CS205126B2 - Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof - Google Patents
Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof Download PDFInfo
- Publication number
- CS205126B2 CS205126B2 CS430178A CS430178A CS205126B2 CS 205126 B2 CS205126 B2 CS 205126B2 CS 430178 A CS430178 A CS 430178A CS 430178 A CS430178 A CS 430178A CS 205126 B2 CS205126 B2 CS 205126B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- bleomycin
- acid
- copper
- solution
- compound
- Prior art date
Links
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims abstract description 12
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 title claims abstract description 9
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 title claims abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title 1
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 claims abstract description 60
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 claims abstract description 60
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 claims abstract description 47
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 22
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 21
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 10
- NQONXAAXIFYYMX-JTQLQIEISA-N n'-[(1s)-1-phenylethyl]propane-1,3-diamine Chemical compound NCCCN[C@@H](C)C1=CC=CC=C1 NQONXAAXIFYYMX-JTQLQIEISA-N 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- MRNLLBXPSWMYCK-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[[2-[[4-[[2-[[6-amino-2-[3-amino-1-[(2,3-diamino-3-oxopropyl)amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[3-[4-carbamoyloxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3-(1h-imidazol-5-y Chemical compound N=1C(C=2SC=C(N=2)C(O)=O)=CSC=1CCNC(=O)C(C(O)C)NC(=O)C(C)C(O)C(C)NC(=O)C(C(OC1C(C(O)C(O)C(CO)O1)OC1C(C(OC(N)=O)C(O)C(CO)O1)O)C=1NC=NC=1)NC(=O)C1=NC(C(CC(N)=O)NCC(N)C(N)=O)=NC(N)=C1C MRNLLBXPSWMYCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 108700023993 bleomycinic acid Proteins 0.000 claims description 12
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 7
- 108010057150 Peplomycin Proteins 0.000 abstract description 63
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 54
- 239000010949 copper Substances 0.000 abstract description 54
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 abstract description 53
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 abstract description 11
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 8
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 abstract description 5
- 206010061924 Pulmonary toxicity Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 4
- 231100000374 pneumotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 abstract description 3
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003972 antineoplastic antibiotic Substances 0.000 abstract 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 abstract 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 abstract 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 abstract 1
- 230000007047 pulmonary toxicity Effects 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 33
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 21
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 16
- -1 amino compound Chemical class 0.000 description 14
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 9
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 8
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 6
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 4
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 4
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 4
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N N-Methylmorpholine Chemical compound CN1CCOCC1 SJRJJKPEHAURKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 3
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 3
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 3
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- AFHFWLNCUQBZAU-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol 2-pyridin-2-ylacetic acid hydrate Chemical compound O.CCCO.OC(=O)CC1=CC=CC=N1 AFHFWLNCUQBZAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N EEDQ Chemical compound C1=CC=C2N(C(=O)OCC)C(OCC)C=CC2=C1 GKQLYSROISKDLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 239000007868 Raney catalyst Substances 0.000 description 2
- NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N Raney nickel Chemical compound [Al].[Ni] NPXOKRUENSOPAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000564 Raney nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000007665 chronic toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000160 chronic toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000012847 fine chemical Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 2
- 238000005984 hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 2
- IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N pentachlorophenol Chemical compound OC1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1Cl IZUPBVBPLAPZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- 231100000456 subacute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- RQEUFEKYXDPUSK-ZETCQYMHSA-N (1S)-1-phenylethanamine Chemical compound C[C@H](N)C1=CC=CC=C1 RQEUFEKYXDPUSK-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- GDHTVPJGHDBBSJ-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) 2,2,2-trichloroacetate Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl)C=C1 GDHTVPJGHDBBSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOSWPVRACYJBSJ-UHFFFAOYSA-N 1,3-di(p-tolyl)carbodiimide Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1N=C=NC1=CC=C(C)C=C1 BOSWPVRACYJBSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 1,5-Diphenyl-3-thiocarbazone Chemical compound C=1C=CC=CC=1N=NC(=S)NNC1=CC=CC=C1 UOFGSWVZMUXXIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 1-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6,7-diol;hydrochloride Chemical group Cl.C1=CC(O)=CC=C1CC1C2=CC(O)=C(O)C=C2CCN1 SWWQQSDRUYSMAR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJCIYUBEISDBDK-UHFFFAOYSA-N 2-(1-phenylethylamino)propanenitrile Chemical compound N#CC(C)NC(C)C1=CC=CC=C1 GJCIYUBEISDBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BDOYKFSQFYNPKF-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;sodium Chemical compound [Na].[Na].OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O BDOYKFSQFYNPKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPSXGPCFLAGJOM-UHFFFAOYSA-M 2-tert-butyl-5-methyl-1,2-oxazol-2-ium;perchlorate Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.CC1=CC=[N+](C(C)(C)C)O1 MPSXGPCFLAGJOM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ISCMYZGMRHODRP-UHFFFAOYSA-N 3-(iminomethylideneamino)-n,n-dimethylpropan-1-amine Chemical compound CN(C)CCCN=C=N ISCMYZGMRHODRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUIABRMSWOKTOF-OYALTWQYSA-O 3-[[2-[2-[2-[[(2s,3r)-2-[[(2s,3s,4r)-4-[[(2s,3r)-2-[[6-amino-2-[(1s)-3-amino-1-[[(2s)-2,3-diamino-3-oxopropyl]amino]-3-oxopropyl]-5-methylpyrimidine-4-carbonyl]amino]-3-[(2r,3s,4s,5s,6s)-3-[(2r,3s,4s,5r,6r)-4-carbamoyloxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)ox Chemical compound OS(O)(=O)=O.N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C WUIABRMSWOKTOF-OYALTWQYSA-O 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238876 Acari Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOQGZXFMHARMLW-UHFFFAOYSA-N Daminozide Chemical compound CN(C)NC(=O)CCC(O)=O NOQGZXFMHARMLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000186359 Mycobacterium Species 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMBCNGLMRSLPH-UHFFFAOYSA-N O.OC=O.CC(O)=O Chemical compound O.OC=O.CC(O)=O FWMBCNGLMRSLPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical compound NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SZKGHIVKMXYMDC-UHFFFAOYSA-N S(=O)(=O)(O)O.Cl.Cl Chemical compound S(=O)(=O)(O)O.Cl.Cl SZKGHIVKMXYMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001147844 Streptomyces verticillus Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N benzyl N-[2-hydroxy-4-(3-oxomorpholin-4-yl)phenyl]carbamate Chemical compound OC1=C(NC(=O)OCC2=CC=CC=C2)C=CC(=C1)N1CCOCC1=O FFBHFFJDDLITSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- BWFPGXWASODCHM-UHFFFAOYSA-N copper monosulfide Chemical compound [Cu]=S BWFPGXWASODCHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000000374 effect on fibrosis Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229910000037 hydrogen sulfide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 150000007529 inorganic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- CMESPBFFDMPSIY-UHFFFAOYSA-N n,n'-diphenylmethanediimine Chemical compound C1=CC=CC=C1N=C=NC1=CC=CC=C1 CMESPBFFDMPSIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000007530 organic bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N propionitrile Chemical compound CCC#N FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006308 propyl amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000008261 skin carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000779 smoke Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 231100000057 systemic toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Description
Bleomyciny jsou karcinostatická antibiotika objevená Umezawou, jedním z autorů předloženého vynálezu, . a jeho spolupracovníky ' [Journal of Antibiotics, 19A, 200 (1966}]. Jsou to ve vodě rozpustné basické glykopeptidy produkované kmenem aktinomycet Streptomyces verticillus, které snadno tvoří cheláty s jedním atomem dvojmocné mědi. Při normální kultivaci je produkováno 16 složek bleomycinu, které byly všechny isolovány [viz například Umezawa a spolupracovníci, Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1966)]. Ze známých bleomycinů se k léčení rakoviny v klinické praxi všeobecně po užívá směsi mědi prostých bleomycinů Ai, Až, As, B.2 a demethyl-A2 (pro tuto směs se v dalším popisu používá názvu „bleomycinový komplex”). Zmíněný bleomycinový komplex se osvědčil ' hlavně v terapii epidermálních karcinomů kůže, karcinomů hlavy a krku, rakoviny krčku děložního, plic a maligního lymfomu.Bleomycins are carcinostatic antibiotics discovered by Umezawa, one of the authors of the present invention. [Journal of Antibiotics, 19A, 200 (1966)] are water-soluble basic glycopeptides produced by a strain of Streptomyces verticillus actinomycetes that readily form single-divalent copper chelates. they have all been isolated [see, for example, Umezawa et al., Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1966)] Of the known bleomycins, a mixture of copper-free bleomycins Ai, Az, As, B.2 and demethyl is generally used to treat cancer in clinical practice. -A2 (the term "bleomycin complex" is used for this mixture in the following description) The bleomycin complex has proven to be particularly useful in the treatment of epidermal carcinomas of the skin, head and neck cancers, cervical cancer, lung cancer and malignant lymphoma.
Pokud se týká vedlejších účinků, bylo referováno, že u léčených pacientů dochází k fibrose plic a k dalším nežádoucím účinkům.Concerning side effects, it has been reported that treated patients experience lung fibrosis and other adverse events.
Z vedlejších účinků vyvolávaných bleomyciny je nejobávanější fibrosa plic. Lze si snadno představit, že karcinostatická účinnost bleomycinů by se při klinické aplikaci ještě více projevila, kdyby se shora uvedený vedlejší účinek podařilo více či méně potlačit.Of the bleomycin-induced side effects, lung fibrosis is the most feared. It is easy to imagine that the carcinostatic efficacy of bleomycins would be even more evident in clinical application if the above-mentioned side effect were more or less suppressed.
