HU203984B - Proces for producing vaccine against dog coronavirus - Google Patents
Proces for producing vaccine against dog coronavirus Download PDFInfo
- Publication number
- HU203984B HU203984B HU882965A HU296588A HU203984B HU 203984 B HU203984 B HU 203984B HU 882965 A HU882965 A HU 882965A HU 296588 A HU296588 A HU 296588A HU 203984 B HU203984 B HU 203984B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- vaccine
- cell
- ccv
- cells
- infection
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 56
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 title claims description 9
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 claims abstract description 47
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 10
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 7
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 claims description 3
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 33
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 12
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 12
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 abstract description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 52
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 33
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 31
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 15
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 11
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 9
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 9
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 8
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 7
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 6
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 4
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 4
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 4
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 3
- 206010048685 Oral infection Diseases 0.000 description 3
- MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N [CH2]CN(CC)CC Chemical group [CH2]CN(CC)CC MZVQCMJNVPIDEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 241000711484 Transmissible gastroenteritis virus Species 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 239000012930 cell culture fluid Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 2
- YYXLGGIKSIZHSF-UHFFFAOYSA-N ethene;furan-2,5-dione Chemical compound C=C.O=C1OC(=O)C=C1 YYXLGGIKSIZHSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- IZQAUUVBKYXMET-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine Chemical compound NCCBr IZQAUUVBKYXMET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241001493036 Canine rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000003495 Coccidiosis Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 206010017918 Gastroenteritis viral Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 229920000209 Hexadimethrine bromide Polymers 0.000 description 1
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- 206010023076 Isosporiasis Diseases 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028735 Nasal congestion Diseases 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010033645 Pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 206010033647 Pancreatitis acute Diseases 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010035742 Pneumonitis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 230000010530 Virus Neutralization Effects 0.000 description 1
- 208000012873 acute gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 201000003229 acute pancreatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- OXJUJQDEISSCTB-UHFFFAOYSA-N but-3-en-2-imine Chemical compound CC(=N)C=C OXJUJQDEISSCTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013066 combination product Substances 0.000 description 1
- 229940127555 combination product Drugs 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 244000309457 enveloped RNA virus Species 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 208000001130 gallstones Diseases 0.000 description 1
- 210000003736 gastrointestinal content Anatomy 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036732 histological change Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000011140 intestinal infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 1
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000003319 supportive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001755 vocal effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14311—Parvovirus, e.g. minute virus of mice
- C12N2750/14334—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/20011—Coronaviridae
- C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/818—Viral vaccine for canidae or mustelidae, e.g. dogs, foxes, minks
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás kutya coronavírus elleni vakcina előállítására.
A coronavírusok sok állatfajnál, számos betegség esetén a legfontosabb előidéző okok egyike, ilyenek pl. az encephalitis, hepatitis, pneumonitis, neasopharyngitis, peritonitis és gastroenteritis. Tekintettel a bélben történő fertőzésre, a coronavírusok kimutathatók emberek, sertések, boijak, egerek, patkányok, csirkék, pulykák, kutyák, macskák és lovak ürülékében.
A kutya coronavírus (CCV) által okozott enteritisről először Binn és munkatársai számoltak be [Proc. 78th. Ann. Mtg. U. S. Anim. Health Assoc. Roanoke VA Oct: 359-366 (1974)]. A vírust először 1971-ben izolálták feltételezett vírusos gastroenteritisben szenvedő katonai kutyákból.
Még nem tisztázott okokból az 1970-es évek végén coronavírus eredetű enteritis bukkant fel kutyák jelentős betegségeként. A fertőzés primer forrása, úgy tűnik, fertőzött állatokból származó ürülék-anyag. A szájon át történő fertőzés replikációhoz vezet a vékonybél hámsejtjeiben. A vírust általában a fertőzést követő 3. és 14. napon fertőzött kutyák ürülékéből izolálhatjuk.
A CCV eredetű gastroenteritist enyhe depresszió, étvágytalanság és laza széklet jellemzi különlegesen átható szaggal. A betegség hirtelen tör ki, és hasmenéssel vagy a betegséget közvetlenül megelőző hányással társul. A hányás gyakorisága általában csökken a betegség első vagy második napja után. A széklet gyakran tartalmaz nyálkát és változó mennyiségű vért, narancstól vörösig terjedő színárnyalatot adva. Gyakran látható átrohanó hasmenés vizes vagy véres folyadék formájában. A fiatal kutyakölykök gyakran gyorsan kiszáradnak még akkor is, ha folyadékterápiát vezetünk be a betegség korai szakaszában. A pusztulás 24-36 órával a klinikai tünetek megjelenésétől számítva következik be a jól megalapozott gondoskodás ellenére. Úgy tűnik, hogy a stressz növeli a betegség súlyosságát Bizonyos esetekben megnövekedett testhőmérséklet figyelhető meg, de a legtöbb állat lázmentes, és néhány megbetegedett kutya esetében a hőmérséklet határozottan normális alatti. Lásd pl. Carmichael: „Infectious canine enteritis caused by a corona-like vírus” (Corona-jellegű vírus által okozott fertőző kutya enteritis), Laboratory Report, The James A. Baker Institute fór Animál Health, Comell U. 2 (9), (1978).
A leginkább fertőzött kutyák 1 hét— 1Ö nap után gyógyulnak, de azok a kutyák, amelyek gyors tüneti kezelést kapnak, és nyugodt, meleg környezetben vannak tartva, gyakran gyorsabban gyógyulnak [Appel és munkatársai: Comell Vet. 69, 123-133 (1979)]. 3-4 hetes állandó hasmenésről számolnak be bizonyos esetekben, amely ellenáll a kezelésnek [Appel és munkatársai: Canine Prac. 7, 22-36 (1980)]. Együttes szemés orrgennyesedés is előfordul, de kapcsolatuk a primer fertőzéssel nem ismeretes. A morfológiai károsodások a CCV enteritisben a bélben és a bélfodor nyirokcsomókban korlátozottak. A szövettani változások rendkívül hasonlóak ahhoz, amelyet szarvasmarha coronavírussal fertőzött gnotobiotikus borjaknál leírtak. A nem komplikált fertőzés kísérleti kutyákban enyhe, és a patológiai változások vagy nem mutathatók ki, vagy kitágult bélhurkokból állnak, amelyek vizes zöldessárga székletanyaggal vannak kitöltve. A bélfodor nyirokcsomók általában megnagyobbodottak és vérbők, vagy bevérzettek.
Az egyik esetben az inkubálási időtartam kísérletileg fertőzött kutyáknál mintegy 24-36 óra. A kutyák nem mutatnak tipikus klinikai tüneteket vagy a coronavírus gastroenteritisszel társult klasszikus hasmenést A mikroszkópos változások mérsékeltek, a bélbolyhok sorvadásával és a tüszőüreg mélyülésével, a lamina propria cellularitásában történő növekedéssel, a hámsejtek megnyúlásával, és a kehely-sejtek kiürülésével jellemezhetők. Az enyhe tünetek a kísérletileg fertőzött kutyák inokulálásához alkalmazott izolálási eljárás következményei lehetnek, és annak a ténynek, hogy a kutyák mentesek más fontosabb patogénektől és parazitáktól.
A CCV enteritis speciális kezelési módszere nem áll rendelkezésre. A terápia támogató jellegű, megkísérelve pótolni a folyadék- és elektrolit veszteséget, szabályozni a hasmenést és megakadályozni a másodlagos bakteriális fertőzést
A parenterálisan CCV-vel inokulált kutyákban a szérum antitest titer nagyobb, mint az orális fertőzésnek kitett kutyákban. Az orális fertőzés után a kutyák anamnéziás típusú antitest válasszal válaszolnak, és gyorsabb időtartamon belül elveszítik a vírust, mint a fertőzésnek ki nem tett kontroll kutyák. Úgy tűnik, hogy a helyi immunitás, amelyet valószínűleg IgA antitestek közvetítenek a bélben, esszenciális a CCV fertőzés elleni védelemhez, hasonló módon, mint az átvihető gastroenteritisnél sertésekben [Appel és munkatársai: Canine Prac. 7, 22-36 (1980)].
