HU189552B - Process for separating d,l-2-amino-4-methyl-phosphino-butyric acid with enzymatic method - Google Patents
Process for separating d,l-2-amino-4-methyl-phosphino-butyric acid with enzymatic method Download PDFInfo
- Publication number
- HU189552B HU189552B HU813902A HU390281A HU189552B HU 189552 B HU189552 B HU 189552B HU 813902 A HU813902 A HU 813902A HU 390281 A HU390281 A HU 390281A HU 189552 B HU189552 B HU 189552B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- ptc
- penicillin
- amino
- acylase
- acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 title 1
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- NIBLDNQQTIFBAI-BYPYZUCNSA-N CPCC[C@H](N)C(O)=O Chemical compound CPCC[C@H](N)C(O)=O NIBLDNQQTIFBAI-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims abstract description 3
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 claims description 9
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 claims description 5
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 claims description 5
- NIBLDNQQTIFBAI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-methylphosphanylbutanoic acid Chemical compound CPCCC(N)C(O)=O NIBLDNQQTIFBAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 abstract 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 7
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 108010003977 aminoacylase I Proteins 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin potassium Chemical compound [K+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 IYNDLOXRXUOGIU-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 2
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 2-phenylacetyl chloride Chemical compound ClC(=O)CC1=CC=CC=C1 VMZCDNSFRSVYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IOEYQTIEZNROGM-UHFFFAOYSA-N 2-phosphanylbutanoic acid Chemical class CCC(P)C(O)=O IOEYQTIEZNROGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 6-aminopenicillanic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@H]1C(C)(C)S[C@@H]2[C@H]([NH3+])C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-ALEPSDHESA-N 0.000 description 1
- NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 6beta-amino-penicillanic acid Natural products OC(=O)C1C(C)(C)SC2C(N)C(=O)N21 NGHVIOIJCVXTGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 7-[(6,8-dichloro-1,2,3,4-tetrahydroacridin-9-yl)amino]-n-[2-(1h-indol-3-yl)ethyl]heptanamide Chemical compound C1CCCC2=NC3=CC(Cl)=CC(Cl)=C3C(NCCCCCCC(=O)NCCC=3C4=CC=CC=C4NC=3)=C21 ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 101710123388 Penicillin G acylase Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 1
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006340 racemization Effects 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
- C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
- C07F9/301—Acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/848—Escherichia
- Y10S435/849—Escherichia coli
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás a D,L-2-amino-4metil-foszfino-vajsav szétválasztására enzimes úton.
A D,L-2-amino-4-metil-foszfino-vajsav (a továbbiakban L-foszfino-tricinnek, illetve L-PTC-nek nevezzük) vagy ennek szerves vagy szervetlen bázisokkal vagy savakkal képzett sói - mint az a 2 939 269 számú német szövetségi köztársaságbeli közrebocsátási iratból ismertté vált - a kémiailag könnyen hozzáférhető racemátok hatásos komponensei. A racemátok a 27 17 440 számú német szövetségi köztársaságbeli közrebocsátási irat szerint számos egyszikű és kétszikű, egyéves vagy több éves gyommal szemben erős herbícid hatásúak. Mivel az L-PTC és az említett származékai kétszer olyan hatásosak, mint a racemátok, szükséges volt olyan eljárás kifejlesztése, amellyel az L-PTC egyszerűen, nagy mennyiségben előállítható.
Az L-PTC-t már előállították az irodalomból ismert, mikrobiológiai úton előállított antibiotikum, az L-PTC-alanil-alanin savas hidrolízisével [73-85 538 számú japán közrebocsátási irat] vagy enzimatikus lebontásával [74-31 890 számú japán közrebocsátási irat].
A 29 39 269 számú német szövetségi köztársaságból közrebocsátási irat olyan eljárást ismertet, amelynek során az N-acil (különösen N-acetil)-LPTC-t speciálisan tenyésztett Pseudomonas, Streptomyces vagy Aspergillus törzsekből származó, egész sejtek vagy sejtextraktumok formájában jelenlévő mikrobás acilázokkal gyorsabban hasítják, mint a D-származékot. A közrebocsátási irat szerint az alkalmazott acilázok alig vagy nagyon kis mértékben hatásosak az N-acíl-L-PTC-től eltérő egyéb szubsztrátumokkal, például az ismert, általánosan alkalmazott L-aminosavak N-acil-származékaival szemben. A feldolgozás után izolált PTC maximális fajlagos forgatóképessége [α]ρ = 23° (c=l, I n HC1), ennek alapján optikai tisztasága mintegy 75%.
A vizsgálatok azt mutatták, hogy a szokásos kereskedelmi acilázok - mint az Acylase I (sertésveséből izolált aminoaciláz, EC 3.5.1.14) vagy a mikrobás AMANO-aciláz - amelyek a természetes aminosavaknál jól alkalmazhatók a racemátok szétválasztására, a D,L-acil-PTC-nél hatástalanok.
Ezt a 29 39 269 számú német szövetségi köztársaságbeli közrebocsátási irat adatai is megerősítik amelyek szerint a PTC-aktív acilázok előállításához költséges mikrobiológiai szűrés szükséges A hagyományos D,L-aminosavaknál nagy aktivitást és szelektivitást mutató egyéb enzimek - például az észteráz aktivitású proteolitikus enzimek sem aktívak illetve sokkal kisebb hatékonyságúal a D,L-PTC-észtereknél.
Azt tapasztaltuk, hogy a Penicillin-G-aciláz p fenacetilezett D,L-PTC-t nemcsak a természetes Penicillin-G-hez közel eső nagy reakciósebességgel dezacilezi, hanem a 29 39 269 számú német szövet ségi köztársasági közrebocsátási iratban ismertetet: mikrobás acilázhoz képest lényegesen nagyobb szelektivitással rendelkezik és ennek következtében a kapott L-PTC rendkívül nagy tisztaságú.
A találmány tárgya ennek megfelelően eljárás a D,L-2-amino-4-metil-foszfino-vajsav szétválasztá- 65 sara enzimatikus úton, amelyre az jellemző, hogy a (I) képletű D,L-2-amino-4-metil-foszfino-vajsavN-fenacetil-származékot 20—40 °C hőmérsékleten 5 vizes közegben E. coliból származó Penicillin-G° acilázzal dezacilezzük és a reakcióelegyből az L-2amino-4-metil-foszfino-vajsavat ismert módon izoláljuk.
Ismert, hogy bizonyos fenacetilezett hagyomá1Q nyos D,L-aminosavak az E. coliból nyert Penicillin υ acilázzal szelektíven a szabad L-aminosavvá hidrolizálhatók [1 369 462 számú nagy-britanniai szabadalmi leírás, Bioorganiceskaja Khimia 5, 604 ff (1979)]. Az is ismert azonban, hogy a szubsztrátum 15 aminosavrészének változtatásával a Penicillin-Gaciláz enzimatikus aktivitás lényegesen csökken [A. Plaskie et al., J. Antibiotics 31, 782 (1978)]. így nem volt várható, hogy a találmány szerint alkalmazott Penicillin-G-acilázzal az L-PTC nagy tiszta2Q ságban állítható elő.
A találmány szerinti eljárásban L-PTC és Nfenacetil-D-PTC, valamint fenil-ecetsav keverékét kapjuk, amelyből az L-PTC ismert módon könynyen elválasztható. így például - adott esetben 25 szűrés után - a vizes reakcióelegyet H' +'-formában lévő erős savas kationcserélő gyantával töltött oszlopon vezetjük át. Míg az N-fenacetil-D-PTC és a fenil-ecetsav átmegy az oszlopon, addig az L-PTC adszorbeálódik. Az L-PTC-t ezután ismert módon 30 híg sósavval vagy ammóniával eluáljuk. Az eluátumot adott esetben aktív szénnel tisztítjuk, majd fagyasztva szárítjuk vagy a bepárolt eluátumot kristályosítjuk.
Az (1) képletű kiindulási anyagot ismert módon, 35 például a D.L-PTC dinátriumsójának - 5 °C és + 5 °C közötti hőmérsékleten fenacetil-kloriddal végbemenő reakciójával, akvimoláris mennyiségű nátrium-hidroxid adagolásával egyidejűleg állítjuk elő. A kapott reakcióelegyet ezután közvetlenül 40 szétválaszthatjuk; kívánt esetben az N-fenacetilD, L-PTC-t sósavval vagy kénsavval történő megsavanyítással kristályos alakban is kinyerhetjük. Az N-fenacetil-D-PTC-t, amelyet enzimatikus úton nem választunk el, a fenil-ecetsav elválasztása után 45 éterrel vagy diklór-metánnal végzett hidrolízissel (híg sósav, 80 °C hőmérséklet) a D-PTC-vé alakíthatjuk, majd ezt racemizálás után ismét enzimatikus elválasztásnak vetjük alá.