Vzhledem k těmto okolnostem zabývali se autoři vynálezu několik let synthesou různých bleomycinů a v testech na zvířatech sledovali jejich karcinostatickou účinnost a toxicitu, včetně vlivu na vyvolání fibrosy plic jako hlavního testu. Výsledkem jejich studia bylo, že objevili 3-[ (S)-r-fenylethylaminojpropylaminobleomycin [v dalším popisu je tento nový bleomycin označován symbolem „NK 631”, který zahrnuje jak formu obsahující měď, tak formu prostou mědi-, který je novým bleomycinem získaným reakcí reaktivního derivátu karboxylové skupiny bleomycinové kyseliny s N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-dtammopropanem, a u kterého je výrazně potlačen vedlejší účinek způsobující fibrosu plic, přičemž jeho· karcinostatická účinnost není ve srovnání s komerčním bleomycinovým komplexem a jinými známými bleomyciny snížena. Na základě tohoto objevu byl realisován předložený vynález. Účelem vynálezu je zaústit způsob výroby nového bleomycinů vzorce I, 3-[(SJ-Γ-fenylethylamino ] propylaminobleomycinu, a jeho netoxických solí. Bližší podrobnosti vynálezu vyplynou z . následujícího popisu.In view of these circumstances, the inventors have been involved in the synthesis of various bleomycins for several years and have investigated in animal tests their carcinostatic efficacy and toxicity, including the effect on induction of lung fibrosis as the main test. As a result of their study, they have discovered 3 - [(S) -r-phenylethylamino-propylamino-leomycin [in the following description, this new bleomycin is designated by the symbol "NK 631", which includes both a copper-containing and copper-free form. by reacting a reactive carboxylic acid derivative of bleomycin acid with N- [(S) -1'-phenylethyl] -1,3-dimammopropane, in which the lung fibrosis side effect is significantly suppressed and its carcinostatic activity is not compared to the commercial bleomycin complex and other known bleomycins decreased. Based on this discovery, the present invention has been realized. The purpose of the present invention is to provide a process for the preparation of the novel bleomycins of the formula I, 3 - [(S-Γ-phenylethylamino) propylaminobleomycin, and non-toxic salts thereof.
Vynikající biologická aktivita nového bleomycinu vzorce I vyplývá z níže uvedených experimentálních testů.The excellent biological activity of the novel bleomycin of formula I results from the experimental tests below.
Biologická účinnost bleomycinů NK 631 byla hodnocena tím způsobem, že byla srov6 nána s účinností monosulfátu 3-[(R,Sj-r-f enylethylamino! ] propylaminobleomycinu (formy prosté mědi- (v dalším popisu je pro tento bleomycin používáno označení „RS-forma”] a s účinností bleomycinového komplexu ve čtyřech následujících testech:The biological activity of Bleomycin NK 631 was evaluated by comparing it to that of 3 - [(R, Sj-phenylethylamino ! )] Propylaminobleomycin monosulfate (copper-free forms - (hereinafter "RS-form" is used for this bleomycin) ] and the efficacy of the bleomycin complex in the four following tests:
účinek na vyvolání fibrosy plic antineoplastická účinnost antimikrobiální účinnost toxicita.effect on lung fibrosis induction antineoplastic activity antimicrobial activity toxicity.
Ke srovnání použitá RS forma bleomycinů byla získána fermentačním způsobem, popsaným v US patentu číslo 3 846 400.For comparison, the RS form of bleomycins used was obtained by the fermentation method described in U.S. Patent No. 3,846,400.
1- Toxicita vůči plícím u myši .(vliv na vznik fibrosyK testování byly použity dvanáctičetné skupiny myších samců kmene ICR ve stáří 15 týdnů. Každý testovaný farmaceutický přípravek byl aplikován v dávce 5 mg/kg. Dávky byly podávány ve formě intraperitoneálních injekcí, jednou denně, po dobu deseti po · sobě následujících dnů. Po skončení aplikace byly myši chovány dalších 5 týdnů. Po uvedené době pozorování byly myši usmrceny a pitvou zjištěn rozsah fibrosy plic. Byl porovnán výskyt a stupeň fibrosy plic vyvolané u myší po podávání nového^ bleomycinů vzorce I, obchodního bleomycinového komplexu a RS formy antibiotika. Nalezené výsledky jsou uvedeny v tabulce I.1- Mouse Lung Toxicity (Effect on Fibrosis Formation) Twelve groups of 15-week-old male ICR mice were used for testing. Each pharmaceutical formulation tested was administered at a dose of 5 mg / kg, administered as intraperitoneal injections, once daily The mice were bred for an additional 5 weeks after the observation period, after which the mice were sacrificed and necropsied for the extent of lung fibrosis, and the incidence and degree of lung fibrosis induced in mice after administration of the new β-bleomycins of the formula was compared. I, the commercial bleomycin complex and the RS form of the antibiotic, the results are shown in Table I.
komplexcomplex
Hodnoceetstuunёfibbossp lic: 0 plicních sklípcích a fibrose podobné změny v alveobodu — žádná fibrosa bod — hromadění exudátu lárních přepážkách body — fibrosa na několika místech plic body — roztroušená fibrosa bodů — fibrosa na více než dvou třetinách celé plochy plicHodnoceetstuunёfibbossp lic: 0 alveoli and fibrosis similar changes in alveobod - no fibrosis point - accumulation of exudate alar septum points - fibrosis at several points of the lung body - scattered fibrosis points - fibrosis on more than two thirds of the entire lung area
5'12 65'12 6
Jak je zřejmé z nalezených výsledků, je fibrosa · plic vyvolaná mmosulfátem NK 631 (formou prostou mědi), · ve srovnání s fibrosou · plic · vyvolanou RS · formou antibiotika a bleomycinovým ·komplexem snížena ·· asi na · 1/2, popřípadě 1/3, pokud se · týká · výskutu, a asi na 1/2, popřípadě 1/4, pokud se týká stupně onemocnění. Z tůho · vyplývá výhodnost monosulfátu NK 631 · pro klinické použití.As can be seen from the results, NK 631 lung fibrosis (copper free) induced by lung fibrosis · is reduced compared to lung fibrosis · RS induced by · antibiotic and bleomycin complex ·· to about · 1/2 or 1 / 3, if it relates to the study, and about 1/2 or 1/4, respectively, as to the degree of the disease. This implies the advantageousness of NK 631 monosulfate for clinical use.
2. Antir^eoplastická účinnost až 1. · Účinek · in vitro na kultury HeLa Ss buněk2. Anti-eoplastic activity up to 1. In vitro effect on HeLa Ss cell cultures
Pro · -každý ' shora uvedený bleomycin bylo stanoveno procento inhibice · růstu buněk po 72 hodinách kultivace v přítomnosti testovaného · bleomycinů · a vypočteno hodnota ID50. Bylo · nalezeno, · že látka NK 631 má IDso = 0,82 ^g/ml, na rozdíl · od b^omyc^vého · komplexu, který má IDso — · 1,70 · ^g/ml, což znamená, že bleomycin NK ' 631 · inhlbuje růst buněk dvakrát silněji než bleomyclnový ·komplex. ·Hodnota IDso pro RS formu an<-8 tibiotika je rovna 0,80 · pg/ml, cdž · znamená, že · jeho inhibiční ·efekt na růst · ·buněk · je srovnatelný · s efektem monosulfátu · NK ·631 (formy prosté mědi}.For each of the above bleomycin, the percent inhibition of cell growth after 72 hours of culture in the presence of test bleomycins was determined and the ID50 value was calculated. NK 631 has been found to have an ID 50 = 0.82 µg / ml, as opposed to a capture complex having an ID 50 of 1.70 µg / ml, which means that bleomycin NK '631 inhibits cell growth twice as much as the bleomycin complex. · ID 50 for RS form an <-8 tibiotics equals 0.80 · pg / ml, which means that its growth inhibitory effect on cells is comparable with monosulfate effect NK 631 copper}.
2—2.' Karčinostatícký · účinek · na myší ;:EhHichův · karcinom (solidní nádor}2—2. ' Carcinostatic effect on mice ; : EhHich's · carcinoma (solid tumor)
Myším · samcům · kmene · IGR, · starým · 6 · týdnů, bylo · transplantováno podkožně ·do · tříselné obilast:i'l^a^2^dému · po ··2 X X^Wrtěk. Po 24 hodinách byl ·každé · myši · podán tetovaný · preparát stejným · Jak · byio-pOpsáno výše v testu 1. '-'Patnáctý děn po -subkutánní transplantaci byly ·myším ''nádory odstraněny a · jejich ' 'hmotnosti 'byly · ·srovnány s · hmotností nádorů, které · se · vyvinuly u kontrolní ·skupiny · myší, které · nebyly ošetřeny, a bylo · stanoveno · procento · inhibice.Male mice of the 6-week-old IGR strain were transplanted subcutaneously into the inguinal obilate: 1 × 2 and 2 × smoke after 2 X X ^ Wrtek. After 24 hours, each mouse was given a tattooed preparation in the same manner as described above in Test 1. The fifteenth day after subcutaneous transplantation, the tumors were removed and their weights were removed. Compared with the weight of tumors that developed in the control group of untreated mice, and the percentage of inhibition was determined.
Jak je · · zřejmé z · tabulky 2, · je : kareinostatická · účinnost mmosuHátu-NK --631 · (formy prosté mědi} srovnatelná · s · účinností Rs formy · antibiotika ·a asi · 1,4 · X · vyšší než 'Účinnost bleůmyclnůvého · komplexu.As can be seen from Table 2, the carcinostatic activity of mmosulfate-NK-631 (copper-free forms) is comparable to that of the Rs form of the antibiotic and about 1.4 X greater than Efficacy of the bleymycline complex.
Tabu1k a · 2Tabu1k and · 2
2—3. · Karcinůstatická účinnost vůči ascitickému hepatonu (ascitický typ) u krys2—3. Carcinostatic efficacy against ascitic hepaton (ascitic type) in rats
Krysám kmene Donryu · bylo transplantováno intřapeřitůneálně po 1 X 106 AH 66 buněk. Za 24 hodin po transplantaci bylo započato s aplikací testovaného preparátu, který · byl podáván intrapentoneálně · jednou denně po dobu deseti po sobě-tiáslédújících dnů. Během 30 dnů po transplantaci hýla sledována hmotnost . jednotlivých krys · a -počet uhynulých · a přežívajících, zvířat. 'Výsledky jsou uvedeny ^v · tabulce 3.Donry strain rats were transplanted intraperitoneally to 1 X 10 6 AH 66 cells. Twenty-four hours after transplantation, administration of the test preparation was started, which was administered intrapentoneally once daily for ten consecutive days. Weight was monitored within 30 days after transplantation. individual rats and the number of dead and surviving animals. The results are shown in Table 3.
