FR2924610A1

FR2924610A1 - Composition cosmetique contenant un extrait de lotus et methode de soin cosmetique utilisant cette composition.

Info

Publication number: FR2924610A1
Application number: FR0858318A
Authority: FR
Inventors: Jean Christophe Archambault; Jocelyne Franchi; Rodolphe Korichi
Original assignee: LVMH Recherche GIE
Current assignee: LVMH Recherche GIE
Priority date: 2007-12-10
Filing date: 2008-12-05
Publication date: 2009-06-12
Anticipated expiration: 2028-12-05
Also published as: US20090148544A1; FR2924610B1; JP2009143912A; US8753693B2; FR2924609A1; JP5582630B2

Abstract

L'invention concerne l'utilisation d'au moins un extrait d'au moins une partie de la plante Lotus Sacré (Nelumbo nucifera) en tant qu'agent actif cosmétique permettant d'obtenir un effet calmant et apaisant sur la peau.Elle concerne également des compositions cosmétiques contenant un extrait de Lotus Sacré, en particulier un extrait de racines de Lotus Sacré et éventuellement un extrait de fleur de Lotus Sacré.Elle concerne également une méthode de soin cosmétique tout particulièrement destinée au soin des peaux sensibles ou réactives.

Description

L'invention concerne une composition cosmétique contenant un extrait de Lotus et une méthode de soin cosmétique utilisant cette composition. Le Lotus Sacré (Nelumbo nucifera Gaertn.) est une plante 5 aquatique de la famille des Nélumbonacées, qu'on trouve notamment dans le sud-est Asiatique. C'est une plante vivace grâce à sa tige en rhizome spongieux, épais, ramifié, portant des tubercules fixés dans le fond de l'étang, dont les fleurs, de couleur blanc rosé, ont 15 à 30 cm de diamètre et comportent une 10 vingtaine de pétales. On a déjà décrit de nombreuses utilisations cosmétiques des extraits de Lotus Sacré. La présente invention porte cependant sur une nouvelle utilisation cosmétique d'un extrait de Lotus Sacré, notamment pour le soin des peaux 15 soumises à un stress. Cette nouvelle utilisation est tout particulièrement adaptée au soin des peaux sensibles. En effet, une peau sensible se caractérise par une tendance à une hyperréactivité par rapport à une peau normale quand elle est soumise 20 au même stimulus, et en particulier à un stimulus environnemental. Cette hyperréactivité se traduit par des picotements, des rougeurs, des échauffements des fourmillements ou des démangeaisons, parfois accompagnées de rougeurs. Les stimuli environnementaux qui déclenchent ou induisent de 25 telles réactions peuvent être de nature physique (rayonnement UV, températures...), chimique (pollution...) hormonale (cycle menstruel) ou émotionnelle (stress) (Morizot et al. Cosmetics and toifetries, 2000, 115 (11), p. 83-89). Des auteurs ont montré que la CGRP (Calcitonin gene-related peptide) qui est le peptide lié au gène de la calcitonine est un neuromédiateur, qui au niveau des cellules neurosensitives de la peau, est impliqué dans la réaction inflammatoire induite par exemple par une irradiation de la peau par un rayonnement ultraviolet (UV) (Scholzen et al., 3 Investig. Dermatol. Symp. Proc., 1999 ; 4(1) : 55-60).

Il a été montré que le neuropeptide CGRP libéré par les cellules nerveuses de la peau, stimule des cellules endothéliales du derme pour libérer !Interleukine 8 (Il-8), un médiateur important de l'inflammation cutanée (Anse) et ai., J Investig. Dermatol. Symp. Proc., 1997 ; 2(1) :23-26). Les effets liés au stress s'expriment au niveau cutané souvent plus intensément chez les personnes ayant une peau sensible ou réactive. On définit ici le stress comme la tension qui résulte de l'adaptation de l'organisme face à des situations particulières ou vécues comme telles. Le stress est donc une réalité subjective qui dépend à la fois de la nature et du caractère prévisible ou non de !'élément stressant et de la façon dont l'individu le perçoit et le vit. 10 Des chercheurs ont montré que la perception d'un stress au niveau du système nerveux central se transmet aux organes périphériques tels que la peau, par l'intermédiaire de neurotrophines et de neuropeptides. La CGRP est un des neuropeptides qui participe à la création d'un état d'irritation au niveau cutané, en exacerbant les sensations 15 d'inconfort (tiraillement ou picotements) qu'on retrouve plus particulièrement chez les personnes présentant une peau sensible. En particulier, il a été démontré que chez des rats soumis à un stress, en l'occurrence un stress sonore, le taux de CGRP libérée par les fibres sensitives de la peau est significativement augmenté (Joachim et al., 20 J Mol Med., 2007 Jul 17). Par ailleurs, une hormone habituellement désignée comme l' hormone du stress est le cortisol. Le cortisol est une hormone corticostéroïde secrétée par le cortex de la glande surrénale à partir du cholestérol et sous la dépendance de 25 l'ACTIl hypophysaire. Des auteurs ont montré que le niveau de cortisol salivaire dans la cavité buccale est soumis à des variations au cours d'épisodes de stress, et que cette hormone est plus particulièrement libérée en période d'évènements négatifs générateurs de stress (Smyth, et al., Psychoneuroendocrinology X998;23:353-370). Ainsi, le cortisol salivaire constitue un marqueur intéressant pour mettre en évidence l'effet d'un stress. Un autre marqueur est l'alpha-amylase L'alpha- amylase est une enzyme salivaire que des travaux récents 35 ont désignée comme un autre marqueur du stress. Il a été ainsi suggéré que la sécrétion salivaire d'alpha-amylase en réponse à un stress correspond à l'activation du système nerveux sympathique (Rohleder et al., Ann. N.Y. Acad. Sei., 2004, 1032, 258 û 263). Des études ont montré une corrélation entre la mesure de l'activité de l'alpha-amylase salivaire avant, puis juste après, un épisode de stress et l'état mental du sujet sur lequel te test est pratiqué (Yamaguchi, Proceedings of the 25th Annual International Conference of the IEEE, 2003, 4, 3075- 3078). Une étude visant à comparer l'évolution de ces deux marqueurs salivaires, cortisol et alpha-amylase, au cours d'épisodes de stress psychologiques a conclu que l'alpha-amylase salivaire augmentait plus significativement et plus rapidement que le cortisol salivaire, en réaction à un stress psychologique suggérant que cette enzyme est un meilleur indicateur du stress, mais également de la relaxation et de l'apaisement (Takai, Arch. Oral Biot., 2004, 49 (12), 963-968).

La Demanderesse a tout d'abord vérifié, en utilisant un modèle de co-culture de neurones sensitifs et de kératinocytes, qu'un extrait aqueux de racine de Lotus Sacré présente un effet favorable d'inhibition de la sécrétion de CGRP, neuromédiateur impliqué dans la réactivité cutanée, par les neurones sensitifs.

La Demanderesse a ensuite mis en évidence que des extraits aqueux de racine de Lotus Sacré associés à différents actifs et éventuellement à d'autres extraits de la même plante, permettaient de préparer des compositions entraînant une diminution significative des effets d'un stress. Cet effet a été mis en évidence en mesurant les marqueurs salivaires précités. De telles compositions qui constituent des produits nouveaux présentent de remarquables propriétés, en permettant à la fois de limiter les effets négatifs sur la peau liés à des facteurs environnementaux tels que le stress, et de procurer un effet calmant et apaisant sur la peau dans le cas des manifestations exacerbées desdits facteurs environnementaux, en particulier du stress, sur les peaux sensibles. Par ailleurs, ces compositions, du fait de la présence du des autres actifs et tout particulièrement d'un extrait supplémentaire de la même plante, présentent, outre un effet apaisant et calmant sur la peau, 5 principalement lié à la présence de l'extrait aqueux de racine de Lotus Sacré qui limite la production de CGRP, différentes autres propriétés qui agissent en synergie avec cet effet pour conduire à des compositions qui permettent de préserver la peau des différentes tensions ou agressions quotidiennes et d'améliorer sa réceptivité sensorielle. En effet, la peau se trouve, grâce aux compositions de l'invention, 5 dans un véritable état de relaxation. Par ailleurs, la présence d'au moins un des agents actifs particuliers entrant dans la composition permet d'améliorer encore l'effet obtenu en apportant au moins un effet supplémentaire permettant d'obtenir une peau plus détendue par un effet myo-relaxant et/ou une meilleure 10 protection contre les radicaux libres et/ou une amélioration de la réceptivité sensorielle de la peau et/ou une stimulation du métabolisme cellulaire. La présence des autres actifs dans la composition de l'invention permet d'obtenir au moins un de ces effets et d'agir ainsi en synergie avec l'actif principal de la composition (extrait aqueux de racine de Lotus Sacré) 15 pour conduire à des compositions particulièrement adaptées au soin des peaux sensibles et permettant de procurer à la peau un effet relaxant, calmant et apaisant lorsqu'elle est soumise à différents effets de stress et/ou à obtenir progressivement des traits du visage détendus, une peau plus lisse et tonifiée, une peau apaisée et plus douce au toucher, un teint lumineux et 20 éclatant. Ainsi, selon un premier aspect, l'invention concerne une nouvelle composition cosmétique contenant au moins un extrait d'au moins une partie de la plante Lotus Sacré (Nelumbo nucifera) dans un véhicule cosmétiquement acceptable compatible avec une application topique sur la 25 peau, caractérisée en ce que ladite composition contient un extrait aqueux de racine de Lotus Sacré et en ce qu'elle contient en outre au moins un agent actif choisi dans le groupe constitué : des agents actifs à activité énergisante ou revitalisante, des agents actifs stimulant la sécrétion des béta-endorphines, 30 des agents anti-radicalaires et des agents anti-inflammatoires. Selon des variantes préférées de ce premier aspect, l'agent actif à activité énergisante ou revitalisante est le polyphosphate de diguanosine ou un extrait en contenant, en 35 particulier un extrait d'Attend satina, - l'agent actif stimulant la sécrétion des bêta-endorphines est le dipeptide N-acétyl-Tyr-Arg -hexadécylester, l'agent antiradicalaire est avantageusement choisi parmi le tocophérol, en particulier l'alpha-tocophérol sous la forme d'un sel ou d'une base, ou d'un de ses esters, par exemple l'acétate de tocophérol, et les extraits de plante en contenant ainsi que les flavonoïdes et les anthocyanes et des extraits de plante en contenant, en particulier les extraits de fleur de Lotus Sacré et l'agent anti-inflammatoire est choisi parmi ceux qui ont une action inhibitrice sur la phospholipase A2. Il s'agit, de préférence, d'un sel d'ascorbyl tocophéryl phosphate, de préférence l'ascorbyl tocophéryl phosphate de potassium. Selon un deuxième aspect, l'invention concerne une méthode de soin cosmétique utilisant la composition qui fait l'objet du premier aspect. Cette méthode de soin cosmétique est destinée à procurer à la peau soumise aux effets d'un stress, un effet relaxant, calmant et apaisant et/ou à obtenir progressivement des traits du visage détendus, une peau plus lisse et tonifiée, une peau apaisée et plus douce au toucher, un teint lumineux et éclatant et comprend l'application sur la partie de la peau du visage ou du corps concernée d'une quantité efficace pour obtenir les effets précités d'une composition faisant l'objet du premier aspect. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention ressortiront de la description détaillée qui suit. Ainsi, les compositions de l'invention contiennent à titre d'agent actif principal un extrait aqueux de racines de Lotus Sacré et contiennent en outre au moins un agent actif complémentaire. Les résultats obtenus par la demanderesse ont, comme exposé précédemment, permis de démontrer dans un test in vitro (co- culture de kératinocytes et de neurones sensitifs) les effets apaisants et neuro-protecteurs dus à la présence de l'extrait principal (extrait aqueux de racine de Lotus Sacré). Par ailleurs, la demanderesse a pu établir que lorsque cet extrait principal était associé à au moins un agent actif complémentaire tel que défini ci-dessus, il était possible d'obtenir un effet global in vivo sur la diminution du taux de cortisol salivaire, traduisant un effet de détente, de confort et de relaxation globale. Ces différents avantages apparaîtront plus clairement dans la description qui suit. L'extrait principal contenu dans la composition est un extrait aqueux de racines de Lotus Sacré.

Selon une variante particulièrement intéressante de l'invention, cet extrait est préparé selon un procédé d'entraînement à la vapeur, utilisant l'eau en tant que solvant. Ce procédé d'entraînement à la vapeur d'eau (indifféremment appelé hydrodistillation dans la présente demande) permet d'extraire en particulier des composés volatiles présents dans la plante et solubles dans l'eau, en particulier des composés aromatiques volatiles, par exemple des huiles essentielles. Pour la mise en oeuvre de ce procédé, on utilise de préférence le matériel végétal à l'état frais, c'est-à-dire fraîchement récolté et non séché. Selon ce procédé préféré, l'extrait est obtenu par un procédé d'hydrodistillation par lequel on amène de la vapeur d'eau exogène qui entraîne les composés volatiles solubles contenus dans la plante. Selon une mise en oeuvre alternative de ce même procédé, l'extrait peut être obtenu par un procédé d'hydrodistillation ne comprenant aucun apport exogène de vapeur d'eau. Selon cette dernière variante du procédé, on vaporise directement l'eau de constitution de la plante par des moyens physiques (ondes, pression, températures).

Un tel extrait peut en particulier être obtenu par un procédé d'hydrodistillation par micro-ondes sous vide pulsé (VMHD), par lequel l'eau de constitution de la plante est vaporisée sous pression réduite, à une température généralement inférieure à 80°C. La vapeur d'eau, qui provient exclusivement de la plante elle-25 même, entraîne les composés volatiles solubles de la plante. La vapeur d'eau collectée enrichie en composés volatiles solubles est ensuite condensée. Le produit de l'étape de condensation est ensuite filtré, puis avantageusement stérilisé de façon à en faciliter la conservation. Ainsi, l'extrait aqueux utilisé par les compositions de l'invention est e préférence un extrait aqueux de racines de Lotus Sacré (Nelumbo nucifera), en particulier un extrait obtenu par hydrodistillation par micro-ondes sous vide pulsé (VMHD) décrit ci-dessus. L'extrait préféré est obtenu à partir de racines fraîches et non 35 séchées de Lotus Sacré (Nelumbo nucifera). De préférence, cet extrait comprend des huiles essentielles.

Un exemple d'un tel extrait est l'extrait de racines de Lotus Sacré commercialisé par la société GATTEFOSSE sous la dénomination Extrait Originet de Lotus. Comme exposé précédemment, la composition cosmétique de l'invention contient, outre l'agent actif principal, à savoir, l'extrait aqueux de racine de Lotus Sacré, avantageusement obtenu par hydrodistillation, au moins un agent actif complémentaire qui, associé à cet extrait aqueux de racine de Lotus Sacré conduit à un effet global in vivo sur la diminution du taux de cortisol salivaire, pour conduire à l'effet recherché de détente, de confort et de relaxation global de la composition de l'invention. Comme exposé précédemment, les compositions de l'invention contiennent au moins un des réactifs précités en combinaison avec l'agent actif principal. Bien entendu, ceci n'exclut pas, au contraire, la présence dans la composition de l'invention de plusieurs agents actifs complémentaires avantageusement choisis dans les catégories d'actifs citées ci-dessus. On précisera les points suivants : 1) en tant qu'agents radicalaires, on choisit avantageusement un agent présentant une activité anti-radicalaire à large spectre, de façon à limiter au mieux la formation des radicaux hydroxyles et des radicaux 20 superoxydes. Dans ces conditions, il s'est avéré particulièrement avantageux d'utiliser en tant qu'agent radicalaire, dans la composition de la présente invention, un extrait de fleur de Lotus. En effet, en choisissant en particulier un extrait de fleur de Lotus particulièrement riche en flavonoïdes et en 25 anthocyanes, on pourra obtenir un spectre très large d'activité antiradicalaire. C'est pourquoi, les compositions cosmétiques de l'invention contiennent avantageusement un extrait de racine de Lotus Sacré et un extrait de fleurs de Lotus Sacré. 30 L'extrait de fleur de Lotus Sacré est avantageusement obtenu par extraction au moyen un solvant polaire ou d'un mélange de solvants polaires choisis dans le groupe constitué de l'eau, des alcools, en Cl à C4, en particulier l'éthanol, des glycols en C2 à C6, en particulier le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et de leurs mélanges. 35 Ainsi, les compositions de l'invention contiennent avantageusement un extrait de fleurs de Lotus Sacré (Nelumbo nucifera), de préférence dans un mélange butylène glycol/eau, de préférence un extrait riche en flavonoicles et anthocyanes. Un tel extrait est par exemple commercialisé par la société SOLABIA sous la dénomination Glycolisat BG de Lotus Sacré (fleurs). 2) A titre d'agents actifs à activité énergisante ou revitalisante, on choisit de préférence le phosphate de diguanosine ou encore de préférence un extrait en contenant, en particulier un extrait d'Artemia satina. Un tel extrait possède un effet revitalisant et énergisant pour les cellules, en stimulant la synthèse d'ATP, qui est la principale source énergétique indispensable au métabolisme cellulaire. 3) A titre d'agents anti-inflammatoires, on choisit de préférence un agent qui présente une activité inhibitrice de la phospholipase A2 et tout particulièrement les ascorbyl tocophéryl phosphates, en particulier rascorbyl tocophéryl phosphate de potassium. Ces diesters phosphoriques de la vitamine E et de la vitamine C agissent par leur activité apaisante en inhibant la phospholipase A2 qui est l'enzyme liée au processus inflammatoire. 4) A titre d'agents actifs stimulant la sécrétion des bêta-endorphines, on choisit de préférence un lipopetide aux propriétés relaxantes qui diminue la fréquence de contraction des fibres musculaires et stimule la production par les kératinocytes de bêta-endorphines. Ce lipopetide est avantageusement le dipeptide N-acétyl-Tyr-Arg-hexadécylester. Comme exposé précédemment, des compositions contenant au moins un des actifs complémentaires cités ci-dessus et de préférence au moins un actif de chacune des catégories ci-dessus ont pu être testées in 25 vivo sur un modèle de dosage de cortisol salivaire, attestant ainsi une réelle détente procurée par la composition de l'invention. Les compositions cosmétiques de l'invention contiennent en outre avantageusement un agent hydratant, en particulier le glycérol. Pour les raisons indiquées précédemment, la composition 30 cosmétique de l'invention contient avantageusement un extrait de fleur de Lotus Sacré, en particulier un extrait obtenu par extraction au moyen d'un solvant polaire. La composition cosmétique de l'invention, comprenant éventuelle- ment un extrait de fleur de Lotus en plus de l'extrait aqueux de racine, 35 contient avantageusement une teneur totale en extrait sec de Lotus sacré comprise entre 0,0001 et 5 %, de préférence de 0,001 et 2 %, de préférence encore entre 0,01 et 1 % en poids d'extrait sec. Cette composition contient avantageusement une teneur totale en extrait sec de Lotus sacré comprise entre 0,0001 et 5 °k, de préférence de 0,001 et 2 %, de préférence encore entre 0,01 et 1 % en poids d'extrait sec.

La composition selon l'invention comprend ainsi préférentiellement de 0,1 % â 99 %, de préférence de 0,1 % à 50 %, en poids d'extrait Lotus Sacré ou de mélanges d'extraits de Lotus Sacré. La composition cosmétique contient avantageusement un extrait de racines de Lotus Sacré et un extrait de fleurs de Lotus Sacré.

Elle contient en outre, de façon particulièrement avantageuse, au moins un autre agent actif complémentaire choisi dans l'une au moins des quatre catégories d'actifs précitées. L'extrait de fleur de Lotus Sacré est avantageusement obtenu par extraction au moyen d'un solvant polaire ou d'un mélange de solvants polaires choisi dans le groupe constitué de l'eau, des alcools, en Cl à C4, en particulier l'éthanol, des glycols en C2 à C6, en particulier le glycérol, le butylèneglycol et le propylèneglycol, et de leurs mélanges. En ce qui concerne les proportions des différents constituants de la composition cosmétique de l'invention, on notera que, de façon avanta- geuse, la composition contient de 10 à 50 % en poids d'un extrait aqueux de racine de Lotus Sacré et de 0,1 à 10 % en poids d'un extrait de fleur de Lotus Sacré. En ce qui concerne les autres agents actifs complémentaires, lorsqu'ils sont présents dans la solution, ils y sont contenus dans les 25 proportions suivantes - 0,5 à 5 % en poids de polyphosphate de diguanosine ou d'un extrait en contenant, en particulier d'un extrait d'Artémia saliva, - 0,1 à 5 % en poids du dipeptide N-Acétyl-Tyr-Arghexadécylester, 30 par ailleurs la composition peut en outre contenir avantageuse-ment de 1 à 15 °/c en poids de glycérol. Ainsi, la composition de l'invention contient avantageusement un extrait aqueux de racine de Lotus Sacré et un extrait de fleur de Lotus Sacré. Selon une mise en œuvre préférée de l'invention, la composition contient de 0,1 à 50 % en poids, d'extrait aqueux de racines de Nelumbo nucifera, de 0,1 % à 10 % en poids d'extrait de fleurs de Nelumbo nucifera, et peut avantageusement comprendre en outre de 0,5 à 5 % en poids de polyphosphate de diguanosine ou d'un extrait en contenant, particulièrement un extrait d'Artémia satina, de 0,1 % à 5 % en poids de dipeptide N-acéty Tyr-Arg-hexadécylester, commercialisé sous la dénomination Calmosensineee, de 0,01 % à 2 % en poids d'un sel d'ascorbyl tocophéryl phosphate et de 1 à 15 % en poids de glycérol. La composition cosmétique comprend au moins un excipient cosmétiquement acceptable qui peut être choisi parmi des pigments, des nacres, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents ante-oxydants, des conservateurs, et leurs mélanges. La composition cosmétique selon l'invention peut être par exemple un sérum, une lotion, une émulsion, une crème, teintée ou non, ou bien encore un hydrogel, de préférence un masque, ou se présenter sous la forme 15 d'un stick, ou encore d'un patch. Les compositions selon l'invention présentent un effet calmant et apaisant particulièrement recherché, et permettent en particulier d'obtenir des traits du visage détendus, une peau plus lisse et tonifiée, une peau apaisée et plus douce au toucher, un teint lumineux et éclatant, lorsqu'on 20 applique ledit extrait ou ladite composition sur la peau du visage ou du corps. La présente invention porte également sur une méthode de soin cosmétique utilisant les compositions précédemment décrites en quantité efficace pour procurer à la peau soumise aux effets d'un stress, un effet 25 relaxant, calmant et apaisant et obtenir progressivement des traits du visage détendus, une peau plus lisse et tonifiée, une peau apaisée et plus douce au toucher, un teint lumineux et éclatant, lorsqu'on applique ledit extrait ou ladite composition sur la peau du visage ou du corps. Les compositions selon l'invention sont destinées à être appliquées sur tout ou partie de la peau du corps ou du visage et en particulier sur les zones de la peau présentant une sensibilité exacerbée, en particulier sur le visage. La méthode de soin cosmétique est particulièrement destinée au soin des peaux sensibles ou réactives.

EXEMPLES

Exemple 1 : Activité d'un extrait de racines de (Nelumbo nucifera) sur la libération de CGRP (calcitonin gene-related peptide) dans un modèle de co-culture de neurones sensitifs et de kératinocytes.

Le modèle sélectionné est une co-culture de neurones sensitifs de rats et de kératinocytes humains. Le modèle est appliqué à un extrait de Lotus Sacré commercial et plus précisément à l'Extrait Originel de racine de 10 Lotus Sacré (Nelumbo nucifera), commercialisé par la Société Gattefosse. Les cultures de neurones sensitifs issus de ganglions rachidiens d'embryons de rats sont choisies du fait que la physiologie de ces neurones est très proche de celle des neurones sensitifs humains. Les effets de cet extrait aqueux sont évalués en mesurant la libération de CGRP par les 15 neurones sensitifs. La CGRP (calcitonin gene-related peptide) est un neuromédiateur impliqué dans la réactivité cutanée en exacerbant les sensations d'inconfort telles que des tiraillements ou des picotements. En outre, le nombre de corps cellulaires de neurones a été évalué 20 par coloration et marquage.

Matériels et méthodes

Cellules utilisées 25 Neurones sensitifs - Type : Primo culture de neurones sensitifs préparés selon la technique décrite par Hall et collaborateurs (3 Neurosci. 1997;17(8):2775-84) Milieu de culture : DMEM en poudre (Invitrogen 21331) 30 reconstitué dans de l'eau ultra pure (Merck ) tamponné avec du NaHCO-. L-glutamine 2mM (Invitrogen 25030) Pénicilline 50 UI/ml - Streptomycine 50 pg/ml (Invitrogen 15070) Supplément N2 (17502) ng/ml Nerf Growth Factor (NGF, Invitrogen 13290) 2, 5 ng/ml Neurotrophine 3 (NT-3, Tebu 450-03-b) 11 Kératinocytes Humains -Type: Kératinocytes humains normaux isolés à partir d'une plastie chirurgicale, utilisés au troisième passage (R3 K015). - Milieu: K SFM (Invitrogen 17005) sans complément

2. Culture et traitement des neurones sensitifs

Les ganglions rachidiens sont prélevés sur des embryons de rats de 15 jours. 10 Après dissociation enzymatique et mécanique des ganglions, les cellules en suspensions ont été ensemencées à la densité de 15000 cellules par puits en plaque 96 puits en milieu de culture. Les cellules ont été placées dans une étuve à 37°C et 5 % CO2 saturée en humidité. 15 Après 3 jours de culture, les surnageants de culture sont éliminés et remplacés par • du milieu reconstitué à partir d'un milieu de culture en poudre additionné par 100 % d'eau ultra pure. • du milieu reconstitué à partir d'un milieu de culture en poudre 20 additionné de 25 % de l'extrait commercial testé et de 75 % d'eau ultra pure, • du milieu reconstitué à partir d'un milieu de culture en poudre additionné de 50% du même extrait et 50 % d'eau ultra pure. Tous ces milieux de culture contiennent 5 ng/mL de NGF et 25 2.5 ng/ml de NT3. La moitié du volume de culture a été changée tous les 2 jours.

3. Co-culture neurones sensitifs-kératinocytes

30 Après 4 jours d'incubation (7 jours de culture des neurones), 10000 kératinocytes ont été ajoutés par puits de culture, et les cellules ont été incubées pendant 4 jours à 370C et 5 0/0 de CO2,

4. Traitement et dosage du CGRP 35 Après 4 jours de co-culture (11 jours de culture de neurones), les surnageants de culture sont éliminés et les cellules sont incubées en présence de l'extrait commercial testé contenant ou non de la capsaïcine à 10 `) M pendant 25 minutes dans une étuve à 37°C et 5 % CO2 saturée en humidité. Chaque condition expérimentale a été réalisée en quadriplicata. A la fin de ces incubations, les surnageants ont été recueillis et le contenu en CGRP a été mesuré dans les surnageants de culture, par un test ELISA (Rat CGRP enzyme immuno assay Kit A05482) selon le protocole préconisé par le fournisseur.

5. Analyse du nombre de corps cellulaires.

A la fin de cette dernière incubation (12 jours de culture de neurones), les cellules sont fixées dans une solution d'alcool-acide acétique. Les corps cellulaires des neurones sont marqués par un anticorps dirigé contre la protéine Microtubule Associated Protein (MAP 2) qui est un anticorps réagissant avec les corps cellulaires des neurones. Après 2 heures d'incubation, les cellules sont lavées en PBS et les 20 marquages révélés par des conjugués fluorescents (GAR Alexa 568). En parallèle, les noyaux ont été marqués avec une solution de Hoechst. Des saisies d'images (3 images par puits de culture soit 12 photos par condition expérimentale au grossissement x 20) et une analyse du 25 nombre de corps cellulaires ont été effectuées à l'aide d'un système d'imagerie à haute résolution, InCell AnalyzerTM1000 (GE Healthcare).

Résultats

La quantité de CGRP libérée par les neurones est rapportée au nombre de neurones (quantité de CGRP/moyenne du nombre de neurones par condition) dans chacune des conditions testées.

Les résultats sont indiqués dans le tableau ci-dessous 35 Conditions de culture Moyenne (SD) Milieu contrôle 100% eau ultra pure 11.2 , Extrait de racines de Nelumbo 8.6 (0,8) nucifera dilué à 2S% dans l'eau Extrait de racines de Nelumbo 8.1 (1,2) nucifera dilué à 50% dans l'eau POt S (p.a. ) Tableau 1 Effet de l'extrait de racines de Lotus Sacré sur la libération de CGRP, rapportée au nombre de corps cellulaires après 8 jours d'incubation (12 Jours de culture dont 5 en coculture avec les kératinocytes).

Après 7 jours d'incubation, dans les conditions basales en présence d'extrait de racines de Nelumbo nucifera à 25 % et 50 %, la quantité de CGRP libérée par neurone est significativement inhibée par 10 rapport au milieu servant de témoin.

4. Conclusions

Les neurones sensitifs au repos, en milieu de culture contenant 15 l'extrait commercial de racines de Nelumbo nucifera, libèrent significativement moins de CGRP que les neurones des cultures témoin. L'extrait testé inhibe l'activité basale rapportée au nombre de neurones, des neurones sensitifs, et dans les deux conditions (25 % et 50 %). 20 L'extrait n'altère cependant pas le fonctionnement des neurones qui gardent leur capacité physiologique de stimulation par la capsaicine (extrait de pigment, excitateur des fibres sensitives présentes dans la peau).

Ces résultats démontrent l'intérêt d'utiliser un tel extrait de racines de Lotus Sacré en tant qu'agent calmant et apaisant dans des compositions cosmétiques.

Exemple 2 : Crème cosmétique pour le soin du visage

La crème dont la formule est indiquée ci-dessous (% exprimés en poids) est une émulsion huile-dans-eau : % Eau purifiée 32,8 Extrait aqueux de racines de Nelumbo nucifera (Extrait Originel commercialisé par la société Gattefosse) 25,0 Calmosensine 3,0 10 Glycérol d'origine végétale 2,0 Extrait d'Artemia satina 1,0 Extrait de fleurs de Nelumbo nucifera (commercialisé sous la dénomination Gycolisat BG par la société SOLABIA) 0,1 Ascorbyl tocophéryl phosphate de potassium (Sepivital ) 0,05 15 Excipients émulsionnés, parfums et conservateurs qs 100 %

L'émulsion huile-dans-eau est préparée selon les méthodes classiques bien connues de l'Homme du métier. La crème ainsi préparée est destinée à être appliquée sur le 20 visage. Exemple 3: Activité in vivo de la composition de l'exemple 2 sur la sécrétion salivaire de cortisol.

25 On mesure l'effet cosmétique in vivo de application sur le visage de la composition de l'exemple 2. L'objet de l'étude est de mesurer les taux salivaires de cortisol et d'alpha-amylase par un dispositif spécifique de collecte, et un dosage une méthode spectrophotométnque.

Protocole de l'étude

Les sujets doivent ne pas avoir pris de caféine, d'alcool ou de nicotine la veille du test salivaire et éviter la prise de vitamine C le jour du test. Durant l'heure précédant la collection salivaire, les sujets ne doivent pas s'être laver les dents ni pris de nourritures. De plus, si les sujets prennent des hormones, s'assurer qu'une période de 12 heures avant le 10 prélèvement a bien été respectée. Les participants sont tout d'abord au repos pendant au moins les 10 minutes précédant la collecte de salive, en position assise, dans une pièce dont l'humidité (50 % 10 %) et la température (22°C 2°C) sont contrôlées. Un échantillon unique de salive est collecté avant application sur le 15 visage de la composition selon l'exemple 2. Pour la collecte de l'échantillon de salive, le sujet mâche un rouleau dentaire de coton stérile (salivette , Sarstedt) pendant 2 à 3 minutes. Après collecte, le prélèvement salivaire est placé dans un tube 20 adapté puis conservé à - 20°C jusqu'à l'analyse

On collecte à nouveau leur salive 10 minutes après application, sur la totalité du visage, de la composition selon l'exemple 2.

25 * Dosage salivaire du cortisol et de l'alpha-amylase.

kit salivaire de dosage immunoenzymatique du cortisol (Salimetrics, référence 1-3012) La méthode utilise des anticorps monoclonaux du cortisol. Le 30 dosage est réalisé sur l'échantillon salivaire ainsi que sur un standart cortisol. Le cortisol est mis en compétition avec du cortisol lié à une peroxydase. On dose la fraction de cortisol-peroxydase liée aux anticorps par réaction calorimétrique avec un substrat tetramethylbenzidine (TMB). 35 La densité optique est mesurée à 450 nm.

La quantité de cortisol-peroxydase est inversement proportionnelle à la quantité de cortisol présente Kit de dosage 'alha-amylase salivaire (Sa/irnetrIcs, de référence 1-1902) La méthode utilise un substrat chromogénique, le 2-chloro-pnitrophenol lié au maltotriose. L'action enzymatique de l'alpha-amylase libère le 2-chloro-p-10 nitrophenol, dosé par spectrophotométrie à 405 nm. L'activité de l'alpha-amylase présente dans l'échantillon est directement proportionnelle à l'augmentation de l'absorbance mesurée à 405 nm. Synthèse des résultats 15 Cortisol Avant Après /y,* application TO Application TI 1.27 1.00 Nislim(=0.11) 1.17 2. 02 NSlim (p=0,08) 1.29 0.97 S (=0.02) Panel total n=21 * Augmentation du cortisol salivaire (pglrm) (n=6: 25 % des sujets) Diminution ou stabilité du cortisol ;salivaire (pg/ml) 18 75 des sujets 2 . Trois individus ont été retires du panel à cause des résidus jugés trop élevés fors de l'analyse statistique. Sur 21 sujets, le cortisol a tendance à diminuer (p=0.11). 75 ' des sujets soit 18/24, présentent une diminution significative cortiso my/ase 18 Panel total n=21* application TO Avant 26.1 Après application Tl 222 * Trois individus ont été retirés du panel à cause des résidus jugés trop élevés lors de l'analyse statistique.

Sur 21 sujets, le taux d'alpha-amylase salivaire diminue de façon significative après application de la composition cosmétique selon l'exemple

10 Conclusion

Les taux salivaires de cortisol et d'alpha-amylase diminuent après application de la composition cosmétique comprenant un mélange de racines et de fleurs de Nelumbo nucifera. 15 Cette diminution indique un état d'apaisement et de relaxation se traduisant généralement au niveau de la peau par une amélioration des symptômes liés aux états de stress. Cet effet permet notamment l'utilisation des compositions de l'invention, pour le soin des peaux sensibles et l'obtention d'un effet calmant et apaisant sur la peau du visage. 20 Exemple 4: Effets cosmétiques de la composition de l'exemple 2.

Evaivation de l'effet hydratant après 24 heures. On détermine l'effet hydratant par cornéométrie = 10 sujets) durant 24 heures suivant une application de la composition selon l'exemple 2, sur la totalité du visage. 25 Action hydratante + 51 % après 2 heures + 51 % après 4 heures + 49 après 6 heures + 37 % après 24 heures. La composition présente un effet hydratant significatif jusqu'à 24 heures après l'application. 2. Evaluation de l'effet lissant immédiat des rides. On détermine l'effet lissant sur les rides du contour de l'oeil, par mesure avant et 1 heure après application de la composition selon l'exemple 2 (n = 15 sujets).

On réalise une prise d'empreinte et on procède également à une analyse d'images par ombre portée. Les résultats obtenus sont les suivants : nombre de rides : - 12 % Profondeur moyenne corrigée : - 13 °lo - Longueur totale : - 20 % L'effet lissant de la composition sur les rides du contour de l'oeil est significatif. 3. Evaluation de l'effet anti-radicalaire La composition est appliquée 4 fois à intervalle de deux heures d'Intervalle pour chacune des applications. On évalue l'activité anti-radicalaire par une méthode ex-vivo (mesure de stripping D-squame) par dosage du taux de peroxydes par fluorirnétrie. La mesure est réalisée 24 heures après la première application de la composition testée, en comparant le résultat avec celui obtenu pour une zone témoin non traitée. On observe une diminution significative, de 28 %, des espèces oxygénées réactives présentes à la surface de la peau. 1925

Claims

REVENDICATIONS

1. Composition cosmétique contenant au moins un extrait d'au moins une partie de la plante Lotus Sacré (Nelumbo nucifera) dans un véhicule 5 cosmétiquement acceptable compatible avec une application topique sur la peau, caractérisée en ce que ladite composition contient un extrait aqueux de racine de Lotus Sacré et en ce qu'elle contient en outre au moins un agent actif choisi clans le groupe constitué des agents actifs à activité énergisante ou revitalisante, de 10 préférence le polyphosphate de diguanosine ou un extrait en contenant, en particulier un extrait d'Artemia salina, des agents actifs stimulant la sécrétion des bêta-endorphines, de préférence un dipeptide N-acétyl-Tyr-Arg-hexadécylester, des agents anti-radicalaires tels que le tocophérol, en particulier 15 l'alpha-tocophérol sous la forme d'un sel ou d'une base, ou d'un de ses esters, par exemple l'acétate de tocophérol, et les extraits de plante en contenant ainsi que les flavonoïdes et les anthocyanes et des extraits de plante en contenant, en particulier des extraits de fleur de Lotus Sacré, et 20 des agents anti-inflammatoires, en particulier ceux qui ont une action inhibitrice de la phospholipase A2, tels que les ascorbyl tocophéryl phosphates, en particulier l'ascorbyl tocophérylphosphate de potassium.

2. Composition cosmétique selon la revendication 1, caractérisée en 25 ce que ledit extrait aqueux de racine de Lotus Sacré est un extrait obtenu par un procédé d'hydrodistillation.

3. Composition cosmétique selon la revendication 2, caractérisée en ce que ledit procédé d'hydrodistillation est un procédé d'hydrodistillation par micro-ondes sous vide pulsé (VMHD).

4. Composition cosmétique selon Lune des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle contient en outre un agent hydratant de la peau, en particulier du glycérol.

5. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ledit au moins un agent actif est choisi dans le groupe 35 constitué :du polyphosphate de diguanosine ou d'un extrait en contenant en particulier un extrait d'Artemia satina, du peptide N-acétyl-Tyr-Arg-hexadécylester, d'un extrait de fleur de Lotus Sacré et -de l'ascorbyl tocophéryl phosphate de potassium.

6. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à caractérisée en ce qu'elle contient un extrait de fleur de Lotus Sacré.

7. Composition cosmétique selon la revendication 6, caractérisée en ce ledit extrait de fleurs de Lotus Sacré est obtenu par extraction au moyen d'un solvant polaire ou d'un mélange de solvants polaires choisi dans le groupe constitué de l'eau, des alcools, en Cl à C4, en particulier l'éthanol, des glycols en C2 à C6, en particulier le glycérol, le butylèneglycol et le pmpylèneglycol, et de leurs mélanges.

8. Composition selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce qu'elle contient une teneur totale en extrait sec de Lotus Sacré comprise entre 0,0001 et 5 %, de préférence entre 0,001 et 2 %, de préférence encore entre 0,01 et 1 % en poids d'extrait sec.

9. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce qu'elle contient une teneur totale en extrait de Lotus Sacré comprise entre 0,1 à 99 % en poids total dudit extrait ou mélange d'extraits, de préférence entre 0,1 et 50 % en poids.

10. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce qu'elle comprend de 10 à 50 % en poids d'un extrait aqueux de racines de Lotus Sacré et de 0,1 à 10 % en poids d'un extrait de fleurs de Lotus Sacré.

11. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 10, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,5 à 5 % en poids de polyphosphate de diguanosine ou d'un extrait en contenant, en particulier d'un extrait d'Artémia satina.

12. Composition selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,1 à 5 70 en poids du dipeptide N-Acétyl-Tyr-Ar hexadécylester.

13. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,01 à 2 % en poids d'un sel d'ascorby! 35 tocophéryl phosphate, en particulier d'ascorbyl tocophéryl phosphate otassium.

14. Composition selon l'une des revendications 1 à caractérisée en ce qu'elle contient de 1 à 15 % en poids de glycérol.

15. Composition cosmétique selon l'une des revendications 1 à 14, caractérisée en ce qu'elle contient de 0,1 à 50 % en poids d'extrait aqueux de racine Nelumbo nucifera, de 0,1 % à 10 % en poids d'extrait de fleurs de Nelumbo nucifera, et de 0,5 à 5 % en poids de polyphosphate de diguanosine ou d'un extrait en contenant, en particulier d'un extrait d'Artémia satina, de 0,1 % à 5 % en poids d'un dipeptide N-acétyl-Tyr-Arghexadécylester, de 0,01 % à 2 % en poids d'un sel d'ascorbyl tocophéryl phosphate, et de 1 à 15 % en poids de glycérol.

16. Méthode de soin cosmétique destinée à procurer à la peau soumise aux effets d'un stress, un effet calmant, relaxant et apaisant et/ou à obtenir progressivement des traits du visage détendus, une peau plus lisse et tonifiée, une peau apaisée et plus douce au toucher, un teint lumineux et éclatant, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application sur la partie de la peau du visage ou du corps concernée d'une quantité efficace pour obtenir les effets précités d'une composition telle que définie dans l'une des revendications 1 à 15.

17. Méthode de soin cosmétique selon la revendication 16, 20 caractérisé en ce qu'elle est destinée au soin des peaux sensibles ou réactives.