A CCV enteritis feltételezett diagnózisa klinikai jeleken alapszik. Az akut hányás és hasmenés egyéb okainak lehet tekinteni kutyákban az alábbi betegségeket: intoxikáció, bakteriális enteritis, coccidiosis, akut pancreatitis, akut vese- vagy májkárosodás, és más vírus-infekciók. A gyors elterjedés bizonyítása erősen sugallja a CCV enteritist. Számos közlemény van, amely leírja kutya parvovírus elektronmikroszkópos kimutatását CCV részecskékkel együtt kutya székletmintákban [lásd pl. Carmichael, fentebb idézett munka; Evermann és munkatársai: J. Am. Vet Med. Áss. 777, 784-786 (1980); Reseto és munkatársai: Arch. Virol. 66, 89-93 (1980)]. Az egyik beszámoló szerint kimutattak ezenkívül kutya rotavírust is egy székletmintában [McNulty és munkatársai: Vet. Rés. 706, 350-351 (1980]. Ez azt jelzi, hogy a hétköznapi eseteket bizonyos mértékig többszörös vírusfertőzésnek lehet tekinteni.
A CCV székletmintából vagy béltartalomból történő izolálásáról több kutató számolt be, és beszámoltak ennek bizonyos nehézségeiről. Kényes természetük és folyékony celluláris szubsztrátumaik hiánya miatt a coronavínisokat gyakran nem lehet izolálni vagy diagnosztizálni.
A szérum-átalakulást vagy post mortem meghatározást végzetes esetekben, beleértve a fagyasztott bél-21
HU 203 984 Β metszetek immunfluoreszcenciáját, mind lehet alkalmazni a megfelelő etiológiai diagnózishoz.
A coronavímsok nagy (mintegy 100 nm átmérőjű), burokkal ellátott RNS vírusok, amelyek csigavonalú nukleokapsziddal bírnak, jellegzetesen nagy bunkó alakú kiugrásokkal vagy tüskékkel, amelyeket peplomereknek nevezünk. Az RNS egyedi, lineáris szálat tartalmaz pozitív polaritással, durván 5,5 x 106 dalton molekulatömeggel. Az ultravékony szöveti metszetekben elektronmikroszkóppal megfigyelhető, hogy a vírus a citoplazmában levő vakuolumokba becsírázva található.
A vírus antigenicitás szempontjából a Swine Transmissible Gastroenteritis vírussal (átvihető sertésgastroenteritis vírus) rokon.
Acree és munkatársai a 4 567 042 és 4 567 043 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban leírnak egy inaktivált, illetve egy legyengített coronavírus vakcinát; mindkettő tenyésztett tápközeget tartalmaz.
A találmány tárgya tehát eljárás vakcina előállítására, amely kutyák kutya coronavíiussal (CCV) történő fertőzés által okozott betegséggel szembeni védelmére szolgál, amely vakcina sejttel társult CCV peplomer fehérje hatásos mennyiségeiből áll.
A találmány szerinti eljárás az alábbi lépésekből áll:
a) a vírus replikálására alkalmas sejttenyészet fertőzése legalább 0,2 MOI értékű CCV-vel (MOI: Multiplicity of Infection, a fertőzés sokszorozása);
b) a sejtek tenyésztése 6-18 órán át;
c) az elhasznált tenyészfolyadék elöntése;
d) a sejtek szétzúzása;
e) a szétzúzott sejtekből a sejttel társult peplomer fehérje összegyűjtése; és
f) a sejttel társult peplomer kombinálása parenterálisan elfogadható hordozóval.
A találmány tárgya további eljárás olyan polivalens vakcina előállítására, amely a sejttel társult CCV peplomer hatékony mennyiségét és egy vagy több más patogén organizmus vagy vírus ellen védő hatású antigén komponens hatékony mennyiségét tartalmazza.
A találmány szerinti eljárással előállított vakcinák kutyák CCV fertőzés által okozott betegség elleni védelmére alkalmazhatók oly módon, hogy parenterálisan az állatoknak adagoljuk a találmány szerinti vakcinát.
A CCV intracellulárisan replikálódik a fertőzés után. A replikációs ciklus folyamán a CCV RNS lefordítódik, hogy különböző szerkezeti és nem szerkezeti fehérjéket alakítson ki, amelyek a vírus replikációban érdekeltek. A kapszid fehérjék, beleértve a peplomer vagy E2 fehérjét, úgy tűnik, a membránhoz kötött poliriboszómákon fordítódnak le a durva endoplazmás retikulumnál. A vírus érési folyamata során a citoplazmás nukleokapszidok belecsíráznak az endoplazmás retikulumba, felvéve a kapszid fehérjéket, hogy érett vírus részecskéket képezzenek, majd külsőleg megnyilvánulnak a Golgi-apparátuson keresztül. A peplomer fehérje hasításon vagy más, transzláció utáni módosításon mehet keresztül a részecske képzést követően. Egyidejűleg bizonyos peplomer fehérjék, úgy tűnik, a sejtmembrán kettős lipid rétegébe beágyazva maradnak a fertőzött sejtbe való kezdeti belépéskor.
Felismertük, hogy a sejttel társult peplomer fehérje, azaz a peplomer fehérje, amely a fertőzött sejtben a részecske-képződés előtt létezik, a kutyákban parenterális beadáskor immunválaszt indukál, amely válasz védő hatású azok ellen a betegségi tünetek ellen, amelyek normálisan társulnak a virulens CCVvel történő fertőzéshez. Ez a felismerés meglepő annak a ténynek a fényében, hogy a teljes vírus, akár legyengített, akár inaktivált, viszonylag gyengén immunprotektív.
A sejttel társult peplomer fehérjét (mintegy 203 000 dalton molekulatömeg) fertőzött sejtek megfelelő tenyésztésével és kinyerésével, szintézissel vagy géntechnikai módszerekkel lehet előállítani.
Abból a célból, hogy a peplomert sejttenyésztéssel állítsuk elő, megfelelő sejttenyészetet vírussal fertőzünk és tenyésztjük. Bármilyen primer vagy folyamatos sejttenyészet, amely képes a vírus replikációjának elősegítésére, vagy amelyben a vírus adaptálható a replikálódáshoz, alkalmazható. Ilyenek például a primer kutyasejtek, pl. a kutya vesesejt és kutya timuszsejt; a kutya sejtvonalak, mint pl. a Madin Darby Canine Kidney sejtvonal és az A-72 fibroblaszt kutya sejtvonal (ATCC CRL 1542); primer macska sejtek/ mint a primer macska vesesejtek; macska sejtvonalak, mint pl. a Crandall Feline Kidney sejtvonal és a Wo-* od’s Feline sejtvonal; és más primer vagy folytonos emlős sejtek, mint pl. a Verő Monkey Kidney sejtvo’nal. *
A vírust a klinikai fertőzésekből ismert technikákkal lehet izolálni. Ilyen technika például egy fertőzött állat székletanyagának a szuszpendálása pl. szövettenyésztő tápkózegben valamely polikation jelenlétében, majd egy primer sejttenyészet inokulálását az ebből kapott felülúszóval [lásd pl. Binn és munkatársai: Proc. 78th Ann. Mtg. U. S. Anim. Health Assoc., Roanoke VA October: 359-366 (1974); Keenan és munkatársai: Am. J. Vet. Rés. 37,247-256 (1976); és Tingpalapong és munkatársai: Am. J. Vet. Rés. 43, 1687-1690 (1982)]. Egy virulens izolátum, az 1-71 törzs, amelyet Binn és munkatársai izoláltak 1971ben, többek között egyike azoknak, amelyek a köz számára rendelkezésre állnak. Ez beszerezhető pl. az American Type Culture Collectiontól (ATCC, Rockville, Maryland, Amerikai Egyesült Államok) ATCC VR-809 számon. Egyéb izolátumokról, pl. a K-328ról, S-378-ról, A76-5-ről és az ATCC VR-2068-ról számolnak be Acree és munkatársai a 4 567 042 és 4 567 043 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban.
