HU180894B - Process for producing pharmaceutically acceptable salts of 3-square bracket-bracket-s-bracket closed-1-comma above-phenyl-ethyl-amino-square aracket closed-propylamino-bleomycine - Google Patents

Process for producing pharmaceutically acceptable salts of 3-square bracket-bracket-s-bracket closed-1-comma above-phenyl-ethyl-amino-square aracket closed-propylamino-bleomycine Download PDF

Info

Publication number
HU180894B
HU180894B HU78NI216A HUNI000216A HU180894B HU 180894 B HU180894 B HU 180894B HU 78NI216 A HU78NI216 A HU 78NI216A HU NI000216 A HUNI000216 A HU NI000216A HU 180894 B HU180894 B HU 180894B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
acid
copper
bleomycin
pharmaceutically acceptable
formula
Prior art date
Application number
HU78NI216A
Other languages
English (en)
Inventor
Tomohisa Takita
Akio Fujii
Takeyo Fukuoka
Yasuhiko Muraoka
Osamu Yoshioka
Hamao Umezawa
Original Assignee
Nippon Kayaku Kk
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from JP7777077A external-priority patent/JPS5414980A/ja
Priority claimed from JP12248577A external-priority patent/JPS5463089A/ja
Application filed by Nippon Kayaku Kk filed Critical Nippon Kayaku Kk
Publication of HU180894B publication Critical patent/HU180894B/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K9/00—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K9/001—Peptides having up to 20 amino acids, containing saccharide radicals and having a fully defined sequence; Derivatives thereof the peptide sequence having less than 12 amino acids and not being part of a ring structure
    • C07K9/003—Peptides being substituted by heterocyclic radicals, e.g. bleomycin, phleomycin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/19—Antibiotic
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/27—Cyclic peptide or cyclic protein

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Description

A találmány tárgya eljárás az új 3-[(S)-1 ’-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicin gyógyászati szempontból elfogadható sóinak előállítására. Az új bleomicin-származék az (I) szerkezeti képlettel jellemezhető.
Az Umezawa által felfedezett bleomicinek [Journal of Antibiotics, 19 A, 200 (1966)] karcinosztatikus hatású antibiotikumok, amelyek az Actinomycete Streptomyces verticillus által termelt vízoldható glikopeptidek, és jellemző vonásuk, hogy kétértékű rézzel erős kelátképző hajlamot mutatnak. Normál tenyésztési feltételek mellett a bleomicinek 16 komponense keletkezik és különíthető el [például Umezawa és munkatársai Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1966)]. Ezek közül a bleomicinek közül a rézmentes A„ A2, As, B2 és dezmetil-A2 (a továbbiakban „bleomicin komplex”) elegye széleskörű klinikai felhasználására került különféle rákos megbetegedések gyógyítására és különösen hasznosnak mutatkozott a pikkelyes sejt karcinoma, a bőrrák, a fej- és nyakrák, a méhnyak rákos megbetegedései, a tüdőrák és a rosszindulatú nyirokcsomó daganatok kezelésében.
Sok esetben azonban e vegyületek adagolását nem kívánatos mellékhatások, például tüdőfibrózis kísérték. A bleomicinek által mutatott mellékhatások közül a legtöbb problémát a tüdőfibrózis okozza. Könnyen belátható, hogy a bleomicinek karcinosztatikus aktivitása lényegesen hatékonyabban hasznosítható a klinikai gyakorlatban, ha sikerül a káros mellékhatásokat többé-kevésbé lecsökkenteni.
Sok éven keresztül próbálkoztunk különféle bleomicinek szintézisével, és a kapott vegyületek karcinosztatikus hatását és toxicitását, beleértve a tüdőfibrózist, számos állatkísérletben vizsgáltuk. Azt találtuk, hogy a 3-[(S)-l’-fenil-etil180894
-amino]-propilamino-bleomicin (a következőkben,, NK631”, beleértve a réztartalmú és rézmentes formákat is), amely a bleomicinsav karboxilcsoporton módosított reaktív származéka és az N-[(S)-r-fenil-etil]-l,3-diamino-propán rea5 gáltatásával állítható elő, olyan új bleomicin, amely, anélkül hogy karcinosztatikus hatása csökkenne a kereskedelmi forgalomban levő és más ismert bleomicinekhez viszonyítva, lényegesen kisebb mellékhatásokat mutat, különösen ami a tüdőfibrózist illeti.
Az (I) képletü új bleomicin gyógyászati szempontból elfogadható sóinak kitűnő biológiai hatását a következőkben kísérleti példákkal igazoljuk.
Az NK631 monoszulfát-sójának bioaktivitását a kereskedelmi bleomicin-komplexszel és a 3-[(R,S)-l’-fenil-etil15 -amino]-propilamino-bleomicin-monoszulfáttal (rézmentes forma, a következőkben „RS forma”) összehasonlítva a következő 4 területen vizsgáltuk. Az RS forma előállítása a 3 846 400 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban ismertetett fermentációs eljárással történt.
1. Tüdőfibrózis
2. Antitumor aktivitás
3. Antimikrobiális aktivitás
4. Toxicitás
1. Egerek tüdejére gyakorolt toxicitás (fibrózis)
A vizsgálatokat 15 hetes, az ICR törzsbe tartozó himnemű egereken végeztük 12-es csoportokban. Valamennyi gyógyá30 szati készítményt 5mg/kg-os adagokban használtuk. Az
-1180894 adagolás napi egy alkalommal, 10 egymást követő napon intraperitoneális injekció formájában történt. Az adagolás befejezése után az egereket 5 héten át neveltük. Megfigyelés után az egereket elpusztítottuk és boncolással meghatároztuk a tüdőfibrózis mértékét. A tüdőfibrózis előfordulásának gyakoriságát és a fibrózis mértékét a találmány szerinti új fileomicin-származék és az összehasonlítóként használt kereskedelmi bleomicinkomplex és RS forma esetében a következő 1. táblázatban adjuk meg.
1. táblázat
Előfordulás gyakorisága Fibrózis mértéke
A tüdőfibrózist mutató egerek száma (%) Relatív érték A tüdófibTÓzis teljes pontértéke /a minták teljes száma.* Relatív érték
NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 4/12 (0,33) 0,36 6/36 (0,17) 0,25
RS forma 7/12 (0,58) 0,63 12/36 (0,33) 0,49
bleomicin komplex 11/12(0,92) 1,0 24/36 (0,67) 1,0
Megjegyzés:
* 0 pont: nincs fibrózis pont: váladék összegyűlése az alvedában és fibrózis- szerű változás az alveda válaszfalban pont: Fibrózis néhány területen pont: Elszórt fibrózis pont: Fibrózis a teljes terület több mint %-án
Amint a táblázatban közölt adatokból kitűnik, az RS formával és a bleomicin-komplexszel összehasonlítva az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) adagolásának tulajdonítható fibrózis körülbelül Yi illetve ‘Λ részre csökken az előfordulás gyakoriságát tekintve, míg a fibrózis foka az összehasonlító készítményekhez viszonyítva Vi illetve % részre csökken. Ezek az eredmények egyértelműen mutatják az NK631 monoszulfát hasznosságát a klinikai gyakorlatban.
2. Antitumor aktivitás
2—1. HeLa S3 sejttenyészetre mutatott hatás
Valamennyi vizsgált bleomicinre kiszámítottuk az ID50 értéket az egyes bleomicinek jelenlétében 72 órás tenyésztés után tapasztalt százalékos növekedésgátlásból. Az NK631 IDSO értéke 0,82 mcg/ml-nek adódott, szemben a bleomicinkomplexnél kapott 1,70 mcg/ml értékkel, ami azt mutatja, hogy az NK631 kétszer olyan erősen gátolta a sejtek növekedését, mint a bleomicinkomplex. Az RS forma ID50 értékét 0,80 mcg/ml-nek találtuk, tehát az itt tapasztalt gátló hatás összevethető volt az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) növekedésgátló hatásával.
2—2. Karcinosztatikus aktivitás egereken Ehrlich karcinomára
A vizsgálatokhoz 6 hetes az ICR törzsbe tartozó hímnemű egereket használtunk. Az egyes egerek lágyék részébe szubkutánúton2 x 10® sejtet transzplantáltunk. 24 óra elteltével valamennyi egeret kezeltük a vizsgálni kívánt készítményekkel a korábban az 1. és 2. pont alatt ismertetett módon. A szubkután transzplantáció 15. napján a kifejlődött daga2 natokat eltávolítottuk és a daganatok súlyát összehasonlítottuk a nem kezelt, kontroll csoportban kifejlődött daganatok súlyával a százalékos növekedésgátlás meghatározása céljából.
Amint a 2. táblázatból látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) karcinosztatikus aktivitása összevethető volt az RS forma karcinosztatikus aktivitásával és körülbelül 1,4-szerese volt a bleomicinkomplexre kapott értéknek.
2. táblázat
Dózis mg/ka x 10 %-ös gátlás
NK631 monoszulfát (rézmentes forma) RS forma Bleomicin komplex
2,7 84 78 67
0,9 68 60 55
0,3 39 51 49
0,1 24 51 24
0,03 19 13 21
0 0 0 0
ID50 mg/kg/nap 0,35 0,31 0,49
2—3. Ascites hepatoma elleni karcinosztatikus aktivitás patkányokon
A Donryu törzsbe tartozó patkányokba intraperitoneálisan 1 x 10® AH66 sejtet transzplantáltunk. 24 óra elteltével a vizsgálni kívánt készítményeket napi egy alkalommal 10 egymást követő napon keresztül intraperitoneálisan adagoltuk. A transzplantálást követő 30 napon keresztül megfigyeltük az egyes patkányok súlyát és az elpusztult és túlélő patkányok számát.
3. táblázat
Adag mg/kg x 10 Az átlagos túlélési napok relatív értékei
NK631 monoszulfát rézmentes forma RS forma Bleomicin komplex
3,12 296 298 241
1,56 269 257 257
0,78 216 196 145
0,39 163 149 116
0,19 116 121 110
0 100 100 100
Amint a 3. táblázat adataiból látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) AH66 ascites hepatomával szemben mutatott aktivitása összevethető volt az RS forma megfelelő aktivitásával, míg a bleomicin komplex aktivitását valamennyi dózisban felülmúlta.
2—4. Egereken 20-metil-kolantrénnel (a továbbiakban „20—MC”) kiváltott pikkelyes sejtkarcinoma ellen kifejtett gátló hatás
A ddy törzsbe tartozó 10 hetes hímnemű egerek leborotvált hátát 18 héten keresztül, heti két alkalommal helyileg a 20—MC acetonos oldatával kezeltük. A 20—MC-vel végzett
-2180894 kezelés kezdetétől számított 5 héttel az egereket intrapffritoneálisan a vizsgálni kívánt készítmények 62,5 mcg/egér adagjával kezeltük 15 héten keresztül, heti két alkalommal. A vizsgálni kívánt készítmények adagolását követő első hét során megfigyeltük a rákképződést azon a területen, amelyet 20—MC-vel kezeltünk.
Amint a 4. táblázatban látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) és az RS forma kissé hatásosabbak voltak a 20—MC-vel kiváltott rákképződés gátlásában, mint a bleomicin komplex.
4. táblázat
Mortalitás A rákképződés gyakorisága (%) %-os gátlás
NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 1/12 5/11 (45,4) 47,8
RS-forma 1/12 5/11 (45,4) 47,8
Bleomicin komplex 1/12 5/10 (50,0) 42,5
Kontroll 1/24 20/23 (86,9) 0
Amint a fenti eredményekből látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) egyértelműen jobb tumorellenes hatást mutatott, mint a kereskedelmi forgalomban levő bleomicin komplex.
3. Antimikrobiális aktivitás
Az antimikrobiális hatást Mycobacterium 607-tel és Bacillus subtilis PCI-vel szemben vizsgáltuk a pohár módszenei (cup method), összehasonlítóként bleomicin A2-t használva (1,000 U/mg). A kapott eredményeket az 5. táblázatban mutatjuk be.
5. táblázat
M. 607 B. Sub.
NK631 monoszulfát (rézmentes forma) 7848 1550
RS forma 7535 1400
Bleomicin komplex 1234 886
Amint az 5. táblázatból látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) és az RS forma lényegesen jobb antimikrobiális hatást mutatott mint a bleomicin komplex.
4. Toxicitás
4—1. Akut toxicitás intraperitoneális adagolás esetén (LDS0) patkányokon
Amint a 6. táblázatban látható, az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) patkányokban mutatott LDS0 értéke körülbelül megegyezik a bleomicin komplex és az RS forma megfelelő értékeivel.
6. táblázat
LDso mg súly/kg Megbízhatósági határok (5%-os szignifikancta)
Patkány NK631 monoszulfát (rézmentes forma) RS forma Bleomicin komplex 155,0 150,6 168,0 133,6—179,8 129,0—170,6 130,0—217,0
4—2. Szubakut és krónikus toxicitás patkányokban és kutyákban
A patkányok és kutyák szervezetében mutatott szubakut és krónikus toxicitás tekintetében az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) hatása összevethető volt a bleomicin komplex hatásával. Külön ki kell emelni azt a tényt, hogy minden olyan kutya esetében, amelyet a bleomicin komplex nagy dózisával kezeltünk (1,2 mg/kg, 90 injekció) az injektált helyen elhalás volt megfigyelhető, míg az NK631 monoszulfáttal (rézmentes forma) azonos dózisban kezelt kutyák esetében megfelelő jelenség soha nem mutatkozott. Az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) tüdőben mutatott toxicitása szintén alacsonyabb volt a bleomicin komplexénél.
A fenti eredményekből megállapítható, hogy az NK631 monoszulfát (rézmentes forma) toxicitása összevethető a bleomicin komplex toxicitásával, kivéve a tüdőben mutatott toxicitást és az elhalást (nekrózis).
5. összefoglalás