A Penicillin-acilázok, illetve -amidázok olyan en50 zimek, amelyekkel a penicillin 6-amino-penicillánsavvá hasítható. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható Penicillin-G-acilázokat a prokarionte mikroorganizmusok - mint az Escherichia coli, a Bacillus megatherium - termelik [M. Colé et al., 55 Meth. Enzym. 43, 698 (1975)] és az
E. C. Nr. 3.5.1.11. szám alatt ismertek. Különösen előnyös az E. coliból (ATCC 11 105) származó Penicillin-G-amidáz.
A találmány szerint alkalmazott Penicillin-Gacilázokat szabad, vízoldható liofilizátum vagy víz60 ben oldhatatlan alakban hordozóhoz kötve (27 32 301 számú német szövetségi köztársaságbeli közrebocsátási irat) vizes oldatban használjuk. A vizes oldat szubsztrátumkoncentrációja 0,l-20%t előnyösen 4-6%. A reakcióhömérséklet
189 552
60 ’C, előnyösen 20 40’C, a reakcióidő a szubs/lráluin és az. enzim koncentrációjától és az enzim aktivitásától függően 1 48 óra. Megfelelő enzimaktivitás érhető el 3-9, előnyösen 6-8 pHértéknél A reakciót valamilyen foszfát-pufferban vagy puffer nélkül folytathatjuk le. A hordozóhoz kötött enzim alkalmazása esetén a reakciót végrehajthatjuk részletekben vagy oszlopeljárásban. Az oszlopeljárás során az oszlopban az álló fázist képező rögzített enzimen az N-fenacetil-L-PTC teljes dezacilezéséig folyamatosan vezetjük keresztül a szubsztrátumoldatot.
A reakció befejeződését, illetve lefolyását polarimetriás módszerekkel vagy az irodalomból ismert kvantitatív analízis módszerrel (a képződött szabad aminosavnak ninhidrinnel történő átalakítása, majd spektrálfotometriás meghatározása) követhetjük.
A nagy kitermeléssel előállított L-PTC forgatóképessége [u]j; = +28,5° (c=l. In HC1), amely legalább 90 t%-os (95 t% L-alak) optikai tisztaságnak felel meg.
A következő kiviteli példák közelebbről mutatják be találmányunkat.
1. példa g (33.4 mmól) N-fenacetíl-D,L-PTC-t kevés kétszer desztillált vízben szuszpendálunk, a reakcióelegy pH-értékét 1 n nátrium-hidroxid-oldattal
7,8-ra állítjuk be és a kapott oldatot kétszer desztillált vízzel 500 ml térfogatra egészítjük ki. A kapott reakcióelegyhez 15 mg E. coliból származó Penicillin-G-acilázt (aktivitása mintegy 2,9LJ/mg, szubsztrátum Penicillin-G-káliumsó, reakcióhőmérséklet 37 ’C) adunk és a reakcióelegyet szobahőmérsékleten állni hagyjuk. 15 óra elteltével ninhidrinnel végzett próbával meghatározzuk a szabad aminosav mennyiségét. Az átalakulás ennek alapján mintegy 50%-os. A reakcióelegyet ezután tömény sósav-oldattal 2-3 pH-értékűre savanyítjuk meg, szűrjük és a tiszta, vizes szubsztrátum-oldatot 150g DOWEX'R| 50 W χ 2 (H'-alak)-vel töltött oszlopon vezetjük keresztül. Az oszlopot vízzel mossuk, amíg az eluátum semleges lesz és már nem mutatható ki benne klorid-ion. Ezt követően a szabad amínosavat 0,8 n sósav-oldattal etanol/víz (80 : 20) elegyével hidrokloridja formájában eluáljuk. Az eluátumot bepároljuk és így a tiszta PTChidrokloridot 199-200’C olvadásponttal kapjuk. Kitermelés 3,3 g (15,2 mmól = 45,4 t%). A hidrokloridból ismert módon, mintegy kétszeres moláris mennyiségű propilén-oxidnak az etanolos szubsztrátumoldathoz való adagolásával a szabad kristályos L-aminosavat izoláljuk, olvadáspont 217-219 ’C, [ag = + 28° (c= 1, 1 n HC1).
2. példa g (200,5 mmól N-fenacetil-D,L-PTC-t kevés vízben szuszpendálunk, pH-értékét nátrium-hidrox d-oldattal 8,0-ra állítjuk be, vízzel 1 1 térfogatra töltjük fel és 6 g rögzített Penicillin-G-acilázzal elegyítjük (aktivitása mintegy 80U/g, szubsztrátum
Penicillin-G-káliumsó, reakcióhőmérséklet 37 ’C, a 5 hordozó előállítása 27 32 301 számú német szövetségi köztársaságbeli közrebocsátási irat szerint). A reakcióelegyet 1,5 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd a szubsztrátum-oldatból kiszűrjük a vízben oldhatatlan katalizátort és a 10 szűrletet 750 g erősen savas kationcserélő gyantával töltött oszlopon vezetjük keresztül az 1. példában megadottakkal azonos módon, majd a reakcióelegyet feldolgozzuk. 20g (92 mmól = 461%) L PTC-hidrokloridot kapunk, amelynek olvadás15 pontja 199-201 ’C. A fajlagos forgatóképesség lo]?,2= 23,3’ (c = 0,6, Ín HC1), ez [Mfe2 = 50,7’ moláris forgatóképességnek felel meg. A propilénoxidos kezelés után kapott szabad L-PTC olvadáspontja 216-217’C, fajlagos forgatóképessége 20 [a]2D2 = +28,5’ (c= 1, Ín HC1), ez [M]2D2 = 51,6’ moláris forgatóképességnek felel meg.
3. példa
A 2. példában alkalmazott hordozóhoz kötött Penicillin-G-aciláz N-fenacetil-D,L-PTC-vel szembeni stabilitásának vizsgálata céljából 100 mg rög30 zített enzimet 10 ml 5 t%-os vizes N-fenacetil-D,LPTC-oldattal (pH - 7,8, kevés foszfát-pufferrel stabilizált) elegyítünk és szobahőmérsékleten keverjük. 24 óránként a szubsztrátumoldatot szűrjük és az elválasztott, vízben oldhatatlan enzimet ismét 35 racém szubsztrátumoldathoz adjuk. Az enzimaktivitást ninhidrinnel 45 perc és 22,5 óra elteltével meghatározott szabad PTC-tartalom alapján számítjuk.
hét elteltével 45 perces reakcióidő után nem 40 tapasztaltuk a PTC-részarány lényeges csökkenését (a bevitt racemátra vonatkoztatva mintegy 20%).
22,5 óra után a bevitt racemát 50%-a hidrolizál.
Claims (4)
- 45 Szabadalmi igénypontok!. Eljárás a D,L-2-amino-4-metil-foszfino-vajsav szétválasztására enzimatikus úton, azzal jellemezve, hogy a vegyület (I) képletű N-fenacetil-származé50 kát 20-40 ’C hőmérsékleten vizes közegben E. coliból származó Penicillin-G-acilázzal dezacilezzük és a reakcióelegyből az L-2-amino-4-metil-foszfinovajsavat ismert módon izoláljuk.
- 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemez55 ve, hogy Penicillin-G-acilázként E. coliból (ATCC11105) származó Penicillin-G-acilázt alkalmazunk.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy szabad liofilizátum formájában60 lévő Penicillin-G-acilázt alkalmazunk.
- 4. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy hordozóhoz kötött Penicillin-Gacilázt alkalmazunk.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3048612A DE3048612C2 (de) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | "Verfahren zur enzymatischen Trennung von L-2-Ami no-4-methylphosphinobuttersäure" |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU189552B true HU189552B (en) | 1986-07-28 |
Family
ID=6120041
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU813902A HU189552B (en) | 1980-12-23 | 1981-12-22 | Process for separating d,l-2-amino-4-methyl-phosphino-butyric acid with enzymatic method |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4389488A (hu) |
| EP (1) | EP0054897B1 (hu) |
| JP (1) | JPS57138394A (hu) |
| AT (1) | ATE14597T1 (hu) |
| AU (1) | AU547636B2 (hu) |
| BR (1) | BR8108346A (hu) |
| CA (1) | CA1172981A (hu) |
| CS (1) | CS224638B2 (hu) |
| DD (1) | DD201907A5 (hu) |
| DE (2) | DE3048612C2 (hu) |
| DK (1) | DK571481A (hu) |
| ES (1) | ES508034A0 (hu) |
| HU (1) | HU189552B (hu) |
| IL (1) | IL64623A (hu) |
| MA (1) | MA19362A1 (hu) |
| OA (1) | OA06973A (hu) |
| PL (1) | PL234314A1 (hu) |
| PT (1) | PT74188B (hu) |
| SU (1) | SU1246897A3 (hu) |
| ZA (1) | ZA818859B (hu) |
| ZW (1) | ZW30581A1 (hu) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3334849A1 (de) * | 1983-09-27 | 1985-04-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur racemisierung optisch aktiver aminosaeuren |
| DE3435156A1 (de) * | 1984-09-25 | 1986-04-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur herstellung der stereoisomeren von 1-amino-alkylphosphonsaeuren oder 1-aminoalkylphosphinsaeuren |
| DE3724722A1 (de) * | 1987-07-25 | 1989-02-16 | Hoechst Ag | Verbessertes verfahren zur enzymatischen herstellung von l-2-amino-4-methylphosphinobuttersaeure |
| DE3817191A1 (de) * | 1988-05-20 | 1989-11-30 | Hoechst Ag | Verfahren zur racemisierung von optisch aktiver d-2-n-phenacetylamino-4- methylphosphinobuttersaeure |
| DE3817956A1 (de) * | 1988-05-27 | 1989-12-07 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung phosphorhaltiger l-aminosaeuren sowie ihrer ester und n-derivate |
| US5081024A (en) * | 1988-09-05 | 1992-01-14 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Process for producing optically active amino acids |
| DE3903446A1 (de) * | 1989-02-06 | 1990-10-18 | Hoechst Ag | Verfahren zur enzymatischen trennung von 2-amino-4-methylphosphinobuttersaeurederivaten |
| US5057607A (en) * | 1990-06-08 | 1991-10-15 | Eli Lilly And Company | Enantiomerically selective biocatalyzed acylation |
| TW353663B (en) * | 1991-04-06 | 1999-03-01 | Hoechst Ag | Process for the preparation of phosphorus-containing L-amino acids, their derivatives and intermediates for this process |
| DE4422045A1 (de) * | 1994-06-26 | 1996-01-04 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Verfahren zur enzymatischen Spaltung von 2-Amino-4-methylphosphinobutansäureamid-Derivaten |
| DE19933362A1 (de) * | 1999-07-20 | 2001-02-08 | Aventis Cropscience Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren aus ihren racemischen N-Acetyl-D,L-Derivaten durch enzymatische Racemat-Spaltung mittels isolierter, rekombinanter Enzyme |
| EP1481068B1 (en) * | 2002-02-26 | 2011-02-02 | Syngenta Limited | A method of selectively producing male or female sterile plants |
| CN110343676B (zh) | 2018-04-03 | 2020-06-23 | 上海弈柯莱生物医药科技有限公司 | 一种l-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用 |
| CN108484665B (zh) * | 2018-04-16 | 2020-06-23 | 浙江工业大学 | 一种从酶转化液中分离提取l-草铵膦的方法 |
| CN111979208B (zh) | 2019-05-23 | 2023-01-10 | 弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司 | 一种l-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用 |
| CN110343734B (zh) * | 2019-06-14 | 2021-03-23 | 浙江工业大学 | 一种l-草铵膦化学酶法生产方法 |
| IL307248A (en) | 2021-04-01 | 2023-11-01 | Basf Se | Methods for preparing L-glufosinate |
| CN114277080B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-10-03 | 河北威远生物化工有限公司 | 一种酶拆分法制备l-草铵膦的工艺 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1369462A (en) * | 1971-11-23 | 1974-10-09 | Beecham Group Ltd | Enzymic resolution of racemic n-acyl-dl-amino acids |
| JPS5547630A (en) * | 1978-10-02 | 1980-04-04 | Meiji Seika Kaisha Ltd | Optical resolution of phosphorus-containing amino acid |
| US4226941A (en) * | 1979-09-27 | 1980-10-07 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid |
-
1980
- 1980-12-23 DE DE3048612A patent/DE3048612C2/de not_active Expired
-
1981
- 1981-12-16 DE DE8181110474T patent/DE3171623D1/de not_active Expired
- 1981-12-16 EP EP81110474A patent/EP0054897B1/de not_active Expired
- 1981-12-16 AT AT81110474T patent/ATE14597T1/de active
- 1981-12-16 ES ES508034A patent/ES508034A0/es active Granted
- 1981-12-18 PL PL23431481A patent/PL234314A1/xx unknown
- 1981-12-21 SU SU813375844A patent/SU1246897A3/ru active
- 1981-12-21 ZW ZW305/81A patent/ZW30581A1/xx unknown
- 1981-12-21 US US06/332,852 patent/US4389488A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-12-21 DD DD81235986A patent/DD201907A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-12-22 PT PT74188A patent/PT74188B/pt unknown
- 1981-12-22 ZA ZA818859A patent/ZA818859B/xx unknown
- 1981-12-22 IL IL64623A patent/IL64623A/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-12-22 CA CA000392945A patent/CA1172981A/en not_active Expired
- 1981-12-22 DK DK571481A patent/DK571481A/da not_active Application Discontinuation
- 1981-12-22 JP JP56206275A patent/JPS57138394A/ja active Granted
- 1981-12-22 HU HU813902A patent/HU189552B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-12-22 BR BR8108346A patent/BR8108346A/pt unknown
- 1981-12-22 AU AU78751/81A patent/AU547636B2/en not_active Ceased
- 1981-12-23 OA OA57574A patent/OA06973A/xx unknown
- 1981-12-23 MA MA19567A patent/MA19362A1/fr unknown
- 1981-12-23 CS CS819717A patent/CS224638B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4389488A (en) | 1983-06-21 |
| IL64623A0 (en) | 1982-03-31 |
| ZA818859B (en) | 1982-11-24 |
| BR8108346A (pt) | 1982-10-13 |
| ATE14597T1 (de) | 1985-08-15 |
| EP0054897A2 (de) | 1982-06-30 |
| PT74188B (en) | 1983-11-08 |
| AU547636B2 (en) | 1985-10-31 |
| AU7875181A (en) | 1982-07-01 |
| ES8207584A1 (es) | 1982-10-01 |
| PL234314A1 (hu) | 1982-07-05 |
| DK571481A (da) | 1982-06-24 |
| ES508034A0 (es) | 1982-10-01 |
| EP0054897A3 (en) | 1982-09-08 |
| DE3048612A1 (de) | 1982-07-01 |
| JPS57138394A (en) | 1982-08-26 |
| DE3171623D1 (en) | 1985-09-05 |
| DE3048612C2 (de) | 1982-12-02 |
| ZW30581A1 (en) | 1982-07-14 |
| PT74188A (en) | 1982-01-01 |
| IL64623A (en) | 1985-04-30 |
| MA19362A1 (fr) | 1982-07-01 |
| EP0054897B1 (de) | 1985-07-31 |
| CA1172981A (en) | 1984-08-21 |
| OA06973A (fr) | 1983-07-31 |
| JPH0218072B2 (hu) | 1990-04-24 |
| SU1246897A3 (ru) | 1986-07-23 |
| DD201907A5 (de) | 1983-08-17 |
| CS224638B2 (en) | 1984-01-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU189552B (en) | Process for separating d,l-2-amino-4-methyl-phosphino-butyric acid with enzymatic method | |
| US4080259A (en) | Process of preparing L and D α-amino acids by enzyme treatment of DL-α-amino acid amide | |
| CA2001647A1 (en) | Process for the production of l-2-amino-4-(hydroxymethylphosphinyl)-butyric acid | |
| HU193902B (en) | Process for preparing l-amino acids by means of transamination | |
| US4668625A (en) | Process for preparing peptides | |
| US4525454A (en) | Production of L-4-phenyl-2-aminobutanoic acid by transamination | |
| JPH0552195B2 (hu) | ||
| AU606185B2 (en) | Improved process for the enzymatic preparation of l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| EP0819761B1 (en) | Process for producing l-2-aminoadipic acid | |
| US6030823A (en) | D-aminoacylase | |
| US3749642A (en) | Method for the production of aminopenicillins | |
| EP0187525B1 (en) | Process for producing l-serine | |
| JPWO1996031616A1 (ja) | Ｌ−２−アミノアジピン酸の製造方法 | |
| JPS6125359B2 (hu) | ||
| JP2674078B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造法 | |
| US3929573A (en) | Method of preparing L-tryptophan | |
| JP2674076B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 | |
| JP2899071B2 (ja) | Ｌ―α―アラニンの製造法 | |
| JPH06181787A (ja) | Ｌ−α−アミノアジピン酸の製造法 | |
| JPS5918994B2 (ja) | Ｄ−Ｎ−カルバミル（ｐ−ヒドロキシフエニル）グリシンの製造法 | |
| JPS62134094A (ja) | 酵素法によるｌ−トリプトフアンの製造法 | |
| JPH0622789A (ja) | 光学活性なｄ−アミノ酸の製造法 | |
| JPH0438398B2 (hu) | ||
| JPS6163296A (ja) | ｒ−グルタミルド−パ及びｒ−グルタミルド−パ誘導体の製造法 | |
| JPS62271A (ja) | 新規な微生物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |