HU181999B - Process for producing new citostatic antracycline antibiotics - Google Patents

Process for producing new citostatic antracycline antibiotics Download PDF

Info

Publication number
HU181999B
HU181999B HU77ZA402A HUZA000402A HU181999B HU 181999 B HU181999 B HU 181999B HU 77ZA402 A HU77ZA402 A HU 77ZA402A HU ZA000402 A HUZA000402 A HU ZA000402A HU 181999 B HU181999 B HU 181999B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
atcc
streptomyces
methyl
hydrogen
formula
Prior art date
Application number
HU77ZA402A
Other languages
English (en)
Inventor
Hamao Umezawa
Tomio Takeuchi
Toshikazu Oki
Taiji Inui
Original Assignee
Microbial Chem Res Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP12023776A external-priority patent/JPS5344555A/ja
Priority claimed from JP6090877A external-priority patent/JPS5463067A/ja
Application filed by Microbial Chem Res Found filed Critical Microbial Chem Res Found
Publication of HU181999B publication Critical patent/HU181999B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/20—Carbocyclic rings
    • C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
    • C07H15/252—Naphthacene radicals, e.g. daunomycins, adriamycins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/56—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen atom of the saccharide radical directly bound to a condensed ring system having three or more carbocyclic rings, e.g. daunomycin, adriamycin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • C12R2001/48—Streptomyces antibioticus ; Actinomyces antibioticus
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/886—Streptomyces
    • Y10S435/888—Streptomyces antibioticus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás új daganatgátló antraciklin-glükozid antibiotikumok előállítására és gyógyászati alkalmazására. Közelebbről a találmány MA144—Gl —G2, —L, —NI, —SÍ, — S2, —Ul, —U2 és —Y elnevezésű új tumorgátló antibiotikus anyagokra, ezen anyagoknak streptomycesek közé tartozó és MA144-et termelő törzsek fermentációjára vonatkozik.
Mikroorganizmusok táptalajában különböző típusú antraciklin-glükozidokat találtak és írtak le az irodalomban. Közülük a daunomicint és az adriamicint már klinikailag is alkalmazzák emberi daganatok kezelésére, és a karminomicin és rubidazon klinikai kipróbálás alatt | áll, amit a daganatgyógyítás területén élénk érdeklődéssel kísérnek.
1 Streptomyces-tcnycszetekben daganatgátló hatású 4 metabolitokat keresve a feltalálók új vegyületeket fedez~ tek fel és tisztítás, valamint fizikokémiai tulajdonságaikon alapuló azonosításuk után megállapították, hogy a MA144—Gl, —G2, —L, —NI, —SÍ, — S2, —Ul, —U2 és —Y elnevezésű antibiotikumok új vegyületek, 20 amelyek jelentős tumorgátló hatást és kisfokú mérgezőképességet mutatnak állatoknál, és eljárásokat és módszereket dolgoztak ki előállításukra és tisztításukra vonatkozóan.
Az adriamicin S. peuceticus var. caesius fermentációja útján való előállítását a 3,590,028 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás, a daunomicin adriamicinné való átalakítását a 3,803,124 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás közli.
A daunomicin (S. peuceticus fermentációjával előál- 30 lítva az 1.003.383 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás szerint) azonos lehet Rhone-Poulenc 13,057 R.P.-jével (korábban rubidomicin és most daunoribicin; lásd a 985,598, 1,188,262 és 1,241,750 számú brit és a 3,616,242 5 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást) és valószínűleg azonos a 3,092,550 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és a 901,830 számú brit szabadalmi leírásban közölt danubomicinnel. A dihidrodaunomicinre vonatkozik a 10 3,686,136 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás.
Aklavinon-aglükonrészt tartalmazó antraciklin-antibiotikumokat a következő közlemények írnak le:
a) Aklacinomicin A és B: 3,988,315 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás és Oki és munkatársai, J. Antibiotics 28, 830 (1975).
b) Aklavin: J. Bacteriol. 72, 90 (1956).
ε-Pirromicinon-aglükonrészt tartalmazó antraciklin-antibiotikumokat a következő közlemények ismertetnek:
c) Musettamicin és marcellomicin: J. Antibiotics 30, 525 (1977).
d) Pirromicin: Chem. Bér. 92, 1904 (1959).
e) Cinerubin A és B: 846,130 számú brit szabadalmi leírás (lásd a 3,864,480 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást és Keller-Schierlein és munkatársai, Antimicrobial Agents and Chemotherapy* 68. oldal, 1970).
Aklavinontól és ε-pirromicinontól eltérő aglükont tar181999
-1181999 talmazó egyéb antraciklin-antibiotikumokat a következő közlemények írnak le:
f) Nogalomicin: J. Amer. Chem. Soc. 99, 542 (1977).
g) Steffimicin: J. Antibiotics 27, 805, 809 (1974).
h) Carminomicin: J. Antibiotics 27, 254 (1974), 2,362,707 számú német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírás és J. Amer. Chem. Soc. 97, 5955 (1975).
Z) Tripanomicin: Antimicrobial Agents and Chemotherapy 1, 395 (1972).
j) Requinomicin: J. Antibiotics 25, 393 (1972).
k) Galirubin A és B: Naturwiss. 52, 539 (1965) és Chem. Abst. 67, 90573z (1967).
Az antraciklin-antibiotikumok további ismertetését lásd az „Index of Antibiotics from Actinomycetes”-ben, Hamao Umezawa, University Park Press, State College, Pennsylvania, Amerikai Egyesült Államok (1967):
Antibiotikum Oldalszám
Aklavin 111
Cinerubin A 220
Cinerubin B 221
Danubomicin 242
Daunomicin 243
Pirromicin 524
Rhodomicin A, B 561
Rubidomicin 574
Az Antibiotics kézikönyv, 1. kötet, Mechanism of Action, Dávid Gottlieb and Paul D. Shaw, SpringerVerlag, New York, Inc., N. Y„ N. Y. (1967) a 190—210 oldalon A DiMarco Daunomycin and Related Antibiotics című áttekintését tartalmazza. Az Information Bulletin, 10. szám, Tnternational Center of Information of Antibiotics, az Egészségügyi Világszervezettel együttműködésben, 1972. december, Belgium, az anthracyclinekről és származékaikról ad áttekintést.
A találmány új antraciklin-glükozid antibiotikumokra, előállításukra szolgáló eljárásra és azokat tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására vonatkozik. A találmány tárgyát közelebbről a MA144—Gl, —G2, —L —NI, —SÍ, —S2, —Ul, —U2 és —Y elnevezésű új antraciklin-glükozidok előállítása képezi. Ezeket az antibiotikumokat a streptomycesekhez tartozó, MA 144termelő törzsek fermentációjával állítjuk elő. A kapott MA144—Gl, —G2, —L, —NI, —Sí, — S2, —Ul, —U2 és —Y vízben oldhatatlan antibiotikumok izolálására és tisztítására használatos módszerekkel nyerhetők ki, választhatók el és tisztíthatok. E módszerek közé tartozik az oldószeres extrakció, oldószeres kicsapás, koncentrálás, gélszűrés, ellenáramú frakcionálás, fémionokkal való kelátképzés és/vagy standard oszlopkromatográfiás eljárások.
így a találmány szerint MA 144—Gl, —G2, —L, —NI, —SÍ, —S2, —Ul, —U2 és —Y daganatgátló antibiotikumokat állítunk elő, amelyek
a) mikrobaellenes hatást mutatnak Gram-pozitív baktériumokkal szemben,
b) hatásosan gátolják emlősök rosszindulatú daganatainak növekedését és
c) nagyfokú sejtmérgező hatással rendelkeznek és ezáltal gátolják szövettenyésztett emlős tumorsejtek szaporodását és RNS-(ribonukleinsav)-szintézisét.
Ezen MA 144 komponensek fizikokémiai tulajdonságai a következők:
MA144—Gl sárga amorf por alakjában izolálható; olvadáspontja 141—145 °C, optikailag aktív, fajlagos .forgatóképessége [a]“= - 54° (c=O,33; CHCIj); gyengén bázikus antraciklin-glükozid, D-cinerulozil5 -2-dezoxi-L-fukoziI-L-rodozaminil-akIavinon, melynek tapasztalati képlete C42H53O15N.
MA 144—G2 piros amorf porként izolálható; olvadáspontja 152—156 °C; gyengén bázikus antraciklin-glükozid, D-cinerulozil-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodoza10 minil-s-pyrromycinon, melynek tapasztalati képlete ^-42^5^ 16N.
MA144—L sárga amorf porként izolálható, olvadáspontja 134—136 °C, gyengén bázikus antraciklin-glükozid, L-cinerulozil-2-dezoxi-L-fukozil-N-mono15 demetil-L-rodozaminil-aklavinon, melynek tapasztalati képlete C41H51Oi5N.
MA 144—NI sárga amorf porként izolálható; olvadáspontja 146—147 °C, optikailag aktív, [α]β=+57,5° (c=0,4; CHCIj); gyengén bázikus antraciklin-glüko20 zid, L-rodinozil-2-dezoxi-L-fukoziI-L-rodozaminil-ak- Á lavinon, melynek tapasztalati képlete ^42^55^15^MA144—SÍ sárga amorf porként izolálható; olvadáspontja 144—147 °C, optikailag aktív, [α]θ=+77° (c=l,0; CHC13); gyengén bázikus antraciklin-glüko25 zid, 2-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil-aklavinon, melynek tapasztalati képlete Cj6H45O13N.
MA144—S2 piros amorf porként izolálható; olvadáspontja 154—158 °C; gyengén bázikus antraciklin-glükozid, 2-dczoxi-L-fukozil-L-rodozamín ίΙ-ε-pyrromy30 cinon, melynek tapasztalati képlete C36H45O14N.
MA144—Ul sárga amorf porként izolálható; olvadáspontja 152—155 °C, optikailag aktív [a]= + 31° (c= = 1,0; CHCIj); gyengén bázikus antraciklin-glükozid, 2-dezoxi-L-fukozil-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodoza35 minil-aklavinon, melynek tapasztalati képlete C42H55°16N·
MA144—U2 piros amorf porként izolálható; olvadáspontja 160—164 °C; gyengén bázikus antraciklin-glükozid, 2-dezoxi-L-fukozil-2-dezoxi-L-fukozil-L40 -rodozaminil-c-pyrromycin, melynek tapasztalati képlete C42H55OI7N.
MA144—Y sárga amorf porként izolálható; olvadáspontja 153—155 °C; optikailag aktív, [α]^=+66° (c= 1,0; CHCIj); gyengén bázikus antracíklin-glüko45 zid, L-akuloziI-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil-aklavinon, melynek tapasztalati képlete c42h51o15n.
Ábrák leírása
Az 1. ábra az MA 144—Gl UV (ultraibolya) és látható fényű abszorpciós spektrumát mutatja 90%-os metanolban.
A 2. ábra az MA 144—G2 UV és látható fényű ab55 szorpciós spektrumát mutatja 90%-os metanolban.
A 3. ábra az MA144—L UV és látható fényű abszorpciós színképét mutatja 90%-os metanolban.
A 4. ábra az MA144—NI UV és látható fényű abszorpciós színképét mutatja 90%-os metanolban.
Az 5. ábra az MA144—SÍ UV és látható fényű abszorpciós spektrumát mutatja 90%-os metanolban.
A 6. ábra az MA144—S2 UV és látható fényű abszorpciós spektrumát mutatja 90%-os metanolban.
A 7. ábra az MA 144—Ul UV és látható fényű ab65 szorpciós színképét mutatja 90%-os metanolban.
-2181999
A 8. ábra az MA144—U2 UV és látható fényű abszorpciós színképét mutatja 90%-os metanolban.
A 9. ábra az MA144—Y UV és látható fényű abszorpciós színképét mutatja 90/ó-os metanolban.
A 10. ábra az MA144—G1 IR (infravörös) abszorpciós spektrumát mutatja KBr-ban.
All. ábra az MA144—G2 IR abszorpciós spektrumát mutatja KBr-ban.
A 12. ábra az MA 144—L IR abszorpciós spektrumát mutatja KBr-ban.
A 13. ábra az MA144—NI IR abszorpciós színképét mutatja KBr-ban.
A 14. ábra az MA144—SÍ IR abszorpciós színképét mutatja KBr-ban.
A 15. ábra az MA144—S2 IR abszorpciós színképét mutatja KBr-ban.
A 16. ábra az MA144—U1 IR abszorpciós színképét mutatja KBr-ban.
A 17. ábra az MA 144—U2 abszorpciós színképét mutatja KBr-ban.
A 18. ábra az MA144—Y IR abszorpciós színképét mutatja KBr-ban.
A 19. ábra az MAÍ44—G1 NMR (mágneses magrezonancia) spektrumát mutatja CDCl3-ban (60 MHz).
A 20. ábra az MA144—G2 NMR spektrumát mutatja CDCI3-ban (60 MHz).
A 21. ábra az MA144—L NMR spektrumát mutatja CDCl3-ban (60 MHt).
A 22. ábra az MA144—NI NMR spektrumát mutatja CDCI3-ban (100 MHz).
A 23. ábra az MA144—SÍ NMR spektrumát mutatja CDCl3-ban (60 MHz).
A 24. ábra az MA144—S2 NMR spektrumát mutatja CDCI3-ban (60 MHz).
A 25. ábra az MA144—U1 NMR spektrumát mutatja CDCI3-ban (60 MHz).
A 26. ábra az MA144—U2 NMR spektrumát mutatja CDCl3-ban (60 MHz).
A 27. ábra az MA144—Y NMR spektrumát mutatja CDCl3-ban (100 MHz).
A 28. ábra az MA144—Y-ból kapott metilált diszacharid UV és látható fényű abszorpciós spektrumát mutatja metanolban (0,04 g per liter).
A29. ábra az MA144—Y-ból kapott metilált diszacharid IR abszorpciós spektrumát mutatja KBr-ban.
A 30. ábra az MA 144—Y-ból kapott metilált diszacharid NMR-spektrumát mutalja CDCl3-ban (100 MHz).
A találmány szerint 9 új antraciklin-antibiotikumot az MA144—Gl-et, -G2-t, —L-et, —Nl-et, -Sl-et, —S2-t, —Ul-et, —U2-t és —Y-t állítunk elő, melyek úgy baktériumellenes, mint daganatgátló hatással rendelkeznek. Közelebbről a találmány szerinti vegyületek hatásosak Gram-pozitív baktériumok ellen, gátolják különböző emlős daganatok, mint L 1210 és P388 leukémia növekedését egérnél és mérgezőképességük kicsi, így a találmány szerinti vegyületek baktériumellenes és daganatgátló szerekként használhatók. Az „MA144 komponensek” megjelölés olyan antibiotikumra vonatkozik, amely az MA144—Gl, —G2, —L, —NI, —SÍ, —S2, —Ul, —U2 és —Y vegyületek közül legalább egyet tartalmaz.
E vegyületeket úgy állítjuk elő, hogy szerves nitrogénforrást tartalmazó vizes szénhidrátoldatban, süllyesztett aerob körülmények között MAl44-et termelő strepto mycestörzset tenyésztünk. A táptalajban képződött vegyületeket vízben oldhatatlan antibiotikumok extrakciójára és tisztítására használt szokványos módszerekkel kivonjuk és tisztítjuk.
Az MA 144 komponensek előállítása
A találmány szerinti vegyületek előállítását fermentáció útján hajtjuk végre.
Fermentációs eljárás
A találmány szerinti vegyületek fermentatív előállításához streptomyces-fajhoz tartozó, MA144-et termelő törzsek, mint Streptomyces galilaeus MA144—NI (FERM P—2455, ATCC 31133), St. galilaeus (ATCC 14969), St. cinereoruber (ATCC 19740), St. niveoruber (ATCC 14971), St. antibioticus (ATCC 8663), St. purpurascens (ATCC 25489), Streptomyces Sp. ME5O5— HEL, ATCC 31273 és mutánsaik használhatók.
Az ME505—HE1 jelű törzs leírása
A találmány szerinti eljárásban használt és a rhodirubin antibiotikumokat termelő egyik mikroorganizmust 1974 júliusában Tokióban az Institute of Microbial Chemistry mellett gyűjtött földmintából izoláltuk, és az ME505—HE1 sorszámmal jelöltük.
Az ME505—HE1 sorszámú törzs a következő tulajdonságokkal rendelkezik:
1. Morfológiai tulajdonságok
A mikroszkópi képben viszonylag hosszú és rectiflexibilis légmicéliumok emelkednek ki az elágazó szubsztrátmicéliumból. Az érett spórákból álló láncokban több mint 10 spóra helyezkedik el, méretük 0,6—0,8 x 1,0—
1,2 μ, felületük sima.
2. A törzs tulajdonságai különböző táptalajokon
A zárójelek között megadott jelek a Container Corporation of America, USA által kiadott Color Harmony Manual-ban megadott színskála szerintiek.
a) Szacharóz-nitrát-agar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végeztük: a telepek színtelenek vagy halványpiros-bíborszínűek, a telepek közepe rózsaszín-sötétpiros-bíborszínű (9 ic—9 le, málnaszínű). Légmicélium nem fejlődik vagy gyengén fejlett és fehér színű. Oldódó színanyag nem termelődik. Ha 15 napos tenyésztést követően egy vágóeszközzel kis darabkát kivágunk a telepből és erre egy csepp IN hidrogénkloridot cseppentünk, úgy a micélium vöröses-bíborszíne halványrózsaszínűre változik.
b) Glükóz-aszparagin-agar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végeztük: a telepek színtelenek vagy sötétvörös-narancsszínűek (5 le, vörösréz színű), de lehetnek világosvörös-narancsszínűek is (6 ga, korallszínű).
Légmicélium nem fejlődik. Oldódó színanyag nem keletkezik.
c) Glicerin-aszparagin-agar (ISP 5 táptalaj), a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: színtelen-halvány vörös-narancs (5 le, vörösréz színű) vagy sárgásvörös (6 ne) vagy bíborvörös (9 ne, málnaszínű) telepek. Légmicélium vagy nem fejlődik, vagy helyenként látható, és ebben az esetben színe fehér, enyhén rózsaszínes fehér-halványrózsaszín. Oldódó színanyag nem keletkezik. Ha 15 napos
-3181999 tenyésztést követően a telepből kivágunk egy kis darabot és 1 N nátriumhidroxid oldatot cseppentünk rá, úgy a micélium sárgásvörös színe bíborszínűre változik.
d) Szervetlen só-keményítő-agar (ISP 4 táptalaj), a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve; színtelen-szürkés-vörösesbarna (4 ni, fűszerbarna vagy 5 lg, kakaóbarna) színű telepek. A légmicélium színe fehér-hal ványrózsaszín. Enyhe barna színű oldódó színanyag keletkezik.
e) Tirozin-agar (ISP 7 táptalaj), a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: színtelen-halványbarna-sárgásbarna-szürkés vörösesbarna színű telepek, a tenyésztés
15. napján a telepek színe világos sárgásbarna (6 le, korallszínű) vagy mélyvörösre (6 ne) vagy sötét vörösesbarnára (7 pn—71/2 pl) változik- 21 napon át tenyésztve légmicélium nem látszik, esetenként fejletlen fehér színű légmicéliqm fejlődik. Enyhe vörösesbarna színű oldódó színanyag keletkezik.
f) Tápagar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: halvány sárgásbarna-halványbarna telepek. Légmicélium 15 napos tenyésztés után nincs vagy elvétve fehér színű. Az oldódó színanyag színe barna.
g) Élesztőkivonat-malátakivonat-agar (ISP 2 táptalaj), a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halványsárga-halványbarna-mélyvörös-sötétvörös-bíborszínűek (71/2 ng—71/2 pg, borszínű). A tenyésztés 7. napján vékony fehér-rózsaszínes fehér légmicélium fejlődik. Igen gyenge barna színű oldódó színanyag látszik az inkubáció 10. napján.
h) Zabliszt-agar (ISP 3 táptalaj), a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halványbarna-sötétvörös-narancs-vörösesbarna (6 pi, barna mahagóni szín) színűek. Légmicélium nem fejlődik. Igen gyenge sötét narancsszínű oldódó színanyag keletkezik.
i) Glicerin-nitrát-agar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek vagy színtelenek vagy halvány rózsaszín-szürkésvörös-mélyvörös-sötétvörös (8 ne) vagy sötét bíborvörös (9 ne, málnaszínűek vagy 9 pg, vörösszilva színűek) vagy sötétbarnás-bíborszínűek. Légmicélium vagy nem fejlődik vagy elvétve fehér színű. Ha a tenyésztés 15. napján a telepből kivágott micéliumdarabkára egy csepp IN nátriumhidroxid oldatot cseppentünk, úgy a micélium sötétvörös színe bíborszínűre változik. Oldódó színanyag nem szintetizálódik.
j) Keményítő-agar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halvány rózsaszín—halvány vörösesbarna-sötétvöröses narancs vagy sötét bíborvörös színűek (8 ne). Vékony rózsaszínűfehér légmicélium fejlődik. Oldódó színanyag nincs.
k) Kalcium-maláta-agar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halványrózsaszínűek. Légmicélium alig vagy elvétve fehér színűén fejlődik ki. Oldódó színanyag nincs.
l) Cellulóz-agar, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halványbarna színűek. Légmicélium és oldódó színanyag nem látszik.
m) Zselatin táptalaj. Sík zselatin táptalajon, a tenyésztést 20 C° hőmérsékleten végezve: színtelen-halványsárgás-barna vagy halványbarna színű telepek. Légmicélium nem fejlődik. Az oldódó színanyag színe barna.
Glükóz-pepton-zselatin táptalajon, a tenyésztést 27 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halványsárgás-barna vagy halványbarna színűek. Légmi4 célium nem fejlődik. Sötétbarna színű oldódó színanyag szintetizálódik.
n) Fölözött tejen, a tenyésztést 30 C° hőmérsékleten végezve: a telepek színtelenek vagy halványsárgásbarnasárgásbarna színűek. Légmicélium alig vagy elszórtan fejlődik, ekkor színe barnásfehér. Oldódó színanyag van, színe barna.
3. Élettani tulajdonságok:
a) Növekedési hőmérséklet:
Az optimális növekedési hőmérséklet élesztőkivonatkeményítő-agaron [1,0% oldódó keményítő; 0,2% élesztőkivonat (Daigoeiyokagaku Co.); 3,4% agar; pH 7,0—7,2) 20, 24, 27, 30, 37 és 50 C° hőmérsékleten vizsgáltuk. 37 C° és 50 C° hőmérsékleten nem, a többi hőmérsékletértéken nőtt a mikroorganizmus, az optimális növekedési hőmérséklet kb. 27 C°-nak bizonyult.
b) Zselatin-elfolyósítási próba (20 C° hőmérsékleten vizsgálva 15% zselatin-tartalom mellett; és 27 C' hőmérsékleten vizsgálva glükóz-pepton-zselatin táptalajon).
Zselatin-táptalajon az elfolyósítás 3 napos tenyésztés után közepes mértékű. Glükóz-pepton-zselatin táptalajon a tenyésztés 3. napján az elfolyósítás közepes-erős.
c) A keményítő hidrolízise (27 C° hőmérsékleten szervetlen só-keményítő-agaron és keményítő-agaron vizsgálva):
A tenyésztés 5. napja után közepes-erős hidrolitikus aktivitás figyelhető meg.
d) A fölözött tej koagulálása és peptonizációja (30 C° hőmérsékleten fölözött tejen tenyésztve a mikroorganizmust): 7 napig változás nem figyelhető meg, a tenyésztés 10. napja után a koaguláció teljes és azután elkezdődik a peptonizációs folyamat, amely 3 hetes inkubáció után teljessé válik. A koagulációs és peptonizációs hatás közepes-erős.
e) Melanoíd típusú színanyag szintézise [27 C°-on tripton-élesztőkivonat-táptalajon (ISP numero 1 táptalaj) ; pepton-élesztőkivonat-vas-agaron (ISP numero 6 táptalaj) és tirozin-agaron (ISP numero 7 táptalaj) tenyésztve]: A pepton-élesztőkivonat-vas-agaron és a tirozin-agaron melanoíd típusú színanyag keletkezik, a tripton-élesztőkivonat-táptalajon melanoíd típusú színanyag nem szintetizálódik.
f) Szénhidrátok hasznosítása [27 C° hőmérsékleten Pridham—Gottlieb-alaptáptalaján (ISP 9 táptalaj) tenyésztve] :
Jó növekedés figyelhető meg L-arabinózon, D-xilózon, D-glükózon, D-fruktózon, inoziton, L-rhamnózon, raffinózon és D-manniton, ugyanakkor a szacharózt nem hasznosítja a mikroorganizmus.
g) A kalcium-maláta elfolyósítása (27 C° hőmérsékleten kalcium-maláta-agaron vizsgálva): a kalciummaláta elfolyósítása a tenyésztés 5. napja után kezdődik, az elfolyósítás mértéke közepes-erős.
h) Nitrát-redukció [27 C° hőmérsékleten 1,0% káliumnitrátot tartalmazó peptonos vízben (ISP 8 táptalaj) vizsgálva]: negatív.
A fenti tulajdonságok szerint az ME—505—HE1 sorszámú törzs a Sterptomyces nembe tartozik, a légmicélium nem formál spirálokat vagy hurkokat, a spórák felülete pedig sima. A különböző táptalajokon a mikroorganizmus halvány barna-mélyvöröses narancsszínűmély-sötét bíborvörös színű telepeket fejleszt, a légmi-4181999 célium vagy hiányzik vagy vékony fehér-rózsaszínes fehér-halvány rózsaszínű. A legtöbb táptalajon oldódó színanyag nem keletkezik, egyes esetekben enyhén barnás vagy vörösesbarna színű oldódó színanyag jelenik meg. Ezenfelül a telepek hátoldala jellemző borvörös színű, ez a hátoldal pH-índikátorként viselkedik. Pepton-élesztőkivonat-vas-agaron és tirozin-agaron melanoid típusú színanyag termelődik, ez a melanoid-színanyag-termelés tripton-élesztőkivonat-folyékony halmazállapotú táptalajon nem következik be. A mikroorganizmus közepesen-erősen hidrolizálja a fehérjéket és a keményítőt. Jellemző tulajdonsága a törzsnek, hogy 37 C° hőmérsékleten nem növekszik.
Az ismert fajok tulajdonságai összehasonlítva a fentieket úgy látszik, hogy a Streptomyces capoamus áll 4 legközelebb a jelen leírásban ismertetett törzshöz (Journal of Systematic Bacteriology, 22. kötet, 282. oldal, 1972).
Az ME505—HE1 sorszámú törzset összehasonlítot• tűk egy sztenderd Streptomyces capoamus törzzsel, az összehasonlítás eredményeit a táblázatban adjuk meg.
Vizsgált tulajdonság ME5O5—HEl Streptomyces capoamus ISP 5494
Légmicélium rektiflexibilis terminális spirálok (retinaculia perti)
Spórák felülete sima sima
A légmicélium színe barnásfehérrózsaszínes fehér-halvány rózsaszín barnás fehérrózsaszínvilágosszürke
A telepek színe mély bíborvörös-sötét bíborvörös mély vöröses narancsszínű-vörösésbarnasötét bíborvörös
Oldódó színanyag barnás vagy vörösesbarna barnás vagy világos vörösesnarancs színű
Melanoid típusú színanyag szintézise
ISP 1 táptalaj — (+)
ISP 6 táptalaj + +
ISP 7 táptalaj + +
A keményítő
hidrolízise + +
A tej koagulálása +
A tej peptonizációja + +
A zselatin elfolyósítása
Zselatin-táptalajon 4~ +
Glükóz-pepton-
zselatin-táptalaj +
Nitrát-redukció — —
Szénhidrát-haszno- sítás
D-glükóz + +
Vizsgáit tulajdonság ME505 —HEl Streptomyces capoamus ISP 5494
L-arabinóz + +
D-xilóz + +
D-fruktóz 4- +
Szacharóz — —
Inozit —
L-rhamnóz _L —
Raffinóz +
D-mannit 4-
(+): valószínű hasznosítás;
+ : gyengén pozitív; ± : közel negatív.
Ahogy a táblázatból kiderül, az ME5O5—HE1 sorszámú törzse és a Streptomyces capoamus közötti különbség elsősorban a légmicélium alakjában jelentkezik. Nevezetesen a Streptomyces capoamus légmicéliumában terminális spirálokat látunk, míg az ME505—HE1 légmicéliuma gyengén fejlett, és vizsgálataink szerint spirálokat nem alkot. Az ISP 1 táptalajon a melanoid típusú színanyag képzésében, a tej koagulációjában, a zselatin elfolyósításában és az inozit és az L-rhamnóz hasznosításában a két törzs különbözik egymástól, más vizsgált tulajdonságaikban azonban közel azonosak.
Az ME5O5—HE1 törzs egy tenyészetét 1976. augusztus 7-én letétbe helyeztük a Fermentation Research Institute-ban, ahol az a FERM 3667 sorszámot kapta.
A találmány szerinti összes vegyületet úgy állítjuk elő, hogy a fenti Streptomyces-törzset az actinomycetes ismert tápanyagforrásait, mint szén-, nitrogén- és szervetlen sóforrásokat tartalmazó, szokványos vizes tápközegben tenyésztjük. Más antibiotikumokhoz hasonlóan nagyobb mennyiségű MA144 komponensek előállításához előnyösen süllyesztett aerob tenyészeteket használunk. Egyéb actinomycetes tenyésztésére használt általános módszerek alkalmazhatók a találmány szerinti anyagok tenyésztéséhez. A táptalaj előnyösen kereskedelmileg beszerezhető szénforrásokat, mint glükózt, glicerint, keményítőt, dextrint, szacharózt, maltózt, olajokat, zsírokat és hasonlókat tartalmaz, akár tisztított, akár nyers állapotban és kereskedelmileg kapható nitrogénforrásokat, mint szójababport, élesztőkivonatot, peptont, gyapotmagot, szárított élesztőt, kukoricalekvárt vagy szervetlen sókat, mint ammónium-szulfátot, nátrium-nitrátot vagy ammónium-kloridot. Előnyösen szervetlen sókat, mint nátrium-kloridot, kálium-kloridot vagy foszfátokat használunk, és szükség esetén nyomnyi mennyiségű fémionokat és habtalanítókat, mint Adekanolt (Azahi Donka Ind. Co.), vagy szilikont (Shinetsu Chem. Ind. Co.) is hozzáadhatunk. A fermentációs hőmérséklet 20—37 C°, előnyösen 25—30 C°. A közeg pH-ját 6—9 között tartjuk. A táptalajban az MA 144 komponensek termelődése 2—7 nap múlva éri el a maximumot, rázatott lombikban, vagy levegőztetés és keverés közben végzett süllyesztett aerob fermentálásnál, az alábbiakban közölt példáknak megfelelően.
MA144 komponensek elválasztása és izolálása
A találmány szerinti vegyületek a tenyészléből vagy a reakciókeverékből nyerhetők ki és egymástól a következő eljárásokkal választhatók el:
A fermentációval előállított MA144 komponensek
-5181999 úgy intracellulárisan, mint extracellulürisan helyezkednek el, de főleg a miccliumban találhatók. Az MA 144 komponenseknek a tenyészléből való kinyerése céljából a tenyészlevet leszűrhetjük, majd a szűrletet vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel, mint kloroformmal, etil-acetáttal, toluollal, benzollal, butil-acetáttal, n-butanollal, metil-propil-ketonnal, metilén-kloriddal és hasonlókkal extraháljuk semlegestől gyengén savas körülmények között. A micéliumban lévő MA144 komponenseket szerves oldószerrel, mint kloroformmal, acetonnal, n-butanollal, metanollal, etanollal, etil-acetáttal vagy valamely szerves vagy szervetlen sav, mint sósav vagy ecetsav vizes oldatával extrahálva nyerjük ki. Úgy is eljárhatunk, hogy az MA144 komponenseket közvetlenül vonjuk ki a fent említett extrakciós eljárásokkal, a micélium előzetes elválasztása nélkül. Vákuumban való bepárlása után az MA 144 kivonatokat újraextraháljuk vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel 6—9 pH között, és csökkentett nyomáson bepárolva az MA-koncentrátumokat 4-nél alacsonyabb pH-jú savas vizes oldattal elkeverjük, majd a szerves vizes oldatban levő MA 144 komponenseket — gyengén lúgos pH beállítása után — szerves oldószerrel újraextraháljuk. Szükség esetén a fenti műveleteket megismételve az MA144 komponensek tisztított formában állíthatók elő. Oldószeres extrakciós kinyerés helyett, vagy azzal kombinálva az MA 144 a tenyészléből oszlopkromatográfiával is kinyerhető, adszorbensként aktív szenet, alumínium-oxidot, szilikagélt, vagy módosított dextránt, mint Sepha5 dex LH—20-at (Pharmacia Fine Chem. Co., New York) használva, továbbá ellenáramú szétválasztással vagy folyadékkromatográfiával, alkalmas szerves oldószereket használva. Az így kapott aktív kivonatokat csökkentett nyomáson bepároljuk és az MA 144 komponenseket pi10 ros vagy sárga por alakjában állítjuk elő.
Az egyes MA144-komponensek, az MA144—Gl, —G2, —L, —NI, —SÍ, — S2, —ül, —U2 és —Y kinyerése céljából további tisztítás és elválasztás végezhető standard elválasztó eljárások, mint oszlopkroma15 tográfia segítségével, különböző adszorbenseket, mint szilikagélt, módosított dextránokat, gyengén savas ioncserélő gyantákat vagy aktív szenet használva, ellenáramú elválasztással, folyadék-kromatográfiával megfelelő szerves oldószereket alkalmazva, vagy különböző 20 fémionokkal való kelátképzéssel, vagy egy vagy több fenti eljárás kombinációjával.
A MA144 komponensek fizikokémiai tulajdonságai
A MA144—Gl, —G2, —L, —NL, —Sí, —S2, —Ul, 25 —U2, és —Y fizikokémiai tulajdonságai a következők:
MA144 Gl G2
Külső megjelenés Gyengén bázikus amorf sárga por Gyengén bázikus amorf piros por
Elemi analízis Talált Számított C Η Ν O 61,45 6,31 1,44 28,93 62,14 6,58 1,73 29,56 C Η Ν O 61,15 6,21 1,75 30,58 60,93 6,45 1,69 30,92
Tapasztalati képlet C42H5JO,sN C42H53OkN
Molekulasúly 811,9 827,9
Olvadáspont (C) 141—145 152—156
Fajlagos forgatóképesség [a]“ 4 54° (c=O,33, CHCI3)
Oldhatóság Oldódik savas vízben, metanolban, etanolban, n-butanolban, acetonban, etil-acetátban, kloroformban, benzolban, toluolban, dimetil-szulfoxidban, metil-celloszolvban, dimetil-formamidban. Gyengén oldódik vízben, n-hexánban, ciklohexánban, dietil-éterben és petróleumban. A hidroklorid-só vízben, metanolban, etanolban, oldódik, de gyengén oldódik kloroformban, acetonban és etil-acetátban.
Rf-értékek* ** *C: M-20: 1 0,38 0,38
Reakció A savas vizes és a metanolos oldat sárga, és lúgos körülmények között biborpirosba, tömény kénsavoldatban barnáspirosba megy át A savas vizes oldat piros, és lúgos körülmények között kékes bíborba, tömény kénsavas oldatban bíborszínbe megy át
UV és látható fényű abszorpciós spektrumok és max. 1 (E) 1 cm MeOH-ban (folytonos vonal) 1. ábra 230 (537), 259 (330), 290 (140), 432 (165) 2. ábra 235 (580), 259 (295), 292 (101), 492 (175)
0,ln HCI-MeOH-ban (szaggatott vonal) 229,5 (610), 259 (273), 289 (159), 430 (169) 235 (627), 259 (300), 292 (104), 492 (178)
0,ln NaOH-MeOH-ban (—.—.— vonal) 239 (521), 285 (151), 317 (96), 522 (144) 242 (575), 565 (230), 605 (198)
Infravörös abszorpciós színkép (KBr) 10. ábra 11. ábra
NMR spektrum (PMR) 19. ábra 20. ábra
* C=kloroform, M=metanol ** Rétegkromatográfia körülményei: szilikagél 60F254 (Merek) (27 ’C-on)
-6181999
ΜΛ144 I Ní
Külső megjelenés Talált Számított C Η N O 61,39 6,31 1,54 30,13 61,72 6,44 1,76 30,08 C Η N O 61,43 6,71 1,71 29,22 61,97 6,82 1,72 29,48
Tapasztalati képlet c41h51o15n C42H55O15N
Molekulasúly 797,9 813,9
Olvadáspont (°C) 134—í 36 146—147
Fajlagos forgatóképesség +57,5° (c=0,4, CHC13)
Oldhatóság MA144—Gl-gyel azonos MA 144—Gl-gyel azonos
Rf-értékek** *C : M =20 : 1 0,31 0,21
Reakció MA144—Gl-gyel azonos MA 144—Gl-gyel azonos
UV és látható abszorpciós spektrum és max. (E ^m) MeOH-ban folytonos vonal) 3. ábra 230 (480), 259 (298), 290 (118), 433 (151), 4. ábra 229,5 (482), 259 (298), 290 (121), 433 (144)
0,1 n HCI MeOH-ban (szaggatott vonal) 230 (530), 259 (324), 290 (128), 433 (156), 229,5 (488), 259 (304), 290 (123), 433 (151)
0,1 n NaOH—MeOH-ban (—.—.— vonal) 238 (412), 287 (100), 318s (68), 525 (140), 239 (450), 287 (121), 318s (76), 525 (133),
Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) 12. ábra 13. ábra
NMR spektrum (PMR) 21. ábra 22. ábra
MA 144 SÍ S2
Külső megjelenés gyengén bázikus amorf sárga por Gyengén bázikus amorf piros por
Elemi analízis talált számított C Η N O 61,37 6,45 1,97 29,36 61,79 6,84 2,00 29,72 C Η N O 60,09 6,13 1,88 30,94 60,41 6,34 1,96 31,13
Tapasztalati képlet C36H45Ol4N
Molekulasúly 699,8 715,8
Olvadáspont (°C) 144—147 154—158
Fajlagos forgatóképesség αθ +77° (c=l,0, CHCl3) —
Oldhatóság MA 144—Gl-gyel azonos MA144—Gl-gyel azonos
Rf-értékek** *C : M=20 : 1 0,14 0,14
Reakció MAI44—Gl-gyel azonos MA 144—G2-vel azonos
UV és látható abszorpciós spektrum és maximum (E]”^) MeOH-ban (folytonos vonal) 5. ábra 230 (638), 258,5 (371), 289,5 (160), 432 (177) 6. ábra 234,5 (607), 258,5 (306), 293 (110), 491 (189)
0,ln HCI—MeOH-ban (szaggatott vonal) 229.5 (652), 258,5 (380), 289.5 (163), 431 (192) 234,5 (629), 258,5 (318), 293 (114), 491 (197)
0,ln NaOH—MeOH-ban (—.—.— vonal) 237,5 (553), 286 (141), 320 (90), 524 (161) 242 (606), 566 (244), 606 (210)
Infravörös abszorpciós színkép (KBr) 14. ábra 15. ábra
NMR spektrum (PMR) 23. ábra 24. ábra
-7181999
MA 144 Ul U2
Külső megjelenés Gyengén bázikus amorf sárga por Gyengén bázikus amorf piros por
Elemi analízis talált számított C Η N O 60,42 6,77 1,74 31,07 60,79 6,68 1,69 30,85 C Η N O 59,26 6,60 1,58 31,87 59,64 6,55 1,65 32,15
Tapasztalati képlet Q2H55OiuN C42H55O17N
Molekulasúly 829,9 845,9
Olvadáspont (°C) 152—155 160—164
Fajlagos forgatóképesség +3Γ (c=l,0, CHC13) —
Oldhatóság MA 144 Gl-gyel azonos MA 144—Gl-gycl azonos
Rf-értkek + + +C: M=20: 1 0,07 0,07
Reakció MA144—Gl-gyel azonos MA144—G2-vel azonos
UV és látható abszorpciós spektrum és maximum MeOH-ban (folytonos vonal) 7. ábra 230 (531), 259 (325), 290 (135), 432 (164) 8. ábra 235 (452), 259 (247), 292 (104), 492 (150)
0,ln HC1—MeOH-ban (szaggatott vonal) 229,5 (602), 259 (365), 289 (150), 430 (168) 235 (465), 259 (250), 292 (103), 492 (152)
0,In NaOH- MeOH-ban (—.—.— vonal) 239 (520), 285 (143), 317 (94), 522 (144) 242 (448), 566 (200), 606 (164)
Infravörös abszorpciós színkép (KBr) 16. ábra 17. ábra
NMR spektrum (PMR) 25. ábra 26. ábra
MAI44 Y
Külső megjelenés Gyengén bázikus amorf sárga por
Elemi analízis számított talált C Η N O 62,29 6,35 1,73 29,63 61,98 6,30 1,70 30,02
Tapasztalati képlet C42H51O15N
Molekulasúly 810
Olvadáspont (°C) 153—155
Fajlagos forgatóképesség, „20 aD +66° (c=l,0, CHCl3)
Oldhatóság MA 144—Gl-gycl azonos
Rf-érték** + C: M-20: 1 0,47
Reakció MA144—Gl-gyel azonos
Szerkezetmeghatározás
Az MA144—Gl, —G2, —L, —NI, —SÍ, — S2, —Ul, —U2 és —Y szerkezetét a következőképpen határoztuk meg: 60
0,ln sósavval 30 percig 85 C°-on végzett hidrolízis után az MA144—Gl, —L, —NI, —SÍ, —Ul és —Y vegyületekből kapott aglükonrész fizikokémiai tulajdonságai — az ultraibolya, látható és infravörös tartomány abszorpciós spektruma, a tömegspektrum és mág- 65
MA144 Y
UV és látható abszorpciós spektrum és maximum (Ej%m) MeOH-ban (folytonos vonal) 9. ábra 229,5 (580), 259 (320), 290 (126), 432 (158)
0,In HC1-MeOH-ban (szaggatott vonal) 229,5 (590), 259 (334), 290,5 (130), 433 (160)
0,ln NaOH—MeOH-ban (— — — vonal) 239 (497), 287 (133), 320s (82), 524 (138)
Infravörös abszorpciós spektrum (KBr) 18. ábra
NMR spektrum (PMR) 27. ábra
neses magrezonancia, olvadáspont, elemi analízis és szilikagél-rétegkromatográfiás Rf-értékek — teljesen megegyeztek az aklavinonéval (Tetrahedron Letters 8, 28—34, 1960), és az MA144—G2-ből, —S2-ből és —U2-ből kapott aglükonrész fenti tulajdonságai teljesen azonosak voltak az ε-pyrromycinonéval (Chem. Bér. 92, 1880—1903, 1959). A fenti hidrolizátum vízoldható frakciójában jelenlévő cukorrészeket szilikagél-rétegkromatográfiával (Merek Co. 60F254 szilikagéllemez, n-butanol: ecetsav : víz=4 :1 : 1) határoztuk meg semlegesítés és bepárlás után, Rf-értékeiket aclacinomycin A-ból (J. Antibiotics 28, 830—834, 1975) és streptolydizinből (J. Amer. Chem. Soc. 86, 3592—3594, 1972) kapott autentikus cukrok Rf-értékeivel összehasonlítva. Az MA 144 komponensekből kapott cukorrészek Rf-8181999 értékeit a következő táblázat mutatja: az MA144—Glben, —G2-ben, —L-ben, —Y-ban és —Nl-ben három és az MA 144—Sl-ben, —S2-ben, —U l-ben és —U2ben két cukorféleség található.
MA144 komponensek cukorrészének Rf-értékei
Vegyület Rf-értékek
0,16 0,20 0,60 0,72 0,83 0,78
ma 144—Gl + + +
MA 144—G2 4- — | · — 4- —
MA 144—L — _L 4- + —
MA 144—NI “Γ — + 4- — —
MA 144—SÍ + — + — — —
MA 144—S2 + — 4- — — —
MA 144—U1 + — 4- — — —
MA144— U2 + — 4- — — —
MA 144—Y 4- - 4- - - 1
Az autentikus cukorminták Rf-értékével, különböző színreakcióval és optikai forgatóképességével való összehasonlítás alapján a 0,16 Rf-értékű cukorrészt L-rodozaminként, a 0,60 Rf-értékűt 2-dezoxi-L-fukózként, a 0,72 Rf-értékűt L-rodinózként és a 0,83 Rf-értékűt Lcinerulózként azonosítottuk, de a 0,20 és 0,78 Rf-értékű cukrokat nem tudtuk azonosítani.
Az MA144 komponensek 0,01n sósavat tartalmazó metanolban, szobahőmérsékleten történő részleges metanolízisénél az MA144—Gl, —NI, —SÍ, —U1 és —Y 1-dezoxi-pyrromycint kaptunk (L-rodozaminil-aklavinon, J. Antibiotics 28, 830—834, 1975), melyeket fizikokémiai tulajdonságai, mint szilikagélrétegkromatográfiás Rf-értékek, olvadáspont, infravörös, ultraibolya és látható fényű abszorpciós színképek és magmágneses rezonancia alapján azonosítottuk ; a megfelelő metilált szacharidok, az MA 144—G2, —S2 és —U2 pyrromycint adtak (Chem. Bér. 92, 1880—1903, 1959) és a megfelelő metilált szacharidok és az MA144—L egy ismeretlen antraciklin-glükozidot és megfelelő metilál diszacharidot adott.
Az MA144—Gl, azaz D-cineruIozil-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil-aklavinon és az MA144—G2, azaz D-cinerulozil-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil-e-pyrromycinon általános képletét a vegyületek és a megfelelő metilált diszacharidjaik NMR, l3C-NMR és ÍR apektrumai alapján határoztuk meg.
Az MA144—L aklavinonból és három cukorrészből áll: egy ismeretlen, 0,20 Rf-értékű amino-cukorból, 2-dezoxi-L-fukózból és L-cinerulózból. Az aklavinonglükozid és az MA 144—L-ből metanolízissel kapott metilált diszacharid NMR és l3C-NMR spektrumának elemzése azt mutatta, hogy azok N-monodemetil-L-rodozaminil-aklavinonnak, illetve metil-cinerulozil-2-dezoxi-L-fukozidnak felelnek meg. így az MA144—L kémiai szerkezetét a mellékelt képletnek megfelelően határoztuk meg.
Az MA 144—SÍ és —S2 kétféle cukorrészt tartalmaz, L-rodozamint és 2-dezoxi-L-fukózt. Metanolízissel metil-2-dezoxi-L-fukozid és 1-dezoxi-pyrromycin vagy pyrromycin képződik, és így MA144—Sl-re és —S2-re 2
-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil-aklavinon vagy -ε-pyrromycinon szerkezetet állapítottuk meg.
Az MA 144—NI aklavinonból és háromféle cukorrészből: L-rodozaminból, 2-dezoxi-L-fukózból és Lrodinózból áll. A cukor-sorrend megállapítása céljából enyhe hidrolízist végeztünk 0,5%-os sósavval 10 percig szobahőmérsékleten, Biedermann és munkatársai (Pharmazie 27, 782—789, 1972) módszerével; L-rodinóz szabadult fel és egyidejűleg MA144—SÍ képződött. így az MA144—NI kémiai szerkezetét a mellékelt képlet szerint állapítottuk meg.
Az MA144—U1 és —U2 kétféle cukorrészt tartalmaz: L-rodozamint és 2-dezoxi-L-fukózt. Metanolíziskor metil-2-dezoxi-L-fukozil-2-dezoxi-L-fukozid — melyet NMR és l3C-NMR spektrum alapján határoztunk meg — és 1-dezoxi-pyrromycin képződik, és így a mellékelt kémiai szerkezetre következtettünk.
Az MA144—Y aklavinonból és háromféle cukorrészből: L-rodozaminból, 2-dezoxi-L-fukózból és egy ismeretlen cukorból áll. Ezenfelül MA144—Y-ból metanolízissel 1-dezoxi-pyrromycint és egy ismeretlen metilált diszacharidot kaptunk. A fenti metilált diszacharidot éterrel extraháltuk és szilikagél és Sephadex LH—20 oszlopkromatográfiával tisztítottuk, majd benzolból kristályosítottuk fehér tűkristályok alakjában. E metilált diszacharid fizikokémiai jellemzői a következők : Elemi analízis C13H20O6-ra: számított: C: 57,34% ; H : 7,40% ; talált: C: 57,77%; H:7,31%.
Molekulasúly: 272.
Olvadáspont: 109—110 °C.
Fajlagos forgatóképesség: [α]θ= — 65° (c=l,0, CHC13).
UV és látható fényű abszorpciós színkép metanolban :
28. ábra, λ*£°Η nm (ε)=209 (6726)
TR abszorpciós spektrum KBr-ban : 29. ábra.
NMR spektrum CDCl3-ban: 30. ábra (100 MHz). A 28. és 29. ábrán látható, hogy az MA144—Y metil-diszacharidjának 1680 cm-1-nél van abszorpciós sávja és nm (ε)=209 (6726), ami a szerkezetben a, β-telítetlen ketocsoport jelenlétére utal.
A 30. ábra PMR spektrumában a 3H dublett δ 1,26nál (J=6,8 Hz), 2H δ 1,9-nél, IH dublett δ 3,74-nél (J=l és 3 Hz), IH kvartett δ 3,94-nél (J=6,8 Hz), IH δ 4,07-nélés IH δ 4,8-nál 2-dezoxi-L-fukózból származó 9 protonnak tulajdonítható, és az éteres oxigénatommal átfedett 3H dublett δ 1,4-nél (J=6,8 Hz) és IH szimmetrikus kvartett δ 4,73-nál (J=6,8 Hz) egymáshoz kapcsolódik és a C-6' metil-protonoknak, illetve C-5' protonnak tulajdonítható. Spinlecsatolási vizsgálatokkal egy dublett δ 6,86-nál (J=3,5 és 10,0 Hz) és két dublett δ 6,11-nél (J=10,0 Hz) és δ 5,26-nál (J=3,5 Hz) az ABM rendszer vinil-protonjainak tulajdonítható, melyek a C-2', C-3', illetve C-l' protonoknak felelnek meg. így a metil-diszacharidban a 2-dezoxi-L-fukóz mellett talált cukorrészt 2,3,6-tridezoxi-hex-2-enopiranoz-4-ulózként azonosítottuk, amely a C-4 helyzetben kapcsolódik a 2-dezoxi-L-fukózhoz.
A fentiekben elemzett eredmények alapján a metilált diszacharidot 1 képletü új cukorként határoztuk meg és akulózként jelöltük meg.
-9181999 így az MA144—Y kémiai szerkezetét a mellékelt képlet szerint állapítottuk meg.
Bár az irodalomból számos, aklavinon és ε-pyrromycinon aglükonrészt tartalmazó atraciklin-glükozid antibiotikum ismeretes, az MA144—Gl, —G2, —L, —N1, —SÍ, —S2, —Ul, —U2 és —Y vegyületek határozottan különböznek a fentiek bármelyikétől molekulaképletük, savi hidrolízissel kapott bomlástermékeik, ultraibolya, optikai, infravörös és mágneses magrezonancia spektrumuk és egyéb jellemzőik alapján, a fentebb leírtaknak megfelelően. Az ismert antraciklin-glükozidok közül az aklavin és a pyrromycin aklavinonból vagy s-pyrromycinonból és egy cukorból, L-rodozaminból áll, eltérően a találmány szerinti vegyületektől. Aklacinomi- 15 cin A és cinerubin A három cukorrészt tartalmaz; az Lcinerulozií-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil, MA 144— Ml és —M2 (Showa 51—39688 számú japán szabadalmi leírás) szintén három cukorrészből állnak; az L-amicetozil-2-dezoxi-L-fukozil-L-rodozaminil és rhodirubin B 20 (Showa 51—98113 számú japán szabadalmi leírás) Lrodinozil-L-rodinozil-L-rodozaminilt tartalmaz, és ez a három ismert antibiotikum cukorrészük alapján különbözik a találmány szerinti vegyületektől. A rhorirubin A cukorrésze L-rodinozil-2-dezoxi-L-fukoziI-L-rodozami5 nilből áll, amely azonos a találmány szerinti MA 144—
NI Cukorrészével, de az MA144—NI aglükonja aklavinon, eltérően a rhodirubin A e-pyrromycinon-aglükonjától.
Igazoltuk tehát, hogy a találmány szerinti MA144— —Gl, —G2, —L, —NI, —SÍ, — S2, —Ul, —U2 és —Y új anyagok.
Az MA144 komponensek mikrobaellenes hatása
Az MA144—G1, —G2, —L, —SÍ, — S2, —NI, —Ul, —U2 és —Y mikrobaellenes hatást mutat különböző mikroorganizmusokkal szemben. Ezen antibiotikumok legkisebb gátló koncentrációja (MIC) tápközeg-hígítási módszerrel meghatározva a következő táblázatban látható:
MA144 komponensek mikrobaellenes spektruma
Vizsgált MIC (meg per ml) MAI44—
mikroorganizmus Gl G2 L NI SÍ S2 Ul U2 Y
Staph. aureus FDA 209P 6,25 3,12 6,25 6,25 6,25 6,25 6,25 3,1 0,4
Staph. aureus, Smith 1,56 1,56 1,56 0,78 3,1 0,78 3,1 0,78 0,2
Bac. subtilis ATCC 6633 3,12 1,56 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 3,1 0,2
Bac. ccreus ATCC 9634 1,56 0,78 1,56 0,78 1,56 0,78 1,56 1,56 0,1
Bac. megaterium NRRL B—938 6,25 6,25 6,25 3,1 3,1 3,1 L3 1,56 0,2
Sár. lutea ATCC 9341 0,78 0,78 0,78 0,78 1,56 1,56 1,56 1,56 0,2
Mic. flavus 0,2 0,2 0,2 0,4 1,56 0,78 1,56 0,78 0,1
Cory. bovis 1810 1,56 0,78 1,56 0,78 0,78 0,78 6,25 6,25 0,2
Ps. fluorescens NIHJB—254 100 100 100 >100 >100 >100 >100 >100 >100
Pr. morganii >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100 >100
Mycobact. smegmatis ATCC 607 3,12 3,12 3,1 >100 >100 >100 >100 >100 3,1
Can. albicans IÁM 4905 100 >100 100 >100 >100 >100 >100 >100 >100
Can. tropicalis IÁM 4942 100 >100 100 >100 >100 >100 >100 >100 >100
Mint látható, a találmány szerinti MA144 komponensek mikrobaellenes hatással rendelkeznek különösen 55 Gram-pozitív baktériumokkal szemben és így gyógyászatilag alkalmazhatók emlősök kezelésére, diftéria, tuberkulózis, tüdőgyulladás, tetanusz és más, Grampozitív baktériumok okozta fertőzőbetegségeknél.
MA 144 komponensek daganatgátló hatása és heveny mérgezőképessége
A találmány szerinti MA144 komponensek csak kis fokú mérgezőképességgel társuló, kifejezett daganat- 65 gátló hatást mutatnak állatkísérletekben és így emlősdaganatok növekedésének gátlására használhatók. A találmány szerinti vegyületek főleg az L1210 egér-leukémiát gátolják hatásosan. Például 19—22 g súlyú BDFt egereket egyenként 1 x 106 L1210 sejttel oltottunk be és a beoltás után 24 óra múlva a vegyületet naponta egy60 szer, 9 egymást követő napon intraperitoneálisan injiciáltuk. A 30. napon meghatároztuk a túlélési idő meghosszabbodásának százalékát a kontroll állatokkal való összehasonlítás alapján. Ezen adatokat és az egyetlen intraperitoneális dózis után kapott LD50 értékeket a következő táblázat mutatja:
-10181999
Terápiás hatékonyság L1210 egér-leukémia ellen cs a MA144 komponensek mérgezőképessége
Túlélési idú meghosszabbítása (T)/C0 ;,) MA144
G1 | C,2 L M Sl S2 Ul U2 Y
L1210-el lenes hatás Dózis (mg/kg/nap) 20 65
10 — — 135 108 98 — 90 — 143
5 187 90 128 20C 140 85 127 86 127
2,5 215 130 114 184 168 110 165 86 115
1,25 145 164 95 137 133 145 157 112 —
0,6 130 140 — 123 114 130 129 135 —
0,3 118 108 . — 110 96 118 114 129 —
0,15 101 97 — — 97 — 110 —
Mérgezőképcsség (egér) Intraperitoneális alkalmazás (mg/kg) 28,5 17,0 45,5 LD,rt 32,5 24,4 12,5 30,2 14,5 40—50
MLA144 komponensek tenyésztett L1210 sejtekre gyakorolt sejtmérgező hatása
A találmány szerinti MA144 komponensek gátolják emlős tumorsejtek szaporodását tenyészetben, különösen kis koncentrációban, és teljesen meggátolják az RNS-szintézist. E kísérletben L1210 sejtekkel 20% borjúszérumot tartalmazó RPMI 1640 táptalajt (Nissui, Rosewell Park Memória! Institute 1640) oltunk be és 37 C°-on 3 napig tenyésztjük CO2-inkubátorban, majd a találmány szerinti vegyületeket 0,1 [J-g/ml koncentrációban az 1. napon hozzáadjuk. A )4C-beépülési kísérletben a találmány szerinti vegyületeket 0,5 [J-g/ml koncentrációban használjuk az RNS-szintézis és 1,0 μg/ml koncentrációban a DNS-szintézis vizsgálatához, és ,4C-timidint vagy -uridint is adunk a közeghez 60 percig 37 C°-on. A növekedésre és a DNS- és RNS-szintézisre gyakorolt hatást a gátlási százalék jelzi a kontrollal való összehasonlítás alapján, a következő táblázat szerint. Az eredmények értelmében az MA144 komponensek kis koncentrációban hatásosan gátolják a tenyésztett L1210 sejtek szaporodását és RNS-szintézisét. Ezen eredmények alátámasztják a vegyületek állati kísérletes tumorokra kifejtett terápiás hatékonyságát.
MA144 komponensek hatása tenyésztett L1210 sejtek szaporodására és makromolekula-szintézisére
Vegyületek Gátlás%
Szaporodás (a 2. napon) RNS-szintézis DNS-szintézis
Aclacino- mycin 89,7 81,6 69,6
MA144—G1 87,7 65,6 40,9
MA 144—G 2 82,1 57,8 39,4
MA 144—L 27,4 39,7 11,3
MA 144—NI 79,2 74,4 57,4
MA 144—Sl 86,0 74,1 76,5
MA 144—S2 88,1 65,6 48,8
MA 144—Ul 78,5 67,2 27,7
MA 144—U2 80,5 71,5 30,5
MA144—Y 90,2 93,9 99,6
Az MA144 komponensek gyógyászati alkalmazása
Mint említettük, a találmány szerinti MA144—G1, 25 — G2, —L, —NI, —SÍ, —S2, —Ul, —U2 és —Y vegyületeket új antibiotikumok, melyek az ember- és állatgyógyászatban egyaránt használhatók és emlősök rosszindulatú daganataival és Gram-pozitív baktériumokkal szemben jelentős gátló hatást fejtenek ki.
A találmány körébe tartoznak azok a készítmények is, amelyek a fentiek közül legalább egy antibiotikumot tartalmaznak, megfelelő gyógyszerészetileg elfogadható hordozóval együtt. A készítmények bármilyen gyógyszer-formában alkalmazhatók. Közéjük tartoznak az 35 orális adagolásra szolgáló szilárd készítmények, mint tabletták, kapszulák, pilulák, porok és szemcsék, orálisan alkalmazandó folyékony készítmények, mint oldatok, szuszpenziók, szirupok és elixírek, és parenterális adagolásra alkalmas készítmények, mint steril oldatok, 40 szuszpenziók és emulziók.
A találmány szerinti vegyületek adott esetben előnyben részesített mennyiségei érthető módon függnek a használt választott vegyülettől, az illető készítmény összetételétől, az alkalmazás módjától és a kezelendő 45 beteg és a betegség állapotától. Általában az MA144 komponenseket intraperitoneálisan, intravénásán, szubkután vagy lokálisan alkalmazzuk, vagy orálisan adagoljuk állatnak és intravénásán, intraperitoneálisan, lokálisan vagy orálisan embernek. A szakembernek a szer50 hatást módosító számos tényezőt kell figyelembe vennie, így például a kort, testsúlyt, nemet, diétát, az alkalmazás idejét, az alkalmazás módját, a kiválasztás sebességét, a beteg állapotát, szerkombinációkat, reagálási érzékenységet és a betegség súlyosságát. Az alkalmazás 55 folyamatosan vagy szakaszosan történhet a maximálisan elviselhető dózistartományon belül. Az adott körülmények közötti legkedvezőbb adagolást a szakember szokványos adagolás-meghatározási próbákkal állapítja meg, a fenti irányvonalak tekintetbevételével.
Antibiotikus szerként használva az MA144 komponenseket általában úgy alkalmazzuk, hogy a hatóanyag koncentrációja nagyobb a kezelendő organizmusra megállapított minimális gátló koncentrációnál.
A következő példák csak a találmány bemutatására 65 szolgálnak, anélkül, hogy oltalmi körét korlátoznák.
-11181999
1. példa
A következő összetételű táptalajt készítjük el: Glükóz 2%,
Burgonyakeményítő 2%, „Magbél” (Szójababpor, Ajinomoto Co.) 2%, Dikálium-hidrogén-foszfát 0,1%, Magnézium-szulfát-heptahidrát 0,1 %, nátrium-klorid 0,3% mangán-diki orid-tetrahidrát 0,0008%, réz-szulfát-heptahidrát 0,0007%, vas(II)-szu1fát-heptahidrát 0,0001 %, cink-szulfát-heptahidrát 0,0002%, pH 7,2.
E táptalaj 50 ml-ét 120 C°-on 15 percig sterilezzük 500 ml-es lombikban, majd beoltjuk Streptomyces galilaeus MA144—Ml (FERM P—2455, ATCC 31133) 1 ml fagyasztott tenyészetével és 30 C°-on 48 óráig rotációs rázógépen inkubáljuk. 20 literes rozsdamentes acél-fermentorban levő, előzetesen sterilezett 10 liter táptalajt csíramentesen beoltunk a fenti törzstenyészet 200 ml-ével. A fermentációt 20 C°-on 18 óráig folytatjuk keverés (300 fordulat per perc) és levegőztetés (5 liter per perc) közben. Ezután a tenyészet 10 literét átvisszük egy második rozsdamentes acéltartályban levő, előzetesen sterilezett 600 liter táptalajba és a tenyésztést 28 C°on 36 óráig folytatjuk keverés (180 fordulat per perc) és levegőztetés (300 liter per perc) közben.
A kapott 500 liter tenyészlé pH-ját kénsavval 5,0-re állítjuk be és a diatomafölddel leszűrjük. A kapott szűrőpogácsát (56 kg) 50 liter acetonban szuszpendáljuk és 1 órai keverés után leszűrjük. Az üledéket újraextraháljuk 50 liter acetonnal. Mindkét kivonatot csökkentett nyomáson 25 literre bepároljuk, 20 liter etil-acetáthoz adjuk és keverjük. Az etil-acetátos réteget elválasztva csökkentett nyomáson 1 literre bepároljuk, a nyers MA144 keveréket 15 liter n-hexán hozzáadásával kicsapjuk, majd kétszer n-hexánnal kimosva 36 g piros port kapunk. Másrészt a fent kapott tenyészlé-szűrlet pH-ját nátrium-hidroxiddal 6,8-ra állítjuk be és 100 liter toluollal extraháljuk. A kivonatot csökkentett nyomáson 10 liter térfogatra bepároljuk és újraextraháljuk 10 liter pH 3,5-ös acetátpufferrel. A kapott vizes réteg pH-ját
6,8-ra állítjuk be, 4 liter toluollal újraextraháljuk és csökkentett nyomáson 30 ml-re bepároljuk. A nyers MA 144 keveréket a koncentrációból 300 ml n-hexán hozzáadásával kicsapjuk és így 2,5 g piros port kapunk.
2. példa
Az 1. példában leírtak szerinti szűrőpogácsából kapott MA144 keverék nyers porát (10 g) feloldjuk 100 ml toluolban és 300 g szilikagéllel megtöltött oszlopra viszszük fel (5x40 cm), majd az első, 1,5% metanolt tartalmazó toluolos eluátumot elöntve az MA144—Gl, —G2 és —L frakciókat egymás után eluáljuk 2% metanolt tartalmazó toluollal. Ezután az MA144—NI frakciót 3% metanolt tartalmazó toluollal és az MA144—-SÍ és —S2 frakciókat és az MA144—U1 és —U2 frakciókat egymást követően 5% metanolt tartalmazó toluollal eluáljuk. Az így kapott összes frakciót bepároljuk, majd n-hexánt hozzáadva 210 mg MA144—Gl és —G2 keveréket kapunk nyers narancsvörös por alakjában, továbbá 190 mg MA144—L-t, 570 mg MA144—NI és rhodirubinA keveréket, 360 mg MA144—SÍ és —S2 keveréket, 270 mg MA144—U1 és —U2 keveréket.
3. példa
Az 1. példában kapott táptalaj-szűrletből kinyert MA144 keverék 2,5 g nyers porát 6 ml toluolban oldjuk, 100 g szilikagélt tartalmazó oszlopra visszük fel, majd az MA144—Y frakciót 1,7% metanolt tartalmazó toluollal eluáljuk 5 C°-on. A kapott frakciót csökkentett nyomáson szárazra pároljuk és 400 mg nyers MA 144—Y-t kapunk narancs vörös por alakjában.
4. példa
A 2. példában kapott 210 mg MA144—Gl és —G2 keveréket kevés etil-acetátban oldjuk és 30 g „Column Lite”-et (szilikagél-márkanév, Fuji Chem. Co.) tartalmazó oszlopra visszük fel és etil-acetát/metanol 1: 1 eleggyel eluáljuk. A sárga frakciót csökkentett nyomáson szárazra párolva maradékot 50 ml kloroformban oldjuk, 10“3 mól EDTA-t (etilén-diamin-tetraecetsav) tartalmazó 50 ml 0,01 mólos foszfátpufferrel rázzuk a fémionmaradványok eltávolítása céljából, a kloroformos réteget kétszer vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáttal szárítjuk és csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. 110 mg MA144—Gl-et kapunk sárga por alakjában.
A fenti Column-lite oszlopot a sárga frakciók elúciója után 10-3 mól EDTA-t tartalmazó 30%-os alkohollal mossuk, és a keletkezett vörös eluátumot szárazra pároljuk, kis mennyiségű kloroformban oldjuk és a viszszamaradt fémionokat a fent megadott módszerrel eltávolítva 22 mg MA144—G2-t kapunk vörös porként. (EDTA=etiléndiamin-tetrae cetsav).
A 2. példában kapott nyers poralakú MA 144—L-t a fentiekben az MA144—Gl kezelésénél leírt módon dolgozzuk fel, és így 115 mg MA144—L-t kapunk sárga por formájában. Az MA144—Gl és —G2 finomításánál leírtak szerint eljárva 260 mg MA144—NI, 150 mg MA144—SÍ, 88 mg MA144—S2, 128 mg MA144—U1 és 54 mg MA144—U2 és 114 mg MA144—Y terméket nyerünk tiszta porként.
5. példa
Az 1., 2. és 4. példa általános módszerével a jelzett Streptomyces törzsekből a következő találmány szerinti vegyületeket állítjuk elő:
-12181999
Kapott MA144(mg)
Gl G 2 L NI SÍ S2 Ul U2 Y
S. galilaeus ATCC 14 969 42 68 55 126 63 145 115 63 43
S. sp. ME5O5—HE1 (FERM P—3667) ATCC 31 273 143 89 97 101 _
S. cinereoruber ATCC 19 740 25 37 38 76 88 79 27 83 16
S. niveoruber ATCC 14 971 — 56 — 43 54 38 — 64 12
S. antibioticus ATCC 8663 — 28 — — — 18 — 32 —
S. purpurascens ATCC 25 489 — 13 — — — 9 — 14 —
S.—Streptomyces

Claims (3)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás az (I) általános képletű
    MA144—Gl, ahol R, hidrogénatom, R2 metilcsoport és
    R3 (a) képletű csoport,
    MA144—G2, ahol R( hidroxilcsoport, R2 metilcsoport és R3 (a) képletű csoport,
    MA144—L, ahol R1 és R2 hidrogénatom és R3 (d) képletű csoport,
    MA144—NI, ahol R! hidrogénatom, R2 metilcsoport és R3 (b) képletű csoport,
    MA144—SÍ, ahol Rt hidrogénatom, R2 metilcsoport és R2 hidrogénatom,
    MA144—S2, ahol R] hidroxilcsoport, R2 metilcsoport és R3 hidrogénatom,
    MA144—Ul, ahol R( hidrogénatom, R2 metilcsoport és R3 (o) képletű csoport,
    MA 144—U2, ahol R, hidroxilcsoport, R2 metilcsoport és R3 (o) képletű csoport, és
    MA 144—Y, ahol R, hidrogénatom, R2 metilcsoport és R3 (e) képletű csoport, antraciklin-típusú antibiotikumok előállítására, azzal jellemezve, hogy
    Streptomyces sp. ME505—HE1 (Ferm P—3667), ATCC 31273, Streptomyces galilaeus MA144—ML (Ferm P—2455), ATCC 31133, Streptomyces galilaeus ATCC 14969, Streptomyces cinereoruber ATCC 19740, Streptomyces niveoruber ATCC 14971, Streptomyces antibioticus ATCC 8663 és Streptomyces purpurascens ATCC 25489 törzset vagy ezek MA144-típusú antibiotikumot termelő mutánsát asszimilálható szén- és nitrogénforrást, szervetlen sókat és kívánt esetben nyomelemeket tartalmazó táptalajon süllyesztett, aerob körülmények között tenyésztünk, majd a kapott antibiotikumot, illetve azok elegyét elkülönítjük a fermentléből, és kívánt esetben az egyes komponensekre választjuk szét (Elsőbbsége: 1977 szeptember 30.)
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az (I) általános képletű
    MA 144—Gl, ahol R, hidrogénatom, R2 metilcsoport és
    R3 (a) képletű csoport,
    MA 144—G2, ahol R, hidroxilcsoport, R2 metilcsoport és R3 (a) képletű csoport,
    MA144—L, ahol R] és R2 hidrogénatom és R3 (d) képletű csoport,
    MA144—NI, ahol R[ hidrogénatom, R2 metilcsoport és R3 (b) képletű csoport,
    20 MA 144—SÍ, ahol Rt hidrogénatom, R2 metilcsoport és R3 hidrogénatom,
    MA144—S2, ahol R( hidroxilcsoport, R2 metilcsoport és R3 hidrogénatom,
    MA144—Ul, ahol R( hidrogénatom, R2 metilcsoport és
    25 R3 (c) képletű csoport, és
    MA144—U2, ahol Rj hidroxilcsoport, R2 metilcsoport és R3 (c) képletű csoport, antraciklin-típusú antibiotikumok előállítására, azzal jellemezve, hogy
    30 Streptomyces sp. ME5O5—HE1 (Ferm P—3667), ATCC 31273, Streptomyces galilaeus MA144—Ml (Ferm P—2455), ATCC 31133, Streptomyces galilaeus ATCC 14969, Streptomyces cinereoruber ATCC 19740, Streptomyces niveoruber ATCC 14971, Streptomyces
    35 antibioticus ATCC 8663 és Streptomyces purpurascens ATCC 25489 törzset, vagy ezek MA144-típusú antibiotikumot termelő mutánsát asszimilálható szén- és nitrogénforrást, szervetlen sókat és kívánt esetben nyomelemeket tartalmazó táptalajon, süllyesztett, aerob
    40 körülmények között tenyésztünk, majd a kapott antibiotikumot, illetve azok elegyét elkülönítjük a fermentléből, és kívánt esetben az egyes komponensekre választjuk szét. (Elsőbbsége: 1976. X. 5.)
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási mód-
    45 ja az (I) általános képletű MA144—Y, ahol Rj hidrogénatom, R2 metilcsoport és R3 (e) képletű csoport, antraciklin-típusú antibiotikum előállítására, azzal jellemezve, hogy
    Streptomyces sp. ME5O5—HE1 (Ferm P—3667),
    50 ATCC 31273, Streptomyces galilaeus ATCC 14969, Streptomyces cinereoruber ATCC 19740, Streptomyces niveoruber ATCC 14971, Streptomyces antibioticus ATCC 8663 és Streptomyces purpurascens ATCC 25489 törzset, vagy ezek MA144-típusú antibiotikumot
    55 termelő mutánsát asszimilálható szén- és nitrogénforrást, szervetlen sókat, és kívánt esetben nyomelemeket tartalmazó táptalajon, süllyesztett, aerob körülmények között tenyésztünk, majd a kapott antibiotikumot elkülönítjük a fermentléből. (Elsőbbsége: 1977. V. 24.)
    A kiadásért felel: a Közgazdasági cs Jogi Könyvkiadó igazgatója
    86.5592.66-4 Alföldi Nyomda, Debrecen felelős vezető: Benkő István vezérigazgató
HU77ZA402A 1976-10-05 1977-09-30 Process for producing new citostatic antracycline antibiotics HU181999B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP12023776A JPS5344555A (en) 1976-10-05 1976-10-05 Anthracyclin.glycoside antibiotics
JP6090877A JPS5463067A (en) 1977-05-24 1977-05-24 Oncostatic drugs and their preparation

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU181999B true HU181999B (en) 1983-11-28

Family

ID=26401967

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU77ZA402A HU181999B (en) 1976-10-05 1977-09-30 Process for producing new citostatic antracycline antibiotics

Country Status (18)

Country Link
US (2) US4207313A (hu)
AU (1) AU505971B2 (hu)
CA (1) CA1100895A (hu)
CH (1) CH637160A5 (hu)
DE (1) DE2743654B2 (hu)
DK (1) DK145200C (hu)
ES (1) ES471823A1 (hu)
FI (1) FI57444C (hu)
FR (1) FR2403350A1 (hu)
GB (1) GB1589536A (hu)
GR (1) GR63996B (hu)
HU (1) HU181999B (hu)
IE (1) IE46236B1 (hu)
LU (1) LU78242A1 (hu)
NL (1) NL176004C (hu)
NO (2) NO148959C (hu)
SE (1) SE425798B (hu)
YU (1) YU40483B (hu)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4123608A (en) * 1977-07-18 1978-10-31 Bristol-Myers Company Antibiotic compound
JPS5543012A (en) * 1978-09-20 1980-03-26 Sanraku Inc Novel anthracycline derivatine and its preparation
JPS6023679B2 (ja) * 1979-07-13 1985-06-08 メルシャン株式会社 ロドマイシン群抗生物質とその製造法
EP0030255B1 (en) * 1979-09-07 1986-01-29 Sanraku Incorporated 2-hydroxyaclacinomycin a, pharmaceutical composition containing it; 2-hydroxyaclavinone and fermentative process for preparing same
JPS5648893A (en) * 1979-09-07 1981-05-02 Sanraku Inc Preparation of anthracycline glycoside
CH648327A5 (de) * 1980-10-16 1985-03-15 Hoffmann La Roche Anthracycline.
JPS5874694A (ja) * 1981-10-29 1983-05-06 Sanraku Inc アントラサイクリン誘導体
JPS5995891A (ja) * 1982-11-26 1984-06-02 Kitasato Inst:The 新規な制癌性抗生物質８０−２１７およびその製造法
JPS61236792A (ja) * 1985-04-12 1986-10-22 Sanraku Inc 新規アントラサイクリン抗生物質
DE3524117A1 (de) * 1985-07-05 1987-02-05 Hoechst Ag Neue anthracyclin-tetrasaccharide, ein verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als cytostatik
DE3641833A1 (de) * 1986-12-08 1988-06-09 Behringwerke Ag Zytostatisch wirksame anthracyclinderivate
US4977084A (en) * 1989-02-16 1990-12-11 Board Of Trustees Operating Michigan State University Production, isolation, and identification of novel antifungal compounds
US5013549A (en) * 1989-02-16 1991-05-07 Board Of Trustees Operating Michigan State University Production, isolation, and identification of novel antifungal compounds
US5066585A (en) * 1990-07-09 1991-11-19 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method of inhibiting fungus using novel antifungal compounds
KR970000591B1 (ko) * 1993-09-03 1997-01-14 동국제약 주식회사 신균주 스트렙토마이세스 라벤도폴리아 DKRS 및 이를 이용한 아클라시노마이신 A, B, Y 및 아글리콘(Aglycone)의 제조방법
US6589591B1 (en) * 2001-07-10 2003-07-08 Baylor College Of Medicine Method for treating medical devices using glycerol and an antimicrobial agent
US20040256561A1 (en) * 2003-06-17 2004-12-23 Allyson Beuhler Wide band light sensing pixel array
TW200510719A (en) * 2003-08-06 2005-03-16 Pharmacia Italia Spa Method for detecting contaminants in pharmaceutical products
US7238363B2 (en) * 2004-04-02 2007-07-03 Baylor College Of Medicine Modification of medical prostheses

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB846130A (en) 1956-03-23 1960-08-24 Ciba Ltd New antibiotic and derivatives and salts thereof, preparations containing the same and process for the manufacture of these substances
US3092550A (en) * 1957-10-29 1963-06-04 Ciba Geigy Corp Antibiotic danubomycin and process for its manufacture
CH362490A (de) 1957-10-29 1962-06-15 Ciba Geigy Verfahren zur Herstellung eines neuen Antibiotikums
FR1533151A (fr) 1962-05-18 1968-07-19 Rhone Poulenc Sa Nouvel antibiotique et sa préparation
FR1527892A (fr) 1967-03-15 1968-06-07 Rhone Poulenc Sa Nouveau procédé de préparation de l'antibiotique 13057 r.p.
YU33730B (en) * 1967-04-18 1978-02-28 Farmaceutici Italia Process for preparing a novel antibiotic substance and salts thereof
US3803124A (en) * 1968-04-12 1974-04-09 Farmaceutici It Soc Process for the preparation of adriamycin and adriamycinone and adriamycin derivatives
US3686163A (en) * 1968-05-14 1972-08-22 Farmaceutici Italia Dihydrodaunomycin antibiotic and derivatives thereof
FR1593235A (hu) 1968-11-18 1970-05-25
US3616624A (en) * 1969-11-04 1971-11-02 Becton Dickinson Co Laminar flow work bench
US3828021A (en) * 1972-06-14 1974-08-06 Merck & Co Inc Gentamicin c1 derivatives
GB1440626A (hu) * 1973-05-02 1976-06-23 Farmaceutici Italia
GB1426637A (en) 1973-12-04 1976-03-03 Vnii Izyskaniju Novykh Antibio Manthracyclic antibiotic and a method of production thereof
US3864480A (en) * 1974-05-06 1975-02-04 Merck & Co Inc Cinerubin A and B As Antiparasitic Agents
JPS5134915B2 (hu) * 1974-07-27 1976-09-29
US4009328A (en) * 1975-05-02 1977-02-22 Schering Corporation Aminoglycoside 66-40C, method for its manufacture, method for its use as an intermediate in the preparation of known antibiotics and novel antibacterials
JPS5231051A (en) * 1975-09-03 1977-03-09 Kowa Co Preparation of amino sugar derivatives
US4039736A (en) * 1976-04-15 1977-08-02 Bristol-Myers Company Antibiotic compounds marcellomycin and musettamycin

Also Published As

Publication number Publication date
NO781949L (no) 1978-04-06
CH637160A5 (fr) 1983-07-15
US4245045A (en) 1981-01-13
FR2403350B1 (hu) 1981-04-30
NO147953C (no) 1983-07-20
IE46236L (en) 1978-04-05
FI772915A (fi) 1978-04-06
NL176004C (nl) 1985-02-01
DE2743654B2 (de) 1979-12-13
AU505971B2 (en) 1979-12-06
NL176004B (nl) 1984-09-03
GB1589536A (en) 1981-05-13
YU235277A (en) 1982-06-30
NO147953B (no) 1983-04-05
LU78242A1 (hu) 1978-01-26
CA1100895A (en) 1981-05-12
ES471823A1 (es) 1979-02-01
AU2933777A (en) 1979-04-12
GR63996B (en) 1980-01-18
DK145200B (da) 1982-10-04
IE46236B1 (en) 1983-04-06
NO773353L (no) 1978-04-06
NL7710380A (nl) 1978-04-07
DK145200C (da) 1983-02-28
SE425798B (sv) 1982-11-08
NO148959B (no) 1983-10-10
NO148959C (no) 1984-01-18
YU40483B (en) 1986-02-28
DE2743654C3 (hu) 1980-08-21
DE2743654A1 (de) 1978-04-06
FI57444B (fi) 1980-04-30
SE7710972L (sv) 1978-04-06
DK435577A (da) 1978-04-06
FR2403350A1 (fr) 1979-04-13
US4207313A (en) 1980-06-10
FI57444C (fi) 1980-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU181999B (en) Process for producing new citostatic antracycline antibiotics
US3988315A (en) Antibiotics aclacinomycins A and B
US4316011A (en) Rhodomycin antibiotics
US4247545A (en) 11-Deoxy anthracycline antibiotics, their preparation and use
US4144329A (en) Antitumor antibiotics MA 144-M1 and MA 144-M2
US4209588A (en) Process for producing new antitumor anthracycline antibiotics
US4198480A (en) Process for producing antibiotic baumycin complex and components
US4373094A (en) Anthracycline derivatives
US4386198A (en) 2-Hydroxyaclacinomycin A and 2-hydroxyaklavinone and process for preparing same
US4127714A (en) Anthracycline glycosides
EP0110155B1 (en) Novel anthracycline derivatives, a process for preparing the same by a microorganism strain, the novel strain streptomyces cyaneus, and use of the anthracycline derivatives as medicaments
US4204038A (en) Process for preparing antibiotics MA 144-M1 and MA 144-M2
US4309503A (en) Preparation of 11-deoxy anthracycline antibiotics
US4942155A (en) Biosynthetic anthracyclines related to daunorubicin
US4071411A (en) Antitumor antibiotics aclacinomycins A and B [RD-9187A]
US4421851A (en) Antitumor antibiotics
US4411834A (en) Preparation of II-deoxy anthracycline antibiotics
US4424342A (en) Anthracycline antibiotic compounds
EP0118732B1 (en) An anthracycline compound, a process for the production thereof, a pharmaceutical composition containing the same and its use as a medicament
JP4443740B2 (ja) アントラサイクリン抗生物質
HU198102B (en) Process for producing anthracycline derivates and pharmaceutical copositions comprising these compounds as active ingredient
EP0205981B1 (en) A novel anti-tumor and antimicrobial compound, its microbiological preparation and its use as medicament
US4192915A (en) Anthracycline glycosides from streptomyces
CA1125746A (en) Antitumor antiobiotics ma 144-m.sub.1 and ma 144- m.sub.2
Umezawa et al. Antitumor antibiotics MA 144-M 1 and MA 144-M 2

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee