FR3015247A1 - Utilisation du phosphate de tocopherol comme agent hydratant - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne l'utilisation dans une composition cosmétique, du phosphate de tocophérol, en tant qu'agent destiné à maintenir ou restaurer l'état d'hydratation de la peau ou prévenir de sa déshydratation. Cet effet d'hydratation de la peau est obtenu notamment par stimulation de l'expression de l'aquaporine 3. L'invention concerne également une méthode de soin cosmétique de la peau en vue d'améliorer son état d'hydratation.

Description

UTILISATION DU PHOSPHATE DE TOCOPHEROL COMME AGENT HYDRATANT L'invention concerne l'utilisation du phosphate de tocophérol ou 5 d'un de ses sels comme agent hydratant de la peau. ETAT DE LA TECHNIQUE On connaît de longue date l'activité anti-oxydante du phosphate de tocophérol et son utilisation dans des compositions cosmétiques. Par exemple, 10 WO 91/11189 décrit l'utilisation d'un phosphate d'alpha-tocophérol dans des compositions pharmaceutiques, cosmétiques ou dermatologiques pour la prévention ou le traitement des effets nocifs des radicaux libres. Les activités anti-âge et blanchissante de la peau du phosphate de tocophérol ont également été mises en évidence. Ainsi, WO 2008/001921 15 décrit des compositions anti-rides qui comprennent le phosphate de tocophérol ou un de ses sels, et WO 2003/094882 décrit une composition blanchissante ou éclaircissante de la peau comprenant du tocophérol sous forme de dispersion ou de solution aqueuse. Il a maintenant été découvert de manière totalement inattendue par 20 les inventeurs de la présente invention, que le phosphate de tocophérol ou un de ses sels, présente un effet sur l'expression de l'aquaporine de type 3 dans des kératinocytes humains, issus notamment de cellules à fort potentiel de clonogénicité (« cellules-souches »). On rappelle que les aquaporines sont des systèmes protéiques 25 transmembranaires facilitant le passage de petites molécules telles que l'eau, le glycérol et l'urée. L'aquaporine de type 3 (AQP-3) est localisée dans l'épiderme humain, plus précisément dans la membrane plasmique des kératinocytes, au sein de laquelle elle exerce un rôle important dans le transport et la distribution 30 de l'eau, mais également du glycérol. L'AQP-3 est ainsi un marqueur biologique majeur impliqué dans les mécanismes de l'hydratation cutanée, tant pour compenser l'évaporation de l'eau épidermique (perte insensible en eau) que pour acheminer et distribuer celle-ci au sein de l'épiderme. Parmi les kératinocytes capables de 35 former l'épiderme, on distingue des cellules à fort potentiel de clonogénicité qui vont produire la plus grande quantité de cellules-filles et ainsi jouer un rôle primordial dans le renouvellement cellulaire au niveau de l'épiderme et maintenir ce renouvellement sur le long terme. Ces kératinocytes particuliers, qu'on peut qualifier de « kératinocytes-souches » ou encore de « kératinocytes-progéniteurs », ne représentent moins de 1% du nombre de cellules constituant l'épiderme et sont localisés préférentiellement au niveau de la couche basale de celui-ci, ce qui les protège plus efficacement contre l'action des radicaux libres et des dommages à l'ADN, notamment induits par l'action du rayonnement solaire, en particulier les UV-B qui sont en grande partie filtrés par les strates cellulaires supérieures de l'épiderme. Ces cellules-souches sont particulièrement sensibles au stress osmotique induit par des facteurs de déshydratation, ce qui les rend particulièrement vulnérables aux variations environnementales susceptibles de produire un tel stress et qui provoque une réduction drastique de leur potentiel clonogénique. Compte tenu du faible nombre de ces kératinocytes-souches et de leur haute sensibilité à une situation de déshydratation, il est particulièrement important que ces cellules soient en mesure de produire les protéines assurant leur hydratation optimale, notamment pour répondre à l'application d'un stress osmotique. Les inventeurs ont à présent montré qu'il est possible de stimuler de façon particulièrement intense l'expression de l'AQP-3 au niveau des kératinocytes de l'épiderme, et que cet effet de stimulation s'exerce de façon plus intense sur des kératinocytes à fort potentiel de clonogénicité, encore appelés « cellules souches » ou « kératinocytes souches » ou « kératinocytes progéniteurs » dans la présente demande. Sous l'action du phosphate de tocophérol, on observe ainsi une augmentation significative de la production d'AQP-3 au niveau des clones de cellules issus des kératinocytes souches. A titre de comparaison, les cellules des clones issues de cellules n'ayant pas ce fort potentiel de clonogénicité présentent elles aussi une stimulation de l'expression de l'AQP-3, mais dans une moindre mesure. Le phosphate de tocophérol est ainsi un agent particulièrement intéressant pour hydrater la peau ou assurer le maintien de l'hydratation de l'épiderme, ou prévenir de sa deshydratation, du fait de son action stimulante de l'AQP-3 au niveau des kératinocytes épidermiques, et plus particulièrement sur les kératinocytes à fort potentiel de clonogénicité et les cellules filles présentes dans les clones de cellules qu'ils produisent. Les peaux sèches présentent une altération des lipides de la surface de la peau qui induit une modification de leur barrière cutanée. Perturbée, la barrière cutanée est moins efficace pour retenir l'eau, et expose les cellules de l'épiderme à une déshydratation et un stress osmotique . L'exposition au froid ou a une environnement desséchant, les nettoyages successifs, et tous les stress agressant la surface de la peau et altérant ses constituants, comme la pollution, le rayonnement solaire, et un régime alimentaire déséquilibré en précurseurs lipidiques, sont des facteurs aggravant cette perte d'équilibre hydrique. Les inventeurs ont observé que la croissance de kératinocytes humain normaux cultivés in vitro est fortement diminuée en présence de sorbitol, ce dernier favorisant, selon les principes de l'osmose une sortie de l'eau des cellules et donc un stress osmotique. Dans ces conditions, les inventeurs ont observé que la croissance des cellules souches épidermiques était fortement diminuée. Ainsi, la capacité des kératinocytes souches de l'épiderme à former de nouvelles cellules et à soutenir sur le long terme le renouvellement cellulaire de l'épiderme est nettement plus altéré au cours du 20 temps en situation de déshydratation donc dans les peaux sèches ou dans les peau dont la barrière hydrique est altérée, que dans une situation normale. La présente invention propose donc une méthode d'hydratation des peaux sèches et matures, qui sont notamment exposées au froid, généralement en période hivernale ou dans un environnement desséchant dû à 25 un air sec, ou encore , qui sont soumises à des actions régulières de nettoyage ou de démaquillage, ou encore à des polluants atmosphériques domestiques ou extérieurs qui altèrent les constituants de la surface cutanée. La découverte de nouvelles propriétés du phosphate de tocophérol rend son utilisation particulièrement intéressante dans des compositions 30 cosmétiques pour réaliser des soins où l'on cherche à maintenir ou à favoriser l'hydratation de la peau. La mise en évidence de l'activité hydratante du phosphate de tocophérol est particulièrement inattendue et intéressante car Inexpression de l'AQP-3 dans les cellules cutanées diminue avec l'âge ainsi qu'avec l'exposition 35 au rayonnement solaire.

