CS224638B2 - Method of enzymetic cleavage d,l-2-amino-4-methylphosphinebutyric acid - Google Patents
Method of enzymetic cleavage d,l-2-amino-4-methylphosphinebutyric acid Download PDFInfo
- Publication number
- CS224638B2 CS224638B2 CS819717A CS971781A CS224638B2 CS 224638 B2 CS224638 B2 CS 224638B2 CS 819717 A CS819717 A CS 819717A CS 971781 A CS971781 A CS 971781A CS 224638 B2 CS224638 B2 CS 224638B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- acid
- amino
- ptc
- acylase
- cleavage
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 230000007017 scission Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 title description 5
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 108010073038 Penicillin Amidase Proteins 0.000 claims abstract 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims 1
- NIBLDNQQTIFBAI-BYPYZUCNSA-N CPCC[C@H](N)C(O)=O Chemical compound CPCC[C@H](N)C(O)=O NIBLDNQQTIFBAI-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract 1
- 108700023418 Amidases Proteins 0.000 description 16
- 102000005922 amidase Human genes 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 108010003977 aminoacylase I Proteins 0.000 description 2
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- VEASIOSTNPNFHD-YFKPBYRVSA-N (2s)-6-amino-2-hydrazinylhexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](NN)C(O)=O VEASIOSTNPNFHD-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 2-phenylacetic acid Chemical compound O[14C](=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-PPJXEINESA-N 0.000 description 1
- ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 7-[(6,8-dichloro-1,2,3,4-tetrahydroacridin-9-yl)amino]-n-[2-(1h-indol-3-yl)ethyl]heptanamide Chemical compound C1CCCC2=NC3=CC(Cl)=CC(Cl)=C3C(NCCCCCCC(=O)NCCC=3C4=CC=CC=C4NC=3)=C21 ULGJWNIHLSLQPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013043 Acetylesterase Proteins 0.000 description 1
- 102000004092 Amidohydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000531 Amidohydrolases Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 101100168110 Hathewaya histolytica colH gene Proteins 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- UVGCAWDXQWPTEK-UHFFFAOYSA-N ethane;hydrate Chemical compound O.CC UVGCAWDXQWPTEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N glufosinate-P Chemical compound CP(O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O IAJOBQBIJHVGMQ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003424 phenylacetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000003279 phenylacetic acid Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/28—Phosphorus compounds with one or more P—C bonds
- C07F9/30—Phosphinic acids [R2P(=O)(OH)]; Thiophosphinic acids ; [R2P(=X1)(X2H) (X1, X2 are each independently O, S or Se)]
- C07F9/301—Acyclic saturated acids which can have further substituents on alkyl
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/848—Escherichia
- Y10S435/849—Escherichia coli
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
Vynález te týká způsobu enzymatického štěpení D,L-2-amino-4-meetylfotfinomátelné kyseliny za účelem výroby L-2-taino-4-aathylfssfinomáselné kyseliny.
L-2-tains-4-aethylfssfinoaáselná kyselina (označována dále jako L-fosfinothricin nebo L-PTC) nebo její soli t organickými nebo anorganickými bázemi nebo kyselinami jsou, jak známo také z DOS č. 2 939 269, účinnou složkou chemicky snadno dostupných racemátů. Tyto racemáty aaaí podle DOS č. 2 717 440 velmi dobrou a širokou herbicidní účinnost proH četným jednoděložiýa a dvojděložiýa, jednoletým a víceletým plevelům. Vzhledem k tomu, že L-PTC a její shora uvedené deriváty jsou ^poH racemátům asi dvojnásobně účinné, bylo Žádoucí vypracovat postup, který by umoonil získávat L-PTC jednoduchým způsobem ve větším m^nosst^íi
L“2-aaino-4-aiehylfstfinoaátelnsu kyselinu lze dosud získávat kyselou hydrclýzcu (srov. japonský zveřejněný patentový spis č. 73-85538) nebo enzymatickým odbouráváním (srov. japonský zveřejněný patentový spis č. 74-31890) ^-110-^81^181^1^, tj. mikrobiálně získávaného aliibictikt známého z ^ec^tu^.
V DOS č. 2 939 269 se dále popisuje postup, při kterém se N-tcyl-(reiméit N-aaetyl-)-L-PTC štěpí pomocí mikrobiálních acyláz, které byly pouusty ve formě celých buněk nebo extraktů z buněk a ze zvláště kultioovarých kmenů rodu Pseudomonas, Strep·loaycet nebo , Ass>periHus, rychleei než odp^vídaící Dderivát. Používané acylázy nemaaí podle údajů DOS žádný účinek nebo maj pouze nepatrný účinek oproU delším substrátů jako N-rícI-L-PTC-, například oproH Ν^ογΙ^Γίνύύϋ známých obvyklých L-tmino0k1trii1 PTC isolovaná po zpracování má navíc pouze mmaim^ní Ы^2 = 23° (c = 1 |N, HOU, což odpovídá optické čistotě pouze asi 75
Pokusy však ukázaly, že na trhu obvyklé acylázy, jako acyláza I (aminoacyláza z ledvin prasat, EC 3-5.1.14) nebo mikrobiální AMNO-aayyáza, které se u přirozených wninoOkSsein dobře hodí ke štěpení racemátu, nevykazuUí žádnou aktivitu u D,L-acyl-PTC. To potvrzuje údaje z DOS δ. 2 939 269, podle kterých je k fermentační výrobě acyláz aktivních vůči PTC zapotřebí nákladného mikrobiálního postupu (Scnening). Také další enzymy, nappíklad proteolytCcké enzymy s esterázovou akkivitou, které mmaí u běžných D,L-aminottyelio vysokou akkivitu a selekkivitu, nemají u esterů D,L-PTC vůbec žádnou akkivitu nebo mmaí pouze silnl sníženou akkivitu. ' .
S překvapením bylo nyní zjištěno, že acyláza penOcdiou G deeacyuje fenacetylovaný D,L-PTC nejen s neobvykle vysokou reakční rychlostí, která se blíží reakční rychlosti deacylace přírodního p^r^óí^di^r^u G, nábrž že má také ve srovnání s mikrob tělními . acylázami popsanými v DOS č. 2 939 269 značně zvýšenou telektivitu, která způsobuje mimořádně vysokou čistotu vzniklého L-PTC.
Předmětem vynálezu je způsob knzyratického štěpení -,L-2-rmino-4-milhylfttf0torάtklné kysedny za účelem získání L-2-rmino-4-mekhylfttf0tomάtklné kyseliny, který spočívá v tom, že se na tdpooídaajcí O-flnaaclyldeeivάt vzorce I
(I) působí ve vodném prostředí acylázou poiíccHou G.
Je sice známo, že u určitých fkoacktylovaoých běžných -,L·-aminoOysekin je možná selektivní hydrolýza acylázou p^r^ói^di^r^u získanou z E. cooi za vzniku volné L-aminotyyekiny (srov. britský patentový spis č. 1 369 462; Bioorganičeskaja Chimia J /1979/, 604 a daaší). Je však také známo, že změnami na čássi aminoOysskiny subbsrátu dochází ke značnému snížení enzymatické akUvity acylázy puncHou G (A. Flaskie a daaší, J. AnOlbiotics 31. 783 /1978/). Nebylo proto možno očekávat, že pomocí acyláz poiIccHou G používaných podle vynálezu se může získat L-PTC ve vysoké čistotě.
Při postupu podle vynálezu vzniká směs z L-PTC a O-fenacetyl-D-PTC, jakož i z fenyloctové kyseliny, ze které je možno L-PTC snadno odddlit známým způsobem. Tak například lze, popřípadě po filtraci, vést vodný reakční roztok kolonou naplněnou silně kyselým katuxem v H+-cyklu. Zatímco O-fenackty--D-PΓC a fknyloctovs kyselina kolonou oгtchásulí, L-PTC se adsorbuje na prysk^y^i. se potom í^*ži provádět známým způsobem zředěnou chlorovodíkovou kyselinou nebo amoniakem. Eluát lze popřípadě čistit aktivním uhlím a podrobovat sušení vymezováním nebo lze zahuštěný eluát přivést ke krystalizaci. ·
Výchozí látky vzorce I se získaj o sobě známým způsobem, například reakcí dvojsodné sod D,L-PTC fknrcetylchloгdkei při t^lo^ -5 až +5 °C za součas^ho přídavku kkvirolάгního mn^ž^í hydroxidu sodného. .Reakční směs se může přímo oodcoOit štěpení, popřípadě lze N-fenrckty--D,--TTC získat také v krystalické formě okyselením chlorovodíkovou kyselinou nebo ' sírovou kyselinou. Enzymmaicky ner^štěpenou O-fenacktyl-D-PTC lze po oddělení fenyloctóvé kyseliny pomocí etheru nebo dichlormethmu hydrolýzou ve zředěné chlorovodíkové kyselinl při teplotě 80 °C na D-PTC a tu lze po rackmiurci znovu podrobovat enz^mUckému štlpenO.
Acylázami ' nebo amidázami peeOidinu se rozumí takové enzymy, které mohou štlppt penicilín na 6-aminopokL0c drnovou kysednu. Acylázy peiOcciinu G, které jsou vhodné pro postup podle vynálezu, tvoří ρrttrrytnní mikroorganismy,. . jako Essc^ich^ cooi, Baadlus meeatherium a další (M. Cole a další, Meth. Enzym. 43, 698 /1975/) a jsou známé pod E. C. č. 3.5.1.11. Zvláště výhodnou je amidáza peiOccdnu G z E. coH ATCC 11 . 105.
Acylázu peeOiciinu G používanou podle vynálezu lze použžvat ve formě volného, ve'vodě rozpustného lyofilizátu nebo ve formě nerozpustné ve vodě vázanou na nosiči (srov. DOS č. 2 732 301) ve vodném roztoku, který může mít konceetraci substrátu 0,1 až 20 %, výhodně 4 až 6 %. Reakční teplota se pohybuje v rozmezí 10 až 60 °C, výtočlně 20 až 40 °C, rea^ní dorba činí podle koncentrace substráta a koncentrace enzymu, popřipadě podle aktivity enzymu, 1 až 48 Hodni.. lósaaeennou enz,matCkkuu aktivitu lee pozorovat při pH 3 žt 9 , .tyhodně pi*i pH 6 , až 4. Reakce se může,provádět ve fssfáSvvém pufru nebo také bez fsifáSovéhs pufru. Reakci s enzymem vázaném na nc^osei lze provádět Oittsntinuáldě nebo na sloupcích. Při postupu na sloupci se přes fixovaný enzym jakožto stacionární , fázi ve sloupci kontinuálně vede roztok iubsiráto až do úplné deacylace N-fenylacetyl-LpTC. ’
Průběh a konec reakce se mohou sledovat pomocí polarimetrictých metod nebo kvannitativní analýzou vzniklé volné шninthkselidy reakcí s ninhydr^nnem známou z literatury a spektrálně fotometrcclým stanovením obsahu.
Ve vy8o>kém výtěži zíslcaná Ь-ЭДС má ot^^ost Мр2 = +28,5° (c = 1, 1 N _ WCIJ, což odpovídá , čistotě nejméně 90 ' % (přísuušná forma 95 «)·
Příklady uvedené v následnicí čássi slouží k b^žšímu objasnění vynálezu.
Příklad 1 g , (33,4 mimi) N-fenacetyl-D,L-PTC se suspenduje v malém imoossví , rt0tsti0vvané vody, přidáním 1 N roztoku hydroxidu sodného se hodnota pH upraví na 7,4 a roztok se doplní rt0t8tiSvaímsu vodou na objem 500 ml. Po přidání 15 mg acylázy peetcClinu G z E. coli (akkivita asi 2,9 u/mgj orastlná sůl peetoi-linu G, rea^ní tepLo^a 37 °C) se ^akční směs nechá stát při teplotě oístntsSi. Po 15 hodinách byla zj:^šě^r^a stanovením obsahu volné amino0kУ81idy zbarvením vzorku пх^уО^^о asi 50« konverze. Po okyselení koncentrovanou chlorovodíkovou kyselinou n* pH 2 až ) a filtaaci se čirý vodný u + roztok wb^rátu vede kolonou, která onanuje 150 g -owexuk 7 50 Wx2 (v H - cyklu).