Abból a célból, hogy a sejttel társult peplomer antigént termeljük és kinyerjük, a sejttenyészetet 0,2-2,0 víms részecske/sejttel fertőzzük, vagyis a fertőzési sokszorozás (MOI) 0,2-2,0 közötti értékkel egyenlő, és a MOI érték előnyösen 0,4 és 1,5 között van. A fertőzött sejteket a fertőzéstől számított 6-18 órán át te3
HU 203 984 Β nyésztjiik, előnyösen 9-16 órán át, legelőnyösebben 9-12 órán át A növesztő tápközeget ezután eltávolítjuk és a peplomert a sejtekből kinyerjük. Ezt előnyösen úgy hajtjuk végre, hogy a használt folyékony tápközeget friss folyékony tápközeggel helyettesítjük, majd a sejteket szétzúzzuk, hogy kibocsássák a sejttel társult peplomert, amely a friss folyékony tápközegben gyűlik össze. A sejttel társult peplomert egyesítjük valamely parenterálisan elfogadható hígítószerrel vagy hordozóval a vakcinakészítményhez. Ezeket a lépéseket kényelmesen kombinálhatjuk a szétzúzás előtt használt folyékony tápközeg helyettesítésével olyan tápközeggel, amely parenterálisan tolerálható.
A szétzúzást végrehajthatjuk pl. mechanikus, ultrahangos vagy kémiai úton, vagy ezek kombinációjával. Ezt kényelmesen elvégezhetjük a sejtek lefagyasztásával mintegy -40 - -70 °C hőmérsékletre. Felengedtetés után a folyadékot, amely a sejttel társult peplomert tartalmazza, összegyűjtjük. Mivel a tápközeget, amelyben a fertőzött sejttenyészet növekszik, eldobjuk, a friss, folyékony közeg lényegében mentes az extracelluláris vírusoktól, amelyek a fertőzött sejttenyészet növekedése során kiválasztódtak.
A folyadékot azonban kezelni kell, hogy inaktiváljuk a maradék extracelluláris és intracelluláris vírusokat és nukleokapszidokát, amely intracelluláris részecskék és nukleokapszidok a szétzúzásra bocsátódnak ki.
Bármilyen standard vírus inaktiválási eljárást lehet alkalmazni, amennyiben a peplomer nem denaturálódik. Ilyen technika például a besugárzás és a kémiai inaktiválás, pl. binér etilén-imin, béta-propiolakton, formaldehid, fenol vagy acetil-etilén-imin hozzáadás. Stabilizálószereket, adjuvánsokat puffereket és/vagy konzerválószereket, amelyek parenterálisan tolerálhatók, szintén adagolhatunk a végső vakcinához. így pl. az előnyös vakcina tartalmaz mertiolátot, pl. 1:60 000 arányban, és etilén maleinsav anhidrid adjuvánst pl. 0,2% mennyiségben.
A találmány szerinti vakcina sejttenyésztéssel történő előállításában fontos, a CCV vakcina készítményekről szóló korábbi beszámolókkal ellentétben, hogy eltávolítsuk a használt folyékony tápközeget a sejtekből az összezúzás előtt. Bár az ok nem világos, a fentebb leírt módon készített, de használt tápközeget alkalmazva friss tápközeg helyett, vakcinák kisebb vírussemlegesítő antitest titereket alakítanak ki, mint a friss tápközeget tartalmazó vakcinák. Az alábbi 1. táblázat mutatja be a használt tápközeget és sejteket alkalmazva készített vakcina vímssemlegesítő antitest literét kutyakölykökben („Folyékony vakcina”) összehasonlítva olyan vakcinával, amely lényegében azonos módon készült azzal a kivétellel, hogy a használt tápközeget dekantáltuk és a találmány szerinti módon új tápközegre cseréltük („Sejtvakcina). A kutyakölyök vírussemlegesítő antitesttiterei azt mutatják, hogy a „Sejtvakcina védő immunológiai választ stimulál (a titer mértani átlaga 32) a második vakcinálás idejére. A vakcinálás utáni mintavétel idejére a válasz 108. mértani átlag titerre emelkedik. Ezzel ellentétben a „Folyékonyvakciná”val vakcináit kutyakölykök negatívak maradnak végig a vizsgált időszakon át. Ez meglepő eredmény, mivel a használt tápközeg tartalmaz CCV vírust, amelytől elvárható lenne, hogy részt vesz az immunvédelemben.
1. táblázat
A „Sejtvakcinák és használt „Folyadékvakcinák” potenciálja kutyakölykökben
Csoport | Kutya száma | Vírussemlegesítő antitest-titer | |
A második vakcinálás előtt | A második vakcinálás után | ||
DE-70 | 32 | 128 | |
„Sejtvakcina” | DE-74 DE-76 | 69 16 | 128 64 |
DE-86 | 32 | 128 | |
Titer geometriai átlaga | 32 | 108 | |
DE-78 | 0 | 0 | |
.Folyadék- | DE-80 | 0 | 0 |
vakcina” | DE-82 | 0 | 0 |
DE-84 | 0 | 0 | |
Titer geometriai átlaga | - | - |
Azokban a kísérletekben, amelyeket annak bemutatására szántunk, hogy a fertőzés utáni eltelt idő milyen fontos a sejttel társult peplomer antigén termelése szempontjából, a fehérje mennyiségét, amely sejttel társult, és azt a mennyiséget, amely a sejttenyésztő közegben van, és ezért vínissal társult, óránként meghatároztuk enzimmel kapcsolt immun-vizsgálat (ELISA) segítségével. Az antigén relatív mennyiségeit a 2. táblázatban mutatjuk be. Bár nem szándékozunk kötődni egy adott mechanizmushoz vagy magyarázathoz, úgy tűnik, hogy az idő hossza, amelyen át a sejteket tenyésztjük, fontos a változások miatt, amelyek a peplomerrel történnek később, a fertőzési ciklusban.
2. táblázat
Órák a fertőzés után | Peplomer fehérje | |
Sejttel társult | Vírussal társult | |
11 | 4830 | 475 |
12 | 3895 | 556 |
13 | 5946 | 748 |
14 | 7282 | 1454 |
15 | 4423 | 2044 |
A sejttel társult peplomer antigénről úgy találtuk, hogy a MOI értéktől is függ. A 3. táblázat adatokat mutat be olyan kísérletsorozatból, amelyben a MOI értéke 0,01 és 1,1 közti tartományban van. Az összes tenyészeteket 12 órával a fertőzés után nyertük ki, és az antigén mennyiségét ELISAval határoztuk meg.
HU 203 984 Β
3. táblázat
MOI | Peplomer fehérje | |
Sejttel társult | Vírussal társult | |
0,01 | 1221 | 0 |
0,04 | 2911 | 13 |
0,1 | 3805 | 93 |
0,4 | 7877 | 207 |
1,1 | 8927 | 646 |
A sejttel társult peplomer antigént másféle módszerekkel is előállíthatjuk. így pl. a peplomert lehet pl. immunaffinitás adszorpciós kromatográfiával tisztítani, szekvenciaelemzés után elő lehet állítani peptidszintézissel, vagy elő lehet állítani a peptid-szekvenciából származó DNS kódoló szekvencia kifejezésével valamely iekombináns gazda mikroorganizmusban vagy sejtben. Ezenkívül a peplomemek azokat a származékait, amelyek megőrzik a sejt-eredetű antigén immttnprotektív tulajdonságait, elő lehet állítani standard rekombináns DNS technikával, fehéqe-technikával vagy kémiai technikákkal.
Bárhogyan is állítjuk elő, a vakcinát parenterálisan, pl. intramuszkulárisan vagy szubkután adjuk be a kutyáknak, előnyösen legalább 3 hónapos korukban. Előnyösen beadunk egy második dózist is 2-4 héttel az első beadás után. Az évenkénti újravakcinálás ajánlatos. Ha fiatalabb kutyákat vakcinálunk, ezeket előnyösen 3 hónapos korukban újra vakcináljuk. A vemhes nőstények vakcinálását valószínűleg legjobb elkerülni.