Enfin il a été mis en évidence qu'un stress osmotique appliqué sur des kératinocytes capables de se régénérer intensifiait le niveau d'oxydation intracellulaire. Ainsi, cette relation entre le processus oxydatif participant au vieillissement des cellules de la peau, et le degré d'hydratation de la peau suggère qu'une meilleure hydratation des couches superficielles de la peau apportée par le phosphate de tocophérol permet de limiter l'excès d'oxydation de la peau mais aussi d'améliorer l'efficacité des molécules anti-oxydantes endogènes ou d'agents cosmétiques présentant un tel effet antioxydant.

BUTS DE L'INVENTION La présente invention a ainsi pour but principal de fournir une nouvelle utilisation du phosphate de tocophérol. La présente invention a encore pour but de fournir une méthode de soin cosmétique destinée à hydrater la peau, en particulier lorsque les 15 cellules de l'épiderme sont soumises à un stress osmotique dû au froid ou plus généralement à un environnement externe desséchant. La présente invention est particulièrement adaptée au soin des peaux exposées à un environnement urbain, en particulier aux polluants atmosphériques des grandes villes, ces polluants étant capables d'altérer la 20 fonction de barrière à l'eau et donc de provoquer un stress osmotique. La présente invention a aussi pour but de fournir une méthode de soin cosmétique destinée à hydrater les peaux délicates qui présentent une fragilité particulière à l'utilisation de tensioactifs et à une action mécanique, ces deux types d'agressions pouvant être combinées lors du démaquillage et du 25 nettoyage quotidien. La présente invention est également particulièrement adaptée aux peaux qui présentent un déficit en aquaporine-3 comme les peaux sèches, mais également les peaux dites matures ou encore les peaux exposées au soleil, en particulier les zones du visage, du décolleté et des mains et les zones 30 corporelles où la sécheresse est plus intense, par exemple au niveau des jambes et des bras mais aussi des lèvres. La présente invention est particulièrement utile pour les peaux à phototypes élevés dont la sécheresse provoque l'apparition de squames blanchâtres contrastant avec la couleur de la peau et donc particulièrement 35 visibles.