Kolona se promývá vodou až do získání dtuUráldíls eluátu a až již nelze prokázat ρřísoodsst chloridových iontů. Potom se nechá volná aminoSt'УsUida e^ovat 0,4 N roztokem chlorovodikové kyseliny ve smési ethano^ a vody (40:20) ve formě tydrochloridu.. Ze zahuštěného uIu^u su tos^ tostý pΓCChlyooshlosi0 o teploto tání 199 až 200 °C. tytožťk 3,3 g (15,2 mool, tj. , asi 45,4 % teorie. Z lydrochloriOo se obvyklým způsobem přidáním asi dvojnásobného mo0árníls m^nosst^:^ prspyludsxiOo k uthadolCtkéou roztoku izoluje volná kystalicMi L-aoino0kУ8uida. Teplota tání 217 až 219 °C [«j|2 - +28° (c = 1 1 К pCC).
PPÍkl a d 2 .
60'g (200,5 mmo) N-funacu8yl-D,-pPΓC se suspenduje v malém оос^б^! vody, ·přidáním hydroxidu sodného se hodno8a pH upraví na 4,0, vodou se objem doplní na 1 litr a přidá se 6 g fioované acylázy petnchlinu G (akkivita asi 80 μ/g, iubsirát: draselná sůl petdchlinu G, reakční teplota 37 °C, výroto nosíce ^dle DOS č. 2 732 300. Po 1,5 dnu míchání při teplotě místnoosi se , rsltsk'ioSstrátu odfiltruje od katalyzátoru nerozpustného ve vodě a fiirát se vede přes kolonu, která je naplněna 750 g silně kyselého kat^u, a analogickým způsobem, jak je popsáno v příkladu I, se ruatení roztok dále zpracovává. Získá se 20 g (92 · mmoo, tj. asi 46 %) ·L-PTCc-lУooohlori<Ou o teplotě tání 199 až 201 Měrná s'tSěivsit [a]22 = 23,3° (c = 0,6, 1 N HC1) , mí Upovídá m^áTní otáčiTOSti [mJ ^2 = 50,7°. Vobiá L-řTC zítkεná po ^sol^ení prspyledsiido má te^ota toní 215 až 217 °C a měrnou otáčivost Ыр2 = +28,5° (c = 1, 1N sdppoíí.ojíhí mcitorní otáČivossii Щ p2= 5b6°.
Příklad 3 ч .
• Ku zjištění stálosti acylázy perncC-lnnu G vázané na kt-erá se používá v příkladu 2, vůči N-fudahuty? 1 , 5-PTC, se 100 g fioovorného enzymu smísí, s 10 m. 5« vodného roztoku N-ftdacttyl-D,LpTC (pH 7,4, s8aSillsvváto přídavkem malého mnnSži.<ví fssfá.sc;véhs puf™) a směs se míchá při teplotě místnosti. Vždy po 24 hodinách se roztok substrátu odfiltruje a oddělený ve vodě nerozpustný enzym se znovu podrobí působení roztoku racemického substrátu. Aktivita enzymu se zjišíuje stanovením obsahu volné PTC po 45 minutách a po 2,5 hodinách zbarvením vzorku ninhydrinem.
Po 8 týdnech nebylo možno zjistit žádné podstatné snížení poddlu PTC po 45 minutách reakční doby (asi 20 % vztaženo na pouuitý racemmt). Po 22,5 hodině bylo v·každém případě hydrolyzováno 50 % použitého racemátu.
Claims (4)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob enzyrnmtického štěpení D,L·-2-tmino-4-methylfotf0oomtteloé kyseliny pró získání L-2-amioo-4-methylfOtfOnomttelné kyseliny, vyznaa^íc^ se tím, že se na odpoovádaící N-fenaaeeyydeeivát vzorce IOH COOH působí ve vodném prostředí acylázou penidlnu G.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyzanaující se tím, že se používá acylázy psenicHnu G z · E. coli, s výhodou z E. coli ATCC 11105.
- 3. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznaačujcí se tím, že se používá acylázy o®e0celinj G příomnnLé ve formě volného l^yofilZ^á^l^u.
- 4. Způsob podle bodu 1 nebo 2, vyznaauuící se tím, že se používá acylázy penidlnu G vázané na ncoSCi.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3048612A DE3048612C2 (de) | 1980-12-23 | 1980-12-23 | "Verfahren zur enzymatischen Trennung von L-2-Ami no-4-methylphosphinobuttersäure" |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS224638B2 true CS224638B2 (en) | 1984-01-16 |
Family
ID=6120041
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS819717A CS224638B2 (en) | 1980-12-23 | 1981-12-23 | Method of enzymetic cleavage d,l-2-amino-4-methylphosphinebutyric acid |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4389488A (cs) |
| EP (1) | EP0054897B1 (cs) |
| JP (1) | JPS57138394A (cs) |
| AT (1) | ATE14597T1 (cs) |
| AU (1) | AU547636B2 (cs) |
| BR (1) | BR8108346A (cs) |
| CA (1) | CA1172981A (cs) |
| CS (1) | CS224638B2 (cs) |
| DD (1) | DD201907A5 (cs) |
| DE (2) | DE3048612C2 (cs) |
| DK (1) | DK571481A (cs) |
| ES (1) | ES508034A0 (cs) |
| HU (1) | HU189552B (cs) |
| IL (1) | IL64623A (cs) |
| MA (1) | MA19362A1 (cs) |
| OA (1) | OA06973A (cs) |
| PL (1) | PL234314A1 (cs) |
| PT (1) | PT74188B (cs) |
| SU (1) | SU1246897A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA818859B (cs) |
| ZW (1) | ZW30581A1 (cs) |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3334849A1 (de) * | 1983-09-27 | 1985-04-04 | Hoechst Ag, 6230 Frankfurt | Verfahren zur racemisierung optisch aktiver aminosaeuren |
| DE3435156A1 (de) * | 1984-09-25 | 1986-04-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur herstellung der stereoisomeren von 1-amino-alkylphosphonsaeuren oder 1-aminoalkylphosphinsaeuren |
| DE3724722A1 (de) * | 1987-07-25 | 1989-02-16 | Hoechst Ag | Verbessertes verfahren zur enzymatischen herstellung von l-2-amino-4-methylphosphinobuttersaeure |
| DE3817191A1 (de) * | 1988-05-20 | 1989-11-30 | Hoechst Ag | Verfahren zur racemisierung von optisch aktiver d-2-n-phenacetylamino-4- methylphosphinobuttersaeure |
| DE3817956A1 (de) * | 1988-05-27 | 1989-12-07 | Hoechst Ag | Verfahren zur herstellung phosphorhaltiger l-aminosaeuren sowie ihrer ester und n-derivate |
| US5081024A (en) * | 1988-09-05 | 1992-01-14 | Nissan Chemical Industries, Ltd. | Process for producing optically active amino acids |
| DE3903446A1 (de) * | 1989-02-06 | 1990-10-18 | Hoechst Ag | Verfahren zur enzymatischen trennung von 2-amino-4-methylphosphinobuttersaeurederivaten |
| US5057607A (en) * | 1990-06-08 | 1991-10-15 | Eli Lilly And Company | Enantiomerically selective biocatalyzed acylation |
| TW353663B (en) * | 1991-04-06 | 1999-03-01 | Hoechst Ag | Process for the preparation of phosphorus-containing L-amino acids, their derivatives and intermediates for this process |
| DE4422045A1 (de) * | 1994-06-26 | 1996-01-04 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Verfahren zur enzymatischen Spaltung von 2-Amino-4-methylphosphinobutansäureamid-Derivaten |
| DE19933362A1 (de) * | 1999-07-20 | 2001-02-08 | Aventis Cropscience Gmbh | Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren aus ihren racemischen N-Acetyl-D,L-Derivaten durch enzymatische Racemat-Spaltung mittels isolierter, rekombinanter Enzyme |
| EP1481068B1 (en) * | 2002-02-26 | 2011-02-02 | Syngenta Limited | A method of selectively producing male or female sterile plants |
| CN110343676B (zh) | 2018-04-03 | 2020-06-23 | 上海弈柯莱生物医药科技有限公司 | 一种l-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用 |
| CN108484665B (zh) * | 2018-04-16 | 2020-06-23 | 浙江工业大学 | 一种从酶转化液中分离提取l-草铵膦的方法 |
| CN111979208B (zh) | 2019-05-23 | 2023-01-10 | 弈柯莱生物科技(上海)股份有限公司 | 一种l-谷氨酸脱氢酶突变体及其应用 |
| CN110343734B (zh) * | 2019-06-14 | 2021-03-23 | 浙江工业大学 | 一种l-草铵膦化学酶法生产方法 |
| WO2022207753A1 (en) | 2021-04-01 | 2022-10-06 | Basf Se | Methods for preparing l-glufosinate |
| CN114277080B (zh) * | 2021-12-22 | 2023-10-03 | 河北威远生物化工有限公司 | 一种酶拆分法制备l-草铵膦的工艺 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1369462A (en) * | 1971-11-23 | 1974-10-09 | Beecham Group Ltd | Enzymic resolution of racemic n-acyl-dl-amino acids |
| JPS5547630A (en) * | 1978-10-02 | 1980-04-04 | Meiji Seika Kaisha Ltd | Optical resolution of phosphorus-containing amino acid |
| US4226941A (en) * | 1979-09-27 | 1980-10-07 | Meiji Seika Kaisha, Ltd. | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid |
-
1980
- 1980-12-23 DE DE3048612A patent/DE3048612C2/de not_active Expired
-
1981
- 1981-12-16 ES ES508034A patent/ES508034A0/es active Granted
- 1981-12-16 DE DE8181110474T patent/DE3171623D1/de not_active Expired
- 1981-12-16 EP EP81110474A patent/EP0054897B1/de not_active Expired
- 1981-12-16 AT AT81110474T patent/ATE14597T1/de active
- 1981-12-18 PL PL23431481A patent/PL234314A1/xx unknown
- 1981-12-21 US US06/332,852 patent/US4389488A/en not_active Expired - Lifetime
- 1981-12-21 SU SU813375844A patent/SU1246897A3/ru active
- 1981-12-21 DD DD81235986A patent/DD201907A5/de not_active IP Right Cessation
- 1981-12-21 ZW ZW305/81A patent/ZW30581A1/xx unknown
- 1981-12-22 HU HU813902A patent/HU189552B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-12-22 PT PT74188A patent/PT74188B/pt unknown
- 1981-12-22 CA CA000392945A patent/CA1172981A/en not_active Expired
- 1981-12-22 ZA ZA818859A patent/ZA818859B/xx unknown
- 1981-12-22 DK DK571481A patent/DK571481A/da not_active Application Discontinuation
- 1981-12-22 IL IL64623A patent/IL64623A/xx not_active IP Right Cessation
- 1981-12-22 JP JP56206275A patent/JPS57138394A/ja active Granted
- 1981-12-22 BR BR8108346A patent/BR8108346A/pt unknown
- 1981-12-22 AU AU78751/81A patent/AU547636B2/en not_active Ceased
- 1981-12-23 MA MA19567A patent/MA19362A1/fr unknown
- 1981-12-23 OA OA57574A patent/OA06973A/xx unknown
- 1981-12-23 CS CS819717A patent/CS224638B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE14597T1 (de) | 1985-08-15 |
| DD201907A5 (de) | 1983-08-17 |
| DE3048612C2 (de) | 1982-12-02 |
| CA1172981A (en) | 1984-08-21 |
| IL64623A (en) | 1985-04-30 |
| AU7875181A (en) | 1982-07-01 |
| AU547636B2 (en) | 1985-10-31 |
| PL234314A1 (cs) | 1982-07-05 |
| HU189552B (en) | 1986-07-28 |
| DE3048612A1 (de) | 1982-07-01 |
| EP0054897B1 (de) | 1985-07-31 |
| JPH0218072B2 (cs) | 1990-04-24 |
| ES8207584A1 (es) | 1982-10-01 |
| EP0054897A2 (de) | 1982-06-30 |
| EP0054897A3 (en) | 1982-09-08 |
| PT74188A (en) | 1982-01-01 |
| US4389488A (en) | 1983-06-21 |
| MA19362A1 (fr) | 1982-07-01 |
| BR8108346A (pt) | 1982-10-13 |
| ZW30581A1 (en) | 1982-07-14 |
| ZA818859B (en) | 1982-11-24 |
| OA06973A (fr) | 1983-07-31 |
| PT74188B (en) | 1983-11-08 |
| SU1246897A3 (ru) | 1986-07-23 |
| IL64623A0 (en) | 1982-03-31 |
| DE3171623D1 (en) | 1985-09-05 |
| ES508034A0 (es) | 1982-10-01 |
| JPS57138394A (en) | 1982-08-26 |
| DK571481A (da) | 1982-06-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS224638B2 (en) | Method of enzymetic cleavage d,l-2-amino-4-methylphosphinebutyric acid | |
| KR100190203B1 (ko) | 커플링된 효소반응에 의해 l-포스피노트리신을 제조하는 방법 | |
| US3971700A (en) | Process for the enzymatic resolution of DL-phenyl glycine amide into its optically active antipodes | |
| Solodenko et al. | Enzymatic preparation of both L-and D-enantiomers of phosphonic and phosphonous analogues of alanine using penicillin acylase | |
| CH629179A5 (it) | Procedimento per l'idrolisi di idantoine in derivati di d, l amminoacidi. | |
| KR100237520B1 (ko) | 2-아미노-4-메틸포스피노부티르 산 유도체의 효소에 의한 분할 방법 | |
| RU2270869C2 (ru) | Способ получения l-аминокислот из их рацемических n-ацетил-d, l-производных посредством ферментативного расщепления | |
| CA1177423A (en) | Enzymatic deesterification of cephalosporin methyl ester | |
| AU606185B2 (en) | Improved process for the enzymatic preparation of l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| US4581332A (en) | Novel alkaline protease | |
| US5492830A (en) | Enzymatic resolution of α-tertiary carboxylic acid esters | |
| EP1141333B1 (en) | Process for the enzymatic preparation of amino acid derivatives with enhanced optical purity | |
| US5010012A (en) | Process for the enzymatic preparation of optically active phosphorus containing functional acetic acid derivatives | |
| CA1187432A (en) | Microorganism and its use for the preparation of glutathione | |
| Kikuchi et al. | A new enzyme, proline acylase (N-acyl-L-proline amidohydrolase) from Pseudomonas species | |
| JP3006615B2 (ja) | Ｄ―β―ヒドロキシアミノ酸の製造法 | |
| Griffiths et al. | Physiological comparison of L-serine dehydratase and tryptophanase from Bacillus alvei | |
| JPH0824575B2 (ja) | 新規アミノペプチダ−ゼ | |
| JPS6224076B2 (cs) | ||
| JP2674078B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造法 | |
| KR830002328B1 (ko) | 효소에 의한 l-트리프토판의 제조방법 | |
| EP0319471A2 (en) | Resolution process | |
| JP2505487B2 (ja) | 光学活性リジンのラセミ化法 | |
| JP2674076B2 (ja) | Ｄ−α−アミノ酸の製造方法 | |
| KR0183447B1 (ko) | 신균주 바실러스 엘케이-1 |