Az egyes vakcinadózisok a sejttel társult peplomer hatásos mennyiségét tartalmazzák, azaz azt a mennyiséget, amely hatásos parenterális kétszeres vakcinálások után kutyák védelmében CCV fertőzés által okozott súlyos betegség-tünetek ellen, pl. gastroenteritis ellen. A fentebb leírt eljárást követően, amelyben az antigént sejttenyészet fertőzésével állítják elő, olyan folyadékot kapunk, amely tartalmazza ezt a hatásos mennyiséget Az ilyen folyadékot tipikusan hígítani lehet akár 1/10 arányban is, és ez még hatásos mennyiséget tartalmaz. Az egyes vakcinadózisok teljes térfogata tipikusan 0,5 és 2 ml, előnyösen 1-1,5 ml között van.
A találmány szerinti vakcinát lehet kombinálni más vakcináié szerekkel polivalens vakcinákban, pl. más inaktivált (elpusztított) vagy legyengített kutyavírussal kombinálva. Az ilyen más vakcinakomponensek előnyösen valamely bélbetegséget okozó víms, pl. rotavírus vagy parvovírus, vagy ezekből számlázó más immunprotektív antigén. Több ilyen inaktivált és legyengített vímsvakcina és antigén ismeretes. Előnyös polivalens vakcina egy olyan bivalens vakcina, amely a jelen találmány szerinti vakcina és egy módosított élő vagy elölt parvovírus vakcina kombinációja. Az ilyen vakcina a jelen találmány szerinti sejttel társult peplomer és a módosított élő vagy elölt parvovírus vakcinához elegendő mennyiségét (pl. 6,3 logi0TCIDJ0 adagonként) tartalmazza. (TCID: szövettenyészet fertőző dózis. TCID50: az a vírusmennyiség, amennyi a szövettenyészet sejtjei 50%-ának a fertőzéséhez szükséges.) A teljes dózistérfogat 0,5-2 ml, előnyösen 1-1,5 ml. Carmichael és munkatársai (4 303 645 lajstromszámú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás) ismertetnek egy módosított éló kutya parvovírus vakcinát, beleértve a vakcináié törzsek és hatásos dózisaik előállítását, amelyet lehet kombinálni a jelen találmány szerinti vakcinával, hogy találmány szerinti bivalens vakcinát készítsünk.
Az ez után következő példák a találmány szerinti eljárás bemutatását szolgálják, és nem korlátozó jellegűek.
1. példa.
Vakcina készítése
Kutya coronavínis NL-18 törzset izolálunk olyan kutyák csoportjának székletmintájából, amelyek akut gastroenteritisben szenvednek. A kezdeti izolálás primer kutya-vesesejteken 50 pg dietil-amino-etil (DEAE) dextránt igényel a fenntartó tápközeg 1 ml-ére [alap tápközeg: Eagle (BME) Earle-sókkal (Grand Island Biological Co., Grand Island, New York)]. A további passzázsokhoz DEAE dextrán nem szükséges. A vímst 4 passzálással adaptáljuk a primer kutya-vesesejtben, és további 36 passzálással macska vesesejt-vonalban, amelyet a 73d-93d passzálási szintnél alkalmazunk. Gill [„Isolation and Characterisation of a Coronavims”, doktori disszertáció (University of Nebraska, 1982. augusztus)] leírja a CCV NL-18 törzs izolálását, ezt a törzset korábban CCV-18 törzsnek nevezték.
Gördülő palack tenyészetek vírussal való inokulálásához a macska vesesejtvonal tömör egy-rétegéről (monolayer) a tápközeget dekantáljuk. A tápközeget a fenntartó tápközeggel helyettesítjük, amely 4-8% Polybrene-vel (Sigma Chemical Co., SL Louís, Missouri) van kiegészítve; ez 2-10% vímst tartalmaz, amely viszont legalább 107,0 TCID50/ml hígítatlan víms-titert (0,2-1,0 MOI) tartalmaz. Az inokulált tenyészeteket 9-16 órán át inkubáljuk 35-37 °C hőmérsékleten. A fertőzés tipikus citopatikus hatással (CPE) érvényesül a sejt egy-rétegen, nevezetesen legömbölyített sejtek foltjaival.
Az inkubálás után és mikroszkopikus vizsgálat után, hogy a CPE-t igazoljuk, a fenntartó tápközeget dekantáljuk és eldobjuk. 100 ml térfogatú Hals tápközeget adunk minden egyes 500 ml-es gördülő palackhoz. A Hals tápközeg Eagle alap-tápközeg (BME) Hank-féle sókkal (Grand Island Biological Co., Grand Island, New York), amely 0,5% laktalbumin hidrolizátummal (Humko Sheffield, Memphis, Tennessee) van kiegészítve. A tenyészeteket azután -50 °C hőmérsékleten fagyasztjuk 6 órán át. Felengedtetés után binér etilénimin (BEI) oldatot adunk hozzá 1% (térfogat/térfogat) végső koncentrációban, hogy inaktiváljuk a megmaradó vínisrészecskéket. A BEI oldatot úgy készítjük el, hogy 2,05 g 2-bróm-etil-amint és 0,8 g nátrium-hidroxidot adunk 100 ml vízhez. Az inaktiválást 35-37 °C hőmérsékleten végezzük, 35°-37 °C hőmérsékletet tartva fenn állandó ke verte réssel 2 napos inkubálással. Az inaktiválást úgy fejezzük be, hogy hideg (4 °C)
HU 203 984 Β nátrium-tioszulfát oldatot adunk hozzá 0,25% (tömeg/térfogat) végső koncentrációig. Tartósítószerként mertiolátot adunk hozzá 1:10 000 végső koncentrációban. A végső vakcinát úgy állítjuk elő, hogy a sejttenyésztő folyadékot összekeverjük fenntartó tápközeggel, majd adjuvánsként etilén-malein-sav-anhidridet adunk hozzá 0,2% végső koncentrációban. A vakcina tipikusan 20% sejttenyésztő folyadékot, 60% fenntartó tápközeget és 20% adjuváns oldatot tartalmaz, térfogat szerint számolva. Az adjuváns oldatot úgy készítjük, hogy etilén-maleinsav anhidrid (EMA) 91, Mon santa, St. Louis, Missouri) törzsoldatát hidráljuk 10 n nátrium-hidroxid hozzáadásával. Az EMA törzsoldat az alábbiakat tartalmazza:
Vegyes anyag gramm! liter
NaQ 0,5
KH2PO4 0,565
Na2HPO4 0,135
EMA 91 10,0 fenol-vörös 0,135
2. példa
A vakcina által biztosított védelem tanulmányozása
Primer kutya vesesejtekben negyedik passzálási szintnél levő CCV-71-et átviszünk A-72 sejtvonalra (ATCC CRL 1542), megfelelő térfogatokra osztjuk, és -70 °C hőmérsékleten tároljuk. A vínist virulens fertőző vírusnak nevezzük, és úgy standardizáljuk, hogy 105·3 TCID50-et tartalmazzon milliliterenként (a CCV71 azonos az ATCC VR-809-cel).
Az A-72 sejtvonalat az ATCC-től szerezzük be a 33. passzálási szintnél (ATCC CRL 1542). Ezen a passzálási szinten az A-72 sejtek nem érzékenyek a CCV fertőzésre. A sejtvonalat sorozatban szaporítjuk 100 egymást követő passzálással, és a 139—140. passzálási szintnél alkalmazzuk a CCV szaporításhoz és tisztításhoz. Ezen a passzálási szinten az A-72 sejtvonal nagyon fogékony a CCV rögzítésére és replikálására.
Fiatal, egészséges kutyakölyköket (8-14 hetesek), amelyeknek nincs ELISA titere CCV-re, alkalmazunk a kísérletekben. Ezeket elkülönítő berendezésekben helyezzük el a kísérleti vizsgálatok időtartama alatt.
Összesen 20 kutyakölyöknek adunk szubkután két 1 ml-es adag vakcinák amelyet lényegében úgy készítünk, ahogyan ezt az 1. példában leírtuk; a két adag közt 21 nap van. Öt kutyakölyköt nem vakcinálunk, ezek a fertőzési kontrollok. A 20 vakcináit állatból és az 5 kontroliból vért veszünk a vakcinálás időpontjában. Majd vért veszünk a vakcinálás utáni 21. napon (abban az időpontban, amikor a vakcináit állatokat újra vakcináljuk), a második vakcinálás utáni 14. napon (amikor a kutyakölyköket provokáljuk és a provokálás (fertőzés) utáni 14. napon.
A vakcináit állatoknak és a kontrolioknak nem adunk enni a provokálás előtt 18-24 órával. A provokálást 5 ml virulens, fertőző víms szájon át végzett inokulálásával (105·3 TCID50/ml) végezzük. 18-24 órával a provokálás után a fertőzött kutyakölyköket visszaállítjuk a normális étrendre.
A pro vokálist követően a kutyakölyköket 14 napon át megfigyeljük a betegség vagy reakció jeleire. A megfigyelési időszak során a hőmérsékletet mérjük és vérmintákat gyűjtünk fehérvérsejt számláláshoz. Székletmintákat gyűjtünk naponta 21 napon át a CCV elleni bélsár-antitest (bél IgA antitest) meghatározásához.
Az egyes vakcinálásokat követően az összes kutya jól van és normális marad. A 4. táblázat mutatja be a kulyakölykök víruscentralizációs (VN) antitest titerét a vakcinálás előtt, második vakcinálás előtt és provokálás előtt. Az összes kulyakölyök VN szeronegatív az első vakcinálás idejében, és negatív marad, amikor a második adagot adagoljuk. A fertőzés időpontjában (két héttel a második vakcinálás után) a VN liter a 0-16 közti tartományban van, a titer mértani átlaga 5. Az 5. táblázat mutatja be a kutyák és a vérvételek adatait ugyanúgy, mint a 4. táblázatban, de ELISA-t alkalmazva az antitest-titerek meghatározásához. Akutyakölykök szeronegatívak az első vakcinálás időpontjában, és ezek közül csupán 7 mutat antitest-választ a második vakcinálás időpontjában. A provokálás időpontjában az összes kulyakölyök jó ELISA antitest ti tért mutat.
nappal a provokálás után a provokált kontroll kutyakölykök ELISA antitest titerének mértani átlaga 3880, míg a vakcináit állatok ELISA antitest titerének mértani átlaga >19 106 (5. táblázat). A vakcináit állatok magas Immorális antitest titere a vakcinálásnak és a provokálást követő jó másodlagos válasznak tulajdonítható, és ez a védelemre utal.
A provokálást követően néhány vakcináit állat rövid vagy átmeneti tüneteket mutat az étvágytalanságtól a hányásig. A provokálást kontrollállatok az étvágytalanság jeleit csak a provokálás után mutatják. Ezek a tünetek általában a provokálás után 6-10. napon figyelhetők meg. A provokálási kontroll kutyakölykök több klinikai tünetet mutatnak, mint a vakcináit csoport.
A fehérvérsejtszámot a provokálástól számítva naponta figyeljük a betegség értékeléséhez. Szignifikáns leukopéniát nem figyelünk meg sem a vakcináit, sem a provokálási kontroll kutyakölykökben. Enyhe leukocitózis figyelhető meg a provokálási kontroll kutyakölykökben a 9. naptól kezdődően, és ez folytatódik a 13. napig.
táblázat
Mintaoltás immunogenecitási vizsgálat Vírussemlegesítő antitest titerek (VN titerek)
Kutya száma | Vírussemlegesítő antitest titerek | |||
Vakcinái- tok | Vakcinálás előtt | 2. vakcinálás előtt | Provokálás előtt | Provokálás után |
DE-88 | 0' | 0 | 4 | 256 |
DE-89 | 0 | 0 | 16 | 1024 |
DE-90 | 0 | 0 | 2 | 256 |
DE-91 | 0 | 0 | 8 | 512 |
DE-94 | 0 | 0 | 8 | 1024 |
HU 203 984 Β
Kutya száma | Vírussemlegesítő antitest titerek | |||
Vakcinál- tak | Vakcinálás előtt | 2. vakcinálás előtt | Provokálás előtt | Provokálás után |
DE-95 | 0 | 0 | 8 | 1024 |
DE-96 | 0 | 0 | 8 | 1024 |
DE-97 | 0 | 0 | 2 | 128 |
DE-98 | 0 | 0 | 2 | 256 |
DE-99 | 0 | 0 | 2 | 256 |
F-125 | 0 | 0 | 0 | 64 |
F-126 | 0 | 0 | 0 | 128 |
F-127 | 0 | 0 | 4 | 64 |
F-128 | 0 | 0 | 2 | 128 |
F-129 | 0 | 0 | 4 | 512 |
F-130 | 0 | 0 | 8 | 2048 |
F-131 | 0 | 0 | 2 | 1024 |
F-132 | 0 | 0 | 0 | 512 |
F-133 | 0 | 0 | 8 | 512 |
F-134 | 0 | 0 | 16 | 2048 |
Mértani átlag | 0 | 0 | 5 | 402 |
Kontrollok | ||||
DF-53 | ND2 | ND | 0 | 64 |
DF-54 | ND | ND | 0 | 128 |
DF-55 | ND | ND | 0 | 128 |
DF-56 | ND | ND | 0 | 518 |
DF-57 | ND | ND | 0 | 64 |
Mértani átlag | - | - | 0 | 128 |
1 Az antitest titert úgy fejezzük ki, mint annak a legnagyobb szérumhígításnak a reciprokát, amely teljes semlegesítést mutat 2 ND - nem határoztuk meg
5. táblázat
Mintaoltás immunogenecitási vizsgálat ELISA semlegesítő antitesttiterek
Kutya száma | ELISA semlegesítő antitesttiterek | |||
Vakcinál- tak | Vakcinálás előtt | 2. vakcinálás előtt | Provokálás előtt | Provokálás után |
DE-88 | 0' | 0 | 640 | >20 480 |
DE-89 | 0 | 80 | 10240 | >20 480 |
DE-90 | 0 | 40 | 5120 | >20 480 |
DE-91 | 0 | 10 | 640 | 20 480 |
DE-94 | 0 | 0 | 320 | >20 480 |
DE-95 | 0 | 0 | 640 | 20 480 |
DE-96 | 0 | 0 | 640 | >20 480 |
DE-97 | 0 | 0 | 640 | 10240 |
Kutya száma | ELISA semlegesítő antitesttiterek | |||
Vakcinál- tak | Vakcinálás előtt | 2. vakcinálás előtt | Provokálás előtt | Provokálás után |
DE-98 | 0 | 0 | 1280 | >20 480 |
DE-99 | 0 | 0 | 320 | 20 480 |
F-125 | 0 | 0 | 1280 | >20 480 |
F-126 | 0 | 20 | 640 | >20 480 |
F-127 | 0 | 10 | 160 | >20 480 |
F-128 | 0 | 0 | 640 | 10240 |
F-129 | 0 | 0 | 320 | >20 480 |
F-130 | 0 | 10 | 1280 | >20 480 |
F-131 | 0 | 20 | 160 | >20 480 |
F-132 | 0 | 0 | 80 | >20 480 |
F-133 | 0 | 0 | 1280 | >20 480 |
F-134 | 0 | 20 | 1280 | >20 480 |
Mértani átlag | 0 | 3 | 715 | >19 106 |
Kontrollok | ||||
DF-53 | ND2 | ND | 0 | J5560 |
DF-54 | ND | ND | 0 | Ii2o ; |
DF-55 | ND | ND | 0 | 2560 |
DF-56 | ND | ND | 0 | 5120 |
DF-57 | ND | ND | 0 | 5120 ‘ |
Mértani átlag | - | - | 0 | 3880 ’ |
-?r1 Az antitest titert úgy fejezzük ki, mint annak a szérum-hígításnak reciprokát, ahol a különbség a 410 nm-nél mért adszorbanciában a coronavírust tartalmazó mikrotitráló lemez üregek és a sejtkontrollt tartalmazó üregek között >0,05.
2i\D -nem határoztuk meg
A fertőzés utáni hőmérséklet-választ szintén követjük, mint a klinikai CCV betegség paraméterét. A fertőzés után hőmérsékletválasz egyaránt előfordul mind a vakcináit, mind a kontroll állatokban. A viszonylagos növekedés a hőmérsékletben nagyobb a kontrollokban, mint a vakcináit állatokban. A növekedés a hőmérsékletben nem elég ahhoz, hogy gondot okozzon. A hőmérséklet-profil a kontroll kutyakölykökben, úgy tűnik, kétfázisú, egy másodlagos hőmérsékleti válasszal, amely a provokálás utáni 10. napon lép fel. A kétfázisú hőmérséklet-profilt azelőtt is észlelték virulens CCVvel fertőzött kutyakölyköknél. Ilyen kétfázisú hőmérsékleti választ nem jegyeztünk fel a kontroloknál.
ELISA módszert fejlesztünk ki, hogy közvetlenül mérjük a vakcináit kutyakölykök béltraktusában nyújtott védelmet a béltraktus fertőzése ellen virulens CCV-vel. A 6. táblázat mutatja be a provokálás után naponként végzett anti-CCV IgA meghatározásokat. A táblázatban található értékek vakcináit és nem-vakcináit állatok provokálás utáni relatív anti-CCV IgA értékét mutatják. Az anti-CCV IgA az alapvonal szintjénél vagy ahhoz közel marad.
HU 203 984 Β
A szignifikáns növekedés a vakcináit állatok antiCCV IgA-jában, amely a provokálás utáni 7. napon kezdődik, a bél nyálka felületek adjuvált, inaktivált CCV vakcinával történő parenterális feltöltésének tulajdonítható. Az orális provokálás stimulálja a nyálka IgA memória választ, jelentős anti-CCV IgA választ váltva ki a béltraktusban. Ez a nagy IgA válasz elegendő a védelemhez a fertőzés ellen. Kicsiny anti-CCV IgA válasz észlelhető vagy nem észlelhető válasz a provokált kontroliokban, demonstrálva a feltöltött memóriasejtek hiányát és a védelem hiányát
Ez a példa azt bizonyítja, hogy a sejthez társult CCV peplomert tartalmazó vakcina védő hatású a CCV-vel történő fertőzés által okozott betegség ellen.
6. táblázat
Mintaoltás immunogenecitási vizsgálat Széklet anti-CCV immunglobulin A.
Kutya- kölykök jele | Napok a fertőzés után | |||||||||||||||||||||
0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 | 19 | 20 | 21 | |
DE-88 | ,04 | ,03 | ,04 | ,05 | ,01 | ,00 | ,01 | ,01 | ,00 | ,27 | ,38 | ,43 | ,36 | ,56 | ,43 | ,43 | ,33 | ,29 | ,25 | ,26 | ,33 | ,41 |
DE-89 | ,01 | ,09 | ,02 | ,06 | ,00 | ,04 | ,02 | ,07 | ,29 | ,26 | ,52 | ,81 | ,56 | 1,09 | ,78 | ,77 | ,69 | ,66 | ,70 | ,43 | ,65 | 22 |
DE-90 | ,02 | ,02 | ,01 | ,02 | ,00 | ,04 | ,06 | ,03 | ,06 | ,09 | ,18 | 22 | ,24 | ,29 | ,28 | ,32 | ,34 | ,12 | ,28 | ,18 | ,18 | ,21 |
DE-91 | ,04 | ,04 | ,01 | ,01 | ,00 | ,00 | ,04 | ,06 | ,14 | ,16 | ,12 | ,18 | ,20 | ,11 | ,12 | ,15 | ,18 | ,20 | ,11 | ,17 | ,15 | .17 |
DE-94 | ,01 | ,10 | ,14 | ,02 | ,00 | ,03 | ,01 | ,06 | ,07 | ,06 | ,14 | ,14 | ,18 | ,21 | ,10 | ,10 | ,21 | ,28 | ,17 | ,17 | ,15 | ,17 |
DE-95 | ,01 | ,00 | ,01 | ,01 | ,03 | ,01 | ,01 | ,02 | ,05 | ,04 | ,06 | 22 | ,20 | ,19 | ,22 | ,17 | ,14 | ,19 | ,16 | ,13 | ,10 | ,17 |
DE-96 | ,03 | ,00 | ,01 | ,02 | ,10 | ,09 | ,09 | ,01 | ,12 | ,15 | ,21 | ,14 | ,15 | ,21 | ,14 | ,15 | ,20 | ,26 | ,23 | ,19 | ,18 | ,05 |
DE-97 | ,00 | ,07 | ,00 | ,04 | ,05 | ,02 | ,02 | ,02 | ,08 | ,06 | ,14 | ,14 | ,18 | ,12 | ,13 | ,37 | ,22 | ,15 | ,21 | ,25 | ,14 | 24 |
DE-98 | ,02 | ,03 | ,00 | ,00 | ,01 | ,00 | ,02 | ,03 | ,08 | ,07 | ,05 | ,04 | ,03 | ,16 | ,18 | ,28 | ,23 | ,11 | ,14 | ,08 | ,07 | ,09 |
DE-99 | ,00 | ,00 | ,02 | ,01 | ,08 | ,04 | ,03 | ,08 | ,11 | ,13 | ,14 | ,16 | ,08 | ,08 | ,12 | ,13 | .12 | ,10 | ,13 | ,14 | ,03 | ,10 |
F-125 | ,03 | ,13 | ,00 | ,02 | ,01 | ,00 | ,00 | ,02 | ,14 | ,19 | ,22 | ,32 | ,37 | ,49 | ,51 | ,47 | ,49 | ,39 | ,39 | ,34 | ,37 | ,29 |
F-126 | ,06 | ,00 | ,00 | ,00 | ,04 | ,01 | ,02 | ,02 | ,10 | ,21 | ,26 | ,26 | ,48 | ,37 | ,45 | ,27 | ,24 | ,27 | ,20 | ,20 | ,13 | ,20 |
F-127 | ,06 | ,00 | ,00 | ,02 | .07 | ,06 | ,00 | ,03 | ,20 | ,23 | ,40 | ,33 | ,34 | ,30 | ,34 | ,48 | ,43 | ,43 | ,29 | ,29 | 22 | 29 |
F-128 | ,00 | ,00 | ,00 | ,01 | ,02 | ,02 | ,05 | ,00 | ,00 | ,03 | ,12 | ,15 | ,17 | ,33 | ,32 | ,30 | ,18 | ,37 | ,19 | ,18 | ,18 | 22 |
F-129 | ,05 | ,02 | ,00 | ,00 | ,01 | ,00 | ,01 | ,15 | ,17 | ,22 | ,25 | ,21 | ,29 | ,52 | ,48 | 1,07 | ,77 | ,54 | ,44 | ,39 | ,13 | ,28 |
F-130 | ,17 | ,09 | ,04 | ,05 | ,06 | ,09 | ,03 | ,06 | ,15 | ,48 | ,38 | ,50 | ,76 | ,34 | ,28 | ,35 | ,30 | ,11 | ,24 | ,23 | ,17 | ,04 |
F-131 | ,12 | ,00 | ,02 | ,05 | ,05 | ,00 | ,00 | ,04 | ,17 | ,18 | ,32 | ,31 | ,29 | ,43 | ,30 | ,28 | ,36 | ,29 | ,25 | ,30 | ,28 | ,14 |
F-132 | ,01 | ,06 | ,02 | ,03 | ,00 | ,04 | ,05 | ,05 | ,05 | ,11 | ,15 | ,17 | ,21 | ,32 | ,17 | ,19 | ,25 | ,07 | ,25 | ,17 | ,32 | ,47 |
F-133 | ,20 | ,00 | ,05 | ,04 | ,03 | ,03 | ,02 | ,03 | ,04 | ,11 | ,43 | ,43 | ,45 | ,71 | ,29 | ,61 | ,61 | .41 | ,23 | .12 | 39 | ,40 |
F-134 | ,07 | ,00 | ,01 | ,02 | ,08 | ,05 | ,04 | ,05 | ,17 | ,20 | ,27 | ,39 | ,29 | ,26 | ,29 | ,29 | ,12 | ,16 | ,19 | ,25 | ,21 | 2i |
Átlag | ,05 | ,05 | ,03 | ,02 | ,03 | ,03 | ,03 | ,04 | ,11 | ,16 | ,24 | ,28 | ,27 | ,35 | ,30 | ,37 | ,32 | ,27 | ,25 | ,22 | ,22 | ,25 |
Kontrollok | ||||||||||||||||||||||
DF-53 | ,044 | ,06 | ,02 | ,03 | ,06 | ,03 | .02 | ,03 | ,02 | ,01 | ,02 | ,05 | ,05 | ,02 | ,03 | ,13 | ,03 | ,07 | ,06 | ,07 | ,06 | ,04 |
DF-54 | ,03 | ,07 | ,03 | ,02 | ,02 | ,02 | ,01 | ,03 | ,01 | ,02 | ,04 | ,03 | ,04 | ,02 | ,03 | ,13 | ,05 | ,07 | ,06 | ,07 | ,06 | ,04 |
DF-55 | ,02 | ,00 | ,04 | ,01 | ,01 | ,01 | ,05 | ,04 | ,00 | ,01 | ,01 | ,01 | ,05 | ,01 | ,01 | ,04 | ,00 | ,01 | ,01 | ,11 | ,04 | ,20 |
DF-56 | ,02 | ,00 | ,00 | ,01 | ,04 | ,03 | ,03 | ,03 | ,01 | ,02 | ,03 | ,09 | ,01 | ,00 | ,02 | ,03 | ,09 | ,03 | ,12 | ,15 | ,09 | ,04 |
DF-57 | ,02 | ,03 | ,04 | ,02 | ,01 | .01 | ,00 | ,04 | ,04 | ,00 | ,01 | ,01 | ,01 | ,03 | 02 | ,08 | ,04 | ,10 | ,07 | ,08 | ,02 | ,17 |
Átlag | ,03 | ,03 | ,03 | ,02 | ,03 | ,02 | ,02 | ,03 | ,02 | ,01 | ,02 | ,04 | ,03 | ,02 | ,02 | ,06 | ,04 | ,04 | ,05 | ,08 | ,05 | ,10 |