La présente invention peut être particulièrement recommandée à des moments de la journée où la perte insensible en eau de la peau est plus importante et nécessite donc un apport compensatoire d'eau comme par exemple en fin de journée ou en milieu de journée.

La présente invention est aussi adaptée au soin des peaux de natures eczémateuses et tout particulièrement dans les cas de spongiose où il a été montré un déficit important en AQP-3 épidermique particulièrement marquée dans les zones lésionnelles.

RESUME DE L'INVENTION L'invention concerne l'utilisation, dans une composition cosmétique, du phosphate de tocophérol ou d'un de ses sels, comme agent destiné à maintenir ou restaurer l'état d'hydratation de la peau, ladite composition contenant en outre un excipient cosmétiquement acceptable.

DESCRIPTION DES FIGURES Les Figures 1 à 3, données en référence à l'exemple 1 présentent sous forme d'histogrammes, l'expression de l'AQP-3 détectée par immunomarquage dans des cellules cutanées en culture exposées à différents composés, dont le phosphate de tocophérol. La solution d'extrait d'Ajuga turkestanica, connue pour stimuler l'AQP3 est utilisée comme témoin positif. - La Figure 1 représente l'expression totale de l'AQP-3 pour des colonies de cellules-filles issues des kératinocytes ayant un potentiel de clonogénicité faible (petit clones), moyen (clones moyens) ou élevé (gros clones), et exposées à différents actifs. - La Figure 2 représente l'expression de l'AQP-3 par cellule dans les colonies de cellules-filles issues de kératinocytes à fort potentiel de clonogénicité (kératinocytes-souches), exposées à différentes doses de phosphate de tocophérol. - La Figure 3 représente l'expression de l'AQP-3 par cellule dans les colonies de cellules-filles issues de kératinocytes à fort potentiel de clonogénicité (kératinocytes-souches), exposées à différents actifs et à leur mélange. DESCRIPTION DE L'INVENTION Le phosphate de tocophérol peut être sous la forme d'une base ou bien d'un sel cosmétiquement acceptable. 30152 4 7 6 Dans le cas d'un sel de phosphate de tocophérol, on préfère un sel de métal alcalin, et de préférence un sel de sodium. Avantageusement, le phosphate de tocophérol est l'alpha-tocophérol, le béta-tocophérol, le delta-tocophérol ou le gamma-tocophérol 5 phosphate, et plus particulièrement le phosphate de gamma tocophérol de sodium. Le phosphate de tocophérol ou un de ses sels peut ainsi être utilisé dans une composition cosmétique en tant qu'agent actif cosmétique pour obtenir un effet de maintien ou de renforcement de l'hydratation de la peau. 10 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION La présente invention a ainsi pour premier objet l'utilisation, comme agent hydratant de la peau, du phosphate de tocophérol ou d'un de ses sels cosmétiquement acceptable. 15 La composition cosmétique comprend une quantité efficace de phosphate de tocophérol pour obtenir l'effet recherché. La composition comprend ainsi préférentiellement de 0,001% à 5%, de préférence de 0,01% à 1%, en poids sec de phosphate de tocophérol. Les essais réalisés par les inventeurs ont montré que les propriétés 20 hydratantes du phosphate de tocophérol peuvent être également obtenues ou améliorées dans des compositions cosmétiques ou dermatologiques, dans lesquelles l'agent actif est associé avec d'autres agents actifs présentant des effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires du phosphate de tocophérol. 25 Ainsi, l'agent actif peut être associé à une ou plusieurs molécules et/ou un ou plusieurs extraits végétaux présentant des propriétés hydratantes, tels que les glycols, en particulier le glycérol, ou des polyols naturels, des céramides naturels ou de synthèse, l'urée, l'acide hyaluronique, l'acide lactique, ou encore un extrait d'Ajuga turkestanica. 30 Il est particulièrement intéressant d'associer au phosphate de tocophérol un agent actif ou des agents actifs qui, utilisés seuls ou en en combinaisons, augmentent l'expression de l'AQP-3 au niveau des cellules de la peau, tel qu'un extrait d'Ajuga turkestanica, un extrait de Paeonia suffrutica, un extrait de roses, de kniphophia uvaria, d'Helianthus annuus, d'Oriza sativa, de 35 Malva sylvestris, de Sanguisorba officinalis, de Glycine max, de Saccharomyces cerevisiae, d'Onopordum acanthrium, de Zea mays, de Filipendula ulmaria, de 30152 4 7 7 Salix alba, de Rhodophyccea et d'acide ascorbique-2-glucoside. L'agent actif peut également être avantageusement associé, dans des compositions cosmétiques, avec au moins un extrait d'au moins une autre plante appartenant à la famille des orchidées (Orchidaceae). Cet extrait 5 supplémentaire d'une autre plante appartenant à la famille des orchidées pourra être en particulier un extrait d'au moins une orchidée du genre Vanda tel que l'orchidée Vanda Coerulea qui présente également une action sur les aquaporines des cellules de l'épiderme. On pourra aussi choisir d'associer le phosphate de tocophérol en 10 particulier à des extraits de plantes connus pour ralentir ou prévenir l'apparition des signes de sécheresse cutanée par une action humectante, une action stimulante de la formation d'acide hyaluronique ou inhibant sa dégradation, une action stimulant la formation des jonctions serrées de l'épiderme ou « tight junctions » qui limitent la perte d'eau l'eau intercellulaire, une action stimulante 15 de la formation du récepteur de l'acide hyaluronique ou CD44, une action stimulante de la formation des jonction cohésives de l'épiderme, desmosomes et cornéodesmosomes, une action stimulante de la formation des lipides épidermiques en particulier des céramides, des acides gras et du cholestérol qui participent à la fonction de barrière à l'eau, une action stimulante de la 20 synthèse du sébum en particulier de squalène et des triglycérides, ou à l'inverse une action inhibitrice de la 5-alpha-réductase comme l'extrait de graines de Linum usitatissimum, ou encore une action occlusive à la surface de la peau. Il peut être également particulièrement intéressant d'associer au 25 phosphate de tocophérol, une ou plusieurs molécules ou extraits de plantes présentant des propriétés anti-oxydantes. De tels anti-oxydants peuvent être par exemple les polyphénols, l'acide tannique, l'épigallocathéchine et les extraits naturels en contenant, l'épigallocatéchine-3-gallate, les anthocyanes, les carotènes, les extraits de 30 romarin, les extraits de feuilles d'olivier, le thé vert, le resvératrol et ses dérivés, le Pycnogénol, l'ergothionéine, la N acétylcystéine, la biotine, les chélatants, l'idébénone, des extraits végétaux come le Pronalen Bioprotect TM de la société Provital' le co-enzyme Q10, les bioflavonoides, les SOD, le phytantriol, les lignanes, la mélatonine, les pidolates, l'acétate ou le 35 palmitate de tocophérol, l'acide ascorbique et ses sels, le pyrrolidone carboxylate d'arginine, les dérivés séléniés, l'idébénone, le gluthation, et les différentes isoformes de tocotriénol et l'ergothioneine. Outre l'extrait défini précédemment, la composition cosmétique comprend au moins un excipient cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable qui peut être choisi parmi des pigments, des colorants, des polymères, des agents tensioactifs, des agents de rhéologie, des parfums, des électrolytes, des ajusteurs de pH, des agents anti-oxydants, des conservateurs, et leurs mélanges. La composition cosmétique peut être par exemple sous la forme d'un sérum, d'une lotion, d'une crème ou bien encore d'un hydrogel, d'un 10 masque, ou se présenter sous la forme d'un stick, ou encore d'un patch. Les extraits et les compositions présentent un effet particulièrement recherché pour maintenir ou renforcer l'état d'hydratation de la peau, lorsqu'on applique ledit extrait ou ladite composition sur la peau du visage ou du corps. La présente invention concerne, comme exposé précédemment, 15 une utilisation du phosphate de tocophérol en tant qu'agent cosmétique destiné à maintenir ou renforcer l'état d'hydratation de la peau. Le phosphate de tocophérol renforce avantageusement la capacité d'adaptation des cellules de la peau à un stress osmotique et/ou favorise leur potentiel clonogénique. L'agent actif utilisé dans le cadre de l'invention permet 20 avantageusement restaurer l'état d'hydratation des kératinocytes de l'épiderme. Il est particulièrement intéressant pour restaurer l'état d'hydratation d'une peau mature et sèche. Par « peau mature », on entend la peau d'une personne ayant plus de 35 ans, plus de 40 ans, voir plus de 45 ans. 25 L'invention a également pour objet une méthode de soin cosmétique utilisant l'extrait défini précédemment ou une composition cosmétique telle que définie précédemment comprenant une quantité efficace dudit phosphate de tocophérol pour maintenir ou renforcer l'état d'hydratation de la peau et/ou encore pour obtenir un effet de prévention ou de 30 ralentissement de l'apparition des signes de sécheresse cutanée. L'invention a également pour objet une méthode de soin cosmétique de la peau qui comprend l'application sur au moins une partie du visage ou du corps, subissant notamment un stress osmotique, d'une quantité efficace de phosphate de tocophérol ou d'un de ses sels décrits précédemment, 35 ou encore d'une composition en contenant telle que précédemment définie.

Les caractéristiques qui ont été décrites en rapport avec le premier objet de l'invention relatif à l'utilisation du phosphate de tocophérol comme agent hydratant, s'appliquent aux caractéristiques de la méthode de l'invention, qui constitue un deuxième objet de l'invention.

Comme cela ressort clairement des exemples ci-après, la demanderesse a mis en évidence l'intérêt du phosphate de tocophérol pour stimuler l'expression de l'AQP-3. Dans les exemples, tous les pourcentages sont donnés en poids, la température est en degrés Celsius, la pression est la pression atmosphérique, sauf indication contraire. D'autres buts, caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront clairement à la lumière de la description explicative qui va suivre faite en référence à des exemples de tests mettant en évidence les propriétés susmentionnées pour le phosphate de tocophérol et des exemples de composition cosmétique utilisant cet agent, donnés simplement à titre d'illustration et qui ne sauraient donc en aucune façon limiter la portée de l'invention.

Exemple 1: Tests d'activité du phosphate de tocophérol en tant qu'agent stimulant l'expression de l'aquaporine-3. L'étude a été réalisée à partir de clones de kératinocytes selon la méthode développée par Barrandon et Green (Barrandon Y and Green H.

Proc Nati Acad Sci USA 1987, 84 : 2302-2306) qui permet d'analyser et de distinguer des kératinocytes possédant des fortes capacités à former des clones (également dénommés « kératinocytes-souches » ou « cellules-souches » ou « progéniteurs »), ou des capacités intermédiaires ou faibles (cellules filles dites d'amplification).

L'objectif de cette étude était d'évaluer l'effet du phosphate de tocophérol sur l'expression de l'aquaporine-3 de Kératinocytes Humains Normaux (KHN) issus de cellules souches en culture. Cette évaluation a été faite par un marquage immunofluorescent à l'issue d'un test de clonogénicité des KHN. 30152 4 7 10 Matériels et méthodes 1. Préparation des cellules et marquage immunofluorescent 1.1 Culture cellulaire 5 Les kératinocytes ont été cultivés selon la méthode simplifiée de «Green» (Rheinwald et Green, 1975) (Rheinwald J.G and GreenH. ; Cell 1975, 6 : 331-343), c'est-à-dire sur une couche nourricière de fibroblastes humains gamma-irradiés, qui ne se divisent plus. Après trypsination, les fibroblastes gamma-irradiés ont été 10 ensemencés à raison de 8000 cellules par cm2 dans des boîtes de Pétri et cultivés à 37°C et 5 % de CO2 dans du milieu de « Green » complet. Après 24 heures de culture, les KHN sont ensemencés sur la couche nourricière de fibroblastes à raison de 4000 cellules par cm2 en milieu de « Green ». 15 1.2 Traitements L'extrait d'Ajuga turkestanica (Ji ste n i ne® HG, La toxa n DIE, solution à 5% en poids d'extrait sec, extrait glycérol/eau) est connu pour stimuler l'AQP-3. Il est utilisé comme témoin positif. 20 On a testé le phosphate de tocophérol sur le modèle de culture cellulaire décrit au paragraphe précédent. Après 72 h de culture et la formation de petits clones, les actifs testés, préalablement filtrés, ont été ajoutés au milieu de culture pour un temps de traitement de 48 h. 25 Solutions d'actifs testés Témoin non traité (Milieu de Green) Extrait d'Ajuga turkestanica (Jistenine®) à 0,01 % de la solution commerciale dans le milieu de culture Phosphate de tocophérol (PVE) à 0,01 % dans le milieu de culture Phosphate de tocophérol (PVE) à 0,02 % dans le milieu de culture Association Extrait d'Ajuga turkestanica (Jistenine®) à 0,01 % de la solution commerciale et du phosphate de tocophérol (PVE) à 0,01 °h dans le milieu de culture 30152 4 7 11 1.3 Marquage immunofluorescent Les cellules sont rincées deux fois au PBS puis fixées à la formaline (Formalin Solution 10% Neutral Buffered, Sigma) pendant 10 5 minutes. Après deux rinçages au PBS, les membranes des cellules ont été perméabilisées avec une solution de PBS/Triton 0,1% (Triton X-100, Sigma), puis les cellules ont été rincées deux fois au PBS. Les cellules ont ensuite été recouvertes d'une solution de PBS/BSA 10 1% (Albumin from bovine serum, Sigma), pendant 30 minutes et à température ambiante. La solution de PBS/BSA a été aspirée et remplacée par une solution d'anticorps primaire anti-AQP-3 (goat polyclonal IgG, Santa Cruz Biotechnology) dilué au 1/200ème dans le PBS/BSA. Les boîtes ont été placées 15 dans une chambre humide pendant 60 minutes à température ambiante. Les boîtes ont été rincées trois fois au PBS. Les cellules ont ensuite été recouvertes d'une solution d'anticorps secondaire anti-goat (Alexa fluor 546, rabbit anti-goat IgG, Invitrogen-Molecular Probes) dilué au 1/200è" dans le PBS/BSA. Les boîtes sont placées à l'obscurité pendant 60 20 minutes à température ambiante. Après trois rinçages au PBS et deux à l'eau distillée, quelques gouttes de milieu de montage (Aqueous Mount, ScyTek laboratories) ont été déposées sur la surface de culture des boîtes. Les boîtes ont été conservées à 4°C et à l'obscurité. 25 2. Acquisition des photos Les images ont été réalisées avec un microscope confocal Leica SP5 II à l'objectif x10 « dry » en 1024 x 1024 pixels. Pour chaque condition, les images ont été réalisées avec les mêmes paramètres d'acquisition. 30 3. Analyse d'images Les images sont analysées à l'aide du logiciel d'analyse d'image Leica QWin. Le contour des colonies de cellules ou clones est tracé pour en déterminer la surface totale puis la surface marquée après détection du 35 marquage de AQP-3. 4. Analyse statistique L'analyse statistique consiste en un calcul de la moyenne, de l'écart type et de l'intervalle de confiance (a = 0,05) du rapport surface marquée par l'AQP3 sur le nombre de cellules présentes dans un clone amenant à distinguer plusieurs tailles de clones correspondant donc au potentiel clonogénique différents des cellules leur ayant donné naissance. La significativité des différences de rapports de surfaces observées entre les témoins et les traités a été mesurée par le test de Student (corrélé au test F). Le test de Student est dit significatif si sa valeur est inférieure à 0,05. Résultats Les résultats sont présentés sur les Figures 1 à 3 et le tableau 1.

