil-4’-(4”-fluor-fenil)-2’,3’-trimetilén-tieno(2,3-b)piridin-5’-il]-3,5-dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
11. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[6’-ciklopropiI-4’-(4”-fluor-fenil-2’,3’-pentametilén-tiano(2,3-b)piridin-5’-il]-3,5-dihídroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsőjának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti koncenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség: 1988.11.02.)
12. Az 1. igénypont szerinti eljárás (E)-7-[6’-ciklopropil-4’-(4”-fluor-feniI)-tieno(2,3-b)-piridin-5’-il]-3,5dihidroxi-hept-6-én-savnak, e karbonsav nátriumsójának, metil-észterének, etil-észterének, n-propil-észterének, i-propil-észterének vagy a karboxilcsoport és az 5-helyzetű hidroxil közötti kondenzációval képzett laktonjának előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk. (Elsőbbség:

1988.11. 02.)
13. Eljárás az 1. igénypontban meghatározott (I) általános képletű mevalonsav-származékok (1-3) általános képletű laktonjainak - ebben a képletben R¹, R², R³ és R⁵ jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottal előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely (I) általános képletű vegyületet - ahol R¹, R², R³, R⁵ és R¹²jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottal - a szükséghez képest a karbonsav-hidrolízis vagy savanyítás útján történő felszabadítása után, célszerűen vízelvonás útján ciklizálunk. (Elsőbbség: 1989.09.07.)
14. A 13. igénypont szerinti eljárás R¹ helyén hidrogénatomot vagy 1-5 szénatomos alkilcsoportot, R² helyén hidrogénatomot vagy 1-5 szánatomos alkilcsoportot, R³ helyén fluor-, klór- vagy brómatomot és R⁵helyén 1-5 szénatomos alkilcsoportot vagy 3-6 szénatomos cikloalkilcsoportot tartalmazó (1-3) általános képletű laktonok előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelően helyettesített kiindulási vegyületeket alkalmazunk. (Elsőbbség: 1989.09.07.)
15. Eljárás a koleszterin bioszintézisét gátló hatású gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely, az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű mevalonsav-származékot - a képletben R’, R², R³, R⁵ és R¹² jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottal - gyógyszerészeti célra alkalmas vivőanyag és/vagy egyéb segédanyag hozzákeverésével gyógyászati készítménnyé alakítunk. (Elsőbbség:

1988.11. 02.)
16. A13. és 15. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy hatóanyagként valamely, a 13. igénypont szerint előállított (1-3) általános képletű laktont - a képletben R¹, R², R³ és R⁶ jelentése egyezik az 1. igénypontban megadottal - alkalmazunk. (Elsőbbség: 1989. 09. 07.)