Tabulka 3Table 3
Relativní . hodnoty průměrného přežití zvířat (počet dnů)Relative. average animal survival (number of days)
Dávka mg/kg X 10 mo^su^át NK 631 [prostý mědi)Dose mg / kg X 10 can be NK 631 [copper free]
RS forma antibiotika bfeomycinový fkomplexRS form of antibiotic bfeomycin complex
2W1262W126
Jak vyplývá z tabulky 3, je účinnost monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi) vůči AH ' 66 ascitickému hepatomu srovnatelná s účinností RS _ formy antibiotika a ' je ve všech dávkách vyšší než účinnost · 'bleomycinového· komplexu.As shown in Table 3, the potency of NK 631 (copper free form) monosulfate against AH-66 ascitic hepatoma is comparable to that of the RS-form of the antibiotic and is higher than that of the bleomycin complex at all doses.
2—4. Inhibiční účinek vůči epidermálnímu karcinomu · 'kůže vyvolávanému 20-methylcholathrenem2—4. 20-Methylcholathrene-induced epidermal carcinoma of the skin
Roztok -20-meth'ylc:holanthrenu (dále označovaný jako „20-MC”) v acetonu byl dvakrát týdně, po dobu 18 týdnů, lokálně aplikován na ostříhaný hřbet myší kmene -ddy (sam ci 10 týdnů staří). Za pět týdnů od začátku aplikace 20-MC bylo započato s podáváním testovaného preparátu, který byl aplikován intraperitonálně v dávce 62,5 ^g/myš, dvakrát · týdně, · po · dobu 15 · týdnů. ' Během prvního’ týdne s po·'' skončení podávání testovaného ' ' preparátu byla pathologicky vyšetřována oblast kůže, na kterou byl aplikován 20-MC a sledován výskyt karcinomu.A solution of -20-methylclan-holanthrene (hereafter referred to as "20-MC") in acetone was applied twice weekly, for 18 weeks, locally to the trimmed back of the mouse -ddy strain (male or 10 weeks old). Five weeks after the start of 20-MC administration, the test preparation was administered intraperitoneally at a dose of 62.5 µg / mouse twice a week for 15 weeks. During the first ´week 'after the administration of the test preparation, the area of the skin to which 20-MC was applied was examined pathologically for cancer.
Jak vyplývá z tabulky 4, jsou monosulfát NK 631 ' (forma prostá mědi) a RS-forma antibiotika o - ' něco málo účinnější pokud se týká inhibice karcinogenesy vyvolané 20-MC, než bleomycinový komplex.As shown in Table 4, NK 631 '(copper free form) monosulfate and RS-form antibiotic are slightly more effective in inhibiting carcinogenesis induced by 20-MC than bleomycin complex.
Tabulka ' 4Table '4
Úmrtnost Výskyt Procento inhibice karcinomů ' (%)Mortality Incidence Percentage of Inhibition of Carcinomas' (%)
Ze · ' všech ' ' shora - uvšedených · výsledků tesťů · vyplývá, že · móriosulfát ŇK 631 - (fóřma prostá mědi) má ve srovnání · s komerčním bleomycinovým ''komplexem zřetelně ' vyšší anťineo^lastickou · účinnost.All of the above test results indicate that NC 631 morphosulfate (copper free) has a significantly higher antineoplastic activity compared to the commercial bleomycin complex.
3. Antimikrobiální účinnost nismům Mycobacterium ''607. a '' Bacillus subtilis 'PCI byla ' zjišťována ' diskovou ' 'metodou za ' 'použití ·bleomycínu Až jako . ' stáň’dářdu (1000 j/mg). '' Výsledky jsou ' uvedeny v tabulce 5.3. Antimicrobial activity of Mycobacterium 607 nisms. and 'Bacillus subtilis' PCI was 'detected' by the 'disk' method using bleomycin Up to. 'site' (1000 j / mg). '' The results are shown in Table 5.
Antimikrobiálm účinnost vůči mikroorgaTabu 1k a 5Antimicrobial activity against microorgaTab 1k and 5
M. 607M. 607
B. Sub.B. Sub.
momosuufát NK 631 (prostý mědi)momosuufate NK 631 (plain copper)
848848
550550
RS-formaRS-form
535535
400 bleomycinový komplex400 bleomycin complex
234234
886886
Jak vyplývá z tabulky 5, vykazují monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) a RS forma antibiotika mnohem vyšší antimikroh ální mohutnost než bleomycinový komplex.As shown in Table 5, the NK 631 monosulfate (copper free form) and the RS form of the antibiotic exhibit a much higher antimicrohum power than the bleomycin complex.
4. Toxicita4. Toxicity
4—1. Akutní toxicita u krys (LDso) při intraptrítontáimm podávání4—1. Acute toxicity in rats (LD 50) by intraptritontamus administration
Jak vyplývá z tabulky 6, jsou hodnoty LDso u krysy nalezené pro monosulfát NK 631 (formy prosté mědi) přibližně stejně vysoké jako hodnoty nalezené u bltomycinového komplexu a RS formy antibiotika.As shown in Table 6, the rat LD 50 values found for NK 631 monosulfate (copper free forms) are approximately as high as those found for the bltomycin complex and the RS form of the antibiotic.
Tabulka 6Table 6
4—2. Subakutní a chronická toxicita u krys a psů4—2. Subacute and chronic toxicity in rats and dogs
Subakutní a chronická toxicita monosulfátu NK 631 (formy prosté mědí) u krys a psů je srovnatelná s analogickou toxicitou bleomycinového komplexu. Je však třeba se speciálně zmínit o tom, že v místě vpichu injekce byla pozorována u psů nekrosa ve všech případech, kdy byly podány vysoké dávky bleomycinového komplexu (90 injekcí v dávce 1,2 mg/kg), ale v žádném případě, kdy byla podána psům stejná · dávka monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi). Toxicita monosulfátu NK ' 631 (formy prosté mědi) vůči plícím je rovněž nižší než toxicita bleomycinového' komplexu.The subacute and chronic toxicity of NK 631 monosulfate (copper free forms) in rats and dogs is comparable to the analogous toxicity of the bleomycin complex. However, special mention should be made that necrosis has been observed at the injection site in dogs in all cases where high doses of bleomycin complex were administered (90 injections at a dose of 1.2 mg / kg) but in no case the same dose of NK 631 monosulfate (copper-free forms) was administered to dogs. The lung toxicity of NK 631 (copper free form) monosulfate is also lower than the toxicity of the bleomycin complex.
Z výše uvedených výsledků vyplývá, že toxicita monosulfátu NK 631 (formy prosté mědi) jest srovnatelná s toxicitou bleomycinového komplexu, s ' výjimkou toxicity vůči plícím a nekrosy, které jsou podstatně nižší u NK 631.The above results indicate that the toxicity of NK 631 monosulfate (copper free form) is comparable to the toxicity of the bleomycin complex, except for lung and necrosis toxicity, which are significantly lower for NK 631.
5. Souhrn5. Summary
Ze shora uvedených výsledků testů lze učinit závěr, že bleomycin NK 631 jest nová sloučenina mající následující výhodné vlastnosti:From the above test results, it can be concluded that bleomycin NK 631 is a novel compound having the following advantageous properties:
a) extrémně nízkou toxicitu vůči plícím,a) extremely low lung toxicity,
b) antimikrobiální a antineoplastickou účinnost vyšší než komerční bleomycinový komplex,b) antimicrobial and antineoplastic activity higher than commercial bleomycin complex,
c) systemickou toxicitu srovnatelou s toxicitou komerčního bleomycinového komplexu, a(c) systemic toxicity comparable to that of the commercial bleomycin complex; and
d) · nízkou lokální toxicitu v místě vpichu injekce.d) low local toxicity at the injection site.
Z uvedených důvodů lze očekávat, že bleomycin NK 631 bude výhodný při klinickém použiti.For these reasons, bleomycin NK 631 can be expected to be advantageous in clinical use.
Podstata výroby nového bleomycinu NK 631 shora uvedeného vzorce I· způsobem podle vynálezu je v tom, že · se kyselina bleomycinová vzorce II iThe essence of the preparation of the novel bleomycin NK 631 of the above-mentioned formula (I) by the process according to the invention is that the bleomycin acid of the formula (II)
СИОН uvede do reakce s N-[ (Sj-r-fenylethylj-1,3-diaminopropanem v prostředí rozpouštědla a v přítomnosti aktivačního činidla, při teplotě 0 až 30 °C po dobu 1 až 24 hodin, nebo se kyselina bleomycinová uvede do reakce nejprve s aktivačním činidlem a potom s N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanem za uvedených reakčních podmínek, a získaný produkt se popřípadě převede působením kyselinou na příslušnou netoxickou sůl.The reaction is reacted with N - [(S-R-phenylethyl) -1,3-diaminopropane in a solvent medium and in the presence of an activating agent, at 0 to 30 ° C for 1 to 24 hours, or the bleomycinic acid is reacted first with an activating agent and then with N - [(S) -1'-phenylethyl] -1,3-diaminopropane under the reaction conditions mentioned, and the product obtained is optionally converted by treatment with an acid into the corresponding non-toxic salt.
* Na jeden ekvivalent kyseliny bleomycinové se obvykle používá 1 až 10 ekvivalentů N- [ (S)-1 ’-fenylethy 1 ] -1,3-diaminopropanu.* 1 to 10 equivalents of N- [(S) -1'-phenylethyl] -1,3-diaminopropane are usually used per equivalent of bleomycin acid.
Jako rozpouštědla se s výhodou používá « vody, methanolu, dimethylformamidu, dimethylsulfoxidu, nebo jejich směsi.Water, methanol, dimethylformamide, dimethylsulfoxide, or a mixture thereof, is preferably used as solvent.
Získaný produkt se převede popřípadě působením kyseliny chlorovodíkové, kyseliny sírové nebo kyseliny octové na příslušnou netoxickou sůl.The product obtained is optionally converted into the corresponding non-toxic salt by treatment with hydrochloric acid, sulfuric acid or acetic acid.
Kyselina bleomycinová používaná jako výchozí látka při postupu jest známá sloučenina a lze ji vyrábět enzymatickým štěpením bleomycinu Bz způsobem popsaným v US patentech číslo 3 843 448 a 3 846 400.Bleomycin acid used as a starting material in the process is a known compound and can be produced by enzymatic cleavage of bleomycin Bz as described in U.S. Patent Nos. 3,843,448 and 3,846,400.
Druhá výchozí složka, N-[(S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropan, jest nová sloučenina synthetisovaná ponejprv autory tohoto vynálezu následujícím způsobem.The second starting component, N - [(S) -1'-phenylethyl] -1,3-diaminopropane, is a novel compound synthesized first by the inventors as follows.
К fenylethylaminu, ochlazenému asi na 0 °C, se přidá asi ekvivalentní množství akrylonitrilu a reakce se dokončí zahříváním směsi na 80 °C až 100 °C po dobu 10 až 24 hodin. Přebytek akrylonitrilu se oddestiluje za sníženého tlaku a zbývající surový produkt se předestiluje za sníženého tlaku. Získaný 3-[ (S)-r-fenylethylamino]propionitril se zredukuje obvyklým způsobem, například vodíkem v přítomnosti Raneyova niklu, a získá se žádaný N-[ (S]-r-fenylethyl]-l,3-diaminopropan (v dalším popisu je tato látka označována jako „aminosloučenina”). Fyzikálně-chemické vlastnosti uvedené aminosloučenlny jsou shrnuty v tabulce 7.About an equivalent amount of acrylonitrile is added to the phenylethylamine cooled to about 0 ° C and the reaction is completed by heating the mixture at 80 ° C to 100 ° C for 10-24 hours. The excess acrylonitrile was distilled off under reduced pressure and the remaining crude product was distilled off under reduced pressure. The obtained 3 - [(S) -? - phenylethylamino] propionitrile is reduced in a conventional manner, for example with hydrogen in the presence of Raney nickel, to give the desired N- [(S) -? - phenylethyl] -1,3-diaminopropane (hereinafter) this substance is referred to as the "amino compound") The physicochemical properties of that amino compound are summarized in Table 7.
2' 05 l· 2· 62 '05 l · 2 · 6
Fyzikálně-chemické vlastnosti N-[ (S)-r-fenylethyl]-l,3-diaminopropanuPhysico-chemical properties of N- [(S) -r-phenylethyl] -1,3-diaminopropane
Tabulka 7Table 7
Volná base DihydrochloridFree base Dihydrochloride
1. Vzhled při teplotě místnosti bezbarvá kapalina1. Appearance at room temperature colorless liquid
2. Teplota tání2. Melting point
3. Teplota varu3. Boiling point
4. Absorpční maxima v ultrafialové oblasti (nm)4. Ultraviolet absorption maxima (nm)
5. Molekulární extinkční koeficient, ε (256 nm)5. Molecular extinction coefficient, ε (256 nm)
6. Specifická optická otáčivost [í]d256. Specific optical rotation []] d25
Dn26D n 26
7. Hodnota Rf při tenkovrstevné chromatografií, soustava n-propanol-pyridin-kys.octová-voda (15 : 10 : 3 : 12, obj/obj), deska zn. Avicel-SFR7. Rf value by thin-layer chromatography, n-propanol-pyridine-acetic acid-water system (15: 10: 3: 12, v / v), Avicel-SFR plate
8. Hodnota Rm při vysokovoltové elektroforese, soustava kys. mravenčí* -kys. octová-voda (25 : 75 : 900, obj/obj), deska zn. Avicel-SFR, 800 V, 10 min., Rm alanínu = 1,08. R m value in high-voltage electrophoresis, formic acid system * -acid. acetic-water (25: 75: 900, v / v), Avicel-SFR plate, 800 V, 10 min., alanine Rm = 1.0
9. IČ absorpční spektrum, cm4, KBr tableta — 103 °C při 0,267 kPa9. IR absorption spectrum, cm 4 , KBr tablet - 103 ° C at 0.267 kPa
241, 247, 252, 257, 263241, 247, 252, 257,263
267 (methanol) —56,38° (neředěno, λ = 1)267 (methanol) —56.38 ° (undiluted, λ = 1)
0,730.73
1,521.52
10. Sumární vzorec (molekulová hmotnost)10. Summary formula (molecular weight)
700, 760, 820, 910, 1025,700, 760, 820, 910, 1025
1080, 1130, 1200, 1305, 1350,1080, 1130, 1200, 1305, 1350
1370, 1450, 1495, 1605, 2850, 2940, 3300, 33751370, 1450, 1495, 1605, 2850, 2940, 3300, 3375
CnHieNž (178,28) bílé ' jehličkovité krystalkyWhite (178.28) white needle crystals
223,5 — 224 °C223.5-224 ° C
250, 256, 259, 266 (destilovaná voda)250, 256, 259, 266 (distilled water)
206 (destilovaná voda) —20,6 0 (c = 1, destilovaná voda)206 (distilled water) —20.6 0 (c = 1, distilled water)
0,730.73
1,521.52
690, ' 750, 820, 910, 980,690, 750, 820, 910, 980,
1020, 1065, 1075, 1150, ‘ 1205,1020, 1065, 1075, 1150, 1205,
1385, 1460, 1500, ' ·1515, 1590, 2500, 2850, 3000, 35001385, 1460, 1500, 1515, 1590, 2500, 2850, 3000, 3500
C11Hžd№C12 (251,20)C11HždąC12 (251,20)
Jako vhodných aktivačních činidel lze při postupu podle vynálezu používat napříkladSuitable activating agents may be used, for example, in the process of the invention
6-chlor-l-p-chborbznzeusulfynyloxynznzotriazolu (CCBT),6-chloro-1-p-chlorobenzzeusulfynyloxynzotriazole (CCBT),
N-ethyl-5-fenylisoxazolium-3’-sulfonátu (NEPIŠ),N-ethyl-5-phenylisoxazolium-3´-sulfonate (DON'T)
N-terc.butyl-5-methylisoxazoliumperchlorátu,N-tert-butyl-5-methylisoxazolium perchlorate,
N.-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinu, p-nitrofenyl-trichloracetátu,N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline, p-nitrophenyl trichloroacetate,
N-hydroxysukcinimidu, dicyklohexylkarbodiimidu (DGC ], l-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyI Jkarbodi imidu, l-cykloliexyl-3- (2-morfolinoethyi Jkarbodiimidu, difenylkarbodiimidu, di-p-toluylkarbodiimidu, diisopropylkarbodiimidu, di-p-nitrofenylsulfitu, tri-p-nitrofenylfosfitu, p-nitrofenolu, pentachlorfenolu a benzylalkoholu.N-hydroxysuccinimide, dicyclohexylcarbodiimide (DGC), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropylcarbodiimide, 1-cycloliexyl-3- (2-morpholinoethyl) carbodiimide, diphenylcarbodiimide, di-p-toluylcarbodiimide, tri-p-nitrophenylphosphite, p-nitrophenol, pentachlorophenol and benzyl alcohol.
Podrobný popis postupuDetailed description of the procedure
Kyselina bleomycinová (forma obsahující měď) se rozpustí ve vodě, dimethylformamidu, dimethylsulfoxidu nebo v jejich, smě, sích. К roztoku se při teplotě 0°C až 30 °C, * za míchání, přidá jedno ze shora uvedených aktivačních činidel. Získaný roztok se upraví na pH 3 až 10, které je vhodné к aktivaci karboxylové skupiny, přidáním buď anor- * ganicke kyseliny nebo base, jako kyseliny chlorovodíkové nebo hydroxidu sodného, nebo přidáním organické kyseliny nebo base, jako kyseliny trichloroctové nebo N-methylmorfolinu. Po uvedené úpravě dojde к aktivaci karboxylové skupiny bleomycinové kyseliny. Bezprostředně poté, nebo během 30 minut po úpravě pH, se к roztoku této reakční složky přidá aminosloučenina (definovaná výše), buď jako taková nebo ve formě roztoku upraveného na pH 7,0. Reakční směs se udržuje 1 až 24 hodin při teplotě 0 až 30 °C, přičemž proběhne reakce a vznikne bleomycin NK 631 vzorce 1. Vhodný poměr reakčních složek jest 1 až 10 ekvivalentů aktivačního činidla nebo aminosloučeniny na 1 ekvivalent kyseliny bleomycinové.Bleomycinic acid (a copper-containing form) is dissolved in water, dimethylformamide, dimethylsulfoxide or mixtures thereof. One of the above-mentioned activating agents is added to the solution at 0 ° C to 30 ° C, with stirring. The solution obtained is adjusted to a pH of 3 to 10, which is suitable for activating the carboxyl group, by adding either an inorganic acid or base such as hydrochloric acid or sodium hydroxide, or by adding an organic acid or base such as trichloroacetic acid or N-methylmorpholine. Following this treatment, the carboxyl group of bleomycin acid is activated. Immediately thereafter, or within 30 minutes after pH adjustment, an amino compound (as defined above) is added to the solution of this reactant, either as such or in the form of a solution adjusted to pH 7.0. The reaction mixture is maintained at 0-30 ° C for 1 to 24 hours to effect the reaction to produce bleomycin NK 631 of Formula 1. A suitable ratio of reactants is 1 to 10 equivalents of activating agent or amino compound per equivalent of bleomycin acid.
Za účelem isolace látky NK 631 z reakční směsi se nejprve bleomycinové složky úplně vysráží přidáním 5 až 10 objemů acetonu na 1 objem reakční směsi. Vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje důkladně acetonem a rozpustí v nejmenším možném objemu destilované vody. Získaný vodný roztok se okamžJtě upraví kyselinou chlorovodíkovou jiebo podobnou kyselinou na pH 6,0 a nanese se na horní konec chromatografického sloupce, připraveného z CM-Sephadexu © C-25 (NH4+ forma; vyráběný firmou Pharmacia * Fine Chemicals), rozmíchaného ve vodném roztoku chloridu amonného. Nezreagovaná kyselina bleomycinová projde sloupcem aniž by byla adsorbována. Bleomycin NK 631 se < adsorbuje na pryskyřici a eluuje se vodným roztokem chloridu amonného se stoupající koncentrací, zvyšující se stupňovitě nebo plynule od 0,05 M do 1,0 M. Bleomycin NK 631 jest obsažen v modře zbarvených frakcích, vytékajících ze sloupce při koncentracích asi 0,35 M až 0,45 M chloridu amonného, které vykazují absorpci v ultrafialové oblasti při 292 nm. Uvedené frakce se separátně spojí a nechají se protéci přes sloupec Amberlitu (§) XAD-2 (výrobek firmy Rohm and Haas Co.) nebo Diaionu ® HP 40 (výrobek firmy Mitsubishi Chemical Co.). Adsorbovaný bleomycin NK 631 se promyje vodou a pak se eluuje; získá se solí zbavený efluent, ze kterého se získá čistý, modře zbarvený, amorfní práškovitý NK 631. Hydrochlorid nebo síran bleomycinů NK 631 se získají elucí látky ze sloupce vodným methanolem obsahujícím kyselinu chlorovodíkovou, popřípadě kyselinu sírovou. Při tomto postupu se s výhodou regeneruje nezreagovaná kyselina bleomycinová.In order to isolate NK 631 from the reaction mixture, the bleomycin component is first completely precipitated by adding 5-10 volumes of acetone per volume of reaction mixture. The precipitate formed is filtered off, washed thoroughly with acetone and dissolved in the smallest possible volume of distilled water. The aqueous solution was adjusted to a j th instantaneous HCl jiebo like acid to pH 6.0 and applied to the upper end of the chromatographic column, prepared from CM-Sephadex © C-25 (NH4 + form, produced by Pharmacia Fine Chemicals *) slurried in aqueous ammonium chloride solution. Unreacted bleomycinic acid passes through the column without being adsorbed. Bleomycin NK 631 is adsorbed onto the resin and eluted with an aqueous solution of ammonium chloride of increasing concentration, increasing in steps or continuously from 0.05 M to 1.0 M. Bleomycin NK 631 is contained in the blue colored fractions flowing from the column at concentrations about 0.35 M to 0.45 M ammonium chloride, which exhibit ultraviolet absorption at 292 nm. The fractions were pooled separately and passed through a column of Amberlite (§) XAD-2 (manufactured by Rohm and Haas Co.) or Diaion ® HP 40 (manufactured by Mitsubishi Chemical Co.). The adsorbed bleomycin NK 631 is washed with water and then eluted; NK 631 hydrochloride or bleomycin sulphate is obtained by eluting the column material with aqueous methanol containing hydrochloric acid or sulfuric acid, respectively. In this process, unreacted bleomycinic acid is preferably recovered.
Shora popsaný způsob, při kterém se к isolaci bleomycinů NK 631 používá CM-Sephadexu ©C-25 (obchodní značka pro měnič kationtů, tvořený mikroskopickými kuličkami karboxymethylovaného derivátu polysacharidu dextranu, vyráběný a prodávaný firmou Pharmacia Fine Chemicals lne., Švédsko), jest uveden jen jako názorný příklad, a lze ho v určitých mezích modifikovat, aniž by se tím podstatněji ovlivnily výsledky. Tak například lze použít jako elučního čin:dla vodného roztoku chloridu sodného nebo síranu amonného.The above process using CM-Sephadex® C-25 (a trademark for a cation exchanger consisting of microscopic beads of a carboxymethyl dextran polysaccharide derivative manufactured and sold by Pharmacia Fine Chemicals Inc., Sweden) is described above for the isolation of bleomycins NK 631. as an illustrative example, and may be modified within certain limits without substantially affecting the results. Thus, for example, can be used as an elution act: dla aqueous solution of sodium chloride or ammonium sulfate.
Uvedeným postupem získaný bleomycin NK 631 obsahuje měď, které se dá zbavit kteroukoliv známou metodou, například působením sirovodíku, pří kterém se měď vysráží ve formě sirníku měďnatého, nebo vyredukováním mědi ve formě kovu vhodným redukčním činidlem (postupem podle US patentu číslo 3 646 197), nebo extrakcí mědi organickým rozpouštědlem obsahujícím clielatotvorné čin:dlo, jako dithizon [viz Umezawa a spolupracovníci, Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1960)], nebo pomocí neionoganní makroskopicky síťované výměnné pryskyřice (postupem podle US patentu číslo 3 929 993). Jeden příklad způsobu odstraňování mědi jest popsán níže.The bleomycin NK 631 obtained by the process comprises copper which can be removed by any known method, for example by treatment with hydrogen sulfide, in which copper precipitates in the form of copper sulphide or by reducing copper in the form of metal with a suitable reducing agent (U.S. Pat. No. 3,646,197). or copper extraction with an organic solvent containing clielatotvorné act: DLO, as dithizone [see Umezawa et al, Journal of Antibiotics, 19A, 210 (1960)] or by using neionoganní macroscopically crosslinked exchange resin (the method of U.S. patent No. 3,929,993). One example of a copper removal method is described below.
Bleomycin'NK 631 (forma obsahující měď) se rozpustí v destilované vodě a roztok se nalije na sloupec pryskyřice značky Amberlite (§) XAD-2 (obchodní značka pro absorpční pryskyřici na basi styren-divinylbenzenového kopolymeru, vyráběnou a prodávanou firmou Rohm & Haas Co., USA) nebo pryskyřice značky Diaion @ HP 40 (obchodní značka pro absorpční pryskyřici tvořenou styren-divinylbenzenovým kopolymerem, vyráběnou a dodávanou firmou Mitsubishi Chemical Co., Japonsko), připravený rozmícháním pryskyřice v destilované vodě. Sloupec s naadsorbovaným bleomycinem NK 631 se promyje 5% vodným roztokem dvojsodné soli kyseliny ethylendiamintetraoctové (v dalším je tato látka označována jako „EDTA.Na?”), přičemž se měďnatý iont roztokem EDTA.Na2 vymyje ze sloupce a na pryskyřici zůstane naadsorbován bleomycin NK 631 prostý mědi. Pryskyřice se promyje za účelem odstranění EDTA.Naz vodným roztokem vhodné soli, jako chloridu sodného, síranu sodného nebo octanu sodného, a pak destilovanou vodou. Posléze se sloupcem nechá protékat okyselená směs methanolu s vodou, jako například směs methanolu s 0,0025 N kyselinou chlorovodíkovou (1:1, V/V), přičemž se eluuje látka mající absorp205126 ci v ultrafialové oblasti při 290 nm. Frakce s ' touto absorpcí . se spojí, zahustí, roztok se upraví na pH 6,0 a rozpouštědlo se odstraní lyofilisací. Získá se dihydrochlorid NK 631 (forma prostá mědi) ve formě světležlutě bílého amorfního prášku.Bleomycin'K 631 (copper-containing mold) is dissolved in distilled water and the solution is poured onto a column of Amberlite (§) XAD-2 (a trademark for an styrene-divinylbenzene copolymer absorbent resin, manufactured and sold by Rohm & Haas Co) , USA) or a resin of the brand Diaion® HP 40 (a trademark for an absorbent resin consisting of a styrene-divinylbenzene copolymer, manufactured and supplied by Mitsubishi Chemical Co., Japan) prepared by mixing the resin in distilled water. The column with adsorbed bleomycin NK 631 is washed with a 5% aqueous solution of disodium ethylenediaminetetraacetic acid (hereinafter referred to as "EDTA.Na?"), The copper ion being washed out of the column with the solution of bleomycin NK remaining on the resin. 631 free of copper. The resin is washed to remove EDTA. Afterwards with an aqueous solution of a suitable salt such as sodium chloride, sodium sulfate or sodium acetate, and then with distilled water. Subsequently, an acidified mixture of methanol and water, such as a mixture of methanol with 0.0025 N hydrochloric acid (1: 1, v / v), is passed through the column, eluting the substance having an absorption of 205126 ci in the ultraviolet region at 290 nm. Fractions with this absorption. The solution was adjusted to pH 6.0 and the solvent was removed by lyophilization. NK 631 dihydrochloride (copper free form) was obtained as a pale yellow amorphous powder.
K přípravě okyseleného vodného methanolu potřebného k eluci se dá použít jakékoliv farmaceuticky vhodné kyseliny. Použije-li se například kyseliny sírové nebo kyseliny octové, získá se uvedeným postupem . . práškovitý monosulfát nebo diacetát bleomycinu NK 631 (formy . prosté mědi).Any pharmaceutically acceptable acid may be used to prepare the acidified aqueous methanol required for elution. If, for example, sulfuric acid or acetic acid is used, it is obtained as described above. . Bleomycin NK 631 powdered monosulfate or diacetate (copper free forms).
Bleomycin NK 631 vzorce I lze převádět obvyklými způsoby na jiné netoxické soli, jako například na sulfát nebo sůl s kyselinou octovou, které lze rovněž získat tak, že se, jak bylo uvedeno výše, příslušným způsobem zamění kyselina používaná při eluci bleomycinu ze sloupce.Bleomycin NK 631 of formula I can be converted by conventional methods to other non-toxic salts, such as sulfate or acetic acid salt, which can also be obtained by, as mentioned above, appropriately replacing the acid used to elute bleomycin from the column.
Vzhledem k tomu, že při postupu 1 reaguje aminosloučenina s karboxylovou skupinou kyseliny bleomycinové aktivovanou přítomností aktivačního činidla používaného při . synthese . ' polypeptidů, probíhá kondensační reakce hladce a za extrémně mírných podmínek. V důsledku toho reaguje s akti20 vovanou karboxylovou skupinou pouze primární aminoskupina aminosloučeniny, zatím co sekundární iminoskupina se reakce nezúčastňuje, a při reakci vzniká přednostně bleomycin NK 631. To je významná přednost postupu.Since in process 1 the amino compound reacts with the carboxyl group of bleomycinic acid activated by the presence of the activating agent used in the process. synthese. of the polypeptides, the condensation reaction proceeds smoothly and under extremely mild conditions. Consequently, only the primary amino group of the amino compound reacts with the activated carboxyl group, while the secondary imino group does not participate in the reaction, and preferably the reaction produces bleomycin NK 631. This is a significant process advantage.
Základní fyzlkálně-chemické vlastnosti bleomycinu NK 631 jsou uvedeny v tabulkách 8 a 9.The basic physico-chemical properties of bleomycin NK 631 are shown in Tables 8 and 9.
Strukturní vzorec I bleomycinu NK 631 byl potvrzen následujícím způsobem: monosulfát NK 631 (forma prostá mědi) byl rozpuštěn v těžké vodě a změřeno jeho 13C-NMR spektrum· metodou potlačení protonového šumu, za použití dioxanu jako vnitřního standardu. Signály příslušející všem jedenácti 13C atomům obsaženým ve zbytku 3-f(Sj-l’-fenylethylaminojpropylaminu v postranním řetězci bleomycinu NK 631 byly zaznamenány při 19,4, 26,3, 37,0, 43,5, 58,9, 128,3 (dva signály), 130,0 (dva signály) a 136,3 ppm. Signály vyvolané ostatními atomy uhlíku odpovídají signálům charakteristickým pro látky bleomycinové skupiny [viz Naganawa a spolupracovníci, Journal of Antibiotics, 30, 388 (1977)j.The structural formula I of bleomycin NK 631 was confirmed as follows: NK 631 monosulfate (copper free form) was dissolved in heavy water and measured by its 13 C-NMR spectrum by the proton noise suppression method, using dioxane as an internal standard. Signals belonging to all eleven 13C atoms contained in the 3-f (Sj-1'-phenylethylamino) propylamine residue in the side chain of bleomycin NK 631 were recorded at 19.4, 26.3, 37.0, 43.5, 58.9, 128, 3 (two signals), 130.0 (two signals), and 136.3 ppm The signals induced by the other carbon atoms correspond to those characteristic of the bleomycin group substances [see Naganawa et al., Journal of Antibiotics, 30, 388 (1977) j.
Tabulka 8Table 8
Fyzlkálně-chemické vlastnosti bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď)Physico-chemical properties of bleomycin NK 631 (forms containing copper)
RM. hodnota [alanin — 1)RM. value [alanine - 1)
Poznámky:Comment:
V a) na tenké vrstvě Silica Gelu G(§) (obchodní značka adsorbentu pro tenkovrstevnou chromatografií, tvořený silikagelem, vyráběný firmou Merek lne., USA)., v soustavě methanol — 10% octan amonný — 10% amoniak (10 : 9 : 1, obj/obj).In a) on a thin layer of Silica Gel G (§) (trademark of silica gel thin-layer adsorbent, manufactured by Merek Inc, USA)., Methanol-10% ammonium acetate-10% ammonia (10: 9: 1, v / v).
b) na tenké vrstvě Avicelu SF ® (obchodní značka adsorbentu pro tenkovrstevnou chromatografii, tvořený krystalinickou celulosou, vyráběný firmou FMC corporation, USA), v soustavě n-propanol — pyridin — kyselina octová — voda (13 : 10 : : 3 : 12).b) that the two sheets of Avicel SF ® (trademark of TCs and adsorbed b ent P ro one to ovrstevnou chromatography, comprising a crystalline cellulose, manufactured by FMC Corporation, USA), eluent: n-propanol - pyridine - acetic acid - water ( 13: 10: 3: 12).
2/ Na Avlcelu SF @ v soustavě kysehna mravenft — kyselina octová . — voda (25 : 75 : : 900, obj/obj); 800 V; 15 minut. 2 / Na @ Avlcelu SF of the system to get hold mravenft y - Selina acetate and alkyl. - water ( 25 : 7 5 :: 900, v / v); 800 V; Fifteen minutes.
Tabulka 9Table 9
Fyzikálně-chemické vlastnosti bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi)Physico-chemical properties of bleomycin NK 631 (copper-free forms)
2. Rozpustnost Rozpustný ve vodě, methanolu, kyselině octové, dimethylsulfoxidu, dimethylformamidu; málo rozpustný v dioxanu; ' nerozpustný v2. Solubility Soluble in water, methanol, acetic acid, dimethylsulfoxide, dimethylformamide; sparingly soluble in dioxane; insoluble in
nin = 1)nin = 1)
Poznámky:Comment:
V a) Silica Gel G (P.' ; methanol — 10% octan amonný — 10% amoniak (10 : 9 : 1, obj/obj)V (a) Silica Gel G (P. '; methanol - 10% ammonium acetate - 10% ammonia (10: 9: 1, v / v)
b) . Avicel SF (g) ; n-propanol — pyridin — kyselina octová — voda (15 : ' 10 : 3 : 12)b). Avicel SF (g); n-propanol - pyridine - acetic acid - water (15: 10: 3: 12)
2/ Avicel SF (§) ; kyselina mravenčí — kyselina octová — voda (25 : 75 : 900, obj/obj); 800 V; 15 minut.2 / Avicel SF; formic acid - acetic acid - water (25: 75: 900, v / v); 800 V; Fifteen minutes.
V příloze jsou na obrázcích 1 a 2 znázorněny ultrafialové absorpční křivky, a na obrázcích 3 a 4 infračervené absorpční křivky bleomycinu NK 631 vzorce I.In the Annex, Figures 1 and 2 show ultraviolet absorption curves, and Figures 3 and 4 infrared absorption curves of bleomycin NK 631 of formula I.
Obrázek 1 znázorňuje ultrafialovou absorpční křivku dihydrochloridu 3-[ (SJď-fenylethylamino ] propylaminobleomycinu (formy obsahující měď), obrázek 2 ultrafialovou absorpční křivku monosulfátu 3-( (S Jď-fenylethylamlnojpropylaminobleomycinu (formy prosté mědi), na obrázku 3 je znázorněna infračervená absorpční křivka dihydrochloridu 3-[ (Spr-fenylethylaminojpropylaminobleomycinu (formy obsahující měď) měřená v tabletě bromidu draselného, a na obrázku 4 je znázorněna infračervená absorpční křivka 3-[ (S))l’-fenylethylamino]propylaminobleomycinu (formy prosté mědi) změřená rovněž v tabletě bromidu draselného.Figure 1 shows the ultraviolet absorption curve of 3 - [(N-phenylethylamino) propylaminobleomycin dihydrochloride (copper-containing forms); Figure 2 ultraviolet absorption curve of 3- ((N-phenylethylamino) propylaminobleomycin (copper-free form)) ultraviolet; 3 - [(Spr-phenylethylamino) propylaminobleomycin (copper form) dihydrochloride measured in a potassium bromide tablet, and Figure 4 shows the infrared absorption curve of 3- [(S)) 1'-phenylethylamino] propylaminobleomycin (copper free form) also measured in the tablet potassium bromide.
Způsob podle vynálezu je podrobně objasněn v následujících příkladech provedení, které však rozsah vynálezu žádným způsobem neomezují.The process according to the invention is explained in detail in the following non-limiting examples.
Příklady provedeníExamples
Příklad 1Example 1
Synthesa dihydrochloridu (formy obsahující měď] a monosuKátu (formy prosté mědi) bleomycinu NK 631Synthesis of Bromomycin NK 631 Dihydrochloride (Copper-containing Form) and Monosuccinate (Copper-Free Form)
Stupeň A: K roztoku 15,0 g kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) ve 400 ml dimethylformamidu se za chlazení na 0 °C přidá ' 1,1 ml N-methyymorfolinu a · 10,3 gramu činidla CCBT, roztok se míchá 5 . minut při 0 °C, pak se k němu přidá 5,3 g aminosloučeniny a směs se míchá další 1 hodinu. Reakce se přeruší přidáním 200 ml 25% vodného roztoku kyseliny octové a roztok se zředí 5 litry chladného acetonu. Vysrážený surový reakční produkt se odfiltruje, promyje acetonem a rozpustí v 500 ml destilované vody. Vodný roztok se ihned okyselí na pH 6,0 a nalije na sloupec připravený ze 2 litrů CM-Sephadexu (§) 025 (NPH + forma] nasuspendovaného v 0,05 M vodném roztoku chloridu amonného.Step A: To a solution of 15.0 g of bleomycinic acid (copper form) in 400 ml of dimethylformamide was added, while cooling to 0 ° C, 1.1 ml of N-methyymorpholine and 10.3 grams of CCBT reagent, and the solution was stirred for 5 minutes. minutes at 0 ° C, then 5.3 g of the amino compound is added and the mixture is stirred for an additional 1 hour. The reaction was quenched by the addition of 200 mL of 25% aqueous acetic acid and diluted with 5 L of cold acetone. The precipitated crude reaction product was filtered off, washed with acetone and dissolved in 500 ml of distilled water. The aqueous solution was immediately acidified to pH 6.0 and poured onto a column made up of 2 liters of CM- S ephadex ( § ) O2 5 (NPH + form) suspended in 0.05 M aqueous ammonium chloride solution.
Naadsorbované bleomyciny se eluují vodným roztokem chloridu amonného tím způsobem, že se sloupcem nechá protéci 20 litrů eluentu, ve kterém koncentrace chloridu amonného kontinuálně stoupá z 0,05 M na 1,0 M. Nezreagovaná kyselina bleomycinová vytéká ze sloupce při koncentraci chloridu amonného asi 0,05 M, a bleomycin NK 631 při koncentraci chloridu - amonného asi 0,45 M. Frakce obsahující shora uvedené bleomyciny, vykazují absorpci v ultrafialové oblasti při 292 nm, se separátně spojí.The adsorbed bleomycins are eluted with an aqueous ammonium chloride solution by passing 20 liters of eluent through the column in which the concentration of ammonium chloride continuously rises from 0.05 M to 1.0 M. Unreacted bleomycin acid flows out of the column at an ammonium chloride concentration of about 0 0.5 M, and bleomycin NK 631 at an ammonium chloride concentration of about 0.45 M. Fractions containing the above bleomycins, exhibiting ultraviolet absorption at 292 nm, were separately pooled.
Frakce obsahující bleomycin NK 631 se nalije na sloupec iontoměniče, připravený ze 2,6 litrů Amberlitu _ @ XAD-2. Sloupec s naadsorbovanou látkou se promyje důkladně vodou a produkt se eluuje 0,01 N roztokem kyseliny chlorovodíkové ve směsi methanolu s vodou (4:1, obj/obj). Jímá se celkem 2,5 litrů modře zbarvených frakcí, které vykazují UF absorpci při 292 nm. Ze spojených eluátů se odpaří methanol, vodný koncentrát se upraví na pH 6,0 Dowexem (§) 44 v OH~ formě (obchodní značka pro anexovou pryskyřici složenou z kopolymerů epichlorhydrinu s amoniakem, vyráběnou a dodávanou firmou Dow Chemical Co., USA] a rozpouštědlo se odstraní lyofilisací. Získá se 16,1 g (výtěžek 92 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 - (formy obsahující měd] ve formě modře zbarveného amorfního prášku.The fraction containing bleomycin NK 631 is poured onto an ion exchange column prepared from 2.6 liters of Amberlite X AD-2. The adsorbed column is washed thoroughly with water and the product is eluted with a 0.01 N hydrochloric acid solution in methanol / water (4: 1, v / v). A total of 2.5 liters of blue-colored fractions are collected which exhibit UV absorption at 292 nm. Methanol is evaporated from the combined eluates, the aqueous concentrate is adjusted to pH 6.0 with Dowex (§) 44 in OH-form (a trademark for an anion exchange resin composed of epichlorohydrin-ammonia copolymers manufactured and supplied by Dow Chemical Co., USA) and the solvent was removed by lyophilization to give 16.1 g (92% yield) of bleomycin dihydrochloride NK 631 - (copper-containing forms) as a blue amorphous powder.
Podobným způsobem se z dříve přecházejících frakcí zregeneruje 280 mg nezreagované kyseliny bleomycinová (formy obsahující měď).In a similar manner, 280 mg of unreacted bleomycinic acid (copper-containing forms) was recovered from the preceding fractions.
Získaný dihydrochlorid bleomycinu NK 631 (forma obsahující měď) má následující spektrální a antimikrobiální - charakteristiky:The obtained bleomycin dihydrochloride NK 631 (copper-containing form) has the following spectral and antimicrobial characteristics:
Absorpční maxima v ultrafialové oblasti:Absorption maxima in ultraviolet:
1%1%
Amax (nm) E - - . destilovaná vodaΛmax (nm) E - -. Distilled water
242 (151)242 (152)
292 (121)292 (122)
Antimikrobiální mohutnost: 8 100 j/mgAntimicrobial cardinality: 8 100 j / mg
Poznámka:Note:
Antimikrobiální mohutnost byla stanovena za použití Mycobacteria smegmatis ATCC 607 jako testovacího mikroorganismu, ve srovnání s antibakteriální mohutností bleomycinu Až (formy prosté mědi) rovné 1000 j/mg. Stejným způsobem byla testována antimikrobiální mohutnost u níže uvedených bleomycinu.Antimicrobial potency was determined using Mycobacteria smegmatis ATCC 607 as a test microorganism, as compared to the antibacterial potency of bleomycin A 1 (copper free forms) equal to 1000 J / mg. In the same way, the antimicrobial cardiovascular power was tested for the bleomycins listed below.
Stupeň B: Roztok 10 g dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve 200 ml destilované vody se nalije na sloupec Amberlitu (R) XAD-2, připravený nasuspendováním 600 ml iontoměniče v destilované vodě. Sloupec se postupně promývá 2 litry 5% vodného roztoku EDTA.Naž, 2,5 litry 5% vodného roztoku síranu sodného a 630 ml destilované vody. Poté se produkt ze sloupce eluuje 0,0025 N roztokem kyseliny sírové ve směsi methanolu s vodou (1 : : 1, obj/obj). Jímají se frakce- obsahující látku vykazující absorpci v UF oblasti při 290 nm (celkem 900 ml). Ze spojených frakcí se oddestiluje methanol, zbývající vodný roztok se upraví Dowexem @44 (v OH formě) na pH 6,0 a rozpouštědlo se odstraní lyofilisací. - Získá se 9,3 g [výtěžek - 95 %) monosulfátu bleomycinu NK 631 (formy prosté mědi] ve formě světle žlutobíle zbarveného amorfního prášku. Uvedený produkt má následující spektrální aantimlkrobiální charakteristiky:Step B: A solution of 10 g of bleomycin NK 631 dihydrochloride (copper form) in 200 ml of distilled water is poured onto an Amberlite (R) XAD-2 column prepared by suspending 600 ml of ion exchanger in distilled water. The column is washed successively with 2 liters of 5% aqueous EDTA solution. Then, 2.5 liters of 5% aqueous sodium sulfate solution and 630 ml of distilled water. The product was then eluted from the column with 0.0025 N sulfuric acid in methanol / water (1: 1, v / v). Fractions containing a substance exhibiting absorption in the UV region at 290 nm (total 900 ml) were collected. From the pooled fractions methanol was distilled off, the remaining aqueous mites will be adjusted to a Dowex® 44 (OH form) to pH 6.0 and the solvent removed by lyophilization. 9.3 g (yield - 95%) of bleomycin monosulfate NK 631 (copper free form) are obtained in the form of a pale yellow-white colored amorphous powder, said product having the following spectral and anantimlrobial characteristics:
Absorpční maxima v ultrafialové oblasti:Absorption maxima in ultraviolet:
Amax (nm)Amax (nm)
290290
1% E 1% 0,1 N HC1 (106)1% E 1% 0.1 N HCl (106)
Antimikrobiální mohutnost: 7 865 j/mg.Antimicrobial cardinality: 7 865 j / mg.
Příklad 2Example 2
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)Synthesis of NK 631 dihydrochloride (forms containing copper)
K roztoku 1,5 g kyseliny bleomycinová (formy .obsahující měď] ve 40 ml - destilované vody se za míchání, při teplotě - 26 - °C, přidá 800 mg činidla NEPIŠ, přičemž se pH reakční směsi udržuje přidáváním 0,01 N vodného roztoku hydroxidu sodného v rozmezí 4,8 až 5,5. Po- 30 minutách se ke směsi přidá roztok připravený rozpuštěním 1,8 g aminosloučeniny ve 20 ml destilované vody a upravením pH kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 7,0. Reakční směs se nechá stát 20 hodin při 26 °C a pak se k roztoku za míchání přidá 600 ml chladného acetonu. Vyloučená sraženina bleomycinových složek se odfiltruje, promyje acetonem, rozpustí ve 30 ml destilované vody -a roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0. Získaný vodný roztok se čistí způsobem popsaným ve stupni A příkladu 1 a získá se 932 mg (výtěžek 53 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď] ve formě modře zbarveného amorfního prášku vykazujícího antimikrobiální mohutnost rovnou 8 073 j/mg.To a solution of 1.5 g of bleomycinic acid (copper-containing form) in 40 ml of distilled water was added, while stirring at -26 ° C, 800 mg of NEPIŠ reagent while maintaining the pH of the reaction mixture by adding 0.01 N aq. After 30 minutes, a solution prepared by dissolving 1.8 g of the amino compound in 20 ml of distilled water and adjusting the pH to 7.0 with hydrochloric acid is added to the mixture. 20 hours at 26 DEG C. and then 600 ml of cold acetone are added to the solution with stirring, and the precipitated bleomycin component precipitate is filtered off, washed with acetone, dissolved in 30 ml of distilled water and immediately acidified with 0.1 N hydrochloric acid to pH 6. The resulting aqueous solution was purified as described in Step A of Example 1 to obtain 932 mg (53% yield) of Bleomycin dihydrochloride NK 631 (copper containing forms) as a blue amo RF powder exhibiting an antimicrobial power of 8073 J / mg.
Příklad 3Example 3
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď]Synthesis of NK 631 dihydrochloride (forms containing copper)
K roztoku 1,5 g kyseliny bleomycinové (formy obsahující · měď] ve 40 ml dimethylsulfoxidu se při teplotě 30 °C, za míchání, přidá 740 mg N-ethoxykarbonyl-2-ethoxy-l,2-dihydrochinolinu a 0,1 ml N-methylmorfolinu. Roztok se míchá 30 minut, pak se za stálého míchání přidá 530 mg aminosloučeniny a směs se nechá stát 3 hodiny při 30 stupních Celsia, Bleomycinové složky se za míchání vysráží přidáním 600 ml chladného acetonu, sraženina se odfiltruje, promyje acetonem, rozpustí ve 30 ml destilované vody a roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0. Získaný vodný roztok se zpracuje způsobem popsaným ve stupni A příkladu 1 a získá se 809 mg (výtěžek 46 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď] ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 028 j/mg.740 mg of N-ethoxycarbonyl-2-ethoxy-1,2-dihydroquinoline and 0.1 ml of N are added to a solution of 1.5 g of bleomycinic acid (form containing copper) in 40 ml of dimethylsulfoxide at 30 DEG C. with stirring. The solution is stirred for 30 minutes, then 530 mg of the amine compound is added with stirring, and the mixture is allowed to stand for 3 hours at 30 degrees Celsius, the Bleomycin component is precipitated with stirring by adding 600 ml of cold acetone, filtered. in 30 ml of distilled water and the solution was immediately acidified with 0.1 N hydrochloric acid to pH 6.0 The aqueous solution obtained was treated as described in Step A of Example 1 to give 809 mg (46% yield) of bleomycin dihydrochloride NK 631 (forms containing copper] in the form of a blue colored amorphous powder, which exhibits an antimicrobial cardinality of 8 028 j / mg.
P,ř í k 1 a d 4P, s 1 and d 4
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)Synthesis of NK 631 dihydrochloride (forms containing copper)
K roztoku 1,5 g kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) ve 40 ml destilované vody se při 27 °C přidá 1,2 g hydrochloridu l-ethyl-3- (3-dimeehylaminopropyl )karbodiimidu a směs se okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 4,5. Poté se přidá 530 mg aminosloučeniny, pH roztoku se upraví 1 N kyselinou chlorovodíkovou na hodnotu 5,0 a směs se nechá stát 20 hodin při 27 °C, K reakční směsi se za míchání přidá 400 ml chladného acetonu a vysrážené bleomycinové složky se odfiltrují a promyjí acetonem. Surový produkt se rozpustí ve 30 ml destilované vody a roztok se ihned upraví 0,1 N hydroxidem sodným na pH 6,0. Získaný vodný roztok se čistí způsobem popsaným ve stupni A příkladu 1 a získá se 440 mg (výtěžek 25 %) dihydrochloridu bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 7 985 j/mg.To a solution of 1.5 g bleomycinic acid (copper containing form) in 40 ml distilled water at 27 ° C was added 1.2 g 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride and acidified with 0.1 N acid hydrochloric acid to pH 4.5. 530 mg of the amino compound are then added, the pH of the solution is adjusted to 5.0 with 1 N hydrochloric acid, and the mixture is allowed to stand at 27 ° C for 20 hours. 400 ml of cold acetone are added to the reaction mixture with stirring. wash with acetone. The crude product was dissolved in 30 ml of distilled water and the solution was immediately adjusted to pH 6.0 with 0.1 N sodium hydroxide. The obtained aqueous solution was purified as described in Step A of Example 1 to give 440 mg (25% yield) of bleomycin dihydrochloride NK 631 (copper containing forms) as a blue amorphous powder having an antimicrobial strength of 7,985 J / mg.
Příklad 5Example 5
Synthesa dihydrochloridu NK 631 (formy obsahující měď)Synthesis of NK 631 dihydrochloride (forms containing copper)
K roztoku 9,0 g monohydrochloridu 3-N-benzoylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď) se za chlazení na 0 °C přidá 9,16 g aminosloučeniny.To a solution of 9.0 g of 3-N-benzoylaminopropyl bleomycinate monohydrochloride (copper containing forms) was added 9.16 g of the amino compound while cooling to 0 ° C.
Reakční směs se míchá 40 hodin při 0 °C a pak se přidá dostatečné množství chladného acetonu, kterým se vysráží reakční produkty. Sraženina se odfiltruje, promyje acetonem a · rozpustí v 300 ml destilované vody, Roztok se ihned okyselí 0,1 N kyselinou chlorovodíkovou na pH 6,0 a nalije na sloupec připravený z 1 litru CM-Sephadexu (g)The reaction mixture was stirred at 0 ° C for 40 hours and then sufficient cold acetone was added to precipitate the reaction products. The precipitate is filtered off, washed with acetone and dissolved in 300 ml of distilled water. The solution is immediately acidified with 0.1 N hydrochloric acid to pH 6.0 and poured onto a column prepared from 1 liter of CM-Sephadex (g).
C-25 (NH4+ forma] rozmíchaného v 0,05 · M vodném roztoku chloridu amonného. Sloupec s naadsorbovanými bleomyciny se promývá 10 litry vodného roztoku chloridu amonného, jehož koncentrace se kontinuálně zvyšuje z 0,05 M až na 1,0 M. Nezreagovaný 3-N-eenzoalaminopropeleerer kyseliny bleomycinové se vymývá ze sloupce roztokem chloridu amonného o koncentraci asi 0,2 M, a bleomycin NK 631 chloridem amonným o koncentraci asi 0,45 M. Frakce obsahující tyto bleomyciny, vykazující absorpci v UF oblasti při 272 nm, se separátně spojí. Podíl . obsahující bleomycin NK 631 se nalije na sloupec iontoměni^čové pryskyřice, připravený z 1,3 litru AmbeeUitu @ XAD-2. Sloupec se promyje důkladně vodou a produkt se . eluuje 0,01 N roztokem kyseliny chlorovodíkové ve směsi methanolu s vodou (4:1, obj/obj). Jímá s celkem 2,5 litrů modře zbarvených frakcí, které vykazují absorpci v UF oblasti spektra · při 292 nm. Ze spojených frakcí se oddestiluje methanol, · zbylý vodný roztok bleomycinu se upraví Dowexem f 44 (v OH~ formě) na pH 6,0 a pak se lyofilis^uj^e. Získá se 8,2 g [výtěžek 90· %) dihydrochloridu · bleomycinu NK 631 (formy obsahující měď) ve formě modře zbarveného amorfního prášku, který vykazuje antimikrobiální mohutnost 8 030 j/mg.C-25 (NH4 + form) mixed in 0.05 M aqueous ammonium chloride solution The column with adsorbed bleomycins is washed with 10 liters of aqueous ammonium chloride solution, whose concentration is continuously increased from 0.05 M to 1.0 M. The unreacted 3-N-eenzoalaminopropeleer of bleomycin acid is eluted from the column with a solution of about 0.2 M ammonium chloride, and bleomycin NK 631 with about 0.45 M ammonium chloride. Fractions containing these bleomycins exhibiting absorption in the UF region at 272 nm The aliquot containing bleomycin NK 631 is poured onto an ion exchange resin column prepared from 1.3 liters of AmbeeUit® XAD-2, the column is washed thoroughly with water and the product is eluted with 0.01 N hydrochloric acid solution. methanol / water (4: 1, v / v) with a total of 2.5 liters of blue-colored fractions showing absorption in the UF spectrum · at 292 nm. The remaining aqueous bleomycin solution was adjusted to pH 6.0 with Dowex f 44 (OH-form) and then lyophilized. 8.2 g (yield 90%) of bleomycin NK 631 (copper-containing forms) are obtained in the form of a blue-colored amorphous powder which exhibits an antimicrobial power of 8030 J / mg.
Podobným způsobem se z dříve přecházejících frakcí získá 910 mg nezreagovaného monohydrochloridu 3-N-benzoylaminopropylesteru kyseliny bleomycinové (formy obsahující měď).In a similar manner, 910 mg of unreacted 3-N-benzoylaminopropyl bleomycinic acid monohydrochloride (copper-containing forms) was obtained from the preceding fractions.
P říklad 6Example 6
Synthesa N-[ (S )-r-fenylethyl]-l,3-diammopropanu („amieotloučeniea”)Synthesis of N- [(S) -r-phenylethyl] -1,3-diammopropane ('amieotlouceniea')
K 50 g (Sl-l-fenylethylamirnu se za chlazení na 0 °C a za míchání přidá 33 g akryloeitrilu. Na.baňku s reakční směsí se nasadí zpětný chladič opatřený chlorkalciovým uzávěrem a směs se za míchání · zahřívá 18 hodin na 93 °C. Po skončení zahřívání se přebytečný alkrylonitril oddessiluje za sníženého tlaku a zbývající surový produkt se předestiluje za sníženého tlaku; jímá · se frakce vroucí při 142 až 145 °C při 0,93 kPa. Získá se 53,5 g 3-[ (S))Γ-fenylethylamieoJrropionitrilu.To 50 g of (S1-l-phenylethylamine) was added 33 g of acryloeitrile while cooling to 0 ° C and stirred while the reaction mixture flask was fitted with a chloro-calcium reflux condenser and heated to 93 ° C for 18 hours with stirring. After heating, the excess alkrylonitrile was distilled off under reduced pressure and the remaining crude product was distilled off under reduced pressure, collecting the fractions boiling at 142-145 ° C at 0.93 kPa to give 53.5 g of 3- [(S)]. 1-Phenylethylamino-propionitrile.
Získaný nitnl se vnese do hydrogenačního autoklávu, přidá se 5 g Raneyova niklu W-7 a 50 ml ethanolu obsahujícího 15 % amoniaku a směs se hydrogenuje, za míchání rychlostí 1000 otáček za minutu, při teplotě 50 až 58 °C, vodíkem pod parciálním tla205126 kem 10 až 4 MPa po dobu 1,5 hodiny. Po skončení hydrogenace se reakční směs destiluje za sníženého tlaku a jímá se frakce vroucí při 95 až 103 °C při 0,27 kPa. Získá se 48,3 g N-[ (S)-l’-fenylethyl]-l,3-diaminopropanu (výtěžek 66 % teorie, počítáno na výchozí (S]-l-fenylethylamin).The nitrile obtained is introduced into a hydrogenation autoclave, 5 g of Raney nickel W-7 and 50 ml of ethanol containing 15% ammonia are added, and the mixture is hydrogenated, with stirring at 1000 rpm, at 50 to 58 ° C, with hydrogen under partial pressure. 10 to 4 MPa for 1.5 hours. After completion of the hydrogenation, the reaction mixture was distilled under reduced pressure and the fraction boiling at 95-103 ° C at 0.27 kPa was collected. 48.3 g of N- [(S) -1'-phenylethyl] -1,3-diaminopropane are obtained (yield 66% of theory, calculated on the starting (S) -1-phenylethylamine).
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS795926A CS205127B2 (en) | 1977-07-01 | 1979-08-30 | Process for preparing 3-/s/-1'-phenylethylamino-propylaminobleomycine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12248577A JPS5463089A (en) | 1977-10-14 | 1977-10-14 | Preparation of 3-(s)-1' phenylethylaminopropylamino-bleomycin and its non-toxic salt |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS205126B2 true CS205126B2 (en) | 1981-04-30 |
Family
ID=14837007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS430178A CS205126B2 (en) | 1977-07-01 | 1978-06-29 | Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5463089A (en) |
| CS (1) | CS205126B2 (en) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS58116497A (en) * | 1981-12-29 | 1983-07-11 | Microbial Chem Res Found | Aminopropylaminobleomycin derivative and its preparation |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS4832355A (en) * | 1971-08-27 | 1973-04-28 | ||
| JPS5614118B2 (en) * | 1972-09-21 | 1981-04-02 | ||
| JPS5623999B2 (en) * | 1972-11-15 | 1981-06-03 | ||
| JPS5414980A (en) * | 1977-07-01 | 1979-02-03 | Nippon Kayaku Co Ltd | 3-((s)-1'-phenylethylamino)propylaminobleomycin |
-
1977
- 1977-10-14 JP JP12248577A patent/JPS5463089A/en active Pending
-
1978
- 1978-06-29 CS CS430178A patent/CS205126B2/en unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5463089A (en) | 1979-05-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4658058A (en) | 11-O-methylspergualin | |
| US6444706B2 (en) | Guanidine derivatives, processes for preparing them and their use as pharmaceutical compositions | |
| WO2007038868A2 (en) | Novel enediyne compound and uses thereof | |
| CA1060003A (en) | N-trifluoroacetyladriamycin-14-alkanoates and therapeutic compositions containing same | |
| US4238391A (en) | 3-[(S)-1'-phenylethylamino]propylaminobleomycin, non-toxic salt thereof, and method for producing same | |
| WO1988008715A1 (en) | Method of tumor inhibition in warm-blooded animals | |
| CN106631957A (en) | Antitumor compound targeting FAP-alpha enzyme and preparation method and application thereof | |
| US4663342A (en) | Pharmaceutical composition and method for immunopotentiation | |
| CS205126B2 (en) | Process for preparing 3-/s/-1-phenylethylamino-propylaminobleomycin and non-toxic salt thereof | |
| US4424348A (en) | Methods of manufacture of nitrile-containing glucuronic acid conjugates | |
| JPH0243727B2 (en) | ||
| EP0262404A1 (en) | Glucosylmoranoline derivatives | |
| US4349546A (en) | D-Allose derivative and preparation method therefor | |
| GB2025410A (en) | 3 - dydroxy - 4 hydroxymethyl benzoic acid its esters salts and hydrates | |
| JPS6260394B2 (en) | ||
| CS210673B2 (en) | Manufacturing process of 3-(ls)p-1 - phenylethylamino prropylaminobleomycine | |
| JPH022593B2 (en) | ||
| CS205127B2 (en) | Process for preparing 3-/s/-1'-phenylethylamino-propylaminobleomycine | |
| US4666887A (en) | Intravenous or intraperitoneal administration of a tripeptide compound for treating cancer | |
| EP0213526A1 (en) | Spergualin-related compounds, a process for their preparation and their use as medicaments | |
| KR810001407B1 (en) | Preparation of 3-[(S) -1′-phenylethyl amino] propyl amino bromycin | |
| US4661495A (en) | Arphamenine-related compounds useful for potentiating the immune response in a living animal | |
| FI62283C (en) | FRAMEWORK FOR THE PREPARATION OF THERAPEUTIC NUTRITIONAL N-2'-CARBOXYPHENYL-4-CHLORANTRANYL SYRADERIVAT | |
| JPH029897A (en) | Teicoplanin hydrazide | |
| EP0051812B1 (en) | Peptide, process for preparation thereof and use thereof |