Dans la Figure 1, l'activité est exprimée comme étant la quantité d'AQP3 dans chaque clone, tandis que dans les Figures 2 et 3, l'activité est exprimée comme le pourcentage d'AQP3 par cellule.

Dans la figure 1, on distingue les clones (colonies) en trois sous- catégories, selon leur taille correspondant à la surface couverte par la cellule-mère et les cellules filles. La taille de la colonie dépend directement du potentiel de clonogénicité de la cellule-mère. Les clones de petite taille (0 à 100 000 micron2) sont issus de kératinocytes à faible potentiel de clonogénicité. Les clones de taille moyenne (100 000 à 200 000 micron2) sont issus de kératinocytes à potentiel moyen de clonogénicité. Les clones de grande taille (> 200 000 micron2) sont issus de kératinocytes-souches à fort potentiel de clonogénicité.

On observe sur la Figure 1 que le tocophérol agit plus spécifiquement sur les cellules issues de kératinocytes-souches qui forme les plus grandes colonies. Le phosphate de tocophérol présente une activité significative sur l'expression de l'AQP-3 pour les cellules issues de kératinocytes à fort potentiel de clonogénicité par rapport à l'expression mesurée pour les cellules issus de kératinocytes à plus faible potentiel de clonogénicité.

On observe un effet plus intense sur l'expression totale de l'AQP-3 d'une colonie de cellules issues de kératinocytes-souches, par rapport à l'effet mesuré sur les colonies issues de cellules à potentiel de clonogénicité moyen ou faible (cellules d'amplification). Pour les clones issus de cellules d'amplification, l'effet est plus faible que pour les kératinocytes-souches à fort potentiel de clonogénicité. Pour ces cellules à plus faible potentiel de clonogénicité, l'effet reste cependant significativement supérieur à celui du témoin non traité, ce qui montre une efficacité du phosphate de tocophérol phosphate sur l'expression de l'AQP-3 sur plusieurs types de kératinocytes.

L'effet est cependant beaucoup plus intéressant pour les kératinocytes souches. Non seulement les cellules filles issues de ces cellules souches expriment individuellement une plus grande quantité d'AQP-3, mais en plus, au total, les colonies formées étant de taille plus importante, l'expression totale de l'aquaporine au niveau de la colonie est bien significativement supérieure à l'expression de l'AQP-3 mesurée pour les colonies formées à partir de cellules à moindre potentiel de clonogénicité. On observe également sur la Figure 2 un effet-dose important : quand on augmente la concentration en phosphate de tocophérol dans le milieu, l'expression de l'AQP-3 augmente de façon importante. Le tableau 1 ci-dessous indique les valeurs moyennes de l'expression de l'AQP3 par cellule issue d'une colonie produite par un kératinocyte à fort potentiel de clonogénicité.

Traitement (% AQP3/cellule) Moyenne Témoin Non Traité 8.49 Ajuga turkestanica (Jistenine®) 0,01% 24.69 Phosphate de tocophérol (PVE) 0,01% 22.88 Ajuga turkestanica (Jistenine®) 0,01% + 35.72 Phosphate de tocophérol (PVE) 0,01% La figure 3, issue du tableau 1, montre que l'effet obtenu sur les cellules des clones de grande taille pour le phosphate de tocophérol est du même ordre de grandeur que celui obtenu pour le témoin positif, l'extrait d'Ajuga turkestanica. L'association des deux actifs montre elle-même sensiblement une addition de l'effet stimulant sur l'expression d'aquaporine 3, ce qui rend cette association particulièrement intéressante dans des compositions cosmétiques visant à hydrater la peau, et plus particulièrement l'épiderme. Conclusions Il a été mis en évidence que le phosphate de tocophérol stimule significativement l'expression de l'aquaporine 3 sur les clones issus des kératinocytes souches à fort potentiel de clonogénicité. Le phosphate de tocophérol stimule significativement l'expression de l'aquaporine 3 quelle que soit la taille des clones.

Le phosphate de tocophérol a une efficacité particulièrement significative pour réguler les flux hydriques et de glycérol dans l'épiderme, permettant ainsi une meilleure hydratation des couches basales de l'épiderme. En outre, les résultats montrent que l'association du phosphate de tocophérol et d'un extrait d'Ajuga turkestanica stimule de façon plus intense l'expression de l'aquaporine 3 que chaque ingrédient testé seuls. L'effet bénéfique de cette association semble spécifique de cette population cellulaire puisque l'effet n'est pas retrouvé pour les cellules des clones de plus petite taille (cellules filles dites d'amplification).

L'association de l'extrait d'Ajuga turkestanica et du phosphate de tocophérol est donc particulièrement avantageuse pour stimuler l'expression de l'aquaporine 3 dans les progéniteurs kératinocytaires à fort potentiel clonogénique (cellules issues de cellules souches). Cette association est donc particulièrement recommandée pour cibler cette population particulière de cellules épidermiques, dans des compositions cosmétiques dont l'application sur la peau permet de renforcer la capacité d'adaptation de ces cellules épidermiques à des stress osmotiques et de favoriser le maintien de leur fort potentiel clonogénique. L'association du phosphate de tocophérol avec l'extrait d'Ajuga turkestanica, agent hydratant connu pour son action sur l'AQP-3, a un effet bénéfique supplémentaire sur l'expression de l'AQP-3. L'effet est spécifique aux clones issus des kératinocytes souches qui ont un rôle primordial dans le renouvellement de l'épiderme du fait de cette capacité à produire des clones contenant une grande quantité de cellules. L'effet de stimulation de l'AQP-3 s'étend ainsi au plus grand nombre de cellules-filles. Ceci permet une meilleure résistance au stress osmotique de ces cellules et assure le maintien d'une hydratation suffisante au niveau de l'épiderme. Exemple 2 - Compositions cosmétiques Le phosphate de tocophérol est utilisé à titre d'agent hydratant 10 dans les compositions cosmétiques suivantes. 1 - Lotion On prépare une solution aqueuse comprenant les actifs suivant 15 (pourcentage en poids) : °A) Phosphate de tocophérol 0,05 Glycérol 3,0 Solution à 5% d'extrait d'Ajuga turkestanica 0,01 20 Extrait de Malva sylvestris 0,2 Hétérosides de Centella asiatica 0,02 Acides hyaluronique de haut et de bas poids moléculaire 0,05 Excipients qsp 100 25 La lotion est appliquée quotidiennement sur le visage. 2 - Crème de jour hydratante 30 On prépare une émulsion hydratante dont la formule est indiquée ci-dessous (% en oids) °A) Phase A Phosphate de tocophérol 0,1 35 Solution à 1% en extrait de Vanda coerulea 0,3 Phénoxyéthanol 0,5 Gomme xanthane 0,2 Acrylates/C20-30 alkylacrylate crospolymères 0,15 EDTA tétrasodique 0,1 Eau qs Phase B Polyisobutène hydrogéné 4 Squalane 3 Caprylique/caprique triglycéride 3 Pentylène glycol 3 Glycéryl stéarate 3 PEG-100 stéarate 2,5 Cire d'abeilles 1,5 Dicaprylyl carbonate 1,5 Cétyl alcool 1 Stéaryl alcool 1 Diméthicone 1 Phase C Hydroxyde de sodium 0,04 Eau qsp 100 On disperse les gélifiants de la phase A dans l'eau puis on chauffe à 80-85°C, avant de solubiliser les composés. Les composés de la phase B sont chauffés à 85°C pour former une phase homogène. On émulsionne la phase A dans la phase B à l'aide d'un mélangeur Ystral.

L'émulsion huile/eau est finalement neutralisée à l'aide d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium, puis refroidie. La composition obtenue est une crème hydratante destinée à être appliquée sur le visage ou une partie du visage. 3 - Crème pour les yeux On prépare sous la forme d'une émulsion huile-dans-eau comprenant les actifs suivant (pourcentages en poids) : °A) Phosphate de tocophérol 0,3 Solution d'extrait d'Ajuga turkestanica 0,1 30152 4 7 17 Glycérol 5,0 Excipients et eau qs 100 Ces ingrédients actifs sont inclus dans la formule pour réaliser une 5 émulsion huile-dans-eau selon le même procédé que l'exemple précédent. Une application quotidienne de cette composition cosmétique autour des yeux, conduit à une amélioration significative de l'hydratation de la peau de cette zone. 10 4 - Sérum comprenant le phosphate d'alpha-tocophérol sodique On prépare un sérum selon la formule suivante (%en poids) : Phase A Eau purifiée 60,2% 15 Conservateurs 0,7% Phase B Carbomer (Carbopol® Ultrez 10) 0,5% Phase C E DTA tétrasodique 0,2% 20 Hydroxyde de sodium 0,2% Glycérol 3,5% Acide ascorbique <0,1% Butylène glycol 1-3 2,0% Méthyl gluceth-20 1,8% 25 Eau purifiée 6,0% Phase D Phosphate de tocophérol (sel de sodium) 0,1% Sorbitol 0.3% Alginate de sodium 0,1% 30 Carboxymethylcellulose de sodium <0,1% Polyvinyl alcool <0,1% Emumlmetik® 300 IP 0,5% Emulmetik® 930 0,5% Butylène glycol 1-3 1,0% 35 Glycérol 1,0% Antioxydants 0,2% Eau purifiée qsp 100% On homogénéise les phospholipides de la phase D à l'Ultraturrax, avec le butylène glycol et le glycérol pendant 20 minutes.

On ajoute les autres composés de la phase D, puis l'eau purifiée. La phase lamellaire obtenue est cisaillée pendant 20 minutes à l'Ultraturrax pour former la dispersion de liposomes. Le Phosphate de tocophérol sous forme de sel est inclus dans le sérum à titre d'agent actif et se trouve encapsulé dans les liposomes ainsi 10 préparés. Séparément, on chauffe les composés de la phase A à 80°C. A température ambiante, on ajoute les composés de la phase B, puis on laisse gonfler le gel avant d'ajouter les composés de la phase C dans le gel précédemment formé.

15 On ajoute la dispersion de liposomes à la phase aqueuse précédemment préparée. Le sérum comprend des liposomes multilamellaires dans lesquels est encapsulé le sel de phosphate de tocophérol. Le sérum est appliqué sur la peau du visage et du coup, en 20 particulier sur les zones présentant des signes de déshydratation ou consécutifs à une exposition à des stress environnementaux (froid ou UV) provoquant un dessèchement de la peau.

Claims (10)

1. REVENDICATIONS1. Utilisation dans une composition cosmétique, du phosphate 5 de tocophérol ou d'un de ses sels, comme agent destiné à maintenir ou restaurer l'état d'hydratation de la peau, ladite composition contenant en outre un excipient cosmétiquement acceptable.
2. 2. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit sel est un sel de métal alcalin. 10
3. 3. Utilisation selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit sel est un sel de sodium.
4. 4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ladite composition contient de 0,001 % à 5% en poids, de préférence de 0,01 à 1%, de phosphate de tocophérol en poids sec. 15
5. 5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, caractérisée en ce que ladite composition contient en outre une ou plusieurs molécules et/ou un ou plusieurs extraits végétaux présentant des propriétés hydratantes, tels que les glycols, en particulier le glycérol, ou des polyols naturels, des céramides naturels ou de synthèse, l'urée, l'acide hyaluronique, 20 l'acide lactique, un extrait de Vanda coerulea ou encore un extrait d'Ajuga turkestanica.
6. 6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en ce que ladite composition est sous la forme d'un sérum, d'une lotion, d'une crème, d'un hydrogel, d'un masque, d'un stick ou d'un patch. 25
7. 7. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent renforce la capacité d'adaptation des cellules de la peau à un stress osmotique et/ou favorise leur potentiel clonogénique.
8. 8. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent restaure l'état d'hydratation des kératinocytes de l'épiderme. 30
9. 9. Utilisation selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'agent restaure l'état d'hydratation d'une peau mature et sèche.
10. 10. Méthode de soin cosmétique de la peau pour maintenir ou restaurer l'état d'hydratation de la peau, caractérisée en ce qu'elle comprend l'application sur au moins une partie du visage ou du corps subissant un 35 stress osmotique, d'une quantité efficace de phosphate de tocophérol ou d'un de ses sels.