Megjegyzés: a vessző után megadott értékek a nulla egész utáni tizedes értékeket jelentik,
3. példa
Kombinációs vakcina
A jelen találmány szerinti CCV vakcinát és egy módosított, élő kutya parvovínis vakcinát (CPV) (6,3 1°8ioTCID5o adagonként) adunk 6 darab, 9-12 hetes kutyakölyöknek.
héttel a vakcinálás után a kutyaköíykök ELISA antitest üterének mértani átlaga 113 a CCV frakcióra és VN titerének mértani átlaga 912 a CPV komponensre. Ebben az időpontban a kutyaköíykök kapnak egy második adagot a kombinációs termékből. Két héttel a második vakcinálás után a CCV ELISA antitest titer mértani átlaga 3260 és a CPV VN titer mértani átlaga 1448.
HU 203 984 Β
A 6 fogékony kutyakölyök második csoportját vakcinájuk monovalens, módosított, éló CPV vakcinával (6,3 log10TCIDJ0). A CPV-t sejt-passzálással módosítjuk. 3 héttel a vakcinálás után a kulyakölykök VN antitest titerének mértani átlaga CPV-re 1448. Ebben az 5 időpontban a kutyakölykök CPV vakcina második adagját kapják meg. Két héttel a második vakcinálás után a CPV VN titer mértani átlaga 2896. A különböző vér-mintavételekből kapott szérumokat CCV titene vizsgáljuk, és negatívnak találjuk ennek a vizsgálatnak 10 a folyamán.
Egy kutyakölyök kivételével az összes kutyakölyök jö választ ad CPV-re. Annak az egy kutyakölyöknek a kivételével mind azonos választ mutatnak CPV-re, akár CPV-vel van kombinálva, akár monovalens termékként 15 van jelen.
Ez a példa azt demonstrálja, hogy a találmány szerinti CCV vakcinát lehet kombináltan alkalmazni más vakcina komponensekkel, főleg kutya parvovírus vakcina komponenssel. 20
Claims (4)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Eljárás kutya coronavínis által okozott fertőzések elleni vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogya) a vírus replikációjára alkalmas sejttenyészetet fertőzünk legalább 0,2 fertőzési sokszorozási értékű (MOI értékű) kutya coronavírussal,b) a sejteket 6-18 órán át tenyésztjük,c) a használt folyékony tápközeget eltávolítjuk,d) a sejteket szétzúzzuk,e) a sejthez társult pepiomer fehérjét a szétzúzott sejtekből összegyűjtjük, ésf) a sejttel társult peplomert parenterálisan elfogadható hordozóval és adott esetben adjuvánssal összekeverve vakcinává alakítjuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejtek szétzúzását parenterálisan elfogadható folyadékban végezzük.
- 3. Az 1. vagy 2, igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejttel társult peplomert tartalmazó hordozót adjuvánssal kévéjük össze.
- 4. Eljárás kombinációs vakcina előállítására, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti eljárással előállított, kutya coronavínis elleni és egy parvovírus elleni vakcinát kombinálunk.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US07/059,437 US4904468A (en) | 1987-06-08 | 1987-06-08 | Canine coronavirus vaccine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
HUT46858A HUT46858A (en) | 1988-12-28 |
HU203984B true HU203984B (en) | 1991-11-28 |
Family
ID=22022943
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
HU882965A HU203984B (en) | 1987-06-08 | 1988-06-08 | Proces for producing vaccine against dog coronavirus |
Country Status (20)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4904468A (hu) |
EP (1) | EP0295057B1 (hu) |
JP (1) | JP2655876B2 (hu) |
KR (1) | KR970000233B1 (hu) |
AT (1) | ATE91902T1 (hu) |
AU (1) | AU612151B2 (hu) |
CA (1) | CA1337267C (hu) |
DE (1) | DE3882599T2 (hu) |
DK (1) | DK175410B1 (hu) |
ES (1) | ES2058283T3 (hu) |
FI (1) | FI87531C (hu) |
HU (1) | HU203984B (hu) |
IE (1) | IE63006B1 (hu) |
IL (1) | IL86635A0 (hu) |
MY (1) | MY103575A (hu) |
NO (1) | NO176004C (hu) |
NZ (1) | NZ224865A (hu) |
PH (1) | PH27018A (hu) |
PT (1) | PT87668B (hu) |
ZA (1) | ZA884040B (hu) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5911999A (en) * | 1987-09-28 | 1999-06-15 | Pfizer, Inc. | Vaccine based on TGEV for protection of dogs against canine coronavirus |
ZA903142B (en) * | 1989-05-03 | 1991-02-27 | Akzo Nv | Canine corona virus vaccine |
US5672350A (en) * | 1989-08-22 | 1997-09-30 | Veterinary Infectious Disease Organization | Recombinant bovine coronavirus E2 and E3 polypeptides and vaccines |
US5882649A (en) * | 1990-04-24 | 1999-03-16 | Flustat Pty. Ltd. | Oral vaccine comprising antigen surface-associated with red blood cells |
ATE162402T1 (de) * | 1990-04-24 | 1998-02-15 | Flustat Pty Ltd | Oraler an der oberfläche von erythrozyten gebundene antigene beinhaltender impfstoff |
US6057436A (en) * | 1990-11-14 | 2000-05-02 | Pfizer Inc. | Canine coronavirus S gene and uses therefor |
NZ240558A (en) | 1990-11-14 | 1994-11-25 | Smithkline Beecham Corp | Recombinant feline coronavirus s proteins useful in diagnosis and vaccination against feline peritonitis virus disease |
US6372224B1 (en) | 1990-11-14 | 2002-04-16 | Pfizer Inc. | Canine coronavirus S gene and uses therefor |
DE69233270T2 (de) * | 1991-04-25 | 2004-09-30 | Akzo Nobel N.V. | Subeinheits-Impfstoff gegen Hundecoronavirus |
EP0524672A1 (en) * | 1991-06-27 | 1993-01-27 | Duphar International Research B.V | CCV vaccine |
US20040063093A1 (en) * | 1992-04-08 | 2004-04-01 | Pfizer, Inc. | Recombinant feline coronavirus S proteins |
ATE225805T1 (de) * | 1992-05-08 | 2002-10-15 | Pfizer | Hundecoronavirus s gen und verwendung davon |
US5750112A (en) * | 1993-02-26 | 1998-05-12 | Solvay Animal Health, Inc. | Canine coronavirus vaccine from feline enteric coronavirus |
PT1780216E (pt) * | 2005-10-26 | 2011-02-03 | Canio Buonavoglia | Coronavírus canino pantrópico |
US7761389B2 (en) | 2007-08-23 | 2010-07-20 | Gm Global Technology Operations, Inc. | Method for anomaly prediction of battery parasitic load |
CA2777692A1 (en) * | 2009-10-14 | 2011-04-21 | Sanjay Kapil | Isolation of a virus related to canine parvovirus-2 from a raccoon |
KR101624089B1 (ko) | 2012-11-22 | 2016-05-24 | 아사히 가세이 메디컬 가부시키가이샤 | 고감염가의 파보바이러스의 생산 방법 |
CN106290880B (zh) * | 2015-05-27 | 2019-01-04 | 江苏雷森生物科技有限公司 | 一种用于犬冠状病毒的免疫层析用试剂组合物及检测方法 |
CN108350437B (zh) | 2015-11-06 | 2021-10-15 | 旭化成医疗株式会社 | 高感染滴度且高纯度的细小病毒的产生方法 |
CN110903387A (zh) * | 2019-12-17 | 2020-03-24 | 吉林省纽卓莱生物科技有限责任公司 | 一种犬冠状病毒免疫球蛋白F(ab′)2及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4567042A (en) * | 1983-06-15 | 1986-01-28 | American Home Products Corporation | Inactivated canine coronavirus vaccine |
US4567043A (en) * | 1983-06-15 | 1986-01-28 | American Home Products Corporation (Del.) | Canine corona virus vaccine |
US5032520A (en) * | 1985-03-29 | 1991-07-16 | National Research Development Corporation | DNA sequences encoding infectious bronchitis virus spike protein |
-
1987
- 1987-06-08 US US07/059,437 patent/US4904468A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-05-31 PH PH36999A patent/PH27018A/en unknown
- 1988-06-01 NZ NZ224865A patent/NZ224865A/en unknown
- 1988-06-02 DK DK198803015A patent/DK175410B1/da not_active IP Right Cessation
- 1988-06-06 IL IL86635A patent/IL86635A0/xx unknown
- 1988-06-07 JP JP14035988A patent/JP2655876B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-07 EP EP19880305190 patent/EP0295057B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-07 ES ES88305190T patent/ES2058283T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-06-07 DE DE88305190T patent/DE3882599T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-07 NO NO882500A patent/NO176004C/no not_active IP Right Cessation
- 1988-06-07 PT PT87668A patent/PT87668B/pt not_active IP Right Cessation
- 1988-06-07 FI FI882689A patent/FI87531C/fi active IP Right Grant
- 1988-06-07 IE IE168988A patent/IE63006B1/en not_active IP Right Cessation
- 1988-06-07 ZA ZA884040A patent/ZA884040B/xx unknown
- 1988-06-07 CA CA 568758 patent/CA1337267C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-06-07 AT AT88305190T patent/ATE91902T1/de not_active IP Right Cessation
- 1988-06-08 KR KR1019880006816A patent/KR970000233B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1988-06-08 HU HU882965A patent/HU203984B/hu not_active IP Right Cessation
- 1988-06-08 MY MYPI88000624A patent/MY103575A/en unknown
- 1988-06-08 AU AU17476/88A patent/AU612151B2/en not_active Ceased
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
FI87531B (fi) | 1992-10-15 |
EP0295057A3 (en) | 1989-12-27 |
NO176004C (no) | 1995-01-18 |
DE3882599T2 (de) | 1994-02-10 |
ES2058283T3 (es) | 1994-11-01 |
FI882689A0 (fi) | 1988-06-07 |
KR970000233B1 (ko) | 1997-01-08 |
IL86635A0 (en) | 1988-11-30 |
AU1747688A (en) | 1988-12-08 |
KR890000105A (ko) | 1989-03-11 |
HUT46858A (en) | 1988-12-28 |
AU612151B2 (en) | 1991-07-04 |
EP0295057A2 (en) | 1988-12-14 |
JP2655876B2 (ja) | 1997-09-24 |
IE881689L (en) | 1988-12-08 |
PH27018A (en) | 1993-02-01 |
IE63006B1 (en) | 1995-03-22 |
US4904468A (en) | 1990-02-27 |
NZ224865A (en) | 1990-12-21 |
NO176004B (no) | 1994-10-10 |
EP0295057B1 (en) | 1993-07-28 |
NO882500D0 (no) | 1988-06-07 |
CA1337267C (en) | 1995-10-10 |
PT87668A (pt) | 1988-07-01 |
DK175410B1 (da) | 2004-09-27 |
NO882500L (no) | 1988-12-09 |
JPS63316739A (ja) | 1988-12-26 |
FI87531C (fi) | 1993-01-25 |
PT87668B (pt) | 1992-09-30 |
DE3882599D1 (de) | 1993-09-02 |
ATE91902T1 (de) | 1993-08-15 |
FI882689A (fi) | 1988-12-09 |
DK301588A (da) | 1988-12-09 |
ZA884040B (en) | 1989-09-27 |
MY103575A (en) | 1993-08-28 |
DK301588D0 (da) | 1988-06-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
HU203984B (en) | Proces for producing vaccine against dog coronavirus | |
Appel et al. | Pathogenicity of morbilliviruses for terrestrial carnivores | |
Erasmus | Bluetongue virus | |
WO1985000014A1 (en) | Canine coronavirus vaccine | |
Powell | Viral respiratory disease of the horse | |
Barrera et al. | Early onset and long lasting protection in pigs provided by a classical swine fever E2-vaccine candidate produced in the milk of goats | |
EP0101348A2 (en) | Avian proventriculitis vaccine, avian proventriculitis reovirus, process for preparing said vaccine and method of protecting a poultry animal against proventriculitis | |
CA1184115A (en) | Infectious bronchitis vaccines for poultry and process for the preparation of such vaccines | |
CA2116500C (en) | Canine coronavirus vaccine from feline enteric coronavirus | |
KR100302522B1 (ko) | 고양이장코로나바이러스로부터의개코로나바이러스왁찐 | |
JP2892767B2 (ja) | イヌコロナウイルスワクチン | |
McKercher | A Comparison of the Viruses of Infectious Bovine Rhinotracheitis (IBR), Infectious Pustular Vulvovaginitis (IPV), and Rinderpest: Part I. Studies of Antigenic Relationships | |
US7211260B1 (en) | Infectious bursitis vaccine | |
Martins et al. | The immunoglobulin M response in chicken serum to infectious bursal disease virus | |
RU2395299C1 (ru) | Вакцина инактивированная комбинированная против инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи, рота-, коронавирусной болезней и лептоспироза крупного рогатого скота | |
AU721367B2 (en) | Canine coronavirus vaccine from feline enteric coronavirus | |
Elhag | PESTE DES PETITS RUMINANTS (PPR) IN SUDAN: DETECTION, VIRUS ISOLATION AND IDENTIFICATION, PATHOGENICITY AND SEROSURVEILLANCE | |
Toro et al. | Absence of Neutralising antibodies to duck plague virus in the commercial duck and goose populations in West Germany (1980–1985) | |
Reddy et al. | Biotechnology, Veterinary college, Madras. Karber (1931) and expressed as log, TGD,/was adapted to A72 cell line and masterseed* ºº | |
Mattson | Properties of six South Dakota bovine picornaviruses | |
EZEIBE et al. | Department of Veterinary Medicine | |
MXPA99007134A (en) | Infectious bursitis vaccine |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HPC4 | Succession in title of patentee |
Owner name: PFIZER INC., US |
|
MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |