CS205127B2 - Způsob výroby 3-[ (S)-l‘-řenylethylamino]propyIaminobleomycinu - Google Patents
Způsob výroby 3-[ (S)-l‘-řenylethylamino]propyIaminobleomycinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS205127B2 CS205127B2 CS795926A CS592679A CS205127B2 CS 205127 B2 CS205127 B2 CS 205127B2 CS 795926 A CS795926 A CS 795926A CS 592679 A CS592679 A CS 592679A CS 205127 B2 CS205127 B2 CS 205127B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- ester
- bleomycin
- copper
- aminopropyl
- solution
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 84
- -1 3-aminopropyl ester Chemical class 0.000 claims description 51
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 44
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical class CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 claims description 7
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 6
- NQONXAAXIFYYMX-JTQLQIEISA-N n'-[(1s)-1-phenylethyl]propane-1,3-diamine Chemical compound NCCCN[C@@H](C)C1=CC=CC=C1 NQONXAAXIFYYMX-JTQLQIEISA-N 0.000 claims description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 101100025420 Arabidopsis thaliana XI-C gene Proteins 0.000 claims 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 81
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical class N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 79
- 108010057150 Peplomycin Proteins 0.000 description 71
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 68
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical group [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 65
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 64
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 64
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 39
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 22
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 20
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 19
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 18
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 18
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 12
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 10
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 9
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 9
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 8
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N Methylcholanthrene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC4=CC=C(C)C(CC5)=C4C5=C3C=CC2=C1 PPQNQXQZIWHJRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 description 5
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone Chemical compound C=1C=CC=CC=1N=NC(=S)NNC1=CC=CC=C1 UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MRNLLBXPSWMYCK-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[[2-[[4-[[2-[[6-amino-2-[3-amino-1-[(2,3-diamino-3-oxopropyl)amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[3-[4-carbamoyloxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3-(1h-imidazol-5-y Chemical compound N=1C(C=2SC=C(N=2)C(O)=O)=CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C MRNLLBXPSWMYCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 3
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N pyridine Substances C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- RQEUFEKYXDPUSK-ZETCQYMHSA-N (1S)-1-phenylethanamine Chemical compound C[C@H](N)C1=CC=CC=C1 RQEUFEKYXDPUSK-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMBCNGLMRSLPH-UHFFFAOYSA-N O.OC=O.CC(O)=O Chemical compound O.OC=O.CC(O)=O FWMBCNGLMRSLPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007868 Raney catalyst Substances 0.000 description 2
- NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N Raney nickel Chemical compound [Al].[Ni] NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000564 Raney nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N benzoyl chloride Chemical compound ClC(=O)C1=CC=CC=C1 PASDCCFISLVPSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 108700023993 bleomycinic acid Proteins 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- AFHFWLNCUQBZAU-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol 2-pyridin-2-ylacetic acid hydrate Chemical compound O.CCCO.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 AFHFWLNCUQBZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N propionitrile Chemical compound CCC#N FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N salicylaldehyde Chemical compound OC1=CC=CC=C1C=O SMQUZDBALVYZAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTTATHOUSOIFOQ-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,4,6,7,8,8a-octahydropyrrolo[1,2-a]pyrazine Chemical compound C1NCCN2CCCC21 FTTATHOUSOIFOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QVCUKHQDEZNNOC-UHFFFAOYSA-N 1,2-diazabicyclo[2.2.2]octane Chemical compound C1CC2CCN1NC2 QVCUKHQDEZNNOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 1-(2H-benzotriazol-5-yl)-3-methyl-8-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carbonyl]-1,3,8-triazaspiro[4.5]decane-2,4-dione Chemical compound CN1C(=O)N(c2ccc3n[nH]nc3c2)C2(CCN(CC2)C(=O)c2cnc(NCc3cccc(OC(F)(F)F)c3)nc2)C1=O YIWGJFPJRAEKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYOGDGGUQFOAQE-UHFFFAOYSA-N 3-aminopropyl 2-[2-[2-[[2-[[4-[[2-[[6-amino-2-[3-amino-1-[(2,3-diamino-3-oxopropyl)amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[3-[4-carbamoyloxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3-(1 Chemical class N=1C(C=2SC=C(N=2)C(=O)OCCCN)=CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C RYOGDGGUQFOAQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SZKGHIVKMXYMDC-UHFFFAOYSA-N S(=O)(=O)(O)O.Cl.Cl Chemical compound S(=O)(=O)(O)O.Cl.Cl SZKGHIVKMXYMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical class C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007098 aminolysis reaction Methods 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002036 chloroform fraction Substances 0.000 description 1
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- BWFPGXWASODCHM-UHFFFAOYSA-N copper monosulfide Chemical compound [Cu]=S BWFPGXWASODCHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N octane Chemical compound CCCCCCCC TVMXDCGIABBOFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 201000008261 skin carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 231100000456 subacute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- POTDIELOEHTPJN-UHFFFAOYSA-N tert-butyl (4,6-dimethylpyrimidin-2-yl)sulfanylformate Chemical compound CC1=CC(C)=NC(SC(=O)OC(C)(C)C)=N1 POTDIELOEHTPJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005979 thermal decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N toluene Substances CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu výroby nového 3-[ (SJ-lďenylethy lamino Jpropylaminobleomycinu vzorce I.
| Ό-Χ | X* |
| f | 2 |
| J-O | o |
| •\'ž | |
| X |
a jeho netoxických solí.
Bleomyciny jsou karclnostatická antibiotika objevená Umezawou, jedním z autorů předloženého vynálezu, a jeho spolupracovníky [Journal of Antibiotics, 19A, 200 (1966)]. Jsou to ve vodě rozpustné basické glykopeptidy produkované kmenem aktinomycet Streptomyces verticilus, které snadno tvoří cheláty s jedním atomem dvojmocné mědi. Při normální kultivaci je produkováno 16 složek bleomycinu, které byly všechny isolovány [viz například Umezawa a spolupracovníci, Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1966)]. Ze známých bleomycinů se k léčení rakoviny v klinické praxi všeobecně používá směsi mědi prostých bleomycinů Ai, Az, As, B2 a demethyl-Az (pro tuto směs se v dalším popisu používá názvu „bleomycino-vý komplex“). Zmíněný bleomycinový komplex se osvědčil hlavně v terapii epidermálních karcinomů kůže, karcinomů hlavy a krku, rakoviny krčku děložního, plic a maligního lymfomu.
Pokud se týká vedlejších účinků, bylo referováno,. že u léčených pacientů dochází k fibrose plic a k dalšímu nežádoucím účinkům. Z vedlejších účinků vyvolávaných bleomyciny je nejobávanější fibrosa plic. Lze si snadno představit že karclnostatická účinnost bleomycinů by se při klinické aplikaci ještě více projevila, kdyby se shora uvedený vedlejší účinek podařilo více či méně potlačit.
Vzhledem k těmto okolnostem zabývali se autoři vynálezu několik let synthesou růz205127 ných bleomycinů a v testech na zvířatech sledovali jejich karcinostatickou účinnost a toxicitu, včetně vlivu na vyvolání fibrosy plic jako hlavního testu. Výsledkem jejich studia bylo, že objevili 3-[ (S)-l’-f enylethylamino Jpropylaminobleomycin (v dalším popisu je tento nový bleomycin označován symbolem „NK 631”, který zahrnuje jak formu obsahující měď, tak formu prostou mědi), který je novým bleomycinem, získaným reakcí reaktivního derivátu karboxylové skupiny bleomycinové kyseliny s N-[(S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanem, a u kterého je výrazně potlačen vedlejší účinek způsobující fibrosu plic, přičemž jeho karcinostatická účinnost není ve srovnání s komerčním bleomycinovým komplexem a jinými známými bleomyciny snížena. Na základě tohoto objevu byl realisován předložený vynález. Účelem vynálezu je zajistit způsob výroby nového bleomycinů vzorce I, 3-[ (S)-l’-fenového bleomycinů vzorce I, 3-[(S)-l’-fenylethylamino] propylaminobleomycinu, a jeho netoxických solí. Bližší podrobnosti vynálezu vyplynou z následujícího popisu.
Vynikající biologická aktivita nového bleomycinu vzorce I vyplývá z níže uvedených experimentálních testů.
Biologická účinnost bleomycinů NK 631 byla hodnocena tím způsobem, že byla srovnávána s účinností monosulfátu 3-[(R,S)-l’-f enylethylamino ] propylaminobleomycinu (formy prosté mědi) (v dalším popisu je pro tento bleomycin používáno označení „RS-forma”) a s účinností bleomycinového komplexu ve čtyřech následujících testech:
lj účinek na vyvolání fibrosy plic
2) antlneoplastická účinnost
3) antimikrobiální účinnost
4) toxicita.
Ke srovnání použitá RS forma bleomycinů byla získána fermentačním způsobem, popsaným v US patentu číslo 3 846 400.
1) Toxicita vůči plicím u myši (vliv na vznik nich injekcí, jednou denně, po dobu deseti fibrosy)
K testování byly použity dvanáctičetné skupiny myších samců kmene ICR ve stáří 15 týdnů. Každý testovaný farmaceutický přípravek byl aplikován v dávce 5 mg/kg. Dávky byly podávány ve formě intraperitoneálpo sobě následujících dnů. Po skončení aplikace látek byly myši chovány dalších 5 týdnů. Po uvedené době pozorování byly myši usmrceny a pitvou zjištěn rozsah fibrosy plic. Byl porovnán výskyt a stupeň fibrosy plic vyvolané u myší po podávání nového bleomycinů vzorce I, obchodního bleomycinového komplexu a RS formy antibiotika. Nalezené výsledky jsou uvedeny v tabulce
I.
Tabulka I Výskyt fibrosy
Počet myší s pulmonární Relativní fibrosou (%) hodnota
Stupeň onemocnění Celkové bodové zhodno- Relativní cení stupně fibrosy hodnota plicx: celkový počet vzorků
| Monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) | 4/12 | (0,33) | 0,36 | 6/36 | (0,17) | 0,25 |
| RS forma | 7/12 | (0,58) | 0,63 | 12/36 | (0,33) | 0,49 |
| Bleomycinový | ||||||
| komplex | 11/12 | (0,92) | 1,0 | 24/36 | (0,67) | 1,0 |
x Hodnocení stupně fibrosy plic:
bodu — žádná fibrosa bod — hromadění exudátu v plicních sklípcích a fibrose podobné změny v alveolárních přepážkách body — fibrosa na několika místech plic 4 body — roztroušená fibrosa bodů — fibrosa na více než dvou třetinách celé plochy plic
Jak je zřejmé z nalezených, výsledků, je fibrosa plic vyvolaná monosulfátem NK 631 (formou prostou mědi), ve srovnání s fibrosou plic vyvolanou RS formou antibio a bleomycinovým komplexem snížena asi na 1/2, popřípadě 1/3, pokud se týká výskytu, a asi na 1/2, popřípadě 1/4, pokud se týká stupně onemocnění. Z toho vyplývá výhodnost monosulfátu NK 631 pro klinické použití.
2. Antineoplastická účinnost — 1. Účinek in vitro na kultury HeLa Só buněk
Pro každý shora uvedený bleomycin bylo stanoveno procento inhibice růstu buněk po 72 hodinách kultivace v přítomnosti testovaného bleomycinu a vypočtena hodnota IDm. Bylo nalezeno, že látka NK 631 má IDso — 0,82 ,ug/ml, na rozdíl od bleomycinového komplexu, který má IDm = 1,70 ^g/ml, což znamená, že bleomycinový NK 631 inhibuje růst buněk dvakrát silněji než bleomycinový komplex. Hodnota IDso pro RS formu antibiotika je rovna 0,80 ^g/ml, což znamená, že jeho inhibiční efekt na růst buněk je srovnatelný s efektem monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi).
2—2. Karcinostatický účinek na myší Ehrlichův karcinom (solidní nádor)
Myším samcům kmene ICR, starým 6 týdnů, bylo transplantováno podkožně do tříselné oblasti každému po 2 X 106 buněk. Po 24 hodinách byl každé myši podán testovaný preparát stejným způsobem jak bylo popsáno výše v testu 1. Patnáctý den po subkutánní transplantaci byly myším nádory odstraněny a jejich hmotnosti byly srovnány s hmotnostní nádorů, které se vyvinuly u kontrolní skupiny myší, které nebyly ošetřeny, a bylo stanoveno procento inhibice.
Jak je zřejmé z tabulky 2, je karcinostatická účinnost monosulfátu NK 631 {formy prosté mědi) srovnatelná s účinností RS formy antibiotika a asi 1,4 X vyšší než účinnost bleomycinového komplexu.
Tabulka 2
Dávka Procenta inhibice mg/kg X 10 monosulfát NK 631 RS forma bleomycinový (prostý mědi] komplex
| 2,7 | 84 | 78 | 67 |
| 0,9 | 68 | 60 | 55 |
| 0,3 | 39 | 51 | 49 |
| 0,1 | 24 | 51 | 24 |
| 0,03 | 19 | 13 | 21 |
| 0 | 0 | 0 | 0 |
| ID50 | 0,35 | 0,31 | 0,49 |
| mg/kg/den |
| 2—3. Karcinostatická účinnost vůči ascitlckému hepatomu (ascitický typ) u krys | který byl podáván intraperitoneálně jednou denně po dobu deseti po sobě následujících dnů. Během 30 dnů po transplantaci byla | ||
| Krysám kmene Donryu bylo transplanto- | sledována hmotnost jednotlivých krys a po- | ||
| váno intraperitoneálně po 1 X 10® AH 66 | čet uhynulých a přežívajících zvířat. Výsled- | ||
| buněk. Za 24 hodin | po transplantaci bylo | ky jsou uvedeny v tabulce 3. | |
| započato s aplikací testovaného preparátu, | |||
| Tabulka 3 | |||
| Relativní hodnoty průměrného přežití zvířat | |||
| (počet dnů) | |||
| Dávka | Monosulfát NK 631 | RS forma | Bleomycinový |
| mg/kg X 10 | (prostý mědi) | antibiotika | komplex |
| 3,12 | 296 | 298 | 241 |
| 1,56 | 269 | 257 | 257 |
| 0,78 | 216 | 196 | 145 |
| 0,39 | 163 | 149 | 116 |
| 0,19 | 116 | 121 | 110 |
| 0 | 100 | 100 | 100 |
Jak vyplývá z tabulky 3, Je účinnost monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi) vůči AH 66 ascitickému hepatonu srovnatelná s účinností RS formy antibiotika a je ve všech dávkách vyšších než účinnost bleomycinového komplexu.
2—4. Inhibiční účinek vůči epidermálnímu karcinomu kůže vyvolanému 20-methylcholanthrenem
Roztok 20-methylcholanthrenu (dále označovaný jako ,,20-MC”) v acetonu byl dvakrát týdně, po dobu 18 týdnů, lokálně aplikován na ostříhaný hřbet myší kmene ddy (samci 10 týdnů staří). Za pět týdnů od začátku aplikace 20-MC bylo započato s podáváním testovaného preparátu, který byl aplikován intraperitoneálně v dávce 62,5 ug/myš, dvakrát týdně, po dobu 15 týdnů. Během prvního týdne po skončení podávání testovaného preparátu byla pathologicky vyšetřována oblast kůže, na kterou byl aplikován 20-MC a sledován výskyt karcinomu.
Jak vyplývá z tabulky 4, jsou monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) a RS-forma antibiotika o hěco málo účinnější pokud se týká inhibice karcinogenesy vyvolané 20-MC, než bleomycinový komplex.
Tabulka 4
Úmrtnost Výskyt Procento karcinomů (%) inhibice
| Monosulfát NK 631 (prostý mědi) | 5/11 (45,4) | 47,8 | |
| RS forma | 1/12 | 5/11 (45,5) | 47,8 |
| Bleomycinový komplex | 2/12 | 5/10 (50,0) | 42,5 |
| kontrola | 1/24 | 20/23 (86,9) | 0 |
Ze všech shora uvedených výsledků testů vyplývá, že monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) má ve srovnání s komerčním bleomycinovým komplexem zřetelně vyšší antineoplastickou účinnost.
3. Antimikrobiální účinnost
Antimikrobiální účinnost vůči mikroorganismů Mycobacterium 607 a Bacillus subtilis PCI byla zjišována diskovou metodou za použití bleomycinu Az jako standardu (1000 j/mg). Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.
Tabulka 5
M. 607 B. Sub monosulfát NK 631 (prostý mědi) 7 848
RS-forma 7 535 bleomycinový komplex 1 234
1550
1400
886
Jak vyplývá z tabulky 5, vykazují monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) a RS forma antibiotika mnohem vyšší antimikrobiální mohutnost než bleomycinový komplex.
4. Toxicita
4—1. Akutní toxicita u krys (LDso) při intraperitoneálním podávání
Jak vyplývá z tabulky 6, jsou hodnoty LDso u krysy nalezené pro monosulfát NK 631 (formy prosté mědi) přibližně stejně vysoké jako hodnoty nalezené u bleomycinového komplexu a RS formy antibiotika.
| 205127 | |||
| 11 | 12 | ||
| Tabulka | 6 LDso mg/kg | Meze spolehlivosti (5% hranice významnosti) | |
| monosulfát NK 631 (prostý mědi) | 155,0 | 133,6 — 179,8 | |
| krysa | RS forma | 150,6 | 129,0 — 170,6 |
| bleomycinový komplex | 168,0 | 130,0 — 217,0 |
4—2. Subakutní a chronická toxicita (formy prosté mědi) u krys a psů je srovnatelná s analogickou toxicitou bleomycinového komplexu. Je však třeba se speciálně zmínit o tom, že v místě vpichu injekce byla pozorována u psů nekrosa ve všech případech, kdy bylý podány vysoké dávky bleomycinového komplexu (90 injekcí v dávce 1,2 mg/kg), ale v žádném případě, kdy byla podána psům stejná dávka monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi). Toxicita monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi) vůči plícím je rovněž nižší než toxicita bleomycinového komplexu.
Z výše uvedených výsledků vyplývá, že toxicita monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi) jest srovnatelná s toxicitou bleomycinového komplexu, s výjimkou toxicity vůči plícím a nekrosy, které jsou podstatně nižší u NK 631.
5. Souhrn
Ze shora uvedených výsledků testů lze učinit závěr, že bleomycin NK 631 jest nová sloučenina mající následující výhodné vlastnosti:
a) extrémně nízkou toxicitu vůči plícím, b j antimikrobiální a antineoplastickou účinnost vyšší než komerční bleomycinový komplex, cj systémickou toxicitu srovnatelnou s toxicitou komerčního bleomycinového komplexu, a dj nízkou lokální toxicitu v místě vpichu injekce.
Z uvedených důvodů lze očekávat, že bleomycin NK 631 bude výhodný při klinickém použití.
Podstata výroby nového bleomycinu NK 631 shora uvedeného vzorce I způsobem podle vynálezu je v tom, že se 3-aminopropylester nebo N-monosubstituovaný 3-aminopropylester kyseliny bleomycinové vzorce II
HO, ,CI\ '
NH.
NH.
•c° ,'CH n Ho~.
CH c. 1
CH, i i sCHs
H i
zN\
N'^CJ <A>
h
O
II ^c.
CH HH
ť •C, /CH
O r H
WA0/H
ΪΗ /ox rO~'C'' '9 ” H
OH
H
N
ϊ
H
V ťC\xOHC\CH,OH \o y\c<\/OČ z Γ V I H OH °\ H
JC
OH (ID uvede do reakce v prostředí rozpouštědla s N-J (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanem při teplotě 0 až 80 °C po dobu 1 až 72 hodin, na jeden ekvivalent 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové nebo jeho N-monosubstituovaného derivátu se používá 1 až 10 ekvivalentů N-[(S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanu. N-Monosubstituovaný 3-aminopropylester se zvolí ze skupiny zahrnující
3-acetylaminopropylester, 3-sukcinylaminopropylester, 3-benzoylaminopropylester, 3-benzylaminopropylester, 3-p-toIuensulfonylaminopropylester, 3- (2,4-dinitrof enyl) aminopropylester, 3- (3,5-dimethyl-3-oxocyklohexen-l-yl)aminopropylester, 3-(terc.butoxykarbonyljaminopropylester a 3-(salicylidenjíminopropylester. Jako rozpouštědla se používá vody, methanolu, dimethylformamidu, dimethylsulfoxidu nebo jejich směsi. Výsledný produkt se převede působením kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou sírovou nebo kyselinou sírovou nebo kyselinou octovou na příslušnou netoxickou sůl.
Výchozí složka, N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropan, jest nová sloučenina synthetisovaná ponejprv autory tohoto vynálezu následujícím způsobem.
K fenylethylaminu, ochlazenému asi na 0 °C, se přidá asi ekvivalentní množství akrylonitrilu a reakce se dokončí zahříváním směsi na 80 °C až 100 °C po dobu 10 až 24 hodin. Přebytek akrylonitrilu se oddestiluje za sníženého tlaku a zbývající surový produkt se předestiluje za sníženého tlaku. Získaný 3-[ (S)-l’-fenylethylamino]propionitril se zredukuje obvyklým způsobem, například vodíkem v přítomnosti Raneyova niklu, a získá se žádaný N-[ (S]-l’-fenylethyíJ-l,3-diaminopropan (v dalším popisu je tato látka označována jako „aminosloučenina”). Fyzikálně-chemické vlastnosti uvedené aminosloučeniny jsou shrnuty v tabulce 7.
Tabulka 7
Fysikálně-chemické vlastnosti N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanu
Volná base Dibydrochlorid
1. Vzhled při teplotě místnosti bezbarvá kapalina bílé jehličkovité krystalky
2. Teplota tání
3. Teplota varu
4. Absorpční maxima v ultrafialové oblasti (nm)
5. Molekulární extinkční koeficient, ε (256 nm)
6. Specifická optická otáčívost [a]D 25
Dd2«
7. Hodnota RF při tenkovrstevné chromatografii, soustava n-propanol-pyridin-kys. octová-voda (15 : 10 : 3 : 12, V/V), deska žn. Avicel-SFR
8. Hodnota Rm při vysokovoltové elektroforose, soustava kys. mravenčí-kys. octová-voda (25 : 75 : 900, V/V), deska zn. Avicel-SFR,
800 V, 10 min., Rm alaninu = 1,0
9. IČ absorpční spektrum, cm-1, KBr tableta až 103 °C při 0,267 kPa
241, 247, 252, 257, 263, 267 (methanol) —56,38° (neředěno, 1 = 1)
0,73
1,52
223,5 až 224 °C
250, 256, 259, 266 (destilovaná voda)
206 (destilovaná voda) —20,6° (c = 1, destilovaná voda)
0,73
1,52
10. Sumární vzorec (molekulová hmotnost)
700, 760, 820, 910, 1025, 1080, 1130, 1200, 1305, 1350, 1370, 1450, 1595, 1605, 2850, 2940, 3300, 3375
C11H18N2 (178,28)
690, 750, 820, 910, 980,
1020, 1065, 1075, 1150, 1205, 1385, 1460, 1500, 1515, 1590, 2500, 2850, 3000, 3500
C11H20N2CI2 (251,20)
Podrobný popis postupu:
3-Aminopropylester kyseliny bleomycinové používaný jako výchozí látka při postupu se dá snadno připravit ve formě dihydrochloridu (forma obsahující měď) tepelným rozkladem bleomycinu A2 na 3-(methylmerkaptojpropylaminobleomycin a reakcí takto získaného bleomycinu s halogenonitrilem, s kyselinou halogenoctovou, s esterem kyseliny halogenoctové nebo s halogenacetamidem v kyselém prostředí (viz US patent číslo 3 886 133 j.
N-Monosubstituovaný derivát 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové, který má chráněnou aminoskupinu, se získá ve vysokém výtěžku tím způsobem, že se dihydrochlorid 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové rozpustí ve vodě nebo v organickém rozpouštědle, jako v methanolu, nebo v jejich směsi, a k roztoku se pomalu přidá, za intensivního míchání, ekvivalentní množství nebo mírný přebytek některého ze známých činidel používaných k chránění aminoskupiny, bud v pevné práškovité formě nebo ve formě roztoku v organickém rozpouštědle, jako v methanolu, a reakce se nechá probíhat při teplotě místnosti nebo za chlazení ledem, přičemž se pH reakční směsi nepřetržitě udržuje na hodnotě 5,0 až
7,5 přidáváním organické báze, jako například trimethylaminu, triethylaminu, pyridinu, l,3-diazibicyklo-[ 5,4,0 ]-7-undecenu, 1,5-diazobicyklo-[ 3,4,0]-5-nonenu 1,,4,-diazabicyklo[ 2,2,2] oktanu, nebo N-methylmorfolinu. Jako typických N-monosubstituovaných derivátů lze při postupu podle vynálezu používat například monohydrochloridu 3-ace205127 tylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové,
3-sukcinylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové, monohydrochloridu 3-acetylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové, 3-sukcinylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové, monohydrochloridu 3-benzoylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové, monohydrochloridu 3-benzyloxykarbonylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové monohydrochloridu 3-p-toluensulfOnylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové, monohydrochloridu 3- (2,4-dinitrofenyl} aminopropylesteru kyseliny bleomycinové, monohydrochloridu 3-(3,5-dimethyI-3-oxocyklohexen-l-ylJaminopropylesteru kyseliny bleomycinové, monohydrochloridu 3-N-terc.-butoxykarbonylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové nebo monohydrochloridu 3-N-salicylideniminopropylesteru kyseliny bleomycinové (viz US patent číslo 3 886 133).
Při postupu se bleomycin NK 631 tvoří reakcí 3-aminopropylesteru nebo N-monosubstituovaného 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové s aminosloučeninou. Použije-li se jako výchozí látky N-monosubstituovaného 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové, lze k práci použít buď čisté isolované látky nebo reakční směsi, popřípadě zahuštěné, která se získá reakcí 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové s činidlem chránícím aminoskuplnu.
Jako vhodných rozpouštědel lze pro reakci
3-aminopropylesteru nebo N-monosubstituovaného 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové s aminosloučeninou použít vody nebo organických rozpouštědel·, jako methanolu, dimethylformamidu nebo dimethylsulfoxidu. Reakční směs se nechá stát po dobu 1 až 72 hodin při teplotě 0 až 80 °C za neutrálních nebo alkalických podmínek; při tom dochází k aminolyse a tvoří se bleomycin NK 631. Při vyšším pH je zapotřebí delší reakční doby přéi relativně nízkých teplotách, zatím co při nižším pH je výhodnější krátká reakční doba při vyšších teplotách. Vhodný poměr reakčních složek v reakční směsi je 1 až 10 ekvivalentů aminosloučenin na 1 ekvivalent 3-aminopropylesteru kyseliny bleomyciové nebo jejího N-monosubstituovaného derivátu.
Za účelem isolace bleomycinu NK 631 z reakční směsi se nejprve bleomycinové složky úplně vysráží přidáním 2 až 5 objemů acetonu na 1 objem reakční směsi. Vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje důkladně acetonem a rozpustí v nejmenším možném objemu destilované vody. Získaný vod ný roztok se rychle upraví kyselinou chlorovodíkovou nebo podobnou kyselinou na pH 6,0 a nanese se na horní konec chromatografického sloupce, připraveného z CM-Sephadexu (§) C-25 (NH<i+ forma; dodávaný firmou Pharmacia Fine Chemicals) rozmíchaného v 0,05 M vodného roztoku chloridu amonného. Bleomycinové složky se naadsorbují na pryskyřici a vymýváním sloupce vodným roztokem chloridu amonného, jehož koncentrace se stupňovitě nebo kontinuálně zvyšuje z 0,05 M do 1,0 M se eluují postupně 3-aminopropylester kyseliny bleomycinové nebo jeho N-monosubstituovaný derivát a bleomycin NK 631. Uvedené látky vytékají ze sloupce ve formě modře zbarveného eluentu (absorbujícího v ultrafialové oblasti při 292 nm] při koncentracích chloridu amonného 0,15 až. 0,20, M, popřípadě 0,35 až 0,45 M. Uvedené frakce se separátně spojí a zbaví solí adsorbcí na sloupci Amberlitu @ XAD-2 nebo Diaionu ®I1P 40, promytím sloupce vodou a elucí bleomycinu; látka NK 631 (forma obsahující měď) se získá ve formě modře zbarveného amorfního prášku. Hydrochlorid nebo sulfát NK 631 se získá použitím směsí methanolu s vodou okyselených kyselinou chlorovodíkovou, popřípadě kyselinou sírovou, k elucí sloupce. Nezreagovaný 3-aminopropylester kyseliny bleomycinové nebo jeho N-monosubstituovaný derivát se při tomto postupu s výhodou regenerují. Shora popsaný způsob, při kterém se používá k isolaci bleomycinu NK 631 CM-Sephadexu (fí) C-25, je uveden jako typický ilustrativní příklad, a lze ho v určitých mezích moďfikovat, aniž by se tím podstatněji ovlivnily výsledky. Tak například lze používat jako elučního činidla vodného roztoku chloridu sodného nebo síranu amonného.
Shora uvedeným postupem získaný bleomycin NK 631 (forma obsahující měď) se dá převést na formu prostou mědi použitím známých postupů k odstraňování mědi, které byly popsány výše v souvislosti s postupem 1. Je-li třeba, je možné převést získaný bleomycin NK 631 prostý mědi na jeho netoxické soli, jako například na hydrochlorid, sulfát nebo sůl s kyselinou octovou.
Základní fyzikálně-chemické vlastnosti bleomycinu NK 631 jsou uvedeny v tabulkách 8 a 9.
Strukturní vzorec I bleomycinu NK 631 byl potvrzen následujícím způsobem; monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) byl rozpuštěn v těžké vodě a změřeno jeho 13C-NMR spektrum metodou potlačení protonového šumu, za použití dioxanu jako vnitřního standardu. S'gnály příslušející všem jedenácti 13C atomům obsaženým ve zbytku
3- [ (S) -l’-fenylethylamino ] propylaminu v postranním řetězci bleomycinu NK 631 byly zaznamenány při 19,4, 26,3, 37,0, 43,5, 58,9, 128,3 (dva signály), 130,0 (dva signály) a 136,3 ppm. Signály vyvolané ostatními atomy uhlíku odpovídají signálům charakteristickým pro látky bleomycinové skupiny [viz Naganawa a spolupracovníci, Journal of Antibiotics, 30, 388 (1977)].
Tabulka 8
Fyzikálně-chemické vlastnosti bleomycinu NK 631 (formy obsahujíc! měď)
| Sůl | Dihydrochlorid | Monosulfát | |
| 1. Vzhled | modrý amorfní prášek | modrý amorfní prášek | |
| 2. Rozpustnost Ύ τ | rozpustný ve vodě, methanolu, dimethylsulfoxidu, dimethylformamidu; málo rozpustný v dioxanu; nerozpustný v ethanolu, acetonu, etheru, benzenu | stejná jako u dihydrochloridu | |
| 3. Teplota tání (rozklad) °C | 205 až 207 | 205 až 207 | |
| 4. Specifická rotace (destilovaná voda, c = 1,0) r . 25 í“] 436 | —95,6° | —93,7° | |
| 5. TL-chromatografie V RF hodnota | a) 0,72 b) 0,75 | aj 0,72 | bj 0,75 |
| 6. Elektroforesa 2/ Rm hodnota (alanin = 1) | 0,80 | 0,80 | |
| Poznámky: 1/ a) na tenké vrstvě Silica | Gelu G(§) (Obchodní značka | adsorbentu pro | tenkovrstev· |
nou chromatografii, tvořený sillkagelem, vyráběným firmou Merck lne., USA), v soustavě methanol — 10% octan amonný — 10% amoniak (10 : 9 : 1, obj/obj). b) na tenké vrstvě Avicelu SF (§) (obchodní značka adsorbentu pro tenkovrstevnou chromatografii, tvořený krystalickou celulosou, vyráběný firmou FMC Corporation, USA), v soustavě n-propanol — pyridin — kyselina octová — voda (13 : 10: : 3 : 12, obj./obj.j.
2) Na Avicelu SF (§) v soustavě kyselina mravenčí — kyselina octová — voda (25 : 75 : 900, obj./ob].); 800 V; 15 minut.
Tabulka 9
Fyzikálně-chemické vlastnosti bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi)
Sůl Dihydrochlorid Monosulfát Diacetát
| 1. Vzhled | světle žlutobíle zbarvený amorfní prášek | světle žlutobíle zbarvený amorfní prášek | světle žlutobíle zbarvený amorfní prášek |
| 2. Rozpustnost | Rozpustný | ve vodě, methanolu, | kyselině oc- |
tové, dimethylsulfoxidu, dimethylf ormamidu; málo rozpustný v dioxanu; nerozpustný v ethanolu, acetonu, etheru, benzenu
3. Teplota tání
| (rozkladu), °C | 195 až 197 | 196 až 198 | 188 až 190 |
| 4. Specifická rotace, (destilovaná voda, | —2,1° | —2,0° | —2,0° |
| -i n i r i 436 c = 1,0) [«] 25 | |||
| 5. TL-chromatografie 1/ Rt hodnota a) 0,56 b) 0,70 | a) 0,56 b) 0,70 | a) 0,56 b) 0. | |
| 6. Elektroforesa 2/ Rm hodnota (alanin = 1) | 0,94 | 0,94 | 0,94 |
| Poznámky: 1/ a) Sllica Gel G (R) | ; methanol — 10% | octan amonný — 10% | amoniak (10 : 9 : |
| : 1, obj./obj) | |||
| b) Avicel SF (§) ; | n-propanol — pyridin | — kyselina octová — | voda (15 : 10 : 3 : |
| : 12, obj./obj.) | |||
| 2/ Avicel SF @ ; | kyselina mravenčí — | kyselina octová — voda (25 : 75 : 900, | |
| obj./obj.); 800 V; | 15 minut |
V příloze jsou na obrázcích 1 a 2 znázorněny ultrafialové absorpční křivky a na obrázcích 3 a 4 infračervené absorpční křivky bleomycinu NK 631 vzorce I.
Obrázek 1 znázorňuje ultrafialovou absorpční křivku dihydrochloridu 3-[(S)-l’-fenylethylamínojpropylaminobleomycinu (formy obsahující měď), obrázek 2 ultrafialovou absorpční křivku monosulfátu 3-[(S)-l’-fenylethylamino]propylaminobleomycinu (formy prosté mědi), na obrázku 3 je znázorněna infračervená absorpční křivka dihydrochloridu 3-[ (S)-l’-fenylethylaminojpropylaminobleomycinu (formy obsahující měď) měřená v tabletě bromidu draselného, a na obrázku 4 je znázorněna infračervená absorpční křivka 3-[ (S)-l’-fenylethylaminojpropylaminobleomycinu (formy prosté mědi) změřená rovněž v tabletě bromidu draselného.
Způsob podle vynálezu je podrobně objasněn v následujících příkladech provedení, které však rozsah vynálezu žádným způsobem neomezují.
Příklad 1
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)
K roztoku 9,0 g monohydrochloridu 3-N-benzoylaminopropylesteru kyseliny blcomycinové (formy obsahující měď) se za chlazení na 0°C přidá 9,16 g aminosloučeniny. Reakční směs se míchá 40 hodin při 0 °C a pak se přidá dostatečné množství chladného acetonu, kterým se vysráží reakční produtky. Sraženina se odfiltruje, promyje acetonem a rozpustí v 300 ml destilované vody. Roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a nalije na sloupec připravený z 1 litru CM-Sephadexu ®
C-25 (NHd+ forma] rozmíchaného v 0,05 M vodného roztoku chloridu amonného. Sloupec s naadsorhovanými bleomyciny se promývá 10 litry vodného roztoku chloridu amonného, jehož koncentrace se kontinuálně zvyšuje z 0,05 M až na 1,0 M. Nezreagovaný
3-N-benzoylaminopropylester kyseliny bleomycinové se vymývá ze sloupce roztokem chloridu amonného o koncentraci asi 0,2 M, a bleomycin NK 631 chloridem amonným o koncentraci asi 0,45 M. Frakce obsahující tyto bleomyciny, vykazující absorpci v UF oblasti při 272 nm, se separátně spojí. Podíl obsahující bleomycin NK 631 se nalije na sloupec iontoměničové pryskyřice, připravený z 1,3 litru Amberlitu (§) XAD-2. Sloupec se promyje důkladně vodou a produkt se eluuje 0,01 N roztokem kyseliny chlorovodíkové ve směsi methanolu s vodou (4 : : 1, obj./obj.). Jímá se celkem 2,5 litrů modře zbarvených frakcí, které vykazují absorpci v UF oblasti spektra při 292 nm. Ze spojených frakcí se oddestiluje methanol, zbylý vodný roztok bleomycinu se upraví Dowexem (β) 44 (v OH- formě) na pH 6,0 a pak se lyofilisuje. Získá se 8,2 g (výtěžek 90 °/o) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě modře zbarveného amorfního prášku prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 030 j/mg.
Podobným způsobem se z dříve přecházejících frakcí získá 910 mg nezreagovaného monohydrochloridu 3- N-benzoylaminopr opylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď).
P ř í k 1 a d 2
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)
K roztoku 950 mg monohydrochloridu 3-N-p-toluen sulfonylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď] ve 3 ml methanolu se za míchání, při 0°C, přidá 980 mg aminosloučeniny a směs se míchá 48 hodin při teplotě 0°C. Reakční směs se za míchání zředí 15 ml chladného acetonu, kterým se vysrážejí bleomycinové podíly. Sraženina se odfiltruje, promyje acetonem a rozpustí ve 30 ml destilované vody. Roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a čistí se způsobem popsaným ve stupni A příkladu
5. Získá se 833 mg (výtěžek 85 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď] ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 010 j/mg.
Příklad 3
Synthesa dihydrochloridu NK 631 ((formy obsahující měď)
K roztoku 850 mg monohydrochloridu 3-acetylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) v 5 ml dimethylformamldu se za míchání, při 0 °C, přidá 950 mg aminosloučeniny a směs se míchá 45 hodin při 0°C. Reakční směs se za mícháni zředí 20 ml chladného acetonu, kterým se vysráží bleomycinová složka. Sraženina se odfiltruje, promyje acetonem a rozpustí ve 30 ml destilované vody. Roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a zpracuje stejným způsobem jak bylo popsáno ve stupni A příkladu 5. Získá se 570 mg (výtěžek 63 °/o) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 010 j/mg.
Příklad 4
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)
2BS127
K roztoku 900 mg monohydrochloridu 3-N- (2,4-dlnitrofenyl) aminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) v 3 ml dimethylsulfoxidu se za míchání, při teplotě 0°C, přidá 793 mg aminosloučeniny a směs se míchá 24 hodin při 0 °C. Reakční směs se pak za míchání zředí 15 ml chladného acetonu, vysrážené bleomycinové podíly se odfiltrují a promyjí acetonem. Surový produkt se rozpustí ve 30 ml destilované vody, roztok se okamžitě okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a pak se zpracuje způsobem popsaným ve stupni A příkladu 1. Získá se 690 mg (výtěžek 78 procent) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 010 j/mg. Příklad 5
Sýnthesa dihydrochloridu NK 631 obsahujícího měď a dihydrochloridu NK 631 prostého mědi
K roztoku 1,0 g dihydrochloridu 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) v 10 ml methanolu se za intensivního míchání přikape během 30 minut 105 mg benzoylchloridu, přičemž se pH směsi udržuje přidáváním 1,4-diazabicyklo[2,2,2] oktanu v rozmezí 6,5 až 7,5. Roztok se míchá dalších 30 minut a pak se zahustí na objem 2 ml. Zahuštěný roztok se ochladí na 0 °C, za míchání se k němu přidá 1,1 g aminosloučeniny a směs se míchá 72 hodin při teplotě 0 °C. Reakční směs se za míchání zředí 6 rol chladného acetonu, vysrážené bleomycinové podíly se odfiltrují a promyjí acetonem. Surový produkt se rozpustí ve 30 ml destilované vody, roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a nalije na sloupec připravený ze 100 ml CM-Septhadexu @ (v NHd+ formě) rozmíchaného v 0,05 M vodném roztoku chloridu amonného. Naadsorbované bleomycinové složky se eluují ze sloupce stejným způsobem, jak bylo popsáno ve stupni A příkladu 5. Získá se 779 mg (výtěžek 73 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 000 j/mg.
Vedle tohoto produktu se získá 240 nr nezreagovaného monohydrochloridu 3-N-benzoylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové.
Stupeň B: Roztok 700 mg dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) získaného ve shora uvedeném stupni A, ve 20 ml destilované vody se nalije na sloupec připravený ze 65 ml iontoměniče značky Diaion ® HP-40 rozmíchaného v destilované vodě. Sloupec s naadsorbovaným bleomycinem se promývá postupně 200 ml 5% vodného roztoku EDTA.Na2, pak 250 ml 5% vodného roztoku chloridu sodného a posléze 100 ml destilované vody. Poté se produkt eluuje ze sloupce směsí methanolu s 0,0025 N vodnou kyselinou chlorovodíkovou [1:1, obj./obj.) a jímají se frakce vykazující absorpci v ultrafialové oblasti při 290 nm (celkem 98 ml). Ze spojených frakcí se oddestiluje methanol za sníženého tlaku, zbývající vodný roztok se upraví Dowexem @ 44 v
OH~ formě na pH 6,0 a pak se lyofilisuje. Získá se 658 mg (výtěžek 98 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi) ve formě světle žlutobíle zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 7 834 j/mg.
Příklad 6
Sýnthesa monosulfátu NK 631 (formy obsahující měď) a diacetátu NK 631 (formy prosté mědi)
Stupeň A: K roztoku 1,0 g dihydrochloridu
3-aminopropylesteru kyseliny bleomvcin' (formy obsahující měď) v 10 ml methanolu se za intensivního míchání, při teplotě místnosti, přikape během 30 minut 104 mg benzoylchloridu, přičemž se pH roztoku udržuje přidáváním N-methylmorfolinu na hodnotě 5,0 až 7,5. Reakční směs se míchá dalších 30 minut, pak se zředí 50 ml acetonu a vysrážené bleomycinové podíly se odfiltrují a promyjí acetonem. Sraženina se rozpustí ve 3 ml methanolu, k roztoku se za míchání, při 0°C, přidá 579 mg aminosloučeniny a směs se míchá 42 hodin při teplotě 0°C. Reakční směs se za míchání zředí 10 ml chladného acetonu, vysrážený reakční produkt se odfiltruje, promyje acetonem a rozpustí ve 30 ml destilované vody. Vodný roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a pak se zpracuje za použití sloupce CM-Sephadexu ® stejným způsobem, jak bylo popsáno výše ve stupni A v příkladu 5. Podíl obsahující reakční produkty se nalije na sloupce připravený ze 65 ml iontoměniče Diaionu (R) HP-40 rozmíchaného v destilované vodě a naadsorbované bleomyciny se po promytí sloupce vodou eluují směsí methanolu s 0,01 N vodným roztokem kyseliny sírové (1:1, obj./obj.; jímají se frakce vykazující absorpci v ultrafialové oblasti při 292 nm, celkem Ϊ30 ml). Ze spojených frakcí se oddestiluje methanol, zbývající vodný roztok bleomycinu se upraví Dowexem @44 (v OH~ formě) na pH 6,0 a pak se lyofilisuje. Získá se 813 mg (výtěžek 75 %) monosulfátu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 7 819 j/mg.
Stupeň Β: 800 mg monosulfátu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) získaného v předchozím stupni A, se zbaví mědi stejným způsobem jak bylo popsáno ve stupni B v příkladu 9, s tím rozdílem, že se ve fázi eluce produktu ze sloupce použije 5% vodného roztoku octanu amonného a směsi methanolu s 0,01 N vodnou kyselinou octovou (1 : 1, obj/obj) místo 5% vodného roztoku chloridu sodného a směsi methanolu s 0,0025 N vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové (1:1, obj/obj). Uvedeným způsobem se získá 748 mg (výtěžek 96 %) diacetátu bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi) ve formě světle žlutobíle zbarveného amorfního prášku, který má následující spektrální a antimikrobiální charakteristiky: Absorpční maximum v ultrafialové oblasti:
Amaxnm E £ 0.1N/HC1
290 105
Antimikrobiální mohutnost: 7 620 j/mg. Příklad 7
Synthesa dihydrochloridu NK 631 obsahujícího měď a dihydrochloridu NK 631 prostého mědi
Stupeň A: K roztoku 1,0 g dihydrochloridu
3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové ve 3 ml methanolu se při teplotě místnosti, za míchání, přikape během 60 minut 193 mg S-terc.butoxykarbonyl-4,6-dimethyl-2-merkaptopyrimidinu, přičemž se pH směsi udržuje přidáváním 14% roztoku triethylaaminu v methanolu na hodnotě 6,0 až 7,4. Reakční směs se míchá další 2 hodiny, získaný roztok 3-N-terc.butoxykarbonylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové se ochladí na 0°C, přidá se k němu 1,2 g aminosloučeniny a směs se míchá 70 hodin. Reakční směs se zředí 10 ml chladného acetonu, vysrážené bleomycinové podíly se odfiltrují a promyjí acetonem. Surový produkt se rozpustí ve 30 ml destilované vody, vodný roztok se Ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a pak se čistí způsobem popsaným ve stupni A v příkladu
5. Získá se 597 mg (výtěžek 56 %) dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měd) ve formě modře zbarveného amorfního prášku vykazujícího antimikrobiální mohutnost 8 010 j/mg.
Stupeň B: Do roztoku 500 mg dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měd) získaného postupem popsaným v předchozím stupni A, v 50 ml methanolu se uváděcí trubičkou o vnitřním průměru 1 mm, ponořenou pod hladinu roztoku, uvádí za intensivního míchání sirovodík tak dlouho, až se v roztoku rozpustí ve velkém přebytku (asi 1 hodinu). Po skončení uvádění sirovodíku se roztok nechá stát 30 minut při teplotě místnosti, vyloučený sírník mědnatý se odfiltruje a promyje 50 ml methanolu nasyceného sirovodíkem. Filtrát a promývací kapalina se spojí a methanol se sirovodíkem se odstraní destilací za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v 50 ml methanolu, k roztoku se přidá 100 ml ethyletheru, vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje etherem a vysuší. Získá se 394 mg (výtěžek 82 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi) ve formě světle žlutobíle zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 7 820 j/mg.
Příklad 8
Synthesa dihydrochloridu NK 631 obsahujícího měď a dihydrochloridu NK 631 prostého mědi.
Stupeň A: K roztoku 1,0 g dihydrochloridu 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měd) ve 2 ml methanolu se za intensivního míchání, při teplotě místnosti, přidá 98 mg salicylaldehydu, přičemž se pH směsi udržuje přidáváním triethylaminu na hodnotě 7,0 až 7,4; v roztoku vznikne 3-N-salicylideniminopropylester kyseliny bleomycinové. Směs se míchá 1 hodinu, pak se ochladí na 0 °C a za míchání se k ní přidá 600 mg aminosloučeniny. Reakční směs se míchá 30 hodin, pak se zředí 10 ml chladného acetonu a vysrážené bleomycinové podíly se odfiltrují a promyjí acetonem. Surový produkt se rozpustí ve 30 ml destilované vody, vodný roztok se okyselí na pH 6,0 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou a pak se čistí způsobem popsaným ve stupni A v příkladu 5. Získá se 501 mg (výtěžek 47 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měd), který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 013 j/mg.
Stupeň B: 450 mg dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) získaného postupem popsaným v předchozím stupni A, se rozpustí ve 25 ml 0,5 N vodné kyseliny chlorovodíkové a k roztoku se přidá 25 ml 0,2% chloroformového roztoku dithiazonu (difenylthiokarbazonu). Směs se rychle protřepe a promíchá a pak se nechá stál v klidu, přičemž se rozdělí na dvě vrstvy. Spodní vrstva (chloroformový podíl) se oddělí a k vrchní vodné vrstvě se přidá 25 ml čerstvého chloroformového roztoku dithizonu; směs se znovu protřepe a chloroformová vrstva se oddělí. Shora uvedený postup, to je třepání, rozdělení na jednotlivé vrstvy a přidání čerstvého chloroformového roztoku dithizonu, se opakuje osmkrát. Posléze se vrchní vodná vrstva promyje chloroformem, oddělí, vodný roztok se upraví Dowexem (§) 44 (v OH' formě) na pH 6,0 a voda se oddestiluje za sníženého tlaku k suchu. Získá se 415 mg (výtěžek 96 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi) ve formě světle žlutobíle zbar205127 veného amorfního prášku majícího antimikrobiální mohutnost 7 845 j/mg.
P ř í k 1 a d 9
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)
K roztoku 1,0 g dihydrochloridu 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) ve 2 ml methanolu se za chlazení na 0 °C a za míchání přidá 1,0 g aminosloučeniny a směs se míchá dalších 72 hodin. Reakční směs se za míchání zředí 6 ml chladného acetonu a vysrážené bleomycinové podíly se odfiltrují. Surový produkt se čistí způsobem popsaným ve stupni A v příkladu 5 a získá se 128 mg (výtěžek 12 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měd) ve formě zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 015 j/mg.
Příklad 10
Synthesa N[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanu („aminosloučenina”)
K 50 g (S)-l-fenylethylaminu se za chlazení na 0 °C a za míchání přidá 33 g akrylonitrilu. Na baňku s reakční směsí se nasadí zpětný chladič opatřený chlorkalciovým uzávěrem a směs se za míchání zahřívá 18 hodin na 93 °C. Po skončení zahřívání se přebytečný akrylonitril oddestiluje za sníženého tlaku a zbývající surový produkt se předestiluje za sníženého tlaku; jímá se frakce vroucí pří 142 až 145 °C při 0,93 kPa. Získá se 53,5 g 3-[ (S j-l’-fenylethylamino]propionitrilu.
Získaný nitril se vnese do hydrogenačního autoklávu, přidá se 5 g Raneyova niklu W-7 a 50 ml ethanolu obsahujícího 15 % amoniaku a směs se hydrogenuje, za míchání rychlostí 1000 otáček za minutu, při teplotě 50 až 58 °C, vodíkem pod parciálním tlakem 10 až 4 MPa po dobu 1,5 hodiny. Po skončení hydrogenace se reakční směs destiluje za sníženého tlaku a jímá se frakce vroucí při 95 až 103 °C při 0,27 kPa. Získá se 48,3 g N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanu (výtěžek 66 °/o teorie, počítáno na výchozí (S)-l-fenylethylamin).
Claims (5)
- PREDMET vynalezu1. Způsob výroby 3-[ (S]-i‘-fenylethyiamino]propylaminobleomycinu vzorce T
X^ u->u O Z X £ a jeho netoxických solí, vyznačující se tím, že se 3-aminopropylester nebo N-monosub30 stituovaný 3-aminopropylester kyseliny bleomycinové vzorce IIOIIWCV zΉ-Ch'CHNH, i * CKNKIPCH oIIANO.ch3 'ch'ch'c'n'ch i II t sCH^,. O ^CH 'CH,HO, cn; ΛοOH /CH OC H l^HXIC Z1ON 'C^ iH ^O.rHVHV ΌΗCH^OHÍ\°W \ zCAzOH44} o* 'nr,INI uvede do reakce v prostředí rozpouštědla s N-[ (S)-4.’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanem při teplotě 0 až 80 °C po dobu 1 až 72 hodin, a získaný produkt se popřípadě převede působením kyselinou na příslušnou netoxickou sůl. - 2. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že se na jeden ekvivalent 3-aminopropylesteru kyseliny bleomycinové nebo jeho N-monosubstituovaného derivátu používá 1 až 10 ekvivalentů N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanu.
- 3. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že se N-monosubstituovaný 3-aminopropylester zvolí ze skupiny zahrnující 3-acetylaminopropylester, 3-sukcinylaminopropylester,3-benzoylaminopropylester, 3-benzylaminopropylester, 3-p-toluensulfonylaminopropylester, 3- (2,4-dinitr of enyl j aminopropylester, 3- (3,5-dimethyl-3-oxocyklohexen-l-yl) aminopropylester, 3- (terc.butoxykarbonyl j aminopropylester a 3-(salicyIiden)iminopropylester.
- 4. Způsob podle bodu 1 vyznačující se tím, že se jako rozpouštědla používá vody, methanolu, dimethylformamidu, dimethylsulfoxidu nebo jejich směsi.
- 5. Způsob podle bodu 1 až 4 vyznačující se tím, že se výsledný produkt převede působením kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou sírovou nebo kyselinou octovou na příslušnou netoxickou sůl.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7777077A JPS5414980A (en) | 1977-07-01 | 1977-07-01 | 3-((s)-1'-phenylethylamino)propylaminobleomycin |
| CS430178A CS205126B2 (en) | 1977-10-14 | 1978-06-29 | Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS205127B2 true CS205127B2 (cs) | 1981-04-30 |
Family
ID=25745973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS795926A CS205127B2 (cs) | 1977-07-01 | 1979-08-30 | Způsob výroby 3-[ (S)-l‘-řenylethylamino]propyIaminobleomycinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS205127B2 (cs) |
-
1979
- 1979-08-30 CS CS795926A patent/CS205127B2/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0004467B1 (en) | Bis-anthracyclines, methods of making and using them and liposome compositions for administering them | |
| US4658058A (en) | 11-O-methylspergualin | |
| CA1315780C (en) | Porphyrin derivatives | |
| US6444706B2 (en) | Guanidine derivatives, processes for preparing them and their use as pharmaceutical compositions | |
| WO2007038868A2 (en) | Novel enediyne compound and uses thereof | |
| US4430346A (en) | Novel carcinostatic substance and process for synthesis thereof | |
| DK173952B1 (da) | Anvendelse af spergualinderivater til fremstilling af lægemidler med immunosuppressiv virkning | |
| Zenker et al. | Thyroxine Analogs. I. Synthesis of 3, 5-Diiodo-4-(2'-alkylphenoxy)-DL-phenylalanines1 | |
| US4148921A (en) | Antitumor agents | |
| US4238391A (en) | 3-[(S)-1'-phenylethylamino]propylaminobleomycin, non-toxic salt thereof, and method for producing same | |
| US4039578A (en) | 1-Tetrahydroxycyclopentyl-3-nitroso-3-(2-chloroethyl)-urea antitumor agents | |
| JPH0243727B2 (cs) | ||
| CS205127B2 (cs) | Způsob výroby 3-[ (S)-l‘-řenylethylamino]propyIaminobleomycinu | |
| EP0262404A1 (en) | Glucosylmoranoline derivatives | |
| DE2832127A1 (de) | Nitroso-harnstoffverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und verwendung derselben als therapeutisches mittel | |
| US4349546A (en) | D-Allose derivative and preparation method therefor | |
| DE2732454A1 (de) | Peptidderivate und deren herstellung | |
| US4430347A (en) | Cystamine derivatives suitable for use as medicaments | |
| RU2768451C1 (ru) | Селективный антагонист рецепторов типа A2A | |
| CS205126B2 (en) | Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof | |
| US4990536A (en) | Immunopotentiator and spergualin-related compound therefor | |
| SU1251806A3 (ru) | Способ получени 7-замещенных 9а-метоксимитозана | |
| US4666887A (en) | Intravenous or intraperitoneal administration of a tripeptide compound for treating cancer | |
| CS210673B2 (en) | Manufacturing process of 3-(ls)p-1 - phenylethylamino prropylaminobleomycine | |
| US5137917A (en) | Spergualin-related compound and use thereof |