Az eddigiekben ismertetett kísérletek eredményeiből levonható az a következtetés, hogy az NK631 jelű új vegyület gyógyászati szempontból elfogadható sói a következő tulajdonságokkal rendelkeznek:
1. A tüdőben rendkívül kis toxicitást mutatnak.
2. Antimikrobiális és antitumor aktivitásuk felülmúlja a kereskedelmi bleomicin komplex aktivitását.
3. Szisztemikus toxicitásuk nagyjából megegyezik a kereskedelmi bleomicin komplexével és
4. az injektálás helyén alacsony helyi toxicitást mutatnak.
A fenti tulajdonságok következtében az NK631 gyógyászati szempontból elfogadható sói várhatóan jól hasznosíthatók a klinikai gyakorlatban.
A találmány értelmében az NK631 gyógyászati szempontból elfogadható sóinak előállítása úgy történik, hogy a (II) általános képletü bleomicinsavnak a karboxil-csoporton módosított reaktív származékát N-[(S)-r-fenil-etil]-l,3-diamino-propánnal reagáltatjuk. Közelebbről, a vegyület előállítása úgy történhet, hogy (a) a bíeomicinsavat N-[(S)-r-fenil-etil]-l,3-diamino-propánnal reagáltatjuk egy aktiváló reagens jelenlétében, vagy (b) a bleomicinsav, 3-aminopropil-észterét vagy annak N-monoszubsztituált származékát N-[(S)-r-fenil-etil]-l,3-diamino-propánnal reagáltatjuk. Ezeknek az eljárásoknak részletes leírását az alábbiakban adjuk meg.
-3180894
Az (a) eljárásban használt bleomicinsav ismert vegyület, amelynek előállítása a 3 843 448 és 3 846 400 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban ismertetett módszer szerint a bleomicin B2 enzimatikus hasításával történhet.
A másik kiindulási anyag, azaz az N-[(S)-l’-fenil-etil]-l,3-diamino-propán új vegyület, melyet elsőként szintetizáltunk. A szintézis a következőképpen történik:
Körülbelül 0 'C hőmérsékletre lehűtött feniletilamint megközelítően ekvivalens mennyiségű akrilnitrillel keverünk el. Az elegyet a reakció teljessé tétele céljából 10—24 órán át 80 —100 ’C-on tartjuk. Ezután az akrilnitri 1 feleslegét csökkentett nyomáson végzett desztillálással eltávolítjuk, és a maradékot tovább desztillálva a 3-[(S)-r-fenil-etil-amino]-propionitrilhez jutunk. Az így kapott vegyületet szokásos módon, például Raney-nikkel jelenlétében redukálva a kívánt N-[(S)r-fenil-etil-l,3-diaminopropán (a továbbiakban „aminovegyület”) keletkezik. E vegyület és dihidrokloridja fizikaikémiai tulajdonságait a következő 7. táblázatban adjuk meg.
7. táblázat
Szabad bázis Dihidroklorid
(1) Megjelenés Szobahőmér- fehér tűs
sékleten színtelen folyadék kristály
(2) Olvadáspont — 223,5—224 ’C
(3) Forráspont 95—103 ’C (2 Hgmm) —
(4) Ultraibolya 241, 247,252, 250, 256, 259,
abszorpciós 257,263, 267 266 (desztillált
maximum (m μ) (metanol) víz)
(5) Molekuláris — 206 (desztillált
extinkciós koefficiens ε (256 m μ) (6) Fajlagos forgató- víz)
képesség —20,6’ (c = 1,
lag — desztillált víz)
—56,38’
(hígítás nélkül,
(7) Rf-érték vékonyréteg kromatográfiásan, n-propanol-piridin-ecetsav-víz (15:10:3:12 térf. arány) Avicel 1=1)
—SFR (8)Rm-érték nagyfeszültségű elektroforézissel hangyasav-ecetsav-víz (25:75:900 térf. arány) Avicel— SFR lOmin., Rm (ala- 0,73 0,73
nin) = 1,0 1,52 1,52
7. táblázat
Szabad bázis Dihidroklorid
700, 760, 820, 690, 750, 820,
910, 1025, 910, 980, 1020,
1080, 1130, 1065, 1075,
(9) IR abszorpciós 1200, 1305, 1150, 1205,
spektrum cmΛ 1350,1370, 1385, 1460,
KBr 1450, 1495, 1500, 1515,
1605, 2850, 1590,2500,
2940,3300, 2850, 3000,
3375 3500
(10) összegképlet CnH18N2 ChH2oN2C12
(molekulasúly) (178, 28) (251, 20)
Aktiválószerként a következő vegyületek használhatók fel: 6-klór-l-p-klórbenzol-szulfoniloxi-benzotriazol (CCBT), N-etil-5-fenil-izoxazólium-3’-szulfonát (NEPIS), N-terc-butil-5-metil-izoxazólium-perklorát, N-etoxi-karbonil-2-etoxi-l,2-dihidro-kinolin, di-p-nitrofenil-szulfit tri-p-nitrofenil-foszfit, p-nitrofenil-diklóracetát, N-hidroxi-szukcinimid, diciklohexil-karbodiimid (DCC), l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid, l-ciklohexil-3-(2-morfolinoetil)-karbodiimid, difenil-karbodiimid, di-p-toluil-karbodiimid, diizopropil-karbodiimid, p-nitrofenol, pentaklorfenol és benzilalkohol.
Az (a) eljárás részletes ismertetését a következőkben adjuk meg:
Bleomicinsavat (réztartalmú forma) feloldunk vízben, dimetilformamidban, dimetilszulfoxidban vagy ezek elegyében. A kapott oldathoz 0—30 ’C hőmérsékleten, keverés közben, hozzáadjuk a fent felsorolt aktiválóreagensek egyikét. A kapott oldat pH-értékét 3—10-re állítjuk be, ami alkalmas körülményeket teremt az aktiválás számára. A pH beállítása valamely szervetlen sav vagy bázis, így például sósav vagy nátriumhidroxid vagy egy szerves sav vagy bázis, például triklórecetsav vagy N-metil-morfolin segítségével történhet. A kezelés hatására megindul a bleomicinsav karboxilcsoportjának aktiválása. A reakcióelegyet azonnal vagy a kezelést követő 30 percen belül elkeverjük az aminovegyülettel. Adott esetben a pH értéket előzőleg 7,0-ra állítjuk be. Az elegyet ezután 1—24 órán át 0—30 ’C-on tartjuk. Ilyen körülmények között lejátszódik a reakció és az NK631-hez jutunk. Az aktiváló reagenst vagy az amino-vegyületet a bleomicinsav 1/mól-ekvivalensnyi mennyiségére vonatkoztatva alkalmasan 1—10 ekvivalens mennyiségben használjuk.
Az NK631-só elkülönítése céljából először a bleomicinvegyületeket a reakcióelegy térfogatára számítva 5—10 térf. aceton hozzáadásával kicsapjuk. A kapott csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, és a lehető legkisebb mennyiségű desztillált vízben feloldjuk. A kapott vizes oldat pH-értékét azonnal beállítjuk 6,0-ra, például sósav-oldat segítségével, és felöntjük egy CM-Sephadex® C—25 gyantával töltött (NHÍ típus, a Pharmacia Fine Chemicals gyártmánya) kromatografáló oszlopba, amelyet előzőleg vizes ammóniumklorid oldattal kezeltünk. Az el nem reagált bleomicinsav adszorpció nélkül halad végig az oszlopon. A gyantán adszorbeált NK631-et gradiens eluálási technikával vizes ammóniumklorid oldattal eluáljuk, a koncentrációkat lépcsősen vagy folyamatosan 0,05 mólról, 1,0 mólra növelve. Az NK631-et a kék színű frakciókban találjuk, körülbelül 0,35—0,45 mól ammóniumklorid koncentrációk
-4180894 esetén. Ezek a frakciók 292 πιμ-nál ultraibolya abszorpciót mutatnak. Ezeket a frakciókat külön összegyűjtjük és átvezetjük egy Amberlite® XAD—2 (Rohm and Haas Co.) vagy Diaion® HP40 (Mitsubishi Chemical Co.) oszlopon. Az oszlop eluálását egy gyógyászatilag elfogadható savat, például sósavat vagy kénsavat tartalmazó vizes metanol-oldattal végezve az NK631 gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóját kapjuk. Ennél az eljárásnál az el nem reagált bleomicinsav kényelmesen kinyerhető. A fentiekben ismertetett eljárási lépések közül az a lépés, ahol CM-Sephadex® C—25 került felhasználásra (a Sephadex cég által gyártott kationcserélő gyanta kereskedelmi neve, amely a dextrán poliszacharidból származó karboximetilcsoportot mikroszkopikus gyöngyeiből áll, előállítása és forgalmazása a Pharmacia Fine Chemicals Inc., Svédország által történik) csupán szemléltető példa és bizonyos mértékig módosítható anélkül, hogy a kapott eredmények lényegesen változnának. Például eluensként vizes nátriumklorid-oldatot vagy vizes ammóniumszulfátoldatot is használhatunk.
A fenti eljárással kapott NK631-SÓ réztartalmú formájából a réz eltávolítása bármely ismert módszenei történhet, így például eljárhatunk úgy, hogy a rezet hidrogénszulfiddal távolítjuk el, amelynek hatására az rézszulfiddá alakul és kiválik. Egy másik módszer szerint a rezet egy redukálószerrel 0 vegyértékű rézzé redukáljuk (3 646197 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás), vagy a rezet egy kelatáló reagens, például ditizont tartalmazó szerves oldószenei extraháljuk [Umezawa és munkatársai: Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1960)], vagy az eltávolításhoz egy nem ionos makroretikuláris ioncserélő gyantát használunk (3 929 993 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom). Az alábbiakban szemléltetésképpen leírunk egy lehetséges rézeltávolítási folyamatot.
NK631 -et (réztartalmú forma) feloldunk desztillált vízben és az oldatot egy Amerlite® XAD—2 gyantával (egy sztiroldivinilbenzol kopolimer alapú abszorpciós gyanta kereskedelmi neve, amely a Rohm & Haas Co. USA gyártmánya) vagy Diaion® HP40 gyantával (egy sztirol-divinilbenzol kopolimer alapú abszorpciós gyanta kereskedelmi neve, amely a Mitsubishi Chemical Co., Japán, gyártmánya), megtöltött és előzőleg desztillált vízzel kezelt oszlopra öntjük. Az oszlopot ezután 5%-os vizes etiléndiamin-tetraecetsav-dinátriumsóval, a továbbiakban „EDTA-Na2” mossuk, amikor a réziont az EDTA-Na2 oldat eltávolítja, visszahagyva a rézmentes NK631-et a gyantán. A gyantát egy só vizes oldatával, így például vizes nátriumklorid, nátriumszulfát vagy nátriumacetát oldattal mossuk az EDTA-Na2 eltávolítása céljából, majd a mosást desztillált vízzel megismételjük. Végül savas metanol-víz eleggyel, így például metanol és 0,0025 n sósav-oldat 1:1 térfogatarányú elegyét engedjük át az oszlopon, amely egy olyan anyagot eluál, mely 290 mp-nál ultraibolya abszorpciót mutat. Ezt a frakciót összegyűjtjük, betöményítjük, pH-értékét 6,0-ra állítjuk be és fagyasztással szárítjuk. Termékként világos sárgásfehér amorf por formájában az NK631 dihidrokloridot (rézmentes forma) kapjuk.
A savas kémhatású metanol-víz elegy előállításához bármely gyógyászatilag elfogadható savat felhasználhatunk, így például, ha kénsavat vagy ecetsavat használunk, az NK631 monoszulfátját vagy diacetátját (rézmentes forma) kapjuk, por alakjában.
Az NK631 találmány szerinti eljárással előállítható gyógyászati szempontból elfogadható sója szokásos módon átalakítható egy másik gyógyászati szempontból elfogadható sóvá, igy például szulfáttá vagy acetáttá, amelyek tetszőlege sen kialakíthatók úgy is, hogy változtatjuk az eluáláshoz használt savat.
Az (a) eljárásnál, miután az amino-vegyület az alkalmazott aktiváló reagens jelenléte miatt a bleomicinsav aktivált karboxilcsoportjával reagál, a kondenzációs reakció zökkenőmentesen, rendkívül enyhe körülmények között lejátszódik. Ennek következtében az amino-vegyületnek csak a primer aminocsoportja reagál az aktivált karboxilcsoporttal, míg a szekunder iminocsoport nem vesz részt a reakcióban, aminek következtében a reakció lefutása az NK631-SÓ keletkezésének kedvez. Ez az (a) eljárás figyelemre méltó előnye.
A (b) eljárás részletes ismertetése:
A (b) eljárásban alkalmazott bleomicinsav-3-aminopropil-észter könnyen előállítható dihidrokloridja formájában (réztartalmú forma), oly módon, hogy a bleomicin A2-t termikusán elbontjuk, amikor 3-(metil-merkapto)-propilamino-bleomicin keletkezik, majd a kapott bleomicint egy halogén-nitrillel, halogén-ecetsawal, halogénecetsav-észterrel vagy halogén-acetamiddal reagáltatjuk savas oldatban (3 886 133 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás).
A bleomicinsav 3-aminopropil-észterének N-monoszubsztituált származékát, amelyben az aminocsoport védett állapotban van, nagy kitermeléssel állíthatjuk elő úgy, hogy a bleomicinsav 3-aminopropil-észterének dihidrokloridját vízben vagy egy szerves oldószerben, például metanolban vagy ezek elegyében feloldjuk, majd a kapott oldathoz erőteljes keverés közben lassan egy ismert, az aminocsoport védésére alkalmas reagens egyenértékű mennyiségét vagy kis feleslegét adjuk por formájában, vagy egy szerves oldószerrel, például metanollal készült oldat alakjában, és a reakciót szobahőmérsékleten vagy jeges hűtés mellett hagyjuk lejátszódni, miközben a reakcióelegy pH-értékét egy szerves bázis, például trimetilamin, trietilamin, piridin, 1,3-diazabiciklo-[5,4,0]-7-undecén, l,5-diazabiciklo-[3,4,0]-5-nonén, 1,4-diazabiciklo-[2,2,2]-oktán vagy N-metil-morfolin hozzáadásával 5,0—7,5 értéken tartjuk. Ilyen N-monoszubsztituált származékok a következők: a bleomicinsav 3-acetilamino-propil-észterének monohidrokloridja, a bleomicinsav
3-szukcinil-aminopropil-észterének monohidrokloridja, a bleomicinsav 3-benzoil-aminopropil-észterének monohidrokloridja, a bleomicin 3-benzil-oxikarbonil-aminopropilészterének monohidrokloridja, a bleomicinsav 3-p-toluolszulfonil-aminopropil-észterének monohidrokloridja, a bleomicinsav 3-(2,4-dinitrofenil)-aminopropil-észterének monohidrokloridja, a bleomicinsav 3-(3,5-dimetil-3-oxociklohexén-l-il)-aminopropil-észterének monohidrokloridja, a bleomicinsav 3-N-terc-butoxikarbonil-propil-észterének monohidrokloridja, és a bleomicinsav 3-N-szalicilidéniminopropil-észterének monohidrokloridja (3 886 133 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás).
A (b) eljárásváltozat szerint az NK631-SÓ a bleomicinsav
3-aminopropil-észtereinek (vagy N-monoszubsztituált 3amino-propil-észtereinek savaddíciós sója, előnyösen hidrokloridja) és az amino-vegyület között lejátszódó reakció eredményeképpen keletkezik. Ha kiindulási anyagként a bleomicinsav N-monoszubsztituált 3-aminopropil-észterének savaddíciós sóját használjuk, felhasználhatunk egy tiszta anyagot, vagy egy olyan reakcióelegyet, amelyet a bleomicinsav 3-aminopropil-észterének és egy amino védőcsoport bevitelére alkalmas reagensnek a reakciójával kapunk, és amelyet kívánt esetben betöményíthetünk.
A 3-aminopropil-észter vagy N-monoszubsztituált 3-aminopropil-észter savaddíciós sója és az amino-vegyület reakciójának végrehajtása során oldószerként előnyösen vizet
-5180894 vagy szerves oldószereket, például metanolt, dimetilformamidot vagy dimetilszulfoxidot használunk. A reakcióelegyet
1—72 órán át 0—80 °C hőmérsékleten semleges vagy lúgos körülmények között állni hagyjuk, amikor lezajlik az aminolízis, ami az NK631 keletkezéséhez vezet. Ha a pH-érték viszonylag magas, célszerű a reakciót hosszabb idő alatt, viszonylag alacsony hőmérsékleten végrehajtani, míg alacsony pH-érték mellett előnyösen magasabb hőmérsékleten rövidebb ideig dolgozunk. A bleomicinsav 3-aminopropilészterének, illetve a 3-aminopropil-észter N-monoszubsztituált származékának 1 ekvivalensnyi mennyiségére általában
1—10 ekvivalens aminovegyületet használunk.
Az NK631-só elkülönítése a reakcióelegyből úgy történik, hogy először a bleomicinkomponenseket 2—5-szörös térfogatú aceton hozzáadásával kicsapjuk a reakcióelegyből. A csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal alaposan átmossuk, majd a lehető legkisebb mennyiségű desztillált vízben feloldjuk. A kapott vizes oldat pH-értékét gyorsan 6,0-ra állítjuk be, például sósav hozzáadásával és az oldatot felöntjük egy előzőleg 0,05 mólos vizes ammóniumklorid oldattal kezelt CM-Sephadex® C—25 oszlopra (NHÍ típus, a Pharmacia Fine Chemicals gyártmánya), ahol a bleomicin komponensek a gyantán abszorbeálódnak. Az eluálást olyan vizes ammóniumklorid oldatok sorozatával végezzük, amelyek koncentrációja lépésenként vagy folyamatosan 0,05 mólról 1,0 mólra nő. Ekkor az el nem reagált 3-aminopropilészter vagy ennek N-monoszubsztituált származéka és az NK631 eluálódik, kék sávokat alkotva (ultraibolya abszorpció 292mp-nál) az elfolyó folyadékban 0,15—0,20 mól, illetve 0,35—0,45 mól ammóniumklorid koncentráció között. Ezeket a frakciókat külön összegyűjtjük és Amberlite® XAD —2 vagy Diaion® HP40 oszlopon történő átengedés után egy gyógyászatilag elfogadható savval, például sósavval vagy kénsawal megsavanyított vizes metanol-oldattal eluáljuk. Az el nem reagált bleomicin-3-aminopropil-észter vagy annak N-monoszubsztituált származéka szokásos módon visszanyerhető. Erre tipikus példa a fent leírt CM-Sephadex® C—25-öt alkalmazó eljárás, amely bizonyos mértékig módosítható anélkül, hogy lényegesen megváltoztatná a kapott eredményeket. Eluensként például vizes nátriumklorid-oldatot vagy vizes ammóniumszulfát-oldatot használhatunk.
A (b) eljárással kapott NK631-SÓ a korábbiakban az (a) eljárással kapcsolatban leírt, ismert rézeltávolítási módszerek bármelyikével átvihető rézmentes formába. Kívánt esetben a kapott termék átalakítható valamely más gyógyászati szempontból elfogadható sóvá, például hidrokloriddá, szulfáttá vagy acetáttá.
Az NK.631 néhány sójának jellegzetes fizikai-kémiai tulajdonságait a 8. és 9. táblázatokban adjuk meg.
Az NK6311 szerkezeti képletét a következő módon határoztuk meg: az NK631 monoszulfát rézmentes formáját feloldottuk nehézvízben és protonzaj kioldásos módszerrel, belső összehasonlitóként dioxánt használva, felvettük a 13CNMR spektrumot. Olyan jeleket kaptunk, amelyek megfeleltek az amino-vegyületben levő összesen 11 13C-atomnak, míg a következő jelekből a 3-[(S)-l’-fenil-etil-amino]-propilamino molekularész jelenlétére lehet következtetni: 19,4, 26,3, 37,0, 43,5, 58,9, 128,3 (két jel), 130,0 (két jel) és
136,3 ppm. Az egyéb szénatomnak tulajdonítható jelek mind megfeleltek a bleomicin családban szokásos jeleknek [Naganawa és munkatársai: Journal of Antibiotics, 30, 338 (1977:)].
8. táblázat
Az NK631 dihidrokloridja és monoszulfátja fizikai-kémiai tulajdonságai réztartalmú forma)
Dihidroklorid Monoszulfát
(1) Megjelenés kék amorf por kék amorf por
(2) Oldhatóság oldódik víz- Ugyanaz mint a
ben, metanol- dihidroklorid-
bán, dimetilszulfoxidban, dimetil-formamidban; korlátoltan oldódik dioxánban; nem oldódik etanolban, acetonban, éterben, benzolban nál
(3) Olvadáspont 205—207 205—207
(bomlik) °C (4) Fajlagos forgatóké- -95,6° -93,7°
pesség (desztillált víz, c= 1,0)
[a]& (5) Vékonyréteg kro- (a) 0,72 (b) (a) 0,72 (b) 0,75
matográfia 1. Rf-érték 0,75
(6) Elektroforézis 0,80 0,80
2. Rm-érték (alanin= 1,0)
Megjegyzés:
1. (a) szilikagél G® (szilikagél alapanyagú vékonyrétegkro- motográfiás célra alkalmas adszorbens kereskedelmi neve, amely a Merek Inc., USA gyártmánya); Metanol (10% ammóniumacetát) 10% ammónia (10: 9 : 1 térfogatarány) (b) Avicel SF® (kristályos cellulóz alapanyagú vékonyrétegkromatográfiás adszorbens kereskedelmi neve, amely az FMC Corporation, USA, gyártmánya); npropanol/piridin/ecetsav/víz (15:10: 3:12 térfogatarány)
2. Avicel SF®; hangyasav/ecetsav/víz (25: 75:900 térfogatarány); 800 V; 15 perc.
9. Táblázat
Az NK631 néhány sójának fizikai-kémiai tulajdonságai (rézmentes forma)
Dihidroklorid Monoszulfát Diacetát
(1) Megjelenés világos világos világos
sárgásfehér sárgásfehér sárgásfehér
amorf por amorf por amorf por
(2) Oldhatóság oldható vízben, metanolban, ecetsavban,
DMSO-ban, DMF-ban; korlátoltan
oldható dioxánban; oldhatatlan
(3) Olvadáspont etanolban, acetonban, éterben, benzolban
(bomlik) °C 195—197 196—198 188—190
9. táblázat folytatása
Dihidroklorid Monoszulfát Diacetát
(4) Fajlagos forgatóképesség (desztillált víz, c=l,0) [a]23 1 J436 — 2,1° -2,0° -2,0°
(5) Vékonyréteg kromatográfia 1. Rf-érték (a) 0,56 (b) 0,70 (a) 0,56 (b) 0,70 (a) 0,56 (b) 0,70
(6) Elektroforézis 2. Rm-érték (alanin=l,0) 0,94 0,94 0,94
Megjegyzés:
1. (a) szilikagél G ®; metanol (10% ammóniumacetát) 10% ammónia (10:9:1 térfogatarány);
(b) Avicel SF®; n-propanol/piridin/ecetsav/víz (15:10:3:12)
2. Avicel SF®; hangyasav/ecetsav/víz (25 : 75:900 térfogatarány); 800 V; 15 perc
A mellékelt 1. és 2. ábrákon megadjuk a bleomicin NK631 ultraibolya abszorpciós spektrumát, míg a 3. és 4. ábrákon az NK631 infravörös abszorpciós spektrumai kerülnek bemutatásra.
Közelebbről, az 1. ábra a 3-[(S)-1 ’-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicin-dihidroklorid (réztartalmú forma) ultraibolya abszorpciós spektrumát, a 2. ábra a 3-[(S)-1 ’-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicin-moní'szulfát (rézmentes forma) ultraibolya abszorpciós spektrumát mutatja be, a 3. ábrán a 3-[(S)-r-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicin-dihidroklorid (réztartalmú forma) infravörös abszorpciós spektruma szerepel, amelyet káliumbromid tabletták formájában vettünk fel, míg a 4. ábra a 3-[(S)-r-fenil-etil-ammo]-propilamino-bleomícin (rézmentes forma) infravörös abszorpciós spektrumát mutatja be, ugyancsak káliumbromid tabletták formájában felvéve.
Találmányunkat közelebbről a következő példákkal illusztráljuk anélkül, hogy azt a példákra korlátoznánk.
1. példa
Az NK631 dihidrokloridjának (réztartalmú forma) és monoszulfátjának (rézmentes forma) szintézise
A) lépés: 400 ml dimetilformamidban feloldunk 15,0 g bleomicinsavat (réztartalmú forma). A kapott oldathoz 0°C-on hozzáadunk 1,1 ml N-metil-morfolint és 10,3 g CCBT-t. Az elegyet 5 percen át 0’C-on keverjük, mqjd hozzáadunk 5,3 g amino-vegyületet, és a keverést további 1 órán át folytatjuk. A reakciót 200 ml 25%-os vizes ecetsav-oldat hozzáadásával leállítjuk, majd a reakeióelegyet elkeveijük 5 liter hideg acetonnal. A kivált terméket szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk és feloldjuk 500 ml desztillált vízben. A kapott vizes oldat pH-értékét azonnal 6,0-ra állítjuk be, majd az oldatot felöntjük egy CM-Sephadex®
C—25 (NHÍ típus) gyantával megtöltött oszlopra, amelyet előzőleg 0,05 mólos vizes ammóniumklorid-oldattal kezeltünk. Az oszlopon a bleomicinek abszorbeálódnak.
Az eluáláshoz vizes ammóniumklorid-oldatot használunk úgy, hogy az oszlopon összesen 20 liter eluenst engedünk keresztül, melynek koncentrációja 0,05 mólról folyamatosan nő egészen 1,0 mólig. Az el nem reagált bleomicinsav a 0,05 mólos ammóniumklorid koncentrációnál jelenik meg az eluátumban, míg az NK631 körülbelül 0,45 mólos ammóniumklorid-oldattal eluálódik. Mindkét frakciót, amelyek 292 mp-nál ultraibolya abszorpciós csúcsot mutattak, külön összegyűjtjük. AzNK631-et tartalmazó frakciót egy 2,6 liter Amberlite® XAD—2-vel megtöltött oszlopra öntjük. Az oszlopot ezután vízzel alaposan átmossuk és 0,01 n vizes sósavoldat metanolt is tartalmazó elegyével eluáljuk. A sósavoldat és a metanol — víz elegy térfogataránya 4:1. őszszesen 2,5 literes kékszínü frakciót gyűjtünk össze, amely 292 mp-nál mutat ultraibolya abszorpciós csúcsot. A metanolt lepároljuk az eluátumból, majd a visszamaradó koncentrátum pH-értékét Dowex® 44 (OH típus) (epiklórhidrin és ammónia kopolimer alapú anioncserélő gyanta, amely a Dow Chemical Co., USA, gyártmánya) gyantával 6,0-ra állítjuk be és az oldatot fagyasztva szárítjuk. 16,1 g (92%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk kék amorf por formájában.
Hasonló kezeléssel 280 mg el nem reagált bleomicinsav (réztartalmú forma) nyerhető vissza.
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) ultraibolya abszorpciós maximumait és antimikrobiális potenciálját a következőkben adjuk meg:
ultraibolya abszorpciós maximuma:
mp (El°ái, desztillált víz)
242 (151)
292 (121)
Antimikrobiális potenciál: 8,100 egység/mg [Megjegyzés: az antimikrobiális potenciált Mycobacterium smegmatis ATCC 607 felhasználásával határoztuk meg a bleomicin A2 (rézmentes forma) potenciálját 1,000 egység/ mg-nak véve. Ugyanez érvényes a következőkre is.]
B) lépés: 200 ml desztillált vízben feloldunk 10,0 g NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma). Az oldatot 600 ml Amberlite® XAD—2 gyantával megtöltött előzőleg desztillált vízzel kezelt oszlopra öntjük. Az oszlopot ezután 2 liter vizes 5% EDTA-Na2-t tartalmazó oldattal, 2,5 liter 5%-os vizes nátriumszulfát-oldattal, majd 630 ml desztillált vízzel mossuk. Az oszlopot ezután kénsav 0,0025 n metanolos-vizes oldatával (térfogatarány =1:1) eluáljuk. 900 ml térfogatú olyan frakciót gyűjtünk, amely 290 mp-nál ultraibolya abszorpciót mutató anyagot tartalmaz. A metanolt ledesztilláljuk és a visszamaradó folyadék pH-értékét Dowex® 44 (OH ‘ típus) gyantával 6,0-ra állítjuk be. Fagyasztva szárítással 9,3 g (95%) NK631 monoszulfátot (rézmentes forma) kapunk világos sárgásfehér amorf por formájában. Ez a termék ultraibolya abszorpciós maximumát és antimikrobiális potenciálját tekintve a következőképpen jellemezhető:
ultraibolya abszorpciós maximum mp (El“ún 0,1 N HC1)
290 (106)
Antimikrobiális porenciál: 7,865 egység/mg.
-7180894
2. példa
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise mi desztillált vízben feloldunk 1,5 g bleomicinsavat (réztartalmú forma). Az oldathoz keverés közben 26 ’C-on hozzáadunk 800 mg NEPIS-t, miközben a reakcióelegy pHértékét 0,1 n vizes nátriumhidroxid-oldat hozzáadásával 4,8 —5,5 értéken tartjuk. 30 perc múlva az elegyet kiegészítjük
1,8 g amino-vegyület 20 ml desztillált vízzel készült oldatával, amelynek pH-értékét 7,0-ra állítottuk be sósav-oldattal. Az elegyet 20 órán át 26 °C-on állni hagyjuk. Ezután keverés közben hozzáadunk 600 ml hideg acetont. A kivált csapadékot, amely a bleomicin komponensekből áll, ezután feloldjuk 30 ml desztillált vízben és pH-értékét 0,1 n vizes sósavoldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot az
1. példa A) lépésében leírt eljárással tovább tisztítva 932 mg (53%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,073 egység/mg.
Teljesen analóg eredményhez jutunk, ha NEPIS helyett N-terc-butil-5-metil-izooxazolium-perklorát ekvivalens mennyiségét használjuk aktiválószerként.
3. példa
NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml dimetilszulfoxidban feloldunk 1,5 g bleomicinsavat (réztartalmú forma). Az oldathoz keverés közben 30 ’C-on hozzáadunk 740 mg N-etoxikarbonil-2-etoxi-l,2-dihidrokinolint és 0,1 ml N-metilmorfolint. Az elegyet 30 percen át keverjük, majd keverés közben hozzáadunk 530 mg aminovegyületet és az elegyet 3 órán át 30 °C-on állni hagyjuk. A reakcióelegyhez keverés közben 600 ml hideg acetont adunk. A kivált bleomicin komponenseket szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben és a kapott oldat pH-értékét 0,1 n vizes sósavoldat hozzáadásával azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot az 1. példa A) lépésében leírtaknak megfelelően feldolgozva 809 mg (46%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmp forma) kapunk kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,028 egység/mg.
4. példa
NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml desztillált vízben feloldunk 1,5 g bleomicinsavat (réztartalmú forma). Az oldathoz 27’C-on hozzáadunk
1,2 g l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid-hidrokloridot, majd a kapott elegy pH-értékét 0,1 n vizes sósavoldattal 4,5-re állítjuk be. A reakcióelegyhez hozzáadunk 530 mg amino-vegyületet, majd pH-értékét 1 n vizes sósavoldattal 5,0-ra állítjuk be, és 20 órán át 27’C-on állni hagyjuk. A reakcióelegyhez ezután keverés közben 400 ml hideg acetont adunk. A kivált bleomicin komponenseket szűréssel elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben és pH-értékét 0,1 n vizes nátriumhidroxidoldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot az
1. példa A) lépésében ismertetett módon tisztítva 440 mg (25%) NK631 dihidrokloridot kapunk (réztartalmú forma) kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 7,985 egység/mg.
Teljesen analóg eredményhez jutunk, ha 1-etiJ-3-(2-dimetil-amino-propil)-karbodiimid helyett a következő aktiválószerek ekvivalens mennyiségét használjuk: di-p-nitrofenil-szulfit, tri-p-nitrofenil-foszfit, p-nitrofenil-triklóracetát, 5 N-hidroxi-szukcinimid, diciklohexil-karbodiimid (DCC), 1 -ciklohexil-3-(2-morfolmoetil)-karbodiimid, difenil-karbodiimid, di-p-toluil-karbodiimid, diízopropil-karbodiimid, pnitrofenil, pentaklórfenol vagy benzilalkohol.
5. példa
NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml metanolban feloldunk 9,0 g bleomicinsav 3-N-benzoilaminopropil-észter-monohidrokloridot (réztartalmú forma). Az oldathoz 0 ’C-on hozzáadunk 9,16 g aminovegyületet. A reakcióelegyet 40 órán át 0 ’C-on keverjük, a 20 reakcióelegyhez hideg acetont adunk, majd a kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk és feloldjuk 300 ml desztillált vízben. Az oldat pH-értékét azonnal 6,0-ra állítjuk be 0,1 n vizes sósavoldat segítségével, majd a kapott oldatot felöntjük egy 1 liter CM-Sephadex® C—25 (NHÍ 25 típus) gyantával megtöltött oszlopra, amelyet előzőleg 0,05 mólos vizes ammóniumklorid-oldattal kezeltünk. A bleomicinek az oszlopon abszorbeálódnak. Az eluáláshoz vizes ammóniumklorid-oldatot használunk, és az eluálást úgy hajtjuk végre, hogy az oszlopon 10 liter eluálószert engedünk 30 keresztül, amelyben az ammóniumklorid koncentrációja fokozatosan nő 0,05 mólról 1,0 mólra. A bleomicinsav el nem reagált 3-N-benzoilaminopropil-észtere a 0,2 mólos frakcióban, míg az NK631 a 0,45 mólos frakcióban mutatható ki. Mindkét frakció ultraibolya abszorpciót mutat a 277 ιημ-os 35 értéknél. A frakciókat külön-külön összegyűjtjük. Az NK631-et tartalmazó frakciót felöntjük egy 1,3 liter Amberlite® XAD—2 gyantával megtöltött oszlopra. Az oszlopot ezután alaposan átmossuk vízzel és 0,01 n metanolos-vizes sósav-oldattal eluáljuk, ahol a sósav és a metanolos-vizes 40 fázis térfogataránya 4:1. Összesen 2,5 liter kék színű frakciót gyűjtünk össze, amely 292 mp-nál mutat ultraibolya abszorpciósmaximumot. A metanolt ledesztilláljuk, a pH-értéket Dowex® 44 (OH ’ típus) gyantával 6,0-ra állítjuk be. Fagyasztva szárítással 8,2 g (90%) NK631 dihidrokloridot 45 (réztartalmú forma) kapunk, kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,030 egység/mg.
Hasonló kezeléssel 910 mg el nem reagált bleomicinsav
3-N-benzoilaminopropil-észter-monoklorid (réztartalmú 50 forma) nyerhető ki.
Analóg eredményhez jutunk, ha a bleomicinsav-3-Ν-benzoil-aminopropil-észter-monohidroklorid helyett 3szukcinil-aminopropil-észter-monohidrokloridból indulunk 55 tó.
6. példa
NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml metanolban feloldunk 950 mg bleomicinsav 3-N-p-toluol-szulfonil-amino-propil-észter-monohidrokloridot (réztartalmú forma). Az oldatot 0 °C-on keverjük és hozzá65 adunk 980 mg amino-vegyületet, majd a keverést 0 ’C-on 48
-8180894 órán át folytatjuk. A reakcióelegyhez keverés közben a bleomicin komponensek kicsapása céljából 15 ml hideg acetont adunk. A csapadékot szűréssel elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben, és pH-értékét 0,1 n vizes sósav-oldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott oldatot az 5. példa A) lépésében leírt módon tisztítva 833 mg (85%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,010 egység/mg.
7. példa
NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml dimetilformamidban feloldunk 850 mg bleomicinsav
3-acetilamino-propilészter-monohidrokloridot (réztartalmú forma). Az oldathoz 0 °C-on, keverés közben, hozzáadunk 950 mg amino-vegyületet, és az elegyet 0 °C-on 45 órán át keverjük. A reakcióelegyhez keverés közben a bleomicin komponensek kicsapása céljából 20 ml hideg acetont adunk. A csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízzel és a kapott oldat pHértékét 0,1 n vizes sósav-oldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott oldatot az 5. példa A) lépésében ismertetett módon kezelve 570 mg (63%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk, kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,010 egység/mg.
8. példa
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml dimetilszulfoxidban feloldunk 900 mg bleomicinsav
3-N-(2,4-dinitrofenil)-aminopropil-észter-monohidrokloridot (réztartalmú forma). A kapott oldathoz 0°C-on keverés közben hozzáadunk 793 mg amino-vegyületet, és az elegyet 24 órán át 0°C-on keverjük. A reakcióelegyhez keverés közben 15 ml hideg acetont adunk. A kivált csapadékot szűréssel elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben, és pH-értékét 0,1 n vizes sósavoldattal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot az 5. példa
A) lépésében leírt eljárással tisztítva 690 mg (78%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,010 egység/mg.
Analóg eredményhez jutunk, ha bleomicinsav-3-N-(2,4dinitro-fenil)-aminopropil-észter-monohidroklorid helyett bleomicinsav-3-(3,5-dimetil-3-oxo-ciklohexen-1 -il)-aminopropil-észter-monohidrokloridból vagy bleomicinsav-3-benzil-aminopropil-észter-monohidrokloridból indulunk ki.
9. példa
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) és a rézmentes dihidroklorid szintézise
A) lépés: 10 ml metanolban feloldunk 1,0 g bleomicinsav3-aminopropil-észter-dihidrokloridot (réztartalmú forma).
Az oldathoz erőteljes keverés közben 30 perc alatt hozzácsepegtetünk 104 mg benzoilkloridot, miközben az oldat pHértékét 1,4-diazabiciklo-[2,2,2]-oktán hozzáadásával a 6,5 —7,5 tartományban tartjuk. A reakcióelegyet további 30 percen át keverjük, majd betöményítjük 2 ml térfogatra. A 0 °C-ra lehűtött, koncentrált anyaghoz keverés közben
1,1 g amino-vegyületet adunk és az elegyet 72 órán át 0 °C-on keverjük. A reakcióelegyhez keverés közben hozzáadunk 6 ml hideg acetont, majd a bleomicin komponensekből álló csapadékot szűréssel elkülönítjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben, és az oldat pH-értékét 0,1 n vizes sósav-oldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot felöntjük egy 100 ml CM-Sephadex® (NHÍ típus) gyantával megtöltött, előzőleg 0,05 mólos vizes ammóniumklorid-oldattal kezelt oszlopra, ahol a bleomicin komponensek abszorbeálódnak. Az adszorbeált anyagot az
5. példa A) lépésében ismertetett módon feldolgozva 779 mg (73%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,000 egység/mg.
Ezen felül, 240 mg el nem reagált bleomicinsav 3-N-benzoilamino-propilészter-monohidroklorid (réztartalmú forma) nyerhető vissza.
B) lépés: 20 ml desztillált vízben feloldunk 700 ml a fenti
A) lépésben előállított NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma). A kapott oldatot felöntjük egy 65 ml Diaion® HP —40 gyantával megtöltött, és előzőleg desztillált vízzel átmosott oszlop tetejére, ahol a bleomicin komponensek abszorbeálódnak. Az oszlopot ezután átmossuk EDTA-Na2 5%-os vizes oldatának 200 ml-ével, majd 250 ml 5%-os vizes nátriumklorid-oldattal és végül 100 ml desztillált vízzel. Ezután az oszlopot metanol és 0,0025 n vizes sósav-oldat 1: 1 térfogatarányú elegyével eluáljuk, és 98 ml olyan frakciót gyűjtünk össze, amely 290 mg-nál ultraibolya abszorpciót mutat. A metanolt vákuumban ledesztilláljuk, a visszamaradó folyadék pH-értékét pedig Dowex® 44 (OH típus) gyantával 6,0-ra állítjuk be. Fagyasztva szárítással 658 mg (98%) NK631 dihidrokloridot (rézmentes forma) kapunk, világos sárgásfehér amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 7,834 egység/mg.
10. példa
Az NK631 monoszulfát (réztartalmú forma) és diacetátja (rézmentes forma) szintézise
A) lépés: 10 ml metanolban feloldunk 1,0 g bleomicinsav-3-aminopropilészter-dihidrokloridot (réztartalmú forma). Az oldathoz szobahőmérsékleten, erőteljes keverés közben, 30 perc alatt hozzácsepegtetünk 104 mg benzoilkloridot, miközben az oldat pH-értékét N-metil-morfolin hozzáadásával az 5,0—7,5 tartományban tartjuk. A reakcióelegyet további 30 percen át keverjük, majd 50 ml aceton hozzáadásával kicsapjuk a bleomicin komponenseket. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, és ismét feloldjuk 3 ml metanolban. A metanolos oldathoz 0 °C-on keverés közben hozzáadunk 597 mg amino-vegyületet és az elegyet 42 órán át 0 °C-on keverjük. A reakcióelegyhez keverés közben 10 ml hideg acetont adunk. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben és az oldat pH-értékét 0,1 n vizes sósav-oldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A vizes oldatot az
5. példa A) lépésében ismertetett módon CM-Sephadex® gyantával kezeljük. A reakciótermékeket tartalmazó frakci-
-9180894 ót felöntjük egy 65 ml Diaion® HP—40 gyantával megtöltött oszlopra, amelyet előzőleg desztillált vízzel átmosunk, ahol a bleomicin komponensek adszorbeálódnak a gyantán. Vízzel történő mosás után az adszorbeált fázist metanol és 0,01 n vizes kénsavoldat 1:1 térfogatarányú elegyével eluáljuk, és 130 ml térfogatban olyan frakciót gyűjtünk össze, amely 292 mp-nál ultraibolya abszorpciót mutat. A metanolt ledesztilláljuk, a visszamaradó folyadék pH-értékét pedig Dowex® 44 (OH ' típus) gyantával 6,0-ra állítjuk be. Fagyasztásos szárítással 813 mg (75%) NK631 monoszulfátot (réztartalmú forma) kapunk kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 7,819 egység/mg.
B) lépés: A fenti A) lépésben kapott NK631 monoszulfát (réztartalmú forma) 800mg-nyi mennyiségéből a rezet ugyanazzal az eljárással távolítjuk el, amelyet a 9. példa B) lépésében ismertettünk, azzal a kivétellel, hogy az eluálás során 5%-os vizes nátriumklorid-oldat és metanol és egy 0,0025 n vizes sósav-oldat 1 : 1 térfogatarányú elegye helyett 5%-os vizes ammóniumacetát-oldatot és metanol és 0,01 n vizes ecetsav 1:1 térfogatarányú elegyét használjuk. Ezzel az eljárással 748 mg (96%) NK631 diacetátot (rézmentes forma) kapunk, világos sárgásfehér amorf por formájában.
Az alábbiakban megadjuk a termék ultraibolya abszorpciós maximumát és antimikrobiális potenciálját:
mg (Éli 0,1 n HC1)
290 (105)
Antimikrobiális potenciál: 7,620 egység/mg
11. példa
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) és a rézmentes dihidroklorid szintézise
A) lépés: 3 ml metanolban feloldunk l,0g bleomicinsav-3-aminopropilészter-dihidrokloridot. A kapott oldathoz szobahőmérsékleten, 60 perc alatt, hozzácsepegtetünk 193 mg S-terc-butoxikarbonil-4,6-dimetil-2-merkapto-pirimidint, miközben az elegy pH-értékét trietilamin 14%-os metanolos oldatának hozzáadásával a 6,0—7,4 tartományban tartjuk. Az elegyet további 2 órán keresztül keverve a
3-N-terc-butoxikarbonil-aminopropil-észterhez jutunk. Az elegyet lehűtjük 0 °C-ra, hozzákeverünk 1,2 g amino-vegyületet és a reakcióelegyet 70 órán át keverjük. A reakcióelegyhez hozzáadunk 10 ml hideg acetont. A kivált bleomicin komponenseket szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben és az oldat pH-értékét 0,1 n vizes sósav-oldattal azonnal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot az 5. példa A) lépésében ismertetett eljárással tisztítva 597 mg (56%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk, kék amorf por formájában, melynek antimikrobiális potenciálja 8,010 egység/mg.
B) lépés: 50 ml metanolban feloldunk 500 mg NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma), amelyet a fenti A) lépésben kaptunk. Az oldatba erőteljes keverés közben az oldatba merített, 1 mm belső átmérőjű fúvókán keresztül hidrogénszulfidot vezetünk 1 órán keresztül, ami ahhoz vezet, hogy az oldatban a hidrogénszulfid nagy feleslegben oldódik. A hidrogénszulfid bevezetésének megszüntetése után az oldatot 30 percen át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A kivált rézszulfidot szűréssel összegyűjtjük és hidrogénszulfiddal telített 50 ml metanollal mossuk. A szűrletet és a mosófolyadékokat egyesítjük, és a metanolt és hidrogénszul- fidot csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk 50 ml metanolban és elkeverjük 100 ml etiléterrel. A kivált csapadékot szűréssel összegyűjtjük, éterrel mossuk és szárítjuk. 394 mg (82%) NK631 dihidrokloridot (rézmentes forma) kapunk, világos sárgásfehér amorf por formájában, melynek antimikrobiális potenciálja 7820 egység/mg.
12. példa
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) és a rézmentes dihidroklorid szintézise
A) lépés: 2 ml metanolban feloldunk 1,0 g bleomicinsav-3-aminopropil-észter-dihidrokloridot (réztartalmú forma). A kapott oldathoz szobahőmérsékleten erőteljes keverés közben hozzáadunk 98 mg szalicilaldehidet, miközben az oldat pH-értékét trietilamin hozzáadásával a 7,0—7,4 tartományban tartjuk. így a bleomicinsav-3-N-szalicilidén-iminopropil-észterhez jutunk. A keverést 1 órán át folytatjuk, majd a reakcióelegyet lehűtjük 0 'C-ra, és keverés közben hozzáadunk 600 mg aminovegyületet. Az elegyet 30 órán át keverjük. A reakcióelegyhez a bleomicin komponensek kicsapása céljából 10 ml hideg acetont adunk. A csapadékot szűréssel összegyűjtjük, acetonnal mossuk, majd feloldjuk 30 ml desztillált vízben és pH-értékét 0,1 n vizes sósavoldattal 6,0-ra állítjuk be. A kapott vizes oldatot az 5. példa A) lépésében ismertetett módon tisztítva 501 mg (47%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk, melynek antimikrobiális potenciálja 8,013 egység/mg.
B) lépés: 25 ml 0,5 n vizes sósav-oldatban feloldunk 450 mg a fenti A) lépésben előállított NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma). A kapott oldathoz hozzáadunk 25 ml kloroformos oldatot, amely 0,2% ditizont (difenil-tiokarbazon) tartalmaz. Gyors felrázás és összekeverés után az elegyet állni hagyjuk, amikor két réteg különül el, az alsó, kloroformos réteget eltávolítjuk és a fenti réteget elkeverjük 25 ml friss, ditizont tartalmazó kloroformos oldattal. A fenti eljárást megismételve a fázisok szétválasztására, összesen nyolc alkalommal, a fenti réteget (vizes réteg) végül kloroformmal mossuk és az elkülönített vizes réteg pH-értékét DowexR 44 (OH típus) gyantával 6,0-ra állítjuk be. A vizes réteget csökkentett nyomáson szárazra párolva 415 mg (96%) NK631 dihidrokloridot (rézmentes. forma) kapunk világos, sárgásfehér amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 7,845 egység/mg.
13. példa
Az NK631 dihidroklorid (réztartalmú forma) szintézise ml metanolban feloldunk 1,0 g bleomicinsav-3-aminopropil-észter-dihidrokloridot (réztartalmú forma). A kapott oldatot lehűtjük 0 °C-ra és keverés közben hozzáadunk 1,0 g amino-vegyületet, majd az elegyet további 72 órán át keverjük. A reakcióelegyhez keverés közben 6 ml hideg acetont adva, kicsapjuk a bleomicin komponenseket. A csapadékot az 5. példa A) lépésében leírt módon tisztítva 128 mg (12%) NK631 dihidrokloridot (réztartalmú forma) kapunk, kék amorf por formájában, amelynek antimikrobiális potenciálja 8,015 egység/mg.
-10180894
1. referenciapélda
Az N-[(S)-l'-fenil-etil],3-diaminopropán szintézise g (S)-l-fenil-etil-aminhoz 0°C-on, keverés és hűtés közben, hozzáadunk 33 g akrilnitrilt. Az elegyet visszafolyató hűtővel és kalciumkloridos csővel ellátott lombikba töltjük, felmelegítjük 93 °C-ra és ezen a hőmérsékleten 18 órán át keverjük. A reakció teljessé válása után a reakcióelegyet csökkentett nyomáson végzett desztillálással megszabadítjuk az akrilonitril feleslegétől. A maradékot csökkentett nyomáson desztilláljuk és összegyűjtjük a 142—145 °C/ 7Hgmm-en forró frakciót. így 53,5 g 3-[(S)-l'-fenil-etil-aminoj-propionitrilhez jutunk. A nitrilt 5 g Raney-nikkel W-7-el együtt autoklávba töltjük és hozzáadunk 50 ml, 15% ammóniát tartalmazó etanolt. Az elegyet 1000 fordulat/perc sebességgel 1,5 órán át keverjük, 50—58 °C-on, 100—40 kg/ cm2 hidrogén parciális nyomás mellett. A redukció teljessé válása után a reakcióelegyet csökkentett nyomáson desztilláljuk. A 95—103 °C/2 Hgmm-en forró frakciót összegyűjtve 48,3 g(66%) N-[(S)-r-fenil-etil]-l,3-diamionopropánt kapunk.

Claims (9)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. Eljárás az (I) képletü 3-[(S)-l'-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicin gyógyászati szempontból elfogadható sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy a (II) képletü bleomicinsavnakegy a karboxilcsoporton 6-klór-l-p-klórbenzol-szulfonil-oxibenzotriazollal, N-etil-5-fenil-izooxazolium-3'-szulfonáttal, N-terc-butil-5-metil-izooxazolium-perkloráttal, N-etoxikarbonil-2-etoxi-l,2-dihidrokinolinnaI, di-p- 35 -nitrofenil-szulfittal, tri-p-nitrofenil-foszfittal, p-nitrofenil-triklóracetáttal, N-hidroxi-szukcinimiddel, diciklohexilkarbodiimiddel, l-etil-3-(3-dimetil-amino-propil)-karbodiimiddel, l-ciklohexil-3-(2-morfolino-etil)-karbodiimiddel, difenil-karbodiimiddel, di-p-toluil-karbodiimiddel, diizopropil-karbodiimiddel, p-nitro-fenollal, pentaklór-fenollal vagy benzilalkohollal aktivált származékát N-[(S)-l'-fenil-etil]-1,3-diamino-propánnal reagáltatjuk, a kapott 3-[(S)-r-fenil-amino]-propilamino-bleomicint gyógyászati szempontból elfogadható sója formájában elkülönítjük, és kívánt esetben egy kapott sót átalakítunk egy másik, gyógyászati szempontból elfogadható sóvá. (Elsőbbsége: 1977. október 14.)
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az (I) képletü vegyület hidrokloridjának, szulfátjának vagy acetátjának előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) képletü vegyület elkülönítését oszlopkromatográfiásan, eluálószer- ként sósavval, kénsawal vagy ecetsavval megsavanyitott vizes metanol-oldatot használva végezzük. (Elsőbbsége:
    1977. október 14.)
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, 5 azzal jellemezve, hogy 1 mólekvivalens bleomicinsavra számítva 1—10 mólekvivalens N-[(S)-l'-fenil-etil]-l,3-diaminopropánt használunk. (Elsőbbsége: 1977. október 14.)
  4. 4. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) képletü 3-[(S)-r-fenil-etil-amino]-propil-
    10 amino-bleomicinnek egy az 1—3. igénypontok bármelyike szerint előállított, gyógyászati szempontból elfogadható sóját egy vagy több gyógyszerészeti vivőanyaggal és adott esetben egyéb szokásos adalékanyaggal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. (Elsőbbsége: 1977. október 14.) 15
  5. 5. Eljárás az (I) képletü 3-[(S)-r-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicin gyógyászati szempontból elfogadható sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy a (II) képletü bleomicinsav 3-aminopropil-, 3-acetil-aminopropil-, 3-szukcinilaminopropil-, 3-benzoil-aminopropil-, 3-benzil-aminopro20 pil-, 3-p-toluol-szulfonil-aminopropil-, 3-(2,4-dinitrofenil)-aminopropil-, 3-(3,4-dimetil-3-oxo-ciklohexen-1 -il)-aminopropil-, 3-(terc-butoxikarbonil)-aminopropil- vagy 3-szalicilidén-aminopropil-észterének egy sóját N-[(S)-l'-feniI-etil]-1,3-diamino-propánnal reagáltatjuk, a kapott 3-[(S)-r-fenilamino]-propilamino-bleomicint gyógyászatilag elfogadható sója formájában elkülönítjük, és kívánt esetben egy kapott sót átalakítunk egy másik, gyógyászati szempontból elfogadható sóvá. (Elsőbbsége: 1977. július 1.)
    30
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja az (I) képletü vegyület hidrokloridjának, szulfátjának vagy acetátjának előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) képletü vegyület elkülönítését oszlopkromatográfiásan, eluálószerként sósavval, kénsawal vagy ecetsawal megsavanyított vizes metanol-oldatot használva, végezzük. (Elsőbbsége:
    1977. július 1.)
  7. 7. Az 5. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a bleomicinsav 3-aminopropil-észterének dihidrokloridjából indulunk ki. (Elsőbbsége: 1977.
    40 július 1.)
  8. 8. Az 5—7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 1-mólekvivalens kiindulási anyagként használt bleomicinsav-3-aminopropilészterre vagy -N-monoszubsztituált -észter-származékra szá-
    45 mítva 1—10 mól-ekvivalens N-[(S)-l'-fenil-etil]-l,3-diamino-propánt használunk. (Elsőbbsége: 1977. július 1.)
  9. 9. Eljárás gyógyszerkészítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy az (I) képletü 3-[(S)-l'-fenil-etil-amino]-propilamino-bleomicinnek egy az 5—8. igénypontok bármelyike
    50 szerint előállított, gyógyászati szempontból elfogadható sóját egy vagy több gyógyszerészeti vivőanyaggal és adot( esetben egyéb szokásos adalékanyaggal összekeverve gyógyszerkészítménnyé alakítjuk. (Elsőbbsége: 1977. július 1.)
HU78NI216A 1977-07-01 1978-06-30 Process for producing pharmaceutically acceptable salts of 3-square bracket-bracket-s-bracket closed-1-comma above-phenyl-ethyl-amino-square aracket closed-propylamino-bleomycine HU180894B (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP7777077A JPS5414980A (en) 1977-07-01 1977-07-01 3-((s)-1'-phenylethylamino)propylaminobleomycin
JP12248577A JPS5463089A (en) 1977-10-14 1977-10-14 Preparation of 3-(s)-1' phenylethylaminopropylamino-bleomycin and its non-toxic salt

Publications (1)

Publication Number Publication Date
HU180894B true HU180894B (en) 1983-05-30

Family

ID=26418836

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU78NI216A HU180894B (en) 1977-07-01 1978-06-30 Process for producing pharmaceutically acceptable salts of 3-square bracket-bracket-s-bracket closed-1-comma above-phenyl-ethyl-amino-square aracket closed-propylamino-bleomycine

Country Status (12)

Country Link
US (2) US4195018A (hu)
CA (1) CA1078831A (hu)
CH (1) CH634582A5 (hu)
DE (1) DE2828933A1 (hu)
DK (1) DK157081C (hu)
ES (1) ES471257A1 (hu)
FR (1) FR2396021A1 (hu)
GB (1) GB2001962B (hu)
HU (1) HU180894B (hu)
IT (1) IT1105081B (hu)
NL (1) NL7806947A (hu)
SE (1) SE7807418L (hu)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4267102A (en) * 1979-03-05 1981-05-12 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Bleomycin group antibiotics
US4314028A (en) * 1979-07-13 1982-02-02 Bristol-Myers Company Fermentation process for producing tallysomycin compounds
US4246400A (en) * 1979-07-13 1981-01-20 Bristol-Myers Company Tallysomycin compounds
JPS5625197A (en) * 1979-07-19 1981-03-10 Microbial Chem Res Found Cleomycin and its preparation
EP0055716B1 (en) * 1980-06-24 1984-11-07 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Amplified antibiotic and antitumor agents
JPS58116496A (ja) * 1981-12-29 1983-07-11 Nippon Kayaku Co Ltd アミドｎ置換ブレオマイシン類
JPS58116497A (ja) * 1981-12-29 1983-07-11 Microbial Chem Res Found アミノプロピルアミノブレオマイシン誘導体及びその製造法
US4810777A (en) * 1987-03-04 1989-03-07 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Antimicrobial compounds

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3846400A (en) * 1969-02-15 1974-11-05 Microbial Chem Res Found Novel process for producing antibiotics bleomycin
US3922262A (en) * 1971-04-28 1975-11-25 Nippon Kayaku Kk N-Substituted derivatives of bleomycins
US4032567A (en) * 1972-02-16 1977-06-28 Schering Aktiengesellschaft Triiodoisophthalic acid monoamino acid amides, process for the preparation thereof, and use thereof as x-ray contrast media
JPS5739751B2 (hu) * 1972-03-03 1982-08-23
US3971822A (en) * 1974-07-19 1976-07-27 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Aspartyl amide sweetening agents
US4007219A (en) * 1974-08-20 1977-02-08 Hoffmann-La Roche Inc. Benzophenone glycinamide derivatives
GB1585076A (en) * 1976-07-13 1981-02-25 Roche Products Ltd Peptides of phosphonic and phosphinic acids

Also Published As

Publication number Publication date
DE2828933B2 (hu) 1980-01-10
NL7806947A (nl) 1979-01-03
DK157081C (da) 1990-04-09
SE7807418L (sv) 1979-01-02
DE2828933A1 (de) 1979-01-04
US4238391A (en) 1980-12-09
FR2396021A1 (fr) 1979-01-26
FR2396021B1 (hu) 1983-01-07
DE2828933C3 (hu) 1980-09-11
IT7850131A0 (it) 1978-06-30
IT1105081B (it) 1985-10-28
US4195018A (en) 1980-03-25
ES471257A1 (es) 1979-01-16
GB2001962B (en) 1982-02-10
DK299578A (da) 1979-01-02
CH634582A5 (de) 1983-02-15
CA1078831A (en) 1980-06-03
DK157081B (da) 1989-11-06
GB2001962A (en) 1979-02-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4767753A (en) Methods and compositions for preventing ulcers
US4658058A (en) 11-O-methylspergualin
US3853837A (en) Novel nonapeptide amide analogs of luteinizing hormone releasing factor
US4216208A (en) N-Acyl derivatives of glucosamines having antitumor chemotherapeutic activity
EP0280741B1 (en) Mitomycin derivatives
DD160417A5 (de) Verfahren zur herstellung von n-(vinblastin-23-oyl)-aminosaeurederivate
JPS6227079B2 (hu)
US4314999A (en) N-Acyl derivatives of glucosamine having antitumor chemotherapeutic acitivity
HU180894B (en) Process for producing pharmaceutically acceptable salts of 3-square bracket-bracket-s-bracket closed-1-comma above-phenyl-ethyl-amino-square aracket closed-propylamino-bleomycine
EP0241797B1 (en) Novel spergualin-related compounds and process for producing the same
US4430346A (en) Novel carcinostatic substance and process for synthesis thereof
US5051404A (en) Tripeptide compounds having hypotensive activity
US4473554A (en) Bestatin-related compounds as immunopotentiator
JPS6058997A (ja) ４’−ハロ−アントラサイクリングリコシド類
JP4615712B2 (ja) ５−イミノ−１３−デオキシアントラサイクリン誘導体、その使用、及び、その調製方法
EP0309971A2 (en) New spergualin-related compound and pharmaceutical composition
US3700651A (en) L-leucyl-l-leucyl-l-valyl-l-tyrosinol
CS205126B2 (en) Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof
DE3341571A1 (de) Neue antibiotika, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung als arzneimittel und zwischenprodukte zu ihrer herstellung
KR810001407B1 (ko) 3-〔(s)-1'-페닐에틸 아미노〕프로필 아미노 브레오마이신의 제조법
JPS5858342B2 (ja) ドパミン誘導体およびドパミン誘導体を含有する医薬
HU187835B (en) Process for preparing /amido/-n-substituted bleomycins and acid additive salts thereof
CS205127B2 (cs) Způsob výroby 3-[ (S)-l‘-řenylethylamino]propyIaminobleomycinu
JPS6342640B2 (hu)
EP0600462A1 (en) Reverse transcriptase inhibitors and antiviral agents

Legal Events

Date Code Title Description
HU90 Patent valid on 900628
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee